FR2616070A1 - Inhibiteurs de l'endopeptidase neutre - Google Patents

Abstract

On produit chez un hôte une diurèse, une natriurèse et un abaissement de la pression artérielle en lui administrant un ou plusieurs inhibiteurs de l'endopeptidase neutre. On peut administrer un agent hypotenseur supplémentaire, comme un inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, en même temps que l'inhibiteur de l'endopeptidase neutre.

Description

INHIBITEURS DE L'ENDOPEPTIDASE NEUTRE

Des acides mercaptoalcanoyl- et alcylmercapto-

alacanoyl-ux-aminés sont décrits comme étant des agents antihypertenseurs du fait de leur activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, par Ondetti et

coll., dans le brevet des Etats-Unis n 4.053.651.

Cushman et coll. (Biochemistry, vol. 16, n' 25,

1977, p. 5484-5491) décrivent différents acides carboxy-

alcanoyl- et mercaptoalcanoyl-aminés, comprenant o Il

ES -(CH2)2- C -NE- (CE2)2--C

en tant qu'inhibiteurs de l'enzyme de conversion de

l'angiotensine.

Greenberg et coll., dans le brevet des Etats-Unis

n 4.401.677, indiquent que différents acides mercapto-

alcanoyl-u-aminés sont des agents analgésiques utiles en

raison de leur activité inhibitrice de l'enképhalinase.

Sundeen et coll., dans les brevets des Etats-Unis nes 4.235.885 et 4.382. 081, indiquent que certains acides mercaptoalcanoyl- et acylmercaptoalcanoyl-aminés inhibent la collagénase chez les mammifères, et peuvent donc être

utilisés dans le traitement de l'arthrite rhumatoide.

Delaney et coll., dans la demande de brevet européen ns 136.883, indiquent que les acides mercaptoalcanoyl- et acylmercaptoalcanoyl-aminés peuvent être utilisés comme agents analgésiques du fait de leur activité inhibitrice

de l'enképhalinase.

Roques et coll., (Nature, vol. 288, novembre 1980,

pp. 286-288) indiquent que le thiorphan [(D,L)-3-mercapto-

2-benzylpropanol]glycine, est un inhibiteur de l'enképha-

linase in vitro à des concentrations nanomolaires, et in vivo, après administration intracérébro-ventriculaire ou

systémique.

Roques et coll. [Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.),.

vol. 80, 1983, pp. 3178-3182], décrivent le thiorphan et son isomère retro-inverso, et leur activité en tant

qu'inhibiteurs de l'enképhalinase.

Roques et coll., dans le brevet des Etats-Unis n 4.513.009, décrivent différents dérivés d'acides -aminés7 comprenant des dérivés mercaptoalcanoyliques et acylmercaptoalcanoyliques, et indiquent qu'ils présentent

une activité inhibitrice de l'enképhalinase.

Delaney et coll., dans la demande de brevet européen n' 161.769, décrivent des inhibiteurs de l'enképhalinase, à base de radicaux mercapto et acylmercapto, de formule o OR I, i 1 R-- S -c2CE-- NE-C -CE (CE2)n- C OR3 Weller et coll., dans le brevet des Etats-Unis

n' 4.560.506, indiquent que les dipeptides mercaptocyclo-

alcanoyliques, acylmercaptocycloalcanoyliques, mercapto-

arylcarbonyliques et acylmercaptoarylcarbonyliques pré-

sentent une activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et, selon l'acide aminé terminal, peuvent aussi présenter une activité inhibitrice de l'enképhalinase. Ondetti et coil., brevet australien n 537.592,

décrivent des dipeptides mercaptoalcanoyliques et acyl-

mercaptoalcanoyliques présentant une activité inhibitrice

de l'enzyme de conversion de l'angiotensine.

Gordon et coll., dans le brevet des Etats-Unis

n 4.499.079, indiquent que les dipeptides carboxycyclo-

alkylcarbonyliques présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et, selon l'acide aminé terminal, peuvent aussi présenter une activité

inhibitrice de l'enképhalinase.

Berger, dans le brevet des Etats-Unis n 4.610.816 indique que les dipeptides carboxyalkyliques présentent

une activité inhibitrice de l'enképhalinase.

Mumford et coll. (Biochemical and Biophysical Research Comm., vol. 109, n 4, 1982, pp. 1303-1309) indiquent que différents dipeptides Ncarboxyméthyliques substitués, y compris ceux comportant un groupe Balanine terminal, présentent une activité inhibitrice de l'enképhalinase. Ksander, -dans la demande PCT WO 86/00066, indique que différents acides carboxyacylaminés présentent une activité inhibitrice de l'enképhalinase. Thorsett et coll., dans le brevet des Etats-Unis n' 4.316.896, indiquent que les phosphoramides, y compris les dipeptides de formule

O R O R4 O

il Ri-O-P NHE-CH-C-iNH-CH -C-OH i OR2 présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de

conversion de l'angiotensine.

Karanewsky et coll., dans le brevet des Etats-Unis no 4.432.972, indiquent que les phosphonamidates, y compris des dipeptides de formule

0 R2 R5 0

il t. Il i Il R2i P- NE- CH-C- NHE -CH-C- OR6 OR3 présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de

conversion de l'angiotensine et de l'enképhalinase.

Karanewsky et coll., dans le brevet des Etats-Unis n' 4.616.005, indiquent que les acides aminés, substitués par des phosphonates, de formule

O R2 0 O

Il I 11,,l1

R1-P- O-CH-C-NH-CH-C-OR6

I!'

OR3 R22

présentent une activité inhibitrice de l'enzyme de

conversion de l'angiotensine.

Gaeta, dans la demande de brevet européen n' 117.429,

décrit des inhibiteurs de l'enképhalinase, contenant du.

phosphore, ayant la formule O i

W-P -X-Y- Z -COR2

OR1 dans laquelle W est R1 ou OR1, X est -(CH2)R-CHR3 ou

0 0 0

3 Il il Il -CHR -(CH2)p-, Y est -NH-C-, -C-NH-, -NH-C-NH-, ou

-NH-C-O-, et Z comprend -(CHR4)r.

Wilkinson et coll., dans le brevet des Etats-Unis

n 4.423.242, décrivent des inhibiteurs de l'enképha-

linase, ayant la formule suivante Rao 0 CH2 0 P- (CH2)m-CH - C'- Y--OR3 Rbo R2

O R1-CH O

dans laquelle Y est -NH-CH2 - ou -NH-CH-C-, et R8 et Rb sont, indépendamment l'un de l'autre, choisis entre l'hydrogène, un ion d'un sel de métal alcalin ou le

radical alkyle.

Ryono et coll., dans le brevet des Etats-Unis.

n 4.452.791, décrivent des inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, y compris ceux- ayant la formule suivante:

O0 R3 0 R17 0

Il 1 1! 1 I I I Ri- P (CH2),j- CE -CNE-CH- C-OR4 OR2 dans laquelle n vaut zéro ou un, R1 est un radical alkyle, aryle, aralkyle, etc., et R3 est(CH2)m-NH2, NH -(CH2)m-NH-C, ou -(CH2)m N

N

NH2 1

H

o m vaut zéro ou est un entier de 1 à 5.

Roques et coll., dans le brevet des Etats-Unis n 4.618.708, décrivent des inhibiteurs de l'enképhalinase y compris ceux ayant les formules

O O O

* Il11 Il

- HO-P-NH-CH-C-NH-CH2-C-OR

CE 2

I I

t et

0 O

Il Il

HO- NE --C --CH2- CH -NH- CH:_ C--OR

Ondetti et coll., dans le brevet des Etats-Unis n 4.105.789, décrivent des acides hydroxamiques-aminés ayant la formule suivante 0 R3 O Ri OiR3 R1 II Il i HO-NH- C -(CH2) CH - c - -NE - CH - COOHE Wilkinson et coll., dans le brevet des Etats-Unis n 4.504.492, décrivent des acides hydroxamiques inhibiteurs de l'enképhalinase, ayant la formule suivante

O0 CHE O

2

HO-NE-C- CHE- C-Y -OR

R2

I

O R1-CH O

dans laquelle Y est -NH-CH2- - ou -NH-CH- C-.

Ura et coll. (Kidney International, vol. 29, n 1), indiquent que le phosphoramidon. a provoqué des modifications de la fonctions. rénale, y compris une diminution de l'activité de la kininase urinaire, une augmentation de l'excrétion de la kinine, une augmentation

26160ZO

du volume urinaire et une augmentation de l'excrétion du sodium. Ces effets sont attributés à l'aptitude du phosphoramiddn à bloquer la dégradation des kininies produites à l'intérieur du rein, par l'intermédiaire de l'inhibition de l'endopeptidase neutre. Elliot et coll. (Journal of Medicinal Chemistry, vol. 28, pp. 1208-1216, 1985) décrivent l'activité inhibitrice de l'enképhalinase et de l'enzyme de conversion de l'angiotensine, présentée par différents

dipeptides phosphonamidates.

Stephenson et coll. (Biochem. J., vol. 243, pp. 183-

187), indiquent que l'hydrolyse du peptide natrïurétique auriculaire ahumain par les membranes des microvillosités du rein de porc, in vitro, a été supprimée par le

phosphoramidon.

Les oreillettes de l'homme, ainsi que d'autres mammifères, contiennent des granulations spécifiques qui se sont avérées contenir un précurseur d'une famille de peptides, collectivement appelée le facteur natriurétique auriculaire (deBold, Science, vol. 230, pp. 767-770, 1985). Les segments biologiquement actifs de ce précurseur, qui circulent dans le sarng, sont des peptides à 21-28 acides aminés, appelés peptides natriurétiques auriculaires. Ces peptides sont à l'origine de la diurèse, de la hatriurèse et de la relaxation des muscles lisses dans les vaisseaux sanguins et d'autres tissus (Needleman

et coll, Hypertension, vol. 7, pp. 469-482, 1985).

L'hormone circulante, chez l'homme, est vraisemblablement

un peptide à 28 acides aminés, appelé ANF 99-126 humain.

Il a été dit que l'administration exogène de ce peptide à l'homme provoquait une diurèse, une natriurèse et une chute de la pression artérielle (Richards et coll.,

Hypertension, vol. 7, pp. 812-817, 1985).

L'endopeptidase neutre (EC 3.4.24.11) est une métalloendopeptidase, liée à la membrane, que l'on trouve dans de nombreux tissus, en particulier dans le cerveau et le rein. L'endopeptidase du cerveau a souvent été appelée "enképhalinase", en raison de son rôlée dans la dégradation

26 1 6070

des enképhalines. Il a été dit que l'endopeptidase neutre du rein hydrolysait les liaisons peptidiques setrouvant sur le côté aminoterminal des acides aminés hydrophobes (Matsas et coll., The Biochemical Journal, vol. 223, pp.

433-440, 1984).

La présente invention concerne une composition destinée à produire une diurèse, une natriurèse et une réduction de la pression artérielle chez un hôte mammifère, tel que l'homme, contenant une quantité

efficace d'un inhibiteur de l'endopeptidase neutre.

L'inhibition de l'endopeptidase neutre se traduit par une réduction de l'inactivation de 1'ANF 99-126 humain administré par voie endogène ou exogène, ce qui produit

l'effet biologique recherché.

On connait de nombreuses classes de composés pouvant faire office d'inhibiteurs d'endopeptidase. Parmi les classes de composés qui se sont avérés présenter une activité inhibitrice de l'endopeptidase neutre et qui donc peuvent être utilisés dans le cadre de la présente invention, on peut citer les acides mercapto- et acylmercapto-aminés, et les dipeptides de formules (I)

R2 0 R0

I il 1 Il R4.-S -(CH2)m- CH-C-NH-CH- (CH2)n C - OR3

- (II)

R2 I (III) z, " $ -(sil cet S -(CE)m CH E CE C-X

261 6070

(IV)

R2 0 R1 0

I il i Il

R - S - C - N -C- C N- CH C (C2)- C -C-0R3

R1 0 0

X est -NH-E CH- (CH2)m- C -N C-C--OR3 H

R1 O R5 O

i I I1

ou -NH-CH- (CE2)m C-N C - (CH2)m,-.

Il

R4 est un hydrogène ou R6-C-.

Z complète un noyau cycloalkylique ayant de 4 à 7

atomes de carbone.

m, m' et m"' sont choisis chacun, indépendamment des

autres, aux valeurs zéro ou un.

R1, R2 et R5 sont choisis, chacun indépendamment des autres, parmi les radicaux hydrogène, alkyle inférieur, -(CH2) q -cycloalkyle, - (CH 2)q--, -(CH2)H OH,

-(CE2) OH, -(CE 2) P-OH,

OH - (CE2)p- SE, - (CE2) p'NH2, -(CEH2)p-$S-CH3 Il t -(C2)NE- C- O-CHf9CH-CHE -(CE2)p'- - '3--O OH

-(CH2)- COOH, -(CH2)- C

NE2 * Il -(CE2)p- C NE2 -(CH2)p et

N

H HH

q vaut zéro ou est un entier de 1 à 4.

p est un entier de 1 à 4.

n vaut zéro ou est un entier de 1 à 15.

R3 est un hydrogène ou un radical alkyle inférieur,-

benzyle, benzhydryle, ou un ion formant un sel pharmaceu-

tiquement acceptable.

R6 est un radical alkyle inférieur, -(CH2)--, -(CE2)-jJ ' -(CE2)gs; -(CE2) g{

ou -(CH2) q -cycloalkyle.

Les composés carboxyacyliques et carboxyalkyliques ayant les formules ciaprès inhibent eux aussi l'endopeptidase neutre et peuvent donc être utilisés dans

le procédé de la présente invention.

(V) o Z 0 R1 0 R5 O0 Il '.l 1 Il i il

R7--O-C-CH CH--C-NH-CE- C NH-CH- C -OR3,

(VI) R5-O- C-CH -NH- CE -C-NK -CH-(CH-2)rn- C-OR3,et (VII)

O R8 R O R O

I!lI I I1 I il

R7- O- -C -CH-H2- CH- C -NE -CH -(CH2)-- C -OR3

R1, R3, R5, Z et n sont comme définis ci-deesus.

R7 est un hydrogène ou un radical alkyle inférieur, benzyle ou benzhydryle, ou encore. un ion formant un sel pharmaceutiquement acceptable, R8 est un hydrogène, un radical alkyle inférieur,

-(CH2)

-(CE2) t N C2p -(CH2 -cycloalkyle, ou encore un 1- ou un 2naphtylalkylène, de formule -(C32)

o p et q sont comme définis ci-dessus.

Les composés contenant du phosphore, ayant les formules ci-après, inhibent eux aussi l'endopeptidase neutre, et peuvent donc eux aussi étre- utilisés dans le

procédé de la présente invention.

(VIII)

O R 0 R5 O

IIl I IIl Rg- P-Y-CE-C -NH - CH C -OR3 I g OR-o (Ix)

0 R1 0

Il, 1 1 1 R iC- P- 2- CH- C -C-NE -(CH2)-C --OR3 OH

R1, R3 et R5 sont conmme définis ci-dessus.

r est un entier de 2 à 4.

Y est -NH, -CH2 ou -0.

RP est un radical alkyle inférieur,-(CH2)q--

-( CH2)cycloalkyle, - ( CEI pUB '-(C2) < -OH-, -O-(alkyle inférieur), -O(CH2) -O-(CH2)q-cycloalkyle, -O-(CH2)p-4, --(CE, ou --( 2)P Ri est un hydrogène ou un radical alkyle, benzyle ou benzhydryle, ou un ion formant un seT

pharmaceutiquement acceptable.

R11 est un radical alkyle inférieur, -(C'-

hydroxy, -O-(alkyle inférieur), -O-(C-2)q,

-(CH2)q-cycloalkyle, ou -O-(CH2)q-cycloalkyle.

Il s'est aussi avéré que le phosphoramidon, N-(x-L-

rhamnopyrannesyloxyhydroxyphosphinyl)-L-leucyl-L-trypto- phane, inhibe l'endopeptidase neutre et peut donc être lui

aussi utilisé dans la présente invention.

Les composés acides hydroxamiques ayant la formule ci-après inhibent eux aussi l'endopeptidase neutre, et peuvent donc eux aussi être utilisés dans la

présente invention.

(X) 0 R2 O- R1 0

Il I Il I Il HO-*H--C- (CH2)m- CH -C-NH- CH - C-OR3

o R1, R2, m et 3 sont comme définis ci-dessus.

L'expression "alkyle inférieur" désigne des hydrocarbures saturés, à chaîne droite ou ramifiée, ayant de 1 à 7 atomes de carbone, de préférence de 1 à 4 atomes de carbone. De même, le terme "cycloalkyle" désigne des noyaux hydrocarbonés saturés ayant de 4 à 7 atomes de

carbone, de préférence 5 ou 6 atomes de carbone.

Les composés mercapto et acylmercapto de formule I

peuvent être préparés comme décrits par Ondetti et coll.

dans le brevet des Etats-Unis n 4'053.651 et par Delaney et coll. dans la demande de brevet européen n' 136.883. On acyle un composé acide aminé ou ester de formule

(XI) R1 0

I Il

11

H2N -CE-(CH2) --C-OR3

avec un acide ou son équivalent chimique de formule

(XII) O R2 0

I- IC I

R6 C S-(CE)rm-CE-C-0E pour obtenir les composés acylmercapto de formule I. Une hydrolyse classique donne les composés mercapto correspondants de formule I. Les mercapto- et acylmercapto-dipeptides de formule II peuvent 'être préparés comme décrit par Ondetti et coll. dans le brevet australien n' 537.592. On peut préparer ces composés en acylant le dipeptide

(XIII)

1R1 O R O

5

I [1 11

R% 0

H2- CE -(CH2)m C- - - C- -OR3 avec l'acide ou son équivalent chimique de formule XII, pour obtenir les produits acylmercapto-dipeptides

recherchés. Une hydrolyse classique donne les mercapto-

dipeptides correspondants de formule II.

Ces dipeptides peuvent aussi être préparés comme décrit par Sundeen et coll. dans le brevet des Etats-Unis n 4.235.885. On peut préparer ces composés en convertissant l'acide acylaminé de formule (XV)

30. O R2 R 0

Il 1' il 1 Il' Ri- C-S- (<C2);-C}i-C- NH-CE- (CEH2)r C--OH en une forme activée, comme l'ester p-nitrophénylique, et en le faisant réagir sur l'acide aminé de formule (XVI)

R5 O

I 1'

2N-C2-CE (2)CE C -OR3

Une hydrolyse classique donne les mercapto-dipeptides

correspondants, de formule II.

De même, les dipeptides acylmercapto- et mercapto-

cycloalcanoyliques de formule III sont préparés comme décrit par Weller et coll. dans le brevet des Etats-Unis n' 4.560.506. On peut préparer ces composés,- quand m vaut

zéro, en couplant un acide acylmercaptocycloalkylcarboxy-

lique, ou son équivalent chimique, de formule

(XVII)

O Z

Il ( A 11

R6- C-S-CH - CH -C-OH

avec le dipeptitde de formule XIII ou XIV. Une hydrolyse classique donne les composés mercapto correspondants de

formule III.

Les composés acylmercapto- et mercapto- de formule IV sont préparés comme décrit par Delaney et coll., brevet européen n' 161.769. On peut préparer ces composés en faisant réagir un acylthiol de formule

(XVIII)

I

30.R6- C- SH

sur l'intermédiaire de formule (XIX)

R2 0 R1 0

HO-C 2- C-NE c- C-CH-(CH2)i- C-OR3 en présence de triphénylphosphine et d'un azodicarboxylate de dialkyle. Ici aussi, une hydrolyse classique donne les

composés mercapto correspondants de formule IV. -

On peut préparer l'intermédiaire.de formule XIX en couplant une amine de formule (XX) R2 HO -(CE2)m- CH - NE2 avec un acide ou son équivalent chimique de formule (XXI)

O R1 O

Il l I1

HO - C -CH -(CH2)- C -OR3

On peut préparer les dipeptides carboxyacyliques de formule V comme décrit par Gordon et coll. dans le brevet des Etats-Unis n 4.499.079. Par exemple, on couple un acide carboxylique ou son équivalent chimique de formule

(XXII)

O Z O

*Il 0 f N\ q

R --C -CH -CH -C -OH

avec le dipeptide de formule XIII.

Les composés de formule III dans laquelle m vaut 1

peuvent être préparés comme décrit par Weller et coll.

dans le brevet des Etats-Unis n 4.560.506. Par exemple, le dipeptide cycloalcanoylique comportant des groupes acide carboxylique, de formuie V, est traité avec du

borane dans du tétrahydrofuranne pour donner l'alcool de.

formule

(XXIII)

Z. 0

HO-CH2-CH CE-C-X.

L'alcool de formule XXIII est traité avec l'acylmercaptan de formule

(XXIV)

II

Ré- C -S -H

en présence d'azodicarboxylate de diisopropyle et de triphénylphosphine. Une hydrolyse classique donne les

composés mercaptan de formule III, dans laquelle m vaut 1.

Les composés dipeptides comportant des groupes acide carboxylique, de formule VI, peuvent être préparés conmme décrit par Berger dans le brevet des Etats-Unis n 4.610.816. Par exemple, on peut coupler un acide aminé de formule (XXV)

R5 O

I Il -NH c- CH-(CH2)- C-OR avec l'acide aminé de formule

(XXVI)

O R. R1 O

Il j I i R7- o- C-CH - NE H-CE- C -OE

en présence d'un réactif de couplage tel que le dicyclo-

hexylcarbodiimide.

Les acides alcanoylaminés comportant des groupes acide carboxylique de formule VII peuvent être préparés

comme décrit par Esander dans la demande PCT WO 86/00066.

Par exemple, on peut coupler un acide aminé de formule XXV à l'acide carboxylique ou à son équivalent chimique de l'id formule

(XXVII)

0 R8 R 0

tl l l l

R7- -- C -C-C -CH C - C -OH

- 72

Les composés phosphorylés de formule VIII, dans laquelle R9 est un radical hydroxy, alcoxy, aralcoxy, cycloalkylalcoxy ou hétécycloalcoxy, et Y est O ou NH,

26 1070

peuvent être préparés'comme indiqué par Thorsett et coll.

dans le brevet des Etats-Unis n 4.316.896. Par exemple, le diester phosphorochloridate de formule

(XX7VIII)

O

R9 P- C

OR10 peut être mis à réagir avec le dipeptide de formule XIII, dans laquelle m' et m" valent tous les deux zéro, pour donner les composés de formule VIII dans laquelle R9 est

comme défini ci-dessus et Y est NH.

De même, on peut faire réagir le phosphorochloridate de forme XXVIII sur un alcool de formule

(XXIX)

R O R 0

I II I Ii

HO - CE -C -NE- CE - C -OR3

pour donner les composés de formule VIII dans laquelle R9 est un radical hydroxy ou un oxygène substitué comme défini ci-dessus, et Y est O. Les composés du phosphore de formule VIII, dans laquelle Y est CH2, ainsi que les composés du phosphore de forme IX, peuvent être préparés comme décrit par Gaeta dans la demande de brevet européen n0 117.429. Par exemple, on couple un acide de formule (XXX)

O R1 O

Rg 1 là l R R9I I Il ou I P-CH2-CE-C- OH R Rll I ORl OR10 ou son équivalent chimique, à l'acide aminé de formule XXV

dans laquele n vaut zéro, pour donner les composés.

contenant du phosphore de formule VIII dans laquelle Y est CH2. De même, l'acide de formule XXX est couplé à l'acide aminé de formule

(XXXI)

O

'

H2N- (CH2 C--OR3

pour donner les composés phosphorés de formule IX.

Les composés phosphonamidates de formule VIII dans laquelle R, est un radical alkyle inférieur, aralkyle, aryle, cycloalkyle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkyle, aminoalkyle ou acylaminoalkyle et Y est NH, peuvent être préparés comme indiqué par Karanewsky et coll., dans le - brevet des Etats-Unis n 4.432.972; Par exemple, on peut préparer ces composés en couplant un phosphonochloridate de formule XXVIII dans laquelle R9 est comme défini ci-dessus, au dipeptide de formule XIII dans laquelle mi

et m" valent chacun zéro.

Les composés phosphonyle de formule VIII, dans laquelle P. est un radical alkyle inférieur, aralkyle, aryle, cycloalkyle, cycloalkylalkyle, hétérocycloalkyle, aminoalkyle ou acylaminoalkyle et Y est O, peuvent être préparés comme indiqué par Karanewsky et- coll. dans le brevet des Etats-Unis n0 4.616.005. Par exemple, on peut préparer ces composés en couplant un acide de formule

( I)

O R1 0

III Ii

R9- P -O --C - C -OH

OR1

ou son équivalent chimique à l'acide aminé de formule XXV

dans laquelle n vaut zéro.

Le composé phosphoramidon peut être préparé comme indiqué par Suda et coll. (Journal of Antibiotics, vol. 26, pp. 621-623, 1973) et Umezawa et coll. (Tetrahedron

Letters, n 1, pp. 97-100, 1972).

Les composés acides hydroxamiques de formule X

peuvent être préparés comme indiqué par Ondetti et coll.

dans le brevet des Etats-Unis n 4.105.789 et Wilkinson et coll. dans 'le brevet des Etats-Unis n 4.504.492. Par exemple, on peut préparer ces composés en traitant un acide carboxylique de formule

(XXXIII)

0 R 0 Ri 0 IltI II, iI Il HO -C -(CH2)>i-CH-C--NH--CE- C-OR3

ou son équivalent chimique avec de l'hydroxylamine.

On peut préparer l'acide carboxylique de formule XXXIII en couplant un monoester de l'acide malonique ou de l'acide succinique, de formule

(XXXIV)

o R2 0 * Il I B alkyle inférieur--O-C-(CH2)- CE - C -OH ou son équivalent chimique à l'acide aminé de formule XI dans laquelle n vaut zéro. Une saponification élimine le groupe ester et donne l'acide carboxylique de

formule XXXIII.

Les composés de formules I à X peuvent contenir un ou plusieurs centres d'asymétrie. Ainsi, ces composes peuvent exister sous des formes diastéréoisomères, ou sous la forme de mélanges de ces dernières. Les procédés décrits ci-dessus peuvent utiliser comme matières de

départ des racémates, des énantiomères, ou des diastéréo-

isomères. Quand on prépare des composés diastéréoisomères, on peut les séparer par des méthodes classiques de

chromatographie ou de cristallisation fractionnée.

Dans les réactions ci-dessus, et selon la définition de R1, R2 et R5, il peut s'avérer nécessaire d'utiliser un groupe protecteur, qui est ensuite éliminé au cours de la dernière étape de la synthèse. Les groupes protecteurs appropriés, et les procédés convenant à leur introduction et à leur élimination, sont bien connus. De même, un grand nombre des réactions décrites ci-dessus sont des réactions de couplage, qui peuvent être mises en oeuvre au mieux en

261 6070

présence d'un réactif tel que le dicyclohexylcarbodiimide ou le carbonyldiimidazole, ou encore peuvent être réalisées au mieux par conversion d'un réactif acide en une forme activée. Les formes activées convenables comprennent les chlorures d'acide, les anhydrides, les anhydrides mixtes, etc. Les composés de formules I à X pouvant être utilisés dans le cadre de la présente invention peuvent être isolés sous la forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable. Les sels convenant à cette application sont les sels de métaux alcalins, comme les sels de sodium et de potassium, les sels de métaux alcalino-terreux, comme les sels de calcium et de magnésium, et les sels dérivant d'acides aminés, comme l'arginine, la lysine, etc. On obtient ces sels en faisant réagir la forme acide du composé sur un équivalent de la base fournissant l'ion souhaité, dans un milieu dans lequel le sel précipite, ou encore en milieu aqueux, puis

en effectuant une lyophilisation.

Certains des composés peuvent aussi former des sels avec toute une gamme d'acides organiques ou inorganiques pharmaceutiquement acceptables, tels ceux formés avec l'acide chlorhydrique, l'acide méthane-sulfonique, l'acide maléique, etc. Une fois de plus, on peut préparer ces sels en faisant réagir le composé sur une quantité équivalente

de l'acide, dans un milieu dans lequel le sel précipite.

Les composés préférés, pour une utilisation dans le cadre de la présente invention, sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formule I, dans laquelle: R4 est un hydrogène, m vaut l,

R2 est le radical benzyle ou un radical alkyle infé-

rieur à chaîne droite ou ramifiée, ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier le radical benzyle, -CH. ou -CH2-CH-(CH3)2,

R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceu-

tiquement acceptable, n vaut zéro, R1 est un hydrogène, un radical alkyle inférieur à chaine droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone, benzyle,

-MÉ2 E - OH -C2C 7 < OH

OH

OH O 0

I,il Il

-CE2.0E, -C-H3, -CH2- C -OH, -(CH2)2-C -OH

'NH

(CH2)2 S-CH3, -(CH2)3- NH- C

N2 i5

CH-(C)4-NE-C-0 CH2, -(CH2)4 NH2

(C2 2..

In -CH2-C-NH2, ou -CH 2 2 H Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre, de formule I, dans laquelle: R4 est un hydrogène, m vaut un, R2 est le radical benzyle, R1 est un hydrogène ou le radical benzyle, en particulier un hydrogène, n est un entier de 1 à 9, R3 est un hydrogène ou un ion salifiable

pharmaceutiquement acceptable.

Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de 1'endopeptidase neutre de formule II, dans laquelle

-R1 O R5 O

I Il I I1 X Xest -NE-CH -(CH2)mT- C-NE -CHE- C -OR3 R4 est un hydrogène, m et m', indépendamment l'un de l'autre, valent chacun zéro ou un, Mm" vaut zéro,

R2 est un hydrogène, -CH2-CH- (CH3)2, ou-CH2 -.

R1 et R5, indépendamment.l'un de l'autre, sont choisis dans le groupe comprenant l'hydrogène et les radicaux alkyle inférieur à chaîne droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone, benzyle, -C H

INE I

-(CH2)3-NH-C, ou -(CH2)2 C-NH2 NE2

R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceu-

tiquement acceptable.

Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formule II, dans laquelle:

R1 O

X estNE --C- C - N-C- COOR H R4 est un hydrogène, m vaut zéro ou un, R2 est le radical benzyle, R est le radical méthyle,

R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceu-

tiquement acceptable. Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la

présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formule IV dans laquelle: R4 est un hydrogène, R2 est le radical benzyle, Ri est un hydrogène, n vaut zéro ou est un entier de 1 à 5,

R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceu-

tiquement acceptable.

Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formuIe VI dans laquelle: R, et R8 sont chacun le radical benzyle, R5 est un hydrogène et n vaut zéro ou est un entier de 1 à 5, ou bien R5 est un radical alkyle inférieur à chaîne droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone, et n vaut zéro, R3 et R7 sont chacun un hydrogène, ou les deux sont

chacun un ion salifiable pharmaceutiquement acceptable.

Un composé tout aussi préféré pour une utilisation dans le cadre de la présente invention est l'inhibiteur de

l'endopeptidase neutre phosphoramidon.

Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formule VIII, dans laquelle: Y est -NH, -CH2, ou O, R1 est le radical benzyle, R5 est -CH2-CH(CH3)2, R9 est le radical méthyle, R3 et R10 sont chacun un hydrogène, ou sont chacun un

ion salifiable pharmaceutiquement acceptable.

Des composés tout aussi préférés pour une utilisation dans le cadre de la présente invention sont les inhibiteurs de l'endopeptidase neutre de formule IX, dans laquelle: R9 est un radical hydroxy, R est 'le radical benzyle, r vaut deux,

R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceu-

tiquement acceptable.

La diurèse et la natriurèse sont produites chez un hôte mammifère par l'administration d'environ 1 mg à environ 100 mg par kg de poids corporel par jour; de préférence d'environ 1 mg à environ 50 mg par kg de poids corporel par jour, d'un ou plusieurs inhibiteurs de l'endopeptidase neutre, ce qui conduit à la diminution de la pression artérielle de l'hôte. L'inhibiteur de l'endopeptidase neutre est de préférence administré par voie orale, mais on peut aussi faire appel à des voies parentérales, par exemple la voie sous-cutanée, la voie intramusculaire et la voie intraveineuse. La dose journalière peut être administrée en une fois, ou peut être subdivisée en 2 à 4 doses, administrées tout au long

de la journée.

L'inhibiteur de l'endopeptidase neutre peut aussi être administré en combinaison avec d'autres agents hypotenseurs. Par exemple, l'inhibiteur de l'endopeptidase neutre peut être combiné, pour une administration double, à un inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (ECA), comme le captopril, le zofenopril, le fosénopril, l'énalopril, le lisinopril, etc. Cette' combinaison devrait correspondre à un rapport pondéral entre l'inhibiteur de l'endopeptidase et l'inhibiteur de

l'ECA compris entre environ 1:10 et environ 10:1. -

L'inhibiteur de l'endopeptidase neutre, et l'autre principe pharmaceutiquement actif, peuvent être formulés pour une utilisation destinée à la réduction de la pression artérielle, dans des compositions comme des comprimés, des gélules ou des élixirs pour administration par voie orale, ou encore dans' des solutions ou suspensions stériles pour une administration par voie parentérale. On mélange environ 10 à environ 500 mg du principe actif à un véhicule, un support, un excipient, un liant, un stabilisant, un conservateur, un aromatisant, etc., physiologiquement acceptable, sous une forme posologique unitaire, comme l'exige la pratique

pharmaceutique acceptée.

Les exemples ci-après illustrent l'invention. Les

températures sont données en degrés Celsius.

Exemple 1

N- r2-(Mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénvlpropvll-L-

leucine (isomère A) On ajoute 4,54 ml (52 mmoles) de chlorure d'oxalyle à une solution de 11,92 g (50 mmoles) d'acide 3-acétylthio-2benzylpropanoique dans 100 ml d'éther. Ce mélange est traité avec précaution avec une quantité catalytique (3 gouttes) de diméthylformamide, puis agité à la température ambiante pendant 1 h. Le mélange est concentré sous vide, pour donner une huile, laquelle est dissoute dans 80 ml de tétrahydrofuranne et de nouveau concentrée sous vide. Le résidu obtenu est dissous dans ml de méthylène et ajouté goutte à goutte en 1 h à une solution froide (-5 ) et sous agitation, de 8,45 g (51 mmoles) du monochlorhydrate de l'ester méthylique de

la L-leucine et de 18,12 ml (104 mmoles) de diisopropyl-

éthylamine dans 100 ml de chlorure de méthylène. Après 2,5 h d'agitation à froid (-5 ), le mélange est concentré sous vide. Le résidu est repris dans 300 ml d'acétate d'éthyle, filtré, et le filtrat est lavé successivement avec une solution à 10 % de bisulfate de potassium, de l'eau, une solution saturée à 50 % de bicarbonate de sodium, de l'eau et une saumure à 50 % (3 x 50 ml pour chaque). La couche organique est séchée sur du sulfate de sodium et concentrée pour donner 17,64 g d'une mousse jaune. Une moitié de ce produit est appliquée sur une

colonne de gel de silice (Merck, 230-400 mesh, 37-68 pm),.

en éluant avec un mélange 7:2 d'éther de pétrole et d'acétate d'éthyle. Les fractions ne contenant que

l'isomère le plus rapide sont combinées et concentrées.

Après dilution de la totalité du diastéréoisomère le plus lent, la colonne est rincée avec environ 1 1 du même solvant. L'autre moitié du mélange est.appliquée sur cette colonne et éluée de la même manière, pour donner en tout 8,76 g de l'isomère A de l'ester méthylique de la N-[2(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine,

sous la forme d'un solide blanc, p.f. 64-66 C.

8,75 g (23,94 mmoles) de ce produit ester méthylique sont dissous dans 72 ml de méthanol et refroidis dans un bain de glace sous atmosphère d'azote. On ajoute goutte à goutte à- cette solution, en 10 min., 72 ml (env. 3 éq.) d'hydroxyde de sodium IN. On agite ce mélange à 0 pendant min., puis on le laisse se réchauffer à la température ambiante et on l'agite pendant 3 h. Le mélange est concentré à la moitié de son volume sous vide. Le résidu est dilué avec 100 ml d'eau, lavé avec 2 X 40 ml de chloroforme, et la portion aqueuse est acidifiée à pH environ 1,5 avec du HC1 concentré. La suspension blanche obtenue est extraite par 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits sont combinés, lavés avec 40 ml d'eau et 40 ml de saumure, séchés sur du sulfate de sodium et concentrés pour donner 7,2 g d'une huile incolore. Cette huile est placée sur une colonne de gel de silice (Merck, 230-400 mesh), en éluant avec un mélange 6:1 de toluène et d'acide acétique pour obtenir une huile incolore. Cette huile est reprise dans du benzène, concentrée et séchée pendant 48 h

pour donner l'isomère A de la N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-

3-phénylpropyl]-L-leucine, sous la forme d'un solide

blanc; p.f. 87-88 (avec agglomération au-delà de 81 ).

CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,44 (trace à 0,29). CCM (gel de silice; chloroforme:

acide acétique, 15:1) Rf = 0,32 (trace à 0,14).

Analyse: Calc. pour C16 H23N03S:

C, 62,11; H, 7,49; N, 4,53; S, 10,35

Trouvé: C, 62,06; H, 7,52; N, 4,52; S, 10,08.

Exemple 2

- N-(3-Mercapto-l-oxopropyl)-L-Phénylalanine

261607Q

Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 6 du brevet des Etats-Unis ne 4.053.651.

Exemple 3

N-(DL-3-MercaPto-2-méthVl-l-oxopropyl)-L-arqinine Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 21 du brevet des Etats-Unis ne 4.053.651.

Exemple 4

N- r DL-2-(Mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl-L-

arainine Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 34 du brevet des Etats-Unis ne 4.053.651.

Exemple 5

N-(DL-3-MercaDto-2-méthyl-1-oxopropvl)-L-tryptophane Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 29 du brevet des Etats-Unis ne 4.053.651.

Exemple 6

N-(DL-3-Mercarto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-tyrosine Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 28 du brevet des Etats-Unis n 4.053.651.

Exemple 7

3-Hvdroxy-N-(DL-3-mercapto-2-méthyl-l-oxopropvl)-L-

tyrosine Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 76 du brevet des Etats-Unis ne 4.339.600.

Exemple 8

( )-N- r 2-(Mercaptométhylj-4-méthyl-l-oxopentyll-

glycine -Ce composé peut être préparé comme décrit en détail

dans l'exemple 3 du brevet des Etats-unis n 4.235.885.

Exemple 9

(+)-N- r 2-(Mercaptométhyl)-l-oxy-3-DhénvlPropyvli-

glvcine On mélange 13 g (67 mmoles) d'acide benzylmaloniiue à 7,6 g (68 mmoles) de diméthylamine en solution aqueuse à 40 % et 5,4 g (68 mmoles) de formaline à 37 % dans 150. ml d'eau. Le solide obtenu qui se forme est séparé par filtration au bout de 2 h, lavé à l'eau et partiellement séché à l'air. Le solide obtenu (20,8 g) est fondu dans un bain d'huile et chauffé pendant 10 min. jusqu'à ce que le dégagement d'amine s'arrête et que le bouillonnement ait pratiquement cessé. Le produit refroidi, un liquide mobile, est acidifié avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10%, extrait à l'hexane, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 6,3 g d'acide

benzylacrylique solide.

On traite 6,2 g (40 mmoles) d'acide benzylacrylique dans 350 ml de chlorure de méthylène avec 5,4 g (40 mmoles) de chlorhydrate de glycinate d'éthyle et 3,9 g (4 mmoles) de triéthylamine. Le mélange est refroidi dans un bain de glace, et on lui ajoute 7,9 g (40 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide. Le mélange est agité à la température ambiante pendant 16 h puis séparé par filtration. Le filtrat est secoué avec du bicarbonate en solution aqueuse,de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 % et de l'eau, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner une huile. Cette huile est reprise dans 200 ml de méthanol et traitée avec un excès d'hydroxyde de sodium à 10 %. Le mélange est chauffé pendant 15 min. sur un cône de vapeur, puis évaporé pour donner une suspension aqueuse. Cette dernière est séparée par filtration, et les filtrats sont extraits à l'éther. La couche aqueuse est

acidifiée avec du HCI à 10 % et extraite au chloroforme.

Les extraits sont séchés sur du sulfate de sodium et

évaporés pour donner 7,3 g d'une huile.

On ajoute 10 ml d'acide thiolacétique à 3,2 g (14 mmoles) du dérivé de glycine ci-dessus et, au bout de 16 h, on évapore la solution obtenue sous vide. Une trituration avec de l'isopropyléther donne 2,9 g d'un solide presque blanc. Une recristallisation dans de

l'acétate d'éthyle-hexane donne 2,5 g de (+)-N-[2-(acétyl-

thiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]glycine; p.f. 97-101 ; 0,5 g (1,7 mmole) de ce produit acétylthiométhylique est repris dans 5 ml d'hydroxyde de sodium à 10 % sous atmosphère d'argon. Après 30 min. à la température ambiante, on ajoute un excès d'hydrogénosulfate de potassium à 10 %, et le produit est extrait dans du chloroforme sous atmosphère d'argon. Un séchage sur du sulfate de sodium et une évaporation donne un solide. Ce solide est trituré avec de l'isopropyléther et séché sur du pentoxyde de phosphore sous vide pour donner 0,3 g de (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo3-phénylpropyl]glycine

sous la forme d'un solide blanc; p.f. 129-134'.

Analyse: Calc. pour C 2H1 NO3S:

C, 56,89; H, 5,97; N, 5,53; S, 12,66

Trouvé: C, 56,46; H, 6,04; N, 5,37; S, 12,36.

Exemple 10 -

Sel de N-cyclohexvlcYclohexanamine de la ( )-N-

r2-(mercaptométhyl)-3-méthyl-l-oxohexvl1-glycine (1:1) Si l'on suit le mode opératoire de l'exemple 9, mais -en utilisant l'acide malonique

H3C(CH2)2-CH -CH - (CO2H)2

CH3 on obtient l'acide acrylique

CH2

I1

E3C(CH2)2CH-C-C02H

CH3 Cet acide acrylique est ensuite mis à réagir sur le chlorhydrate du glycinate d'éthyle et la triéthylamine en présence de dicyclohexylcarbodiimide, selon le mode opératoire de l'exemple 9. On dissout 5,4 g (28 mmoles) du dérivé de glycine obtenu dans 15 ml d'acide thiolacétique, et on les laisse reposer à la température ambiante pendant 16 h. Une évaporation sous vide à la température ambiante donne une huile visqueuse. Cette huile est reprise dans de

l'isopropyléther et traitée avec un excès de dicyclohexyl-

amine. On élève à 200 ml le volume d'isopropyléther, et le produit se solidifie en plusieurs heures. Ce produit est séparé par filtration et lavé à l'acétate d'éthyle et à l'hexane. Une recristallisation dans de l'acétate d'éthyle donne 0,4 g du sel de N-cyclohexylcyclohexanamnine de la (+)-N- [2-(acétylthiométhyl-3-méthyl-l-oxohexyl]glycine

(1:1); p.f. 121-123 .

On secoue 0,5 g (1,1 mmole) de ce produit acétylthiométhylique avec 4 ml d'hydroxyde de sodium à 10% et de l'éther, sous atmosphère d'argon. La phase aqueuse est réextraite à l'éther, puis acidifiée avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 % et extraite au chloroforme. Un séchage et une évaporation donnent 0,3 g d'une huile incolore. Cette huile est reprise dans 5 ml

d'acétate d'éthyle et traitée avec un excès de dicyclo-

hexylamine. Une dilution à l'hexane et une filtration

donnent, au bout d'l jour, 0,25 g du sel de N-cyclohexyl-

cyclohexanamine de la ( )-N-[2-(mercaptométhyl)-3-méthyl-

1-oxohexyl]glycine (1:1) sous la forme d'un solide blanc;

p.f. 112-116 .

Analyse: Calc. pour C1o H19NO3S. C2H23N. 0,25 H2 O:

C, 63,04; H, 10,22; N, 6,68; S, 7,64

Trouvé: C, 63,02; H, 10,32; N, 6,63; S, 7,93. -

Exemple 11

(+) -N2 - r2-(Mercaptométhvl)-4-méthyl-1-oxoDentvl1-L-

arginine On dissout 1,9 g (11 mmoles) de (L)-arginine dans ml d'eau contenant 0,9 g (11 mmoles) de bicarbonate de sodium. On refroidit cette suspension à 5 et on ajoute goutte à goutte 2,5 g (11 mmoles) de chlorure de

2-acétylthiométhyl-4-méthylpentanoyle dans 5 ml d'éther.

Le pH du mélange réactionnel est maintenu entre 7 et 8 par l'addition goutte à goutte et occasionnelle d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium. Après 5 h d'agitation à la température ambiante, le mélange réactionnel est lavé à l'éther, et la solution aqueuse est lyophilisée pour donner 3,6 g du produit brut. Ce dernier est dissous dans 10 ml d'éthanol absolu et versé sur une colonne de 100 ml de XAD-4 (lavée au préalable à l'éthanol). Quand 200 ml d'éthanol ont traversé la colonne, on élue le produit en deux fractions de 50 ml (2,3 g). Ce produit est chromatographié sur 100 g de gel de silice en utilisant un mélange 9:1 de méthanol et

d'eau. Le produit est élue dans deux fractions de 100 ml.

Une lyophilisation de la première fraction donne 0,6 g de

(+)-N2-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-L-

arginine; p.f. ramollissement à 64-80 C. On dissout 0,6 g du produit acétylthiométhylique ci-dessus dans de l'eau, et on le purge à l'argon. On ajoute 2 ml d'une solution aqueuse à 37 % d'hydroxyde d'ammonium, et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 h. On le lyophilise en 16 h. Le solide blanc obtenu est lavé avec 60 ml d'acétonitrile contenant 6 gouttes d'eau. Le solide granulaire est filtré et séché sous vide à 60 pendant 2 h pour donner sous la forme d'un

solide blanc la (+)-N2-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxo-

pentyl]-L-arginine; p.f. ramollissement à 1270.

Analyse: Calc. pour C13H26N4 03S. 1H20

C, 46,41; H, 8,39; N, 16,65; S, 9,53

Trouvé: C, 46,38; H, 8,21; N, 16,38; S, 9,42.

Exemple 12

N-r 2-(Mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyll-L-

2 0 alanine (isomère A) On dissout dans 20 ml de dioxanne sec 2,04 g (10, 0 mmoles) d'acide 2-acétylthiométhyl-4-méthylpentanoique. La solution est refroidie à 15 , et on ajoute 1,15 g (10,0 mmoles) de Nhydroxysuccinimide, puis on ajoute goutte à goutte du dicyclohexylcarbodiimide. Le mélange est agité à la température ambiante pendant 5 h, puis filtré pour donner une solution aqueuse de 0,84 g (15 ml) de bicarbonate de sodium et de 0,9 g de (L)-alanine. Après 20 h d'agitation, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu au fond du creuset dans 20 ml d'eau et lavé à l'acétate d'éthyle. La solution aqueuse est acidifiée avec du HCl concentré, et le produit est extrait à l'acétate d'éthyle. L'extrait est séché sur du sulfate de magnésium, filtré et concentré sous vide pour donner 1,5 g du produit brut. Ce dernier est placé sur 50 g de silice, puis filtré à travers 250 ml d'éther de pétrole puis 250 ml d'un mélange 1:1 d'éther et d'éther de pétrole. Le produit est élue avec 250 mi d'éther pour

donner 1,2 g.

Ce produit brut est traité avec de la dicyclohexyl-

amine dans de l'acétate d'éthyle. On laisse la première récolte cristalliser pendant 2 jours; p.f. 145-152 . On filtre et on la recristallise une fois dans de lacétate d'éthyle, puis dans un mélange 1:1 d'acétate d'éthyle et d'acétonitrile, pour obtenir le sel de Ncyclohexylcyclohexanamine de l'isomère A de la N-[2-(a&étylthiométhyl)-4méthyl-l-oxopentylj]-L-alanine

*(1:1).

On dissout 1,0 g du sel ci-dessus dans.10 ml d'eau, on l'extrait à l'éther, et on le sature sous atmosphère d'argon. On ajoute 5 ml d'hydroxyde de sodium à 10 %, et on laisse le mélange reposer à la température ambiante pendant 30 min. L'éther est décanté, et la solution aqueuse est lavée une deuxième fois à l'éther. La solution basique est ensuite acidifiée avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 %, et le produit est extrait au chlorure de méthylène, séché sur du sulfate de sodium, filtré et concentré sous vide à 50. pour donner l'isomère A de la N-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-L-alanine;

t]D = -33 (c = 1 %, éthanol à 95 %).

Analyse: Calc. Pour C10H19 NOS. 0,2H20:

C, 50,70; H, 8,25; N, 5,91; S, 13,53

Trouvé: C, 50,88; H, 7,75; N, 5,74; S, 13,34.

Exemple 13

N- r 2-(Mercartométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-L-

alanine (isomère B)

Les filtrats provenantdu traitement àla dicyclohexyl-

amine de l'exemple 12 sont concentrés sous vide, et l'acide libre est libéré par lavage d'une solution d'acétate d'éthyle par de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 %. Après concentration de l'extrait organique sous vide, on chromatographie l'acide brut sur 200 g de silice en éluant avec un mélange 9:1 d'acétate d'éthyle et d'acide acétique pour obtenir 1,3 g du produit brut. Cet échantillon est converti en le sel de dicyclohexylamine et est recristallisé à deux reprises dans de l!acétonitrile pour donner 1,2 g du sel de N-cyclohexylcyclohexanamine de

l'isomère B de la N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxo-

pentyl]-L-alanine (1:1); p.f. 131-134%; []D = +36" (c = 1 % dans de l'éthanol à 95 %). On dissout dans l'eau 0,9 g du sel ci-dessus. Cette solution est purgée à l'azote et extraite à l'éther. On ajoute 2 ml d'hydroxyde de sodium à 10 %, et on laisse le mélange reposer pendant 5 min. Puis on rejette l'éther. La couche aqueuse est acidifiée avec du HCl à 10 %, et l'acide libre est extrait à l'éther. Après séchage sur du sulfate de sodium et concentration sous vide, l'acide est dissous dans de l'éthanol absolu et dans 1 ml d'ammoniaque à 37 %. Le mélange est agité sous atmosphère d'argon pendant 2 h, concentré sous vide et dissous dans de l'éther. La couche éthérée est lavée avec du HCl à 10 %, séchée sur du sulfate de magnésium, filtrée et séchée sous vide à 40 pour donner 0,5 g de l'isomère B de la N-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-Lalanine;

[]D = -35,7 (c = 1 % dans de l'éthanol à 95 %).

Analyse: Calc. pour C10 H19N3S: S

C, 51,48; H, 8,21; N, 6,00; S, 13,74

Trouvé: C, 51,29; H, 8,10; N, 5,82'; S, 13,53.

ExemDle 14

3-Hydroxv-N-(D-3-mercapto-2-méthvl-1-oxopropyl)-L-

tyrosine

,84 g (60 mmoles) de chlorure de D-3-acétylthio-2-

méthylpropanoyle sont ajoutés en 5 portions, à 0 sous

atmosphère d'azote, à 11,83 g (60 mmoles) de 3-hydroxy-L-

tyrosine, en même temps qu'une portion égale de 60 m*

d'hydroxyde de sodium 1N. On laisse le mélange réactionne.

sous agitation à la température ambiante pendant 4 h-. Puis on l'extrait avec 200 ml d'acétate d'éthyle et on le rend fortement acide avec du HC1 concentré. Puis l'extrait aqueux est extrait par 2. x 200 ml d'acétate d'éthyle, et les couches organiques combinées sont séchées sur du sulfate de magnésium. On chasse le solvant, et le résidu est dissous dans 30 ml d'acétate d'éthyle. On ajoute

26 1 6070

250 ml d'éther, puis.9,05 g (50 mmoles) de dicyclohexyl-

amine dans 30 ml d'éther. Le sel de dicyclohexylamine de

la 3-hydroxy-N-[D-3-(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-

tyrosine se forme immédiatement en cristaux blancs. Ce sel est filtré et séché jusqu'au lendemain; p.f.: ramollis-

sement à 60 , 75-80'.

Ce sel est converti en l'acide libre à l'aide

d'acétate d'éthyle et d'hydrogénosulfate de potassium.

Le composé acétylthio obtenu est traité par de l'ammoniaque en solution aqueuse sous atmosphère d'azote

pour donner la 3-hydroxy-N-(D-3-mercapto-2-méthyl-l-oxo-

propyl)-L-tyrosine; p.f.: ramollissement à 45 , 50-55 ; []CD = -1,1 (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice;

chloroforme:acide acétique 7:3) Rf: 0,29.

Analyse:calc. pour C13H17N05S. 0,5 H20:

C, 50,63; H, 5,88; N, 4,54; S, 10,39

Trouvé: C, 50,09; H, 6,06; N, 4,60; S, 10,39.

Exemple 15

3-Hydroxy-N-(R-3-mercapto-2-méthyl-1-oxopropvl)-L-

tyrosine Si l'on reprend le mode opératoire de l'exemple 14,

mais en utilisant du chlorure de R-3-acétylthio-2-méthyl-

propanoyle, on obtient la 3-hydroxy-N-(R-3-mercapto-2-

méthyl-l-oxopropyl)-L-tyrosine; p.f. 40-50e;]D =

+21,90 (c = 1, méthanol).

Analyse: Calc. pour C13H17N5S. 0,6 H20:

C, 50,34; H, 5,81; N, 4,52; S, 10,34

Trouvé: C, 50,01; H, 6,02; N, 4,51; S, 10,54.

Exemple 16

(+))-N-(3-mercapto-2-méthyl-l-oxoPropvl')lvcine

12,6 g (66 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-

méthylpropanoyle et une solution de 12 g (880 mmoles) de carbonate de sodium dans 50 ml d'eau sont ajoutés simultanément, en 5 portions distinctes, sur une période de 15 min. et sous vigoureuse agitation, à une solution, refroidie à 0 , de 5,7 g (75 mmoles) de glycine, de 4,0 g

(38 mmoles) de carbonate de sodium et de 100 ml d'eau.

Puis le mélange est lavé avec 3 portions d'acétate d'éthyle, acidifié avec du HC1 concentré jusqu'à pH-2, et extrait avec 3 portions d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont combinées, séchées sur du sulfate'de sodium et concentrées sous vide pour donner 12,5 g de ( )-N-[3(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]glycine. On agite à la température ambiante pendant 1 h une solution de 12,3 g (60 mmoles) du produit acétylthio dans 34 ml d'eau et 23 ml d'ammoniaque concentrée, puis on la lave avec 3 portions d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est acidifiée avec du HC1 concentré à pH 2 et extraite avec 3 portions d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont combinés, lavés à l'eau, séchés sur du sulfate de sodium et concentrés sous vide pour donner ,89 g d'une huile jaune. L'huile est cristallisée dans de l'acétate d'éthyle pour donner sous forme d'un solide

blanc 1,39 g de ( )-N-(3-mercapto-2-méthyl-k-oxopropyl)-

glycine; p.f. 121,5-123,5 . CCM (gel de silice; acétone:

acide acétique, 15:1) Rf = 0,57.

Analyse: Calc. pour C6H1N03S:

C, 40,70; H, 6,26; N, 7,91; S, 18,09

Trouvé: C, 40,67; H, 6,20; N, 7,94; S, 17,87.

Exemple 17

Sel de 1l1-diméthyléthanamine de la (+)-N-(3-

mercaDto-2-méthvl-1-oxopropyl)-L-phénylalanine (1:1) On reprend le mode opératoire de l'exemple 16 et on fait réagir la L-phénylalanine sur du chlorure de

3-acétylthio-2-méthylpropanoyle pour obtenir la (+)-N-[3-

(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-phénylalanine. Une solution de ce produit acétylthio dans de l'eau est traitée avec de l'ammoniaque concentrée et du méthanol sous atmosphère d'argon pendant 2 h. Le mélange est acidifié à pH environ 2 avec du HCl concentré, puis extrait à l'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées à l'eau, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner une huile

jaune doré. On ajoute 0,36 g (5;04 mmoles) de tert-butyl-

amine à une solution de 1,27 g (4,95 mmoles) de cette huile dans 10 ml de diéthyléther. On laisse le mélange réagir pendant 5 min. à la température ambiante, puis on triture le précipité blanc avec 2 x 25 ml de diéthyléther. Un séchage jusqu'au lendemain donne 1,15 g du sel de

1,1l-diméthyléthanamine de la (+)-N-(mercapto-2-méthyl-1-

oxopropyl)-L-phénylalanine (1:1) sous la forme d'une poudre blanche; p.f. 151,5-157'. CCM (gel de silice;

acétone:acide acétique, 30:1) Rf = 0,51.

Analyse: calc. pour C13H17N03S. C4H11 N

C, 59,97; H, 8,29; N, 8,23; S, 9,24

Trouvé: C, 59,31; H, 8,17; N. 8,06; S, 9,20.

Exemple 18

Sel de 1,1-diméthyléthanamine de la ( )-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-leucine (1:1) On a repris le mode opératoire de l'exemple 16 et

fait réagir la L-leucine sur du chlorure de 3-acétylthio-

2-méthylpropanoyle pour obtenir la (+)-N-[3-acétyl-thio)-2-

méthyl-l-oxopropyl]-L-leucine. Une solution aqueuse de ce produit acétylthio est traitée avec de l'ammoniaque concentrée sous atmosphère d'argon pendant 1,5 h et extraite avec de l'acétate d'éthyle. Puis la portion aqueuse est acidifée à pH 2 avec du HCl concentré. Le mélange huileux blanc obtenu est extrait à l'acétate d'éthyle, et les couches organiques sont combinées, lavées à l'eau, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner une huile limpide. Une solution de cette huile dans du diéthyléther est traitée avec de la tertbutylamine pour donner le sel

de 1,1-diméthyléthanamine de la (+)-N-(3-mercapto-2-

méthyl-l-oxopropyl)-L-leucine (1:1); p.f. 143-1540 avec décomposition. CCM (gel de silice; acétone:acide

acétique, 30:1) Rf = 0,54.

Analyse: Calc. pour C10H19NO3S. C4H11N

C, 54,87; H, 9,87; N, 9,14; S, 10,46

Trouvé: C, 54,44; H, 9,69; N, 8,81; S, 10,25.

Exemple 19

Sel de l,l-diméthyléthanamnine de l'acide ( )-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-qlutamiïue (1:2) On a repris le mode opératoire de l'exemple 16 et on a fait réagir l'acide L-glutamique sur le chlorure de 3-acétylthio-2-méthylpropanoyle pour obtenir l'acide (+)-N[3-(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-glutamique. Une solution aqueuse de ce produit acétylthio est traitée avec de l'ammoniaque concentrée sous atmosphère d'argon puis traitée comme dans l'exemple 18. On traite une solution du produit 3-mercapto dans le diéthyléther par de la tertbutylamine pour obtenir le sel de

1,1-diméthyléthanamine de l'acide (+)-N-(3-mercapto-2-

méthyl-l-oxopropyl)-L-glutamique (1:2); p.f. 167-185 avec décomposition. CCM (gel de silice; butanol:acide

acétique:eau 3:1:1) Rf = 0,55.

Analyse: Calc. pour C9 H1 5 N05S. 2C4Hl1N. 0,5 H20:

C, 50,47; H, 9,22; N, 10,39; S, 7,93

Trouvé: C, 50,72; H, 5,l4; N, 10,31; S, 8,44. -

Exemple 20

(+)-N-(3-Mercapto-2-méthyl-1-oxopropvl)-L-valine On reprend le mode opératoire de l'exemple 16 et on fait réagir de la L-valine sur du chlorure de 3-acétyl-

thio-2-méthylpropanoyle pour obtenir la (+)-N-[3-(acétyl-

thio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-valine. Une solution aqueuse de ce produit acétylthio est traitée avec de l'ammoniaque concentrée puis traitée selon le mode opératoire de l'exemple 16 pour donner la

(+)-N-(3-mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-valine; p.f.

-157 . CCM (gel de silice; butanol:acide acétique:eau

3:1:1) Rf = 0,61/0,64 avec chevauchement.

Analyse: Calc. pour C9gH17 NO3S:

C, 49,29; H, 7,81; N, 6,39; S, 14,62

Trouvé: C, 49,18; H, 7,47; N, 6,64; S, 14,43.

Exemple 21

Sel de N-cvclohexvlcvclohexamine de la (+)-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxoDropvl)-L-sérine (1:1) On reprend le mode opératoire de l'exemple 16 et on fait réagir de la L-sérine sur du chlorure de

3-acétylthio-2-méthylpropanoyle pour obtenir la (+)-N-[3-.

(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-sérine. Une solution aqueuse de ce produit acetylthio est traitée avec de l'ammoniaque concentrée sous atmosphère d'argon, puis traitée comme dans l'exemple 18. Une solution du produit 3-mercapto dans l'acétonitrile est traitée avec une solution de dicyclohexylamine dans du diéthyléther. Il se forme un précipité blanc, que l'on triture dans du diéthyléther. Un séchage jusqu'au lendemain donne le sel de N-cyclohexylcyclohexanamine de la (+)-N-(3-mercapto-2méthyl-l-oxopropyl)-L-sérine (1:1) sous la forme d'une poudre blanche; p. f. 163-171. CCM (gel de silice; butanol:acide acétique:eau, 3:1:1) Rf = 0, 65. Analyse: Calc. pour C7H13N04S. C12H23N:

C, 58,73; H, 9,34; N, 7,21; S, 8,25

Trouvé: C, 58,39; H, 9,27; N, 7,20; S, 8,22.

Exemple 22

(+)-N- r2-(Mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyll-L-

méthionine On ajoute goutte à goutte en 7 min., 3,85 g (15 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-benzylpropanoyle à une suspension, agitée à froid (0 ) de 3,29 g (16,5 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la L-méthionine et de 4,6 ml de triéthylamine dans 75 ml de chlorure de méthylène. Le mélange est agité pendant 2,5 h

à froid, puis dilué avec 100 ml de chlorure de méthylène.

La solution jaune obtenue est extraite successivement avec ml d'une solution aqueuse à 10 % de HC1, 50 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et 75 ml de saumure, séchée sur du sulfate de sodium et concentrée sous vide pour donner 5,94 g de l'ester méthylique de la

(+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-

méthionine sous la forme d'une huile jaune foncé.

On ajoute sous vigoureuse agitation 16,9 ml d'hydroxyde de sodium lN à une solution froide (-5 ), purgée à l'argon, de 2,94 g (7,67 mmoles) de ce produit acétylthio dans 20 ml'de méthanol. Ce mélange est agité pendant 3 h à froid, puis versé dans 125 ml d'eau et extrait par 2 x 40 ml de diéthyléther. La portion aqueuse est acidifiée à pH environ 1 avec du HCl concentré et extraite par 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont combinées, lavées avec 60 ml de saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner 2,06 g d'un solide jaune clair. Une recristallisation de 1,4 g de ce solide dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'hexane donne sous la forme d'une

poudre blanche 1,07 g de (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-

3-phénylpropyl]-L-méthionine; p.f. 130-141 . CCM (gel de

silice; butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,69.

Analyse: Calc. pour C15H2,lN03S2:

C, 55,02; H, 6,46; N, 4,28; S, 19,58

Trouvé:.C, 55,14; H, 6,46; N, 4,19; S, 19.14.

Exemple 23

Sel de 1,1-diméthyléthanamine de la (+)-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-méthionine (1:l) On ajoute goutte à goutte en 6 min., 3,78 ml (25 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2méthylpropanoyle à une suspension de 4,99 g (25 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-méthionine-et de 13,94 g de triéthylamine dans 100 ml de chlorure de méthylène. Le mélange est agité à froid pendant 3 h, puis dilué avec 100 ml de chlorure de méthylène. La solution jaune obtenue est lavée successivement avec 70 ml d'une solution aqueuse à % de HCl, 70 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et 100 ml de saumure, séchée sur du sulfate de sodium et concentrée sous vide pour donner l'ester

méthylique de la (+)-N-[3-(acétylthio)-2-méthyl-l-oxo-

propyl]J-L-méthionine. Une solution de ce produit acétylthio dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N et élaborée selon le mode opératoire de l'exemple 22 pour

donner la (+)-N-(3-mercapto)-2-méthyl-1-oxopropyl)-L-

méthionine. On ajoute de la tert-butylamine à une solution du produit mercapto dans du diéthyléther. La gomme jaune obtenue est triturée dans de l'éther pour donner un solide jaune clair. Une recristallisation dans de l'acétate d'éthyle/éthyléther donne le sel de 1,1-diméthyléthanamine de la (+)-N-(3-mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-méthionine (1:1) sous la forme d'une poudre blanche; p.-f. lente décomposition au-delà de 109 . CCM (gel de silice;

butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,64.

Analyse: Calc. pour CH NO3S2. C4H11N

C, 48,12; H, 8,70; N, 8,63; S, 19,76

Trouvé: C, 47,87; H, 8,68; N, 8,45; S, 19,59.

Exemple 24

Sel de 1,1-diméthyléthanamine de la (+)-3-hydroxy-

N- 2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyvll-L-tyrosine

(1:1

On ajoute 6,9 g (35 mmoles) de 3-hydroxy-(L)-

tyrosine et 30 ml d'éther à une solution refroidie à -5, et sous agitation, de 7,03 g (17,5 mmoles) de borate de sodium décahydraté dans 75 ml d'hydroxyde de sodium lN, sous atmosphère d'argon. On ajoute en 15 min., tout en agitant vigoureusement, 8,97 g (34,9 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-benzylpropanoyle et 63 ml d'hydroxyde de sodium iN, pour obtenir un mélange brun foncé. On laisse l'émulsion obtenue réagir à froid pendant -2 h. Puis la couche aqueuse est séparée, lavée avec 30 ml d'éther, acidifiée à pH 1,5 avec du HC1 concentré et extraite par 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 100 ml de saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner

sous la forme d'une gomme jaune 4,57 g de (+)-3-hydroxy-N-

[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-tyrosine. On ajoute sous atmosphère d'azote 9,2 ml d'ammoniaque concentrée à une solution-sous agitation de 4,57 g (10,95 mmoles) du produit acétylthio dans 17 ml de méthanol. Le mélange est agité pendant -1,5 h à -la température ambiante, puis versé dans 120 ml d'eau et lavé avec 2 x 40 ml d'éther. La couche aqueuse est acidifiée à pH environ 1,5 avec du HCl concentré et extraite par 3 x ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées par 100 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner sous la forme d'une mousse brun jaune clair 4,19 g de

( )-3-hydroxy-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-

l

2615Q70

L-tyrosine.

Une solution de 2,2 ml (11 mmoles) de dicyclohexyl-

amine dans 20 ml d'éther est ajoutée à une solution de 4,15 g (9,94 mmoles) de ce produit mercaptométhylique dans 250 ml d'éther. On laisse reposer pendant 30 min. le précipité jaune clair qui se forme, puis on le filtre et on le triture dans 100 ml d'éther pour obtenir 4,37 g du sel de cyclohexylcyclohexanamine sous la forme d'une poudre jaune clair. L'acide libre est régénéré par partage de 4,02 g (6,71 mmoles) de ce sel entre 50 ml d'une solution aqueuse de HCl à pH 1 et 2 x 50 ml d'éther et ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont recueillies, lavées avec 75 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner une mousse jaune. On laisse cette mousse se dissoudre dans ml d'éther, et on lui ajoute une solution de 0,68 ml (6,47 mmoles) de tert-butylamine dans 10 ml d'éther. On laisse reposer pendant 5 min. le précipité blanc caillebotté gui se forme, puis on le triture-avec 2 x 100 ml d'éther, on le filtre et on le sèche sous vide pour obtenir sous la forme d'une poudre blanche, 2,88 g du sel

de 1,1-diméthyléthanamine de la (+)-3-hydroxy-N-[2-

(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-tyrosine (1:1); p.f. décomposition au-delà de 680. CCM (gel de silice;

butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,79.

Analyse: Calc. pour C19H21 NO5S. C4H11 N

C, 61,58; H, 7,19; N, 6,24; S, 7,15

Trouvé: C, 61,88; H, 7,22; N, 6,02; S, 5,73.

Exemple 25

Sel de N-cyclohexylcvclohexanamine de la ( )-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxopropyvl)-L-alanine (1:1) On ajoute sous agitation 72,6 ml (1 mole) de chlorure de thionyle à une suspension refroidie à 5' de 44,55 g (0,5 mole) de (L)-alanine. On laisse la réaction se poursuivre pendant 16 h tout en chauffant à la température ambiante. Le soIvant et le chlorure de thionyle en excès sont chassés par distillation sous vide, pour donner 69,58 g du chlorhydrate de l'ester méthylique

26 6070

de la (L)-alanine, p.f. 108-111,5 .

On ajoute sous vigoureuse agitation et en 10 min.

3,61 g (20 nmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-mnéthyl-

propanoyle à une suspension de 2,85 g (20 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-alanine et de ,76 g de triéthylamine dans 75 ml de chlorure de méthylène. On laisse le -mélange réagir à froid pendant 4 h. Puis on l'extrait successivement avec 40 ml de HC1 à %, 40 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et 75 ml d'une saumure, on le sèche sur du sulfate de sodium et on le concentre sous vide pour obtenir sous la forme d'une huile jaune 4,85 g de l'ester méthylique de

la (+)-N-[3-(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-alanine.

On ajoute 40,38 ml de chlorure de sodium 1N à une solution sous agitation, refroidie à -5 , de 4,59 g (18,59 mmoles) de ce produit acétylthio dans 30 ml de méthanol, sous atmosphère d'argon et en maintenant la température en dessous de 5 . La solution est agitée pendant 3 h à froid, puis versée dans 150 ml d'eau et lavée à l'acétate d'éthyle. La couche aqueuse est acidifiée à pH environ 1,5 avec du HC1 concentré et extraite par 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées -sous vide pour

donner sous la forme d'une huile jaune 3,09 g de (+)-N-(3-

mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-alanine.

On ajoute 2,45 ml de dicyclohexylamine à une solution de 2,14 g (11,19 mmoles) de ce produit mercapto dans 30 ml d'acétate d'éthyle. Après avoir laissé au repos pendant 16 h à 4 , il se forme une masse cristalline blanche, qui est filtrée et séparée sous vide pour donner 3,34 g du sel de N-cyclohexylcyclohexanamine de la (+)-N-(3-mercapto-2-méthyl-loxopropyl)-L-alanine (1:1) sous la forme d'une poudre blanche; p.f. 149153. CCM (gel de silice; butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf =

0,66 et 0,50.

Analyse: Calc. pour C7H13N03S. C12Hz23N:

C, 61,25; H, 9,74; N, 7,52; S, 8,61

Trouvé: C, 61,10; H, 9,85; N. 7,40'; S, 8,38.

Exemple 26

Sel de N-cvclohexylcvclohexanamine de la (+ )-N2-2-

(mercaptométhvl)-l-oxo-3-phénvlpropvll-N- r (phénvlméthoxvX -carbonyll-Llvsine (1:1) On ajoute sous agitation 12,19 ml (177,7 mmoles) de chlorure de thionyle à une suspension refroidie à -10' de

24,92 g (88,9 mmoles) de N6-[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-

lysine dans 150 ml de méthanol! tout en maintenant la température en dessous de -5 . On agite la suspension obtenue pendant 16 h, période au cours de laquelle om

laisse la température revenir à la température ambiante.

Le mélange est concentré sous vide pour donner unq huile

jaune, qui cristallise en formant une masse jaune clair..

Une trituration dans l'éther donne 28 g du chlorhydrate de

l'ester méthylique de la N6-[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-

lysine. On ajoute, tout en maintenant la température em dessous de 0 , 12, 84 g (50 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-benzylpropanoyle à une suspension sous agitation, refroidie à -10 , de 14,72 g (50 mmoles) du

chlorhydrate de l'ester méthylique de la N6-[(phényl-

méthoxy)carbonyl]-L-lysine et de 18,3 ml (110 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 300 ml de chlorure de méthylène. On laisse le mélange réagir pendant 3 h à froid. Puis on le verse dans une quantité supplémentaire

de 200 ml de chlorure de méthylène, on le lave successive-

ment avec 100 ml de HCl à 10 %, 100 ml de bicarbonate de sodium saturé et 150 ml d'une saumure, on le sèche sur du sulfate de sodium et on le concentre sous vide pour; obtenir sous la forme d'un solide brun 26,12 g de l'ester

méthylique de la (+)- N2-[2-(acétylthiométhyl)-i-oxo-3-

phénylpropyl]-N6-[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-lysine. Tout en maintenant la température en dessous de 0', on ajoute sous atmosphère d'azote une solution de 104,7 ml (104,7 tmmoles) d'hydroxyde de sodium 1N à une solutiam sous agitation, refroidie à -8 , de 26,04 g (49,9.mmoles} de ce produit acétylthiométhylique dans 250 ml de méthanol. Après 3 h d'agitation du mélange à froid, on le

2 616070

concentre sous vide à environ le quart de son volume et on le verse dans 400 ml d'eau. On ajoute de l'hydroxyde de sodium 4N, en mettant les solides en solution, laquelle est ensuite lavée avec 2 x 100 mi d'acétate d'éthyle, acidifiée à pH environ 2 avec du HC1 concentré et extraite avec 3 x 70 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 100 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner sous la forme d'une mousse brune 20,51 g de

(+)-N2-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-N6-

[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-lysine. On ajoute 0,84 ml de dicyclohexylamine à une

solution de 1,7 g (3,82 mmoles) de ce produit mercapto-

méthylique dans de l'acétate d'éthyle et de l'éther. La gomme jaune qui se forme est solidifiée par addition d'hexane et triturée dans l'hexane pour donner 2,05 g d'une poudre jaune clair. Une portion (1,6 g) est recristallisée dans un mélange éther/benzène/hexane pour donner sous la forme d'un solide blanc, 1,41 g du sel de

N-cyclohexylcyclohexanamine de la ( )-N2-[2-(mercapto-

méthyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-N6 -[(phénylméthoxy)carbonyl] -L-lysine (1:1); p.f.: décomposition au-delà de 66'. CCM (gel de silice; butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,78. Analyse: Calc. pour C24H30N205S. Cl:H23:

C, 67,57; H, 8,35; N, 6,57; S, 5,01

Trouvé: C, 67,19; H, 8,22; N, 6,37; S, 4,80.

Exemple 27

(+)-N- r 2-MercartométhYl)-l-oxo-3-phénvlpropyll-L-

alanine

On fait réagir du chlorure de 3-acétylthio-2-benzyl-

propanoyle et le chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-alanine en présence de triéthylamine selon le mode opératoire de l'exemple. 25 pour obtenir l'ester méthylique

de la (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]'-L-

alanine. Une solution refroidie et sous agitation de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium lN sous atmosphère d'argon et élaborée comme décrit dans l'exemple 25 pour donner sous la

forme d'une poudre blanche la (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-l-

oxo-3-phénylpropyl]-L-alanine; p.f.. 119,5-124,5 . CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,21,

0,23 (chevauchement).

Analyse: Calc. pour C13H17NO3S:

C, 58,40; H, 6,41; N, 5,24; S, 11,99

Trouvé: C, 58,27; H, 6,59; N, 5,14; S, 11,00 Exemple 28

Sel de 1,1-diméthyléthanamine du ( )-N-r2-(mercarto-

méthyl)-l-oxo-3-phénylpropyli]-L-tryptophane (1:1)

On fait réagir du chlorure de 3-acétylthio-2-benzyl-

propanoyle et le chlorhydrate de l'ester méthylique du (L)-tryptophane en présence de diisopropyléthylamine selon le mode opératoire de l'exemple 26 pour obtenir l'ester

méthylique du (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-tryptophane. On ajoute de l'hydroxyde de sodium IN à une solution sous agitation, refroidie à -10, de cet ester méthylique dans du méthanol, et on l'élabore selon le mode opératoire de l'exemple 26 pour obtenir sous la forme d'une mousse

brun clair le ( )-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-tryptophane. On ajoute de la tert-butylamine dans de l'éther a une

solution de ce produit mercaptométhylique dans de l'éther.

Un traitement selon le mode opératoire de l'exemple 24

donne le sel de 1,1-triméthyléthanamine du (+)-N-[2-

mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-tryptophane (1:1); p.f.: décomposition au-delà de 74'. CCM (gel de silice: butanol:acide acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,73 Analyse: Calc. pour C,H22N203S. C4H1,N:

C, 65,39; H, 7,24; N, 9,15; S, 6,98

Trouvé: C, 65,38; H, 7,54; N, 9,08; S, 5,91.

Exemple 29

(+)-N- r 2-(Mercaptométhvl)-l-oxo-3-phénvlpropyll-L-

tvrosine

On fait réagir du chlorure de 3-acétylthio-2-benzyl-

propanoyle et le chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)--tyrosine en présence de diisopropyléthylamine selon le mode opératoire de l'exemple 26, pour obtenir l'ester

méthylique de la (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]-L-tyrosine. On ajoute de l'hydroxyde de sodium 1iN à une solution sous agitation, refroidie à -10 , de ce produit ester méthylique dans du méthanol, et on le traite selon le mode opératoire de l'exemple 26 pour obtenir sous la forme

d'une mousse jaune la (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]-L-tyrosine. On ajoute 1,1 ml de tert-butylamine à une solution de 3,41 g (9,89 mmoles) de ce produit. mercaptométhylique dans de l'éther. On fait précipiter plus avant la gomme jaune ainsi formée, par addition d'hexane. Une trituration dans

2 x 50 ml de ligroine donne 3,15 g du sel de 1,1-diméthyl-

éthanamine de la (+)-N-[2-(mercaptomnéthyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-tyrosine. On partage 2,5 g (5,78 mmoles) de ce sel entre du HCl à 10 % et 3 x 30 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées et lavées avec 50 ml d'eau et ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide. Le résidu, une mousse jaune, est repris dans 40 ml d'éther et on lui ajoute 1,24 ml (6,22 mmoles) de dicyclohexylamine dans 10 ml d'éther. Il se forme une gomme jaune, qui est solidifiée par addition d'hexane pour donner sous la forme d'un solide amorphe

2,04 g du sel de N-cyclohexylcyclohexanamine de la (+)-N-

* [2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-tyrosine,

p.f.: décomposition au-delà de 64 .

Une portion de 0,6 g (1,11 mmole) de ce sel de Ncyclohexylcyclohexanamine est partagée entre 15 ml

d'hydroxyde de sodium 0,2N et 4 x 7 ml d'acétate d'éthyle.

La portion aqueuse est ensuite acidifiée à pH environ 1 avec du HCl concentré et extraite avec 4 x 10 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 30 ml d'hydrogénosulfate de potassium à 10 % et 30 ml de saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner sous la forme d'une

mousse blanche la (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]-L-tyrosine. CCM (gel de silice; benzène:

acide acétique, 3,5:1) Rf = 0,23, 0,25.

Analyse: Calc. pour C19H21NO4S:

C, 62,65; H, 5,96; N, 3,85; S, 8,80

Trouvé: C, 62,65; H, 5,76; N, 3,77; S, 8,54.

Exemple 30

N-r2-(MercaDtométhvll--l-oxo-3-phénylpropvl1l-L-

norleucine (isomère B) On met en suspension 2,62 g (20 mmoles) de (L)norleucine dans une solution de 30 ml d'éthanol à 95 % et de 7 ml d'hydroxyde de sodium IN, et on refroidit à -10 . On ajoute sous vigoureuse agitation en 5 portions égales, en 20 min., 5,32 g (20 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-2-benzylpropanoyle et 14 ml d'hydroxyde de sodium iN. Puis le mélange est agité pendant 1,5 h à froid, versé dans de l'eau, le pH est ajusté à environ5 avec du carbonate de potassium 2N, puis le mélange est extrait par 3 x 7 ml d'acétate d'éthyle. La couche aqueuse est ensuite acidifiée à pH environ 1,5 avec du HC1

concentré et extraite avec 3 x 50 ml d'acétate d'éthyle.

Les couches organiques sont combinées, lavées avec une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner sous la forme d'une huile jaune 3,9 g de (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-1-oxo-3phénylpropyl] -L-norleucine. Tout en agitant vigoureusement sous atmosphère d'azote et en maintenant la température de réaction en dessous de 0 , on ajoute 14,4 ml d'hydroxyde de sodium iN à une solution refroidie à -10 de 3,48 g (9,6 mmoles) du produit acétylthiométhylique ci-dessus dans 20 ml de méthanol. Le mélange est agité pendant 3,5 h à froid, puis partiellement concentré sous vide, versé dans 200 ml d'eau et lavé avec 3 x 50 ml d'acétate d'éthyle. La couche aqueuse est acidifiée à pH environ 1,5 avTec du HC1 concentré et extraite avec 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 100 ml d'une

2616? 70

saumure pour donner sous la forme d'une huile jaune qui

commence à cristalliser au repos 2,99 g de (+)-N-[2-

(mercaptométHyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-norleucine.

On applique 2,99 g (9,57 mmoles) du produit mercapto-

méthylique ci-dessus sur une colonne chromatographique (gel de silice E. Merck, 230-400 mesh, 260 g), et on l'élue sous pression avec -un mélange 8:1 de toluène et d'acide acétique. Les fractions portant les nos 36 à 40 (30-40 ml chacune) sont réunies et concentrées sous vide

pour donner 0,18 g du produit recherché. Une recristalli-

sation dans du benzène/hexane donne 0,13 g de l'isomère B

de la N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-

norleucine; p.f.: décomposition au-delà de 105 ; [î]D = -56,8 (c = 1,0, méthanol). CCM (gel de silice;benzene:

acide acétique, 4:1) Rf = 0,26.

Analyse: Calc. pour C 6H23N03S:

C, 62,11; H, 7,49; N, 4,53; S, 10,36

Trouvé: C, 61,96; H, 7,49; N, 4,42; S, 10,03.

Exemple 31 -

N-r 2-(Mercattométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyll-L-phénvl-

alanine (isomère A) Tout en maintenant la température en dessous de 0 C,

on ajoute 2,57 g (10 mmoles) de chlorure de 3-acétylthio-

2-benzylpropanoyle à une suspension sous agitation et refroidie à -5' de 2,37 g (11 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)phénylalanine et de 3,07 ml (22 mmoles) de triéthylamine dans 60 ml de chlorure de méthylène. On laisse le mélange réagir à froid pendant 3 h, puis on le verse dans une quantité supplémentaire de

ml de chlorure de méthylène, puis on le lave successi-

vement avec 30 ml de HC1 à 10 %, 30 ml de bicarbonate de sodium en solution saturée et 50 ml d'une saumure, puis on le sèche sur du sulfate de sodium et enfin on le concentre sous vide pour obtenir 4,02 g de l'ester méthylique de la (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl] -L-phényl -alanine. Une solution de 13,36 g (29,4 mmoles) de ce produit ester méthylique dans une faible quantité d'un mélange 2,5:1 d'hexane et d'acétate d'éthyle est appliquée sur du gel de silice (1,5 kg, 230-400 mesh) et éluée sous pression avec un mélange 2,5:1 d'hexane et d'acétate d'éthyle. On isole une portion de l'isomère ayant un R. élevé (2,81 g). Le résidu de la première chromatographie

(8,17 g) est ensuite appliqué sur une colonne de chromato-

graphie préparative en phase liquide Waters 500, en utilisant deux cartouches de silice et en éluant avec un mélange 3,5:1 d'hexane et d'acétate d'éthyle. On obtient une quantité supplémentaire de 2,36 g de l'isomère ayant un Rf élevé, et on la combine avec le premier lot pour obtenir 5,17 g de l'isomère A de l'ester méthylique de la

N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-phényl-

alanine; p.f. 95-98,5 , sous la forme d'une masse

cristalline blanche.

Sous vigoureuse agitation et sous atmosphère d'azote, on ajoute 25,3 ml d'hydroxyde de sodium 1N à une solution de 5,02 g (12,57 mmoles) du produit isomère A de l'ester méthylique ci-dessus dans 30 ml de méthanol refroidi a -10 C. On laisse la solution, qui se solidifie après addition de l'hydroxyde de sodium, revenir à 10 , et on l'agite à cette température pendant 3 h. Puis le mélange est partiellement concentré sous vide et versé dans 150 ml d'eau, alcalinisé à pH environ 10 avec de l'hydroxyde de sodium lN et lavé avec 2 x 80 ml d'éther. La portion aqueuse est séparée, acidifiée à pH environ 1,5 avec du HC1 concentré et extraite avec 3 x 60 ml d'acétate d'éthyle. Ces extraits sont 'lavés avec 100 ml d'une solution saturée à 50 % de chlorure de sodium, séchés sur du sulfate de sodium et concentrés sous vide pour donner 30. 4,16 g d'un solide blanc. Ce produit est dissous dans du benzène, refroidi par addition d'hexane pour donner un gel, lequel est séparé par filtration et séché sous vide pour donner sous la forme d'un solide blanc 3,66 g de

l'isomère A de ia N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-phénylalanine; p.f. 98-103 ; [O]D =.+19,5' (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice; chloroforme:acide

acétique, 10:1) Rf = 0,56.

Analyse: Calc. pour C19H21N03S:

C, 66,43; H, 6,16; N, 4,08; S, 9,33

Trouvé: C, 66,71; H, 6,32; N, 3,93; S, 9,30.

Exemple 32

N- [2- (Mercaptométhyl-l-oxo-3-phény1propyll-L-phényl- alanine (isomère B) En utilisant le mode de séparation chromatographique décrit dans l'exemple 31, on obtient sous la forme d'un solide blanc 4,66 g de l'isomère B de l'ester méthylique

de la N-[2-(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-

phénylalanine; p.f. 75,5-79 .

Un traitement d'une solution de ce-produit ester méthylique dans du méthanol avec de l'hydroxyde de sodium IN, puis traitement par le mode opératoire de l'exemple 31, donne sous la forme d'une mousse blanche 2,7 g de

l'isomère B de la N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-phénylalanine; [o]D = -9,0 (c = 1, méthanol).

CCM (gel de silice; chloroforme: acide acétique, 10:1).

Rf = 0,42.

Analyse calc. pour C19H21,NO3S. 0,31 H20:

C, 65,38; H, 6,24; N, 4,01; S, 9,19

Trouvé: C, 65,49; H, 6,21; N, 3,87; S, 9,07.

Exemple 33

(+)-N- r2-(Mercattométhyl)-4-méthyl-1-oxoDentvl]-L-

Dhénvlalanine

On fait réagir du chlorure de 2-acétylthiométhyl-4-

méthylpentanoyle et l'ester éthylique de la (L)-phényl-

alanine dans du chlorure de méthylène en présence de diisopropyléthylamine à une température inférieure à 0 , selon le mode opératoire de l'exemple 26, pour obtenir sous la forme d'une mousse blanc cassé l'ester éthylique

de la (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-L-

phénylalanine. Une solution de ce produit ester éthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium lN à'une température inférieure à 0 et traitée selon le mode opératoire de l'exemple 26 pour donner sous la forme d'une

huile visqueuse limpide la (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-4-

méthyl-l-oxopentyl]-L-phénylalanine. CCM (gel. de silice;

benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,12, 0,17.

Analyse: calc. pour C16H23N03S:

C, 62,11; H, 7,49; N, 4,53, S, 10,36

Trouvé: C, 61,81; H, 7,30; N, 4,35; S, 10,14.

Exemple 34

(+)-N- r 2-(Mercaptométhyvl)-4-méthyl-l-oxopentv 1-L-

leucine

On fait réagir du chlorure de 2-acétylthiométhyl-4-

méthylpentanoyle et l'ester éthylique de la (L)-leucine

dans du chlorure de méthylène en présence de diisopropyl- éthylamine à une température inférieure à 0 , selon le mode opératoire de

l'exemple 26 pour obtenir l'ester

éthylique de la (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-1-

oxopentyl]-L-leucine.

Une solution de ce produit ester éthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N à une température inférieure à 0 , et élaborée selon le mode opératoire de l'exemple 26 pour donner sous la forme d'un

solide jaune la (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxo-

pentyl]-L-leucine. CCM (gel de silice; chloroforme:acide

acétique, 10:1) Rf = 0,30, 0,39.

Analyse: Calc. pour C13 H25N03S:

C, 56,69; H, 9,15; N, 5!09; S, 11,64

Trouvé: C, 56,72;-H, 9,05; N, 4,99; S, 11,44.

- Exemple 35

(+)-N- r 2-(Mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyll-L-

trvptophane

On fait réagir du chlorure de 2-acétylthiométhyl-4-

méthylpentanoyle et l'ester méthylique du (L)-tryptophane

dans du chlorure de méthylène en présence de diisopropyl-

éthylamine à une température inférieure à 0 , selon le mode opératoire de l'exemple 26, pour obtenir l'ester

méthylique du (+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxo-

pentyl]-L-tryptophane.

Une solution de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N à une température inférieure à 0 et élaborée selon le mode operatoire de l'exemple 26 pour donner sous la forme d'un

solide jaune amorphe le (+)-N-[2-(mercaptométhyl)-4-

méthyl-l-oxopentyl]-L-tryptophane. CCM (gel de silice;

chloroforme:acide acétique, 8:1) Rf = 0,19, 0,25.

Analyse: Calc. pour ClH24N2O3S. 0,47 H20:

C, 60,57; H, 6,78; N, 7,84; S, 8,98

Trouvé: C, 60,98; H, 7,01; N, 7,40; S, 8,80.

Exemple 36

N- r2- (Mercartométhyl)-l-oxo-3-phénylDropvl1-L-

leucine (isomère B) Dans le mode opératoire de l'exemple 1, les fractions contenant l'isomère se déplaçant le plus lentement sont combinées et concentrées pour donner

l'isomère B de l'ester méthylique de la N-[2-(acétyl-

thiométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine. Un traitement à l'aide d'hydroxyde de sodium comme décrit dans l'exemple 1 donne sous la forme d'un solide cristallin

blanc l'isomère B de la N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]-L-leucine; p.f. 143-145'; -[î]D = -75,7 (c = 0,89, méthanol). CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,38. CCM (gel de silice, chloroforme:

acide acétique, 15:1) Rf = 0,25.

Analyse: Calc. pour C16H23N03S:

C, 62,11; H, 7,49; N, 4,53; S, 10,36

Trouvé: C, 62,01; H, 7,49; N, 4,49; S, 10,32.

Exemple 37

Sel de N-cyclohexylcvclohexanamine de la (R)-N-(2-

mercaoto-l-oxo-3-phénylDropyl)-L-leucine (1:1) Tout en maintenant le mélange réactionnel à 0 , on ajoute 32,75 g (482 mmoles) de nitrite de sodium, en 1 h, à une solution refroidie de 51 g (309 mmoles) de (L)phénylalanine et de 125 g de bromure de potassium dans 620 ml d'acide sulfurique 2,5N. Le mélange est encore agité pendant 1 h à 0O, puis pendant 1 h à la température ambiante. La solution réactionnelle est extraite à l'éther, extraite de nouveau à 1'eau, et la couche éthérée est séchée sur du sulfate de sodium. L'éther est éliminée sous vide, et une distillation du résidu huileux donne 44,9 g d'acide (S)-2-bromo-3phénylpropionique; PE 142-144' (33 Pa = 0,25 mm Hg). On agite sous argon à la température ambiante pendant 75 min. un mélange de 8,7.ml (121,5 mmoles) d'acide thiolacétique et de 6,8 g (121,5 mmoles) d'hydroxyde de potassium dans 225 ml d'acéto- nitrile. Le mélange est refroidi dans un bain de glace, et on ajoute en 10 min. une solution de 25,3 g (110,5 mmoles) d'acide (S)-2-bromo-3-phénylpropionique dans 25 ml d'acétonitrile. Le mélange réactionnel est agité sous atmosphère d'argon à la température ambiante pendant 5 h, filtré, et l'acétonitrile est chassé sous vide. Le résidu huileux est redissous dans de l'acétate d'éthyle et lavé avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 % et de l'eau. Une élimination de l'acétate d'éthyle sous vide donne 24 g du produit brut. Ce produit brut est purifié par conversion en son sel de dicyclohexylamine, en utilisant de l'isopropyléther comme solvant pour la

cristallisation, pour donner le sel de N-cyclohexyl-

cyclohexanamine de l'acide (R)-2-acétylthio-3-- phényl-

propionique (1:1).

Le sel ci-dessus (2,83 g, 7,0 mmoles) est mis en suspension dans 50 ml d'eau, acidifié à pH environ 1,0 avec du HCl concentré et extrait avec 3 x 25 ml d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques combinés sont lavés avec 30 ml de HCl 0,1N et 30 ml de-saumure, séchés sur du sulfate de sodium et concentrés sous vide pour donner une huile jaune clair limpide. On ajoute 1,44 g (7,0 mmoles)

de dicyclohexylcarbodiimide dans 10 ml de tétrahydro-

furanne à une solution, refroidie à -5 , de 1,31 g (7,0

mmoles) de cette huile qui est l'ester.l,l-diméthyl-

éthylique de la (L)-leucine, et de 0,95 g (7,0 mmoles) d'hydrate d'hydroxybenzotriazole dans 50 ml de tétrahydrofuranne. Le mélange est agité jusqu'au lendemain, tout en étant chauffé à la température ambiante. Le mélange est séparé par filtration, et le filtrat est concentré, repris dans 60 ml d'acétate d'éthyle, filtré, lavé avec une solution saturée de

bicarbonate de sodium, une solution à 10 % d'hydrogéno-

sulfate de potassium et une saumure (30 ml pour chaque solution), séché sur du sulfate de sodium et concentré sous vide pour donner une huile jaune limpide. Cette huile est appliquée sur une colonne de 15 g de gel de silice 230-400 mesh et éluée avec 100 ml d'un mélange 1:1 d'éther et d'hexane. L'éluat est concentré sous vide pour donner sous la forme d'une huile jaune clair limpide 2,49 g dé

l'ester 1,1-diméthyléthylique de la (R)-N-[2-(acétylthio)-

1-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine. [a]D' = +24,7 (c = 1,

méthanol).

On ajoute 2,0 ml d'acide trifluoracétique dans 5 ml de chlorure de méthylène à un mélange de 1,88 g (5,09

mmoles) de l'ester 1,1-diméthyléthylique de la (R)-N-[2-

(acétylthio)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine et de 0,1 ml d'anisole. Le mélange est agité jusqu'au lendemain sous un tube sécheur. Ensuite, le mélange est concentré sous vide, on ajoute 10 ml de toluène et le mélange est encore concentré deux fois. Le résidu rose est repris dans de l'isopropyléther, et on ajoute 0,86 ml (5,21 mmoles) de dicyclohexylamine. Il se forme un précipité blanc, qu'on sépare par filtration. Les liqueurs mères sont concentrées, et le résidu est repris dans 40 ml d'acétate d'éthyle et lavé avec 2 x 20 ml d'hydrogénosulfate de potassium à 10 %, 20 ml d'eau et 3 x 20 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. Lés portions basiques aqueuses sont combinées, acidifiées à pH environ 2 avec du HC1 concentré et extraites avec 3 x 30 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 30 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner sous la forme d'une

huile jaune clair limpide la (R)-N-[2-(acétylthio)-1-oxo-

3-phénylpropyl]-L-leucine. Une solution de 0,9 g (2,87 mmoles) de cette huile dans 5 ml de méthanol est purgée à l'azote et refroidie à -10 . On ajoute goutte à goutte en 10 min., 5 ml d'ammoniaque concentrée, et le mélange est agité pendant 2 h puis concentré sous vide. Le résidu est repris dans ml d'eau, et le pH est ajusté à 'environ 8,5 avec de l'hydroxyde de sodium 0,iN, lavé avec 2 x 20 ml d'acétate d'éthyle, acidifié à pH environ 3 avec du HCl 1N et extrait avec 3 x 20 ml d'acétate d'éthyle. Ces couches sont combinées et concentrées pour donner 0,93 g d'une huile jaune. Une portion de cette huile (0,73 g) est reprise dans 80 ml d'isopropyléther (en chauffant

doucement), et on ajoute 0,56 ml (2,8 mmoles) de dicyclo.

hexylamine dans de l'isopropyléther chaud. On ajoute 80 ml d'hexane, et le mélange est refroidi jusqu'au lendemain dans un congélateur. Le précipité blanc qui se forme est séparé par filtration, lavé 3 fois avec un mélange d'isopropyléther à 50 % et d'hexahe, et séché sous vide pour donner 0,87 g du sel de N-cyclohexylcyclohexanamine de la (R)-N-(2mercapto-l-oxo-3-phénylpropyl)-L-leucine

(1:1); p.f. 176-178; [o]D = -28,6 (c = 1, méthanol).

CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf =

0,17, 0,37 (tache inférieure due à la dicyclohexylamine).

Analyse: Calc. pour C15H21NO3S. C12H23N. 0,3 H2 0

C, 67,26; H, 9,32; N, 5,81; S, 6,65

Trouvé: C, 67,36; H, 9,20; N, 5,83; S, 6,41 Exemole 38

Sel de N-cvclohexvlcvclohexanamine de la (S)-N-(2-

mnercatto-l-oxo-3-phénylpropylt-L-leucine (1: 1) On obtient, en suivant le mode opératoire de l'exemple 37 mais en utilisant la D-phénylalanine, l'acide (R)-2-bromo-3-phénylpropionique. Un traitement de cet acide par de l'acide thiolacétique et de l'hydroxyde de potassium, puis son élaboration selon le mode opératoire de l'exemple 37, donnent le sel de Ncyclohexylcyclohexan-' amine de l'acide (S)-2-acétylthio-3phénylpropionique

(1:1).

Ce sel est converti en l'acide libre. On ajoute du dicyclohexylcarbodiimide dans du tétrahydrofuranne à une solution d'acide (S)-2-acétylthio-3-phénylpropionique, de l'ester 1,l-diméthyléthylique de la (L)-leucine et d'hydroxybenzotriazole hydraté,dans du tétrahydrofuranne à -8 , et le mélange réactionnel est agité jusqu'au lendemain, sous chauffage à la température ambiante, puis il est traité selon le mode opératoire de l'exemple 37 pour donner sous la forme d'une huile visqueuse jaune

clair l'ester 1,1-diméthyléthylique de la (S)-N-[2-

(acétylthio)-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine. Une partie de cette huile (2,05 g, 5,21 mmoles) est purgée à l'argon et traitée avec une solution froide à -5 d'anisole à 5 % dans 10,25 ml d'acide trifluoracétique. Le mélange est agité pendant 30 min. à 0 , puis on le laisse revenir à la température ambiante pendant 1 h. La solution est concentrée sous vide, on ajoute 30 ml de toluène et on le chasse sous vide, et le résidu est séché jusqu'au lendemain sous vide. La plus grande partie de ce produit (95 %) est dissoute dans 5 ml de méthanol et refroidie à 0 sous atmosphère d'azote. On ajoute goutte à goutte en 10 min. 5 ml d'ammoniaque concentrée, et le mélange est agité jusqu'au lendemain, en réchauffant à la température ambiante. Puis le mélange est versé dans 150 ml d'eau, acidifié à pH environ 2 avec du HC1 1N et extrait par 3 x ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées et lavées avec 30 ml de HCl 0,1N, 30 ml d'eau et ml d'une saumure, puis séchées sur du sulfate de sodium anhydre et concentrées sous vide. Le résidu visqueux jaune limpide est repris dans 60 ml d'isopropyléther, et on ajoute une solution chaude de 0,99 ml (6 mmoles) de dicyclohexylamine dans 10 ml d'isopropyléther. On laisse le mélange reposer jusqu'au lendemain à 4 C sous une couverture d'argon. Le précipité blanc obtenu est filtré, lavé deux fois avec de l'isopropyléther et séché pour donner sous la forme d'un solide blanc 1,94 g du sel de

N-cyclohexylcyclohexanamine de la (S)-N-(2-mercapto-l-oxo-

3-phénylpropyl)-L-leucine (1:1) '; p.f. 161,5-163'; =]D = -18,0 (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice; benzène: acide acétique, 4:1) Rf = 0,17, 0, 41 (tache inférieure due

à la dicyclohexylamine).

Analyse: Calc. pour C15 HlNO3S. C12H23N 0,53:

C, 66,69; H, 9,34; N, 5,76; S, 6,59

Trouvé: C, 66,69; H, 8,98; N, 5,72; S, 6,46.

Exemple 39

(S)-N-(3-Mercapto-2-méthvl-1-oxopropyl)-L-phényl-

alanine On ajoute goutte à goutte, sous atmosphère d'azote,

2,4 g (13,13 mmoles) de chlorure de (D)-3-acétylthio-2-

méthylpropanoyle dans 35 ml de chlorure de méthylène sec à une suspension sous agitation et refroidie à -5 de 3,15 g (14,6 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-phénylalanine et de 3,86 g (29,9 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 35 ml de chlorure de méthylène sec. Quand l'addition est terminée, on agite le mélange réactionnel à froid pendant encore-2,5 h pui.s on le laisse revenir à la température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est dissous dans 125 ml d'acétate d'éthyle et lavé avec des portions de 20 ml d'hydrogénosulfate de potassium en solution aqueuse à 10 %, d'eau, de bicarbonate de sodium en solution aqueuse à 5 %, d'eau et de saumure, puis séché sur du sulfate de magnésium et concentré sous vide pour donner 4,3 g du produit brut. Une chromatographie éclair sur 400 g de gel de silice, en éluant avec un mélange 3:1 d'hexanes et d'acétate d'éthyle, donne sous la forme d'une

huile jaune clair 3,8 g de l'ester méthylique de la (S)-N-

[3-(acétylthio)-2-méthyl-l-oxopropyl]-L-phénylalanine. Une solution de 3, 7 g (11,4 mmoles) de ce produit ester méthylique dans 70 ml de'méthanol est refroidie dans un bain de glace sous atmosphère d'azote et traitée goutte à goutte avec 34,3 ml (34,3 mmoles) d'une solution d'hydroxyde de sodium iN. Quand l'addition est terminée, on agite le mélange réactionnel à froid pendant 15 min., puis on le laisse revenir à la température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est concentré sous vide pour éliminer la totalité du méthanol, et la solution aqueuse restante est diluée avec 100 ml d'eau et lavée avec 2 x 35 ml de chloroforme. Les eaux de lavage organiques sont concentrées sous vide, et le résidu est dissous dans 75 ml d'hydroxyde de sodium iN et lavé au chloroforme. Les couches aqueuses sont combinées et acidifiées à pH 1 avec du HC1 concentré puis extraites avec 3 x 100 ml d'acétate d'éthyle. L'extrait organique combiné est lavé successivement avec 75 ml d'eau et une saumure, séché sur du sulfate de magnésium et concentré sous vide pour donner 3,25 g du produit brut. Une chromatographie éclair sur 325 g de gel de silice, en éluant avec un mélange 40:1:1 de chloroforme:méthanol: acide acétique donne sous la forme d'un solide blanc

2,75 g de (S)-N-(3-mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-

phénylalanine; p.f. 108-109'; [îzD = -7,0' (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice; chloroforme:méthanol:acide

acétique, 30:1:1) Rf = 0,24.

Analyse: Calc. pour C13H17N3S: S

C, 58,40; H, 6,41; N, 5,24; S, 11,99

Trouvé: C, 58,11; H, 6,36; N, 5,11; S, 11,68.

Exemple 40

(S)-N-(3-MercaDto-2-méthvl-1-oxopropyl)-L-leucine En suivant le mode opératoire de l'exemple 39 mais en utilisant le chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-leucine, on obtient sous la forme d'un solide blanc la

(S)-N-(3-mercapto-2-méthyl-l-oxopropyl)-L-leucine: p.f.

66-71; t]D = -70,8 (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,24 Analyse: Calc. pour C10H19 NO0S:

C, 51,47; H, 8,21; N, 6,00; S, 13,74

Trouvé: C, 51,28; H, 8,17; N, 5,95; S, 13,76

Exemple 41

(S)-N-(3-Mercamto-2-méthvl-l-oxoproryl)-L-thréonine On dissout 5,0 g (42 mmoles) de (L)-thréonine et 9,8 g (92 mmoles) de bicarbonate de sodium dans 100 ml d'eau, et on ajoute 80 ml de p-dioxanne. Ce mélange trouble est refroidi à 0 , et on ajuste le pH à-8. On ajoute goutte à goutte en 2 h, 7',52 ml (50,4 mmoles) 'de chlorure de (D)-3-acétylthio-2méthylpropanoyle, tout en maintenant le pH à 8 grâce à l'addition d'hydroxyde de sodium 1M. Quand l'addition est terminée, on laisse le mélange sous agitation pendant 30 min., puis on le lave avec 2 x 250 ml d'éther. La phase aqueuse est acidifiée à pH 1 avec du HC1 concentre, puis extraite avec 3 x 250 mi d'acétate d'éthyle. L'extrait organique est séché sur du sulfate de magnésium, filtré, et le solvant est chassé sous vide pour donner sous la forme d'une huile incolore limpide 10,8 g de (S)N-[3-(acetylthio)-2-méthyl-l-oxo- propyl]-L-thréonine. On noie sous argon 2,75 g (10,4 mmoles) de ce produit acétylthio, et on le dissout dans 15 mI d'hydroxyde d'ammonium en solution concentrée à 50 %. Le mélange réactionnel est agité pendant 3 h, puis lavé avec 2 x 20 ml d'éther. La phase aqueuse est acidifiée à pH 1 à l'aide de HCl concentre, puis extraite avec 3 x 25 zl d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont séchés sur du sulfate de magnésium, et le solvant est chassé sous vide pour donner 1,68 g d'un semi-solide blanc. Une recristallisation dans l'acétonitrile donne sous la forme

d'un solide cristallin blanc 747 mg de (S)-N-(3-mercapto-

2-méthyl-1-oxopropyl)-L-thréonine; p.f. 148-150'; [ai = -39,1 (c = 0,56, méthanol). CCM (gel de silice; chlorure

de méthylène:acide acétique:méthanol, 8:1:1) Rf = 0,37.

Analyse: Calc. pour C8H 15NO4S:

C, 43,42; H, 6,83; N, 6,33; S, 14,49

Trouvé: C, 43,48; H, 6,79; N, 6,43; S, 14,21.

Exemple 42

Acide (S)-N-(3-mercaoto-2-méthyl-l-oxoproPyl)-L-

aspartique En suivant le mode opératoire de l'exemple 41 mais en utilisant de l'acide (L)-aspartique, on obtient l'acide (S)-N-(3-mercapto2-méthyl-l-oxopropyl)-L-aspartique p.f. 129-131 ; [î]D = -42,6' (c = 0,47, méthanol). CCPI (gel de silice; chlorure de méthylène:acide acétique:

méthanol, 8:1:1) Rf = 0,27.

Analyse: Calc. pour C8 H3N5S: S

C, 40,84; H, 5,57; N, 5,96; S, 13,63

Trouvé: C, 40,61; H, 5,68; N, 6,03; S, 13,19.

Exemnple.43 (S)-N-(3-Mercapto-2-méthvl-1-oxoPropvl)-L-isoleucine En suivant le mode opératoire de l'exemple 41, mais

61 2 6 16.0 70

en utilisant de la (L)-isoleucine, on obtient sous la

forme de cristaux blancs la (S)-N-(3-mercapto-2-méthyl-1-

oxopropy-L-isoleucine; p.f. 164';]D = -43,4 (c = 0,53, méthanol). CCM (gel de silice; acide acétique: toluène, 1:9) Rf = 0,12. Analyse: Calc. pour C10H19NO3S:

C, 51,48; H, 8,21-; N. 6,00; S, 13,74

Trouvé: C, 51,53; H, 8,38; N, 5,99; S, 13,70.

Exemple 44

(S)-N2-(3-Mercapto-2-méthyl-l-oxopropvl -L-

asparacine En suivant le mode opératoire de l'exemple 41, mais

en utilisant de la (L)-asparagine, on obtient la (S)-N2-

(3-mercapto-2-méthyl-1-oxopropyl)-L-asparagine; p.f.

181e; ta]D = -25,2' (c = 0,5, méthanol). CCM (gel de silice; chlorure de méthylène:méthanol:acide acétique,

4:1:1) Rf = 0,35.

Analyse: Calc. pour C8 H14 N204S:

C, 41,01; H, 6,02; N, 11,96; S, 13,69 -

Trouvé: C, 40,83; H, 6,09; N, 12,05; S, 13,97.

Exemple 45

Acide (+)-3-rF2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phényl-

propyl]aminolpropanoicrue

On fait réagir l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester

éthylique de la j3-alanine en présence de diisopropyléthyl-

amine, comme il est décrit plus en détail dans l'exemple 1 de la demande de brevet européen n 136.883, pour obtenir

l'ester éthylique de l'acide (+)-3-[[2-[(acétylthio)-

méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]propanoique. Une solution refroidie de ce produit ester éthylique dans du méthanol esttraitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N puis élaborée comme décrit dans l'exemple 1 de la demande de brevet européen ne 136.883, pour donner l'acide

(+)-3-[.[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]-

propanoique sous la forme d'un solide blanc; p.f. 76-82'.

CCM (gel de silice; toluène:acide acétique, 4:1) Rf =

0,37, petite tache à 0,07.

Analyse: calc. pour C13H17N03S:

C, 58,40; H, 6,41; N, 5,24; S, 11,99

Trouvé: C, 58,17; H, 6,34; N, 5,15; S, 11,85.

Exemple 46

Acide (+)-4-r r2-(mercaptométhvl)-1-oxo-3-phényl-

Dro vl1aminolbutanoicue

On fait réagir l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyie,- puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 4aminobutanoique, en présence de disopropyléthylamine, comme décrit plus en détail dans l'exemple 2 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour obtenir l'ester méthylique de l'acide ( )-4-[[2-

[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]buta-

noique. Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N et élaborée comme décrit dans l'exemple 2 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour donner sous la forme d'un solide blanc l'acide ( )-4-

[[-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]aminobutanoique; p.f. 94,5-101 . CCM (gel de silice; benzène:acide

acétique, 4:1) Rf = 0,41.

Analyse calc. pour C14 H19N03S

C, 59,76; H, 6,81; N, 4,98; S, 11,40

* Trouvé: C, 59,81; H, 6,81; N, 4,96; S, 11,37.

Exemple 47

Acide (S)-3-rF2-(mercaDtométhvl)-l-oxo-3-phényl-

propyvlaminolbenzènebutanoicue (isomère A)

On fait réagir de 'l'acide 2-acétylthiométhyl-3-

phénylpropanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le sel de l'acide p-toluène sulfonique de l'ester méthylique de l'acide

(S)-3-amino-4-phénylbutanoique, en présence de diiso-

propyléthylamine, comme décrit plus en détail dans l'exemple 3 de la demande de brevet européen n 136.883. Le produit brut obtenu est chromatographié pour donner l'ester

2 616070

méthylique de l'acide (S)-3-[[2-[(acétylthio)méthyl]-1-

oxo-3-phénylpropyl]amino]benzènebutanoique (isomère A, le

plus rapide et isomère B, le plus lent).

Une solution refroidie du produit ester méthylique (isomère A) dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium lN, et élaborée comme décrit dans l'exemple 3 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour donner l'isomère A de l'acide (S)-3-[[2-(mercapto-

méthyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]benzènebutanoique p.f. 149-151,5'. []D = +40,3- (c = 1, méthanol). CCM (gel

de silice; benzène: acide acétique, 7:1) Rf = 0,40.

Analyse: Calc. pour C20H23N3S:

C, 67,20; H, 6,49; N, 3,92; S, 8,97

Trouvé: C, 66,86; H, 6,45; N, 3,93; S, 8,71.

Exemple 48

Acide (S)-3-r r2-(mercaptométhvl)-l-oxo-3-phényl-

Propyllaminolbenzènebutanoique (isomère B) Une solution refroidie du produit ester méthylique (isomère B) de l'exemple 47 dans du méthanol' est traitée avec de l'hydroxyde de sodium puis élaborée comme décrit dans l'exemple 4 de la demande de brevet européen

n 136.883, pour donner l'isomère B de l'acide (S)-3-[[2-

(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]benzène-

butanoique; p.f. 148-150 ; []D = -28,9 (C = 1,07, méthanol). CCM (gel de silice; benzène:acide acétique,

7:1) Rf = 0,34.

Analyse: Calc. pour C20H23NO3S:

C, 67,20; H, 6,49; N, 3,92; S, 8,97

Trouvé: C, 66,95; H, 6,53; N, 3,82; S, 8,82.

Exemple 49

Acide ( )-5-rr2-(mercaptométhvl)-l-oxo-3-mhénvl-

propyvl amino pIentanoique

On fait réagir de l'acide 2-acétylthiométhyl-3-

phénylpropanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 5-aminopentanoique en présence de diisopropyléthylamine, comme décrit plus en détail dans l'exemple 5 de la demande de brevet européen n 136.883, pour obtenir l'ester méthylique de l'acide (+)-5-[[2[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl!amino] pentanoique. Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium JN et élabor&e comme décrit dans l'exemple 5 de la demande de Brevet européen n 136.883,

pour donner l'acide (+)-5-[[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]amino]pentanoique; p.f. 78-795. CCM (gel de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,30 (faible traînée). Analyse: Calc. pour C15H21NO3S:

C, 60,99; H, 7,17; N, 4,74; S, 10,85

Trouvé: C, 60,80; H, 7,15; N, 4,62; S, 10,73.

Exemple 50

Acide (+)-6- fr2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénvl-

propvllaminolhexanoique

On fait réagir l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 6aminohexanoique en présence de diisopropyléthylamine, comme décrit.plus en détail dans l'exemple 6 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour obtenir l'ester méthylique de l'acide (+)-6-[[2-

[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]hexa-

noique. Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N et élaborée comme décrit dans l'exemple 6 de la demande de brevet européen n 136.883

pour donner l'acide (+)-6-[[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]amino]hexanoique, p.f. 58-63 . CCM (gel de silice; toluène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,26 (faible traînée). Analyse: Calc. pour C16H23NOS À 0,18 H20:

C, 61,46; H. 7,53; N, 4,48; S, 10,25

Trouvé: C, 61,46; H, 7,47; N, 4,40; S, 10,14.

Exemple 51

Acide 8- r2-(inercartométhyl)-l-oxo-3-phénv!DroDyl1-

aminoloctanoioue

On fait réagir-l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 8aminooctanoique en présence de diisopropyléthylamine, comme décrit plus en détail dans l'exemple 11 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour obtenir l'ester méthylique de l'acide (+)-8-E[2-

[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]octa-

noïque. Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium iN et élaborée comme décrit dans l'exemple 1il de la demande de brevet européen n 136.883,

pour donner l'acide (+)-8-[[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]amino]octanoique, p.f. 81-83 (agglomération au-delà de 68 ). CCM (gel de silice; benzène:acide

acétique, 4:1) Rf = 0,42.

Analyse: Calc. pour C18H27N03S:

C, 64,06; H, 8,06; N, 4,15; S, 9,50; SH 9,80

Trouvé: C, 63,77; H, 7,84; N. 4,12; S, 9,18; SH 9,66.

Exemple 52

Acide 7- rr2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-DhénvlDroDyl1-

amino]heitanoiaue

On fait réagir l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 7aminoheptanoique en présence de diisopropyléthylamine, comme décrit plus en détail dans l'exemple 8 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour obtenir l'ester méthylique de l'acide (+)-7-[t2-

[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]hepta-

noique.

Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium IN et élaborée comme décrit dans l'exemple 9 de la demande de brevet européen n 136.883,

pour donner l'acide ( )-7-[[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]amino]heptanoique; p.f. 71-73 (agglomé-

ration au-delà de 65 ). CCM (gel de silice; benzène: acide acétique, 4:1) Rf = 0,36 (trace à 0,27). Analyse: Calc. pour C17H25NOS:

C, 63,13; H, 7,79; N, 4,30; S, 9,91; SH 10,22

Trouvé: C, 63,36; H, 7,91; N, 4,21; S, 9,57; SH 9,89

Exemple 53

Acide (+)-11-rr2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénvl-

propyllaminolundécanoicque

On fait réagir l'acide 2-acétylthiométhyl-3-phényl-

propanoique sur du chlorure d'oxalyle, puis on fait réagir le chlorure d'acide obtenu sur le chlorhydrate de l'ester méthylique de l'acide 11amino-undécanoique en présence de diisopropyléthylamine, comme décrit plusen détail dans l'exemple 12 de la demande de brevet européen n 136. 883,

pour obtenir l'ester méthylique de l'acide (+)-11-[[2-

[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]undéca-

noique.

Une solution refroidie de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium IN et élaborée comme décrit dans l'exemple 12 de la demande de brevet européen n 136.883

pour donner l'acide (+)-11-[[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-

phénylpropyl]amino]undécanoique; p.f. 104-105 . CCM (gel

de silice; benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,51.

Analyse: Calc. pour C21H33N03S:

C, 66,45; H, 8,76; N, 3,69; S, 8,45; SH, 8,71

Trouvé: C, 66,12; H, 8,75; N, 3,65; S, 8,45; SH, 8,67.

Exemple 54

Sel de lithium du N-(mercaptoacétyl)-L-valvl-L-tryp-

tophane Comme décrit dans l'exemple 10 du brevet australien n 537.592, une solution d'acide acétylthioacétique et

d'hydroxybenzotriazole monohydraté dans du tétrahydro-

furanne est refroidie à 0o et traitée avec du dicyclo-

hexylcarbodiimide dans du tétrahydrofuranne, puis par une solution de Nméthylmorpholine et du sel trifluoracétate de l'ester méthylique du Lvalyl-L-tryptophane. Un traitement du mélange réactionnel donne l'ester méthylique

du N-(acétylthioacétyl)-L-valyl-L-tryptophane.

Une solution de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxydede potassium sous atmosphère d'azoté et élaborée comme décrit dans l'exemple 11 du brevet australien n 537.592 pour donner le sel de lithium du N-(mercaptoacétyl)-L-valyi-L-tryptophane. CCM

(gel de silice; méthanol) Rf = 0,71.

Analyse: Calc. pour C H2N304S. Li. 2H20

C, 51,54; H, 6,25; N, 9,43; S, 7,65;

Li, 1,65 Trouvé: C, 51,94; H, 6,03; N, 10,02; S, 7,28;

Li, 1,62.

Exemple 55

(+)-N- rN- r 2-(Mercaptométhyl)-4-méthvl-1-oxoPentvl-

glycyl -L-arqinine

Comme décrit dans l'exemple 7 du brevet des Etats-

Unis n 4.235.885, on peut préparer ce composé en faisant

réagir l'ester 4-nitrophénylique de la (+)-N-[2-[(acétyl-

thio)méthyl]-4-méthyl-l-oxopentyl]glycine sur la (L)-argi-

nine pour obtenir la (+)-N-[N-[2-[(acétyithio)méthyl]-4-

méthyl-l-oxopentyl]glycyl]-L-arginine. Puis une solution aqueuse refroidie de ce produit est traitée avec de

l'ammoniaque concentrée pour donner la (+)-N-[N-[2-

mercaptométhyl)-4-méthyl-1-oxopentyl]glycyl]-L-arginine;

p.f. 132-146 .

Analyse: Calc. pour C15H2 9N504S:

C, 47,99; H, 7,79; N, 18,65; S, 8,54

Trouvé: C, 47,55; H, 7,99; N, 18,34; S, 8,30.

Exemple 56

N-rN- r 2-(Mercaptométhyl)-4-méthvl-l-oxopentvll-L-

alanvli-L-arqinine (isomère A)

0,7 g de l'isomère A de la N-[2-(acétylthiométhyl)-

4-méthyl-l-oxopentyl]-L-alanine (préparé comme décrit dans.

l'exemple 12) est dissous dans 50 ml de tétrahydrofuranne,

refroidi à -10 , puis on ajoute 0,25 g de triéthylamine.

On ajoute goutte à goutte 0,27 g de chloroformiate d'éthyle dans 2 ml de tétrahydrofuranne. Après 20 min. d'agitation à -10 , le mélange réactionnel est filtré pour arriver dans un ballon prérefroidi à -30 . On ajoute goutte à goutte 0,44 g de L-arginine dissoute dans 5 ml d'eau à une solution, sous vigoureuse agitation, de l'anhydride mixte. Le mélange réactionnel est stocké à 0 jusqu'au lendemain, puis dilué avec 5 ml d'eau, puis concentré sous vide jusqu'à un volume de 5 ml. Cette solution est chromatographiée sur cellulose (90 g d'Avicel), en utilisant comme système solvant le mélange 9:1 de méthanol et d'eau. La fraction contenant le produit est concentrée sous vide, puis lyophilisée, pour donner

l'isomère A de la N-[N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-1-

oxopentyl]-L-alanyl]-L-arginine; p.f. 121-138 ; [J]D =

-44 (c = 1, éthanol à 95 %).

Le produit acétylthiométhylique ci-dessus est dissous dans 16 ml d'eau et purgé à l'argon. On ajoute 2 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré, et on agite la solution à la température ambiante pendant 45 min. Puis on la lyophilise jusqu'à la siccité et on la met en

suspension dans 15 ml d'acétonitrile avec 3,gouttes d'eau.

Après 30 min. d'agitation, on filtre et on sèche sous vide à 45 pendant 3 h pour obtenir sous la forme d'un solide

jaune brun l'isomère A de la.N-[N-[2-(mercaptométhyl)-4-

méthyl-l-oxopentyl]-L-alanyl]-L-arginine; p.f.: début de

ramollissement entre 115 et 143 .

Analyse:calc. pour C16H3N5 04S 0,6H2O:

C, 48,00; H, 8,10; N, 17,49; S, 8,01

Trouvé: C, 47,92; H, 8,02; N, 17,15; S, 8,07.

Exemple 57

N- rN- r 2-(mercaptométhvl)-4-méthyl-l-oxopentyll-L-

alanyll-L-arginine (isomère B) En suivant le. mode opératoire de l'exemple 56, mais

en utilisant l'isomère B de la N-[2-(acétylthiométhyl)-4-

méthyl-l-oxopentyl]-L-alanine (préparé comme décrit dans

l'exemple 13), on obtient l'isomère B de la N-[N-[2-

(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-L-alanyl]-L-

arginine; []D = +6,0'.

Le produit acétylthiométhylique ci-dessus est dissous dans de l'eau et traité avec de l'hydroxyde d'ammonium concentré;selon le mode opératoire de l'exemple 56, pour donner sous la forme d'un solide blanc cassé

l'isomère B de la N-[N-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxo-

pentyl]-L-alanyl]-L-arginine; p.f. 140-150.

Analyse: Calc. pour C1 6H31N 0 S. 0,7H20

C, 47,79; H, 8,12; N, 17,42; S, 7,97

Trouvé: C, 48,15; H, 7,94; N, 16,93; S, 7,69.

Exemple 58

(+)-N-rN- r 2-(Mercaptométhyl)-4-méthvl-l-oxopentyll-

j-alanylI-L-arqinine On dissout 1,45 g de j-alanine dans une eau contenant 1,37 g de bicarbonate de sodium. Cette solution aqueuse est refroidie à 0 , et on ajoute goutte à goutte

3,34 g de chlorure de 2-acétylthiométhyl-4-méthylpenta-

noyle dans 30 ml de tétrahydrofuranne, tout en ajoutant en même temps une quantité supplémentaire de 1,37 g de carbonate de sodium dans 30 ml d'eau. Quand l'addition est terminée, le mélange réactionnel est agité pendant 2 h et concentré sous vide à 50 ml. La solution aqueuse est acidifiée avec du HCl à 10 %, et le produit est extrait à l'acétate d'éthyle. L'extrait est séché sur du sulfate de magnésium, filtré et concentré sous vide. L'huile obtenue (4,2 g) est lavée à l'hexane, et on laisse leproduit cristalliser dans une quantité minimale d'acétate d'éthyle (5 ml) pour obtenir sous la forme d'un solide 2;6 g de

(+)-N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl] - -

alanine; p.f. 87-91 .

1,4 g de ce produit 3-alanine et 0,7 g de p-nitro-

phénol sont dissous dans 100 mi d'acétate d'éthyle et refroidis à -5e. On ajoute par portions 1,0 g de dicyclohexylcarbodiimide, et le mélange réactionnel est agité pendant 4 h à 0'. On sépare par filtration la dicyclohexylurée, et le filtrat est concentré sous vide pour donner 2,0 g de l'ester p-nitrophénylique de la N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-1oxopentyl] - -alanine brut.

Cet ester brut est dissous dans 50 ml de tétrahydro-

furanne et refroidi à 0 . On ajoute goutte à goutte 0,8; g de L-arginine dissoute dans 10 ml d'eau. Après avoir agité jusqu'au lendemain, on concentre le mélange réactionnel sous vide à 10 ml. Cette solution aqueuse est lavée à l'acétate d'éthyle jusqu'à ce qu'elle soit incolore. On là chromatographie sur 100 g de cellulose microcristalline, en éluant avec un mélange 1:4 d'eau et de méthanol, pour obtenir sous la forme d'un solide blanc 0,9 g de

(+)-N-[N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]-3 -

alanyl]-L-arginine. 0,4 g du produit acétylthio ci-dessus est dissous dans 10 ml d'eau, purgé à l'argon et refroidi à 0 . On ajoute 1,7 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré, et on agite le mélange sous atmosphère d'argon pendant 2 h. Ce mélange réactionnel est lyophilisé jusqu'au lendemain. On agite le résidu avec 30 ml d'acétonitrile contenant3 gouttes d'eau, jusqu'à ce que le produit devienne un solide granulaire. Il est alors filtré et séché sous vide pour donner sous la forme d'un solide blanc 0,3 g de

(+)-N-[N-[2-(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl] -

alanyl]-L-arginine; p.f. 123-134 .

Analyse: Calc. pour C16 H31N504S. 0,5H20:

C, 48,22; H, 8,09; N, 17,57; S, 8,04; SH 8,29

Trouvé: C, 48,36; H, 7,92; N, 17,35; S, 8,10;.SH 8,33.

ExemDle 59

Sel d'ammonium de la (_)-N2-rN-r2-(mercaDtométhyl)-

4-méthvl-l-oxopentyllql cyl] -L-qlutamine (1:1) Une solution de 0,58 g (4 mmoles) de (L)-glutamine et de 0,34 g (4 mmoles) de bicarbonate de sodium dans ml d'eau est traitée d'abord avec 1,5 g (4 mmoles) de

l'ester p-nitrophénylique de la N-[2-(acétylthiométhyl)-4-

méthyl-l-oxopentyl]glycine, préparé comme décrit dans l'exemple 7 du brevet des Etats-Unis n 4.235.885, puis ml de dioxanne. La suspension jaune est agitée à 25' - jusqu'au lendemain, puis filtrée. Le mélange aqueux est ensuite filtré avec de l'acétate d'éthyle jusqu'à devenir incolore, puis acidifié avec de l'hydrogénosulfate de potassium et extrait au n-butanol. Un séchage sur du

sulfate de magnésium et une évaporation donnent une huile.

Une trituration dans de l'éther donne, sous la forme d'un solide, 0,4 g de (+)-N2-[N-[2-(acétylthiométhyl)-4-méthyl-

1-oxopentyl]glycyl]-L-glutamine; p.f. 60-80'.

mg (0,5 mmole) de ce produit acétylthio-

méthylique sont dissous dans 5 ml d'éthanol absolu, refroidis dans un bain de glace et traités avec 2 ml d'hydroxyde d'ammonium sous atmosphère d'argon. Après chauffage à 25' en 2 h, le mélange est évaporé pour donner une huile. Une trituration avec de l'acetonitrile, une filtration et un lavage à l'éther donnent, sous la forme d'une poudre blanche qui durcit pour donner un verre

incolore, 0,15 g du sel d'ammonium de la (+)-N2-[N-[2-

(mercaptométhyl)-4-méthyl-l-oxopentyl]glycyl]-L-glutamine

(1:1).

Analyse: Calc. pour C14H25N305S. NH3

C, 45,57; H. 7,79; N, 15,18; S, 8,69

Trouvé: C, 45,51; H, 7,96; N. 15,24; S, 8,32.

Exemple 60

N-rN-(Mercaptoacétyl)-L-phénylalanyll-L-alanine Tout en maintenant la température en dessous de 0 ,

on ajoute une solution de 29,5 g (140 mmoles) de dicyclo-

hexylcarbodiimide dans 40 ml de tétrahydrofuranne à une suspension sous agitation et refroidie à -10c de 18,15 g (130 mmoles) du chlorhydrate de l'ester méthylique de la (L)-alanine, de 38,91 g (130 mmoles) de N[(phénylméthoxy) -carbonyl]-L-phénylalanine, de 22,6 ml (130 mmoles) de 30.diisopropyléthylamine et de 17,52 g (130 mmoles)

d'hydroxybenzotriazole hydraté dans 200 ml de tétrahydro-

furanne. On laisse le mélange réagir jusqu'au lendemain, tout en chauffant à la température ambiante. Puis on le concentre sous vide, on le reprend dans de l'acétate

d'éthyle et on le filtre pour éliminer-la dicyclohexyl-

urée. Puis le filtrat est lavé avec 200 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, 200 ml d'une solution à % d'hydrogénosulfate de potassium, 200 ml d'eau et ml d'une saumure, puis séché sur du sulfate de sodium et concentré sous vide pour donner un solide blanc. Une trituration dans de l'éther de pétrole donne sous la forme d'une masse blanche et duveteuse 32,33 g de l'ester méthylique de la N-[N[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-phényl- alanyl]-L-alanine. On ajoute 1,5 g d'un catalyseur palladium à 10 % sur charbon à une suspension, sous agitation, de 14,47 g (37,64 mmoles) du produit ester méthylique cidessus et de 7,16 g (37,64 mmoles) d'acide p-toluène sulfonique, sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous une pression d'hydrogène de 1 atmosphère, et on le laisse réagir jusqu'au lendemain à la température ambiante. Au bout de 17 jours, le mélange est séparé par filtration pour éliminer le catalyseur, et le solvant est chassé par distillation sous vide pour donner sous la forme d'un solide blanc 17,51 g du sel de l'acide p-toluène

sulfonique de l'ester méthylique de la N-(L-phénylalanyl)-

L-alanine; p.f. 158-166 .

Tout en maintenant la température en dessous de 5', on ajoute une solution de 90,79 g (440 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide dans 200 ml d'acétate d'éthyle à une suspension sous agitation, et refroidie à 0, de 46,04 g (400 mmoles) de N-hydroxysuccinimide et de 53,66 g (400 mmoles) d'acide acétylthioacétique dans 500 ml d'acétate d'éthyle. On laisse le mélange réagir jusqu'au lendemain tout en chauffant à la température ambiante. Au bout de 17 heures, la suspension est séparée par filtration, et le précipité est recristallisé dans de l'acétonitrile pour donner, sous la forme d'un solide blanc cassé, 28,42 g de l'ester de succinimide de l'acide

- acétylthioacétique; p.f. 98,5-100 .

mmoles de cet ester de succinimide de l'acide acétylthioacétique et 2,2 g (5 mmoles) du sel de l'acide p-toluène sulfonique de l'ester méthylique de t la N-(L-phénylalanyl)-L-alanine sont mis en suspension dans ml de diméthylformamide et refroidis à 0 , et placés

sous atmosphère d'azote. On ajoute 0,96 ml de diisopropyl-

éthylamine, et le mélange est agité jusqu'au iendemain, puis versé dans 250 ml d'eau et extrait avec 4 x 75 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées et lavées avec 2 x 50 ml de bicarbonate de sodium en solution saturée, 2 x 50 ml d'hydrogénosulfate de potassium à 10 % et 100 ml d'une saumure, puis séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner un solide blanc cassé. Une recristallisation dans de l'acétonitrile donne, sous la forme de cristaux blancs aciculaires, 1,07 g de l'ester méthylique de la N-[N(acétylthioacétyl)-L-phénylalanyl]-L-alanine. Tout en maintenant la température en dessous de 0 , on ajoute sous atmosphère d'argon 5,4 ml d'hydroxyde de sodium iN à une suspension sous agitation et refroidie à 5 de 0,9 g (2,46 mmoles) du produit ester méthylique ci-dessus dans 15 ml de méthanol. On laisse le mélange réagir pendant 3 h à froid, puis on le verse dans 100 ml d'eau, on le lave avec 2 x 40 ml d'acétate d'éthyle, on l'acidifie à pH environ 1,5 avec du HCl concentré, puis on l'extrait avec 3 x 30 ml d'acétate d'éthyle. Ces phases organiques sont combinées, lavées avec 80 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner 0,74 g d'un solide blanc. Une recristallisation dans de l'acétate d'éthyle donne, sous la

forme d'un solide blanc, la N-[N-(mercaptoacétyl)-L-

phénylalanyl]-L-alanine; p.f.'172-174,5 ; []D = -1'93 (C = 1,97, méthanol). CCM (gel de silice; butanol:acide

acétique:eau, 4:1:1) Rf = 0,66.

Analyse: Calc. pour C14H18N204S

C, 54,18; H, 5,85; N, 9,03; S, 10,33

Trouvé: C, 53,91; H, 5,63; N, 8,82; S, 10,07.

Exempie 61

N-FN-(Mercaptoacétvyl)-L-phénylalanyll-L-phény1-

alanine En suivant le mode opératoire de l'exemple 60, on' couple la N[(phénylméthoxy)carbonyl]-L-phénylalanine et le chlorhydrate de l'ester méthylique de L-phénylalanine,

en présence de dicyclohexylcarbodiimide, d'hydroxybenzo-

triazole hydraté et db diisopropyléthylamine. Le dipeptide N-protégé obtenu est hydrogéné en présence d'un catalyseur palladium sur charbon et d'acide p-toluène sulfonique pour donner le sel d 'acide p-toluène sulfonique de l'ester méthylique de la N-(L-phénylalanyl)-L-phénylalanine. Un traitement de ce sel avec l'ester de succinimide

de l'acide acétylthioacétique, en présence de diisopropyl-

éthylamine, selon le mode opératoire de l'exemple 60,

donne l'ester méthylique de l'acide N-[N-(acétylthio-

acétyl)-L-phénylalanyl]-L-phénylalanine.

Une suspension sous agitation, refroidie à -10, de ce produit ester méthylique dans du méthanol est traitée avec de l'hydroxyde de sodium 1N sous atmosphère d'azote et élaborée comme décrit dans l'exemple 60 pour donner sous

la forme d'une poudre blanche la N-[N-(mercaptoacétyl)-L-

phénylalanyl]-L-phénylalanine; p.f. 228-228,5 ;]D = -5 (c = 1, diméthylformamide). CCM (gel de silice;

benzène:acide acétique, 4:1) Rf = 0,31 (légère traînée).

Analyse: Calc. pour C2 H22N2 04 S. 0,24 E20:

C, 61,47; H, 5,85; N, 7,06; S, 8,20; SH, 8,46

Trouvé:C, 61,47; H, 5,85; N, 7,06; S, 8,02; SH, 8,30.

Exemple 62

N-rN-(3 -Mercapto-l-oxopro vl)-L-phénylalanvli-L-

phénvlalanine On met en suspension dans 60 ml de tétrahydrofuranne et on refroidit à 0O 2,55 g (5 mmoles) du sel d'acide

p-toluènesulfonique de l'ester méthylique de la (L)-

phénylalanyl-(L)-phénylalanine, 1,44 g (2,5 mmoles) du sel de dicyclohexsyla.ne du dithiobis (2-carboxyéthane) et 0,68 g (5 mmoles) d'hydroxybenzotriazole hydraté. On ajoute minutes une solution de 1,03 g (5 mmoles) de dicyclo- hexyl carbodiimide dans 12 ml de tétrahydrofuranne, et on agite le mélange pendant 30 heures tout en chauffant jusqu'à la température ambiante. La dicyclohexylurée est séparée par filtration, et on concentre le.filtrat. Le résidu est mélangé à 150 ml d'acétate d'éthyle sous chauffage modéré, et filtré de nouveau. Après lavage avec ml d'une solution à 10 % d'hydrogénosulfate de potassium, 40 ml d'une saumure à 50 %, 40 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et 40 ml d'une saumure, la phase organique est partiellement concentrée, et on sépare un précipité par filtration. Le filtrat est séché sur du sulfate de sodium et concentré pour donner, sous la forme d'un solide cristallin blanc cassé,1,59 g du

produit ester dithiobisdiméthylique.

On refroidit à -10 une suspension de 1,35 g (1,58 mmole) de ce produit ester dithiobisdiméthylique dans 20 ml de méthanol. On ajoute goutte à goutte en 10 minutes 3,4 ml d'hydroxyde de sodium lN. Le mélange est agité jusqu'au lendemain, tout en étant chauffé jusqu'à la température ambiante, puis il est partiellement concentré pour chasser le méthanol. Le résidu solide jaune est mis en suspension dans de l'eau, alcalinisé à pH environ 14 avec de l'hydroxyde de sodium iN, et lavé par 3 x 60 ml d'acétate d'éthyle. La couche aqueuse est acidifiée à pH environ 3 avec du HC1 concentré (il se forme un précipité blanc), et extraite avec 3 x 40 ml d'acétate d'éthyle. Un peu du solide blanc reste en suspension, et il est filtré et séché sous vide. Les extraits organiques du mélange aqueux acide sont combinés, lavés avec 10Q ml d'une saumure, séchés sur du sulfate de sodium et concentrés pour donner un solide jaune pale. Ce produit est réuni au solide blanc pour donner 1,1 g d'un produit quelque peu brut. Un échantillon analytique est préparé par recristallisations successives d'une portion du produit brut (600 mg) dans de l'acétate d'éthyle, pour donner sous

la forme d'un solide blanc, 280 mg de N', N"-[dithiobis-

(1-oxo-3,1-propanediyl)]bis-N-(L-phénylalanyl)-L-phényl-

alanine; PF 198-199 .

On refroidit dans un bain de glace une solution de mg (0,14 mmole) de ce produit dithiobis dans 12 ml de méthanol. On ajoute 1,2 ml de HCl concentré, puis 0,67 g de poudre de zinc en quatre portions sur 30 minutes. Le mélange est agité à froid pendant encore 30 minutes, puis filtré, concentré. et versé dans 40 ml de HC1 IN. Le précipité blanc obtenu est extrait par 3 x 20 ml d'acétate d'éthyle, et l'extrait est séché sur du sulfate de sodium et concentré sous vide pour donner une huile blanche trouble. Cette huile est appliquée sur une colonne de gel de.silice (15 g, 230-400 mesh) et éluée avec un mélange 5:1 de toluène et d'acide acétique. Les fractions contenant le produit (n 5 - 7, 7 ml chacune) sont recueillies et concentrées sous vide pour donner sous la

forme d'un solide cristallin blanc 57 mg de N-[N-(3-

mercapto-l-oxopropyl)-L-phénylalanyl]-L-phénylalanine; PF 169-172,5c. CCM (gel de silice, toluène:acide acétique, -1) Rf = 0,31 (une trace à 0,10 due à une oxydation à

l'air donnant le bisulfure).

Analyse: calculé pour C21H24N204S. 0,35 H20

C, 62,00; H, 6,12; N, 6,89; S, 7,88

* Trouvé: C, 62,30; H, 6,04; N, 6,65; S, 7,58.

Exemple 63

N-rN-(Mercaptoacétyl)-L-leucyllglycine On refroidit à -5 sous vigoureuse agitation une

suspension de 18,5 g (80 mmoles) de N-[(1,1-diméthyl-

éthoxy)carbonyl]-L-leucine, 26,99 g (80 mmoles) du sel d'acide ptoluènesulfonique de l'ester phénylméthylique de la glycine, 10,81 g (80 mmoles) d'hydroxybenzotriazole hydraté et 14 ml (80 mmoles) de diisopropyléthylamine dans ml de tétrahydrofuranne. On ajoute goutte à goutte, en

10 minutes, une solution de 16,51 g (80 mmoles) de di-

cyclohexyl carbodiimide dans 10 ml de tétrahydrofuranne.

On laisse la réaction se poursuivre jusqu'au lendemain, en chauffant à la température ambiante. Ensuite, la dicyclohexylurée est séparée par filtration, et le filtrat est concentré sous vide. Le résidu, une huile jaune, est repris dans 400 ml d'acétate d'éthyle, filtré de nouveau et lavé avec 150 ml d'hydrogénosulfate de potassium à %, 150 ml d'eau, 150 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, et une solution saturée à 50 % de - chlorure de sodium, puis séché sur du sulfate de sodium et concentré sous vide pour donner sous la forme d'un verre jaune 28,75 g de l'ester phénylméthylique de la N-EN-[(1,1-diméthyléthoxy) carbonyl]-L-leucyl]glycine.

On ajoute en une portion 30 ml d'acide trifluor-

acétioue refroidi à -5B à une solution prérefroidie à -10 de 20 g (54,6 mnoles) du produit ester phénylméthylique ci-dessus dans 50 ml de chlorure de méthylène. La solution est agitée pendant 1 heure à froid, puis concentrée sous vide. On ajoute 50 ml de toluène, et le résidu est de nouveau concentré deux fois -sous vide. L'huile jaune obtenue est reprise dans 100 ml d'éther, et on ajoute ,38 g (54,6 mmoles) d'acide ptoluènesulfonique hydraté dans 500 ml d'éther. Le précipité huileux est séché sous vide (deux jours, 6,7 Pa = 0,05 mm Hg) pour donner sous la forme d'une huile jaune visqueuse et limpide 29,57 g du

sel d'acide p-toluènesulfonique de l'ester phényl-

méthylique de la N-(L-leucyl)glycine.

On refroidit à 0 (tube sécheur) une suspension de ,4 g (10 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique et de 2,31 g (10 mmoles) de l'ester succinimide de l'acide acétylthioacétique dans 15 ml de diméthylformamide. On

ajoute en une portion 1,74 ml (10 mmoles) de diisopropyl-

éthylamine, et on laisse la réaction se poursuivre jusqu'au lendemain, tout en chauffant à la température ambiante. Ensuite, la suspension rose clair est versée dans 100 ml d'eau, et le précipité blanc est extrait avec 4 x 30 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont

réunies, lavées avec 50 ml d'une solution d'hydrogéno-

sulfate de potassium à 10 %, 50 ml d'eau, 50 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, 50 ml d'eau et ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et

concentrées sous vide pour donner 3,29 g d'un solide brun-

jaune clair. Une recristallisation de 3,25 g de ce produit dans un mélange 1:4 d'acétate d'éthyle et d'hexane donne, sous la forme de cristaux blancs, 2,89 g de l'ester

phénylméthylique de la N-[N-acétylthioacétyl)-L-leucyl]-

glycine; PF 117-120 .

On ajoute 12,3 ml d'hydroxyde de sodium 1N à une solution, sous agitation et refroidie à -10 , de 2,37 g (6 mmoles) du produit acétylthioacétylique ci-dessus dans ml de méthanol, sous atmosphère d'azote. Le mélange est agité à froid pendant 3,5 heures, puis le méthanol est

chassé sous vide et le résidu est versé dans 40 ml d'eau.

L'addition d'hydroxyde de sodium ne permet pas de solubiliser une partie des matières en suspension, mais un lavage par 2 x 30 ml d'acétate d'éthyle donne une solution limpide, laquelle est acidifiée à pH environ 1 avec du HC1 concentré et extraite avec 3 x 30 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques pont combinées, lavées avec 50 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous vide pour donner, sous la forme d'une huile jaune clair, visqueuse et limpide, 0,88 g de N[N-(mercaptoacétyl)-L-leucyl]glycine. []D*' = -27' (c = 1, méthanol). CCM (gel de silice; chloroforme:méthanol: acide acétique en solution aqueuse à 27 %, 6:4:2) Rf =

0,57 (faible trainée).

Analyse: calculé pour C1oH1,8N204 S

C, 45,79; H, 6,92; N, 10,68; S, 12,22

Trouvé: C, 45,74; H, 6,83; N, 10,50; S, 12,00.

ExemDle 64

(+)-1-FrN-r 2-(Mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropvll-

L-alanvll-L-proline On refroidit dans un bain de glace sous atmosphère

d'azote et on traite avec 208,2 g (1,01 mole) de dicyclo-

hexylcarbodiimide, une suspension de 189 g (1 mole) de N-[(l,ldiméthyléthoxy)carbonyl]-L-alanine, de 286 g (1,01 mmole) du sel chlorhydrate de l'ester phénylméthylique de la L-proline, de 154 g (1,01 mole) d'hydrcxybenzotriazole hydraté et de 155,8 g (1,18 mole) de diisopropyléthylamine dans 3000 ml de tétrahydrofuranne sec. Le mélange réactionnel est agité à froid pendant 45 minutes, puis à la température ambiante pendant 22 heures. Le mélange réactionnel est filtré pour chasser la dicyclohexylurée, et le filtrat est concentré sous vide. le résidu est dissous dans 2500 ml d'éther et lavé successivement avec du bicarbonate de sodium en solution saturée, de l'hydrogénosulfate de potassium en solution à 5 %, de l'eau et une saumure, puis séché sur du sulfate de magnésium et concentré sous vide pour donner, sous la

forme d'une huile épaisse, 365 g de l'ester phényl-

méthylique de la 1-[N-[(1,1l-diméthyléthoxy)carbonyl]-L-

alanyl]-L-proline. Une solution de 365 g (960 mmoles) de cette huile dans 1500 g (13,2 moles) d'acide trifluoracétique est refroidie dans un bain de glace pendant 3 heures, puis agitée à la température ambiante pendant 1 heure. La solution est concentrée sous vide, et le résidu est mélangé à du toluène pour former un azéotrope et donner,

sous la forme d'une huile, 380 g du sel trifluoracétate.

Cette huile est dissoute dans 600 ml d'éther et ajoutée

à une solution de 186 g (980 mmoles) d'acide p-toluène-

sulfonique monohydraté dans 200 ml d'acétone et 4300 ml d'éther. Le mélange est agité pendant 20 heures, puis

séparé par filtration pour donner 366 g du sel 4-méthyl-

benzènesulfonate de l'ester phénylméthylique de la l-L-alanyl-L-proline (1:1); PF '154-155D. CCM (gel de

silice; méthanol) Rf = 0,23.

On traite avec 465 mg (3,6 mmoles) de diisopropyl-

éthylamine une solution de 1,62 g (3,6 mmoles) du sel 4méthylbenzènesulfonate de l'ester phény2méthylique de la l-L-alanyl-Lproline (1:1) dans 5 ml de chlorure de méthylène. La solution obtenue est refroidie à -5 sous atmosphère d'azote et traitée goutte à goutte avec une

solution de 3,6 mmoles de chlorure de 2-acétylthiométhyl-3-

phénylpropanoyle, préparé par réaction de l'acide 2-acétylthiométhyl-3phénylpropionique sur le chlorure d'oxalyle, dans 5 ml de chlorure de méthylène, en même

temps que 465 mg (3,6 mmoles) de diisopropyléthylamine.

Quand l'addition est terminée, on agite la solution à froid pendant 2 heures et on la laisse revenir à la température ambiante jusqu'au lendemain. Puis le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est dissous dans 25 ml d'acétate d'éthyle, et cette solution est lavée avec des portions de 5 ml d'hydrogénosulfate de potassium en solution aqueuse à 10 %, d'eau, de bicarbonate de sodium en solution aqueuse à 5 %, d'eau et de saumure, puis séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous vide pour donner, sous la forme d'une huile, 1,7 g du produit brut.Une chromatographie éclair sur 170 g de gel de silice, en éluant avec un mélange 3:1 d'éther de pétrole et d'acétone, donne sous la forme d'une huile, 1,4 g de l'ester phénylméthylique de la (+)-l-[N-[2-

(acétylthiométhyl)-l-oxo-3-phérnylpropyl]-L-alanyl]-L-

proline. CCM (gel de silice éther de pétrole:acétone,

3:1) Rf = 0,24.

Une solution de 1,4 g (2,82 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 20 ml de méthanol est refroidie dans un bain de glace sous atmosphère d'azote et traitée goutte à goutte avec 8,46 ml (8,46 mmoles) d'une solution d'hydroxyde de sodium 1N. Quand l'addition est terminée, on agite le mélange réactionnel à froid pendant 15 minutes et on le laisse revenir à la température ambiante jusqu'au lendemain. Puis le mélange réactionnel est concentré sous vide pour chasser le méthanol. La couche aqueuse restante est diluée avec 25 ml d'eau et lavée avec 2 x 10 ml de chloroforme. La couche aqueuse est acidifiée à pH 1 avec du HCl concentré et extraite par 3 x ml d'acétate d'éthyle. L'extrait organique combiné est lavé avec 10 ml d'eau et une saumure, séché sur du sulfate de magnésium et concentré sous vide pour donner 1,1 g du produit brut. Une chromatographie éclair sur 110 g de gel de silice, en éluant avec un mélange 40:1:1 de chlorure de méthylène:méthanol:acide acétique, donne 900 mg d'un produit partiellement purifié. Une chromatographie éclair sur 90 g de gel de silice, en éluant avec un mélange 7:1 de toluène et d'acide acétique donne, sous la forme d'un

solide blanc, 600 mg de (+)-l-[N-[2-(mercaptométhyl)-l-

oxo-3-phénylpropyl]-L-alanyl]-L-proline; PF 151-175 ; [a]D = -112 (c = 0, 5, méthanol). CCM (gel de silice;

benzène: acide acétique, 4:1) Rf = 0,52.

Analyse: calculé pour C18H24N204S:

C, 59,32; H, 6,64; N, 7,69; S, 8,80; SH, 9,07

Trouvé:C, 59,20; H, 6,69; N,.7,47; S, 8,55; SH, 8,86.

ExemDle 65 (R)-l-rN-(2-Mercapto-l-oxo-3-phénylPropvyl)-L-alanyll -Lproline On ajoute goutte à goutte en 10 minutes 3,17 g (15,4 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide à une solution, refroidie par de la glace, de 3, 45 g (15,4 mmoles) d'acide (R)-2-acétylthio-3-phénylpropionique, préparé comme décrit

dans l'exemple 37, et de 2,59 g (16,94 mmoles) d'hydroxy-

benzotriazole hydrat& E ns 50 ml de tétrahydrofuranne. Le mélange est agité pendant 75-minutes à la température ambiante, filtré pour chasser la dicyclohexylurée, et séché sous vide pour chasser le tétrahydrofuranne. Le résidu huileux est repris dans 50 ml de diméthylformamide

et on ajoute 3,1 g (12,83 mmoles) de l'ester 1,1-dL mthyl-

thlique de la L-alanl-L-proline et- 1,8 ml (12,83 mmoles) de triéthylamine. On laisse le mélange réactionnel reposer à la température ambiante pendant 18 heures. Le diméthylformamide est chassé sous vide, et le résidu huileux est redissous dans de l'acétate d'éthyle et lavé avec de l'eau, de l'acide citrique à 10 % et du bicarbonate de sodium en solution saturée. L'acétate d'éthyle est chassé sous vide, et le résidu huileux est chromatographié sur 400 g de gel de silice en éluant avec un mélange 6:1 de toluène et d'acétone. Le produit subit une purification supplémentaire par dissolution dans du chloroforme et lavage à l'eau. Une élimination du

chloroforme sous vide donne 3,2 g de l'ester 1,1-diméthyl-

éthylique de la (R)-l-[N-(2-acétylthio-1-oxo-3-phényl-

propyl-L-alanyl]-L-proline; [a]D = -20" (c = 1,05, chloroforme). CCM (gel de silice; toluène: acétone, 4:1)

Rf = 0,48.

On dissout 4,4 g (9,82 mmoles) de ce produit ester 1,1-diméthyléthylique dans 22 ml d'acide trifluoracétique contenant 5 % d'anisole, et on laisse reposer à -la température ambiante pendant 1,5 heure. Le solvant est' chassé sous vide, et le résidu huileux est dissous dans de l'éther, et le produit précipite sous l'effet de l'hexane, sous la forme d'une gomme. Puis cette gomme est triturée à l'éther pour donner, sous la forme d'un solide, 2,6 g de

(R)-l-[N-(2-acétylthio-1-oxo-3-phénylpropyl)-L-alanyl]-L-

-82 proline; PF (124) 135-138 ; []D = -23o (c = 1,4, chloroforme). Une quantité supplémentaire de 0,57 g du

produit cristallise dans les eaux de lavage éther/hexane.

On ajoute 20,52 ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 1N à une solution de 2,68 g (6,84

mmoles) de (R)-l-[N-(2-acétylthio-1-oxo-3-phénylpropyl)-L-

alanyl]-L-proline dans 3 ml' de méthanol, et on laisse le mélange réactionnel reposer sous atmosphère d'argon à la température ambiante pendant 15 minutés. Le méthanol est chassé sous vide, et la solution aqueuse est acidifiée avec du HCl (environ 3N, 7,5 ml). La solution acidifiée est saturée par du chlorure de sodium et extraite à l'acétate d'éthyle jusqu'à épuisement. L'acétate d'éthyle est chassé sous vide, et le résidu est évaporé à partir d'un mélange méthanol/eau et de chloroforme pour donner

sous la forme d'un solide mousseux 2,4 g de.(R)-l-[N-(2-

mercapto-l-oxo-3-phénylpropyl)-L-alanyl-]-L-proline; [a] D = -78,4 (c = 1,1, chloroforme). CCM (gel de silice; acétate d'éthyle:pyridine:acide acétique:eau, 45-20:6:11)

Rf = 0,45.

Analyse: calculé pour C17 H22 N404S. 2H20

C, 52,83; H, 6,78; N, 7,25; S, 8,30

Trouvé: C, 52,54; H, 6,26; N, 7,01; S; 8,16.

Exemple 66

(S)-l-rN-(2-Mercapto-l-oxo-3-phénylpropyl) -L-alanvll -L-oroline En suivant le mode opératoire de l'exemple 65, on fait réagir l'acide (S)-2acétylthio-3-phénylpropionique (préparé comme décrit dans l'exemple 38) d'abord sur du dicyclohexylcarbodiimide et de l'hydroxybenzotriazole hydraté, puis sur l'ester 1,1-diméthyléthylique de la

L-alanyl-L-proline, pour donner l'ester 1,1-diméthyl-

éthylique de la (S)-l-[N-(2-acétylthio-l-oxo-3-phényl-

propyl)-L-alanyl]-L-proline. Un traitement par de l'acide trifluoracétique et de l'anisole, pour éliminer le groupe ester de proline, et un traitement par de l'hydroxyde de sodium pour donner le groupe mercaptan selon le mode opératoire de l'exemple 65,

donnent, sous la forme d'un solide, la (S)-l-[N-(2-mercapto-

l-oxo-3-phénylprgpyl)-L-alanyl]-L-proline;]D = -82,7' (c = 1,5, chloroforme). CCM (gel de silice; acétate d'éthyle:pyridine:acide acétique:eau, 45:20:6:11) Rf =

0,58.

Analyse: calculé pour C17H22 N2 04 S. 1H2 0

C, 55,42; H, 6,56; N, 7,60; S, 8,70

Trouvé: C, 55,25; H, 6,18; N, 7!36; S, 8,43.

Exemple 67

(trans)-N-rN-rr2-(Mercaptométhvl)cvclohex7lcarbo-

nvli-L-phénvlalanvll-L-leucine On peut préparer ce composé comme décrit en détail

dans l'exemple 65 du brevet des Etats-Unis n 4.560.506.

Exemple 68

(trans)-N-rN-r(2-Mercaptocvclohexvl)carbonvli-L-

phénylalanvll-L-leucine (isomare A) On peut préparer ce composé comme décrit en détail

dans l'exemple 6 du brevet des Etats-Unis n 4.560.506.

Exemple 69

Acide 3- r 1-(mercaptométhyl)-2-phényléthyllaminol-3-

oxo-proDanoicue on ajoute goutte à goutte 4,03 ml (23,2 mmoles) de diisopropyléthylamine à une suspension, sous agitation, de

4,35 g (23,2 mmoles) du chlorhydrate de 2-amino-3-phényl-

1-propanol dans 100 ml de chlorure de méthylène à 0 .

Quand la totalité du produit est passée en solution, on ajoute une solution de 3,06 g (23,2 mmoles) de l'ester monoéthylique de l'acide malonique dans 25 ml de chlorure de méthylène, cette addition étant suivie -de l'addition goutte à goutte d'une suspension de 4,78 g (23,2 mmoles) de dicyclohexyl carbodiimide dans 75 ml de chlorure de méthylène, en 5 minutes. Puis le mélange réactionnel est retiré du bain de glace et agité à la température ambiante pendant 16 heures. La dicyclohexylurée est séparée par filtration et lavée à l'acétate d'éthyle. Le filtrat est évaporé, et le résidu est trituré avec environ 25 ml d'acétate d'éthyle, puis filtré de nouveau. Le filtrat est

lavé successivement avec une solution à 10 % d'hydrogéno-

sulfate de potassium, de l'eau, une solution de bicarbonate de sodium à moitié saturée, de l'eau et une saumure (3 x 30 mlde chaque), séché sur du sulfate de sodium et concentré sous vide pour donner 5,6 g d'un solide de couleur bleu clair. Ce produit est adsorbé par une faible quantité de silice (Merck, 230-400 mesh), séché et

appliqué sur une colonne de 350 g de cette même silice.

Une élution avec 4 1 d'un mélange 3:2 d'acétate d'éthyle et d'hexane, suivie de 2 1 d'acétate d'éthyle, donne

4,15 g de l'ester éthylique de l'acide 3-[[1-(hydroxy-

méthyl)-2-phényléthyl]amino]-3-oxo-propanoique; PF 58-60 .

On ajoute à 0 5 ml (25,4 mmoles) d'azodicarboxylate de diisopropyle à une solution, sous vigoureuse agitation, de 6,66 g (25,4 mmoles) de triphénylphosphine dans 65 ml de tétrahydrifuranne. Le mélange est agité à 0O pendant 30 minutes, après quoi il se forme un précipité jaune clair. On ajoute en 10 minutes une solution de 1,82 ml (25,4 mmoles) d'acide thiolacétique et de 3,36 g (12,7

mmoles) de l'ester éthylique de l'acide 3-[[1-(hydroxy-

méthyl)-2-phényléthyl]amino]-3-oxopropanoique dans 50 ml de tétrahydrofuranne. Le mélange est agité pendant 2 heures à 0 et pendant 1 heure à la température ambiante (période au cours de laquelle le mélange vire au vert, puis au jaune clair), puis il est concentré sous vide. Le résidu obtenu est repris dans 125 ml d'acétate d'éthyle, lavé avec 3 x 30 ml de bicarbonate de sodium en solution saturée, séché sur du sulfate de sodium et concentré pour donner une huile jaune avec un précipité blanc. Le résidu est repris dans un mélange 2:3 d'acétate d'éthyle et

d'hexane, filtré pour séparer le précipité, et concentré.

On applique 9,19 g de l'huile jaune restante sur une colonne de 450 g de silice (Merck, 230-400 mesh), et on élue avec un mélange 3:2 d'hexane et d'acétate d'éthyle pour obtenir 3,48 q d'une huile jaune. Une portion de ce produit (3,4 g) est appliquée sur une deuxième colonne' de 230 g de silice et éluée avec un mélange 4:3 d'hexane et d'acétate d'éthyle pour donner, sous la forme d'un solide

jaune pâle, 2,71 g de l'ester éthylique de l'acide 3-[[1-

[(acétylthio)méthyl]-2-phényléthyl]amino]-3-oxo-propa-

noique PF 59-63 .

2,68 g (8,29 mmoles) de ce produit acétylthiométhy-

lique sont dissous dans 35 ml de méthanol refroidi à 0 , et agités sous atmosphère d'azote. On ajoute goutte à goutte à cette solution, en 10 minutes, 35 ml d'hydroxyde de sodium iN. Le mélange st agité à 0 pendant 10 minutes, puis on le chauffe à la température ambiante et on le laisse sous agitation pendant 3 heures. Puis le mélange est concentré sous vide jusqu'à environ la moitié de son volume. Le résidu est dilué avec 40 ml d'eau, puis lavé par 2 x 20 ml de chloroforme. La couche aqueuse est acidifiée à pH 1,5 avec du HC1 concentré. La suspension blanche obtenue est extraite par 3 x 15 ml d'acétate d'éthyle. Les couches organiques sont combinées, lavées avec 20 ml d'eau et 20 ml d'une saumure, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées pour donner 2,05 g d'un solide blanc. Un échantillon de 1,96 g de ce produit est dissous par chauffage dans un petit vôlume d'un mélange 4:1 de toluène et d'acide acétique, appliqué sur une colonne de 140 g de silice (Merck, 230-400 mesh) et élué avec un mélange 4:1 de toluène et d'acide acétique pour donner 1,83 g du produit brut. Ce produit est dissous dans un mélange chaud d'acétate d'éthyle et d'hexane, et refroidi sur de la glace. Après un fort grattage, il se forme des cristaux, qui sont filtrés pour donner 0,719 g

d'acide 3-[[1-(mercaptométhyl)-2-phényléthyl]amino]-3-oxo-

propanoci'e; PF 109-112 . CCM (gel de silice; n-butanol:

eau:acide acétique, 4:1:1) Rf = 0,69.

Analyse: calculé pour C12H15N03S:

C, 56,90; H, 5,97; N, 5,53; S, 12,66; SH,.

13,06 Trouvé: C, 56,81; H, 6,02; N, 5,35; S, 12,37; SH,

12,65.

Exemple 70

Acide 6- r r1-(mercaptométhyl)-2-phényléthyllaminol-

6-oxohexanoicue En suivant le mode opératoire de l'exemple 69, mais en utilisant l'ester Ionoéthylique de l'acide. adipique, on

obtient l'ester éthylique de l'acide 6-[[l-(hydroxy-

méthyl)-2-phényléthyl]amino]-6-oxohexanoique. La réaction de ce produit ester éthylique sur l'acide thiolacétique selon le mode opératoire de

l'exemple 69 donne l'ester éthylique de l'acide 6-[[1-

[(acétylthio)méthyl]-2-phényléthyl]amino]-6-oxohexanoique. Un traitement par de l'hydroxyde de sodium dans du méthanol refroidi donne, sous la forme d'un solide blanc,

l'acide 6-[[1-(mercaptométhyl)-2-phényléthyl]amino]-6-oxo-

hexanoique; PF 82-85 . CCM (gel de silice; benzène:

acide acétique, 4:1) Rf = 0,41.

Analyse: calculé pour C15H21,NO3S:

C, 60,99; H. 7,17; N, 4,74; S, 10,85; SH,

11,20

Trouvé: C, 60,92; H, 7,15; N, 4,76; S, 10,75; SH,

11,00.

On trouve une description plus détaillée de la

préparation de ce composé dans l'exemple 1 de la demande

de brevet européen n 161.769.

Exemple 71

Acide 8- r[1-(mercartométhyl)-2-phényléthYllaminol-8-

oxo-octanolque En suivant le mode opératoire de l'exemple 69, mais en utilisant de l'ester monométhylique de l'acide

subérique, on obtient l'ester méthylique de l'acide 8-[[1-

(hydroxyméthyl)-2-phényléthyl)amino]-8-oxo-octanolque. La réaction de ce produit ester méthylique sur l'acide thiolacétique selon le mode opératoire' de l'exemple 69 donne l'ester méthylique- de l'acide

8-[[1-[(acétylthio)méthyl]-2-phényléthyl]amino]-8-oxo-

octanoique. Un traitement par de l'hydroxyde de sodium dans du méthanol refroidi donne, sous la forme d'un solide blanc, l'acide 8-[[1(mercaptométhyl)-2-phényléthyl]amino] -8-oxo-octanoique; PF 90-92 (agglutination au-delà de 87 ). CCM (gel de silice; toluène:acide acétique, 4:1)

Rf= 0,33.

Analyse: calculé pour C17H25NO3S:

C, 63,13; H, 7,79; N, 4,33; S, 9,91; SH,

,22 Trouvé: C, 63,13; H. 7,91; N. 4,26; S, 9,90; SH, ,17.

On trouve une description plus détaillée de la

préparation de ce composé dans les exemples 2 et 3 de la

demande de brevet européen n 161.769.

Exemple 72

N-( -L-RhamnoDvrannosyloxyhydroxvphosphinvl)-L-

leucvl-L-trvDtoDhane La préparation du phosphoramidon est décrite par Umezawa et coll. dans Tetrahedron Letters N l, pages

97-100 (1972).

Exemple 73

Sel de dilithium de la N-rN-rhvdroxy(méthvl)phosphi-

nvll-L-phénylalanyll-L-leucine On peut préparer ce composé comme décrit en détail

dans l'exemple 1 du brevet des Etats-Unis n' 4.432.972.

Exemple 74

Sel de dilithium de la N-r2-r(hydroxyméthylphosphi-

nVl)-l-oxo-3-phénvlpropyl]-L-leucine On chauffe sous reflux sous atmosphère d'azote pendant 7 heures, puis on agite à la température ambiante pendant 16 heures, un mélange de 661 mg (6,12 mmoles) de l'ester éthylique de l'acide méthylphosphinique, de 900 mg

(5,1 mmoles) de l'ester méthylique de l'acide 2-benzyl-

acrylique et de 1,03 g (5,1 mmoles) de bis(triméthyl-

silyl)acétamide. Le mélange réactionnel est ensuite dilué avec 70 ml de chloroforme, lavé avec 2 x 10 ml d'eau et une saumure, et séché sur du sulfate de magnésium. Une élimination des solvants sous vide donne 2,4 g du produit brut, lequel est chromatographié sur de l'alumine (activité III, 100 g), l'éluant étant de l'éther, suivi d'un mélange 42:1 d'éther et de méthanol. Les fractions contenant le produit sont réunies pour donner 1,14 g de

l'ester méthylique de l'acide 3-phényl-2-[(éthoxyméthyl-

phosphinyl)méthyl]propanoique. On traite avec 9 ml d'hydroxyde de sodium en solution aqueuse IN une solution de 400 mg (1,41 mmole) de ce produit ester méthylique dans 1 ml de méthanol. Le mélange est dhauffé dans un bain d'huile à 50 pendant 3 heures, puis fixé avec de l'acide acétique et concentré sous vide. Le mélange réactionnel concentré est élué sur une colonne contenant 100 ml de AG 50W-X2 (H+), dans une solution aqueuse de méthanol à 15 %. Une élimination des

solvants sous vide donne l'acide 3-phényl-2-[(hydroxy-

méthylphosphinyl)méthyl]propanoique. A la température ambiante et sous atmosphère

d'argon, on ajoute 251 mg (1,55 mmole) de carbonyldi-

imidazole à une solution de 342 mg (1,41 mmole) d'acide 3-phényl-2[(hydroxyméthylphosphinyl)méthyl]propanoique dans 8 ml de tétrahydrofurane sec. Au bout de 90 minutes, on refroidit la réaction dans un bain d'eau glacée et on traite le mélange réactionnel avec 610 mg (1,55 mmole) du sel d'acide p-toluènesulfonique de l'ester phénylméthylique de la L-leucine, traitement suivi de

l'addition de 285 mg (2,82 mmoles) de N-méthylmorpholine.

Au bout d'une heure, on enlève le bain de glace et on agite la masse réactionnelle à la température ambiante pendant 16 heures. Puis le mélange.réactionnel est dilué avec 60 ml d'acétate d'éthyle, rincé à deux reprises avec des portions de 10 ml de HCl IN, deux portions de 10 ml d'eau et une saumure, et séché sur du sulfate de magnésium. Une concentration sous vide donne, sous la forme d'une huile, l'ester phénylméthylique de la

N-[2-[(hydroxyméthylphosphinyl)méthyl]-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-leucine. On déprotège 628 mg (1,41 mmole) de ce produit ester 3 0 phénylméthylique, en deux lots, par action d'hydrogène sous la pression atmosphérique dans du méthanol et en présence d'un catalyseur au palladium sur charbon. Le mélange réactionnel est filtré sur Celite, et le filtrat est traité par de la triéthylamine puis concentré sous vide. Le résidu est ensuite élué sur une colonne de AG

W-X8(Li+) dans de l'eau pour donner, après lyophi-

lisation, le sel de dilithium sous foirme solide. Ce sel de dilithium brut est purifié par chromatographie en phase inversée sur une colonne de HP-20 (25 x 400 mm), en éluant avec un gradient allant de 400 ml d'eau à 400 ml d'acétonitrile. Les fractions contenant le produit

sont combinées puÂs subissent une purification supplé-

mentaire par élution dans de l'eau, sur une colonne de LH-20 (15 x 200 mm) . Les fractions contenant le produit sont combinées et lyophilisées pour donner, sous la forme

d'un solide, 140 mg du sel de dilithium de la N-[2-

E[(hydroxyméthylphosphinyl)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-

leucine; PF 247-252' avec décomposition; [Ex], = -36,4' (c = 0,5, eau). CCM (gel de silice; chloroforme:méthanol:

acide acétique, 11:1:1) Rf = 0,15, 0,12.

Analyse calculé pour C17H24NO5P. 2Li. 0,9H20

C, 53,25; H, 6,78; N, 3,65; P, 8,08

Trouvé C, 53,43; H, 7,06; N, 3,50; P, 7,80.

Exemple 75

Acide 3-[r 1-oxo-2-(mhénvlméthyl)-3-phosphonoprop l1 amino]propano loue On ajoute à la température ambiante 5 g (24 mmoles, 6 ml) de bis(triméthylsilyl)acétamide à une solution de 2 g (12 mmoles) d'acide 2benzylacrylique et de -3,3 g (24 mmoles) de phosphite de diéthyle dans 30 ml de'chlorure de méthylène. Le mélange est agité à la température ambiante pendant 30 minutes, concentré sous vide à la température 2.5 ambiante, et le résidu est chauffé à une température de bain de 100-110: pendant 16 heures. Le mélange réactionnel huileux, incolore, est dissous dans de l'acétate d'éthyle et extrait avec une solution à 5 % de bicarbonate de sodium (pH 9-10). La solution aqueuse alcaline est lavée à

l'éther et acidifiée à pH 1-2 avec du HCl concentré.

L'huile incolore qui se sépare est extraite dans de l'acétate d'éthyle, lavée avec une saumure, séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous vide pour donner, sous la forme d'une huile incolore, 3,6 g d'acide 3-phényl-2-[(diéthoxyphosphinyl)méthyl]propanoique. On refroidit dans un bain d'eau glacée une solution

de 2,2 g (7,33 mnmoles) d'acide 3-phényl-2-[(diéthoxy-

phosphinyl)méthyl]propanoique dans 70 ml de tétrahydro-

furanne et on ajoute 1,3 g (8,0 mmoles) de l,l'-carbonyl-

diimidazole. Après. heure d'agitation, on ajoute d'abord

1,73 g (8 mmoles) d. sel chlorhydrate de l'ester phényl-

méthylique de la D-alanine, puis 1,6 g (16 mmoles) de triéthylamine. On enlève le bain et on agite le mélange à la température ambiante pendant 16 heures. Les matières solides sont séparées par filtration. Le filtrat est concentré sous vide. le résidu est dissous dans de l'acétate d'éthyle, lavé à lieau, avec une solution à 5% d'hydrogénosulfate de potassium jusqu'à pH 1-2, de l'eau, une solution saturée de bicarbonate de potassium et une saumure, puis séché sur du sulfate de magnésium et concentré sous vide. Le résidu huileux (3,7 g) devient semi-solide après repos à la température ambiante. Le résidu est chromatographié sur gel de silice (Whatman LPS-1, 610 g) et est élué à l'acétate d'éthyle pour donner, sous la forme d'une huile incolore, 2,5 g de

l'ester phénylméthylique de l'acide 3-[[2-[(diéthoxy-

phosphinyl)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]amino]propanoique.

On ajoute à la température ambiante 2,0 g (13 mmoles) de bromotriméthylsilane à une solution de 2,2 g (47 mmoles) de l'ester phénylméthylique ci-dessus dans 45 ml de chlorure de méthylène. Après repos jusqu'au lendemain à la température ambiante, le mélange est concentré sous vide. Le résidu est repris dans 25 ml d'eau, et on ajoute 25 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. La solution alcaline obtenue est diluée à l'eau jusqu'à 100 ml, lavée à l'acétate d'éthyle et à l'éther, et acidifiée à pH 1-2 par addition de HCl concentré. Le solide qui se sépare est recueilli par filtration sous aspiration, trituré dans 50 ml d'acétonitrile au reflux, refroidi et filtré pour donner 1,5 g du produit. après séchage sous vide à 80 pendant 4 heures. On recristallise un échantillon dans, de l'acétonitrile pour obtenir l'ester phénylméthylique de

l'acide 3-[[1-oxo-2-(phénylméthyl)-3-phosphonopropyl]-

amino]propanoique; PF 122-123 .

On place dans un appareil réducteur de Parr, sous une pression de 345 kPa (50 psi) une solution de 1,4 g (34 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 50 ml d'acide acétique glacial, plus urn catalyseur hydroxyde de palladium sur charbon. Au bout de 5 heures, le mélange est filtré sur Celite et concentré sous vide. On ajoute du toluène au résidu, et le mélange est de nouveau concentré sous vide. Ce mode opératoire est répété plusieurs fois, et on laisse reposer sous vide jusqu'au lendemain le résidu solide vitreux (1,2 g). On le triture avec de l'acétate d'éthyle au reflux. Puis on le cristallise dans ml d'un mélange 19:1 d'acétonitrile et d'eau; puis on le recristallise dans 100 ml d'acétone pour obtenir, sous

la forme d'un solide, 400 mg d'acide 3-[[l-oxo-2-(phényl-

mé.thyl)-3-phosphonopropyl]amino]propanoique; PF 138-140 .

CCM (gel de silice; n-butanol:pyridine:acide acétique:

eau, 4:1:1:1) Rf = 0,50.

Analyse: calculé pour C13Hl,8NO6P:

C, 49,59; H, 5,76; N, 4,44; P, 9,82

Trouvé: C, 49,42; H, 5,95; N, 4,50; P, 9,90 ExemDle 76

N-r(S)-2-r ('hdroxvméthylphosDhinvl) oxyl-l-oxo-3-

mhénvlpropyll-L-leucine On ajoute à 0-5 sous atmosphère d'argon, à une suspension de 15,74 g (40 mmoles) du sel d'acide p-toluènesulfonique de l'ester phénylméthylique de la

L-leucine, d'abord 6,97 ml (40 mmoles) de diisopropyl-

éthylamine, puis 6,65g(40 mmoles) d'acide (S)-2-hydroxy-3-

phénylpropanoique, et 5,4 g (40 mmoles) de l-hydroxybenzo-

triazole hydraté. On ajoute une solution de 8,25 g (40 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide dans 25 ml de tétrahydrofuranne, puis on agite le mélange réactionnel pendant 3 heures à 0 , puis jusqu'au lendemain à la température ambiante. La dicyclohexylurée est séparée par filtration et lavée à l'acétate d'éthyle. Le filtrat est' évaporé, et le résidu est repris dans 300 ml d'acétate d'éthyle, lavé avec une solution à 10 % d'hydrogénosulfate de potassium, de l'eau, une solution à 5 % de bicarbonate de sodium, de l'eau -et une saumure, puis séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 15,26 g d'un solide cristallin jaune pâle. Deux cristallisations dans l'acétate d'éthyle donnent, sous la forme d'un solide blanc, 10,12 g de l'ester phénylméthylique de la N- [(S)-2-

hydroxy-3-phényl-l-oxopropyl]-L-leucihe; PF 110,5-112,5'.

On ajoute en une fois 5,24 g (20 mmoles) de phosphite de dibenzyle à une suspension de 832 mg (20,8 mmoles) d'une dispersion d'hydrure de sodium dans de l'huile minérale à 60 % dans 30 ml de diméthylformamide sous atmosphère d'argon. On agite le mélange obtenu à la température ambiante pendant 1 heure, puis à 40 pendant minutes. On laisse refroidir à la température ambiante la solution ambre limpide, puis on ajoute en 5 minutes une solution de 3,36 g (23,7 mmoles) d'iodométhane dans 3 ml de diméthylformamide. Après 1 heure d'agitation à la température ambiante, le mélange réactionnel est versé dans ml d'hydrogénosulfate de potassium en solution à 5% et

extrait par 1 x 100 ml puis 4 x 50 ml d'acétate d'éthyle.

L'extrait acétate d'éthyle combiné est lavé par 2 x 50 ml d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium, et une saumure, puis séché et évaporé pour donner 4,39 g d'un liquide jaune foncé. Une chromatographie éclair sur gel de silice (Whatman LPS - 1, 325 g), en éluant avec un mélange 3:2 d'acétate d'éthyle et d'hexane donne, sous la forme d'un liquide légèrement jaune, 2,27 g de l'ester

dibenzyligue de l'acide méthylphosphonique.

On ajoute sous atmosphère d'azote, 1,09 g (5,25 mmoles) de pentachlorure de phosphore à une solution de 1,38 g (5 mmoles) de l'ester dibenzyligue de l'acide méthylphosphonique dans 7,5 ml de benzène sec. On agite le mélange pendant 30 minutes à ia température ambiante, puis à 60 (température du bain) pendant 45 minutes. La

solution est évaporée. Le résidu est repris dans du-

benzène, et la solution obtenue est évaporée. Cette séquence d'opérations est répétéé pour éliminer les traces de chlorure de phosphoryle. Le phosphonochloridate brut est repris dans 5 ml de chlorure de méthylène sec, refroidi à 0-5' sous atmosphère d'argon et traité avec une

solution de 1,85 g (5,0 mmoles) de l'ester phényl-

méthylique de la N-[(S)-2-hydroxy-3-phényl-1l-oxopropyl)]-L-

leucine et de 75 mg (0,5 mmole) de 4-pyrrolidinopyridine dans 5 ml de chlorure de méthylène sec. On ajoute goutte à goutte en 10 minutes une solution de 0,92 ml (5!2 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 5 ml de chlorure de méthylène sec. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes à 0-5e, puis à la température ambiante jusqu'au lendemain. Le solvant est évaporé et le résidu est repris dans 150 ml d'acétate d'éthyle. Cette solution est lavée avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 %, de l'eau, du bicarbonate de sodium à 5 %,'de l'eau et une saumure, puis séchée sur du sulfate de sodium et évaporée pour donner 3,07 g d'un résidu jaune. Une chromatographie éclair sur gel de silice (Whatman LPS-1, 300 g), en éluant avec un mélange 3:2 d'acétate d'éthyle et d'hexane donne, sous la forme d'un solide blanc, l'ester phénylméthylique

de la N-[(S)-2-[[(phénylméthoxy)méthylphosphinyl]]oxy]-1-

oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine.

On agite une solution de 950 mg (1,77 mmole) de ce produit ester phénylméthylique dans 250 ml d'acétate d'éthyle et 2,5 ml d'acide acétique avec 200 mg d'un catalyseur palladium à 10 % sur charbon, sous un courant d'hydrogène pendant 4 heures à la température ambiante. Le catalyseur estséparé par filtration, et le solvant est évaporé. On dissout le résidu dans du toluène puis on évapore la solution. Puis le résidu incolore est recristallisé deux fois dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'hexane pour donner, sous la forme d'un solide

cristallin blanc, 476 mg de N-[(S)-2-[(hydroxyméthyl-

phosphinyl)-oxy]-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine; PF 124-

; [] = -32,3 (c = 1,0, méthanol). CCM (gel de

silice; chloroforme:méthanol:acide acétique) Rf = 0,38.

* Analyse: calculé pour C1 6H2 4NO6P:

C, 53,78; H, 6,77; N, 3,92; P, 8,67

Trouvé: C, 53,79; H, 6,66; N, 3,86; P, 8,50.

Exemple 77

Sel de dilithium de la N-r(S)-2-rrhydroxv(2-phényl-

éthvl)phosphi'nylloxv -l-oxo-3-plDhénylpropyll-L-leucine On ajoute goutt. à goutte, sous atmosphère d'argon à la température ambiane, 11,93 ml (54 mmoles) de phosphite de dibenzyle à une suspension, sous agitation, de 1, 45 g (59,4 mmoles) d'hydrure de-sodium prélavé dans 40 ml de diméthylformamide sec. Au bout de 40 minutes à la température ambiante, le mélange homogène brun est traité par 7,38 ml (54 moles) de bromure de phénéthyle, puis agité pendant 20 minutes. Le mélange est ensuite partagé entre de l'hydrogénosulfate de potassium à 5 % et de l'acétate d'éthyle. La couche organique est lavée avec une saumure, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et

évaporée pour donner 20,6 g d'une huile jaune visqueuse.

L'huile brute est purifiée par chromatographie. éclair sur gel de silice (Whatman LPS-1), en éluant avec un mélange

7:3 d'hexane et d'acétate d'éthyle. Les fractions conte-

nant le produit sont réunies, concentrées et cristallisées dans du pentane pour donner, sous la forme d'un solide cristallin blanc,3,92 g de l'ester dibenzylique de l'acide

(2-phényléthyl)phosphonique; PF 53-55 .

On fait réagir cet ester dibenzylique de l'acide (2-phényléthyl) phosphonique sur l'ester phénylméthylique de la N-[(S)-2-hydroxy-3-phényil-oxo-propyl]-L-leucine selon le mode opératoire décrit dans i'exemple 76 pour obtenir, sous la forme d'une huile incolore, l'ester phénylmnéthylique de la N-[(S)-2-[[(phénylméthoxy)(2-phényl -éthyl) phosphinyl]oxy]-l-oxo-3-phénylpropyl]-L-leucine. Une solution de 1,43 g (2,3 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 35 ml d'acétate d'éthyle et 3,5 ml d'acide acétique est traitée avec 30 mg d'un catalyseur palladium à 10 % sur charbon et soumise à un écoulement continu d'hydrogène sous une pression de 1 atmosphère. Au bout de 5,5 heures, le mélange réactionnel est filtré sur Celite et concentré sous vide pour donner 1 g du produit diacide brut. Une solution de 855 mg (1,9 mmole) de ce diacide dans un mélange eau/ acétone/méthanol est traitée par 1,9 ml (3,8 mmoles) d'une solution aqueuse 2N d'hydroxyde de lithium, filtrée et concentrée sous vide. Le résidu est chromatographié sur une colonne de HP-20 de 150 ml, en éluant avec un gradient allant de 300 mIl d'eau à 300 ml d'acéto- nitrile. Les fractions contenant le produit sont combinées et lyophilisées pour donner, sous la forme d'un solide

blanc, 510 mg du sel de dilithium de la N-[(S)-2-

r[hydroxy(2-phényléthyl)phosphinyl]oxy]-l-oxo-3-phényl-

propyl]-L-leucine; PF 212-225'; [t]D = -16,2 (C = 1, méthanol). CCM (gel de silice; chloroforme:métbar.ol:acide

acétique, 15:1:1) Rf = 0,13.

Analyse: calculé pour C23H2 8 NO6 PLi2. 1,75 H20:

C, 56,28; H, 6,47; N, 2,85; P, 6,31

Trouvé: C, 56,31; H, 6,19; N, 2,90; P, 6,40

Exemple 78

Acide 3-rrtN-r(S)-l-carboxv-2-phényléthvl1-L-phényl-

alanyl aminoTDropanoicue a) Monochlorhvdrate de l'ester phénylméthvlioue de la B-alanine On ajoute goutte à goutte sous vigoureuse agitation et sur une période de 75 minutes, une solution de 60 g (275 mmoles) de dicarbonate de di-tert-butyle-dans 50 ml de tert-butanol à une suspension de 22,27 g (250 mmoles) de fD-alanine et de 10 g (250 mmoles) d'hydroxyde de sodium dans 25 ml d'eau et 50 ml de tert-butanol. Quand l'addition est terminée, on dilue le mélange avec 25 ml d'un mélange 2:1 de tert-butanol et d'eau et on le laisse

sous agitation jusqu'au lendemain.

Le mélange réactionnel est dilué avec 150 ml d'eau et extrait avec 3 x 150 ml de pentane. La couche aqueuse est refroidie dans un bain de glace, puis acidifiée à pH 2-3 avec une solution de 35 g d'hydrogénosulfate de potassium dans 150 ml d'eau. Le produit est extrait avec 4 x 200 ml d'acétate d'éthyle. L'extrait organique combiné est lavé à l'eau et avec une saumure, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner, sous la forme sulfate de sodium et évaporé pour donner, sous la forme 96 -

d'un solide blanc, 43,74 g de N-[(l,l-diméthyléthoxy)-

carbonyl]- -alanine, PF 73,5-76 .

On ajoute souF atmosphère d'argon 25,2 g (300 mmoles) de bicarbonate de sodium à une solution, sous agitation, de 28,38 g (150 mmoles) de N-[(1,1diméthyl-

éthoxy)carbonyl])--alanine dans 125 ml de diméthyl-

formamide, puis on y ajoute goutte à goutte une solution de 17,8 ml (150 mmoles) de bromure de benzyle dans 25 ml de diméthylformamide, en 1 heure. On laisse le mélange réactionnel sous agitation à la température ambiante et -à l'abri de la lumière. Au bout de 50 heures, on ajoute une quantité supplémentaire de 1,78 ml (15 mmoles) de bromure de benzyle. Au bout d'une nouvelle période de 40 heures, on évapore le diméthylformamide. Le résidu est dilué avec 250 ml d'eau et extrait avec 3 x 150 ml d'acétate d'éthyle. L'extrait acétate d'éthyle, combiné, est lavé avec une solution à 5 % de bicarbonate de sodium, de l'eau et une saumure, puis séché sur du sulfate de sodium et

évaporé pour donner 28,56 g d'une huile presque incolore.

On purifie 14 g de ce produit en deux portions par chromatographie éclair. sur 320 g de gel de silice Merck en éluant avec un mélange 5:1 d'hexane et d'acétate d'éthyle pour obtenir, sous la forme d'une huile, 12,34 g de

l'ester phénylméthylique de la N-[(1,1l-diméthyléthoxy)-

carbonyl] - -alanine.

On ajoute à 15 , en goutte à goutte rapide sur 30 minutes, une solution 1, 5 N de HCl dans de l'acide acétique (240 ml) à une solution, sous agitation, de 12,19

g (43,6 mmoles) de l'ester phénylméthylique de la N-[(l,l-

diméthyléthoxy)carbonyl] -j-alanine dans 40 ml d'acide acétique. Quand l'addition est terminée, on agite la solution pendant 1 heure à 15 , puis on évapore le solvant. Le résidu est cristallisé par addition d'éther, trituré et recueilli pour donner, sous la forme d'un solide blanc, 9,12 g du monochlorhydrate de l'ester

phénylméthylique de la p-alanine; pF 87-89,5 .

b) (S)-N-rl-r(ll-diméthvléthoxv)carbonvll-2-phénVl-

éthvl]-L-Dhénvlalanine On ajoute goutte à goutte en 2 heures, à 45-50 , une

261.6070

solution de 25,9 g (360 mmoles) de nitrite de sodium dans ml d'eau à une solution, sous agitation, de 16,52 g (100 mmoles) de D-phénylalanine dans 250 ml d'acide sulfurique à 10 %. Quand l'addition est terminée, le mélange réactionnel est agité pendant 4,5 heures à 50, puis jusqu'au lendemain à la température ambiante. Ce mélange réactionnel est extrait par 3 x 100 ml d'acétate d'éthyle, puis l'extrait organique combiné est lavé à l'eau et avec une saumure, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 14,79 g d'un solide jaune pâle. Une recristallisation dans du benzène donne, sous la forme

d'aiguilles -blanches, 11,62 g d'acide (R)-2-hydroxy-3-

phénylpropanoique; PF 121-124,5 ; [3]D = +28,5 (c = 1,03, acétone). CCM (gel de silice; benzène:acide

acétique, 7:3) Rf = 0,33.

On ajoute 10,08 g (120 mmoles) de bicarbonate de sodium à une solution, sous agitation, de 9,97 g (60 mmoles) d'acide (R)-2-hydroxy-3phénylpropanoique dans 50 ml de diméthylformamide sous atmosphère d'argon, puis on ajoute goutte à goutte une solution de 7,13 ml (60 mmoles) de bromure de benzyle en 1 heure. Quand l'addition est terminée, on laisse le mélange réactionnel sous agitation à la température ambiante et à l'abri de la lumière. Au bout de 26 heures, on évapore le diméthylformamide. Le résidu est dilué avec 100 ml d'eau et extrait avec 1 x 250 ml et 1 x 50 ml d'acétate d'éthyle. L 'extrait acétate d'éthyle combiné est lavé avec une solution à 5 % de bicarbonate de sodium, de l'eau et une saumure, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 12,78 g d'une huile jaune pâle. Ce produit - est soumis à une chromatographie éclair en deux portions sur 320 g de gel de silice Merck, en éluant avec un mélange 7:3 d'hexane et d'éther pour donner, sous la forme d'une huile incolore,

11,68 g de l'ester phénylmnéthylique de l'acide(R)-2-

hydroxy-3-phénylpropanoique. On ajoute à -5 sous atmosphère d'argon et en goutte

à goutte rapide, 0,84 ml (5 mmoles) d'anhydride trifluoro-

méthane sulfonique à une solution, sous vigoureuse agitation, de 0,44 ml. (5,5 mmoles) de pyridine dans 40 ml de chlorure de méthylène sec. La suspension blanche épaisse obtenue est agitée pendant 5 minutes, puis on ajoute une solution de 1,28 g (5 mmoles) de l'ester phénylméthylique de l'acide (R)-2-hydroxy-3-phényl- propanoique dans 5 ml de chlorure de méthylène. On laisse le mélange réactionnel sous agitation pendant 1 heure, on le chauffe progressivement jusqu'à 5 , puis on l'agite pendant 2 heures à la température ambiante. Le mélange réactionnel contient encore un peu du produit de départ n'ayant pas réagi. On le refroidit à une température de -10 à -15 , et on ajoute 0,22 ml (2,75 mmoles) de pyridine, puis 0,42 ml (2,5 mmoles) d'anhydride trifluorométhane sulfonique. On agite le mélange réactionnel à froid pendant 5 minutes, puis à la température ambiante pendant 15 minutes. Le solvant est évaporé et le résidu est soumis à une chromatographie éclair sur 100 g de gel de silice Merck en garnissage dans de l'hexane, en éluant avec un mélange 9:1 d'hexane et d'éther pour donner, sous la forme d'une huile incolore,

1,64 g de l'ester phénylméthylique de l'acide (R)-2-

[[(trifluorométhyl)sulfonyl]oxy]benzènepropanoique. On ajoute en une fois sous atmosphère d'argon une

solution de 1,4 g (6,33 mmoles) de l'ester 1,1-diméthyl-

éthylique de la L-phénylalanine et de 0,81 ml (4,65 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 5 ml de chlorure de méthylène sec, en une portion, à une solution de 1,64 g (4,22 mmoles) de l'ester phénylméthylique de l'acide (R)-2-[[(trifluorométhyl)sulfonyl)oxy] benzènepropanoique dans 10 ml de chlorure de méthylène. On laisse le mélange réactionnel sous agitation à la température ambiante jusqu'au lendemain. On évapore le solvant et le résidu est repris dans 200 ml d'acétate d'éthyle. Cette solution est lavée à l'eau, avec une solution de bicarbonate de sodium à 5 %, de l'eau et une saumure, puis séchée sur du sulfate de sodium et évaporée pour donner 2,67 d'une huile trouble. Une purification par chromatographie él-air sur 235 c de cel de silice Merck, en éluant avec un mélange 4:1

:2616070

d'hexane et d'éther, donne sous la forme d'une huile incolore limpide, 1, 64 g de l'ester phénylméthylique de la

(S)-N-[1-[(1,1l-diméthyléthoxy)carbonyl]-2-phényléthyl]-L-

phénylalanine. Un échantillon a alytique est obtenu par cristallisation dans du pentane, PF 54-56e; [t]D = +3,1

(c = 1,02, chloroforme).

On agite pendant 2 heures sous atmosphère d'hydrogène, une solution de 1, 63 g (3,55 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 20 ml d'acétate d'éthyle et 20 ml d'éthanol à 95 %, avec 325 mg d'un catalyseur hydroxyde de palladium sur charbon. Le catalyseur est filtré et lavé avec 200 ml d'éthanol à 95 % pour dissoudre le produit qui avait précipité. Une évaporation du solvant donne 1,33 g d'un solide jaune. Une purification par chromatographie éclair sur 90 g de gel de silice Merck (garnissage dans du chloroforme), en éluant avec un mélange 50:1:1 de chloroforme:méthanol:acide

acétique, donne 1,06 g de (S)-N-[l,l-diméthyléthoxy)-

carbonyl]-2-phényléthyl]-L-phénylalanine.

c) Acide 3-[rN-r(S)-l-carboxv-2-phényléthyll-L-

phénvlalanyllaminoipropanoicue On ajoute sous atmopshère d'argon 598 mg (2,76 mmoles) du monochlorhydrate de l'ester phénylméthylique de la jalanine, sous forme de poudre fine, à une solution de 1,02 g (2,76 mmoles) du produit provenant de la partie B et de 0,48 ml (2,76 mmoles) de diisopropyléthylamine dans ml de tétrahydrofuranne, puis on ajoute 373 mg (2,76 mmoles) de l-hydroxybenzotriazole hydraté. Le mélange est refroidi à 0-5 , et on ajoute une solution de 567 mg (2,67 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide dans 10 ml de tétrahydrofuranne. On laisse le mélange réactionnel sous agitation pendant 3 heures à 0-5 , puis jusqu'au lendemain à la température ambiante. Le mélange est dilué avec 50 ml

d'acétate d'éthyle et filtré pour éliminer la dicyclo-

hexylurée. Le solvant est évaporé, et on dissout le résidu dans 100 ml d'acétate d'éthyle. Le solvant est séparé par filtration, dilué avec 50 ml d'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, avec du bicarbonate de sodium -à 5 %, de l'eau et une saumure, séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 1,46 g d'un résidu semi-solide incolore. Ce produit est combiné à 0,3 g de produit provenant d'un autre traitement, puis purifié par chromatographie éclair sur 135 g de gel de silice Merck, en éluant avec un mélange 3:2 d'hexane et d'acétate d'éthyle pour donner, sous la forme d'une huile incolore, 1,41 g de l'ester

phénylm-n thylique de l'acide 3-[[N-[(S)-l-[(diméthyl-

éthoxy)carbonyl]-2-phényléthyl]-L-phénylalanyl]amino]pro-

panoique. On agite sous atmosphère d'hydrogène pendant 2 heures, avec 280 g d'un catalyseur à base d'hydroxyde de palladium sur charbon, une solution de 1,41g(2,66 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 20 ml d'éthanol à 95 %. Le catalyseur est filtré, et le solvant est évaporé pour donner 1,15 g d'une mousse jaune. Une chromatographie éclair sur 45 g de gel de silice Merck (garnissage dans du chloroforme), en éluant avec un mélange 50:1:1 de chloroforme:méthanol:acide acétique, donne, sous la forme d'une huile incolore, 1,12 g d'acide

(3-[[N-[(S)-l-[(diméthyléthoxy)carbonyl]-2-phényléthyl]-L-

phénylalanyl]amino]propanoique. On agite à la température ambiante pendant 3 heures une solution de 1,06 g (2,41 mmoles) de ce produit acide

propanoique dans du HCl 1,5N dans 20 ml d'acide acétique.

Une évaporation du solvant et une trituration à l'éther donnent un solide blanc. On redissout ce solide dans 25 ml -de HCl 1,5N dans de l'acide acétique, et on le laisse sous agitation jusqu'au lendemain. On filtre la solution et on évapore le solvant. On ajoute de l'acide acétique au résidu, et on évapore deux fois, puis le résidu est trituré à l'éther pour donner 1,01 g d'un solide blanc pulvérulent. Une portion de 850 ml de ce produit est recristallisée deux fois dans de l'acétonitrile-eau pour donner, sous la forme d'un solide blanc, 647 mg d'acide 3-[[N-[(S)-lcarboxy-2-phényléthyl]-L'-phénylalanyl]amino]-' propanoique; PF 219-220, 5 avec décomposition; [f]D = -31,4 (c = 0,99, diméthylformamide). CCM (gel de silice;

chloroforme:méthanol:acide acétique, 10:1:1) Rf = 0,27.

Analyse: calcule pour C2H2 N25:0

C, 65,61; H, 6,29; N, 7,29

Trouvé.: C, 65,30; H, 6,28; N, 7,42.

Exemple 79

Acide 7-r EN- r (S)-l-carboxv-2-mhényléthyll-L-phényl-

alanvllaminolhertanoicue On laisse sous agitation sous atmosphère d'argon pendant 6 heures, une solution de 6,66 g (14,5 mmoles) de

l'ester phénylméthylique de la (S)-N-[1-[(1,1-diméthyl-

éthoxy)-carbonyl]-2-phényléthyl]-L-phénylalanine, préparé comme décrit dans l'exemple 78, et de 1 ml d'anisole dans 43 ml de chlorure de méthylène et 100 ml d'acide trifluoracétique. Le solvant est évaporé, et le résidu est repris deux fois dans du toluène et évaporé jusqu'à la siccité. Une trituration du résidu à l'éther donne, sous

la forme d'un solide blanc, 5,91 g de l'ester phényl-

méthylique de la (S)-N-(l-carboxy-2-phényléthyl)-L-phényl-

alanine; PF 185,5-187,5 .

On ajoute en une fois à 0-5. sous atmosphère d'argon, 722 mg (3,5 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide solide à une solution de 1,41 g (3,5 mmoles) du produit ester phénylméthylique ci-dessus, de 951 mg (3;Snnoles) du monochlorhydrate de l'ester phénylméthylique de l'acide 7aminoheptano que, préparé comme décrit par Smith et Coll., J. Med. Chem., 20, 1292 (1977), de 473 mg (3,5 mmoles) de l-hydroxybenzotriazole hydraté et de 0,61 ml (3,5 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 35 ml de diméthylformamide. On laisse le mélange réactionnel sous

agitation, jusqu'au lendemain, en chauffant progressive-

ment jusqu' à la température ambiante. La dicyclohexylurée

est séparée par filtration et lavée à l'acétate d'éthyle.

Le filtrat est évaporé, et le résidu est repris dans 175 ml d'acétate d'éthyle. Cette solution est filtrée, lavée avec de l'hydrogénophosphate de potassium à 10 %, de l'eau, du bicarbonate de sodium à 5 %, de l'eau et une saumure, séchée sur du sulfate de sodium et évaporée pour donner 2, 48 g d'un résidu jaune pâle. Ce résidu est

26160?0

dissous dans un volume minimal de chloroforme, adsorbé par un gel de silice Merck, séché et appliqué sur une colonne de 185 g de ce même gel de silice et chromatographié en éluant avec un mélange 7:3 d'hexane et d'éther pour donner, sous la forme d'une huile incolore, 1,64 g de

l'ester phénylméthylique de l:acide 7-[[N-[(S)-l-[(phényl-

méthoxy)carbonyl]-2-phényléthyl]-L-phénylalanyl]amino]-

heptanoique. On agite sous atmosphère d'hydrogène, avec 320 mg d'un catalyseur à base d'hydroxyde de palladium sur charbon, une solution de 1, 64 g (2,64 mmoles) de ce

produit ester phénylméthylique dans 20 ml d'éthanol à 95%.

Au bout de 10 minutes, un précipité blanc commence à se séparer. On ajoute deux portions supplémentaires de 20 ml

d'éthanol à 95 %, mais le précipité ne se reddisout pas.

Au bout de 5 heures, le catalyseur est séparé par

filtration et extrait par 5 x 20 ml de diméthylformamide.

Le filtrat combiné est évaporé jusqu'à la siccité pour donner 1,13 g d'un résidu solide jaune. Le produit est dissous sous chauffage modéré dans 200 ml de bicarbonate de sodium à 2 %. Cette solution est lavée avec 2 x 30 ml d'acétate d'éthyle et 3 x 30 ml d'éther, décolorée au charbon de bois, puis ajustée à pH environ 6 avec du HCl MN. Le précipité blanc qui se sépare est recueilli et

trituré à l'acétonitrile pour donner 494 mg d'un solide.

Le filtrat est concentré à environ 50 ml et réacidifié à pH environ 5 avec HCl 1N, pour donner une quantité supplémentaire de 417 mg d'un solide. Les deux récoltes du solide sont combinées et triturées à l'acétonitrile pour donner, sous la forme d'un solide blanc, 895 mg d'acide

7-[[N-[(S)-l-carboxy-2-phényléthyl]-L-phénylalanyl]amino]-

heptanoique; PF 198,5 - l99 (agglomération à 185 ); [a]D = -33,3 (c = 1, diméthylformamide). CCM (gel de silice; chloroforme:méthanol:acide acétique, 20:1:1) Rf = 0,22 (trace à l'origine). CCM (gel de silice; acétate d'éthyle:pyridine:acide acétique:eau, 180:20:6:11) Rf =

0,42 (trace à l'origine).

Analyse: calculé pour C2sH32 N2O5:

C, 68,16; H, 7,32; N, 6,36

Trouvé: C, 67,87; H, 7,26; N, 6,21.

Exemp!e 80

N-rN-F(S)-!-carboxv-2-phén!éthyll-L-phénylalan -

L-leucine On ajoute en une fois, à 6-5 sous atmosphère d'argon, 722 mg (3,5 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide solide à une solution de 1,41 g (3,5 mmoles) de l'ester

phénylméthylique de la (S)-N-(l-carboxy-2-phényléthyl)-L-

phénylalanine, préparé comme décrit dans l'exemple 79, de 1,38 g (3,5 mmoles) du sel d 'acide p-toluènesulfonique de l'ester phénylméthylique de la L-leucine, de 473 mg (3,5 mmoles) de l-hydroxybenzotriazole hydraté et de 0,61 ml (3,5 mmoles) de diisopropyléthylamine dans 70 ml de diméthylformamide. On laisse le mélange réactionnel sous agitation jusqu'au lendemain, en chauffant progressivement à la température ambiante. On filtre la dicyclohexylurée, et le filtrat est évaporé. Le résidu est dissous dans 200 ml d'acétate d'éthyle, et cette solution est lavée avec de l'hydrogénophosphate de potassium à 10%, de l'eau, du bicarbonate de sodium à 5 %, de l'eau et une saumure, puis séché sur du sulfate de sodium et évaporé pour donner 2,2 g d'un résidu semi-solide blanc cassé. Ce

résidu est dissous dans une quantité minimale de chloro-

forme, adsorbé par un gel de silice Merck, séché et appliqué sur une colonne de 156 g de ce même gel de silice. Une chromatographie éclair, l'éluant étant un mélange 4:1 d'hexane et d'acétate d'éthyle, donne sous la

forme d'une huile incolore, 1,85 g de l'ester phényl-

méthylique de la N-[N-(S)-l-[(phénylméthoxy)carbonyl]-2-

phényléthyl]-L-phénylalanyl]-L-leucine. On agite sous atmosphère d'hydrogène pendant 2 h, avec 370 mg d'un catalyseur à base d'hydroxyde de palladium sur charbon, une solution de 1,85 g (3,05 mmoles) de ce produit ester phénylméthylique dans 40 ml d'éthanol à 95%. On sépare le catalyseur par filtration et on évapore le solvant. Le résidu encore humide est recristallisé dans de l'acétatonitrile-eau pour donner

sous la forme d'un solide blanc 1,15 g de N-[N-[(S)-l-

carboxy-2-phényléthyl]-L-phénylalanyl]-L-leucine; p.f.

-186,5 ; []D = -48,0 (c = 0,99, diméthylformamide).

CCM (gel de silice; chloroforme:méthanol:acide acétique, 15:1:1) Rf = 0, 4C (trace à l'origirne). CCM (gel de silice; acétate d'éthyle:pyridine:acide acétique:eau,

:20:6:11) Rf = 0,28 (trace à l'origine).

Analyse: Calc. pour C24 H30N205. 0,6 H20:

C, 65,92; H, 7,19; N, 6,40

Trouvé: C, 65,90; H, 7,34; N, 6,46.

Exemple 81

(trans) (R,R)-N-rN-r (2-Carboxycyclohexyl)carbonvll-L-

phénylalanvli-L-leucine Un échantillon de 0,6 g (3,5 mmoles) d'acide (trans)(R,R)-l,2-cyclohexanedicarboxylique, préparé comme indiqué dans l'exemple 27(a) du brevet des Etats-Unis nO 4.499.079, est mis en suspension dans 7 ml de chlorure d'acetyle, purgé à l'azote et chauffé au reflux pendant 2 h. La solution jaune limpide obtenue est concentrée sous vide, on ajoute 5 ml de benzène et on concentre de nouveau

le mélange. Le résidu est repris dans 6 ml de tétrahydro-

furanne, traité avec 0,54 ml (1,5 éq.) d'alcool benzylique et soumis à un courant d'argon. Puis on ajoute 0,22 ml (1,3 mmole) de diisopropyléthylamine (le mélange vire au rose), et la solution est agitée jusqu'au lendemain à la température ambiante. Le solvant est chassé sous vide, et le résidu est versé dans 80 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium. Après lavage avec 2 x 25 ml d'éther, la solution aqueuse est acidifiée à pH environ 2 avec du HCl concentré et extraite avec 3 x 20 ml d'acétate d'éthyle. Ces extraits sont combinés, lavés à l'eau et à l'aide d'une saumure (20 ml chaque) séchés sur du sulfate de sodium et concentrés sous vide pour donner sous la forme d'une huile brun clair limpide, 0,58 g de l'ester

monophénylméthylique de l'acide (trans)(R,R)-l,2-cyclo-

hexanedicarboxylique. On soumet à un courant d'azote et on traite avec 0, 66 ml (3,8 mmoles) de diisopropyléthylamine une suspension, dans 10 ml de tétrahydrofuranne, de 0,5 g (1,9 mmole) de cet ester monophénylméthylique, 0,78 g (1,9 mmole) du monochlorhydrate de l'ester phénylméthylique *de la N-(L-phénylalanyl)-L-leucine et 0,26 g (1,9 mmole) d'hydroxybenzotriazole hydraté. Le mélange est refroidi dans un bain de glace et de méthanol, et on ajoute sur une période de 10 min., une solution de 0,39 g (1,9 mmole) de

dicyclohexylcarbodiimide dans 5 ml de tétrahydrofuranne.

Après agitation jusqu'au lendemain, tout en chauffant à la température ambiante, on ajoute 20 ml d'acétate d'éthyle,

et on filtre le mélange pour chasser la dicyclohexylurée.

Le filtrat est concentré sous vide, repris dans 50 ml d'acétate d'éthyle, lavé à deux reprises avec de l'hydrogénosulfate de potassium à 10 %, à deux reprises avec du carbonate de sodium en solution saturée, de l'eau et une saumure (25 ml chaque), et séché sur du. sulfate de sodium. Une concentration sous vide donne un solide blanc gommeux, lequel est adsorbé par 5 g d'un gel de silice Baker, de granulométrie 60-200 mesh (0,250-0, 074- mm), et appliqué sur une colonne de 80 g de gel de silice Merck (230400 mesh). Une élution à l'aide d'un mélange 20:7 d'hexane et d'acétate d'éthyle et une concentration, sous vide, des fractions contenant le produit, donnent, sous la forme d'un solide amorphe mousseux et blanc, 0, 74 g de

l'ester phénylméthylique de là (trans)(RR)-N-[N-[[2-

[(phénylméthoxy)carbonyl]cyclohexyl]carbonyl]-L-phënyl-

alanyl]-L-leucine. On traite avec 70 mg d'un catalyseur palladium à 10 % sur charbon, une solution soumise à un courant d'argon, de 0,71 g (1,2 mmole) de ce produit ester phénylméthylique dans 30 ml d'éthanol à 95 %. Ce mélange est hydrogéné sous une surpression d'hydrogène, sous vigoureuse agitation, jusqu'au lendemain à la température ambiante. Après filtration du mélange sur Celite, le filtrat est concentré sous vide pour donner 0,41 g d'un solide brun olair. On prépare un échantillon analytique par recristallisation de 0,33 g du produit dans de l'acétate d'éthyle/hexane, pour donner, sous la forme d'un solide blanc, 0,243 g de

2616070,

O (trans)(R,R)-N-[N-[(2-carboxycyclohexyl)carbonyl]-L-phényl -alanyl]-Lleucine; PF 183,5-185'. [f]D = -39,8e (c = 1,0, méthanol). -CM (gel de silice; toluène:acide

acétique, 9:2) Rf = 0,30.

Analyse: calculé pour C23H32N206. 0,35 H2:

C, 62,95; H, 7,56; N, 6,39

Trouvé: C, 62,95; H, 7,58.; N, 6,15.

ExemDle 82

N- rN-r2-(Mercaptométhyl)-l-oxo-3-phén lpropYll-

glvcyll-L-arqinine Comme décrit dans l'exemple 35 du brevet australien

n 537.592, une solution de N-[2-[(acétylthio)méthyl]-l-

oxo-3-phénylpropyl]glycine dans. du tétrahydrofuranne est traitée par de la triéthylamine refroidie à 0o puis traitée à l'aide de chloroformiate d'éthyle. Après 40 minutes d'agitation du mélange à 0o, on le filtre dans une solution d'arginine et on le traite pour obtenir la

N-[N-[2-[(acétylthio)méthyl]-l-oxo-3-phénylpropyl]glycyl]-

arginine. Ce produit acétylthiométhylique est traité par de l'hydroxyde d'ammonium concentré, comme décrit dans l'exemple 35 du brevet australien no 537.592,pour donner

la N-[N-[2-(mercaptométhyl)-l-oxo-3-phénylpropyl]glycyl]-

L-arginine; PF 120-137 .

Analyse: calculé pour C,8H27N5 O4S. 1,75 H20:

C, 49,02; H, 6,97; N, 15,88; S, 7,27

Trouvé: C, 48,89; H, 6,67; N, 16,17; S, 7,28.

Exemple 83

On détermine l'activité d'endopeptidase neutre in

vitro par une technique d'analyse fluorimétrique.

L'analyse se fonde sur le clivage du tripeptide aansylé fluorescent DnsGly-Phe-Arg pour former Dns-Gly..Ce dernier est extrait du mélange acidifié à l'aide d'acétate

d'éthyle, et présente une forte fluorescence.

Le mélange d'incubation utilisé pour l'analyse contient la substance DnsGly-Phe-Arg (0,5 mM), un tampon tris(hydroxyméthyl)aminométhane -HC1 (pH 7,5, 50 mM), une préparation enzymatique dans du triton X-100 à 0,05 %,

26 1 6070

dilué à l'eau ou à l'aide d'un inhibiteur jusqu'à un volume final de 0,25 ml. La préparation enzymatique est purifiée à partir du rein de rat par lemode opératoire décrit par Almenoff et coll. dans Biochemistry Vol. 22, p. 590-599 (1983). L'inhibiteur est préincubé pendant 10 minutes avec la préparation enzymatique et le tampon avant que la réaction ne soit déclenchée par addition du substrat. L'incubation est mise en oeuvre à 37 pendant 30 minutes et la réaction est arrêtée par addition de 0,25 ml de HCl iN etextraction du produit Dns-Gly dans 1,5 ml d'acétate d'éthyle. L'intensité relative de fluorescence (IRF) de l'extrait acétate d'éthyle est mesurée à l'aide d'un spectrofluorimètre Ferrand, à une longueur d'onde d'excitation de 342 nanomètres et une longueur d'onde d'émission de 508 nanomètres, une correction étant faite pour tenir compte de i'IRF d'un témoin à l'instant zéro et elle est comparée aux résultats des analyses sans inhibiteur. Des analyses sont effectuées à différentes concentrations du composé d'essai, et on détermine la CI50 à l'aide d'un modèle mathématique. La CI50 est la concentration du composé d'essai conduisant à une

inhibition de 50 % de l'activité de l'enzyme.

Composé d'essai CI 50(pM) Composé d'essai CI 50 (pM)

C 50(M

Exemple 1 0 0066 Exemple 31 0 0053 2 01380 32 0t0089

3 0;720 33 0,009

4 0;290 34 0,012

01020 35 0,0069

6 0,013 36 0>072

7.01054 37. 0,016

8 01280 38 0>087

9 0;0039 39 0>015

0,510 40 O 190

11 0,170 41 0,730

12 0>0033 42 01036

13 0,0022 43 0;064

14 0>091 44 01220

0,030 45 0 0089

16 0;370 46 0>006

17 0;014 47 0,018

18 0>069 48 0,052

19 0,110 49 0,022

0,021 50 0;059

21 0,280 51 0,020

22 0,0067 52 0,026

23 0;049 53 0,076

24 0)047 54 0,680

0,120 55 0;53D

26 0,032 56 0,023

27 0;0057 57 0,028

28 0;0078 58 0;095

29 0;017 59 0)330

0;020 60 0,031

-' I

Composé d'essai CI 5(pM) ComDosé d'essai CI50(PM) Exemple 61 0,120 Exem5le72 0, 0038

62 0,740 73 0,0072

63 0,310 74 0;950

64 0;006 75 0,040

0,062 76 1>200

66 0,078 77 2,200

67 0;970 78 0;013

68 1,200 79.0,940

69 0,012 80 0,330

0,0031 81 1,200

71 0,014 82 0;015

ExemDle 84 On détermine par le mode opératoire ci-après la réponse (diminution de la tension artérielle) aux composés d'essai chez des rats conscients, hypertendus sous l'effet de minéralocorticoides. Des rats Sprague-Dawley mâles (environ 150 g) sont anesthésiés à l'aide de pentobarbital-sodium, et on implante dans l'aorte abdominale et dans la veine cave des sondes vasculaires à demeure, par les méthodes de Weeks et

coll., Biological Medicine, volume 104, p. 646 (1960).

Avant de fermer l'incision abdominale, on place dans la cavité péritonéale une pastille contenant 100 mg d'acétate de désoxycorticostérone (DOCA). Le DOCA est libéré de la pastille à un débit constant pendant 21

jours.

Les rats sont logés à titre individuel et reçoivent comme boisson une solution physiologique (à 0,9 % de chlorure de sodium) et sont alimentés par une alimentation normale pour rats au cours des trois à quatre semaines suivantes. Ensuite, on ouvre les sondes et on mesure la tension artérielle moyenne (TAM) à l'aide d'un transducteur de pression Statham et d'n enregistreur à bande. On maintient le libre passage dans la sonde artérielle grâce à une perfusion d'une solution physiologique à partir d'un réservoir sous pression, à un

débit d'environ 10 à 15 pl/minute.

Après 2 heures d'acclimatation, le composé d'essai est injecté par voie intraveineuse. Chaque dose est administrée à raison de 1,0 ml/kg + 0,03 ml (quantité suffisante pour remplir la cavité de la sonde). On

enregistre la TAM pendant au moins 4 heures.

Variation de la TAM Dose Composé d'essai (mm Hg) (jimole/kg) Exemple 1 65+14 300

35 -56+3 300

39 -55+4 300

52 -41+8 300

64 -44+5 300

Exemple 85

On détermine par le mode opératoire suivant la capacité des composés d'essai à améliorer la diminution de la tension artérielle provoquée par 1'ANP 99-126 exogène

chez des rats génétiquement hypertendus (RGH) conscients.

Des sondes vasculaires sont implantées à demeure dans l'aorte abdominale et la veine cave de rats RGH mâles, à l'aides des méthodes de Weeks et coll.. On octroie au rat au moins 1 semaine de rétablissement. Le jour de l'expérience, on ouvre la sonde aortique, et on la fixe à un transducteur de Statham à l'aide d'un diviseur de

courant à trois voies. Ce système permet une perfusion-

lente et continue d'une solution physiologique (environ 10 à 15 pl/minute) à partir d'un réservoir sous pression,

pour maintenir le libre passage dans la sonde artérielle.

On mesure en continu, sur un enregistreur à bande, la

tension artérielle moyenne (TAM).

Deux heures après le début de la mesure de la tension artérielle, le composé d'essai (ou le véhicule utilisé pour le dissoudre) est injecté par voie intraveineuse (1,0 ml/kg) et poussé avec 0,3 ml d'une solution physiologique. 30 minutes plus tard, on administre 3 nmoles/kg de ANP 99126 (1,0 ml/kg + 0,03 ml de solution physiologique). On attend un temps suffisant après l'injection de 1'ANP 99-126, pour observer la réponse maximale (diminution de la tension artérielle) et

un rétablissement à 50 %.

On détermine la TAM avant l'administration de ANP 99-126, et à des intervalles de 5 minutes, jusqu'à ce que la tension artérielle se soit rétablie à au moins 50 % de

112 2616070

sa valeur initiale. On utilise un modèle mathématique pour calculer l'aire sous la courbe, entre le moment o la TAM tombe à 50 $ de la réponse maximale et le moment d'un rétablissement à 50. Les résultats sont repris sur un tableau, par le logarithme de la dose d'inhibiteur en

fonction de l'aire sous la courbe.

La DE600 est la dose nécessaire pour augmenter l'aire, sous la courbe donnant la tension artérielle en fonction du temps, pour 1'ANP exogène, 'jusqu'à 600 mm Hg

X minute. -

Composé d'essai DE600 ( mole/kg) Exemple 1 22,8

9,2

*36 8,22

52 15,5

66 2,93

Exemple 86

On détermine par le mode opératoire suivant la

fonction rénale après administration des composés d'essai.

On construit une sonde comme suit. On insère des tronçons d'un tube métallique de jauge 18 (longueur environ 6,35 mm (1/4 inch)) dans deux tronçons d'un tube "microbore" en Tygon (diamètre intérieur 1,016 mm (0, 04 inch) x diamètre extérieur 1,778 mm (0,007 inch). On scelle autour de deux raccords métalliques un court trançon d'un tube de Tygon de grand diamètre (diamètre intérieur 2,642 mm (0,104 inch)) x diamètre extérieur 3,658 mm (0,144 inch). Cette extrémité est destinée à être implantée dans la vessie. Pour empêcher que l'extrémité ne soit colmatée par des matières particulaires, on perce

quatre trous sur sa longueur.

Pour implanter les sondes, on anesthésie des rats mâles à l'aide de pentobarbital sodique et on expose la vessie urinaire à l'aide d'une incision abdominale centrale. On aménage une petite fente au sommet de la vessie, et on insère la pointe de la sonde dans la lumière. La sonde est fixée en place à l'aide d'une suture en soie, et on fait courir les extrémités libres par voie sous-cutanée jusqu'à la base du crâne. Le tube est protégé par un ressort métallique, et l1extrémité du ressort est fixée au crâne à l'aide d'une résine acrylique à usage dentaire. Le tube de la sonde est rempli d'une solution de nitrofurazone à 0,2 %, et bouché d'une manière étanche. On laisse les rats au repos pendant 3 à 5 jours avant ouverture des tubes. L'urine est doucement prélevée de la vessie à l'aide d'une pompe à prélèvement fixée à l'un des tubes. L'autre tube sert d'évent, pour permettre à l'air de pénétrer dans la vessie et empêcher la création 'd'une aspiration. L'ouverture du tube est protégée par un filtre Millipore, de façon que les particules étrangères soiept

éliminées avant que l'air n'arrive à la vessie.

Au cours de l'expérience, l'urine est recueillie dans des récipients tarés, à certains intervalles de temps. On détermine le volume d'urine par une méthode gravimétrique (1 g = 1 ml), et on calcule le débit par le rapport entre le volume total et la durée du prélèvement (ml/minute). On mesure les concentrations du sodium à

l'aide d'un analyseur à électrode sélective d'ions Nova-l.

On calcule les taux d'excrétion des électrolytes (g Eq./minute) en multipliant la concentration ionique (p

Eq/ml) par le débit urinaire (ml/minute).

L'urine est prélevée deux fois à 20 minutes d'intervalle avant administration du composé d'essai. Le composé est administré par voie intraveineuse, et l'urine est prélevée toutes les 20 minutes au cours des 4 heures

suivantes.

Selon ce mode opératoire, l'administration du composé de l'exemple 52 à une dose intraveineuse de 30 mg/kg + 3 mg/kg/minute pendant 20 minutes a conduit à une multiplication par 2,6 du taux d'excrétion du sodium chez des rats génétiquement hypertendus, conscients. Le composé de l'exemple 1, à une dose intraveineuse de 100 mg/kg, a provoqué une multiplication par 2,4 de l'excrétion du sodium.

26 16070

Claims (15)

REVENDICATIONS

1. Composition pour produire une diurèse, une natriurèse et une diminution de la pression artérielle chez un hôte mammifè e, comprenant une quantité efficace d'un ou plu.ieurs inhibiteurs de l'endopeptidase neutre.

2. Composition selon la revendication 1, contenant

aussi une quantité efficace d'un agent hypotenseur.

3. Composition selon la revendication 2, dans laquelle l'agent hypotenseur est un inhibiteur de l'enzyme

de conversion de l'angiotensine.

4. Composition selon la revendication 2, dans laquelle ledit agent hypotenseur est un peptide

natriurétique auriculaire administré par voie exogène.

5. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante (I)

R2 O R1 0

R4- S- (CH2)-CH- C- NH -CH -(CH2)n-C-OR,

(II)

R2 0

R4--S-- (CH2)- CH - C -X

(III)

< Z 0

C

R4- S -(CH)-CE CH--C-- X

R4 - - - -C2)m..

(IV) R2

I2 11 1 -; 0

i II i I. R4-S-CH2- CH -NH- C CH - (CH2)n-C-OR3 (V) o O R lI R5 11

R7-O-C- CH CH-C-NH-CH-- C - NH-CH- C-OR3

(VI)

O R8 R1 R5 O

I I 1 11 1 I1

R7-O-C- CH -- NH -CH- C- NH-CH -(CH2)n-C-OR3 (VII)

0 R8 R O R5 O

II 8 I1 Il I Il

R7-O-C-CH -CH-- CH -C-NH-CH - (CH) --C-OR3

(VIII)

O R1 O R5 O

IlI li i Il

R9-- P- Y- CH - C- NH- CH- C --OR3

OR1I OR 10

116 26 1607

(IX)

0 R1 0 0

Il I i! Ri-- P - CHf- CH-C- NH - (CH2) C-OR3 ou OH (X)

O R2 R1 O

Il. 1 il 1 i1

HO -NH- C -(CH2) -CH- C - NH - CH - C-OR3

O dans laquelle: il R4 est un hydrogène ou R6-C-; R1, R2 et R5, indépendamment les uns des autres, sont choisis dans le groupe comprenant l'hydrogène, les radicaux alkyle inférieur, -(CH2)q-cycloalkyle, -(CH2) q) , -(C H2) q--OH -(CH2) qOH, -(CH2)p-OH OH -(CH2)p-SH, -(CH2)p-NE2, -(CH2) p-S-CH3 O0 IlI -(CH2) p-NH - C -O CH -CH - CH OH f/NH -(CH2) p-COOH, (CH2)- NH- C NH2

0

-(CH2)p -C- NH2, -(CH2)p N e

2 p- 2-

N H

EH

g vaut zéro ou est un entier de 1 à 4; p est un entier de 1 à 4; n vaut zéro ou est un entier de'l à 15; R3, R7 et R1, indépendamment les uns des autres, sont choisis dans le groupe comprenant l'hydrogène, les radicaux alkyle inférieur, benzyle, bernzhydryle, et un ion salifiable, pharmaceutiquement acceptable;

R6 est un radical alkyle inférieur, -(CH2)q-

- (CE2 q< (CH2)q 3 (CE) A)0 ou -(CH2)q-cycloalkyle; m, m' et m", chacun indépendamment des autres, vaut zéro ou un; R8 est un hydrogène, un radical alkyle inférieur,

-(CH2)

-(CH2)pi3,-(CH2pg, (CE 2p4 N -(CH2) q -cycloalkyle, -CH2 ou un radical 1ou 2-naphtylalkylène de formule -(C2)p.-- '; R9 est un radical alkyle inférieur, (CH2) >, l0 -(Ccs2q-cyoloalkyle, -(CH2)p-C-3, -(cH21p C--, (CH2)P-NO), -(CH2)p-NH2, -(CH2)p-NH-C-R6,

N

-OH, -O-(alkyle inférieur),-O-(CH2), -O-(CH2)q-cycloalkyle, -0-(CH2)p- pI

-- (CH2

ou -O-(CH2)q-cycloalkyle; r est un entier de 2 à 4; X est R 0 R1 -NH-CH(CH2)mC - C-OR3 H R1 o R5 ou 1I Il I Il -NE-CH - (CH2) m-C-NH- CH - (CHE2) m C-OR3; Y est -NH, -CH2 ou -0; et Z complète un noyau cycloalkyle ayant de 4 à 7

atomes de carbone.

6. Composition selon la revendication 5, 'dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante:

R 0 R 0

2 II 1 il 1 if

HS CH2 CH- C- NEH- CH C -OR3

dans laquelle: R2 est un radical benzyle ou alkyle à chaine droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone; R3 est un hydrogène ou un ion salifiable pharmaceutiguement acceptable; et R1 est un hydrogène, un radical alkyle inférieur à chaine droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone, benzyle,

-(CH2)EH, -CH2 - OH

OH

OR 0

OH O - o 2 3 1 -C i CO1 ' i1

-CH2-OH, -CH, -CH2-C--OH, -(CH2)2-C-OH

NB

-(CH2) 2-S-CH5 -(CH2)3-NH-CN

NEB2 0 O

-(CH2)4-NH-C-0-CH2 -(CH2)4-NH2

-CEH2-C-NH2, ou -C2

N

H

7. Composition selon la revendication 6, dans laquelle R2 est le radical benzyle, -CH3 ou

-CH2 -CH- (CH3) 2

8. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante: R2 0. R1 o

I I I I

ES -CH2- CH- C - NH - CH - (CH2)n-C-OR3 dans laquelle: R2 est le radical benzyle; 30. R1P est un hydrogène ou le radical benzyle; n est un entier de 1 à 9; et est un hydrogène ou un ion salifiable

pharmaceutiquement acceptable.

9. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante

2 0 R1 0 0

I II I II r u

HS-- CH2)-CH - C- NH-CH- C- N C -C-OR3

H dans laquelle: m vaut zéro ou 1; R2 est le radical benzyle; R1 est le radical méthyle; et R3 est un hydrogène ou un ion salifiable

pharmaceutiquement acceptable.

10. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante:

R1 O

R2 0 R1 R5 0

i II11,I ' il t I1 S-(CH2) m-CH - C --NH-C - (CH2) m -C NH-CH - C-OR3 dans laquelle: m et m' sont choisis indépendamment l'un de l'autre entre zéro et 1; R2 est un hydrogène ou -CH2-CH-(CH3)2; R1 et R5, indépendamment l'un de l'autre, sont choisis dans le groupe comprenant l'hydrogène et les radicaux alkyle inférieur à chaine droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone, benzyle, NH -CH2 t Q, -(CH2)3-NH-C, et NH2

1 2

H O Il -(CH2)2-C-NH2 et R3 est un hydrogène ou un ion salifiable

pharminaceutiquement acceptable.

11. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante:

R O R R O

HS-CH2-CH -NHE- C - CH- (CH2)n-C-OR3 dans laquelle: R2 est un radical benzyle; R1 est un hydrogène; n vaut zéro ou est un entier de 1 à 5; et R3 est un hydrogène ou un ion salifiable

pharmaceutiquement acceptable.

12. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante: 0 R R 0 R o il 18 i Il I5 il R7-O-C- CH - NH -CH - C- NH -CH-(CH2)n-C-OR3 dans laquelle: R1 et R8 sont chacun le radical benzyle; R5 est un hydrogène et n vaut zéro ou est un entier de 1 à 5, ou bien R5 est un radical alkyle inférieur à chaîne droite ou ramifiée ayant de 1 à 4 atomes de carbone et n vaut zéro; et R3 et R7 sont tous les deux des atomes d'hydrogène, ou tous les deux des ions salifiables pharmaceutiquement

acceptables.

13. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a-la formule suivante:

O R O R O

*IlI il

R9- P- Y- CH- C-NH- CH- C- OR3

i OR10 dans laquelle: Y est -NH, -CH2 ou 0O; R1 est le radical benzyle; R est -CH2-CH(CH3)2; R9 est le radical méthyle; R3 et R1i sont tous les deux des atomes d'hydrogène ou tous les deux des ions salifiables pharmaceutiquement

acceptables.

14. Composition selon la revendication 5, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre a la formule suivante:

0 R 0 0

Il Rl

HO-P - CH2 -CH.- C - NH-(CH2)2- C-OR3

OH dans laquelle: R1 est le radical benzyle; et R3 est un hydrogène ou un ion salifiable

pharmaceutiquement acceptable.

15. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit inhibiteur de l'endopeptidase neutre est le

N- ( -L-rhamnopyranosyloxyhydroxyphosphinyl)-L-leucyl-L-

tryptophane.