FR2560881A1

FR2560881A1 - Derives d'acide sialique, leurs procedes de preparation et leurs applications notamment comme medicament inhibiteur de la metastase des cellules cancereuses

Info

Publication number: FR2560881A1
Application number: FR8503521A
Authority: FR
Inventors: Haruo Ogura; Kimio Furuhata; Toshiaki Osawa; Satoshi Toyoshima; Yoshiyasu Shitori; Masayoshi Ito; Shoji Yoshimura
Original assignee: KANTO ISHI PHARMA CO Ltd
Current assignee: KANTO ISHI PHARMA CO Ltd
Priority date: 1984-03-09
Filing date: 1985-03-11
Publication date: 1985-09-13
Also published as: JPS60190791A; JPS637556B2; GB8506244D0; US4691012A; CA1257257A; DE3508356A1; FR2560881B1; HK27689A; GB2158433A; GB2158433B; DE3508356C2

Abstract

DERIVE D'ACIDE N-ACETYLNEURAMINIQUE DE FORMULE I: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE LES GROUPEMENTS R REPRESENTENT INDEPENDAMMENT, HYDROGENE OU ACETYLE; R EST UN RESTE DE NUCLEOSIDE; R EST UN CARBOXYLE OU UN METHOXYCARBONYLE; LEURS PROCEDES DE PREPARATION ET LEUR APPLICATION NOTAMMENT COMME MEDICAMENT INHIBITEUR DE LA METASTASE DES CELLULES CANCEREUSES.

Description

-1- 256088 1

La présente invention se rapporte à un nouveau dérivé d'acide N-

acétyl-neuraminique et à son procédé de préparation. Plus particulièrement, elle se rapporte à un nouveau dérivé d'acide N-acétylneuraminique qui trouve son utilité comme médicament inhibant de façon remarquable la métastase des cellules cancéreuses, ainsi qu'un procédé de préparation de ce dérivé. On sait que l'acide N-acétyl-neuraminique, ou acide sialique, occupe les groupements glycide terminaux d'un glucide complexe tel que glycolipide et glycoprotéine, et est présent sur les surfaces des cellules o il produit des effets importants en ce qui concerne la différentiation, la

maturité, les fonctions et les actions intercellulaires des cellules orga-

niques. Un certain nombre de dérivés d'acide N-acétyl-neuraminique a été

synthétisé et a fait l'objet de recherches.

Parmi les références de l'art antérieur, on citera par exemple les suivantes: -R. Kuhn, P. Lutz und D.L. MacDonald, Chem Ber., 99 611-617 (1966) Synthese anomerer SialinsHure-methylketoside - P. Meindl und H. Tuppy, MIh. lChem., 100 1295-1306 (1969) Uber 2-Deoxy-2,3-dehydrosialinsauren, I. Mitt.:

Synthese und Eigenschaften von 2-Deoxy-2,3-dehydro-N-

acetylneuraminsâuren und deren Methylestern - R. Brossmer, H. Friebolin, G. Keilich, B. Loser and M. Supp Hopp-Seyler's Z. physiol. Chem., 359 1064 (1978) Synthesis of Disaccharides Containing N-Acetyl-D-neuraminic Acid M. N. Sharma and R. Eby, Carbohydr. Res., 127 201-210 (1984) Synthesis and Conformational Studies of 2-3-Chloro, 2-a Fluoro, and 2-8Fluoro-Derivatives of 2-Deoxy-N-acetyluneuraminic acid L. Ilolmquist and R. Brossmer, Hoppe-Seyler's Z. Physiol, Chem.,

353 1346-1350 (1972)

Synthesis and Properties of the 2-Aminoethyl a-and the 2-Pyridyl a-and eKetosides of N-Acetyl-D-neuraminic Acid - L. Holmquist and R. Brossmer, FEBS Letters, 22 46-48 (1972)

ON THE SPECIFICITY OF NEURUAMINIDASE

The carboxymethyl a-ketoside of N-acetyl-D-neuraminic acid, a Vibrio cholerae neuraminidase substrate having two anionic sites - T. Ogawa and M. Sugimoto, Carbohydr. Res., 128 Cl-C4 (1984) Synthesis of a- and 8-(2-9) -iinked disialylglycerolipids - H. Paulsen und H. Tietz Carbohydr. Res., 125 47-64 (1984) Synthese eines trisaccharides aus N-acetyl-neuraminsaure und

N-acetyllactosamin.

-2-

Nous avons précédemment trouvé que le dérivé d'acide N-acétyl-

neuraminique ayant un nucléoside ou glucose couplé à l'acide N-acétylneura-

minique par une liaison a possède d'excellentes activités physiologiques, et nous avons déjà déposé une demande de brevet concernant un tel dérivé et son procédé de préparation (demande de brevet japonais né 77672/1981; demande de

brevet U.S. correspondante devenue brevet U.S. n 4.447.600).

Nous avons maintenant découvert qu'un nouveau dérivé d'acide N-

acétyl-neuraminique, en plus du dérivé précédemment trouvé, dans lequel le nucléoside est couplé par une liaison e à l'acide N-acétyl- neuraminique peut être isolé et purifié en appliquant une double chromatographie dans le procédé connu déjà mentionné. En outre, on a découvert de façon surprenante que le nouveau dérivé isolé et purifié comme indiqué ci-dessus avait une efficacité prononcée et caractéristique en ce qui concerne l'inhibition de la métastase des cellules cancéreuses. La présente invention est fondée sur

cette découverte.

Le dérivé d'acide N-acétyl-neuraminique selon l'invention est représenté par la formule générale suivante: AcNH O R2 Ri R' R' OR" dans laquelle les groupements R1 représentent, indépendamment, hydrogène ou acétyle; R est un reste de nucléoside; et R est un carboxyle ou un méthoxycarbonyle. L'invention a également pour objet un procédé de préparation du dérivé d'acide N-acétyl-neuraminique représenté par la formule générale (I) indiquée ci-dessus, ce procédé comprenant l'étape consistant à faire réagir un composé représenté par la formule générale: O AcNH OAc ce OAAc C II)3 OAc 0OAc

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avec un composé représenté par la formule R2EH (III), dans laquelle R2 est un reste de nucléoside, en présence d'un catalyseur; et l'étape d'isolement et de purification consistant à isoler et purifier le produit réactionnel obtenu au stade précédent par double chromatographie effectuée après un stade éventuel d'hydrolyse du produit réactionnel. Comme cela a été décrit précédemment, la présente invention a pour objet de nouveaux dérivés d'acide N-acétyl-neuraminique ainsi que leur

procédé de préparation.

Les nouveaux dérivés d'acide N-acétyl-neuraminique sont représentés par la formule générale (I): R2 AcN ORIO

V OR' C I)

OR

3

R OR{ dans laquelle les groupements R1 représentent, indépendamment, hydrogène ou acétyle; R2 est un reste de nucléoside; et R3 est un carboxyle ou un méthoxycarbonyle. Le terme "reste de nucléoside" tel qu'utilisé dans la présente

demande et dans les revendications désigne un ribose couplé avec une base

purique ou pyrimidique à l'aide d'une liaison glycoside. Le ribose ou les bases respectives dans le "reste de nucléoside" tels que définis ci-dessus

peuvent avoir un groupe substituant et/ou peuvent posséder un cycle condensé.

Des exemples de tels restes de nucléoside sont donnés ci-après

O C \ 7 6

\)21* \C6_ N

3 H 3 2H

450O--C N

4'? 4'CC1

41 C 1' i

C-C H 31 21HC-

3' 2'

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Parmi les restes de nucléoside préférés, on citera à titre d'exemplE H N O-oi:0 0 Y

'0 0

OH

N N

- NNNN

0

AcO OAc Un certain nombre d'exemples spéciúiques du résidu représenté par les formules structurelles indiquées ci-dessus seront illustrés dans les

exemples donnés plus loin.

Les composés de la présente invention représentés par la formule

générale (I) peuvent être préparés selon le procédé indiqué à titre illustra-

tif par l'équation réactionnelle suivante puis isolés et purifiés à l'aide

des méthodes de double chromatographie qui seront décrites en détail ci-

après. Dans les séquences réactionnelles des équations qui suivent, le composé représenté par la formule (III) est un composé connu et peut être

facilement utilisé dans la synthèse de divers composés comme produit inter-

médiaire. O HN (H ou F)

O _

AcN OAc0 Ac OA N OAc \ Réaction de OAc OAc Roenigs-Knorr COOMe C OCMe0 0O

><' 0

OAc OAc 0 > l+2 0NN (H ou F) CII'J AcNH OH O COOH E HO o OH X Dans les séquences réactionnelles illustrées ci-dessus, on fait réagir ensemble les composés (II) et (III) dans les conditions habituellement utilisées pour la réaction connue dite de Koenigs-Knrorr. Par exemple, les réactifs sont mis à réagir l'un avec l'autre en présence d'un catalyseur à la pression atmosphérique et à une température d'environ 20 à 25 0C pendant

environ 36 à 48 heures.

Dans le but d'augmenter le rendement en dérivé e, on préfère utiliser le composé (II) dans une proportion d'au moins environ 1,2 moles pour 1 mole du composé (III) dans la réaction représente par l'équation réactionnelle indiquée ci-dessus. Dans le même but, on préfère également ajouter des quantités supplémentaires du composé (II) et le catalyseur de façon intermédiaire dans l'étape réactionnelle, par exemple après environ 12 heures à 24 heures à compter du début de la réaction. Il est bien entendu nécessaire que les quantités de produit de départ ou de composés et le catalyseur utilisé soient maintenus dans une gamme raisonnable comme indiqué ci-dessus, quand le procédé mentionné en dernier lieu d'ajout intermédiaire

est employé.

-6- Parmi les catalyseurs appropriés pour la réaction de Koenigs-Knorr, il convient d'utiliser dans le procédé de l'invention le bromure de mercure (II), (bromure mercurique), le cyanate de mercure (II) (cyanate mercurique) ou le perchlorate d'argent. Le bromure mercurique et le cyanate mercurique sont davantage préférés pour augmenter le rendement et la sélectivité. Le

catalyseur est utilisé dans une proportion variant d'environ 1 à 4 équi-

valents par rapport au composé (II).

Les solvants utilisables dans la préparation des composés de l'invention comprennent l'acétronitrile, le nitrométhane, l'acétone et le

chlorure de méthylène. Les solvants préférés sont l'acétone et l'acétonitrile.

Le produit réactionnel ainsi formé est isolé et purifié par double chromatographie. L'expression "double chromatrographie" telle qu'utilisée dans la présente demande désigne le procédé dans lequel la purification est effectuée par une combinaison de deux ou plusieurs étapes de chromatographie

d'adsorption et/ou de chromatographie de partage effectuées dans des condi-

tions différentes. Comme cela a été décrit précédemment, bien qu'un dérivé d'acide N-acétyl-neuraminique ayant un nucléoside couplé par une liaison a ait été obtenu par le procédé décrit dans notre demande de brevet précédente (demande de brevet japonais n 77672/1981; correspondant à une demande de brevet U.S. qui est devenue le brevet U.S. n 4.447.600), aucun dérivé d'acide N-acétyl-neuraminique ayant un reste de nucléoside couplé par une liaison B ne pouvait être obtenu. Cependant selon la présente invention un dérivé d'acide N-acétyl-neuraminique ayant un reste de nucléoside couplé par une liaison e a été isolé et obtenu à l'état purifié, en plus du dérivé a par

l'utilisation ou l'emploi de la double chromatrographie mentionnée précédem-

ment. Les combinaisons des différents procédés chromatographiques qui peuvent être utilisées dans la double chromatographie selon l'invention comprennent par exemple les suivantes: chromatographie d'adsorption/chromatographie d'adsorption; chromatographie d'adsorption/chromatographie de partage; chromatographie de partage/chromatographie d'adsorption;

et chromatographie de partage/chromatographie de partage.

En ce qui concerne l'amélioration dans l'isolement, la combinaison

chromatographie de partage/chromatographie d'adsorption est plus particulière-

ment préférée.

Les supports devant être introduits dans une colonne pour la

chromatographie d'adsorption et devant être utilisés selon l'invention, com-

prennent par exemple le gel de silice et l'alumine, le gel de silice étant particulièrement préféré. D'autre part, parmi les agents éluants qui peuvent Etre utilisés on citera le chloroforme, le méthanol, l'acétate d'éthyle, l'éthanol, le benzène, l'acétone et le toluène. Les supports devant être disposés dans une colonne pour la chromatographie de- partage et utilisés conformément à la présente invention comprennent par exemple le gel de silice et l'alumine, le gel de silice étant préféré. Des agents éluants similaires à ceux utilisables pour la chromatographie d'adsorption peuvent être également

utilisés dans l'étape de chromatographie de partage.

Les opérations et conditions détaillées pour la double chromato-

graphie sont exposées davantage dans la partie expérimentale ci-après.

Les composés selon la présente invention reprdsentés par la formule générale (I) ont une activité pharmaceutique notable concernant l'inhibition

de la métastase des cellules cancéreuses.

Cette propriété d'inhibition des métastases de cellules cancéreuses a été démontrée par le test décrit dans l'exemple de référence qui sera donné

ci-après.

La présente invention va maintenant être décrite plus en détail à l'aide d'exemples spécifiques. On notera que les exemples qui suivent sont donnés à titre d'illustration uniquement et ne doivent pas être considérés

comme limitatifs.

L'invention a également pour objet l'utilisation des composés de formule (I) dans la préparation industrielle de médicament, notamment de

médicament inhibiteur de la formation de métastase des cellules cancéreuses.

L'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques, caractérisée par le fait qu'elles comprennent comme ingrédient actif au moins

un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus.

EXEMPLE 1

Préparation de la 2',3'-isopropylidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéox

3,6,7,8-tétra-o-acétyl-i-méthoxycarbonyl-D-glycéro-e-D-galacto-

octapyranosyl) uridine:

Dans 50 mX d'acétonitrile, on ajoute 1 g de 2',3'-isopropylidène-

uridine, 300 mg de cyanate mercurique, 600 mg de bromure mercurique et 1 g de tamis moléculaire (4A) pour suspension dans l'acétonitrile, et la suspension

résultante est agitde à température ambiante pendant 30 minutes.

On fait réagir 1,5 g de méthyl-2-chloro-4,7,8,9-tétra-o-acétyl-e-D-

N-acetylneuraminate (appelée ci-après composé /II/) avec la suspension mentionnée ci-dessus en agitant à température ambiante pendant 16 heures et on ajoute à nouveau 510 mg du composé (II), 150 mg de cyanate mercurique et 300 mg de bromure mercurique puis on agite pendant 24 heures. Le mélange

réactionnel est ensuite filtré et le solvant est distillé jusqu'a siccité.

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La poudre résultante est dissoute dans 100 mX d'eau et les matières insolubles sont éliminées. La solution ainsi obtenue est traitée à l'éther pour éliminer les substances qui se dissolvent dans l'éther, puis la solution aqueuse résiduelle est saturée avec du chlorure de potassium puis extraite à l'acétate d'éthyle. La solution dans l'acétate d'éthyle est séchée avec du sel de Glauber, filtrée, et le solvant est ensuite distillé pour obtenir 2,3

g de produit brut.

Le produit brut solide obtenu est soumis à une chromatographie sur colonne en utilisant une colonne remplie d'alumine (Aluminoxid 90, 70 à 230 meshes ASTM, correspondant environ à 60-200 micromètres, Merk) qui est compacté par l'utilisation d'acétate d'éthyle et élué avec de l'acétate d'éthyle, un mélange acétate d'éthyle/éthanol (5:1), un mélange d'acétate d'éthyle/éthanol (3:1) puis avec de l'éthanol, dans cet ordre, grâce à quoi on élue un mélange du composé indiqué (appelé ci-après isomère B) et la

2',3'-isopropylidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-3,6,7,8-tétra-o-acétyl1-

méthoxycarbonyl-D-glycéro-a-D-galacto-octapyranosyl) uridine (appelée ci-

après isomère a).

On élue à nouveau 1,9 g du mélange à travers la colonne de chroma-

tographie sur alumine (Alumine:100 g) en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthanol (6:1) comme solvant, grâce à quoi on obtient 120 mg de l'isomère y (rendement-: 4,5%) et 300 mg de l'isomère a (rendement: 11, 2Z), respectivement sous la forme d'une poudre incolore. Le résidu est élué pour

obtenir un mélange de l'isomère a et l'isomère À.

Pour l'isolement par chromatographie sur colonne, la colonne chromatographique d'alumine mentionnée ci-dessus est remplacée par une colonne chromatographique de gel de silice (Merk, Lober, colonne prête à l'emploi taille B (310-25) Lichroprep Si 60 (40 X 63 pm)), grâce à quoi on peut isoler 830 mg de l'isomère B (rendement: 31,1%) et 210 mg de l'isomère a (rendement: 7,9%). Dans cette variante du procédé, on utilise un mélange chloroforme/méthanol (60:1) comme solvant que l'on fait passer à travers la

colonne à un débit de 5 mi/minute.

Propriétés physiques de l'isomère: /a722 + 3,4 (C = 1, méthanol) Analyse:C32H43018N3; Poids moléculaire 757,70 Calculé: C; 50,73, H; 5,72, N; 5,55 Trouvé: C; 50,42, H; 5,80, N; 5,36 Spectrographie de masse m/Z 757 (M+), 742 (M+ 15),

714 (M+ -43), 698 (M -59)

-9- IR v KBr 1735, 1680 et 1535 cm max RMI-H (CDC13) dH (TMS) 1,37 (s, 3H) , 1,56 (s, 3H), 1,88 (s, 3H) 1,99 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 2,05 (s, 3H) 2, 12 (s, 3H), 2,46 (dd, 1H, J 4,8 et 12,9 Hz), 3,82 (s, 3H), 5,72 (d, 1H, J = 2,1 Hz), ,83 (d, 1H, J = 8,4 Hz) 7,35 (d, 1H, J = 8,4 Hz),

9,83 (large s, 1E).

EXEMPLE 2

Préparation de la 2',3'-isopropylidàne-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-1-

carboxy-D-glycéro-e-D- aacto-octapyranosyl) uridine: A 185 mg de l'isomère A obtenu à l'exemple 1 on ajoute 10 mk d'une solution de soude!N-NaOH et la solution résultante est agitée à température ambiante pendant 2 heures. On ajoute ensuite à la solution 20 m% d'eau et on refroidit avec de la glace, et la valeur du pH de la solution est ajustée à 3,0 à l'aide de Dowex-50 (H+), puis on filtre et on lyophilise. La poudre ainsi obtenue est dissoute dans 20 mE de méthanoi et traitée avec du charbon actif, filtrée, concentrée jusqu'à un volume de 5 miZ, puis on ajoute de l'acétate d'éthyle pour obtenir une poudre incolore et séchée sur pentoxyde

de phosphore pour obtenir le produit indiqué avec un rendement de 82%.

Propriétés:siques &725 -12 (c = 1, méthanol) Analyse: C23H33014N3; Calculé: C; 48,00, H; 5,78, N; 7,30 Trouvé: C; 47,91, H; 5,84, N; 7,25 UV X meo nm (log E); 260 (3,96) max film -1 IR Vflm 1660, 1530 cm1 max

RMN-H D2 0 CSH (DSS)

1,40 (s, 3H), 1,58 (s, 3H), 1,70 (dd, 1H, J = 12,8 et 11,5 Hz), 2,03 (s, 3H), 2,43 (dd, 1H, J = 12,8 et 3,8 Hz), 5,82 (large s, 1H), 5,85 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,72 (d, 1H,

J = 8,1 Hz).

EXEMPLE 3

Préparation de la 5-fluoro-2',3'-sopropylidène-5-o-(4-N-acétyl-2,4-

didéoy-3,6,7,8-tétra-o-acétyl-l-méthoxycarbonyl-D-glycéro-a-D-galacto-

octapy>ranoy uridine

Dans 50 mi d'acétonitrile, on met en suspension 500 mg de 5-fluoro-

-10- 2',3'-isopropylidèneuridine, 300 mg de cyanate mercurique, 600 mg de bromure mercurique et 1 g de tamis moléculaire (4A). On fait réagir la suspension avec 1,2 g du composé (II) (le même composé que celui utilisé à l'exemple 1), puis on agite à température ambiante pendant 16 heures; on ajoute ensuite une quantité supplémentaire de 510 mg du composé (II), 150 mg de cyanate

mercurique et 300 mg de bromure mercurique puis on agite pendant 24 heures.

Le liquide réactionnel est filtré, et le filtrat est soumis à une distil-

lation à 40 C sous pression réduite pour éliminer le solvant, après quoi on obtient un produit huileux. On ajoute 100 mZ d'eau au produit huileux, on élimine les produits insolubles puis l'on traite à l'éther pour éliminer les substances solubles dans l'éther. La solution aqueuse est ensuite saturée avec du chlorure de potassium, puis soumise à une extraction à l'acétate d'éthyle. La solution résultante dans l'acétate d'éthyle est séchée à l'aide de sel de Glauber et le solvant est éliminé par distillation pour obtenir 1,5

g d'un autre produit huileux.

Ce dernier produit huileux est soumis à un isolement par chromato-

graphie sur colonne en utilisant une colonne remplie de gel de silice (200 g, Merk, Silica Gel 60, 70 à 230 meshes ASTM, correspondant environ à 60-200 micromètres) et en utilisant un mélange CHO13/méthanol (30:1), grace à quoi

on forme un mélange du produit mentionné ci-dessus, et d'un isomère de celui-

ci. La fraction résultante est concentrée et séchée pour obtenir 580 mg de

produit brut.

Le produit brut est soumis à une chromatographie sur colonne de gel de silice (Merk, Lobar, taille C, Lichroprep Si 60) en utilisant un mélange CHCl3/méthanol (60:1) comme éluant que l'on fait passer à travers la colonne avec un débit de 10 mU/minute. Le produit du titre est isolé à l'aide d'un détecteur pour recueillir la fraction d'UV (290 nm), puis est purifié pour obtenir 300 mg du composé du titre. Rendement: 23%. En même temps, 210 mg

(rendement: 16%) d'un isomère sont obtenus. Cet isomère est le 5-fluoro-

2',3'-isopropylidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-3,6,7,8-tétra-o-acétyl1-

méthoxycarbonyl-D-glycéro-a-D-galacto-octapyranosyl) uridine. Le rendement en

isomère pur est de 85 mg (rendement: 11%).

Propriétés physiques: _725 + 11,0 (C = 1, méthanol) Analyse: C32H42018N3; Calculé: C; 49,55, H; 5,42, N; 5,45 Trouvé: C; 49,34, H; 5,65, N; 5,22 Spectrographie de masse m/Z 775 (M+), 760 (M+ -15),

732 (M -43), 716 (M -59)

-n-- 2560881 KBr -1 IR v KBr 1735, 1680, 1530 cm1 max

RMN-1H (CDC13) 6H (TMS)

1,37 (s, 3H), 1,56 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,99 (s, 6H), 2,02 (s, 3H), 2, 13 (s, 3H), 2,50 (dd, 1H, J = 14 et 3,5 Hz), 3,77 (s, 3H), ,54 (large s, 11), 7,44 (dd, 1H, J = 8 Hz).

EXEMPLE 4

Préparation de la 5-fluoro-2',3'-isopropylidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-

didéoxy-l-carboxy-D-glycéro-B-D-galacto-octapyranosyl) uridine En utilisant le composé obtenu à l'exemple 3, le produit du titre est obtenu avec un rendement de 80% en opérant selon les procédés décrits à

l'exemple 2.

Propriétés physiques: 725 -9,2 (C = 1, méthanol) Analyse: C23H32143;O Calculé: C; 48,08, H; 5,61, N; 7,31 Trouvé: C; 48,05, H; 5,48, N; 7,42 KBr -1 IR v 3400, 1688, 1580 cm max

RMN-H (D2 0) 6H (DSS)

1,40 (s, 3H), 1,58 (s, 3H), 1,74 (t, 1H, J = 14 Hz), 2,04 (s, 3H), 2,48 (dd, 1H, J = 14 et 3,5 Hz), ,86 (large s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 8 Hz).

EXEMPLE 5

Préparation de la 2',3'-iso rop.lidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-1-

méthoxycarbonyl-D-glycéro--D-galacto-octapyranosyl) uridine

On dissout 500 mg de 2',3'-isopropylidène-5'-o-(4-N-acétyl-2,4-

didéoxy-3,6,7,8-tétra-o-acétyl-1-méthoxycarbonyl-D-glycéro-e-D-galacto-

octapyranosyl) uridine, soit 0,66 millimole dans 10 mZ de méthanol et on ajoute 10 mZ d'une solution méthanolique contenant 100 mg (4,35 millimoles) de sodium métallique, tout en maintenant sur un bain de glace et on agite le mélange pendant 20 minutes. La solution mélangée est neutralisée en utilisant 1 g de Dowex 50-X8 (H), et la solution neutralisée est filtrée, concentrée, séchée jusqu'à prise en masse. La masse solidifiée est dissoute dans une petite quantité d'eau, lyophilisée puis séchée sous vide pour obtenir 350 mg d'un solide incolore et amorphe (rendement: 90%). On soumet 200 mg du solide amorphe à une chromatographie sur gel de silice et on fractionne à l'aide du mélange chloroforme/méthanol (10:1) pour obtenir 150 mg (rendement: 75%) du

produit du titre sous la forme d'un produit amorphe.

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Propriétés physiques: Point de décomposition: 165 C -/D - 3,4 (C = 1, méthanol) Analyse: C24H350l4N3 3H20; Calculé: C; 44,79, H; 6,42, N; 6,53 Trouvé: C; 45,23, H; 5,51, N; 6,38 IR v KBr 1730 cm-1 (COO Me) max RMN-1H PP400MHz (D2 O, TSP) 1,413 (s, 3H), 1,605 (s, 3H),

2,061 (s, 31H), 3,807 (s, 3H).

EXEMPLE 6

Préparation de la 5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-1-mdthoxycarbonyl-Dglycéro-

e-D-galacto-octapyranosyl) uridine On agite pendant 2.heures à température ambiante 2 mL d'une solution dans l'acide trifluoroacétique à 90% de 150 mg (0,273 millimole) du composé obtenu à l'exemple 5. Apres la fin de la réaction, on élimine le

solvant par distillation et on ajoute une petite quantité d'eau. La solu-

tion est ensuite lyophilisée et séchée sous vide pour obtenir 150 mg d'une masse amorphe incolore qui est soumise à une chromatographie sur gel de silice et qui est fractionnée par un mélange chloroforme:méthanol (20:1), et l'on obtient 120 mg (rendement: 80%) du produit du titre sous la forme

d'une masse amorphe incolore.

Les propriétés physiques des produits sont indiquées ci-dessous: Point de décomposition: 158 C

--20

a/D: 4,1 (C = 1, méthanol) Analyse: C21H31N3014.2H2; Calculé: C; 43,08, H; 6,07, N; 7,18 Trouvé: C; 42,72, H; 5,26, N; 7,03 RMN-H ppm (D O TS 400 MHz (D2 TSP) 1,83 (1H, 3-Hax), 2,06 (3H, -NHAc)

2,49 (1H, 3 - Heq), 3,86 (3H, COOMe).

EXEMPLE 7

Préparation de la 5'-o-(4-N-acétyl-2,4-didéoxy-3,6,7,8-tétra-o-acétyl-

1-méthoxycarbonyl-D-glycéro-e-D-galacto-octapyranosyl) uridine On agite pendant 2 heures à température ambiante 1,5 mZ d'une solution aqueuse à 90% d'acide trifluoroacétique contenant 50 mg (0,07 millimole) du composé produit à l'exemple 1. On élimine le solvant par distillation après la fin de la réaction et on ajoute une petite quantité d'eau pour obtenir une solution qui est soumise à un traitement séquentiel

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de lyophilisation et de séchage sous vide, grâce à quoi on obtient 50 mg du composé du titre sous la forme d'une masse amorphe incolore. Les propriétés physiques du produit sont les suivantes: Point de décomposition: 133 C KBr -1 IR V r 1735, 1680 cm max RMNE-E- (D2 O) 5H (DSS) 2,62 (1H, 3Heq),

3,85 (3H11, C00e).

EXEM1PLE DE REFERENCE

Cet exemple de référence montre les propriétés des produits de l'invention en ce qui concerne l'inhibition de la métastase des cellules cancéreuses. Protocole du test: Les cellules cancéreuses utilisées dans le test sont les cellules a haut pouvoir de métastase NL-17 et les cellules à faible pouvoir de métastase NL-44 provenant toutes deux d'un clone d'anénocarcinome 26 de souris Balb/c. Les détails sur ces cellules peuvent être obtenus en faisant

référence à Takashi Tsuruo et al., Cancer. Res., 43, 5437 (1983).

Chacune des cellules cancéreuses est cultivée dans un incubateur à dioxyde de carbone pendant 24 heures en présence de 0,1 mM du composé obtenu a l'exemple 3 (appelé ci-après composé /17). Des souris de la même famille sont traitées avec 5 s 104 cellules cancéreuses dans leurs veines de la queue et en même temps on administre aux souris 0,25 mg ou 0,5 mg du composé (I). Apres cela, on administre 0,25 mg ou 0,5 mg du composé (1) par voie intraveineuse deux fois par semaine. Après 22 jours à compter de l'inoculation des cellules cancéreuses, les souris sont sacrifiées et leurs poumons sont prélevés. Les poumons ainsi prélevés sont pesés et le nombre

de tubérosités formées sont déterminées.

Les résultats sont rassemblés dans le tableau qui suit. Comme indiqué dans le tableau, les facteurs de métastase pour les métastases des poumons des cellules NL-17 et NL-44 sont inhibés de façon significative par

le pré-traitement et le post-traitement avec le composé (I) de l'invention.

On a également trouvé que les effets d'inhibition dépendent des quantités

de produit administré.

T A B L E A U

Propriété du Composé (I) dans les expériences de métastase avec les cellules NL-17 et NL-44 Cellule Traitement Nombre de Poids des poumons Nombre de métastases cancéreuse souris (mg) Grande Petite Totale

_- 4 198 + 12 0 0 0

- - 4 407 + 95 52 + 16 28 + 7 80 + 22

NL-17 Composé,17a 4 318 + 65 18 + 7* 14 + 3* 32 + 9*

- 3 279 + 18 19 + 2 32 + 4 51 + 2

NL-44 Composé /17a 3 228 + l0s 16 + 5 25 + 4 40 + 7

4 190 + 16 0 0 0

- 4 370 + 26 57 + 13 31 + 14 88 + 23

NL-17 Composé /7 4 243 + 44 *** 13 + 7** 13 + 8 26 + 14**

- 4 216 + 12 19 + 4 21 + 5 40 + 3

NL-44 Composé l7b 4 194 + 9 * 5 + 2 14 + 3 * 20 + 4

Les cellules cancéreuses sont traitées avant inoculation avec 0,1 mM du composé pendant 24 heures.

Apres inoculation, les souris sont traitées par voie intraveineuse avec 0, 25a ou 0,5b mg/souris/3 jours.

i: P < 0,: P <0,5,: P < 0,01

Les groupes traités se distinguent de façon significative des groupes non traités.

Co _.

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Claims

REVENDiCATIONS

1L Un dérivé d'acide N-acétylneuraminique représenté par la formule générale cN RO AcNH OR1 OR:z OR' R3

O

OR1 dans laquelle les groupements R1 représentent indépendamment, hydrogène ou

acétyle; R2 est un reste de nucléoside; R3 est un carboxyle ou un méthoxy-

carbonyle.
2. Le dérivé de la revendication 1, dans lequel Rest acétyle,.

R2 est un reste 2',3'-isopropylidèneuridine et R3 est un mêthoxycarbonyle.
3. Le dérivé de la revendication 1, dans lequel R1 est hydrogène,

R2 est la 2',3'-isopropylidèneuridine et R3 est méthoxycarbonyle.
4. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est hydrogène,

Rlest l'uridine et R est carboxyle.
5. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est hydrogène,

R2 est 5-fluoro-2',3'-isopropylidèneuridine et R 3est méthoxycarbonyle.
6. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est acétyle,

R2 est 5-fluoro-2',3'-isopropylidèneuridine et R3 est méthoxycarbonyle.
7. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est hydrogène,

R2 est 5-fluorouridine et R3 est méthoxycarbonyle.
8. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est hydrogène,

R2 est 5-fluorouridine et R3 est carboxyle.
9. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R est hydrogène,

R2 est uridine et R3 est mithoxycarbonyle.
10. Dérivé selon la revendication 1, dans lequel R1 est acétyle,

R2 est uridine et R3 est mithoxycarbonyle.
11. Un procédé de préparation d'un dérivé d'acide N-acétylneurami-

nique représentd par la formule AcN OR' OI R / OR' OR' OR1 -16- dans laquelle les groupes R représentent, indépendamment, hydrogène ou

acétyle; R2 est un-reste de nucléoside; et R est un carboxyle ou métho-

xycarbonyle; comprenant l'étape consistant à faire réagir un composé de formule: AcNH * CO OAc I OAc 510 - OMe OAc avec un composé de formule R2H (III), dans laquelle R2 est un reste de nucléoside, en présence d'un catalyseur; et l'étape d'isolement et de purification consistant à isoler et à purifier le produit réactionnel de l'étape précédente par double chromatographie après un stade facultatif

d'hydrolyse du produit réactionnel.
12. Procédé selon la revendication 11, dans lequel l'étape d'isolement et de purification est l'une des possibilités de double chromatographie choisies dans le groupe constitué par: chromatographie d' adsorption/chromatographie d' adsorption; chromatographie d'adsorption/chromatographie de partage; chromatographie de partage/chromatographie d'adsorption;

et chromatographie de partage/chromatographie de partage.
13. Procédé selon la revendication 11, dans lequel ledit composé représenté par la formule (III) est un composé de formule générale: EN- N

HO

Me Me -17-

dans laquelle R est hydrogène ou fluor, et Me est méthyle.
14. Utilisation d'un dérivé de formule (I) tel que défini dans

l'une quelconque des revendications i à 10, dans la préparation industrielle

d'un médicament inhibiteur de la métastase des cellules cancéreuses.
15. Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle renferme comme ingrédient actif au moins un dérivé de formule (I) tel que

défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 10.