DE3508356A1

DE3508356A1 - Sialinsaeure-derivate und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE3508356A1
Application number: DE19853508356
Authority: DE
Inventors: Kimio Furuhata; Masayoshi Kunitachi Tokio/Tokyo Ito; Haruo Matsudo Chiba Ogura; Toshiaki Osawa; Yoshiyasu Musashino Tokio/Tokyo Shitori; Satoshi Tokio/Tokyo Toyoshima; Shoji Iruma Saitama Yoshimura
Original assignee: KANTO ISHI PHARMACEUTICAL CO Ltd; KANTO ISHI PHARMA CO Ltd; Kanto Ishi Pharmaceutical Co Ltd Tokio/tokyo
Current assignee: Mect Corp
Priority date: 1984-03-09
Filing date: 1985-03-08
Publication date: 1985-09-12
Also published as: DE3508356C2; FR2560881A1; GB2158433A; CA1257257A; GB2158433B; GB8506244D0; JPS637556B2; HK27689A; US4691012A; FR2560881B1; JPS60190791A

Description

Gegenstand der Erfindung sind neue N-Acetylneuraminsäure-Derivate, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Die neuen N-Acetylneuraminsäure-Derivate der Erfindung sind wertvolle Arzneistoffe, die die Metastasierung von Krebszellen inhibieren.

N-Acetylneuraminsäuren, die auch als "Sialinsäure" bezeichnet wird, besetzt die Glycid-Enden von zusammengesetzten GIuciden, wie Glycolipiden und Glycoproteinen, die sich auf den Zelloberflächen befinden und wichtige Wirkungen auf die Differenzierung, Reifung, Funktionen und intrazellulären Wirkungen organischer Zellen ausüben. Es wurde bereits eine Vielzahl von N-Acetylneuraminsäure-Derivaten hergestellt und auf ihre Wirkung untersucht. Einschlägige Veröffentlichungen hierüber sind z.B.

R. Kuhn, P. Lutz und D.L. MacDonald, Chem Ber.,

Bd. 99 (1966) , S. 611-617
"Synthese anomerer Sialinsäure-methylketoside"

P. Meindl und H. Tuppy, Mh. Chem., Bd. 100

(1969), s. 1295-1306
»über 2-Deoxy-2,3-dehydro-sialinsauren, I. Mitt.:

Synthese und Eigenschaften von 2-Deoxy-2,3~ 30

dehydro-N-acylneuraminsäuren und deren

Methylestern "

- R. Brossmer, H. Friebolin, G. Keilich, B. Löser und M. Supp

Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem., Bd. 359(1978) S.1064 " Synthesis of Disaccharides Containing N-Acetyl-D-neuraminic Acid "
M. N. Sharma und R. Eby, Carbohydr. Res., Bd.

127 (1984)/ S. 201-210
10

" Synthesis and Conformational Studies of 2-ß-Chloro, 2-&. Fluoro, and 2-ß-Fluoro-Derivatives of 2-Deoxy-N-acetylneuraminic acid"

- L. Holmquist and R. Brossmer, Hoppe-Seyler's Z.

Physiol, Chem., Bd. 353 (1972) , S. 1346-1350

" Synthesis and Properties of the 2-Aminoethyl <*-

and the 2-Pyridyl a-and ß-Ketosides of N-Acetyl-D-neuraminic Acid "

L. Holmquist and R. Brossmer, FEBS Letters, Bd. (1972) , S. 46-48

ON THE SPECIFICITY OF NEURAMINIDASE "
25

The carboxymethyl a-ketoside of N-acetyl-D-

neuraminic acid, a Vibrio cholerae neuraminidase substrate having two anionic sites

- T. Ogawa and M. Sugimoto, Carbohydr. Res., Bd. 128.

(1984), ci - C4
»Synthesis of «- and β -(2 ->■ 9) -linked

disialylglycerolipids "
35

H. Paulsen und H. Tietz

Carbohydr. Res., Bd. 125 (1984), g. 47-64 "Synthese eines T.risaccharides aus N-acetyl neuraminsaure und N-acetyllactosamin "

N-Acetylneuraminsäure-Derivate mit einem über eine α-Bindung an die N-Acetylneuraminsäure gebundenen Nucleosid- oder Glukoserest besitzen hervorragende physiologische Wirkungen; vgl. US-A-4,447,600.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue N-Acetylneuraminsäure-Derivate mit physiologischer Wirksamkeit herzustellen. Diese Aufgabe wird durch den überraschenden Befund gelöst, daß N-Acetylneuraminsäure-Derivate, bei denen ein Nucleosidrest über eine ß-Bindung an die N-Acetylneuraminsäure gebunden ist, hervorragende pharmazeutische Wirksamkeit im Hinblick auf die Inhibierung der Metastasenbildung

20 von Krebszellen besitzen.

Gegenstand der Erfindung sind somit N-Acetylneuraminsäure-Derivate der allgemeinen Formel I

25 AcNH

(D

OR¹ 30

Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung der N-Acetylneuraminsäure-Derivate der vorstehenden allgemeinen Formel I, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel II

C - OMe ^(II)

OAc

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III

R²-H (III)

2
in der R einen Nucleosidrest darstellt, in Gegenwart eines

Katalysators umsetzt, das erhaltene Reaktionsprodukt gegebenenfalls hydrolysiert und anschließend mit Hilfe eines zweifachen Chromatographieverfahrens aus dem Reaktionsgemisch
gewinnt.

Schließlich ist auch die Verwendung der N-Acetylneuraminsäure-Derivate der vorstehenden allgemeinen Formel I zur
„₀ Behandlung von Krebserkrankungen, insbesondere zur Inhibierung der Metastasenbildung, Gegenstand der Erfindung.

Der Begriff "Nucleosidrest" bezeichnet eine über eine Glykosidbindung an eine Purin- oder Pyrimidinbase gebundene Ribose. Die Ribose und die entsprechenden Basen im vorstehend

definierten "Nucleosidrest" können Substituenten tragen oder einen ankondensierten Ring aufweisen. Beispiele für derartige Nucleosidreste sind Reste der folgenden Formeln:

^erv>

5- ₉N-Jl4 J .₂

-o-c » ^_n ■ /°\ ³

4¹C Cl¹

V, __Λ· - C_ C I

3' 2 Ή

L J

Bevorzugte Beispiele für Nucleosidreste sind Reste mit folgenden Formeln:

— ο

AcO OAc

Eine Anzahl verschiedener Beispiele für die Reste der vorstehend angegebenen Formeln sind in den nachstehenden Beispielen erläutert.

Die Verbindungen der Erfindung können beispielsweise nach dem in folgender Reaktionsgleichung dargestellten Verfahren hergestellt, und danach durch doppelte Chromatographieverfahren, die im einzelnen nachstehend beschrieben werden, gewonnen und gereinigt werden. In der folgenden Reaktionsgleichung ist die durch die Formel III wiedergegebene Verbindung bekannt und kann im Verfahren der Erfindung als Zwischenprodukt zur Herstellung verschiedener Verbindungen verwendet werden.

- 10 -

COOMe

OAc

.0

(H or F)

ο ο

(W

AcN:

Koenigs-Knorr Reaction

(H or F)

OAc

(H or F)

AcNH/. OH \ 0-, 0 N_N ■ OH N I

COOH

.0 0

Gemäß vorstehendem Reaktionsschema werden die Verbindungen der Formeln II und III miteinander unter Reaktionsbedingungen umgesetzt, wie sie bei der Koenigs-Knorr-Reaktion angewendet werden. Beispielsweise läßt man die Reaktionsteilnehmer miteinander in Gegenwart eines Katalysators bei Atmosphärendruck und bei einer Temperatur von etwa 20 bis 25 C etwa 36 bis 48 Stunden miteinander reagieren.

Zur Erhöhung der Ausbeute an ß-Derivat ist die Verwendung der Verbindung II in einem Verhältnis von mindestens etwa 1,2 Mol pro Mol Verbindung III bevorzugt. Zum gleichen Zweck ist auch die absatzweise Zugabe von frischer Verbindung II und Katalysator, beispielsweise nach etwa 12 bis 24 Stunden nach Beginn der Umsetzung günstig. Dabei sollen jedoch die Mengen der Ausgangsverbindungen und des Katalysators in einem vernünftigen Bereich bleiben, wenn das nachstehend erläuterte absatzweise Beschickungsverfahren angewendet wird.

Von den üblicherweise bei der Koenigs-Knorr-Reaktion verwendeten Katalysatoren eignen sich im Verfahren der Erfindung Quecksilber(II)-bromid, Quecksilber(II)-cyanat oder Silberperchlorat. Im Hinblick auf Ausbeute und Selektivität sind Quecksilber(II)-bromid und -(II)-cyanat am meisten bevorzugt. Der Katalysator wird in einer Menge von etwa 1 bis 4 Äquivalenten zur Verbindung (II) verwendet.

Geeignete Lösungsmittel sind Acetonitril, Nitromethan, Aceton und Methylenchlorid, wobei Aceton und Acetonitril bevorzugt sind.

Das bei der Umsetzung erhaltene Reaktionsprodukt wird durch ein doppeltes Chromatographieverfahren gewonnen und gereinigt.

Der Begriff "doppeltes Chromatographieverfahren" bezeichnet ein Verfahren, bei dem die Reinigung durch eine Kombination von mindestens zwei Absorptionschromatographie- und/oder Verteilungschromatographiestufen erfolgt, die unter verschiedenen Bedingungen durchgeführt werden. Bei der Herstellung der N-Acetylneuraminsäure-Derivate, die den Nucleosidrest über eine α-Bindung gebunden enthalten, gemäß US-A-4,447,600 konnten keine N-Acetylneuraminsäure-Derivate mit ß-gebundenem Nucleosidrest erhalten werden. Dagegen werden im Verfahren der Erfindung N-Acetylneuraminsäure-Derivate mit ß-gebundenem Nucleosidrest zusätzlich zu den α-Derivaten gewonnen und im gereinigten Zustand erhalten, wenn eines

der doppelten Chromatographieverfahren angewendet wird.

Beispiele für geeignete Kombinationen verschiedener chromatographischer Verfahren, die erfindungsgemäß zur Anwendung kommen können, umfassen:

Adsorptionschromatographie/ Adsorptionschromatographie, Adsorptionschromatographie/ Verteilungschromatographie, Verteilungschromatographie/ Adsorptionschromatographie, Verteilungschromatographie/ Verteilungschromatographie. Im Hinblick auf die Verbesserung der Abtrennung ist die Kombination von Verteilungschromatographie und Adsorptionschromatographie am stärksten bevorzugt.

Als Füllstoffe für die Säule zur Adsorptionschromatographie eignen sich z.B. Kieselgel und Aluminiumoxid, wobei Kieselgel bevorzugt ist. Zur Entwicklung der Säule können beispielsweise Chloroform, Methanol, Essigsäureäthylester, Äthanol, Benzol, Aceton oder Toluol verwendet werden. Auch als Füllstoffe für eine Säule zur Verteilungschromatographie eignen sich z.B. Kieselgel und Aluminiumoxid, wobei wiederum Kieselgel bevorzugt ist. Zur Verteilungschromatographie können ähnliche Entwickler wie für die Adsorptionschromatographie verwendet werden.

Einzelheiten zu den Verfahrensbedingungen der doppelten Chromatographie ergeben sich aus den nachstehenden Beispielen.

Die Verbindungen der Erfindung besitzen hervorragende pharmazeutische Wirksamkeit bei der Inhibierung der Metastasenbildung von Krebszellen. Diese Wirksamkeit wurde durch den im nachstehenden Bezugsbeispiel wiedergegebenen Test aufgezeigt.

35 Die Beispiele erläutern die Erfindung.

^L J

1 Beispiel 1

Herstellung von 2',3'-Isopropyliden-5'-ο-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-3,6 , 7,8,-tetra-o-acetyl-i-methoxycarbonyl-D-glycero ß-D-galacto-octapyranosy1)-uridin

50 ml Acetonitril werden mit 1 g 2',3'-Isopropylidenuridin, 300 mg Hg(II)-cyanat, 600 mg Hg(II)-bromid und 1 g Molekularsieb (4A) versetzt. Die erhaltene Suspension wird bei Raumtemperatur 30 Minuten gerührt.

1,5 g 2-Chlor-4,7,8,9-tetra-o-acetyl-ß-D-N-acetylneuraminsäuremethylester (nachstehend als Verbindung II bezeichnet) werden mit der vorstehend genannten Suspension 16 Stunden unter Rühren umgesetzt. Dann werden weitere 510 mg Verbindung II, 150 mg Hg(II)-cyanat und 300 mg Rg(II)-bromid zugegeben und das Gemisch weitere 24 Stunden gerührt. Sodann wird das Reaktionsgemisch filtriert und das Lösungsmittel zur Trockene abdestilliert.

Der erhaltene pulverförmige Rückstand wird in 100 ml Wasser gelöst und von unlöslichen Bestandteilen befreit. Die dabei erhaltene Lösung wird zur Entfernung ätherlöslicher Stoffe mit Äther behandelt. Anschließend wird die wäßrige Lösung mit Kaliumchlorid gesättigt und mit Essigsäureäthylester extrahiert. Der Essigsäureäthylesterextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft, wobei 2,3 g Rohprodukt erhalten werden.

Das feste Rohprodukt wird an einer unter Verwendung von Essigsäureäthylester mit Aluminiumoxid gepackten Säule (Merk, Aluminoxid 90, 0,06 bis 0,21 mm) der Säulenchromatographie unterzogen und mit Essigsäureäthylester, einem Gemisch von Essigsäureäthylester und Äthanol (5:1), einem Gemisch von Essigsäureäthylester und Äthanol (3:1) und dann mit Äthanol in dieser Reihenfolge eluiert. Dabei wird ein

Gemisch der Titelverbindung (nachstehend als "ß-Isomer" bezeichnet) und von 2·,3'-Isopropyliden-5'-o-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-3,6,7,8-tetra-o-acetyl-1-methoxycarbonyl-D-glyceroa-D-galacto-octapyranosyl)-uridin (nachstehend als "α-Isomer"

5 bezeichnet) erhalten.

1,9 g des Gemisches werden erneut durch 100 g Aluminiumoxid säulenchromatographisch gereinigt, wobei ein Gemisch von Essigsäureäthylester und Äthanol (6 : 1) zur Eluierung verv/endet wird. Dabei werden 120 mg des ß-Isomers (Ausbeute: 4,5 %) und 300 mg des a-Isomers (Ausbeute: 11,2 %) in Form von farblosen Pulvern gewonnen. Die restliche Menge wird als Gemisch der a.- und ß-Isomeren eluiert.

Bei der Gewinnung durch Säulenchromatographie wird in einer anderen Ausführungsform die vorstehend genannte Aluminiumoxidsäule durch eine mit Kieselgel gefüllte Säule ersetzt (Merk, Lober, vorgepackte Säule, Größe B (310-25) Lichroprep Si 60 (40 bis 63 um)). Dabei werden 830 mg ß-Isomer (Ausbeute: 31,1 %)und 210 mg α-Isomer (Ausbeute: 7,9 %) gewonnen. In dieser Ausführungsform wird Chloroform/Methanol (60 : 1) mit einer Fließgeschwindigkeit von 5 ml/min zur Eluierung verwendet.

²⁵ Physikalische Eigenschaften des ß-Isomer:

" + 3.4° (C = I₁ in Methanol)

Analyse-: ^<-32^Η43θΐ8^Ν3/ Molekulargewicht

30 757.70

Ber ·: C; 50.73, H; 5.72, N; 5.55 Gef : C; 50.42, H; 5.80, N; 5.36 Massenspektrogramm m/Z 757(M⁺), 742(M⁺ -15), ³⁵ 714(M⁺ -43), 698(M⁺ -59)

L J

¹ IR y^KBr 1735, 1680 und 1535 cnfl

IucliC

¹H-NMR (CDCl₃) 3H (TMS)

1.37 (S, 3H), 1.56 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), ⁵ 1.99 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 2.05 (s, 3H),

2.12 (s, 3H), 2.46 (dd, IH, J = 4.8 and 12.9 Hz),

3.82 (s, 3H), 5.72 (d, IH, J = 2.1 Hz),

5.83 (d,lH, J = 8.4 Hz), 7.35 (d, IH, J = 8.4 Hz), 10

9.83 (breit s, IH)

Beispiel 2 15

Herstellung von 2',3'-Isopropyliden-5'-o-(4-N-acetyl-2,4-dideoxyl-1-carboxyl-D-glycero-ß-D-galacto-octapyranosyl)-uridin

185 mg des in Beispiel 1 erhaltenen ß-Isomers werden mit. 10 ml 1 N Natronlauge versetzt. Die erhaltene Lösung wird bei Raumtemperatur 2 Stunden gerührt. Dann wird die Lösung mit 20 ml Wasser versetzt und im Eis gekühlt. Der pH-Wert der Lösung wird mit Dowex-50 (H⁺) auf 3,0 eingestellt. Dann wird die Lösung filtriert und gefriergetrocknet. Das dabei erhaltene Pulver wird in 20 ml Methanol gelöst, mit Aktivkohle behandelt, filtriert, auf ein Volumen von 5 ml eingeengt und mit Essigsäureäthylester versetzt, wobei ein farbloses Pulver erhalten wird, das über Phosphorpentoxid getrocknet wird. Es wird, die Titelverbindung in einer Ausbeute von 82 % erhalten.

Physikalische Eigenschaften:

35 [α] 25 _₁₂o (C = 1, in Methanol)

Analyse: C23H33O14N3;

Ber .: C; 48.00, H; 5.78, N; 7.30 Gef. ! C; 47.91, H; 5.84, N; 7.25 UV A^Mf;°**nm (log e); 260 (3.96)

^IR "^"1660, 1530 cm-1

¹H-NMR D₂ 0 SE (DSS) 1.40 (s, 3H), 1.58 (s, 3H), ₁₀ 1.70 (dd, IH, J = 12.8 und 11.5 H₂),

2.03 (s, 3H), 2.43 (dd, IH, J = 12.8 und 3.8 Hz), 5.82 (breit s, IH), 5.85 (d, IH, J = 8.1 Hz), 7.72 (d, IH, J = 8.1 Hz)

Beispiel 3

Herstellung von 5-Fluor-2',3'-isopropyliden-5-o-(4-N-acetyl-

2,4-dideoxy-3 ,6,1, 8-tetra-o-acetyl-i-methoxycarbonyl-D-glycero-ß-D-galacto-octapyranosyl)-uridin

In 50 ml Acetonitril werden 500 mg 5-Fluor-2',3'-isopropylidenuridin, 300 mg Hg(II)-cyanat, 600 mg Hg(II)-bromid und 1 g Molekularsieb (4A) suspendiert. Die Suspension wird mit 1,2 g Verbindung II (die in Beispiel 1 verwendete Verbindung) 16 Stunden unter Rühren umgesetzt. Dann werden weitere 510 mg Verbindung II, 150 mg Hg(II)-cyanat und 300 mg Hg(II)-bromid zugegeben und weitere 24 Stunden gerührt. Anschließend wird das Reaktionsgemisch filtriert, und das Filtrat unter vermindertem Druck bei 40 C zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft. Es wird ein öliger Rückstand erhalten, der mit 100 ml Wasser versetzt wird. Unlösliche Bestandteile werden entfernt. Hierauf wird die Lösung zur Entfernung von ätherlöslichen Stoffen mit Äther behandelt. Die wäßrige Lösung wird mit Kaliumchlorid gesättigt und mit Essigsäureäthylester extrahiert. Der erhaltene Essig-

L J

säureäthylesterextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel abdestilliert. Es verbleiben 1,5 g öliges Produkt.

Das erhaltene öl wird säulenchromatographisch an einer Kieselgelsäule gereinigt (200 g, Merk, Kieselgel 60, 0,06 bis 0,21 mm). Zur Eluierung wird Chloroform/Methanol (30 : 1) verwendet. Es wird ein Gemisch der Titelverbindung und eines Isomeren davon erhalten. Die erhaltene Fraktion wird eingedampft und getrocknet. Ausbeute: 580 mg Rohprodukt.

Das Rohprodukt wird erneut an Kieselgel säulenchromatographisch gereinigt (Merk, Lobar, Größe C, Lichroprep Si 60). Chloroform/Methanol (60:1) wird als Laufmittel mit einer Fließgeschwindigkeit von 10 ml/min durch die Säule geführt. Die Titelverbindung wird mit Hilfe eines Detektors zur Aufnahme der Fraktion mit UV (29 0 nm) isoliert und anschließend gereinigt. Ausbeute: 300 mg (23 %) der Titelverbindung. Gleichzeitig werden 210 mg (Ausbeute: 16 %) des isomeren 5-Fluor-2',3'-isopropyliden-5'-o-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-3,6,7,8-tetra-o-acetyl-i-methoxycarbonyl-D-Glycero-a-D-galacto-octapyranosyl)-uridin erhalten. Die Ausbeute an reinem Isomer beträgt 85 mg (11 %).

Physikalische Eigenschaften der Titelverbindung:

Ca] I⁵ + 11.OO (C = 1, in Methanol)

Analyse: C₃₂H₄₂O₁₈N₃F;

³⁰ Ber ·: C; 49.55, H; 5.42, N; 5.45

Gef. : C; 49.34, H; 5.65, N; 5.22 Massenspektrogranin m/Z 775 (M⁺), 760(M⁺ -15),

732(M⁺ -43), 716(M⁺ -59) 35 ira _r

^{IR V}max ¹⁷³⁵' ¹⁶⁸⁰' ¹⁵³⁰ cm"¹ ¹IH-NMR (CDCl₃) JH (TMS)

L J

1.37 (S, 3H), 1.56 (s, 3H), 1.87 (s, 3H)

1.99 (s, 6H), 2.02 (s, 3H), 2.13 (s, 3H),

2.50 (dd, IH, J = 14 und 3.5 Hz), 3.77 (s, 3H),

5.54 (breit s, IH), 7.44 (dd, IH, J = 8 Hz)

Beispiel 4

Herstellung von 5-Fluor-2',3'-isopropyliden-5'-ο-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-1-carboxyl-D-glycero-ß-D-galactooctapyranosyl)-uridin

Unter Verwendung der in Beispiel 3 hergestellten Verbindung 15 wird bei Anwendung des Verfahrens von Beispiel 2 die Titelverbindung in einer Ausbeute von 80 % erhalten.

Physikalische Eigenschaften:

C«1q⁵ - 9.2° (C = 1, in Methanol)

Analyse ,: C23H32O14N3F; Ber.: , C; 48.08, H; 5.61, N; 7.31 Qef·! C; 48.05, H; 5.48, N; 7.42 iRV^KBr 3400, 1688, 1580 cm"*

max

¹H-NMR (D₂ O) ίΗ (DSS)

1.40 (s, 3H), 1.58 (s, 3H), 1.74 (t, IH, J = 14 Hz)

2.04 (s, 3H), 2.48 (dd, IH, J = 14 und 3.5 Hz),

5.86 (breit s, IH), 7.95 (d, IH, J = 8 Hz)

L J

Beispiel5

Herstellung von 2',3'-Isopropyliden-5'-ο-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-1-methoxycarbonyl-D-glycero-ß-D-galacto-octapyranosyl)-uridin

500 mg (0,66 mMol) 2",3'-Isopropyliden-5'-o-(4-N-acetyl-2,4-dideoxy-3,6,7,8-tetra-o-acetyl-1-methoxycarbonyl-D-Glyceroß-D-galacto-octapyranosyl)-uridin, gelöst in 10 ml Methanol, werden mit 10 ml einer 100 mg (4,35 mMol) metallisches Natrium enthaltenden Methanollösung versetzt, wobei das Gemisch in einem Eisbad 20 Minuten gerührt wird. Die erhaltene Lösung wird mit 1 g Dowex 50-X8 (H ) neutralisiert, anschließend filtriert, eingedampft und durch Trocknen verfestigt. Die verfestigte Masse wird in einer kleinen Menge Wasser gelöst, gefriergetrocknet und dann im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 350 mg (90 %) farbloser amorpher Feststoff. 200 mg des amorphen Feststoffes werden an Kieselgel chromatographiert und unter Verwendung von Chloroform/Methanol (10:1) fraktioniert. Ausbeute: 150 mg (75 %) der Titelverbindung in amorpher Form.

Physikalische Eigenschaften:

Zersetzungspunkt: 16 5 ⁰C

[«] j?° - 3.4° (C = 1, in Methanol)

Analyse : C24H₃5O^4N₃«3H2O; Ber .: C; 44.79, H; 6.42, N; 6.53 Gaf : C; 45.23, H; 5.51, N; 6.38 IR v*^^r 1730 cm-1 (COO Me)
IH-NMR_{400 MHz} (D₂ 0, TSP)

1.413 (S, 3H), 1.605 (s, 3H) ,

2.061 (s, 3H), 3.807 (s, 3H)

Beispiel6

Herstellung von 5'-ο-(4-N-Acetyl-2,4-dideoxy-i-methoxycarbonyl-D-glycero-ß-D-galacto-octapyranosyl)-uridin 5

2 ml einer 90 % Trifluoressigsäurelösung von 150 mg (0,273 mMol) der in Beispiel 5 erhaltenen Verbindung werden 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach vollständiger Umsetzung wird das Lösungsmittel abdestilliert und der Rück-

10 stand mit einer kleinen Menge Wasser versetzt. Die Lösung wird dann gefriergetrocknet und im Vakuum getrocknet. Es werden 150 mg farblose amorphe Masse erhalten, die an Kieselgel säulenchromatographiert und mit Chloroform/Methanol (20 : 1) fraktioniert werden. Ausbeute: 120 mg (80 %) der

Titelverbindung als farblose amorphe Masse.

Physikalische Eigenschaften:

Zersetzungspunkt: 158°C
O] ρ⁰ - 4.1° (C = 1, in Methanol)

Analyse : C₂₁H₃₁N₃O₁₄-2H₂O; Ber .: C; 43.08, H; 6.07, N; 7.18 Gef. : C; 42.72, H; 5.26, N; 7.03

^lH-^NMRfg? MH₂

1.83 (IH, 3-Hax), 2.06 (3H, -NHAc) 2.49 (IH, 3 - Heq), 3.86 (3H, COOMe)

Beispiel 7

Herstellung von 5'-o-(4-N-Acetyl-2,4-dideoxy-3,6,7,8-tetra-oacetyl-1-methoxycarbonyl-D-glycero-ß-D-galacto-octapyranosyl) ³⁵ uridin

1,5 ml einer 90 % wäßrigen Trifluoressigsäurelösung von

L J

] 50 mg (0,07 mMol) der in Beispiel 1 erhaltenen Verbindung wird 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach vollständiger Umsetzung wird das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand mit einer kleinen Menge Wasser versetzt und die erhaltene Lösung gefriergetrocknet und dann im Vakuum getrocknet, wobei 50 mg der Titelverbindung als farblose amorphe Masse erhalten werden.

Physikalische Eigenschaften: ₁₀ Zersetzungspunkt: 133°C

TCR τ*

^IR max ¹⁷³⁵' ^{1680 cnrl}

¹H-NMR (D₂ O) JH (DSS) 2.62 (IH, 3Heq), 3.85 (3H, COOMe) 15

Bezugsbeispiel

Das Bezugsbeispiel zeigt die Wirkung der Verbindungen der Erfindung bei der Inhibierung der Metastasenbildung von Krebszellen.

Testverfahren:

Im Test werden als Krebszellen "high metastasis factor species NL-17" und "low metastasis factor species NL-44" verwendet, die beide vom Clon Anenocarcinoma 26 von der Balb/c Maus stammen. Einzelheiten hierzu finden sich bei Takashi Tsuruo u. Mitarb., Cancer. Res., Bd. 43 (1983),

30 S. 5437.

Die Krebszellen werden in einem Kohlendioxid-Inkubator 24 Stunden in Gegenwart von 0,1 inM der in Beispiel 3 erhaltenen Verbindung inkubiert (nachstehend als Verbindung I bezeichnet). Mäuse der gleichen Familie werden durch ihre

4
Schwanzvene mit 5 χ 10 Krebszellen infiziert. Gleichzeitig

L J

wird den Mäusen 0,25 mg oder 0,5 mg der Verbindung I verabreicht. Danach wird zweimal pro Woche 0,25 mg bzw. 0,5 mg der Verbindung I intravenös gegeben. 22 Tage nach der Überimpfung der Krebszellen werden die Mäuse getötet und ihre Lun gen entkernt. Die entkernten Lungen werden gewogen und die An zahl der entstandenen Tuberosa bestimmt.

Die Ergebnisse sind in nachstehender Tabelle zusammengefaßt. Aus der Tabelle ist zu sehen, daß der Faktor der Metastasenbildung in der Lunge für beide Zellarten NL-17 und NL-44 durch die Vorbehandlung und die Gabe der Verbindung I der Erfindung erheblich inhibiert wird. Die Inhibierung hängt dabei auch von der Dosierung der Verbindung ab.

L J

	Tabelle	4	die Metastasierung von	NL-17 und NL-44	0 0	0	22 9***
Wirkung der Verbindung I	gegen	4 4	Gewicht Lunge I		+16 28+7 + 7 14 + 3	80 + 32 +	2 7
Krebszelle Behandlung Anzahl der Mäuse	3 3	198 ;		+2 32+4 +5 25+4	51 + 40 +
- -	4	407 - 318 ■		0 0	0	23 2^4***
NL-17 Verbindung [I] a	4 4	279 - 228 ]		+13 31 + 14 + 7*** 13 + 8*	88 + 26 +	3 4***
NL-44 Verbindung [i]a	4 4	190 ;	Anzahl der metastasierten Tuberosa groß klein insgesamt	+4 21+5 + 2*** 14 + 3*	40 + 20 +	Die Krebszellen werden vor'der Überimpfung 24 Stunden mit 0,1 mM der Verbindung' behandelt. _a b / / ^ Nach der Überimpfung wird den Mäusen intravenös 0,25 bzw. 0,5 rag/Maus/3 Tage verab reicht : P < 0.1, : P < 0.5, : P < 0.01** ' . .. · Die behandelten Gruppen unterscheiden sich deutlich von den unbehandelten Gruppen.
- -		370 243
NL-17 Verbindung [l]b		216 19 4 ;	52 18
NL-44 Verbindung QQ b	. der mg)	19 16
I 12
l· 95 £ 65	57 13
f 18 Ϊ 10**	19 5
t +6
t 26 ± 44***
+ 12 ₊ 9**

CD CX)

Ul CT)

Claims

VOSSIUS · VOSSIUS · TA UCHN ER - H E- U "N- E M-A N-N RAUH PATENTANWÄLTE 350835S SIEBERTSTRASSE 4 · 8OOO MÜNCHEN 86 · PHONE: (O89) 47 4O 75 CABLE: BENZOLPATENT MÖNCHEN · TELEX 5-29 453 VOPAT D 08. Ha«ζ 1985 5 u.Z.: T 614 (Ra/kä) Case: OP 85019 KANTO ISHI PHARMACEUTICAL CO., LTD. Tokyo, Japan 10 " Sialinsäure-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung " Patentansprüche 15

1. N-Acetylneuraminsäure-Derivate der allgemeinen Formel I

(I)

I / ΛΤ,-* \ I

in der die Reste R unabhängig voneinander Wasserstoff-

2 atome oder Acetylgruppen bedeuten, R einen Nucleosid-

rest darstellt und R eine Carboxyl- oder Methoxycarbony lgruppe ist.
30

2. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R eine Acetylgruppe be-

deutet, R eine 2',3'-Isopropylidenuridingruppe darstellt und R eine Methoxycarbonylgruppe bedeutet. 35

3. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom bedeu-

2
tet, R die 2·,3'-Isopropylidenuridingruppe darstellt

und R die Methoxycarbonylgruppe ist.

4. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom bedeu-

2 3

tet, R die üridingruppe darstellt und R eine Carboxylgruppe bedeutet.

5. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom bedeutet,

2
R die 5-Fluor-2",3'-isopropylidenuridingruppe darstellt

und R eine Methoxycarbonylgruppe bedeutet.

6. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R eine Acetylgruppe bedeutet,

2
R die 5-Fluor-2',3'-isopropylidenuridingruppe darstellt

und R eine Methoxycarbonylgruppe bedeutet.

7. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I₇ in der R ein Wasserstoffatom bedeutet,

2 3

R die 5-Fluoruridingruppe darstellt und R eine Methoxycarbonylgruppe bedeutet.

8. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom bedeutet,

2 3

R die 5-Fluorüridingruppe darstellt und R eine Carboxylgruppe bedeutet.
30

9. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom bedeutet,

2 3

R die üridingruppe darstellt und R eine Methoxycarbonylgruppe bedeutet.
35

10. N-Acetylneuraminsäure-Derivat nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R eine Acetylgruppe bedeu-

2 3

tet, R die üridingruppe darstellt und R eine Methoxy-

carbonylgruppe bedeutet. 5

11. Verfahren zur Herstellung der N-Acetylneuraminsäure-Derivate nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, dadurch gekennzeichnet/ daß man eine Verbindung der allge meinen Formel II
10

AcNH

/\ OAc \ *-*

(ID

OAc

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III

R²-H (III)

in der R einen Nucleosidrest darstellt, in Gegenwart eines Katalysators umsetzt, das erhaltene Reaktionsprodukt gegebenenfalls hydrolysiert und anschließend mit Hilfe eines zweifachen Chromatographieverfahrens aus dem Reaktionsgemisch gewinnt.

12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man als zweifaches Chromatographieverfahren Adsorptionschromatographie/Adsorptionschromatographie,

Adsorptionschromatographie/Verteilungschromatographie, Verteilungschromatographie/Adsorptionschromatographie

oder

Verteilungschromatographie/Verteilungschromatographie

durchführt.

13. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man als Verbindung der allgemeinen Formel III eine Verbindung der allgemeinen Formel einsetzt

Me Me

in der R ein Wasserstoff- oder Fluoratom bedeutet und

Me Methylgruppe ist.

14. N-Acetylneuraminsäure-Derivate nach Anspruch 1 bis 10 zur Verwendung bei der Behandlung von Krebserkrankungen.

15. Verwendung der N-Acetylneuraminsäure-Derivate nach Anspruch 1 bis 10 zur Behandlung von Krebserkrankungen,

2₅ insbesondere zur Inhibierung der Metastasebildung.