FR2510889A1 - Medicament contenant certains phosphates ribofurannosyl-3',5'-cycliques substitues en 6, 8 pour le traitement de maladies proliferatives de la peau - Google Patents

Abstract

L'INVENTION A TRAIT AU DOMAINE DE LA CHIMIE DES MEDICAMENTS. ELLE CONCERNE UN MEDICAMENT NOUVEAU QUI CONTIENT, EN ASSOCIATION AVEC UN SUPPORT TOPIQUE PHARMACEUTIQUEMENT ACCEPTABLE, UNE QUANTITE EFFICACE D'UN 3,5-PHOSPHATE CYCLIQUE DE RIBOFURANNOSYLPURINE SUBSTITUE EN POSITIONS 6 ET 8. APPLICATION AU TRAITEMENT DE MALADIES PROLIFERATIVES DE LA PEAU, PAR EXEMPLE LE PSORIASIS.

Description

10889

La présente invention concerne le traitement

de maladies prolifératives de la peau avec certains phos-

phates ribofurannosylpurine-3 ',5 '-cycliques substitués

en positions 6 et 8.

Le psoriasis est peut-être la maladie proli- férative de la peau la plus répandue Un récent article de revue intitulé "Research Needs in 11 Major Areas in Dermatology", J Invest Derm 73:402-413, 1979, rapporte

des estimations selon lesquelles jusqu'à 4 % de la popula-

tion des Etats-Unis d'Amérique sont atteints de psoriasis.

Le psoriasis est considéré comme une maladie génétique

multifactorielle Des individus qui sont prédisposés géné-

tiquement à la sensibilité au psoriasis contractent la maladie soit spontanément, soit dans une zone d'altération de la peau La maladie est caractérisée par une croissance bénigne anarchique de l épiderme, et l'épiderme psoriasique présente ( 1) une nette accentuation de la prolifération et ( 2) une différentiation terminale réduite En conséquence, les travaux de recherche sur l'étiologie et le traitement du psoriasis ont été en grande partie concentrés sur les

facteurs qui influencent la croissance et là différentia-

tion de l'épiderme et sur la modulation pharmacologique

d'un ou plusieurs de ces facteurs.

Divers types de traitements sont utilisés cou-

ramment pour traiter le psoriasis, comprenant la dialyse, la photochimiothérapie, la chimiothérapie systémique et la chimiothérapie topique Cette dernière est probablement le traitement le plus largement utilisé Le goudron, des résinoldes, l'anthraline, des corticostéroides et des

antimétabolites comptent parmi les agents couramment uti-

lisés pour traiter le psoriasis Le monophosphate d'adéno-

sine cyclique (c AMP) compte parmi les facteurs considérés comme étant des régulateurs déterminants de la physiologie cellulaire et, parallèlement, la perturbation du système c AMP épidermique est associée au psoriasis En conséquence, le c AMP et beaucoup de ces dérivés ont été considérés comme étant des agents antipsoriasiques Sous ce rapport, les brevets des Etats-Unis d'Amérique NI 4 007 268 et N O 4 207 315 proposent l'utilisation de certains phosphates 9-0-D-ribofurannosyladénine-3 ',5 'cycliques pour traiter des

maladies prolifératives de la peau telles que le psoriasis.

Ces composés sont des analogues des nucléotides cycliques qui sont utilisés dans la présente invention Des essais

comparatifs entre certains de ces analogues et les nucléoti-

des utilisés dans la présente invention montrent que ces

derniers ont une activité antipsoriasique inattendue supé-

rieure à celle des analogues qui ont été testés.

Le brevet des Etats-Unis d'Amérique No 4 058 659

décrit un genre de phosphates 9-4-D-ribofurannosylpurine-3 ',51-

cycliques substitués en positions 6, 8 qui comprend quelques-

uns, mais non la totalité des nucléotides cycliques qui sont utilisés dans la présente invention Les composés de ce genre sont des analogues des nucléotides puriques naturels et sont considérés comme étant plus résistants à l'attaque par une phosphodiestérase que ne le sont les composés naturels Ces composés sont décrits comme exerçant, entre

autres, une inhibition des phosphodiestérases, une activa-

tion de la protéine-kinase et une inhibition de l'adényl-

cyclase A ce point de vue, les deux premières activités inhibition des phosphodiestérases et activation de la protéine-kinase sont généralement considérées comme étant caractéristiques de composés qui sont utiles au traitement-du psoriasis Toutefois, les constatations

faites par la Demanderesse montrent qu'une activité anti-

psoriasique topique ne peut cependant pas être déduite de ces activités, parce que tous composés qui possèdent de telles activités ne sont pas des agents antipsoriasiques

pratiques La troisième activité inhibition de l'adényl-

cyclase n'est pas caractéristique de tels composés et serait en fait davantage caractéristique de composés qui

favorisent des maladies prolifératives de la peau.

Comme décrit en détail ci-dessous, les recher-

ches de la Demanderesse montrent aussi clairement que

l'efficacité d'un analogue de c AMP donné comme agent anti-

psoriasique topique ne peut pas être prédite d'après la

structure chimique de l'analogue.

L'invention se base sur la découverte selon laquelle un groupe choisi d'analogues de c AMP possède une efficacité inattendue en tant qu'agents antipsoriasiques

lorsqu'on applique ces composés topiquement.

En conséquence, l'un des aspects de l'inven- tion réside dans un procédé de traitement d'une maladie

proliférative de la peau, qui consiste à administrer topi-

quement à une région atteinte de la peau du patient une

quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de for-

mule: R 6

N N

A > R 8

( 1) O CH 2

O= P -O OH

g O dans laquelle: R 6 représente: (i) un groupe -NR 1 R 2 dans lequel R 1 et R 2

sont choisis, indépendamment, entre l'hydrogène, des radi-

caux alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone et le radical cyclopentyle ou forment conjointement avec l'atome d'azote un groupe hétérocyclique ayant 4 ou 5 atomes cycliques de

carbone, à condition que le nombre total d'atomes de car-

bone du groupe -NR 1 R 2 soit de 4 ou 5, ou (ii) un groupe de formule -XR dans laquelle X est un atome de chalcogène de nombre atomique égal à 8

ou 16 et R est un groupe alkyle de 4 ou 5 atomes de car-

bone, R 8 représente: (i) un groupe de formule -X-(CH 2)n R 3 dans laquelle X a la définition donnée ci-dessus, N est un nombre entier compris dans la plage de 1 à 3, R 3 est l'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 7 atomes de carbone ou un groupe phényle substitué avec O ou 1 radical nitro, halogéno ayant un nombre atomique de 9 à 35, méthoxy, hydroxy ou méthyle, ou (ii) un groupe de formule -NR 4 R 5 dans laquelle R et R sont choisis, indépendamment, entre l'hydrogène

4 5

et des radicaux alkyle ayant 7 à 8 atomes de carbone, et des radicaux phénalkyle ayant 7 à 9 atomes de carbone, à

condition qu'un seul des groupes R 4 et R 5 puisse représen-

ter l'hydrogène et que le nombre total d'atomes de carbone du groupe -NR 4 R 5 se situe dans la plage de 1 à 9, et 0 est l'hydrogène, un cation de métal alcalin

ou le cation ammonium.

Un autre aspect de l'invention réside dans une forme posologique topique pour le traitement d'une maladie

de peau proliférative, comprenant une quantité thérapeuti-

quement efficace d'au moins l'un des composés de formule (I) en mélange avec un support topique pharmaceutiquement

acceptable.

La figure unique du dessin annexé est une repré-

sentation graphique de l'activité antipsoriasique de l'un

des nucléotides de formule ( 1).

L'expression "maladies prolifératives de la

peau" utilisée dans le présent mémoire désigne des condi-

tions non malignes de la peau qui sont caractérisées par une prolifération des cellules épidermiques ou par une différentiation incomplète des cellules Ces conditions peuvent apparaître spontanément ou peuvent être induites par des moyens extracorporels tels qu'une exposition à des radiations ou à des substances chimiques Ces maladies

comprennent le psoriasis, la dermatite atopique-, la der-

matite non spécifique, la dermatite par contact irritant primaire; la dermatite par contact allergique, l'ichthyose, l'hyperkératose épidermolytique, la kératose pré-maligne induite par les rayons solaires, la kératose non maligne et la dermatite séborrhéique Elle couvre également des maladies telles que la gale, qui sont spécifiques d'animaux autres que les êtres humains Le procédé peut être appliqué au traitement d'êtres humains et d'autres animaux tels que des animaux domestiques, des animaux d'agrément et des

animaux utilisés pour le sport.

Des maladies prolifératives de la peau sont traitées conformément à l'invention par administration topique d'un ou plusieurs des nucléotides cycliques de formule ( 1) ci-dessus dans la région atteinte, à une dose thérapeutiquement efficace Le nucléotide est ordinairement appliqué à la région atteinte de la peau sous une forme posologique topique classique telle que pommade, crème,

gelée, pâte, lotion, shampooing ou composition pulvérisable.

Ces formes posologiques renferment le nucléotide formulé avec un ou plusieurs véhicules topiques pharmaceutiquement

acceptables tels que vaseline, polyéthylène-glycol, géla-

tine, myristate d'isopropyle, alcool polyvinylique, etc. Les formulations peuvent aussi renfermer des additifs tels que des émollients, des agents stabilisants, des agents tensio-actifs, des agents modifiant la pénétration de la peau et des pigments Si l'on désire obtenir une libération réglée continue du nucléotide sur le site atteint, par exemple si le nucléotide a une courte période in vivo, il peut être incorporé à des formes posologiques connues à libération réglée qui contrôlent la vitesse de libération du médicament à la peau par diffusion osmose, dissolution, iontophorèse ou érosion Les nucléotides de formule ( 1) sont généralement stables à des p H compris dans la plage d'environ 3 à 9 et la formulation qui les contient doit *donc avoir des p H compris dans cette plage De préférence, le p H de la formulation est approximativement neutre, de manière que la formulation ne soit principalement pas irritante pour la peau Lors d'une application sous une forme posologique classique dans laquelle le nucléotide est dissous dans le véhicule, la concentration maximale du nucléotide dans la formulation dépend naturellement de la solubilité du nucléotide dans le véhicule Sous ce rapport, les nucléotides sont en général solubles dans l'eau et utilisation de véhicules à base d'eau dans la

formulation permet d'utilisation une large plage de con-

centrations en nucléotides Normalement, la concentration

du nucléotide dans des formes posologiques topiques classi-

ques se situe dans la plage de 0,0001 à 1 % en poids, notamment de 0,001 à 0,1 % en poids de la forme posologi- que. Le régime posologique qui est utilisé dans l'administration des nucléotidesde formule ( 1) au patient dépend du nucléotide particulier Des tests effectués sur des animaux choisis comme modèles indiquent que l'activité antipsoriasique de certains au moins des nucléotides se manifeste dans une plage posologique limitée Cela est vraisemblablement dû à une activation préférentielle, dépendant de la dose, de protéine-kinase du type I ou de protéine-kinase du type II L'activation préférentielle

de protéine-kinase du type II est associée à une prolifé-

ration épidermique réduite, tandis que l'activation préférentielle de protéine-kinase du type I peut tout au plus exacerber l'tétat du patient Par conséquent, en termes fonctionnels, une dose thérapeutique est une dose qui active préférentiellement et de façon significative

la protéine-kinase du type II chez le patient en traite-

ment La plage de doses thérapeutiques pour un nucléotide donné peut être déterminée de façon empirique en utilisant le modèle animal décrit dans les exemples ci-après Des plages de doses thérapeutiques pour d'autres espèces animales s'approchent de celle du modèle, attendu que le mode d'administration est topique plutôt que systémique et est donc pratiquement indépendant du poids corporel ou du volume de sérum individuel Des tests portant sur des animaux choisis comme modèles indiquent que la plage

des doses thérapeutiques des nucléotides se situe ordinai-

rement entre environ 0,01 et 10 gg/cm 2 de surface traitée,

notamment d'environ 0,1 à 1 gg/cm 2 de surface traitée.

Des formes posologiques classiques qui ne libèrent pas le nucléotide à la peau à une vitesse réglée pendant une période prolongée sont normalement réappliquées au site

atteint sur une base biquotidienne, en les quantités indi-

quées ci-dessus Des formes posologiques à libération réglée sont destinées à administrer le nucléotide à une vitesse qui maintient sa concentration dans l'épiderme

à un niveau thérapeutique Sur la base de la concentra-

tion du nucléotide qui devrait activer préférentiellement la protéinekinase du type II, cette concentration est estimée comprise dans la plage d'environ 0,0025 à

0,25 gg/cm 2 de peau.

Comme indiqué ci-dessus, le substituant se trouvant en position 6 sur le groupe purine du nucléotide, appelé R 6 dans la formule ( 1), peut être un certain radical amino à substituant alkyle, un radical N- hétérocyclique, un radical alkylthio ou un groupe alkoxy Le groupe amino peut être mono-alkylé ou dialkylé, à condition que le nombre total d'atomes de carbone de ce groupe amino soit égal à 4 ou 5 De préférence, le ou les groupes alkyle est ou sont des groupes à chaîne droite (excepté le groupe cyclopentyle) Des exemples de ces groupes sont les

groupe n-butylamino, n-pentylamino, isobutylamino, iso-

pentylamino, cyclopentylamino, méthylpropylamino, méthyl-

isopropylamino, diéthylamino, éthylpropylamino et éthyl-

isopropylamino Les radicaux N-hétérocycliques que R 6 peut représenter sont des radicaux saturés Des exemples de

ces radicaux sont les radicaux N-pipéridyle et N-pyrroli-

dyle Les groupes alkyle des radicaux alkylthio ou alkoxy représentés par R 6 peuvent être à chaîne ramifiée ou à chaîne droite De préférence, le groupe alkyle de ces radicaux est un groupe à chaîne droite Des exemples de ces radicaux sont les radicaux n-butylthio, isobutylthio,

n-pentylthio, isopentylthio, n-butoxy, isobutoxy, n-

pentoxy et isopentoxy R 6 est de préférence le radical n-butylamino. Le substituant du groupe purine du nucléotide en position 8, appelé R 8 dans la formule ( 1), représente certains groupes alkylthio, phénylalkylthio, alkoxy,

phénylalkoxy, mono ou dialkylamino ou phénylalkylamino.

Les groupes alkyle dans ces radicaux sont de préférence des groupes à chaîne droite Des exemples de ces groupes

sont les groupes méthylthio, éthylthio, n-hexylthio, 3-

méthylhexylthio, n-décylthio, méthoxy, propoxy, n-heptoxy,

n-nonoxy, benzylthio, p-chlorobenzylthio, m-fluorobenzyl-

thio, p-nitrobenzylthio, o-chlorobenzylthio, p-méthoxy-

benzylthio, p-méthylbenzylthio, phénéthylthio, phénpropyl- thio, benzoxy, phénpropoxy, méthylamino, diméthylamino, éthylamino, diéthylamino, npropylamino, di-n-propylamino, hexylamino, octylamino, benzylamino, phénéthylamino et

phénpropylamino R 8 est de préférence un groupe benzyl-

thio.

Comme indiqué dans la formule ( 1),les nucléotides peuvent être sous la forme d'une base libre ou d'un sel

de métal alcalin ou d'ammonium L'expression "sels d'ammo-

nium" utilisée dans le présent mémoire comprend des sels d'ammonium primaire, secondaire et tertiaire Le sel de

sodium est un sel apprécié.

Les nucléotides cycliques de formule ( 1) peuvent être préparés selon les schémas réactionnels indiqués dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N 4 058 659 Les exemples suivants donnent de plus amples détails sur les

procédés de synthèse de ces nucléotides Sauf spécifica-

tion contraire, les pourcentages sont exprimés en poids

dans les exemples qui suivent.

Exemple 1

Préparation du 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-(benzylthio)-

6-(n-butylamino)-9-( 8-D-ribofurannosyl)-purine Procédé A.

On agite pendant environ 16 heures à la tempé-

rature ambiante une solution de sel de sodium du 3 ',5 '-

phosphate cyclique de 2 '-O-acétyl-8-(benzylthio)-6-chloro-

9-(-D-ribofurannosyl)-purine ( 3,5 g, 5,25 mmoles) dans ml d'eau et 10 ml de n-butylamine On évapore le solvant et on triture le résidu deux fois avec de l'éther, on le dissout dans l'eau et on l'acidifie à p H 1 avec H Cl 1 N. La substance solide brute est filtrée et dissoute dans Et OH Cinq volumes d'éther sont ajoutés à l'Et OH et la

substance solide précipitée est recueillie: par recris-

tallisation-dans Et OH-H 20 ( 1:1), on obtient 1,68 g ( 61 %) de composé 26; UV À max, p H 1, 288 nm (c 22300), p H 11, 291 nm

( 18100).

Analyse: C % H % N % S % Calculé pour

C 21 H 26 N 50 PS H 20: 47,99 5,32 11,32 6,10

Trouvé: 47,77 5,48 13,24 6,30 Procédé B. Une suspension de 3 ',5 'phosphate cyclique

d'adénosine ( 230 g, 0,70 mole) et de 1,5-diazabicyclo-

5 4 O _ 7 undéc-5-ène ( 115 g, 0,75 mole) dans 600 ml de diméthylformamide (DMF) est agitée à 60 C (température interne) dans un ballon à trois cols de 2 litres équipé

d'un thermomètre, d'un tube dessiccateur et d'un conden-

seur à reflux, jusqu'à ce qu'une solution ait été obtenue.

On ajoute goutte à goutte 37,4 g ( 240 ml) de 2,6-lutidine, puis on ajoute lentement 135 g ( 1 mole) de bromure de crotyle On agite le mélange réactionnel pendant encore heures à 60 C Le produit qui cristallise lentement dans la solution est filtré, lavé avec un faible volume

de DMF et de Me OH et séché en donnant 146 g de Nl-crotyl-

c AMP.

On dissout 140 g ( 0,365 mole) de Nl-crotyl-

c AMP dans 800 ml de Na OH 1 N et on chauffe la solution

à 75 C pendant 2 heures On refroidit le mélange réaction-

nel et on y ajoute 24 ml d'acide acétique cristallisable.

Après l'addition de 4,0 g de Pt à 5 % sur du carbone, on agite le mélange réactionnel par secousses sous atmosphère d'hydrogène ( 0,28 M Pa pendant 5 heures) jusqu'à ce que

39,5 kg d'hydrogène aient été absorbés (théorie, 41,3 kg).

Du brome ( 61 g, 0,38 mole) est ajouté en deux portions

à des intervalles de 30 minutes au mélange formé du fil-

trat et de la liqueur de lavage ( 1 litre) On ajoute 40 g

de Na O Ac et on agite la solution à la température ambiante.

Au bout de 4 heures, on ajoute encore 10 ml de Br 2 et on

continue d'agiter pendant 3 jours.

On purge la solution à l'azote pendant 2 heures, puis on y ajoute du borohydrure de sodium Na BH 4 jusqu'à ce que la solution donne une réaction négative dans l'essai à l'amidon et à l'iodure de potassium On ajuste le p H à

12 avec Na OH à 30 % et on ajoute 40 ml de benzylmercaptan.

La solution résultante est chauffée à 70 C pendant 1 heure, puis acidifiée à p H 1,8 avec H Cl concentré On agite la solution acide et on la laisse lentement refroidir On filtre le produit brut et on le lave avec H 20, puis avec Et OH On dissout la matière brute dans CHC 13 par addition de triéthylamine La solution chloroformique est chargée sur une colonne de 200 g de gel de silice anhydre La colonne est lavée au chloroforme et le produit est élué avec de l'éthanol à 4 % dans le chloroforme Les fractions

intéressantes de la colonne sont rassemblées et évaporées.

Le sel de triéthylammonium est dissous dans 100 ml de NH 4 OH 2 N chaud, la solution est additionnée de 500 ml de Me OH et le mélange est acidifié à p H 2 avec H Cl concentré Apres

refroidissement de la solution, la substance solide résul-

tante est filtrée, lavée avec H 2 O et Et OH et séchée, ce

qui donne 101 g de 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-(benzyl-

thio)-6-(n-butylamino)-9-(e-D-ribofurannosyl)-purine qui est identique à celui qui a été préparé par le procédé A.

Exemple 2

Préparation du 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-(benzylthio)-

6-pipéridino-9-(e-D-ribofurannosyl)-purine

On agite pendant environ 16 heures à la tempé-

rature ambiante une solution de 1,3 g de sel de sodium de

3 ',5 '-phosphate cyclique de 2 '-O-acétyl-8-(benzylthio)-6-

chloro-9-(e-D-ribofurannosyl)-purine dans 20 ml d'eau et ml de pipéridine On évapore le solvant et on triture le résidu deux fois avec de l'éther Le résidu final est dissous dans de l'eau et la solution est chargée sur une colonne de "Dowex 50 " (H+, particules de 74 à 149 gm) de 2,5 x 10 cm, préalablement lavée avec un mélange de méthanol et d'eau à 1:1 La colonne est lavée à l'eau, puis avec ml de mélange de méthanol et d'eau ( 1:4), 100 ml de mélange de méthanol et d'eau ( 1:1) et, finalement un mélange de méthanol et d'eau ( 3:1) jusqu'à ce que tout le produit ait été élué Les fractions contenant le produit sont recueillies, rassemblées et évaporées à sec Le résidu est dissous dans de l'éthanol bouillant, la solution est additionnée de 5 volumes d'eau et elle est concentrée au cinquième de son volume Pendant le refroidissement,

700 mg ( 59 %) de cristaux blancs de 3 ',5 '-phosphate cycli-

que de 8-(benzylthio)-6-pipéridino-9-( 3-D-ribofurannosyl)-

purine se déposent dans la solution aqueuse.

Analyse: C % H % N % S % Calculé pour

C 22 H 26 N 506 PS: 51,01 5,11 13,52 6,05

Trouvé

Exemple 3

Préparation du 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-(benzylthio)-

6-pyrrolidine-9-( -D-ribofurannosyl)-purine On traite comme pour la synthèse du composé de

l'exemple 2 une solution de 2 g de 3 ',5 '-phosphate cycli-

que de 2 '-O-acétyl-8-(benzylthio)-6-chloro-9-(e-D-ribo-

furannosyl)-purine dans 20 ml d'eau contenant 5 ml de pyr-

rolidine On ajoute de l'eau au résidu de la colonne et on filtre les cristaux résultants, puis on les sèche pour

obtenir 947 mg ( 51 %) de 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-

(benzylthio)-6-(pyrrolidino)-9-(<-D-ribofurannosyl)-purine. Analyse: C % H % N % Calculé pour

C 21 H 24 N 506 PS 1,5 H 20 47,36 5,11 13,15

Trouvé: 47,05 5,26 12,94

Exemples 4-7

En suivant des modes opératoires analogues à

ceux qui ont été décrits dans les exemples 1-3, on a égale-

ment préparé, isolé et purifié les nucléotides suivants

de formule ( 1).

4 3 ',5 '-phosphate cyclique de 6-(n-butylamino)-8-

(méthylthio)-9-( 1-D-ribofurannosyl)-purine: UV max p H 1, 289 nm ( 19 600); p H 11, 290 nm (ú 17 800); Analyse élémentaire:

C % H% N%

Calculé pour

C 15 H 22 N 506 PS: 41,73 5,15 16,24

Trouvé: 41,37 5,23 15,81 3 ',5 '-phosphate cyclique de 6-(diéthylamino)-8(diéthylamino)-9-(e-D-ribofurannosyl)-purine: UV À max p H 1, 289 nm (< 18 900); p H 11,

290 nm (c 20 000).

Analyse élémentaire:

C % H % N%

Calculé pour

C 18 H 29 N 606 P: 47,34 6,42 18,42

Trouvé: 47,09 6,30 18,33

6 3 ',5 '-phosphate cyclique de 8-(benzylthio)-6-

(n-pentylamino)-9-(B-D-ribofurannosyl)-purine; UV X max p H 1, 288 nm (E 21 900); p H 11, 291 nm

(s 17 900).

Analyse élémentaire:

C % H % N %

Calculé pour

C 22 H 28 N 5 OPS: 50,53 5,42 13,44

Trouvé: 50,89 5,17 13,55

7 3 ',5 '-phosphate cyclique de 6-(n-butylméthyl-

amino)-8-(benzylthio)-9-(e-D-ribofurannosyl)-

purine: UV À max p H 1, 288 nm (E 21 500);

p H 11, 290 nm (s 18 700).

Analyse élémentaire:

C% H% N%

Calculé pour

C 22 H 28 N 5 OPS: 50,53 5,42 13,44

Trouvé: 51,02 5,61 13,63 Les nucléotides des exemples 1 et 3-7 de même

que divers homologues et divers nucléotides connus apparen-

tés considérés comme doués d'activité antipsoriasique ont été soumis à un test d'acti Vité antipsoriasique selon le modèle d'animal et les modes opératoires décrits dans le British Journal of Dermatology 94, I, pages 16 ( 1976) En bref, ce test utilise la souris glabre et son critère

d'activité est l'inhibition de la synthèse de l'ADN épi-

dermique (qui est un indice d' inhibition de la prolifération), comme mis en évidence par la réduction de l'incorporation

de thymidine tritiée à l'ADN des cellules épidermiques.

Dans ces tests, une portion de 7 cm 2 de la surface du dos de la souris est exposée à une dose particulière de rayons

ultraviolets Il a été démontré que cette exposition provo-

quait une hyperprolifération significative de l'épiderme (comme mis en évidence par un accroissement de la synthèse d'ADN) 48 heures après l'exposition Le nucléotide testé est administré à la peau exposée à la dose désirée 1, 18,

24 et 47 heures après l'exposition aux rayons ultraviolets.

On injecte aux souris de la thymidine tritiée au bout de

47 heures et on les sacrifie au bout de 48 heures L'épi-

derme traité est détaché du cadavre et lysé L'ADN est

extrait du lysat de cellules épidermiques au moyen d'hydro-

xylapatite L'incorporation de thymidine tritiée à l'ADN est mesurée au moyen d'un compteur à scintillations Des animaux témoins traités seulement avec le nucléotide, des

animaux témoins traités seulement avec le véhicule (eau-

alcool polyvinylique)et des animaux témoins exposés à l'irradiation ultraviolette, mais traités avec le véhicule ne contenant pas le nucléotide sont utilisés parallèlement avec les animaux traités aux rayons ultraviolets et traités au nucléotide, à des fins de comparaison Les nucléotides sont appliqués sous la forme d'une formulation à l'eau et à l'alcool polyvinylique ( 0,000001 à 0,1 % en poids de nucléotide). Le nucléotide de l'exemple 1 a été testé à

diverses doses totales selon le mode opératoire ci-dessus.

La figure unique du dessin annexé illustre graphiquement le résultat de cet essai La partie hachurée à la base du graphique représente les résultats obtenus pour les animaux témoins traités avec le véhicule; la section hachurée à la partie supérieure du graphique représente les résultats obtenus pour les témoins traités aux rayons ultraviolets et les témoins traités avec le véhicule; les cercles représentent les résultats obtenus pour les animaux traités aux UV et traités avec le nucléotide; et les triangles représentent les résultats obtenus pour les animaux témoins traités seulement avec le nucléotide L'axe des abscisses indique la dose totale en microgrammes L'axe des ordonnées représente, à droite, le pourcentage d'inhibition de la synthèse de l'ADN et, à gauche, l'incorporation de /fméthyl-3 H_ 7thymidine à l'ADN épidermique, en Cpm/10 Ag d'ADN. Comme le fait apparaître le graphique, le nucléotide a été efficace dans une plage totale de doses d'environ 0,1 à 15 Fg (ce qui représente, ramené à l'unité de surface, environ 0,01 à 1,5 gg/cm 2), avec un maximum

d'efficacité à la dose totale d'environ 2-3 gg (soit envi-

* ron 0,15-0,25 ug/cm 2, ramené à l'unité de surface) La nature cyclique de la courbe représentée sur le dessin

annexé doit vraisemblablement être attribuée à la stimula-

tion de la protéine-kinase de type I par le nucléotide à une dose totale dépassant environ 2-3 Fg Les résultats reproduits sur le dessin représentent les valeurs obtenues

pour au moins 15 animaux à chaque dose d'essai.

En termes d'efficacité pratique, il est très désirable, sinon essentiel, qu'un agent antiprolifératif permette le traitement d'un très fort pourcentage, sinon

de la totalité, des individus traités A cette fin, l'effi-

cacité antipsoriasique des composés en ce qui concerne leur aptitude à offrir un traitement à 100 % des animaux traités (au moins 5 animaux par dose) a été déterminée à chaque

dose de la façon suivante.

La vitesse de synthèse de l'ADN pour chaque

groupe d'animaux ú-pas de rayons UV (véhicule>, UV (véhi-

cule), UV (médicament)_ 7 a tout d'abord été exprimée par une valeurmoyenne plus ou moins l'erreur standard Le degré d'inhibition de la synthèse de l'ADN a été calculé en retranchant la vitesse moyenne obtenue pour les témoins non traités aux rayons ultraviolets et traités avec le véhicule, ( 1) des témoins traités avec le véhicule et la lumière ultraviolette et ( 2) des animaux traités avec le médicament et avec la lumière ultraviolette La différence entre la valeur nette obtenue pour ( 1) et la valeur nette obtenue pour ( 2) a été exprimée par un pourcentage de la valeur nette de ( 1) L'erreur associée à chaque pourcentage d'inhibition a été choisie comme la plus grande des erreurs

standardsassociées à ( 1) ou ( 2) (valeurs globales) et con-

vertie en un pourcentage.

Le tableau ci-dessous reproduit les résultats de ces déterminations et leurs erreurs standards, pour les composés des exemples 1 et 3 à 7 et pour des analogues apparentés ne répondant pas à la définition de la formule ( 1) (La valeur zéro a été attribuée aux cas pour lesquels l'erreur standard dépassait la détermination (c'est-à-dire une thérapie inférieure à 100 %)) Les colonnes intitulées R 6 et R 8 indiquent les substituants occupant les positions 6 et 8 du nucléotide Tous les composés mentionnés ont été

testés sous la forme de la base libre.

Inhibition de la synthèse (%) de l'ADN épidermique Dose totale (gg)

0,002 0,02 0,2 2 20 200

R 6 Concentration utilisée (mg/ml)

R 8 10-5 10-4 10 3 10-2

Nucléotides de formule ( 1) _ 1 -N Hn C 4 H 9

-

-N Hn C 5 H 11 -lN(CH 2)4 l -N(CH 3)n C 4 H 9 -N Hn C 4 H 9

-N(C 2 H 5)2

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 3

-N(C 2 H 5)2

0 O O 89 27

0 O O O

0 O O O

O O O O

0 O O O

0 O O O

Analogues

-NH 2

-N Hn C 4 H 9

-NHCH 2 CH 3

-N Hn C 3 H 7 -N(n C 3 H 7)2 -N Hn C 6 H 13

-SCH 2 C 6 H 5

-H

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

-SCH 2 C 6 H 5

0 O O O O

0 O O O O

O O O O O

O O O O O

O O O O -0

0 O O O O

32 o o o

32 10

o o 34 i 18 20 25 o O o

Les résultats reproduits sur le tableau ci-

dessus indiquent plusieurs facteurs en ce qui concerne l'activité antipsoriasique topique de 3 ',5 '-phosphates cycliques de ribofurannosylpurine substitués en positions 6 et 8 Premièrement, le second analogue mentionné (R 6 = n- butylamino, R 8 = H) indique que le substituant en position 8 du groupe purine est essentiel Cela a été vérifié par

des tests portant sur plusieurs autres analogues non substi-

tués en position 8, qui montraient tous une activité anti-

psoriasique nulle Deuxièmement, le premier des analogues mentionnés (R 6 = NH 2, R 8 = benzylthio) a indiqué que l'azote

lié à la position 6 du groupe purine devait être substitué.

Les analogues restants qui ont été testés ont indiqué que

le nombre d'atomes de carbone dans le substituant en posi-

tion 6 devait être égal à 4 ou 5 De même, le premier ana-

logue mentionné présente les caractères du genre décrit dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N O 4 007 268 et N O 4 207 315 et les résultats montrent que les composés de formule ( 1) ont une meilleure activité antipsoriasique

topique comparativement à cet analogue.

Des modifications des modes de mise en oeuvre

de l'invention, tels que décrits ci-dessus, qui sont éviden-

tes pour le spécialiste en matière de chimie, de bio-

chimie, de pharmacie et/ou de médecine, sont incluses dans

le cadre de la présente invention.

Claims (8)

REVENDICATIONS

1 Médicament destiné au traitement d'une maladie proliférative de la peau par administration topique à une région atteinte de la peau d'un patient, caractérisé en ce qu'il renferme une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de formule: R 6

N

R N>

0-CH 2

0 O

0 P O OH

dans laquelle: R 6 représente: (i) un groupe -NR 1 R 2 dans lequel R 1 et R 2

sont choisis, indépendamment, entre l'hydrogène, des radi-

caux alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone et le radical cyclopentyle ou forment conjointement avec l'atome d'azote un groupe hétérocyclique ayant 4 ou 5 atomes cycliques de

carbone, à condition que le nombre total d'atomes de car-

bone du groupe -NR 1 R 2 soit de 4 ou 5, ou (ii) un groupe de formule -XR dans laquelle X est un atome de chalcogène de nombre atomique égal à 8

ou 16 et R est un groupe alkyle de 4 ou 5 atomes de car-

bone, R 8 représente: (i) un groupe de formule -X-(CH 2)n R 3 dans laquelle X a la définition donnée ci-dessus, N est un nombre entier compris dans la plage de 1 à 3, R 3 est l'hydrogène, un groupe alkyle ayant 1 à 7 atomes de carbone ou un groupe phényle substitué avec O ou 1 radical nitro, halogéno ayant o 10889 un nombre atomique de 9 à 35, méthoxy, hydroxy ou méthyle, ou (ii) un groupe de formule -NR 4 R 5 dans laquelle R 4 et R 5 sont choisis, indépendamment, entre l'hydrogène et des radicaux alkyle ayant 1 à 8 atomes de carbone, et des radicaux phénalkyle ayant 7 à 9 atomes de carbone, à

condition qu'un seul des groupes R 4 et R 5 puisse représen-

ter l'hydrogène et que le nombre total d'atomes de carbone du groupe -NR 4 R 5 se situe dans la plage de 1 à 9, et B est l'hydrogène, un cation de métal alcalin

ou le cation ammonium.

2 Médicament suivant la revendication 1, dans lequel R 6 est le groupe nbutylamino, n-pentylamino,

n-butylméthylamino ou pyrrolidyle, R 8 est le groupe benzyl-

thio et B est l'hydrogène.

3 Médicament suivant la revendication 1, dans lequel R 6 est le groupe nbutylamino, R 8 est le groupe

méthylthio et B est l'hydrogène.

4 Médicament suivant la revendication 1, dans lequel R 6 est le groupe diéthylamino, R est le groupe

diéthylamino et B est l'hydrogène.

Médicament suivant la revendication 1, dans lequel R 6 est le groupe nbutylamino, R 8 est le groupe

benzylthio et S est l'hydrogène.

6 Médicament suivant l'une quelconque des

revendications 1 à 5, destiné au traitement du psoriasis.

7 Médicament suivant l'une quelconque des

revendications 1 à 5, renfermant une quantité suffisante

de substance active pour effectuer l'activation préféren-

tielle et significative d'une protéine-kinase du type II.

8 Médicament suivant l'une quelconque des

revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il renferme la

substance active en quantité permettant l'application d'environ 0,01 à environ 10 "g, de préférence d'environ

0,1 à 1 gg de ladite substance par cm 2 de peau à traiter.

9 Médicament suivant la revendication 1,

caractérisé en ce qu'il est présenté sous une forme poso-

logique qui permet la libération du composé à la peau à traiter à une vitesse maintenant la concentration du composé

dans l'épiderme à un niveau thérapeutiquement efficace.

Forme posologique topique destinée au traite-

ment d'une maladie proliférative de la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité thérapeutiquement effi- cace d'au moins un composé suivant l'une quelconque des

revendications 1 à 5, en mélange avec un support topique

pharmaceutiquement acceptable.