FR2471408A1 - Procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation - Google Patents
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Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE POUR PRODUIRE DE L'ACIDE L-GLUTAMIQUE PAR FERMENTATION. ON CULTIVE EN AEROBIOSE, DANS UN MILIEU AQUEUX, UN MUTANT PROVENANT D'UN MICRO-ORGANISME PRODUCTEUR D'ACIDE L-GLUTAMIQUE APPARTENANT AUX GENRES BREVIBACTERIUM OU CORYNEBACTERIUM, CE MUTANT RESISTANT A L'ACIDE GLUTAMIQUE OU AUX ANALOGUES DE L'ACIDE GLUTAMIQUE, ET ON RECUEILLE L'ACIDE L-GLUTAMIQUE ACCUMULE DANS LE MILIEU AQUEUX.
Description
Procéda pour produire de l'acide L-glutamique par fermentation.
La présente invention concerne un procédé pour produire de l'acide L-glutamique par fermentation.
On produit l'acide L-glutamique, dont on utilise les sels monosodiques comme agents d'assaisonnement, selon des procédés de fermentation qui utilisent des micro-organismes appartenant aux genres Brevibacterium ou Corynebacterium.
La demanderesse a réussi à obtenir, à partir de microorganismes connus producteurs d'acide L-glutamique appartenant aux genres Brevibacterium et Corynebactérium, des mutants qui résistent à l'acide glutamique ou aux analogues de l'acide glutamique et ont un pouvoir de production de l'acide L-glutamique supérieur à celui des micro-organismes connus producteurs d'acide L-glutamique.
L'invention concerne un procédé pour produire de l'acide L-glutamique par fermentation, qui consiste à cultiver en adrobiose, dans un milieu aqueux, un mutant provenant d'un microorganisme producteur d'acide L-glutamique appartenant aux genres
Brevibacterium ou Corynebacterium, ce mutant résistant à l'acide glutamique ou aux analogues de l'acide glutamique et à recueillir l'acide L-glutamique accumulé dans le milieu aqueux.
Brevibacterium ou Corynebacterium, ce mutant résistant à l'acide glutamique ou aux analogues de l'acide glutamique et à recueillir l'acide L-glutamique accumulé dans le milieu aqueux.
On peut citer comme mutants utiles dans le procéda de l'invention :
Brevibacterium lactofermentum AJ 11292 (FERM-P 4585, NRRLB-12035) (résistant au glutamate d'ammonium),
Brevibacterium lactofermentum AJ 11293 (FERM-P 4586, NRRLfl-12036) (résistant à l'acide glutamique-γ-monohydroxamate),
Brevibacterium flavum AJ 11294 (FERM-P 4587, NRItLB-12037) (résistant au glutamate d'ammonium),
Brevibacterium flavum AJ 11295 (FERM-P 4588, NRRL-B 12038) (résistant à l'acide α;-méthylglutamique)
Corynebacterium acetoacidophilum AJ 11296 (FERM-P 4581, NRItL-B 12039) (résistant au glutamate d'amnonium),
Corynebacterium acetoacidophilum AJ 11297 (FERM-P 4582, NRRL-B 12040) (résistant à l'acide glutamique-y-monohydroxamate),
Corynebacterium glutamicum AJ 11298 (FERM-P 4583, NRItL-B 12041) (résistant au glutamate d'ammonium),
Corynebacterium glutamicum AJ 11299 (FEEM-P 4584 RL-B 12042) (résistant à l'acide a-mSthylglutamique).
Brevibacterium lactofermentum AJ 11292 (FERM-P 4585, NRRLB-12035) (résistant au glutamate d'ammonium),
Brevibacterium lactofermentum AJ 11293 (FERM-P 4586, NRRLfl-12036) (résistant à l'acide glutamique-γ-monohydroxamate),
Brevibacterium flavum AJ 11294 (FERM-P 4587, NRItLB-12037) (résistant au glutamate d'ammonium),
Brevibacterium flavum AJ 11295 (FERM-P 4588, NRRL-B 12038) (résistant à l'acide α;-méthylglutamique)
Corynebacterium acetoacidophilum AJ 11296 (FERM-P 4581, NRItL-B 12039) (résistant au glutamate d'amnonium),
Corynebacterium acetoacidophilum AJ 11297 (FERM-P 4582, NRRL-B 12040) (résistant à l'acide glutamique-y-monohydroxamate),
Corynebacterium glutamicum AJ 11298 (FERM-P 4583, NRItL-B 12041) (résistant au glutamate d'ammonium),
Corynebacterium glutamicum AJ 11299 (FEEM-P 4584 RL-B 12042) (résistant à l'acide a-mSthylglutamique).
Les numéros FERM-P sont les numéros d'enregistrement è l'institut de Recherches sur les Fermentations, Service des
Sciences et Technologies Industrielles, Ministère du Commerce
International et de l'Industrie, 3-go, l-ban, l-chome, Yatabecho-higashi, Tsukuba-gun, Ibaragi-ken, Japon. Les numéros
NRRL -sont les numéros d'admission à l'Agricultural Research, North
Central Region, Northern Regional Research Centrer, 1815 North
University Street, Peoria Illinois 61604, Etats-Unis d'Amérique.
Sciences et Technologies Industrielles, Ministère du Commerce
International et de l'Industrie, 3-go, l-ban, l-chome, Yatabecho-higashi, Tsukuba-gun, Ibaragi-ken, Japon. Les numéros
NRRL -sont les numéros d'admission à l'Agricultural Research, North
Central Region, Northern Regional Research Centrer, 1815 North
University Street, Peoria Illinois 61604, Etats-Unis d'Amérique.
Ces mutants dérivent respectivement de Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869, Brevibacterium flavum ATCC 14067 et
Corynebacterium glutamicum ATCC 13032.
Corynebacterium glutamicum ATCC 13032.
On peut également utiliser comme souches parentes pour produire les mutants utiles dans l'invention : Brevibacterium divaricatum NRRLB-2311, Brevibacterium saccharoliticum ATCC 14066,
Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 15806, Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354 et d'autres bactéries productrices d'acide
L-glutamique de type Coryne.
Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 15806, Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354 et d'autres bactéries productrices d'acide
L-glutamique de type Coryne.
Lorsque le mutant présente d'autres caractéristiques biologiques que l'on sait être utiles pour la production d'acide
L-glutamique, telles que la sensibilité à l'acide N-palmitoylglutamique, le rendement en acide L-glutamique peut être encore accru.
L-glutamique, telles que la sensibilité à l'acide N-palmitoylglutamique, le rendement en acide L-glutamique peut être encore accru.
Les procédés d'obtention de la mutation sont classiques et sont, par exemple, l'exposition de la souche parente à la lumière ultraviolette, à des rayons X ou à des agents chimiques mutagènes. Par exemple, on expose les souches parentes Bl'action de la N-nitro N'-méthyl N-nitrosoguanidine à 30CC pendant 20 min.
On peut, pour séparer les souches mutantes utiles dans l'invention, des souches parentes exposées, isoler les souches qui peuvent se développer dans un milieu contenant des quantités d'acide glutamique ou d'analogues de l'acide glutamique inhibant le développement des souches parentes.
Les analogues de l'acide glutamique inhibent le développement des souches parentes des mutants utilisés dans l'inven tion, mais cette inhibition est supprimée par l'acide L-glutamique et ces analogues sont, par exemple, l'acide a-méthylglutsmique, l'acide -hydroxyglutamique, l'acide glutamique-Y-monohydroxamate, l'acide a-aminophosphono-4 butyrique, l'ester y-méthylique de l'acide glutamique, l'ester diméthylique de l'acide glutamique, l'ester y-éthylique de l'acide glutamique, l'ester di-tert-butylique de l'acide glutamique et l'ester diéthylique de l'acide glutamique.
Les mutants qui résistent à l'acide glutamique ou aux analogues de l'acide glutamique peuvent se développer dans un milieu gélosé contenant une quantité d'analogues de l'acide glutamique inhibant le développement des souches parentes.
Le degré de résistance des mutants précités à l'acide glutamique et aux analogues de l'acide glutamique figure dans les tableaux I et il ci-aprEs.
TABLEAU
<tb> Glutamate
<tb> d'ammonium <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP>
<tb> g/dl <SEP> en
<tb> acide <SEP> glu- <SEP> <SEP> 13869 <SEP> 11292 <SEP> 14067 <SEP> 11294 <SEP> 13870 <SEP> 11296 <SEP> 13032 <SEP> 11298 <SEP>
<tb> tamique
<tb> <SEP> O <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> <SEP> 1 <SEP> 105 <SEP> 105 <SEP> 95 <SEP> 101 <SEP> 98 <SEP> 99 <SEP> 101 <SEP> 102
<tb> <SEP> 5 <SEP> 102 <SEP> 110 <SEP> 98 <SEP> 97 <SEP> 96 <SEP> 97 <SEP> 98 <SEP> 99
<tb> <SEP> 10 <SEP> 85 <SEP> 102 <SEP> 65 <SEP> 95 <SEP> 68 <SEP> 96 <SEP> 95 <SEP> 96
<tb> <SEP> 15 <SEP> 1 <SEP> 50 <SEP> 95 <SEP> 40 <SEP> 68 <SEP> 52 <SEP> 96 <SEP> 77 <SEP> 95
<tb> <SEP> 20 <SEP> 10 <SEP> 60 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 20 <SEP> 58 <SEP> 52 <SEP> 85
<tb>
TABLEAU II
<tb> d'ammonium <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP>
<tb> g/dl <SEP> en
<tb> acide <SEP> glu- <SEP> <SEP> 13869 <SEP> 11292 <SEP> 14067 <SEP> 11294 <SEP> 13870 <SEP> 11296 <SEP> 13032 <SEP> 11298 <SEP>
<tb> tamique
<tb> <SEP> O <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> <SEP> 1 <SEP> 105 <SEP> 105 <SEP> 95 <SEP> 101 <SEP> 98 <SEP> 99 <SEP> 101 <SEP> 102
<tb> <SEP> 5 <SEP> 102 <SEP> 110 <SEP> 98 <SEP> 97 <SEP> 96 <SEP> 97 <SEP> 98 <SEP> 99
<tb> <SEP> 10 <SEP> 85 <SEP> 102 <SEP> 65 <SEP> 95 <SEP> 68 <SEP> 96 <SEP> 95 <SEP> 96
<tb> <SEP> 15 <SEP> 1 <SEP> 50 <SEP> 95 <SEP> 40 <SEP> 68 <SEP> 52 <SEP> 96 <SEP> 77 <SEP> 95
<tb> <SEP> 20 <SEP> 10 <SEP> 60 <SEP> 20 <SEP> 30 <SEP> 20 <SEP> 58 <SEP> 52 <SEP> 85
<tb>
TABLEAU II
<tb> Acide <SEP> L-glu
<tb> tamique <SEP> -r- <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> ÂJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ
<tb> monohydroxa
<tb> mate
<tb> <SEP> pg/Xl <SEP> 13869 <SEP> 11293 <SEP> 14067 <SEP> 11295 <SEP> 13870 <SEP> 11297 <SEP> 13032 <SEP> 11299
<tb> <SEP> 0 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> <SEP> 10 <SEP> 99- <SEP> 99 <SEP> 72 <SEP> 98 <SEP> 95 <SEP> 99 <SEP> 96 <SEP> 98
<tb> <SEP> 20 <SEP> 85 <SEP> 97 <SEP> 52 <SEP> 95 <SEP> 90 <SEP> 98 <SEP> 92 <SEP> 97
<tb> <SEP> 50 <SEP> 70 <SEP> 96 <SEP> 45 <SEP> 93 <SEP> 72 <SEP> 95 <SEP> 72 <SEP> 95
<tb> <SEP> 100 <SEP> 55 <SEP> 60 <SEP> 30 <SEP> 65 <SEP> 54 <SEP> 88 <SEP> 55 <SEP> 88
<tb> 1000 <SEP> 20 <SEP> 50 <SEP> 15 <SEP> 55 <SEP> 36 <SEP> 60 <SEP> 43 <SEP> 55
<tb>
On détermine la résistance des mutants de la. façon suivante. On cultive préalablement-les micro-organismes sur une gélose inclinée contenant 1 g/dl de peptone, 1 g/dl d'extrait de levure, 0,5 g/dl de chlorure de sodium et 2 g/dl de gélose à pH 7,0, à 300C pendant 24 h, puis on en ensemence des milieux aqueux contentant, par décilitre, 0,5 g de glucose, 0,15 g d'urée, 0,15 g de sulfate d'ammonium, 0,3 g de phosphate monopotassique, 0,1 g de phosphate dipotassique, 0,01 g de sulfate de magnésium heptahydraté, 0,1 mg de chlorure de calcium dihydraté, 1011g de chlorhydrate de thiamine, 3pg de biotine, 0,44 mg de borate de sodium décahydraté, 4,85 mg de chlorure ferrique hexahydrate, 1,95 mg de sulfate cuivrique pentahydraté, 0,185 mg d'heptamolybdate d'ammonium tétrahydraté, 44 mg de sulfate de zinc heptahydraté, 0,36 mg de chlorure manganeux tétrahydraté et la quantité de
L-glutamate d'ammonium ou d'acide L-glutamique-7-monohydroxamate indiquée dans les tableaux I et li ci-dessus.
<tb> tamique <SEP> -r- <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> ÂJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ
<tb> monohydroxa
<tb> mate
<tb> <SEP> pg/Xl <SEP> 13869 <SEP> 11293 <SEP> 14067 <SEP> 11295 <SEP> 13870 <SEP> 11297 <SEP> 13032 <SEP> 11299
<tb> <SEP> 0 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> <SEP> 10 <SEP> 99- <SEP> 99 <SEP> 72 <SEP> 98 <SEP> 95 <SEP> 99 <SEP> 96 <SEP> 98
<tb> <SEP> 20 <SEP> 85 <SEP> 97 <SEP> 52 <SEP> 95 <SEP> 90 <SEP> 98 <SEP> 92 <SEP> 97
<tb> <SEP> 50 <SEP> 70 <SEP> 96 <SEP> 45 <SEP> 93 <SEP> 72 <SEP> 95 <SEP> 72 <SEP> 95
<tb> <SEP> 100 <SEP> 55 <SEP> 60 <SEP> 30 <SEP> 65 <SEP> 54 <SEP> 88 <SEP> 55 <SEP> 88
<tb> 1000 <SEP> 20 <SEP> 50 <SEP> 15 <SEP> 55 <SEP> 36 <SEP> 60 <SEP> 43 <SEP> 55
<tb>
On détermine la résistance des mutants de la. façon suivante. On cultive préalablement-les micro-organismes sur une gélose inclinée contenant 1 g/dl de peptone, 1 g/dl d'extrait de levure, 0,5 g/dl de chlorure de sodium et 2 g/dl de gélose à pH 7,0, à 300C pendant 24 h, puis on en ensemence des milieux aqueux contentant, par décilitre, 0,5 g de glucose, 0,15 g d'urée, 0,15 g de sulfate d'ammonium, 0,3 g de phosphate monopotassique, 0,1 g de phosphate dipotassique, 0,01 g de sulfate de magnésium heptahydraté, 0,1 mg de chlorure de calcium dihydraté, 1011g de chlorhydrate de thiamine, 3pg de biotine, 0,44 mg de borate de sodium décahydraté, 4,85 mg de chlorure ferrique hexahydrate, 1,95 mg de sulfate cuivrique pentahydraté, 0,185 mg d'heptamolybdate d'ammonium tétrahydraté, 44 mg de sulfate de zinc heptahydraté, 0,36 mg de chlorure manganeux tétrahydraté et la quantité de
L-glutamate d'ammonium ou d'acide L-glutamique-7-monohydroxamate indiquée dans les tableaux I et li ci-dessus.
Après 24 h de culture à 300C, on détermine la croissance par mesure de la densité optique du milieu aqueux.
Les milieux de fermentation utilisés dans l'invention sont des milieux classiques contenant des sources de carbone, des sources d'azote, des sels minéraux et, lorsqu'il est nécessaire, d'autres substances nutritives organiques secondaires telles que des vitamines et des aminoacides.
Les sources de carbone utilisées dans la pratique de l'invention sont des sources classiques, telles que les hydrates de carbone (saccharose, glucose, mélasse ou hydrolysat d'amidon), l'acide acétique ou l'éthanol.
On effectue la culture dans les milieux de fermentation de façon classique.
Le bouillon de fermentation obtenu contient des quantités d'acide L-glutamique supérieures à celles accumulées lorsqu'on utilise diverses bactéries connues productrices d'acide
L-glutamique.
L-glutamique.
On peut récupérer l'acide L-glutamique contenu dans le bouillon de fermentation selon divers procédés tels que la préci pitation au point isoélectrique.
L'invention est utilisée par les exemples non limi- tatifs suivants.
EXEMPLE 1
On place, dans des flacons à agitation de 500 ml, des portions de 30 ml d'un milieu de fermentation contenant, par millilitre, 100 mg de sucre de mélasse de canne à sucre, 1 mg de phosphate monopotassique, 1 mg de sulfate de magnésium heptahydraté et du chlorhydrate de thiamine, à pH 7,0 et on chauffe.
On place, dans des flacons à agitation de 500 ml, des portions de 30 ml d'un milieu de fermentation contenant, par millilitre, 100 mg de sucre de mélasse de canne à sucre, 1 mg de phosphate monopotassique, 1 mg de sulfate de magnésium heptahydraté et du chlorhydrate de thiamine, à pH 7,0 et on chauffe.
On ensemence les milieux de fermentation avec les micro-organismes indiqués dans le tableau iii ci-après et on cultive à 31,50C en agitant. Pendant la culture, on introduit,dans les milieux de fermentation, une petite quantité de solution d'urée (contenant 400 mg/ml d'urée) pour maintenir le pH du milieu de fermentation entre 6,5 et 8,0.
Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 des milieux de fermentation atteint 0,3, on ajoute aux milieux 3 mg/ml de polyoxyéthyldnesorbitannemonopalmitate (PESP).
Après 36 h de culture, les quantités d'acide L-glutamique indiquées dans le tableau III ci-après sont accumulées.
TABLEAU III
<tb> Micro- <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> AJ <SEP> ATCC <SEP> <SEP> ATCC <SEP> AJ
<tb> organismes <SEP> 13869 <SEP> 11292 <SEP> 14067 <SEP> 11294 <SEP> 13870 <SEP> 11296 <SEP> 13032 <SEP> 11298
<tb> étudiés
<tb> Rendement <SEP> en
<tb> acide <SEP> L-glu- <SEP> 55 <SEP> 58 <SEP> 49 <SEP> 52 <SEP> 5o <SEP> 52 <SEP> 51 <SEP> 53
<tb> tamique
<tb> en <SEP> en <SEP> poids)
<tb>
EXEMPLE 2
On prépare un milieu aqueux contentant, par millilitre, 50 mg de sucre de mélasse de betterave, 1,0 mg de phosphate monopotassique, 1,0 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, 10 g de sulfate ferreux heptahydraté, 8g de sulfate manganeux tétrahydraté et l/ug de chlorhydrate de thiamine, on ajuste le pH à 7 > 0 et on introduit des portions de 300 ml de ce milieu dans des fermenteurs de 1 litre et on chauffe pour stériliser.
<tb> organismes <SEP> 13869 <SEP> 11292 <SEP> 14067 <SEP> 11294 <SEP> 13870 <SEP> 11296 <SEP> 13032 <SEP> 11298
<tb> étudiés
<tb> Rendement <SEP> en
<tb> acide <SEP> L-glu- <SEP> 55 <SEP> 58 <SEP> 49 <SEP> 52 <SEP> 5o <SEP> 52 <SEP> 51 <SEP> 53
<tb> tamique
<tb> en <SEP> en <SEP> poids)
<tb>
EXEMPLE 2
On prépare un milieu aqueux contentant, par millilitre, 50 mg de sucre de mélasse de betterave, 1,0 mg de phosphate monopotassique, 1,0 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, 10 g de sulfate ferreux heptahydraté, 8g de sulfate manganeux tétrahydraté et l/ug de chlorhydrate de thiamine, on ajuste le pH à 7 > 0 et on introduit des portions de 300 ml de ce milieu dans des fermenteurs de 1 litre et on chauffe pour stériliser.
On ensemence les milieux avec les micro-organismes indiqués dans le tableau IV ci-après et on cultive à 31,5 C en agitant et en aérant. Pendant la culture, on introduit de l'ammoniac gazeux dans les milieux pour maintenir leur pH à 7,8. Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 des milieux de culture atteint 0,3, on ajoute aux milieux 0,5 mg/ml de PESP.
Après 24 h de culture, on détermine l'acide L-glutamique accumulé dans le liquide de culture. Les résultats figurent dans le tableau IV.
TABLEAU iv
<tb> Nicro-organismes <SEP> étudiés <SEP> Rendement <SEP> en <SEP> acide <SEP> L-glutamique
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11293 <SEP> 65%
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13869 <SEP> 60% <SEP>
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11297 <SEP> 54%
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13870 <SEP> 507. <SEP>
<tb>
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11293 <SEP> 65%
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13869 <SEP> 60% <SEP>
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11297 <SEP> 54%
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13870 <SEP> 507. <SEP>
<tb>
EXEMPLE 3
On introduit des portions de 30 mî d'un milieu de culture aqueux contenant, par millilitre, 36 mg de glucose, 2 mg d'urée, 1 ng de phosphate monopotassique, 0,4 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, 10,ug de sulfate ferreux heptahydraté, 8,ug de sulfate manganeux tétrahydraté, 5P1 d'hydrolysa t de protéine de soja, O,1/Cig de chlorhydrate de thiamine et 0,005 g de biotine, dans des flacons à agitation de 500 mî et on chauffe à 115 C pendant 10 min. On ensemence le milieu de culture avec Brevibacterium îactofermentum AJ 11292 ou la forme parente ATCC 13869 et on cultive à 31,50C en agitant.
On introduit des portions de 30 mî d'un milieu de culture aqueux contenant, par millilitre, 36 mg de glucose, 2 mg d'urée, 1 ng de phosphate monopotassique, 0,4 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, 10,ug de sulfate ferreux heptahydraté, 8,ug de sulfate manganeux tétrahydraté, 5P1 d'hydrolysa t de protéine de soja, O,1/Cig de chlorhydrate de thiamine et 0,005 g de biotine, dans des flacons à agitation de 500 mî et on chauffe à 115 C pendant 10 min. On ensemence le milieu de culture avec Brevibacterium îactofermentum AJ 11292 ou la forme parente ATCC 13869 et on cultive à 31,50C en agitant.
Pendant la culture, on introduit dans le milieu une petite portion de solution d'urée (d 450 mg/ml) pour maintenir le pH du milieu entre 6,5 et 8,0. Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 du milieu de culture atteint 0,3, on ajoute 3 mg/ml de PESP au milieu de culture.
La souche M 11292 produit 19,8 mg/dl d'acide
L-glutamique dans le liquide de culture et la souche ATCC 13869 en produit 18,7 mg/dl.
L-glutamique dans le liquide de culture et la souche ATCC 13869 en produit 18,7 mg/dl.
EXEMPLE 4
On introduit dans des flacons h agitation de 500 ml des portions de 30 ml d'un milieu de culture contenant, par millilitre, 100 mg de sucre brut, 1 mg de phosphate monopotassique, 0,4 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, lOpg de sulfate ferreux heptahydraté, 8,ug de sulfate manganeux tétrahydraté, 5 mg d'urée et 5/ul d'hydrolysat acide de protéine de soja et on chauffe pour stériliser.
On introduit dans des flacons h agitation de 500 ml des portions de 30 ml d'un milieu de culture contenant, par millilitre, 100 mg de sucre brut, 1 mg de phosphate monopotassique, 0,4 mg de sulfate de magnésium heptahydraté, lOpg de sulfate ferreux heptahydraté, 8,ug de sulfate manganeux tétrahydraté, 5 mg d'urée et 5/ul d'hydrolysat acide de protéine de soja et on chauffe pour stériliser.
On ensemence le milieu de culture avec la souche
AJ 11299 ou la souche ATCC 13032 et on cultive à 31,5 C en agitant.
AJ 11299 ou la souche ATCC 13032 et on cultive à 31,5 C en agitant.
Pendant la culture, on introduit une petite portion d'une solution à 400 mg/ml d'urée pour maintenir le pH du milieu entre 6,5 et 8,0. Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 du milieu atteint 0,30, on ajoute au milieu 3 mg/ml de PESP.
Après 30 h de culture, la souche AJ 11299 a produit 50 mg/ml d'acide L-glutamique dans le milieu de culture et la souche
ATCC 13032 en a produit 48 mg/ml.
ATCC 13032 en a produit 48 mg/ml.
EXEMPLE 5
On cultive BrevibacteriumlactofermentumM 11292 dans 300 ml d'un milieu de culture d'ensemencement suivant contenu dans un fermenteur de 1 litre.
On cultive BrevibacteriumlactofermentumM 11292 dans 300 ml d'un milieu de culture d'ensemencement suivant contenu dans un fermenteur de 1 litre.
Milieu de culture d'ensemencement glucose 5,0 g/dl
KH2PO4 0,1 g/dl
MgSO4,7R2O 40 mg/dl
FeSO4,7H2O 1,0 mg/dl
MnSO4,4H2O 1,0 mg/dl hydrolysat de protéine de soja 24 mg/dl (en azote total) urée 0,2 g/dl biotine 30/1/dl thiamine,HCl 20 g/dl
On introduit 300 ml du milieu de culture suivant dans un fermenteur de 1 litre et on chauffe pour stériliser : mélasse de canne à sucre 6,0 g/dl (en sucre) RH2P04 0,2 g/dl
MgSO4,7H2O 80 mg/dl
FeSO4,7H2O 2,0 mg/dl
Hydrolysat de protéine de soja 6,8 mg/dl (en azote total) thiamine,HCl 20rg/dl
On transfère 15 ml du bouillon de culture d'ensemencement ci-dessus dans 300 ml de milieu de culture et on cultive à 31,50C en ajustant le pH du milieu à 7,8.Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 du milieu de culture atteint 0,45, on introduit dans le milieu 0,4 g/dl de PESP. Pour maintenir la concentration en sucre entre 2 et 4 g/dl, on introduit de la mélasse de canne à sucre contenant 45 g/dl de sucre.
KH2PO4 0,1 g/dl
MgSO4,7R2O 40 mg/dl
FeSO4,7H2O 1,0 mg/dl
MnSO4,4H2O 1,0 mg/dl hydrolysat de protéine de soja 24 mg/dl (en azote total) urée 0,2 g/dl biotine 30/1/dl thiamine,HCl 20 g/dl
On introduit 300 ml du milieu de culture suivant dans un fermenteur de 1 litre et on chauffe pour stériliser : mélasse de canne à sucre 6,0 g/dl (en sucre) RH2P04 0,2 g/dl
MgSO4,7H2O 80 mg/dl
FeSO4,7H2O 2,0 mg/dl
Hydrolysat de protéine de soja 6,8 mg/dl (en azote total) thiamine,HCl 20rg/dl
On transfère 15 ml du bouillon de culture d'ensemencement ci-dessus dans 300 ml de milieu de culture et on cultive à 31,50C en ajustant le pH du milieu à 7,8.Lorsque la densité optique à 562 nm d'une dilution au 1/26 du milieu de culture atteint 0,45, on introduit dans le milieu 0,4 g/dl de PESP. Pour maintenir la concentration en sucre entre 2 et 4 g/dl, on introduit de la mélasse de canne à sucre contenant 45 g/dl de sucre.
Lorsqu'on poursuit la culture pendant 33 h, on introduit 170 ml de mélasse de canne à sucre et on utilise 20,1 g/dl de sucre.
On cultive Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869 selon le procédé ci-dessus. Les résultats figurent dans le tableau V ci-après.
TABLEAU V
<tb> <SEP> Acide <SEP> L-glutamique <SEP> Rendement
<tb> <SEP> accumulé <SEP> (en <SEP> poids)
<tb> Brevibacterium
<tb> lactofermentum
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11292 <SEP> 9,84 <SEP> g/dl <SEP> 48,0% <SEP>
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13869 <SEP> 9,21 <SEP> g/dl <SEP> 45,8%
<tb>
Bien entendu, diverses modifications peuvent autre apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent entre décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention.
<tb> <SEP> accumulé <SEP> (en <SEP> poids)
<tb> Brevibacterium
<tb> lactofermentum
<tb> <SEP> AJ <SEP> 11292 <SEP> 9,84 <SEP> g/dl <SEP> 48,0% <SEP>
<tb> <SEP> ATCC <SEP> 13869 <SEP> 9,21 <SEP> g/dl <SEP> 45,8%
<tb>
Bien entendu, diverses modifications peuvent autre apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent entre décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention.
Claims (1)
- REVENDICATIONProcédé pour produire de l'acide L-glutamique par fermentation, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver en aérobiose dans un milieu aqueux, un mutant provenant d'un micro-organisme producteur d'acide L-gîutamique appartenant aux genres Brevibacterium ou Corynebacterium, ce mutant résistant à l'acide glutamique ou aux analogues de l'acide glutamique} et a recueillir l'acide L-glutamique accumulé dans le milieu aqueux.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7930382A FR2471408A1 (fr) | 1979-12-11 | 1979-12-11 | Procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7930382A FR2471408A1 (fr) | 1979-12-11 | 1979-12-11 | Procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2471408A1 true FR2471408A1 (fr) | 1981-06-19 |
| FR2471408B1 FR2471408B1 (fr) | 1984-06-08 |
Family
ID=9232653
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR7930382A Granted FR2471408A1 (fr) | 1979-12-11 | 1979-12-11 | Procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2471408A1 (fr) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2248320A1 (fr) * | 1973-10-17 | 1975-05-16 | Ajinomoto Kk | |
| FR2413465A1 (fr) * | 1977-12-27 | 1979-07-27 | Ajinomoto Kk | Procede de production d'acide l-glutamique par fermentation |
-
1979
- 1979-12-11 FR FR7930382A patent/FR2471408A1/fr active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2248320A1 (fr) * | 1973-10-17 | 1975-05-16 | Ajinomoto Kk | |
| FR2413465A1 (fr) * | 1977-12-27 | 1979-07-27 | Ajinomoto Kk | Procede de production d'acide l-glutamique par fermentation |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| EXBK/72 * |
| EXBK/75 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2471408B1 (fr) | 1984-06-08 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |