FR2464074A1 - Production de vaccin a base d'une substance biologiquement active, conjuguee avec une saccharide - Google Patents
Production de vaccin a base d'une substance biologiquement active, conjuguee avec une saccharide Download PDFInfo
- Publication number
- FR2464074A1 FR2464074A1 FR8019109A FR8019109A FR2464074A1 FR 2464074 A1 FR2464074 A1 FR 2464074A1 FR 8019109 A FR8019109 A FR 8019109A FR 8019109 A FR8019109 A FR 8019109A FR 2464074 A1 FR2464074 A1 FR 2464074A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- saccharide
- vaccine
- toxin
- solution
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 55
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 title description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims abstract description 14
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 claims abstract description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 25
- -1 polysucrose Polymers 0.000 claims description 21
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 claims description 20
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 claims description 20
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 claims description 16
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 claims description 6
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 claims description 5
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 claims description 5
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 claims description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 claims description 3
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N (2s,3s,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[(2r,3s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](OC3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N 0.000 claims description 2
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 claims description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 claims description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 claims description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 2
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 claims description 2
- 229920002581 Glucomannan Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 2
- PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N Succinic aldehyde Chemical compound O=CCCC=O PCSMJKASWLYICJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 claims description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 claims description 2
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 claims description 2
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 2
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 claims description 2
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 claims description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229940046240 glucomannan Drugs 0.000 claims description 2
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 claims description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 claims description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 2
- 229960000292 pectin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930000184 phytotoxin Natural products 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 2
- DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N toluene 2,4-diisocyanate Chemical compound CC1=CC=C(N=C=O)C=C1N=C=O DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002435 venom Substances 0.000 claims description 2
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 claims description 2
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 claims description 2
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 claims description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- PUKLCKVOVCZYKF-UHFFFAOYSA-N 1-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1CCN1C(=O)C=CC1=O PUKLCKVOVCZYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000271039 Agkistrodon Species 0.000 claims 1
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 claims 1
- 229920002558 Curdlan Polymers 0.000 claims 1
- 239000001879 Curdlan Substances 0.000 claims 1
- 244000007835 Cyamopsis tetragonoloba Species 0.000 claims 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 claims 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006149 azo coupling reaction Methods 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims 1
- 235000019316 curdlan Nutrition 0.000 claims 1
- 229940078035 curdlan Drugs 0.000 claims 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 claims 1
- 229920000591 gum Polymers 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 29
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 29
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 21
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 21
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 abstract description 8
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 abstract description 7
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 abstract description 4
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 abstract 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 45
- 239000000047 product Substances 0.000 description 31
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 101000911019 Homo sapiens Zinc finger protein castor homolog 1 Proteins 0.000 description 11
- 102100026655 Zinc finger protein castor homolog 1 Human genes 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000015864 Protobothrops flavoviridis Species 0.000 description 8
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 5
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 229940031572 toxoid vaccine Drugs 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002096 anti-tetanic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000027326 copulation Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 229960005097 diphtheria vaccines Drugs 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SKDHHIUENRGTHK-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzoyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(C(Cl)=O)C=C1 SKDHHIUENRGTHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000039077 Copula Species 0.000 description 1
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090898 Desensitizer Drugs 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000271042 Gloydius halys Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000920340 Pion Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000271577 Trimeresurus Species 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002799 interferon inducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 231100000668 minimum lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000021178 picnic Nutrition 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229960002766 tetanus vaccines Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/961—Chemistry: molecular biology and microbiology including a step of forming, releasing, or exposing the antigen or forming the hapten-immunogenic carrier complex or the antigen per se
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/855—Proteins from animals other than mammals or birds
- Y10S530/856—Snakes; venom
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
PREPARATION DE VACCINS PEU TOXIQUES, N'ENTRAINANT PAS DE REACTIONS ALLERGIQUES OU DE CHOCS ANAPHYLACTIQUES. ELLE CONSISTE A REALISER, ENTRE LA SUBSTANCE BIOLOGIQUEMENT TOXIQUE ET UN SACCHARIDE, UNE LIAISON DE COVALENCE. LE PRODUIT DE CONJUGAISON SUBSTANCE BIOLOGIQUEMENT TOXIQUE-SACCHARIDE AINSI OBTENU, ENTRAINE LA PRODUCTION DE QUANTITES BEAUCOUP PLUS IMPORTANTES QUE LES VACCINS CLASSIQUES, D'IMMUNOGLOBULINES G ET M, ET LA DISPARITION PRESQUE TOTALE D'IMMUNOGLOBULINE E. EN OUTRE, LA DESINTOXICATION AINSI OBTENUE DE LA TOXINE DE DEPART NE DEMANDE QUE 2 A 3JOURS AU MAXIMUM AU LIEU DE 20 A 90JOURS DANS LES PROCEDES CLASSIQUES DE PREPARATION DE VACCINS.
Description
La présente invention concerne un procédé de pré-
paration de vaccins comportant des quantités élevées d'im-
munoglobulines G et M, mais pratiquement dépourvus d'immu-
noglobuline E, anticorps responsables d'allergies et de chocs anaphylactiques.
En général, les vaccins sont préparés par sup-
pression de la toxicité ou inactivation de substances bio-
logiquement toxiques hautement purifiées, à l'aide d'un
réactif, comme formaldéhyde ou f-propiolactone, qui ne di-
0lo minue pas leur activité immunologique; ces vaccins sont
utilisés pour la prévention, le traitement et l'essai cli-
nique, de différentes maladies. La production d'anticorps
comme les immunoglobulines G et M, qui empêchent l'infec-
tion de se développer, est, lorsqu'on prépare les vaccins selon des procédés classiques, beaucoup plus diminuée en comparaison de celle de substances intactes, biologiquement
toxiques; l'administration de ces vaccins entraîne en ou-
tre la production d'immunoglobuline E responsable d'aller-
gies et/ou de chocs anaphylactiques.
La présente invention permet d'éviter ces incon-
vénients de l'art antérieur et d'éliminer complètement ou presque la tendance à produire de l'immunoglobuline E, sans qu'il y ait diminution de production d'immunoglobulines-G
et M, qui empêchent l'infection.
Le nouveau procédé selon l'invention consiste à
préparer, par la fixation covalente d'une substance biolo-
giquement toxique à un saccharide, un produit de conjugai-
son substance biologiquement toxique-saccharide qui permet
l'inactivation de ladite substance.
La substance biologiquement toxique, utilisée conformément à l'invention, qui contient généralement une
protéine toxique, anatoxine protéinique et/ou enzymes toxi-
ques, comme collagénase ou protéase, comprend des toxines bactériennes comme celles de la diphtérie, du tétanos, de
la gangrène gazeuse, du choléra, ainsi que la toxine botu-
lique, qui provoquent des maladies chez l'homme et/ou les animaux, des zootoxines, y compris des venins comme ceux
d'Agkistrodon halys, Trimeresurus flavoviridis et scor-
pion, et des phytotoxines comme le ricin.
Les saccharides, utilisés selon l'invention, com-
prennent des mono-, di-, oligo- et poly-saccharides, comme amidon, amylose, dextrane, polysucrose (par exemple "Ficoll" fabriqué par Pharmacia Fine Chemicals AB, en Suède), pullu- lane, elsinane, curdlane, gomme arabique, gomme adragante,
gomme guar, gomme de xanthane, carraghénane, pectine, cellu-
lose, glucomannane, chitosane, ainsi que leurs dérivés et produits d'hydrolyse partielle, ayant un poids moléculaire moyen compris dans l'intervalle de 100 à 10 000 000, et de
préférence 500 à 1 000 000. Plus particulièrement, la liai-
son de covalence de la substance biologiquement toxique avec pullulane, elsinane ou leurs produits d'hydrolyse partielle,
rend non toxique avantageusement ladite substance, et aug-
mente de façon remarquable la production originale des an-
ticorps tels qu'immunoglobulines G et M, mais par contre, élimine nettement la production d'immunoglobuline E. Conformément à l'invention, on peut utiliser, pour réaliser la liaison de covalence entre ladite substance et le saccharide, tout mode opératoire tel que de préférence:
copulation diazorque, procédé peptidique, procédé par alky-
lation, réticulation, et copulation par disulfure.
La copulation diazolique implique une réaction de
copulation de la substance avec un saccharide diazoté, por-
tant un ou plusieurs types de groupements aminoaromatiques choisis parmi les suivants: p-aminobenzyle, m-aminobenzyle, p-aminobenzoyle, maminobenzoyle, m-aminoanisoyle, p-amino benzyloxy méthyle, (paminophénoxy)-3 hydroxy-2 propionyle, (p-amino m-methyl anilino)-3 chloro5 triazinyle,- que l'on
peut introduire par des procédés classiques.
Le procédé peptidique met en jeu une réaction de la substance avec un saccharide activé comme les saccharides activés par BrCN, carbonates de sucre, et les dérivés, azide d'acide, halogénure d'acide, carbodiimide et isocyanate de
saccharides portant un groupement carboxylique.
Le procédé par alkylation implique une réaction
entre la substance en question et un dérivé halogénure d'al-
kyle de saccharides portant un groupement fonctionnel, tels que chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle, halogénure de triazinyle, etc.
Le procédé de réticulation est réalisé en présen-
ce de la substance et de réactif polyfonctionnel comme glu-
taraldéhyde, glyoxal, succindialdéhyde, diisocyanate d'hexa- méthylène, diisocyanate de toluène-2,4, bis-azobenzidine ou
NN'N-éthylène bis-maléimide.
Le rapport pondéral entre la substance biologique-
ment toxique et le saccharide, pour la réaction de conjugai-
O10 son, est en général compris dans l'intervalle de 1/1000 à
1000, de préférence de 1/100 à 100, conformément à l'inven-
tion. Dans ce cas, la substance biologiquement toxique et le saccharide, respectivement, ne sont pas limités à une
seule variété: la conjugaison utilisant une variété de subs-
tance biologiquement active, peut impliquer 2 ou plusieurs variétés de saccharides, et celle qui utilise une variété de
saccharide peut impliquer 2 ou plusieurs variétés de substan-
ces biologiquement toxiques pour produire un vaccin mixte; de même, conformément à l'invention, on peut utiliser 2 ou
plusieurs variétés aussi bien de saccharides que de subs-
tances biologiquement toxiques.
Les conditions de réaction ne sont pas critiques, pourvu que le produit, résultant de la conjugaison de la substance biologiquement toxique avec le saccharide, ne soit
pas toxique, et que ces conditions fassent décroître consi-
dérablement la production d'immunoglobuline E, sans entraP-
ner une baisse notable de la production des immunoglobulines
G et M. On réalise, par exemple, cette conjugaison à une tem-
pérature de 0O à 1000C, un pH de l'ordre de 3 à 12, pendant
une durée de 6 minutes à 50 heures.
Les produits de conjugaison, substance biologique-
ment toxique-saccharide, ainsi obtenus, sont généralement soumis à des procédés de purification et de séparation, tels que filtration, lavage, centrifugation, relargage, dialyse, adsorption et désorption par échangeur d'ions, filtration sur gel, chromatographie par échange d'ions, chromatographie par
affinité et électrophorèse; ils sont ultérieurement concen-
trés sous forme de sirops ou de liquides, ou bien séchés pour
2464074 -
donner des poudres, qui constituent le vaccin.
Pour la désensibilisation de l'induction d'inter-
feron chez l'homme ou l'animal, le vaccin est utilisé avan-
tageusement seul, ou en combinaison avec d'autres substan-
ces comme agents-antiseptiques ou adjuvants. De plus, la production de vaccin selon le procédé classique, utilisant le formaldéhyde, nécessite généralement une période de 20 à 90 jours pour l'inactivation, ce qui constitue -un danger
de possibilité de régénération de toxicité potentielle.
Par contre, bien que le procédé selon l'invention ne demand-
de que 1 à 2 jours pour l'inactivation, le produit est très
stable sur une longue durée d'entreposage, sans danger.
Ainsi, les dispositions à prendre, concernant la prédomi-
nance des maladies, sont considérablement facilitées. De
plus, comme la production du vaccin élimine les choc ana-
phylactique et allergie léthale dues à la souillure par des protéines, il n'est plus nécessaire d'avoir comme matière
première hautement purifiée, ccmmie une substance biologique-
ment toxique. Par conséquent, le procédé selon l'invention
permet une inactivation directe de la substance, sans sta-
des préalables de purification, d'o réduction du coût et obtention de quantités suffisantes de vaccin. On constate également que le vaccin, produit à partir d'une substance brute, possède une activité immunogénique égale ou même bien supérieure à celle des vaccins préparés à partir de
substances hautement purifiées.
Les exemples non limitatifs suivants, constituent
des formes de réalisation préférées de l'invention et per-
mettent de la mieux comprendre.
EXEMPLE 1
VACCIN ANTITETANIQUE
) Préparation de la toxine tétanique
On prépare la toxine tétanique selon le mode opératoire dé-
crit dans "Japan J. Med. Sci. Biol.", vol. 14, page 121 (1961); on ensemence 100 litres de milieu P II avec une souche Harbard A 47, puis on cultive le mélange résultant
à 350C pendant 7 jours.
A la partie surnageante du bouillon de culture, obtenue par centrifugation, on ajoute une solution aqueuse de chlorure de zinc à 50 % en poids/volume, et l'on extrait la toxine
à partir du précipité formé, à l'aide d'une solution aqueu-
se de phosphate disodique, puis on additionne l'extrait avec du sulfate d'ammonium pour obtenir une saturation de
à 60 %, et on recueille ultérieurement le précipité for-
mé. Par dissolution de ce précipité dans de l'eau distillée,
on obtient une solution brute de toxine tétanique.
Cette anatoxine brute est alors purifiée à l'aide d'un sys-
tème de colonne de gel de dextrane et de colonne échangeuse d'ions, avec respectivement du Sephadex G-100 (fabriqué par Pharmacia Fine Chemicals AB, en Suède) et de la cellulose
DEAE, ce qui permet d'obtenir une toxine tétanique haute-
ment purifiée, ayant une Lf de 3 000 par mg d'azote protéi-
nique. Une unité Lf est définie comme la quantité de toxine ou d'anatoxine qui, mélangée avec 1 unité d'anti-toxine,
produit le plus rapidement la réaction de floculation.
2 ) Préparation du produit de conjugaison toxine-pullulane.
On ajuste à pH 10,7 avec de la soude iN, une solution de pullulane préparée avec 400 ml d'eau et 5 g de pullulane de
poids moléculaire moyen de l'ordre de 140 000. Tout en main-
tenant le pH à ce niveau, on ajoute peu-à-peu au mélange 3g de BrCN, et l'on poursuit la réaction pendant 1 heure pour activer le pullulane, puis on ajuste la valeur du pH à 5 au
moyen de HCl iN et on dialyse ensuite le mélange réaction-
nel contre de l'eau glacée, à pH 5.
On ajoute à la solution de pullulane, ainsi activée, 200 ml
de solution de toxine tétanique hautement purifiée, prépa-
rée comme plus haut, et on laisse la réaction de conjugai-
son se faire à temnpérature ambiante pendant 24 heures.
Lorsque cette réaction est terminée, on ajoute au mélange
réactionnel 3 volumes d'acétone, et on recueille le préci-
pité résultant. Puis on dissout ce dernier dans un tampon de phosphate 0, 01 M (pH 7) et on centrifuge pour éliminer
les substances insolubles. La partie surnageante est sou-
mise à une filtration sur gel, pour recueillir la fraction contenant le produit de conjugaison toxine-pullulane, et cette fraction est filtrée sur filtre Millipore (fabriqué
par Millipore Inc. aux U.S.A.) pour donner un vaccin d'ana-
toxine tétanique avec un rendement de 70 % environ par rap-
port à la protéine de la toxine de départ.
Conformément au procédé classique, on prépare un vaccin té-
moin par addition d'une solution de formaldéhyde du codex à ml de solution de toxine tétanique hautement purifiée, jusqu'à une concentration finale de 0,4 % en volume/volume, et on laisse reposer 3 semaines à 370C. Le rendement, par
rapport à la protéine de la toxine de départ, est de l'or-
dre de 60 %.
) Essai d'administration chez l'animal.
L'essai d'administration chez la souris montre que la toxi-
cité de la toxine est abaissée à environ 1/50 000 par la
conjugaison selon l'invention, et que la dose léthale mini-
male (DLM) est de l'ordre de une à plusieurs fois supérieure par Lf. De plus, on effectue chez la souris des injections
intraveineuses de vaccin témoin et de vaccin selon l'inven-
tion, à raison de 10 Lf, et on répète l'injection à la mê-
me dose 7 jours plus tard. 10 jours après la dernière admi-
nistration, les souris sont saignées et les titres des anti-
corps sont déterminés, ceux des immunoglobulines G et M par la réaction d'hémoagglutination passive (HAP) décrite dans Japan J. Med. Sci. Biol. vol. 28, page 127 (1975), et ceux
de l'immunoglobuline E par la réaction d'anaphylaxie cuta-
née passive (ACP) décrite dans Life Science, vol. 8, page
813 (1969). Ces essais révèlent que l'administration du vac-
cin, préparé conformément à l'invention, conduit à une pro-
duction environ 12 fois supérieure d'immunoglobulines G et M, comparée à la production obtenue avec le vaccin témoin, et que l'on ne peut détecter d'immunoglobuline E dans le
cas du vaccin selon l'invention.
Il ressort de ce qui précède que la conjugaison donne de
bons résultats dans le cas du vaccin antitétanique.
EXEMPLE 2
VACCIN D'ANATOXINE DIPHTERIQUE
) Préparation de la toxine diphtérique.
La toxine diphtérique est préparée selon le mode opératoire
décrit dans Journal of Immunology, vol. 40, pp. 21-32 (1941).
On ensemence dans 20 litres de milieu de Mueller & Miller,
de la souche NO 8 de Park Williams, puis on cultive pen-
dant 48 heures le mélange résultant à 35OC, sous agitation
et dans des conditions aérobiques.
Après centrifugation du bouillon de culture, la partie sur-
nageante (pH 8,4) est refroidie à 40C, et additionnée peu-
à-peu avec une solution aqueuse à 50 % en poids/volume de
chlorure de zinc, pour obtenir un pH de 6; après centri-
fugation du mélange, on recueille le précipité que l'on dissout dans 1/10 de son volume d'une solution à 25 % en
poids/volume de Na2HPO4.12H20, et on laisse reposer la so-
lution résultante une heure durant à 350C, avant de centri-
fuger.
On additionne la partie surnageante de 0,3 % en poids/vo-
lume de charbon activé et à 40 % de saturation de sulfate d'ammonium, puis le mélange est abandonné pendant 3 heures; il est ensuite soumis à la filtration. Le filtrat obtenu est à nouveau additionné de sulfate d'ammonium, à 60 % de saturation, abandonné une nuit durant, puis le mélange est
centrifugé et le précipité recueilli. On dissout ce préci-
pité dans 700 ml de tampon phosphate M/15 (pH 8) et l'on soumet à une chromatographie par échange d'ions et à une filtration sur gel. On obtient ainsi une toxine diphtérique
(environ 3 000 Lf/ml).
20) Préparation du produit de conjugaison toxine diphtéri-
que-pullulane. Une solution activée de pullulane, préparée par le procédé décrit dans l'exemple 1, est ajustée à pH 8 avec du tampon
carbonate 0,05 M et on y ajoute 200 ml de solution de toxi-
ne diphtérique. La solution résultante est soumise, à tem-
pérature ambiante pendant 24 heures, à la réaction de con-
jugaison, et le produit de conjugaison formé est purifié et séparé comme décrit dans l'exemple 1, ce qui donne, avec un
rendement de 70 % par rapport à la toxine de départ, un vac-
cin antidiphtérique.
Un vaccin témoin est préparé par addition d'une solution de forme aldéhyde codex à 50 ml de solution de toxine préparée au (1) de cet exemple, à une concentration finale de l'ordre de 0,4 % en volume/volume; on laisse reposer 5 semaines à 370C, dialyse pendant 2 jours, et soumet à filtration par Millipore. Le rendement par rapport à la protéine de la
toxine de départ, est voisin de 60 %.
-30) Essai d'administration du vaccin chez l'animal. L'administration de 0,02 Lf de vaccin témoin, dilué avec de la solution saline physiologique, à des cobayes pesant
300 g environ, aboutit à leur mort. Par contre, l'adminis-
tration du vaccin préparé conformément à l'invention (envi-
ron 500 Lf) ne provoque aucun décès. La détermination des titres en immunoglobulines G et M, selon le procédé décrit dans l'exemple 1, indique que la conjugaison les multiplie
par 10, par rapport au témoin, et qu'il n'y a pas de pro-
duction détectable d'immunoglobuline E. On constate égale-
ment, après immunisation avec 1 ml de vaccin témoin addi-
tionné de 1 mg d'adjuvant hydroxyde d'aluminium, une quan-
tité considérable d'immunoglobuline E aussi bien que d'im-
munoglobulines G et M.
Il résulte de ces résultats que le produit selon l'inven-
tion convient comme vaccin antidiphtérique, puisqu'il n'y
a aucun danger d'allergie ou de choc anaphylactique.
EXEMPLE 3
VACCIN D'ANATOXINE DIPHTERIQUE
Une solution d'elsinane, préparée avec 200 ml d'eau chaude
et 8 g d'elsinane, de masse moléculaire moyenne aux envi-
rons de 800 000, est refroidie à la température ambiante, puis est additionnée de 40 ml de chlorure cyanurique à 10%
en poids/volume dans de la diméthyl formamide, puis soumi-
se à cette température pendant 2 heures à une réaction d'ac-
tivation, le pH étant maintenu à 7. Lorsque la réaction est terminée, le mélange réactionnel est dialysé contre de
l'eau à 40C, le pH étant toujours maintenu à la même valeur.
On obtient ainsi une solution d'elsinane activée.
A cette solution sont ajoutés 45 ml de solution de toxine diphtérique, afin que s'effectue la réaction de conjugaison,
et l'on poursuit la réaction pendant 2 heures à pH 9 à tem-
pérature ambiante, sous agitation. Le mélange réactionnel est purifié et séparé comme décrit dans l'exemple 1, et l'on
2464074-
obtient, avec un rendement de 60 % par rapport à la toxine
de départ, un vaccin antidiphtériquae.
L'étude de l'administration de ce vaccin à des souris, con-
formément au procédé de l'exemple 1, démontre que la toxine est suffisamment inactivée par la conjugaison. La détermina- tion des titres d'immunoglobulines G et M indique également que la conjugaison multiplie par 10 environ la valeur des titres du témoin préparé dans l'exemple 2, et qu'on ne peut détecter de production d>immunoglobuline E. Les résultats ci-dessus conduisent à la conclusion que le
produit de conjugaison convient comme vaccin antidiphtAri-
que.
EXEMPLE 4
VACCIN rD P.iTRIQUE Un vaccin d'anatoxine diphtérique est préparé commne dans l'exemple 2, le pullulane de masse moléculaire moyenne de
l'ordre de 140 000 étant remplacé par du dextrane de mas-
se moléculaire moyenne voisine de 70 000. Le rendement est de l'ordre de 40 % par rapport à la protéine de la toxine
de départ.
L'étude de l'administration de ce vaccin aux souris, con-
formément au procédé décrit dans l'exemple 1, indique que la toxine est suffisamment inactivée par la conjugaison La détermination des titres des immunoglobulines G et M démontre également que la conjugaison multiplie par 5 la valeur des titres obtenus avec le vaccin témoin, préparé
dans l'exemple 2, et quail n'y a pas de production déce-
lable d'immunogiobuline E. 11 découle de ces résultats que ce produit de conjugaison
convient commte vaccin antidiphtérique.
EXEMPLE 5
VACCIN D'ANATOXINE DE Trimeresurus flavoviridis
1.) Préparation de la toxine de Tximeresurus flavoviridis.
De la toxine solide de Trimeúesurus flavoviridis est dis-
soute dans du tampon Tris-HCl 0,02 M (pH 8,5) de façon à aboutir à une concentration finale de l'ordre de 5 %' en
poids/volume, puis le mélange est centrifugé pour élimi-
ner les substances insolubles. La partie surnageante est Io utilisée dans ce qui suit, corme toxine brute deTrimeresurus flavoviridis.
) Préparation du produit de conjugaison toxine de Trimere-
surus flavoviridis-hydrolysat partiel de pullulane.
Une solution de pullulane, préparée par chauffage de 110 ml
de diméthylformnamide et 5,2 g d'hydrolysat partiel de pul-
lulane de masse moléculaire moyenne de l'ordre de 10 000, est refroidie à température ambiante, puis additionnée de ml de pyridine et 1 g de chlorure de p-nitrobenzoyle, O10 sous agitation, et on laisse ensuite reposer la solution résultante à température ambiante pendant 17 heures. A ce mélange réactionnel, on ajoute 2 volumes de n-propanol, et
le précipité formé est recueilli et dissous dans de la di-
mAthyl form-amide. On répète à 3 reprises ce mode de préci-
* pitation, et le précipité final est dissous dans 100 ml de solution à 5 % en poids/volume de dithionite de sodium et
on laisse incuber 30 minutes à 80 C.
Le produit résultant est décoloré avec du charbon activé,
filtré, et le filtrat est additionné de 2 volumes de n-
propanol. Le précipité est dissous dans de l'eau, et la solution résultante est dialysée une nuit durant contre de l'eau, puis le dialysat est refroidi au-dessous de 20C et additionné de HCl jusqu'à une concentration finale de 0,1 N. -A cette solution on ajoute du nitrite de sodium à
la concentration de 1 % en poids/volume environ, pour dia-
zoter l'hydrolysat partiel de pullulane. Lorsque cette ré-
action de diazotation est terminée, le produit résultant est dialysé contre de l'eau en dessous de 4 C, pendant 2
heures. On obtient ainsi un hydrolysat partiel de pullu-
lane diazoté.
A cette solution d'hydrolysat partiel de pullulane diazoté on ajoute 20 ml de la solution de toxine préparée au (1) de cet exemple, puis on ajuste à pH 8,5 avec du carbonate
de sodium. Ce mélange est soumis à une réaction de copula-
tion diazo'que à 4oc, pendant 2 heures, sous agitation, puis le mélange réactionnel est purifié et séparé comme au (2) de l'exemple 1, pour obtenir le produit de conjugaison toxine de Trimeresurus flavoviridishydrolysat partiel de il pullulane avec un rendement voisin de 60 % rapporté à la
protéine toxique de départ.
O -prépare un vaccin témoin par addition d'une solution de
formaldéhyde du codex à 0,05 % en volume/volume, à la so-
lution de toxine préparée au (1) du présent exemple, on laisse reposer 60 jours à 40C pour inactiver la toxine, on centrifuge, puis on filtre sur Millipore. Dans ce cas,
le rendement rapporté à la toxine de départ est de l'or-
dre de 50 %.
1Q 30) Essai d'administration du vaccin à l'animal.
L'étude de l'administration à des souris, conformément au procédé décrit au (3) de l'exemple 1, du vaccin témoin et du vaccin selon l'invention, démontre que la conjugaison
inactive suffisamment la toxine. En outre, la détermina-
tion des titres d'immunoglobulines G et M, indique qu'ils sont 5 fois plus élevés que ceux qui sont obtenus avec le témoin, et que, dans le cas du vaccin selon l'invention, on ne peut déceler de production d&immunoglobuline E. Par contre, lorsqu'on utilise le vaccin témoin on détecte,
outre la production des immlnoglobulines G et M, une net-
te formaeion d'immunoglobuline E.
Il ressort des résultats ci-dessus, et du fait que l'ad-
ministration du produit de conjugaison n'entraîne ni al-
lergie, ni choc anaphylactique, que ce produit de conju-
gaison peut être avantageusement utilisé comme vaccin con-
tre Trimeresurus flavoviridis.
EXEFMPLE 6
VACCIN D'ANATOXINE DE Trimeresurus-flavoviridis Une solution d'elsinane, préparée par chauffage de 200 ml d'eau distillée-et 10 g d'elsinane de poids moléculaire moyen de l'ordre de 200 000, est refroidie à température ambiante, puis additionnée de 5 g d"'hexaméthylène diamine, et ensuite son pHli est ajusté à 11 avec de la soude 1 N. On ajoute alors peu à peu à cette solution, sous agitation, maintenue au-dessous de 200C par addition de glace, 5 g de BrCN. La réaction est poursuivie pendant 30 minutes sous agitation, puis le mélange réactionnel est dialysé contre de l'eau distillée à 40C pendant 1 heure, et l'on obtient une solution d'elsinane activée-. A cette solution d'elsinane activé, on ajoute 2 ml de solution aqueuse de glutaraldéhyde à 25 % en poids/volume, 60 ml de solution de toxine brute de Trimeresurus flavoviridis préparée comme au (1) de l'exemple 5, et 10 ml de tampon acétate 1M (pH 5); on laisse se dérou- ler la réaction de conjugaison à 4 C, pendant 24 heures, sous agitation, puis on ajoute de la glycine jusqu'à une
concentration voisine de 1M et on laisse reposer à tempé-
rature ambiante pendant 24 heures, afin de bloquer les grou-
pements actifs n'ayant pas réagi. Le mélange réactionnel est ensuite centrifugé et la partie surnageante est soumise à
une filtration sur gel, afin de recueillir la fraction con-
tenant le produit de conjugaison toxine-elsinane; cette fraction est concentrée puis filtrée sur Millipore, et on obtient ainsi, avec un rendement voisin de 50 %' rapporté à la toxine de départ, un vaccin d'anatoxine de TrimeresUruS flavoviridis.
L'étude de l'administration à des souris de ce vaccin, con-
formément au procédé décrit au (3) de l'exemple 1, démontre
que la toxine est suffisamment désactivée' par la conjugaison.
De plus, après détermination des titres d'imnmunoglobulines G et M,on constate que ces titres sont multipliés par 8 par la
conjugaison, par rapport à ceux que l'on obtient avec le vac-
cin témoin préparé au (2) de l'exemple 5; en outre, on ne peut déceler de production d'immunoglobuline E. En conséquence, ce produit de conjugaison convient comme
vaccin d' anatoxine de Trimeresurus flavoviridis.
EXPMPLE 7
VACCIN D'ANATOXINE de TTimeresurus flavoviridis Une solution de carboxyméthyl cellulose activée, préparée
par addition de 2 g de méthiodure d'éthyl-1 (diméthylamino-
3'propyl)-3 carbodiimide à 200 ml d'une solution à 1 % en poids/volume de carboxyméthyl cellulose de poids moléculaire moyen de l'ordre de 20 000, ajustement du pH à 4, réaction
d'activation à température ambiante sous agitation, et dia-
lyse du mélange réactionnel contre de l'eau distillée une nuit durant, est additionnée avec 50 ml de la solution de toxine préparée au produit (1) de l'exemple 5. Le mélange résult=-nt est ajusté à pH 4,5, puis soumis à la réaction de conjugaison à température ambiante, sous agitation,
toute la nuit. La partie surnageante, obtenue par centri-
fugation du produit résultant, est soumise à une filtra-
tion sur gel pour obtenir la fraction contenant le produit de conjugaison toxine-carboxyméthyl cellulose, puis cette
fraction est concentrée et filtrée sur Millipore. On ob-
tient ainsi, avec un rendement voisin de 60 % par rapport
à la toxine de départ, un vaccin.
L'étude de l'administration à des souris, conformément au
procédé décrit au (3) de l'exemple 1, de ce vaccin, indi-
que que la toxine est suffisamment désactivée par la con-
jugaison. En outre, on constate, après détermination des
titres d'immunoglobulines G et M, que ces titres sont mul-
tipliés environ par 3 par rapport à ceux que l'on obtient avec le témoin, préparé au (2) de l'exemple 5, et qu'il n'y a pas de production d'inmunoglobuline E. En conséquence, ce produit de conjugaison convientcomme
vaccin d' anatoxine de Trimeresurus flavoviridis.
EXEMPLE 8
SUPPRESSION DE LA TOXICITE DU RICIN
1 ) Préparation du ricin.
Une solution brute de ricin est préparée par extraction de poudre de grains de ricin dégraissés, dans une solution saline à 0,85 % en poids/volume, centrifugation de cet
extrait, relargage de la partie surnageante avec du sulfa-
te d'ammonium à 33-50 % de saturation à pH 8, et dissolu-
tion finale du précipité dans de l'eau.
2 ) Préparation du produit de conjugaison ricin-pullulane.
A une solution de pullulane activée, préparée par le pro-
cédé décrit au (2) de l'exemple 1, on ajoute 200 ml d'une
solution brute de ricin préparée comme au (1) de cet exem-
ple, et l'on soumet la solution résultante à une réaction de conjugaison à température ambiante pendant 24 heures, pour obtenir un produit de conjugaison ricin-pullulane; on purifie et sépare ce produit conformément au procédé décrit au (2) de l'exemple 1, et on obtient ainsi du ricin désactivé avec un rendement de l'ordre de 40 % par rapport
au ricin de départ.
) Essai d'administration du ricin désactivé chez l'ani-
mal.
L'étude de l'administration à des souris de ce ricin inac-
tivé, selon le procédé décrit au (3) de l'exemple 1, démon- tre que la conjugaison inactive suffisamment le ricin. De
plus, lors d'injections intraveineuses répétées de ce ri-
cin inactivé chez la souris, on ne constate pas de choc anaphylactique. l0 Les résultats ci-dessus suggèrent une utilisation possible de ce produit de conjugaison comme désensibilisateur ou
inducteur d'interferon.
EXEMPLE 9.
RICIN INACTIVE
On prépare une gomme arabique activée de manière similaire à celle qui est décrite au (2) de l'exemple 3, à ceci près que' l'elsinane de poids moléculaire moyen de l'ordre de
800 000 est remplacé par de la gomme arabique de poids mo-
léculaire moyen voisin de 300 000. On ajoute à la solution de gomme arabique activée, 100 ml de ricin brut, préparé au (1) de l'exemple 8, on ajuste le pH à 9, et laisse se
dérouler la réaction de conjugaison à température ambian-
te, sous agitation, pendant 2 heures. Le produit de conjur.e
gaison résultant ricin-gomme arabique, est purifié et sé-
paré comme au (2) de l'exemple 1. On obtient ainsi, avec un rendement de 50 % environ par rapport à la protéine de
ricin de départ, un ricin inactivé.
L'étude de l'administration de ce produit à la souris, se-
lon le procédé décrit au 3 de l'exemple 1, démontre que le ricin est suffisamment inactivé par la conjugaison. Comme
au (3) de l'exemple 8, l'administration intraveineuse répé-
tée de cette substance chez la souris, n'entratne pas de
choc anaphylactique.
EXEMPLE 10
VACCIN ANTITETANIQUE
Une solution de maltotriose, préparée avec 3 g de maltotrio-
se et 300 ml d'eau distillée, est additionnée de 15 ml d'une solution de chlorure cyanurique à 10 % poids/poids dans de
la diméthyl formamide, son pH est ajusté à 7, et on la sou-
met à une réaction d'activation à température ambiante pen-
dant 2 heures, sous agitation. A cette solution activée, on
ajoute 150 ml de solution de toxine tétanique hautement pu-
rifiée, préparée au (1) de l'exemple 1, puis on ajuste la solution résultante à pH 9 avec du carbonate de sodium iN, on laisse s'effectuer la réaction de conjugaison à 40C sous
agitation, on ajoute de la glycine et laisse reposer 6 heu-
res à cette température. Après centrifugation du mélange
réactionnel, la partie surnageante est soumise à une chro-
matographie par échange d'ions et à une filtration sur gel,
pour obtenir la fraction contenant un produit de conjugai-
son toxine tétanique-maltotriose, qui est ensuite soumise à une filtration sur Millipore; on obtient ainsi, avec un
rendement de l'ordre de 80 % par rapport à la toxine de dé-
part, un vaccin antitétanique.
L'étude de l'administration de ce vaccin chez la souris, selon le procédé décrit au (3) de l'exemple 1, indique que
la toxine est suffisamment inactivée par la conjugaison.
En outre, la détermination des titres des immunoglobulines G et M révèle que ces titres sont multipliés par 16, par rapport aux titres que l'on obtient avec le vaccin témoin préparé au (2) de l'exemple À, et qu'il n'y a pas, après immunisation, de production d'immunoglobuline E. Il ressort de ces résultats que ce produit de conjugaison
convient parfaitement conume vaccin antitétanique.
-2464074
Claims (9)
- REVENDICATIONSI. Procédé de préparation d'un vaccin, à partir d'une substance biologiquement toxique, caractérisé en ce qu'onprépare par fixation de covalence, un produit de conjugai-son entre cette substance biologiquement toxique et unsaccharide, pour inactiver ladite substance.
- 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la substance biologiquement toxique est constituée par une ou plusieurs des substances suivantes: toxines bactériennes, en particulier celles de la diphtérie, dutétanos, du botulisme, de la gangrène gazeuse ou du cho-léra; zootoxines, notamment venin de Agkistrodon de Trime-resurus flavoviridis ou de scorpion; et phytotoxines com-me celle du ricin.
- 3. Procédé selon une des revendications 1 ou 2, ca-ractérisé en ce que le saccharide est constitué par une ou plusieurs des substances suivantes: amidon, amylose, dextrane, polysucrose, curdlan, gomme arabique, gomme adragante, gomme "guar", gomme de xanthane, carraghenane, pectine, cellulose, glucomannane, chitosane, ainsi que leurs dérivés et produits d'hydrolyse partielle, et plus particulièrement pullulane et elsinane, ainsi que leursdérivés et produits d'hydrolyse partielle.
- 4. Procédé selon une des revendications 1 à 3, ca-ractérisé en ce que la réaction de conjugaison se faitpar: copulation diazoique, procédé peptidique, alkyla-tion, réticulation ou copulation par disulfure.
- 5. Procédé selon une des revendications 1 à 4, ca-ractérisé en ce que, le rapport pondérai substance bio-logiquement toxique/saccharide est compris entre 1/1 000 et 1 000, de préférence entre 1/100 et 100, le pH entre 3 et 12, la t.empérature entre 0 et 100C, la durée dela réaction poulvant aller de 6 minites à 50 heures.
- 6. Procédé selon une des revendications 1 à 5, ca-ractérisé en ce que le poids moléculaire moyen du saccha-ride est compris entre 100 et 10 000 000, de préferenceentre 500 et 1 000 000.
- 7. Procédé selon une des revendications 1 à 6, ca-ractérisé en ce que pour que s'effectue la fixation parcovalence, le saccharide comporte un des groupements fonc-tionnels suivants: p-aminobenzyle, m-aminobenzyle, p-ami-nobenzoyle, m-aminobenzoyle, m-aminoanisoyle, p-aminoben-zyloxy méthyle, hydroxy-2 (p-aminophénoxy)-3 propionyle,(p-amino m-méthyl anilino)-3 chloro-5 triazinyle, imido-carbonate, azide d'acide, halogénure d'acide, carbodiimi-de, isocyanate, chloroacétyle, bromoacétyle, iodoacétyle,halogénure de triazinyle et disulfure.lo
- 8. Procédé selon une des revendications 1 à 6, carac-térisé en ce que la liaison de covalence est réalisée enprésence d'un réactif polyfonctionnel tel que glutaraldA-hyde, gvlyoxal, succindialdéhyde, diisocyanate d'hexmnéthy-lène, diisocyanate de toluene-2,4, bis-azobenzidine ouN,N'-éthylene bis-maléimide.
- 9. Application du procédé suivant une des revendica-tions i à 8 à la préparation de vaccins utilisant laditesubstance biologiquement toxique, conjuguée avec un sac-charide.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP11284879A JPS5639022A (en) | 1979-09-05 | 1979-09-05 | Preparation of vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2464074A1 true FR2464074A1 (fr) | 1981-03-06 |
FR2464074B1 FR2464074B1 (fr) | 1983-06-24 |
Family
ID=14597035
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR8019109A Granted FR2464074A1 (fr) | 1979-09-05 | 1980-09-04 | Production de vaccin a base d'une substance biologiquement active, conjuguee avec une saccharide |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4372883A (fr) |
JP (1) | JPS5639022A (fr) |
CA (1) | CA1156553A (fr) |
DE (1) | DE3032488A1 (fr) |
FR (1) | FR2464074A1 (fr) |
GB (1) | GB2061955B (fr) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2499412A1 (fr) * | 1981-02-09 | 1982-08-13 | Hayashibara Biochem Lab | Production de vaccin antivirus |
EP0659768A2 (fr) * | 1993-12-24 | 1995-06-28 | Ilexus Pty Ltd | Antigène-carbohydrate conjugées et leur utilisation immunothérapeutique |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5823847B2 (ja) * | 1981-02-06 | 1983-05-18 | 株式会社 林原生物化学研究所 | 抗ヒト蛋白質抗体の製造方法 |
US4590181A (en) * | 1982-12-20 | 1986-05-20 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Synthetic immunoregulators and methods of use and preparation |
US4663160A (en) * | 1983-03-14 | 1987-05-05 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccines for gram-negative bacteria |
US4650675A (en) * | 1983-08-18 | 1987-03-17 | The Children's Medical Center Corporation | Oligonucleotide conjugates |
JPS60258125A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物 |
IL78775A (en) * | 1985-05-15 | 1992-06-21 | Biotech Australia Pty Ltd | Oral vaccines |
US4693891A (en) * | 1985-09-09 | 1987-09-15 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccine for Pseudomonas aeruginosa |
US4707543A (en) * | 1985-09-17 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Process for the preparation of detoxified polysaccharide-outer membrane protein complexes, and their use as antibacterial vaccines |
WO1996009805A2 (fr) * | 1994-09-23 | 1996-04-04 | Zonagen, Inc. | Immunostimulation induite par le chitosane |
US5912000A (en) * | 1994-09-23 | 1999-06-15 | Zonagen, Inc. | Chitosan induced immunopotentiation |
US5980912A (en) * | 1997-03-25 | 1999-11-09 | Zonagen, Inc. | Chitosan induced immunopotentiation |
FR2763244B1 (fr) * | 1997-05-14 | 2003-08-01 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale multivalente a porteur mixte |
US6280742B1 (en) | 1998-06-17 | 2001-08-28 | Zonagen, Inc. | Methods and materials for the treatment of prostatic carcinoma |
US7175848B1 (en) | 2000-09-22 | 2007-02-13 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Ricin A chain mutants lacking enzymatic activity as vaccines to protect against aerosolized ricin |
JP2002201141A (ja) | 2000-10-27 | 2002-07-16 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白質合成抑制遺伝子の発現増強剤 |
WO2012095746A2 (fr) | 2011-01-11 | 2012-07-19 | Capsugel Belgium Nv | Nouvelles gélules dures |
CA3059529A1 (fr) | 2017-04-14 | 2018-10-18 | Capsugel Belgium Nv | Procede de fabrication de pullulane |
CN110678170A (zh) | 2017-04-14 | 2020-01-10 | 比利时胶囊公司 | 普鲁兰多糖胶囊 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR7784M (fr) * | 1967-07-07 | 1970-03-23 | ||
FR1604982A (en) * | 1968-03-29 | 1972-06-26 | Active protein product - with polymeric carrier |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE337223B (fr) * | 1967-05-23 | 1971-08-02 | Pharmacia Ab | |
US4003792A (en) * | 1967-07-01 | 1977-01-18 | Miles Laboratories, Inc. | Conjugates of acid polysaccharides and complex organic substances |
US3641235A (en) * | 1968-11-01 | 1972-02-08 | Miles Lab | Immunological reagent and process for making same |
US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
US4125492A (en) * | 1974-05-31 | 1978-11-14 | Pedro Cuatrecasas | Affinity chromatography of vibrio cholerae enterotoxin-ganglioside polysaccharide and the biological effects of ganglioside-containing soluble polymers |
GB1541435A (en) * | 1975-02-04 | 1979-02-28 | Searle & Co | Immunological materials |
IL47372A (en) * | 1975-05-27 | 1979-10-31 | Yeda Res & Dev | Fab'dimers bound to daunomycin or adriamycin,their preparation and pharmaceutical compositions containing same |
US4140679A (en) * | 1976-10-12 | 1979-02-20 | Research Corporation | Antigen-protein complex for blocking allergic reactions |
US4226978A (en) * | 1978-03-13 | 1980-10-07 | Miles Laboratories, Inc. | β-Galactosyl-umbelliferone-labeled aminoglycoside antibiotics and intermediates in their preparation |
-
1979
- 1979-09-05 JP JP11284879A patent/JPS5639022A/ja active Granted
-
1980
- 1980-08-18 US US06/178,904 patent/US4372883A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-08-20 CA CA000358690A patent/CA1156553A/fr not_active Expired
- 1980-08-28 DE DE19803032488 patent/DE3032488A1/de active Granted
- 1980-09-02 GB GB8028230A patent/GB2061955B/en not_active Expired
- 1980-09-04 FR FR8019109A patent/FR2464074A1/fr active Granted
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR7784M (fr) * | 1967-07-07 | 1970-03-23 | ||
FR1604982A (en) * | 1968-03-29 | 1972-06-26 | Active protein product - with polymeric carrier |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2499412A1 (fr) * | 1981-02-09 | 1982-08-13 | Hayashibara Biochem Lab | Production de vaccin antivirus |
EP0659768A2 (fr) * | 1993-12-24 | 1995-06-28 | Ilexus Pty Ltd | Antigène-carbohydrate conjugées et leur utilisation immunothérapeutique |
EP0659768A3 (fr) * | 1993-12-24 | 1996-12-18 | Austin Research Inst | Antigène-carbohydrate conjugées et leur utilisation immunothérapeutique. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5639022A (en) | 1981-04-14 |
US4372883A (en) | 1983-02-08 |
DE3032488A1 (de) | 1981-04-02 |
JPS578090B2 (fr) | 1982-02-15 |
GB2061955B (en) | 1983-07-27 |
DE3032488C2 (fr) | 1988-06-09 |
FR2464074B1 (fr) | 1983-06-24 |
GB2061955A (en) | 1981-05-20 |
CA1156553A (fr) | 1983-11-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FR2464074A1 (fr) | Production de vaccin a base d'une substance biologiquement active, conjuguee avec une saccharide | |
KR100234792B1 (ko) | 제감작제 | |
CH650683A5 (fr) | Production de vaccin antivirus. | |
EP0035429B1 (fr) | Complexe vaccinal contenant un antigène spécifique et vaccin le contenant | |
KR0155383B1 (ko) | 감감작제 | |
JPS59225125A (ja) | 改良された静脈内投与可能な免疫性グロブリン組成物 | |
JPH06510768A (ja) | IgEの不変部の一部を含有するIgE媒介アレルギー反応治療用ワクチン | |
JPS5823847B2 (ja) | 抗ヒト蛋白質抗体の製造方法 | |
JPS6356300A (ja) | 核酸またはエンドトキシンの除去剤および除去方法 | |
US4226853A (en) | Formalinized allergen-containing substances and production thereof | |
SU1012786A3 (ru) | Способ получени протеинового комплекса,стимулирующего секрецию инсулина | |
EP0037522A2 (fr) | Dérivés de l'entérotoxine thermostable de Escherichia Coli et leur préparation | |
FR2590172A1 (fr) | Nouvel antigene commun (psc-a) de pseudomonas aeruginosa protegeant contre l'infection provoquee par cet organisme | |
EP0071515A1 (fr) | Procédé d'obtention de polyosides capsulaires, polyosides capsulaires ainsi obtenus et leur application à la préparation de vaccins | |
Eaton | Recent chemical investigations of bacterial toxins | |
CA2086101C (fr) | Produit immunosuppressif | |
CH639395A5 (fr) | Glycoproteines constitutives d'hafnia, procede de preparation et compositions pharmaceutiques. | |
JPS6236040B2 (fr) | ||
CA1250810A (fr) | Hexapeptide, son procede d'obtention et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent | |
JPH09216829A (ja) | Hsp60ファミリーに属するタンパク質の麦芽抽出物含有合成抑制剤 | |
JPH0528208B2 (fr) | ||
JP2022532617A (ja) | 高い比活性を有する精製された魚類プロテアーゼ及びその製造方法 | |
CN116731194A (zh) | 一种可透过细胞膜的溶菌酶 | |
AU783851B2 (en) | Method for preparing a polypeptide soluble in an aqueous solvent in the absence of detergent | |
SU967484A1 (ru) | Способ получени L-фукозоспецифичного лектина |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |