JPS59225125A - 改良された静脈内投与可能な免疫性グロブリン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は高純度の静脈注射口■能なガンマ−・グロブリ
ン（ＩｒＧ）製剤及び同上物のＡ裏方法に関する。特に
は、本発明は無変性、無変質、性質を変えていない天然
のままの、静脈内投与のための高純度のガンマ−・グロ
ブリン分子の生成物及び製造方法に関する。

本発明は又、シュードモナス・アエルギノーサ（Ｐｓｅ
ｌＬｄｏｒｎｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：緑膿菌
）の１６種の血清特異性菌株に対して増大した抗体力価
を有する高純度静脈（注射）用超免疫性グロブリン製剤
及びかかる製剤の製造方法に関する。

かなり長い間、ある種の患者が急性又は慢性の感染に対
して液素性の免疫欠如の可能性があり、その感染はある
場合には一生の間続くことが知られていた。これらの患
者は必要なレベルの抗体を自己生産することが出来ず、
かかる感染の予防と治療にはこの抗体の供給を受ける必
要がある。

ヒトの合同血漿の免疫性ガンマ−・グロブリンの７ラク
シヨン（分画）は多くのビールス及びバクテリヤに対す
る抗体を含んでおり、従って５ｔｒａｐｈｙｔｏｃｏｃ
ｃｉ　　（ブドウ球菌）、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ　
（連鎖球菌）、Ｃｏ１１（大腸菌）、Ｐｓｅｒｂｄｏｍ
ｏｎａｓ　　（シュードモナス属）、Ｈｅｒｐｅｓｚｏ
ｓｔｅｒ（帯状庖疹）及びＰ’１０ｃｙａｎｅｒｂｓ　
５ｅｐｔｉｃｅｒｎｉａｓに付属する様々の疾病の処置
に有効である。正常の抗体レベルを持つ患者も例えばＰ
ｓｅｒｂｄｏｒｎｏｎａｓ　ａｅｒｒｂｇｉｎｏｎａに
より惹起された圧倒的に激しい感染には付加的防御を必
要とする。

保護抗体の高くした力価及び食細胞活性を高めである免
疫的シュードモナス（ｐｓ　ｅｕｄ、ｏｒｎｏｎα）ワ
クチン及びグロブリンかＰ　ｓ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
に依ってひき起された感染の治療に有効であることが見
出されていた。

ヒトの免疫性グロブリンは１９４０年代にＦ、Ｊ、Ｃｏ
ｈｎによって大規模にはじめて単離された。フラクショ
ネーション（分画）中に生成した集合体が抗補体活性を
生じ、また臨床的利用では患者に逆の反応を生じさせる
ことも観緊された。所謂Ｃｏｈｎ法によってヒトの血漿
の分画に依って抗体を含有する免疫性グロブリンを調製
することが既知である。筋肉内又は静脈内の投与のため
に免疫性グロブリンを更に精製することも知られている
。所望の効果を生じているが、上記の二つの投与方法の
いずれでも若干の不都合があり、それは時には危険であ
るか人命にかかわることもあろう。

免疫グロブリンの筋肉注射が循環免疫グロブリンのレベ
ルの向上及び患者の感染期間、頻度及び過酷度の低減に
有効であることが確められている。然し、免疫性グロブ
リンの筋肉注射によって充分な免疫グロブリンのレベル
に到達出来ずそして感染から保護されていない患者もあ
る。かかる患者は血漿療法によって治療した時に良好な
結果を示し、静脈内投与が筋肉内法よりも利点を有する
可能性のあることを示している。免疫グロブリンの筋肉
内投与のその他の欠点には、この物質がゆっくりと循環
系に拡散してゆくために生ずる反応開始の遅れ、及び−
貫しない吸収及び注射を行った筋肉内だけでの部分的減
成がある。

静脈内に投与する免疫グロブリンによって充分なレベル
の循環抗体に即刻到達出来、そして注入速度によってそ
のレベルｆ：調節出来る。静脈内・＼の投与方法は一貫
しない吸収及び一部の筋肉内だけでの部分減成の影響を
無くすることも出来る。筋肉量が少いか又は出血性素因
の患者は筋肉注射よりも静脈注射に良く例えられる。

静脈内投与が好ましい投与経路であるが、かく投与した
結果には若干の危険な欠点が無いわけではない。静脈内
に検力した免疫グロブリンは、発熱、喘鳴前、背及び筋
肉痛、苦悶及び低血症の様な好差しからざる副作用を起
す可能性のあることが知られている。これらの副作用は
補体の活性化のため、第二には免疫複合体、免疫グロブ
リンの集合体の形成及び貯蔵期間中に生じた変性したグ
ロブリンによるものであろうと考えられている。

先行技術では、主として集合した又は変性したグロブリ
ンの分解又は除去によって、より補体活性の低い免疫グ
ロブリンの調製に大きな努力を払って来た。かかる方法
には、Ａ２　フシン、プラズミン、パパイン又はバクテ
リア性のプロテアゼーを用いた酵素的加水分解；酸、プ
ロピオラクトン等による化学的処理；免疫グロブリンの
アミド化、アルキル化又はＳ−スルホン化等による化学
的−導体への変換；及びポリエチレングリコール等を用
いる免疫グロブリンの分別沈澱等がある。

これらの方法は最終生成物中の集合した又は変性したグ
ロブリンの存在を少くシ、その結果、補体活性を低くし
ている様に見えるが、一方、抗体の低い活性、血液中の
免疫グロブリンの半減期の短縮、免疫グロブリンの効能
を低下させる原因となると信じられている若干の変性し
た不純物の存在等のその他の欠点を避けることは出来な
い。

上述の欠点克服のために、先行技術では静脈用の免疫グ
ロブリンの様々の調製法が更に提案されている。それら
の代表例は以下の特許中で開示された方法である。

米国特許第４，２５６，６３１号は一種又は二種以上の
二価又は二価の金属塩を免疫グロブリンの水溶液に添加
する分別沈澱と上澄み液をヒトのＩｙＧとポリヒドロキ
シ−ポリマー化合物との複合物を吸着剤として用いる親
和クロマトグラフィーとを組合わせた免疫グロブリンの
精製法より成る静脈内投与用の免疫グロブリンの調製方
法を開示している。

米国特許第４，３０５，８７０号はベントナイトと外因
性活性分を含んだ血清誘導体水溶液とを、外因性活性分
を成製するのに足るベントナイトの量と時間の間、混合
し、そしてベントナイト７１−ら水相を分離する工程を
含んだ静脈用血漿誘導体の製造方法に関する。場合によ
っては残留する外因性活性除去のために、ベントナイト
処理した水相を更にイオン交換クロマトグラフィーによ
って精製する。かくして得た生成物は外部的に有害な父
は外因性の活性が許容し得る低い含量を有していると言
われている。

先行技術による上述の企図は様々の感染性疾病の治療の
成功率を、かかる治療についての満足すべき免疫グロブ
リンを製造することによって、大巾に増しているが、以
下の特徴を好１しくけ有しているべきである天然の、無
変性、無変質及び特性を変えていない生成物については
一切われわれの頭に浮かばなかった。その特徴は、それ
は実質上純粋な免疫グロブリンＧＣｂｔＧ）を宮有せね
ばならず、従って天然産のＩｆＡ及びＩ２Ｍ抗体が実質
上無い；それは血漿中にある比率ですべてのＩ、Ｇの亜
群、即ちＩｙＧｌ　、ＩｔＧ２、ＩｙＧｓ及びＩｔＧ＋
ｚ　　を官有し−ｃい１けｎばならず；自発補体活性は
極めて低いか無いかである；それは重合体のＩｔＧが無
く；そしてそれは貯蔵中にＩｙＧを減衰及び不安定化さ
せる傾向のある酵素の様な痕跡成分が極めて低いレベル
であるべきである。

以下の簡単な説明によってかかる天然産生成物を製造す
る基本的理由が当業者に容易に納得されるであろう。

天然の１９０分子は二つのタイプの生物学的活性、即ち
免疫特異性活性及び非免疫特異性又は゛エフェクター”
活性、を持つことが知られている。免疫特異性活性は特
定の抗原と結合し、その際１ｙＧ分子が抗体として働く
性質によって特徴付けられる。非免疫特異性又は゛エフ
ェクター”活性には補体と結合して活性化し、オプソニ
ン活性化、及び分子のＦＣ部分に対して特異的な細胞受
体と結合することが含まれる。天然１１０分子を変質し
、これらの二つのタイプの活性を減少させるか又は無く
する変化は、その変性が意図的な無意図的な化学的又は
酵素的変性であろうとも、変性（ｄｅルａｔｗｒａｔｉ
ｏｎ、）と呼ばれている。化学変性無しで製造される市
販の筋肉用１１Ｇ−＃！剤は１．％いレベルの自発性固
定及び活性化補体を惹起するＩｆＧの集合型（αｇｇｒ
ｅｇａｔｅｄ、　ｆｏｒηｔｓ）を含んでおり、無意図
的変性の例である。意□□□的に変性した１７０分子の
例には静脈内投与のための安全性を改善する意図で薬品
及び／又は酵素を用いて変性した１１Ｇ製剤がある。か
かる意図的変性はＩｆＧのエフェクター機能を減少させ
るか完全に無くすることさえもあり、そしてＩｆＧの有
効な生物学的総合効力を減少させる。

上述の所望の特性に加えて、シュードモナス（ｐｓｅｒ
Ｌｄ。

ｍ、ｏｎａｓ）免疫性グロブリン製剤は予め調製した、
特異的な抗シュードモナス抗体を所有する必要がある。

シュードモナスに対する客体の防御は「充分な数の官能
性食細胞の細胞十血清のオプソニン活性」に左右される
。最大のシュードモナス食作用はタイプ特異性シュード
モナス抗体の存在で起る０少ぐとも１７種のＰｓ、ａｅ
ｒｒＬｇｉｎｏｓａの単離菌株が世界保健機構によって
同定されて窓り、その多くは抗生物質薬品による治療に
対して異常な耐性を示している。それぞれの菌株は客体
組織を崩壊させる可能性のある局部感染によって特徴付
けられている。客体の防御機能を更に弱体化させるため
にエンドトキシン、トキシンＡ、エラスターゼ及びプロ
テアーゼが放出される。火傷、がん、膿胞状繊維症の場
合の様な、正常な免疫防御が危ぶまれる臨床的ケースで
は特にＰｓ　、ａｅｒｒｂｇｉｎｏｓαに感染し易い０
特異的＼抗体活性増大のための超免疫性多価ガンマ−・
グロブリンの迅速に作用する静脈注射がこれらの患者の
一命をとりとめることが出来る。

抗シュードモナス免疫性グロブリン、免疫性全血液及び
免疫性血漿は当業界公知である。そイｔらの有益な特性
にも刀・かわらず、限られた抗体力価、Ｐｓ、αｅｒｕ
、ｇｉｎｏｓａの確認菌株の若干のみに対する防御力及
び高純度を欠く等の欠点かある。

本発明は、無変性、天然のま葦の（以下「天然の」と略
記）免疫性ガンマ−・グロブリンの静脈内投与のための
製剤で、該製剤はヒトの血清アルブミン１部に対して１
乃至５重量部の少くとも９９％純度の天然ガンマ−・ダ
ロプリ質上１ｆＭ及び分子集合体が無く、且つ約０．Ｉ
Ｃ’５０単位／ｍ９以下の抗補体活性を持つものである
、に関する。本発明は父、水性−アルコール媒体中のコ
ーン（Ｃｏｈｎ　）フラクション（分画）■より約１−
１９℃の温度及び約７乃至９のｐＨで不純物を沈澱させ
、該沈澱不純物を除去し、アルブミンで溶液を安定化し
、該溶液を濃縮し且つそれよりアルコールを除去する諸
工程より成る静脈内投与のための無変性、天然の免疫性
ガンマ−・グロブリン（製剤）の調製方法に関する。

本発明によれば、無変質、無変性、性状が変っていない
又は天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤が静脈内投
与に対して提供される。該製剤は一切の化学的又は酵素
的変性を受けていない、少くとも９９．０％のヒトのガ
ンマ−・グロブリンより成り、０．１％以下のＪ、Ａを
含有し、実質上ＪｆＭ及び集合体が無く、そして０．１
又はそれ以下のＣ′５０単位／ηの抗補体活性を有する
。本発明の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤は出発物質
中に存在する太約の比率、即ち６４％ＪｆＧ、　、　２
９％ＩｙＧ２．６％ＩｆＧ、及び１％ＩｆＩＧ＋と同一
の比率のＩｙＧのすべての亜群より成る。

本発明の抗シュードモナス超免疫性グロブリンの態様は
、免疫ガンマ−・グロブリンの上述の特性に加えて、Ｐ
ｓｅｗｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｒＬｇｉｎｏｓａの１６
種の血清特異性菌株に対して増加した抗体力価も有して
いる。超免疫性グロブリン生成物とここで名付けるもの
は、無免疫の供血者から得られる血液生成物中で見出さ
れる量よりも多量の抗体を持った生成物である。

ＩｆＧ製剤の製法は次の諸工程を含む。

α、　　Ｃｏｈｎクラクション…又は血漿搬出法で得た
血漿フラクションから、水性−アルコール媒体中、約１
−１０℃の温度及び約７から９のｐＨで不純物を沈澱さ
せ、ｂ、沈澱した不純物を除去し； Ｃ０溶液をアルブミンで安定化し；且つｄ、溶液を濃縮
し、そしてアルコールをそれから除去する諸工程 濃縮した溶液に塩及び／又は炭水化物を添加して処方す
る。

調合した１１Ｇは無菌濾過して小瓶に入れる。

本発明によれば、免疫性ガンマ−・グロブリンの調製方
法は、 α、正當又は超免疫性血漿から得たＣｏｈｎフラクショ
ン■中に存在する蛋白質を、約Ｏ乃至１６％Ｗ／Ｖ及び
好ましぐは約２から１０％Ｗ／Ｖのアルコールの水溶液
中に、約１から８％Ｗ／Ｖ及び好ましくは約１から４％
Ｗ／Ｖの蛋白質濃度で、１−１９℃の温度及び好貰しく
に２−５℃温度で懸濁させ； ｂ、懸濁液のｐ１１全約７．８±０．２及び好１しくは
約７．６±０．２とし； Ｃ０懸濁液にＮａＣ１を加えて０から２　ｒｎＭ　Ｎａ
Ｃ１の塩濃度とし； ｄ、懸濁液を２から２４時間及び好徒しくは６から１８
時間の間装置して、９Ｍ−、ＩｙＡ−、酵素及びＩｙＧ
不純物の重合体型を沈砂させ、そして沈澱した不純物と
溶解している１７Ｇとの間の平衡に達しさせ：ｅ、濾過
又は遠心分離によって沈澱した不純物を除去して稀Ｉ７
Ｇ溶液を得； 、ｆ、精製したヒトの血清アルブミンを１／１から５／
１及び好甘しくは１／１から２／１のｈＧ／アルグミン
比となる様に添加して稀１９Ｇ溶液を安定化し；ｇ、溶
液のＮａＣ１濃度をＯから０．９％Ｗ／ＶＮａＣＬにし
；ｈ、溶液のｐＨを約６．９±０．４とじ；ｉ、限外濾
過に依り溶ｉを濃縮Ｉ７て３．８力・ら４．５％Ｗ／Ｖ
　　ＩｆＧ及び好１しくは約４％Ｗ／Ｖ　　ＩｙＧの濃
度とし； ｊ、アルコールを除去し、そして透析沖過に依り、約４
から６％Ｗ／Ｖ　　ＩｙＧに溶液を濃縮し；且つに、溶
液を塩化す）　ＩＪウム及び／又は炭水化物の添加によ
って調剤する 諸工程より成る。

本発明によれば、天然ＩｆＧからの不純物が、ＩｙＧを
変性する傾向のある薬品を使用すること無く、先行技術
によって何の示唆を受けず、本製造法で使用する化合物
の既知の特性からは予測出来ない、明確に定められた条
件下で、除去出来ることが見出された。この条件は低い
イオン強度のアルコール溶液の使用、及び特定された温
度及びｐＨでの寒冷法’Ｉｌｌ　（Ｃｒｙｏｐｒｅｃｉ
ｐｉｔａｔｉｏｎ）より本質上酸る。

本発明の多価抗シュードモナス超免疫性グロブリンは、
ＰｓｅＬｕ、ｄｏｒｎｏｎ、ａｓ　ａｅｒｔｂｇｉｎｏ
ｓａの特定の菌株から得られた免疫抗原を先ず単離し、
Ｐｓｇｕ、ｔｉｏｍ、ｏｎａｓ　ａｅｒｗｇｉｏｎｓａ
の１６種の確認された血清型のどの感染に対しても免疫
化し得る多価ワクチンとして使用するため組合わせるこ
とによって調製される。次にヒトである供血者に多価ワ
クチンを接種して１６種の血清型のすべてに対する抗体
力価としての応答を引出し、ついでワクチン接種を行っ
た供血者から血漿を採取し、得られた高力価ガンマ−・
グロブリンの精製を行う。

先行技術では〜Ｐｓ、αｅｒｕ、ｇｉｎｏｓαの血清型
分類に別の方法を用いていたが、然しＨａ　ｂ　ｓの研
究（ｌｆａｂｓ、１．Ｚｓｃｈｒ、ｆ、Ｈｙｇ−１，４
４：　２１８−２２８．１９５７）ｅ基礎とした国際的
に確立された血清型分類システムによってとってかわら
れている。本発明に使用した１６種の菌株はｔｈｅ　Ｃ
ｅｎｔｒａｌ　ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ。

Ｑｏｌｉｎｄａｌｅ、Ｌｏｎｒｌｏｎによって分類され
、凍結乾燥した型でｔｈｅ　Ｗｅｔ　ｌｃｏｍ、ｅ　Ｂ
ａｃｔｅｒｉａｌ　Ｃｔｔ、＃ｔｒｔ、ｒｅ　Ｃｏ１１
ｅｃ−ｔｉｏｎ、Ｌｏｎｄｏｎで厳重に保存きれている
ものである。表１はＷｅｌｌｃｏｒｎｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎにある１６菌株とその命
名番号（Ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ　Ｎｕｍｂｅｒ）及び
Ｂαｂｓ血清型との対応を示している。

表　　１ １１ＡＢｓ１６６６９　　１ １１ＡＢＳ２　　６６７０　　２ １１ＡＥＳ３　　６７６６　　３ ＨＡＢＳ４　　６’１６７　　４ ＨＡＢＳ５　　６６７４　　５ ＨＡ、／３Ｓ６　　６６７５　　５ ＨＡＢＳ７　　６７６８　　７ ＨＡＢＳ８　　６６７７　　　Ｂ １１ＡＢＳ９　　６７７７　　　ｇ ｌｌＡＢＳｌｏ　　　６７８９　　１０ＨＡＢＳ１１６
７８２　　１１ １１ＡＢｓ１２　　６７０９　　１２ ＶＥＲＮＯＮ１３６７１０１３ ＭＥＩＴＥＲＴｌｏ　　６８２１　　１４ｊｉＯＭＭＡ
１１　　６７８７　　１５１１０ＭＭ’Ａ１３　　６７
８８　　１６抗原の単離、多価ワクチン製造、供血者の
免疫化及び血漿採取の諸方法は先行技術で使用された公
知の技術によるものである。

ワクチン ワクチンｉ１１．Ｍｉｌｅｒ　ｅｔ　ａｔ、Ｊ−Ｍｅｄ
、、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

Ｖｏ、１０．ｐｐ、１９−２７．１９７７の報告に従っ
て調製出来る。Ｐｓｅｕｄｏｒｎｏｎａｓ　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓαの１６種の確認された有毒血清型は別々の臨
床的単離によって同定され、１６種の別々のマスター血
清型肉汁として培養した。各マスター培養は乳酸アンモ
ニウム及びその他の栄養分の存在で生長した。（各マス
ター培養の一部を次のワクチン調製の出発物質として凍
結した）。微生物を遠心分離によって採取し、新媒体中
に再懸濁して洗浄し、遠心分離し、次にグリセリンとエ
チレンジアミン四酢酸言有の抽出溶液に再懸濁させた。

遠心分離によって微生物を取出して破壊した。

バクテリヤからの細胞壁成分を含有する抽出溶液は各菌
株の血清型は特異的なものである。新抽出液全ホルマリ
ン処理して毒性を最小にした。エチレンジアミン四酢酸
と過剰のホルマリンを透析に依って除き、１０８個の・
；クチリヤからの抽出液が１ゴの溶液になる迄濃縮した
。１６種のそれぞれの一価ワクチンでマウスを免疫化し
、それぞれの場合に血清特異性を示す、バクテリヤ菌株
に対応する抗体応答を引き出しｆｃ、結果をｇｎｚｙｍ
ｅ−Ｌｉｎ／ｃｅｄ　Ｉｒｎｍ５ｎｏｓｏ−ｒｂｅｎｔ
　Ａｓ５ａｙ（ＥＩＩＳＡ）で求めた。

ＥＬＩＳＡ効力検定（酵素免疫測定法）山羊を使ったＥ
　１／　Ｉ　Ｓ　Ａ効力検定ではアルカリホスファター
ゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｔｒｎｉｃａｌ　Ｃｏ、）及びｐ
−ニトロフェニルホスフェートと共役した抗ヒト免疫性
グロブリン（ＩｙＧ　）を指示薬系に用い、Ｔｈｅ　Ｗ
ｅｌｔｃｏｒｎｅ　Ｐｓｅｕ、ｃｌｏ−ｔｎｏＴＬａｓ
　Ｖａｃｃｉｎｅに含まれた１６種の悶々のシュードモ
ナス血清型に対する抗体応答を測定した。要約すると、
Ｉηｖｒｎｕｎｌｏｎ　　（ボリスチレンミクロカ価測
定プレート（Ｄ’／ｎａｔｅｃｈ　Ｌａｂｓ）の穴を４
℃、４時間の培養によって、０．１Ｍグリセリン緩衝液
（ｐＨ９，５）中の個々の血清型抗原の５０μｔで覆っ
た。各血清型抗原の最上の濃度をＷｇ　ｔ　Ｌ　ｃ　ｏ
ｒｌＬｅ多価シュードモナス抗体対照に対するブロック
滴定によって求めた。培養期間の終了時にプレートを４
回０．０２Ｍ　ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ　２０　（ｐＨ７，
２）で洗った。

１：５０のＰＥＳ−１ｗｅｅｎ中の稀釈で出発した血清
試料を自動稀釈器（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　Ｌａｂｓ　）　
’に用いて５０μを量で２倍宛に稀釈した。プレートを
次に室温で３時間培養した。各プレＪトには適当な正及
び負の対照を有する。培養後、プレートを３回ＰＢＳ−
Ｔｗｅｅｎで洗った。アルカリホスファタ−ト共役した
抗−ヒトＩ、ＧのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中での予め定めら
れている最上稀釈物をつくり、ミクロ力価測定プレート
の各穴に５０μを宛配った。プレートを次に室温で１時
間培養した。培養後、プレートを４回ＰＢＳ−７ｕｙｅ
ｅｎ中で洗い、１０チジエタノールアミン（ｐＨ９，８
）中の１ｍｇ／ｒｎｌ　　ｐ−ニトロフェニルホスフェ
ートの５０μｔを加えた。次にプレートを４℃で１８時
間培養した。

培養後、５０μｔのクエンチング溶液０．１Ｍ　ＥＤＴ
Ａ（ｐＨ７，０）ｋ各穴に加えた。各穴の溶液に対して
自動記録式分光光度計（Ｄｙｎａｔａｃｈ　Ｌａｂｓ　
）を用いて光学濃度を分光光贋的に求めた。

抗体の力価は０．３又はそれ以上の光学濃度を与える試
料最大稀釈率によって求められる。

一般に、−価のワクチンと接種したマウスによるそれに
対する応答、即ち各血清型の一価ワクチンが特定の血清
型に対して免疫応答する、相関が見出された。Ｉｍｅｒ
ｒｕｘｇｇ　ｌｘ　−ｔｉｎａｔｉｏｎ効力検定を用い
たＲｏＪ、Ｊｏｎｅｓ　ａｎｄ　Ｅ、Ａ。

Ｒｏｅ（Ｂｒ、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｐａｔｈ、５６　：　３４
−４３　、１９７５　）の研究でも同様な発見が示され
た。

免疫法 ヒトのワクチン注射のために１６種の一価ワクチンの各
々を調合して１ｍｌの溶液が各菌株の１０８　個のバク
テリヤからの抽出物となる様に濃縮した。１ｍｌの多価
ワクチンを供血者に１週間間隔で３回皮下注射し、抗体
生産を発現させた。１６種の血清型のそれぞれに対する
血漿中の抗体力価の増加が起った。然し表２は高い平均
力価で応答する者もあるがＨＬＩＳＡ効力検定によると
一万ではずっと低い力価で応答することを示している。

応答はワクチン注射後３から６週間の間の高いレベルに
通常維持されている力価によって示されている。

表　　２ （１５供血者）（１３供皿者） ０　　　　　　１．０　　　　　１，０２１　　　　　
　１２．１　　　　　３．７４２　　　　　　　　　　
６．５　　　　　　　　２．２７０　　　　　　３．４
　　　　　１．６９８　　　　　　２．９　　　　　１
．４１２６　　　　　　２．１　　　　　１．３従って
、免役化した供血者から血液を採取する日時は高い抗体
レベルを持つ免役グリプリン生成物を得る重要因子とな
る。一般に免疫俊約３週間で抗体レベルが最高値となり
、以後次第に減少する。

血漿選定 ワクチン注射の結果、ヒト供血者に生じた抗体を血漿搬
出法で採取する。表３は２８人の免疫化した供血者から
得た血漿プール（合同血漿）の力価の値を示しており、
一群は高い応答を示し、他方は免疫に低い応答ケ示して
いた。

非免疫の供血者から単離させた血漿はＰｓ、ａｅｒｗｇ
ｉｎｏｓａの１６種の血清型のそれぞれに対して低い抗
体力価を持っていることも示しである。

表 選定した合同血漿中のＰｓｅｖ、ｄｏｍｏｎ型に対する
力価の相対応答 ワクチン投与前　　　２１日口の合同血漿１　　　　　
２００　　　　　　　　　８００２　　　　　４００　
　　　　　　　　８００３　　　　　４００　　　　　
　　　　８００４　　　　　　Ｚｏｏ　　　　　　　　
　　８００５　　　　４α０　　　　　　　　１６００
６　　　　　１００　　　　　　　　　８００７　　　
　　２００　　　　　　　　　８００８　　　　　２０
０　　　　　　　　　８００９　　　　　２００　　　
　　　　　　８００１０　　　　　２００　　　　　　
　　１６００１１　　　　　４００　　　　　　　　　
８００１２　　　　　２００　　　　　　　　１６００
１３　　　　　　２５　　　　　　　　　８００１４　
　　　　４００　　　　　　　　１６００１５　　　　
　１００　　　　　　　　　８００１６　　　　　４０
０　　　　　　　　１６００ａｓ　ａｅｒｗｇｉｎｏｓ
ａの各血消 低応答群 ワクチン投与前　　　２１日口の合同血漿２００　　　
　　　　　　　８００ ２００　　　　　　　　　　８００ ２００　　　　　　　　　　４００ １００　　　　　　　　　　４００ ２００　　　　　　　　８００ ５０　　　　　　　　　　２００ ５０　　　　　　　　　　４００ １００　　　　　　　　　　４００ ２００　　　　　　　　　　４００ ５０　　　　　　　　　　４００ ２００　　　　　　　　　　８００ ２００　　　　　　　　　　４００ ２５　　　　　　　　　　４００ ４００　　　　　　　　　　４００ １００　　　　　　　　　　４００ ２００　　　　　　　　　　４００ 多価ガンマ−・グロブリンの精製 一方は低いそして他方は高い抗体力価レベルを有してい
る合同血漿は両方とも免疫性ガンマ−・グロブリンの調
製に使用出来るが、高力価血漿が超免疫性ガンマ−・グ
ロブリンの製造の出発片ギ」として好ましい。

本発明の方法に依る精製を行う前に、凝固因子、第■因
子及び第Ｖ因子複合体’を除去し、血漿はＣｏｈｎフラ
クショネーション（分画）を施す。本発明の精製方法（
ｒＪ、’ｃｏｈｎフラクション（Ｆｒａｃｔｉｏｎ）ｆ
Ｊの物質に実質上等しい血漿フラクションを用いて始め
る。

出発物質 通常の免疫性ガンマ−・グロブリンのだめの出発原料は
衆知のＣｏｈｎフラクションＨＳ−スト、又は天然のＩ
ｆＧと（天然の１まの）亜群を持ったその他の出発原料
である。

然し、安全についての歴史と、筋肉用用叶形伸で治療用
製品としての効Ｎ’Ｑｋ有してＳつ、市場で入手可曲で
あるためＣｏｈｎフラクション■を使用するのが好まし
い。別の方法として、ヒトの血漿から凝固因子、第〜・
１因子、及び第ｖ因子複合体を、Ｃｏｈｎフラクショネ
ーションを実施する前に除いであるヒトの血漿を処理し
て活性成分を得ることが可能である。

第〜１因子及び第■因子の除去に続いて、Ｃｏｈｎの冷
エタノール・フラクショネーション方法は一連の蛋白フ
ラクション：フラクション１１フラクシヨン■＋■、フ
ラクションＩｖＩ＋ｌｖ４及びフラクション■をつくり
出す。ＩｙＧ、　１１Ｍ及びＩｆＡ以外に、フラクショ
ンＩｆ　＋　Ｉｌｌは脂質、リポ蛋白質、カロチノイド
の様な色素物質並びに蛋白質分解酵素に富む。

これらの物質をすべてＩｆＧから取除く必要がある。こ
れらの好１しからざる物質の除去後、フラクショントは
約９５饅純度のＩｙＧを含有し、これは原料血漿のＩｆ
Ｇ含量の約４０から５０％に当る。フラクション■はＩ
？Ｇの４種のすべての亜群、即ちＩｙＧ、、ＩｆＧ２、
Ｉｙ、Ｇ３及びＩ２Ｇ４、を血漿中にそれらがあるのと
同一の比率で言んでいる。この９５チ純度のＩｔＧはい
くつかの理由でそのまま静脈用製品に処方するのには不
適当である。ＩｙＧは容易に変性されそしてその結果、
大きな高分子徴集合体を形成する。これらの集合体は、
ＩｆＧの静脈注入を受ける患者にとって危険となる補体
カスケード（ｃａｓｃａｄｅ）を制動している抗原無し
に補体ヲ作る。Ｃ０ｈｎフラクシヨン■中の約５％の不
純物量も好ましくない、例えば：ＩりＭｌ　これは変性
し易くそして補体を作り易いｒ　ｈＡ−これはＩｆＡ−
欠乏患者中でアナフラクトイド反応をひき起すことが知
られている：Ｐｒｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ　Ａｃｔｉｖ
ａｔｏｒは投与で血管活性化効果を起す；プラズミノー
ゲン／プラズミン、これはＩｙＧを破断し、循環系での
半減期を短縮させる。従って、Ｃｏｈ、ｎフラクション
Ｉｎｋ史に精製し、しかも本発明の方法で詳細に、以下
に更に記述されている注意深い取扱い方法及び安定化に
よって、分子の天然の１まの特性を保たねばならぬ。

ＩｆＧの調製法 Ｃｏｈｎフラクション■ペースト又はその相当物をアル
コールの水溶液に懸濁し、その可溶性部分を溶解させる
。好ましいアルコールはエタノールであるが、その他の
製薬上許容し得るアルコールも使用できる。ＩりＭ、　
ＩｙＡ、酵素、重合体の型の（ｙａ及び痕跡量の汚染物
質より成る沈澱の沈降後、これを濾過又は遠心分離によ
って取除いた。

濾過は、懸濁液にＨ’／ｆｌｏ−８ｕｐｅｒ　Ｃｅｌの
様なケイソウ土濾過助材を加え、懸濁液とこれを混合し
、Ｑｒｔ、ｎｏ　６０８Ｐの様な０．２から０．５ミク
ロンの濾過パッドＣｐａｄ）を通して濾過することによ
って達成出来る。別の方法では、通常の装置を用いた遠
心分離によって沈澱を除去する。泥液はＰａ１ｌフイル
ター・カートリッジの様な、１．５ミクロンのフィルタ
ーと組合わせだｉｏ、ｏｏｏ又は２０．０００　ｒｎｏ
ｗ。

を限度と１−るＰＴシリーズ膜を包含しているＰｅ１ｌ
ｉｃｏｎシステムの様な半透１１λでの限外濾過によっ
て濃縮する。ガを７．３±０．５に合わせ、アルブミン
を添加して精製したガンマ−・グロブリンを安定化し、
ＮａＣ１を添加して溶解性を改善する。一定容積で５−
１０倍容積の０．２％Ｗ／ＶＮａＣＬを用いる透析濾過
に依りアルコールを除去する。アルコール除去後、溶液
を更に約６．０％Ｗ／Ｖ　　ＪｆＧに濃縮する。アルコ
ールの無いｈＧ／アルブミン溶液をクエン酸を用いてｐ
ｌｉ’　６．９−１＝　（１４とする。次にこの溶液を
、塩又は糖の溶液と調合することに依り約５％Ｗ／Ｖ　
　ＩｙＧに稀釈する。塩と調合した場合は塩の最終濃度
は約０．９％Ｗ／Ｖであるべきであり、糖と調合した時
は、糖濃度は、一般に、約２．５−１０％Ｗ／Ｖの範囲
であるべきである。かかる濃度は使用する個々の糖によ
って変るものであろうし、例えば単糖類では最終濃度は
５．０　Ｗ／Ｖ、二糖類では約１０．０％Ｗ／Ｖでなけ
ればならぬ。更に、例えば２５％Ｗ／Ｖグルコース＋（
１，４５％Ｗ／Ｖ　　Ｎａ、Ｃｔ、父は５．０％ＩＸＩ
／Ｖスクロース＋０．４５％Ｗ／Ｖ　　ＮａＣＬの様に
糖／塩の組合わせで調剤されることもある。この様にし
て調合したＩｆＧ溶液を、（Ｊ、ｒｔ、ｎｏ　６０ＳＰ
又はＣｕ＞＞ｏ　　ＩＤＥＰの様な、０．２−０．５ミ
クロンのパッド又はカートリッジを通して濾過し、この
濾過後１．５乃至０．２ミクロンの多孔度を持つ清澄化
及び滅菌フィルタ一群で濾過する。

本発明の方法はＰｓｅｒＬｄｏｍ、ｏｎａｓ　ａ、ｅｒ
ｗｇｉｎ、ｏｓａの一種又は二種以上の血清型に対する
超免疫性グロブリンを含有する様々の超免疫性グロブリ
ン製剤の調製に使用できることを銘記されたい。更に、
精製方法も、その他の病源体に対して効力のある高度精
製超免疫性グロブリンを得るためにも使用出来る。また
史に少くとも２種以上の、然し好ましくはＰｓｅｕ、ｄ
ｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｒｂｇｉｎｏｓａの血清型の１６
種すべてに対し増大した力価を有する静脈用に使用する
多価免疫性グロブリン製剤で、本発明の方法又は本発明
の範囲に属すると当栗者が認める他の方法で製造された
ものも本発明の対象である。

以下の実施例で本発明を更に例示する。

実施例１ １１ｃ９のＣｏｈ、ｎフラクション■ペーストを１０ｔ
の冷純水に懸１蜀させた。ｐ１１７．５として、懸７蜀
液を２±１．０℃で４時間面１罰した。集合１１Ｇ、　
　ＩＩＭＸＰＫα、プラズミノーゲン及び他の痕跡汚染
物質を含む沈澱を、３０００Ｘ７２０分間の遠心分離又
はＣｖ、ｎｏ　６０　Ｓｐの様なＯ−２−０，５ミクロ
ンの濾過パッドによる漣過で除去した。溶液をｐＨ６，
８とし、２部のＪｆＧに対して１部のアルブミンの割合
でアルブミンを加えて安定化し、濃縮し、Ｑ２％Ｗ／Ｖ
　ＮａＣＬを用いて透析濾過し、所望の糖及び／又は塩
を加えて調合した。溶液のｐＨを６．８に再調整して稀
釈し、５．０Ｗ／ＶＩｆＧ最終濃度と所望の塩及び／又
は糖濃度とした。

実施例２ １　Ｊｒ、ｇのＣＯんルフラクション■を１５ｔの冷純
水−エタノール溶液に懸濁させ、エタノールの最終濃度
が４％Ｗ／Ｖとなる様にしだ。１）Ｈを７．６にして懸
濁液を２時間、２±１．０℃で静置した。沈澱を除去し
、ＪｆＧ２部に対してアルミン１部の割合でアルブミン
を加え、濃縮し、０．２％Ｗ／Ｖ　ＮａＣ１ｆ：用いて
一定容積で透析濾過し、所望の糖及び／又は塩と調合し
た。ＴＨを６．８に合わせ、所望の濃度の塩及び／又は
糖全宮んだ５％Ｗ／Ｖ（ＩｖＧ）溶液に稀釈した。

実施例３ １峠のＣｏｈｎフラクション■を１５ｔの冷水−アルコ
ールに懸濁させ、４％Ｗ／Ｖアルコールの最Ｐ：濃度と
なる様に加えた。懸濁液のＴ）Ｈを７．６として、２時
間、２±１．０℃で静置した。沈澱を除去し、Ｐ液のｐ
Ｈを６．８とした。

（＃Ｇ）２に対してｌの割合で７Ａ＝７’ミンを加えた
。溶液を濃縮し、パイロゲンの無い冷水を用い等容積で
透析濾過した。溶液を（１宕釈し、５％Ｗ／Ｖ　　Ｉ、
Ｇ溶液で所望濃度の塩及び／又は糖を含むものとした。

溶液のｐＩＩを６．８に再調整し、清澄化及び滅閑フィ
ルターを通し、無菌の瓶に無菌的に充填し、栓欠して密
封した。

実施例３ 最終ア／Ｌ−コ−／ｌ／　２９ｒｆ−が４％Ｗ／Ｖとな
る様ＪＣ１ｋｇのＣｏｈｎフラクション’ｄ’；ｃ２０
ｔの冷純水−エタノール溶液に懸濁させた。ｐＨをｐＨ
７，４に調整して、懸濁液を１６時間２±１．０℃で静
置した。沈澱を除去し、涙液をｐＨ６，８に合わせた。

１−１の比でアルブミンを加え、溶液を濃縮し、１０容
積のパイロゲンの無い冷水を用いて一定容積で透析涙過
した。所望の糖及び／又は塩を加えて溶液を調合し、ｐ
Ｈを再び６．８に合わせ、所望濃度の塩及び／又は糖も
言んでいる５％Ｗ／Ｖ　　ＩりＧ溶液となる様に溶液を
うすめた。

実施例５ １５人の免疫化してない供血者から得だ合同血漿からＣ
ｏｈｎフラクショネーションによって天然１７Ｇを単離
し、本発明の方法によって精製した。合同血漿及び精製
ガンマ−・グロブリンの抗体力価を測定した。表４に　
ｌ）Ｂ。

ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの１６血清型のすべてに対する血
漿及びＩｆＧの力価の並列的結果を示す。

表　　４ 非免疫化供血者の血漿及び純ＩｙＧの抗体力価（大略　
１％ＩｙＧ）） １　　　　　　１００　　　　　　　　　２００２　　
　　　　４００　　　　　　　　　２００３　　　　　
　４００　　　　　　　　　２００４　　　　　　１０
０　　　　　　　　　１００５　　　　　　４００　　
　　　　　　　４００６　　　　　　　２５　　　　　
　　　　２ＱＯ７１００１００ ８１００１００ ９２００１００ １０２００２００ １１２００２００ １２５０１００ １３２５１００ １４４００４００ １５１００２００ １６２００２００ 実施例６ 正常な非免疫の供血者の大規模の市場プール（約２，０
００人の供血者）から天然１ｙＧｆ単離させ、実施例５
の方法で精製した。精製ガンマ−・グロブリンの抗体力
価を測定し、Ｐｓ　、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの１６種の
血清型のすべてについての結果を表５に示した。

表　　５ ４００ ４００ ４００ ２００ ８００ ２００ ２００ ２００ ２００ １０　　　１００ １１　　　４００ １２　　　２００ １３　　　２００ １４　　　４００ １５　　　２００ １６　　　４００ 実施例７ 多価シュードモナス・ワクチンで免疫化した１３人の低
応答供血者をワクチン接種後３週間に、血漿搬出のため
にえらび出した。実施例５と同様にこれらの供血者から
得た合同血漿から天然ＩｙＧを単離した。合同血漿及び
精製したガンマ−・グロブリンの抗体力価全測定した。

１６種の血液型すべてについての血漿とｈＧの力価の結
果を表６に示す。

低応答供血者 （ワクチン接種後３週間） １　　　　　８００　　　　　　　４００２　　　　　
８００　　　　　　　８００３　　　　　４００　　　
　　　　８００４　　　　　４００　　　　　　　４０
０５　　　　　８００　　　　　　　４Ｑ０６　　　　
　２００　　　　　　　４００７　　　　　４００　　
　　　　　４００８　　　　　４００　　　　　　　４
００９　　　　　４００　　　　　　　４ＱＯ１０４０
０４００ １１８００８０゜ １２　　　　　４００　　　　　　　８００１３　　　
　　４００　　　　　　　２００１４　　　　　４００
　　　　　　　８００１５　　　　　４００　　　　　
　　４００１６　　　　　４００　　　　　　　　ＢＯ
Ｏ実施例８ 多価シュードモナス・ワクチンで免疫化した１３人の高
応答供血者をワクチン接種後３週間での血漿搬出のため
にえらんだ。実施例５の記載の如く供血者から得た合同
血漿から天然１ｙＧを単離した。合同血漿及びＮ製した
ガンマ−・グロブリンの抗体力価を測定した。表７に血
漿及びＩグＧの１６血清型すべてについての結果を示す
。

表　　７ （ワクチン接種後３週間） １　　　　　　８００　　　　　　　　８００２　　　
　　　８００　　　　　　　１６００３　　　　　　８
００　　　　　　　　８００４　　　　　　８００　　
　　　　　　８００５　　　　　１６００　　　　　　
　１６００６　　　　　　　　８００　　　　　　　　
　　　８００７　　　　　　　　８００　　　　　　　
　　　　８００８　　　　　　８００　　　　　　　１
６００９　　　　　　　　　８００　　　　　　　　　
　　　８００１０　　　　　１６００　　　　　　　１
６００１１　　　　　　８００　　　　　　　１６００
１２　　　　　１６００　　　　　　　３２００１３　
　　　　　８００　　　　　　　　８００１４　　　　
　１６００　　　　　　　３２００１５　　　　　　８
００　　　　　　　１６００１６　　　　　　　１６０
０　　　　　　　　　　１６００実施例９ 多価シュードモナス・ワクチンで免疫化した１５人の高
応答供血者をワクチン接独後３週目での血漿搬出のため
にえらび出した。実施例５の記載の如く供血者から得た
合同ｎｎ　晴より天然１１Ｇを単＆ＩＬシた。合同血・
°党及び精製したガンマ−・グロブリンの抗体力価を測
定した。１６血清をすべてについての血漿及びＩｙＧの
力側の結果を表８に示す。

表　　８ 高応答供血者 （ワクチン接種後３週間） １　　　　　　８００　　　　　　　　　８００２　　
　　　　８００　　　　　　　　　８００３　　　　　
　８００　　　　　　　　　８００４　　　　　　８０
０　　　　　　　　　８００５　　　　　　８００　　
　　　　　　　８００６　　　　　　４００　　　　　
　　　　８００７　　　　　　４００　　　　　　　　
　８００８　　　　　　８００　　　　　　　　　８０
０９　　　　　　８００　　　　　　　　　８００１０
　　　　　　８００　　　　　　　　１６００１１　　
　　　　８００　　　　　　　　　８００１２　　　　
　　８００　　　　　　　　１６００１３　　　　　　
８００　　　　　　　　　８００１４　　　　　１６０
０　　　　　　　　１６００１５　　　　　　８００　
　　　　　　　　ｉｂｏ。

１６　　　　　　８００　　　　　　　　１６００実施
例１０ 多価シュードモナス・ワクチンにより免疫化した１５人
の高応答供血者をワクチン接イ重後１８週間目の血漿搬
出のためにえらんだ。これら供血者から得た合同血漿か
ら天然ｈｔＧを単離した。合同血漿及び精製したガンマ
−・グロブリンの抗体力価を測足した。１６種の血清型
すべてについての血漿とＩｙＧの力価の結果を表９に示
す。

表　　９ （ワクチン接種後１８週間） １　　　　　　４００　　　　　　　　　４００２　　
　　　　８００　　　　　　　　　４００３　　　　　
　８００　　　　　　　　　４００４　　　　　　４０
０　　　　　　　　　４００５　　　　　　４００　　
　　　　　　　８００６　　　　　　２００　　　　　
　　　　２００７　　　　　　４００　　　　　　　　
　４００８　　　　　　４００　　　　　　　　　４０
０９　　　　　　４００　　　　　　　　　４００１０
　　　　　　４００　　　　　　　　　４００１１　　
　　　　４００　　　　　　　　　４００１２　　　　
　　４００　　　　　　　　　８００１３　　　　　　
４００　　　　　　　　　２００１４　　　　　　４０
０　　　　　　　　　８００１５　　　　　　４００　
　　　　　　　　４００１６　　　　　　４００　　　
　　　　　　８００実施例１１ ５ｔｉｅｒｉｔｚ　＆　Ｈｏ１ｄｅｒ（，１，Ｉｎ、ｆ
ｅｃｔ、Ｄｉｓ、１３１　：６８８−６９１．１９７５
）法により、火傷させたマウスのモデルで実施例５．６
．７．９及び１０で得たＩｙに’ｃその効能を測定する
ため検討した。

表１０及び１１から明らかな如く、抗体力価と１０’Ｐ
８．αｅｒｒｂｇｉｎｏｓαで感染させたマウスの生存
率と相関関係にある傾向がある。

上述の実施例によって得られた生成物、及び明細書の教
示に従って製造された生成物は、先述の如く抗体力価及
び効能を試験した上に、１７Ｇ−製品のその他の特質を
保証、規定するために適切な方法を用いて試験した。一
般的に言って、以下に明示した方法によって分析を行っ
た時、次の品質が本発明の生成物の特徴となる。

本発明の生成物は少くとも９９チ純度の免疫ガンマ−・
グロブリンである；　Ｒａｄｉａｌ　　Ｉｍｙｍｂｎｅ
　Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ（ＲＩＤ）法（Ｍａｎｃｉｎｉ　
、Ｇ、　ｖｃａｒｏｎａｒａ＋Ａ、Ｄ、　＋１１ｅｒｍ
ａｎｓ　Ｉｎｒｍｓｎｏ−ｃｈ、ｅｒｎｉｓｔｒｙ２　
２３５　（１９６５）による〕及び５ｃｈｕｌｔｚ　ｅ
ｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｉｒｎ、ｒｍｂｎｏｌｏｇｉｃａｌＭ
ｅｔｈｏｄｓ　　３１　３１−４０　（１９７９）によ
り報告された抗体−抗原複合体測定にもとづくレーザー
・比濁法で測定して、ＩノＡ及びＪ、ｙＭは実質上無い
。Ｓｉｌυｅｒｓｔｅｓル。

Ｒ，Ｍ、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏｃｈｔｎｎｉ
ｓｔｒ’ｌ　　６５　　５００−５０６　（１９７５）
記載の方法で示される、ストレプトキナーゼ（５ｔｒｅ
ｐｔｏｋｉｎａｓｅ）及びＣＢＺ−１ｙｚ−ｐ−二トロ
フェノールを用いて測定したところプラズミン又はブラ
ズミノーゲンは測定されない。

ノ（ａｂｅ　ｔ　、Ｅ、Ａ、ａｎｄ　　Ａｌａｙｅｒ、
Ａｉ″ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｗｒＬｕ　ｎ　ｏ　
ｃんｅｍｉｓｔｒｙ第２版Ｔｈａｍｔｘｓ　Ｓｐｒｉｎ
ｇｆｉｅｌｄ（１９６１）の改良法で測定した抗補体活
性（ＡＣＡ）は０．１０Ｇ”５０単位／ｍ９　１ｙＧ以
下である。

生成物をＴＳＫ　　３０００　　ＳＷカラムを用いる高
性能液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）とＬＫＢ　ｕｌｔ
ｒａｇｅｌＡｃＡ３４を充填した９０ｃｍカラムを用い
るゲル・パーメーション・クロマトグラフのいずれで分
析しても集合したＩｙＧＣ１測定されなかった。Ｅｌｅ
ｃｔｒｏ−ＮｕｃｌｅｏｎｉｃｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ、Ｉｎｃ、から購入したＲＩＡＳＵＩＩＥ　　ＩＩ
テスト・キットを用いたラジオイル（放射化免疫）測定
（ｒ’ａｄｉｏ　ｉｎｖｍｉｅ　ａｓｓａｙ）で測定し
た時、生成物は測定可能な肝炎表面抗原Ｂを含有しては
いない。この生成物は１９Ｇのすべての亜群、即ちＩｆ
Ｇ、、ＩｆＧ２、ＩｆＧ３及びＩｙ　Ｇ４、を含有し、
そしてこれらの亜群のそれぞれの割合は約６４係、２９
％、６％と１％で、これは上述のＲａｄｉａｌＩｍｍｓ
ｎｅ　Ｄｉｆｆｒｂｓｉｏｎ、（ＲＩＤ）法でＣｏｈｎ
フラクション■ペーストを測定した時に見出される分布
割合と実質上同一である。麻疹、ポリオ、ジフテリャ及
び肝炎に対する抗体力価は市販の筋肉用免疫血清グロブ
リン製品での力価と等価であった。

先に述べた如く、本発明の方法によって得られた純１１
Ｇ分子は静脈投与に適した製薬上の用量の型に処方され
る。

かかる用量型能にはＩｙＧの直結乾燥型態及びＩｆＧの
液状用量型態が包含される。

凍結乾燥用量型態では、マルトース、スクロース又はグ
ルコースの様な製薬上許容し得る糖を刊（生成物に加え
てＩｆＧｆ保護し、凍結、乾燥の間の嵩高さを提供する
。力・がる凍結乾燥した組成物の例を実施例１２で示し
た、これは少くとも１年間、冷凍及び室温のいずれでも
抗補体活性が０．０３から０．０４Ｇ’５０単位／Ｉｎ
９の平均値であって安定であることが見出された。集合
体及びフラグメントも見出されなかった。

実施例１２ 免疫性グロブリン　　　　　　　２．５通常の血清アル
ブミン　　　　　１．２５塩化ナトリウム　　　　　　
　　　０．１マルトース　　　　　　　　　　　５．０
注射用の水７　　　　　　５０ｍＪ迄の必要量（米　水
は凍結乾燥で除去） 実施例１３．１４、及び１５に５％Ｗ／Ｖ　　ＩｙＧ及
び２．５％Ｗ／Ｖ通常の血清アルブミンを含有し、また
１０％のマルトースか５％のスクロースかを含むか、炭
水化物を含んでいない敲状用址処方を示す。製剤を等滲
透圧にするためにどの場合も適当量の塩化す）ＩＪウム
が加えてあった。

実験によると、マルトース含有１．Ｇは室温で６ケ月間
、冷凍条件で少くとも１年間安定であった。抗補体活性
は初期値より際立って液化せず、０．０２５と０．０４
５（、”５０単位１ｍｇ間の・Ｆ均値であった。更に集
合体と７ラダメントは認められなかった。

スクロース含イ〕及び炭化水素の無いＪ、Ｇの液状処方
は少くとも６ケ月間、冷凍及び室温条件下のいずれでも
安定であると判明した。抗補体活性は初期値より際立っ
て変化せず、０．０７から０．ＩＣ’５０単位／ダの間
の平均値であった。前例同様、集合体又はフラグメント
は認められなかつた。

実施例１３ 免疫性グロブリン　　　　　　　２．５通常の血清アル
ブミン　　　　　１．２５塩化ナトリウム　　　　　　
　　Ｏ−１マルトース　　　　　　　　　　５．０注射
のための水　　　　　　５０ｄ迄の充分址実施例１４ 免疫性グロブリン　　　　　　　　　　２．５通常の血
清アルブミン　　　　　　　　１．２５塩化ナトリウム
　　　　　　　　　　　　ｏ、２５スクロース　　　　
　　　　　　　　　２．５注射用の水　　　　　　　　
　　５０ｄ迄の充分量実施例１５ 成分　　　　　＆　／　５０　ｍｌ 免疫性グロブリン　　　　　　　　　　２．５通常の血
清アルブミン　　　　　　　　１．２５塩化ナトリウム
　　　　　　　　　　　０．４５注射のための水　　　
　　　　　５０ｄ迄の充分継本発明によって調製した処
方剤の結果を表１２に示す。

表１３は本発明のＩｙＧと市販製品の分析結果塗対比し
て示したものである。

本発明の製剤は静脈内に投与される。一般に、１から１
０ｇのガンマ−・グロブリンを一就に使用出来る。然し
、静脈内への投与に用いるガンマ−・グロブリンの使用
量は、年令、肉体的条件、特定の製剤の抗体力価等によ
って変るものであり、医師はｚＬｔ、々の因子及び環境
に対する考慮に基すいて効果的な処置のためにその場に
応じた用量を決定するであろう。

本発明の趣旨及び範囲を離れずに、本発明の改良及び変
更が行われ得ることは明白である。これ迄に述べた特定
の態様は例示のためのみに示したものであり、本発明の
範囲は特許請求の範囲の記載によって限定されるたけで
ある。

手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和５９年特許願第６７７９８号 ２、発明の名称 改良された静脈内投与可能な免疫性グロブリン組成物３
、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　　　アーマ−７アーマシユーテイカル　カンパニ
ー氏名　弁理士　（６３２３）　　用瀬艮治５、補正の
対象　　　　　　　　　　　　、−３゜（１）ｈ書の特
許出願人の欄および代理権を証する杏面（２）願書に添
付の手書き明細書 ６、補正の内容 前止はない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトの血ｍアルブミン１部に対して１乃至５重量部
   の少くとも９９％純度の天然ガンマ−・グロブリンを含
   有しており、該ガンマ−・グロブリンは化学的又は酵素
   的変性を一切受けてＳらず、約０．１％以下のＩｆＡｆ
   ：官有し、実質上１ｆＡＤＪｔび分子集合体が無く、且
   つ約０，１σ５０単位／η以下の抗補体活性を持つもの
   である、 静脈内投与のだめの無変性、天然の免役性ガンマ−・グ
   ロブリン製剤。 ２、該ガンマ−・グロブリンが出発物質中に存在するす
   べてのガンマ−・グロブリン亜群より成る特許請求の範
   囲第１項記載の無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブ
   リン製３、該ガンマ−・グロブリン亜群がＩｆＧいＩｇ
   Ｇ１、Ｉｆ　Ｇ３及びＩｆＧ、より成る特許請求の範囲
   第１項記載の無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリ
   ン製剤。 ４、該ガンマ−・グロブリン亜群の大略の割合が：６４
   ％ＩｆＧ、　、２９％ＩりＧ２．６％ＩｙＧ、及び１％
   Ｉ、Ｇ、より成る特許請求の範囲第３項記載の無変性、
   天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製斉Ｌ ５、更に約０．９１％Ｗ／Ｖ以下塩化ナト１７ウムの浴
   液を官有する特許請求の範囲第１項乃至第４項のいずれ
   かに記載の無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン
   製剤。 ６、更に約２．５乃至１０％Ｗ／Ｖの製薬上許容し得る
   炭水化物を含有する特許請求の範囲第１項乃至第５項の
   いずれかに記載の無変性、天然の免疫性カンマ−・グロ
   ブリン製剤。 ７、該製薬上許容し得る炭水化物がマルトース、スクロ
   ース又はグルコースである特許請求の範囲第６項記載の
   無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤。 ８、更に約０．４５％Ｗ／Ｖの塩化ナトリウム溶液及び
   約２．５乃至５％Ｗ／Ｖの製薬上許容し得る炭水化物を
   含有する特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれかに
   記載の無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤
   。 ９、約２．５ｇの少くとも９９％純度の天然ガンマ−・
   グロブリン； 約１．２５ｇの正常血清アルブミン； 約０．１ｇの塩化ナトリウム； 約５．０ｇのマルトース；及び５０ｒＬｌにするに充分
   な水より成る静脈内投与のだめの薬剤投与量の型態とし
   た特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれかに記載の
   無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤。 １０、約２．５ｇの少くとも９９％純度の天然ガンマ−
   ・グロブリン； 約１．２５ｆ！の正常血清アルブミン；約０．２５ｇの
   塩化ナトリウム： 約２．５ｇのスクロース：及び５０−にするに充分な水
   より成る静脈内投与のための薬剤投与量の型態とした特
   許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれかに記載の無変
   性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤。 ■、約２．５Ｉの少くとも９９％純度の天然ガンマ−・
   グロブリン； 約１．２５．Ｖの正常血清アルブミン；約０．４５　ｇ
   の塩化ナトリウム：及び５０ｍ／にするに充分な水 より成る静脈内投与のための薬剤投与量の型態とした特
   許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれかに記載の無変
   性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリン製剤。 進歩くとも９９．５％純度の天然ガンマ−・グロブリン
   を存在させた特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいず
   れかに記載の無変性、天然の免疫性ガンマ−・グロブリ
   ン製剤。 Ｂ、グロブリンか無変性、天然超免疫性ガンマ−・グロ
   ブリンである特許請求の範囲第１項乃至第１２項記載の
   無変性、天然ガンマ−・グロブリンの静脈内投与用製斉
   曳力価レベルを有していることを特徴とする特許請求の
   範囲第１３項記載の無変性、天然ガンマ−・グロブリン
   製剤。 ｂ、該超免疫性グロブリンがシュードモナス・アエルギ
   ノーサの１６種の血清特異性菌株に対して増加した抗体
   力価を有していることを特徴とする特許請求の範囲第１
   ４項記載の無変性、天然ガンマ−・グロブリン製剤。 １６、該抗体力価レベルが正常ガンマ−・グロブリンの
   力価レベルに比して２から４倍高い特許請求の範囲第１
   ３項乃至第１５項のいずれかに記載の無変性、天然ガン
   マ−・グロブリン製剤。 １７、製剤が凍結乾燥した型ゆである特許請求の範囲第
   １項乃至第１６項のいずれかに記載の無変性、天然ガン
   マ−・グロブリン製剤。 抵静脈内投与のための無変性、天然の、免役性ガンマ−
   ・グロブリンの調製方法に於て、 α、水性アルコール媒体中のコーンフラクション■より
   、約１−１９℃の温度及び約７乃至９のｐＨで不純物を
   洗絨させ； ｂ、該沈澱不純物を除去し； Ｃ０溶液をアルブミンで安定化し； ｄ、該溶液を濃縮し：且つ ｅ、それよりアルコールを除去する諸工程より成ること
   を特徴とするガンマ−・グロブリンの調製方法。 わ、諸工程を、α、１７Ｇコーンフラクション■のＯか
   ら１６％Ｗ／Ｖのアルコールの水溶液中に約１乃至８％
   Ｗ／Ｖの蛋白質濃度、１から１９℃の温度で懸濁させ；
   ｂ、該懸濁液のｐＨを約７．８±０，４に合わせ；Ｃ０
   懸濁液にＮａＣ１を添加して懸濁液中のＮａＣ１濃度を
   ０から２ｍＡ４とし； ｄ、ｉ割濁液を２乃至２４時間静置して不純物を沈澱さ
   せ、そして沈澱した不純物と溶解したＩｆＧとの間の平
   衡に達しさせ： ｅ、沈澱不純物を除去し； ｆ、　　ＩｙＧ溶液に１／１から５／１のＩ、Ｇ／アル
   ブミン比になる様にヒトの血清アルブミンを添加して安
   定化し：σ、溶液のＮａＣ１濃度を約Ｏから０．９％Ｗ
   ／Ｖ　ＮａＣｔにし： ん、溶液のｐＨを約６．９±０．４にし；ｉ、限外濾過
   に依り溶液濃度を約３．８から４．５Ｗ／Ｖ１９Ｇに濃
   縮し； ｊ、アルコールを除去し、そして透析温過に依り溶液全
   豹６から７チｗ７ｖに濃縮し； ん、溶液を塩化ナトリウム又は炭水化物又は両者を組合
   わせたものと調剤する ことに依り実施する特許請求の範囲第１８項記載の製剤
   調製方法。 ２０、諸工程を、 α、ＩｙＧコーンフラクション■を約２−１０％Ｗ／Ｖ
   （Ｄエタノール水溶液中に、約１−４％Ｗ／Ｖの蛋白質
   濃度、２−５℃の温度で懸濁させ； ｂ、懸濁液のｐＨを約７．６±０．２にし：Ｃ９懸濁液
   にＮａＣＬを加えて０−２　ｒｄ／　Ｎａｃｔの塩濃度
   とし： ｄ、ｐ、３濁液を６−１８時間静置してｈＭ、Ｉ２Ａ１
   酵素、ＩｙＧ不純物のポリマー型を沈澱し、そして沈澱
   した不純物と溶解しているＲｔＧとの間の平衡に達しさ
   せ：ｅ、沈澱不純物を濾過によって除去し、稀Ｉ、Ｇ溶
   液を得；ｆ、稀ｈＧ溶液に１／１−２／１のｒｙ　Ｇ／
   アルブミン比となる様にヒトの血清アルブミンを加えて
   安定化し；ｇ、溶液のＮａＣＬ濃度をＯ−０，９％Ｗ／
   ＶＨａＣＬとし；ｈ、溶液のｐＨを約６．９±０．４に
   し；ｉ、限外濾過によって溶液を濃縮して約４％ＷｌＶ
   ｈＧの濃度とし； ｊ、アルコールを除去し、そして透析濾過に依り溶液を
   ４−６％Ｗ／Ｖ　ＩｆＧに濃縮し； ｌｃ−溶液を塩化す）ｌ］ウム、炭水化物又は両者の混
   合物を添加して調剤する、 ことに依り実施する特許請求の範囲第１８項又は１９項
   言己載の方法。 ２Ｌ　　該無変性、天然の免疫性ガンマ−・ダロブ１】
   フカζ超免疫性ガンマ−・グロブリンである特許請求の
   範囲第１８項乃至第２０項のいずれかに記載の方法。 ２２、　ＭコーンフラクションＩｌｅシュードモナス・
   アエルギノーサに対し免役化しだ供皿者の合同血漿力・
   ら得る特許請求の範囲第１８項乃至第２０項のいずれか
   に記載の方法。 ２３、該アルコールがエタノールである特許請求の範囲
   第１８項乃至第２２項のいずれかに記載の方法。 ２４、該コーンフラクション■が約９５チ純度である特
   許ＮＦｆ求の範囲第１８項乃至第２３項のいずれかに記
   載の方法。 ２５、該９５％純度の天然ガンマ−・グロブリンかＩｙ
   Ｇ、、Ｉ、Ｇ、、ＩｙＧ、及びＩｙＧ４より成る特許請
   求の範囲第２４項記載の方法。 ２６．沈澱した不純物を沖過又は遠心分離によって除去
   する特許請求の範囲第１８項乃至第２５項のいずれかに
   記載の方法。 ２７、　　ＩｆＧ溶液をＮａＣ１と処方して、約０−０
   ．９％Ｗ／ＶＮａＣ１の最終濃度及び／又は約２．５−
   １０％Ｗ／Ｖの炭水化物濃度を得る特許請求の範囲第１
   ９項乃至第２６項のいずれかに記載の方法。