FI95384B - Menetelmä 3'-deoksi-3'-substituoitujen metyylinukleosidien valmistamiseksi ja menetelmässä käytettäviä välituotteita - Google Patents

Description

1 95384

Menetelmä 3'-deoksi-3’-substituoitujen metyylinukleosi-dien valmistamiseksi Ja menetelmässä käytettäviä välituotteita 5 Keksintö koskee menetelmää 3'-deoksi-3'-substi tuoitujen metyylinukleosidien valmistamiseksi, joiden kaava on R10—1 rt ,ΐτ r2oj q ! 15 jossa rv B osoittaa, että B voi olla joko a tai β; B on valittu ryhmästä pyrimidiini- ja puriininuk-leosidiemäkset, jotka ovat liittyneet tetrahydrofuraani-renkaaseen pyrimidiinin N1-heterosyklisen typpiatomin tai 20 puriinin N9- tai NT-heterosyklisen typpiatomin välityksellä, mukaan lukien luonnossa esiintyvät nukleosidi-emäkset ja 5-fluori-, 5-bromi-, 5-jodi-, 5-kloori-, 5-trifluorimetyyli-, 5-etyyli- ja 5-(2-bromivinyyli)urasii-li, triatsolikarboksiamidi, 2-aminopuriini, 2,6-diamino-25 puriini, 4-klooripyrimidiini, pyrimidiini, atsapyrimidii- • · ni, puriini, 2,6-diklooripuriini, 2-amino-6-klooripuriini ja deatsapuriini; R ja Q tarkoittavat vetyä tai toinen symboleista R ja Q on hydroksi ja toinen on vety; ja 30 Rl ja R2 tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä : tai hydroksisuojaryhmää. Keksintö koskee myös välituot teita.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa virusinfektioita, esim. infektioita, joita 35 aiheuttavat herpes simplex-virustyypit 1 ja 2 samoin a. 95384 kuin sytomegalovirukset (CMV), varicella-zoster-virukset (VZV) ja tetrovirukset (HIV 1, HIV 2, MuLV, jne.)

Kirjallisuudessa on selostettu useita 3-hydroksi-metyylinukleosideja. Rosenthal ym., Canadian Journal of 5 Chemistry, Vol. 47, sivuilla 4477-4481 (1969), selostavat 3'-hydroksimetyylinukleosidia, jonka kaava on nh2 CX> N N HOCH,

15 V°N

W

HOCHj OH

20 Shuto ym., Nucleosides and Nucleotides, Voi. 1, sivuilla 263-273 (1982), selostavat 3'-hydroksimetyyli-nukleoside-ja, joiden kaavat ovat: 6» & " t/ $

* OH

35 3 95384

Samankaltaisia yhdisteitä kuvataa JP-hakemusjulkaisussa nro 57-146798, ja esitetty menetelmä liittyy myös adeniini-välituotteisiin. Julkaisussa ei kuitenkaan adeniini-lopputuotteiden valmistusta. Acton ym., Journal 5 of Medicinal Chemistry, Voi. 22, nro 5, sivuilla 518-525 (1979), selostavat 3'-hydroksimetyyli-nukleosidia, jonka kaava on

S

>X,>

X

HOCH, )

15 O C

V

HOCH2 20 ja ilmoittavat, että tällä yhdisteellä on kasvaimen vastainen vaikutus.

Oxetanacin A on käymistuote, jolla on bakteerin-vastainen ja virusvastainen vaikutus ja sen rakenne on 25 seuraava (PharmaProjects, Voi. 10, May 1989, sivu M1051, ** PJP Publications Ltd, Richmond, Surrey, U.K.).

NH8 HO—* 4 95384

Kansainvälinen patenttihakemus nro PCT/SE88/00169, kansainvälinen julkaisu nro 88/08001, julkaistu lokakuun 20. päivänä 1988, koskee yhdisteitä, joiden kaava A on

A

5 R2 A O B

10 I \ y / I

H0- X tai -C-CH.f -C SCH

Il 3 NH. CH, ib. * r 15 - i joissa substituentlt A, X, R1, R2 ja R3 määritellään seuraavasti: A: kaava (a) tai kaava (b); X: (a) 0; (b) S; 20 (c) CH2; R1: H; alkyyli, jossa on 1-3 hiiliatomia; -CH-CH2; -CH«CH-CH3; -CH2-CH-CH2; kaava (B); -CH=CH; R2: H; tai R2 muodostaa yhdessä R3:n kanssa hiili-hiili -sidoksen; R3: H; F; Cl; Br; J; N3; CN; CsCH; OH; OCH3; CH2OH; ja kun R3 on F; Cl; Br; J; N3; CN; CsCH; OH; OCH3 25 tai CHjOH, se voi omata cis-konfiguraation tai transkon- e flguraation asemassa 4’ olevan hydroksimetyyli-funktion suhteen tai R3 muodostaa yhdessä R2:n kanssa hiili-hiili-sidoksen, ja niiden terapeuttisesti hyväksyttävät suolat. Yhdisteiden ilmoitetaan olevan käyttökelpoisia HIV-virus-30 infektioiden hoidossa.

:‘i Brindidge ym. (US-patentti 4 625 020) kuvaavat me netelmää l-halogeeni-2-deoksi-2-fluoriarabinofuranosyyli-johdannaisten, joissa on suojaryhmiä (rakenne 1), valmistamiseksi 1,3,5-tri-0-asyyli-riboosista. 1-halogeeni-joh-35 dannaiset ovat välituotteita terapeuttisesti aktiivisten nukleosidi-analogien synteesissä (rakenne 2).

s 95384

RO—* A

^νντ\ΛΧ I

1 \j &

RO N

\y

RO

2 15

Rakennekaavoissa 1 ja 2, R on asyyliryhmä, X on halogeeni, erityisesti bromi, A on OH tai NH2 ja Y on halogeeni, alkyyli tai alkenyyli. Nämä yhdisteet ovat huo-20 mättävän merkittäviä biologisesta aktiivisuudestaan johtuen. Lopez ym. (EP-patenttihakemus nro 0 010 205) mukaan, että useat 5-substituoidut l-(2-deoksi-2-substi-tuoitu-8-D-arabinofuranosyyli)pyrimidiini-nukleosidit (rakennekaavat 3), joissa on 2'-fluorisubstituentti, 25 omaavat biologista aktiivisuutta. Nämä yhdisteet ovat jatkuvasti huomattavan mielenkiinnon kohteena (Fox ym., "Antiviral Activities of 2'-fluorinated Arabinosyl-pyrimidine Nucleosides” julkaisussa "Fluorinated Carbohydrates", toim. N.F. Taylos, ACS Symposium Books nro 374, 30 books 1988). Tuttle ym (EP 0 285 432) ilmoittavat, että substituoiduilla l-(2-deoksi-2-fluori-p-D-arabinofurano-syyli)pyriininukleosideilla osoittautuu olevan hyvä biologinen aktiivisuus (rakennekaava 4).

6 95384 £y 5 1 Ν ΧΝΗ2 RO-n / ΒΟ-Ι 1 .. \y $ RO "Ο 1 1

Rakennekaavassa 3, kukin R voi olla vety tai asyy- 15 li, X voi olla NH2, Y voi olla halogeeni tai alkyyli, ja Z voi olla metyleeni tai typpi. Rakennekaavassa 4, R voi olla vety, hydroksi jne.

Hertel (US-patentti nro 4 692 434) toteaa, että 1-(2'-deoksi-2',2'-difluori-p-D-ribofuranosyyli)-nukleosi- 20 dien sekä pyrimidiini- että puriinijohdannaisilla (rakennekaavat 5 ja 6) on osoittautunut olevan biologista aktiivisuutta.

0' C& :. -"W -K) '

R0 Γ RO F

35 - S

Rakennekaavioissa 5 ja 6 kukin R voi olla vety tai asyyli, ja X ja Y voivat olla vety.

Il . i-ö-i Ali; i i i a . . i 95384 7

Matsuda ym (WO 88/07049) kuvaavat uusia 2-alkyli-deenipyrimidiini-nukleosidi-johdannaisia, joita esittää rakennekaava 7, joilla on hyviä virusvastaisia vaikutuksia.

5 R1 -w HO R3 15 7

Rakennekaavassa 7, R1 on aminoryhmä tai hydroksi-ryhmä ja R2, R3 ja R4 voivat kaikki olla vetyjä. Samankal-20 talsia yhdisteitä ovat kuvanneet Matsuda ja muut, J. Pharm. Pharmaceutical Sciences 76, nro 11, Nov. 1987.

Nyt on havaittu, että tietyt 3'-substituoidut me-tyyli-nukleosidit ovat käyttökelpoisia hoidettaessa virusinfektioita, esim. infektioita, joita ovat aiheutta-25 neet herpes simplex-virustyypit 2 ja 2, ja/tai ovat käyt- i tökelpoisia välituotteina valmistettaessa 3'-substituoi-tuja metyylinukleosideja, joilla on virusvastainen vaikutus.

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää edellä 30 määriteltyjen kaavan I mukaisten 3'-deoksi-3'-substi-;; tuoitujen metyylinukleosidien valmistamiseksi. Menetel mälle on tunnusomaista, että 1,2-isopropylideeni-3-deok-si-3-R20-metyyli-5-0-R1-a-D-ribofuranoosi, jonka kaava on β 95384 . :^ν

XII

jossa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, muutetaan nukleosidiemäksen suhteen reaktiiviseksi välituotteeksi, 10 jonka kaava on .. '> IV XI 0 Lor1 joissa kaavoissa R1 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, 20 z on nukleosidiemäksen kanssa reagoiva esteri ja asyyli on alkanoyyli- tai aroyyliryhmä, jossa on enintään 7 hiiliatomia, ja kaavan IV tai XI mukainen välituote saatetaan kosketukseen edellä määriteltyä ryhmää B vastaavan nukleosidiemäksen tai sen aktivoidun johdannaisen kanssa 25 reaktio-olosuhteissa, minkä jälkeen haluttaessa, suoja- ryhmät poistetaan, jolloin saadaan 3'-deoksi-3'-hydroksi-metyyli-nukleo-sidianalogi, jonka kaava on

"W

HO-J ^ OH

35 ja haluttaessa 2'-0H-ryhmä korvataan sinänsä tunnetulla tavalla vedyllä.

· : atf‘t tili) IltM

9 95384

Keksintö koskee myös kaavojen III, IV ja XI mukaisia välituotteita.

Kaavan I mukaisten 3'-substituoitujen metyyli-nuk-leosidien synteesi voidaan suorittaa lähtemällä 1,2,5,6-5 diasetoni-a-D-glukoosista tai 1,2-isopropylideeni-a-D-ksylofuranoosista. Ensisijaisen menetelmän mukaisesti, nämä aineet muutetaan sokeri-johdannaiseksi, joka on kaavan III mukainen 10 R*0—| .,0,.

15

Esimerkkejä suojaryhmistä R1 ja R2 ovat bentsyy-li-, bentsoaatti- ja silyyliryhmät, ja ne voivat olla joko samoja tai erilaisia. Suojaryhmien R1 ja R2 sarjan osalta, joita voidaan käyttää, katso julkaisua 20 T.W. Greene "Protecting Groups in Organic Synthesis", 1981, John Wiley, New York, jonka paljastus liitetään tähän viitteeksi. Isopropylideeniryhmä voidaan sitten poistaa kaavan lii mukaisesta yhdisteestä ja yhdiste asy-loida, jolloin saadaan rakennekaavan IV mukaista bisasy-25 loitua tuotetta ·· , w * R*0 —l Oasyyli • ♦ * jossa Z on aktivoitu esteri. Näitä johdannaisia voidaan 35 käyttää suoraan tai muuttaa hyvin tunnetuin menetelmin ίο 95384 vastaaviksi anomeerisiksi haloideiksi, erityisesti bro-midiksi TMSBrrn kanssa (joka on trimetyylisilyylibromidi, katso Gillard ym., Tetrahedron Lett., 1981, 22, 513), tai katso Brundidge ym., US-patentti 4 625 020) tai erilaisi-5 siksi anomeerisiksi estereiksi.

Hiilihydraatti-välituotetta IV voidaan käsitellä aktivoimattoman tai aktivoidun puriini- tai pyrimidiini-emäksen kanssa Bronsted-hapon ja/tai Lewis-hapon läsnä ollessa, jolloin saadaan kaavan V mukaista tuotetta.

" .

15 R 0—J o.asyyli pääasiallisesti β-anomeerina. Emäs aktivoidaan silyloi-malla tai muodostamalla kompleksi raskasmetallisuolan, ensisijaisesti elohopeakloridin kanssa, tai muodostamalla 20 anioni. Reaktiossa käytetään joko aproottista liuotinta kuten halogenoitua hiilivetyä (metyleenikloridia, kloroformia, 1,2-dikloorietaania, hiilitetrakloridia, jne.), aromaattista hiilivetyä (bentseeniä, tolueenia, ksyleeniä jne.) tai karboksyylihappojohdannaista (etyyliasetaattia, 25 asetonitriiliä jne.). Jokin halogenoiduista hiilivedyis- l tä on ensisijainen reaktiolämpötilojen ollessa välillä 0 - 140 °C, tavallisesti 30 - 80 °C, 0,5 tunnin - 10 päivän aikana.

Poistamalla suojaus joko happamissa tai emäksisis-30 sä tai hapettavissa tai pelkistävissä olosuhteissa tai ·'; niiden yhdistelmää käyttäen, muodostetaan kaavan VI

mukaisia yhdisteitä : su i im· i · ♦ *# : w 95384 ";p ..

HO-1 OH

Täsmällisten olosuhteiden valinta riippuu käytet-10 tävistä suojaryhmistä (katso Greene, "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley, New York, 1981).

Kaavan VI mukaisten yhdisteiden 2'-asema voidaan myös pelkistää monin tunnetuin menetelmin; esimerkiksi poistamalla 2'-suojaryhmä sopivissa reaktio-olosuhteissa 15 ja muodostamalla sitten 2'-asemaan joko 2'-0-tiokarbo-nyyli-imidatsoli-esteri (Prisbe ym., Syn. Comm., 1985, 15, 401) tai fenyylitionokarbonaatti (Robins ym., J. Am. Chem. Soc., 1981, 103, 932). Tiokarbonyyli-johdannaisen reaktiossa Bu3SnH:n kahssa saadaan haluttuja 20 kaavan VII mukaisia tuotteita.

,1ονο\1

25 \-· VII

R20 J

Pelkistysjaksossa käytetään joko aromaattista hii-livety-liuotinta (bentseeniä, tolueenia, ksyleeniä jne.) 30 tai eetteri-liuotinta (THF:a, dioksaania jne.) tai dipo-:\ laarista aproottista liuotinta (DMF:a, joka on dimetyyli-

formamidi; HMPA:ta, joka on heksametyylifosforihappo-tri-amidi jne.). Reaktio on suoritettava 20-140 °C:ssa ensisijaisesti 60-120 °C:ssa, 1-36 tunnin aikana. Kaavan VII

12 95384 mukaisten yhdisteiden suojauksen poisto voidaan suorittaa happamissa tai emäksisissä tai hapettavissa tai pelkistävissä olosuhteissa tai niiden yhdistelmää käyttäen. Täsmällinen olosuhteiden valinta riippuu käytettävistä suo-5 jaryhmistä. Tapauksissa, joissa suojaryhmät asemissa 5' ja 6' ovat samoja, silloin suorassa poistossa muodostuu kaavan Vili mukaisia yhdisteitä.

B

B°—| I

T7 \_! viii HO-1 15 Jos R1 ja R3 ovat erilaisia, ryhmät voidaan pois taa peräkkäin 5'- ja 6'-asemista (tai päinvastoin). R2 voidaan poistaa olosuhteissa, jotka tarvitaan vapaan OH:n vapauttamiseksi 6'-asemassa ja jättämään 5'-aseman suojatuksi ja kaavan IX mukaisten yhdisteen muodostamiseksi

20 B

"p ..

25 HO -1

Vaihtoehtoisesti R1 voidaan poistaa ensisijaisesti siten, että 5'-OH vapautuu, 6'-aseman jäädessä suojatuksi, jolloin saadaan kaavan X mukaista välituotetta

30 B0~1/°\J

P .

r2o—I

13 95384

Nukleosidi-analogit IX ja X voidaan kummatkin muuttaa kaavan VIII mukaisiksi johdannaisiksi poistamalla viimeinen suojaryhmä. Suojauksen poisto-olosuhteet riippuvat käytetyistä täsmennetyistä suojaryhmistä (katso 5 Greene, "Protecting Groups in Organic Synthesis", katso yllä).

Vaihtoehtoisessa menetelmässä kaavan I mukaisten β-anomeeristen nukleosidien saamiseksi kaavan III mukaiset välituotteet voidaan muuttaa uudeksi dimeeri-väli-10 tuotteeksi XI.

R,°~| o 15 „* I—\ °v r0B* xi "L-or*

XX

20

Dimeerin muodostaminen suoritetaan halogenoidussa hiilivety- liuottimessa (metyleenikloridissa, kloroformissa jne.) ferrikloridin ja piidioksidin läsnä ollessa. Ensi-25 sijaiset reaktio-olosuhteet edellyttävät 40-120 °:n reak-' tiolämpötilaa 2 tunnin - 4 päivän ajan.

Kaavan XI mukaisen dimeerin renkaan suora avaaminen sopivasti aktivoidulla nukelosidi-emäksellä (katso yllä) tuottaa kaavan VI mukaisia yhdisteitä. Nämä ovat 30 identtisiä aikaisemmalla menetelmällä valmistettujen yh-disteiden kanssa. Tällä menetelmällä tuotettujen rakenteiden käsittely tarkalleen samalla tavalla kuin edellä, johtaa kaavan I mukaisten yhdisteiden muodostumiseen.

14 95384

Kaavan VI mukaisten nukleosidi-anaiogien, joissa B on pyrimidiiniemäs, 2'-0H-asema voidaan aktivoida aktivoivalla ryhmällä, tavallisesti alkyyli- tai aryylisulfo-naatti- tai tiokarbonyyli-imidatsoli-ryhmällä. Ensisi-5 jäisissä reaktio-olosuhteissa reaktio on suoritettava antamalla kaavan VI mukaisten johdannaisten reagoida vastaavan alkyyli- tai aryylisulfonyylikloridin tai tiodi-imidatsolin kanssa halogenoiduissa hiilivetyliuottimissa (metyleenidikloridissä, 1,2-dikloorietaanissa, jne.) 10 tai eetteri-liuottimissa (THF, dioksaani) tai dipolaa-risissa aproottisissa liuottimissa (DMF, HMPA jne.) -20 - 120 °Csssa, jolloin saadaan kaavan XII mukaisia yhdisteitä.

'V .

Ä20 —I OR3 20 jossa R on poistuva ryhmä kuten alkyylisulfonaatti, aryylisulfonaatti, trifluorialkyylisulfonaatti tai muita hyvin tunnettuja poistuvia ryhmiä. Reaktio alkyyli-tai aryylisulfonaattien kanssa edellyttävät orgaanisen 25 emäksen läsnä oloa. Seuraava kaava XII mukaisten akti- « voitujen välituotteiden käsittely joko emäksisissä tai lämpö-olosuhteissa tai eetteri-liuottimien (THF, dioksaani jne.) tai aromaattisten hiilivetyliuottimien (bent-seenin, tolueenin jne.) tai amidi-liuottimien (asetonit- 30 riilin, DMF:n, jne.) yhdistelmässä 20-140 °C 1-36 tunnin :* ajan, tuottaa kaavan XIII mukaisia johdannaisia.

il ' IMI III H II 1-tt : 95384

π JJ

5 'Τ' ΐΓ XIII

10 *2ο—» 4 ς jossa R on O tai ΝΗ, ja RJ on halogeeni, alkyyli tai alkenyyli.

Käsiteltäessä kaavan XIII mukaisia johdannaisia vesipitoisissa emäksisissä olosuhteissa saadaan kaavan (IV) 15 mukaisia nukleosideja

20 \ V XIV

R20 J

Poistamalla suojaavat ryhmät joko samanaikaisesti 25 (R^=R^) tai peräkkäin (R^ t R^) sopivissa olosuhteissa (katso Greene "Protective Groups in Organic Synthesis”, yllä) saatiin rakennekaavan XV mukaisia nukleosideja.

30 B0“K°V

w

HO -J

35 jossa B on pyramidiini-emäs.

16 95384

Kaavan III mukaiset johdannaiset,käsiteltäessä alifaattisten tai aromaattisten alkoholien (C1-C4) kanssa joko Lewis- ja/tai Bronsted-hapon läsnä ollessa, muuttuvat helposti kaavan XVI mukaisiksi johdannaisiksi.

5 1 ^VW*Ö asyyli , w

1 q RO —J OH

Pelkistämällä sen jälkeen 2-asema jollakin edel-äl selostetuista menetelmistä saatiin kaavan XVII mukaisia johdannaisia.

15 ^ Ϊ° ^Nyvvsoasyyli

-' XVII

.

Nämä voidaan muuttaa hyvin tunnetuin menetelmin vastaaviksi kaavan XVIII mukaisiksi anomeerisiksi estereiksi tai haloideiksi -J 25

\-1 XVIII

30 r20-1 jossa on haloidi tai esteri, (katso Brundidge ym., US-patentti 4 625 020 ja käyttämällä TMSBrta, katso Gillard ym., yllä).

17 95384

Suorittamalla näiden kaavan XVII tai XVIII mukaisten hiilihydraattien kytkentäreaktio sopivan aktivoidun emäksen kanssa (katso aktivointimenetelmää edellä) saadaan kaavan XIX mukaisten yhdisteiden anomeerista se-5 osta.

I-' XIX

1 o r2q-1 Tämä anomeeri-seos voidaan erottaa kromatograa- fisin ja kiteytysmenetelmin, jotka ovat tämän keksinnön alan asiantuntijain hyvin tuntemia. Poistamalla suoja- 15 ryhmät joko puhtaasta a- tai puhtaasta β-anomeerista saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä. Suojaryhmät 12 12 voidaan poistaa yhdessä (R =R ) tai erikseen (R f R ). Tarkat olosuhteet riippuvat käytetyistä suojaryhmistä.

Vaihtoehtoisessa menetelmässä anomeerisen seoksen 20 xix saamiseksi, kaavan VII mukaiset johdannaiset, jotka ovat β-anomeereja, voidaan muuttaa kaavan XIX mukaiseksi anomeeri-seokseksi. β-anomeerit voidaan transglykosyloi-da kemiallisesti happamissa olosuhteissa (Eckstein ym., J. Org. Chem., 1978, 43, 3044). Näissä olosuhteissa tun-25 netun anomeerisen konfiguraation omaava nukleosidi muutetaan nukleosidin anomeeriseokseksi, jossa on erilainen nukleiini-emäsosa. Näissä reatkioissa pyrimidiini-nukleosidit muuttuvat tavallisesti puriini-nukleosideik-si. Olemme käyttäneet näitä reaktioita myös anomeeristen 30 seosten valmistamiseen puhtaista anomeereista käyttä -mällä samaa emäsosaa. Ensisijaisessa tapauksessa kaavan VII mukaisen β-anomeerin annetaan reagoida silyloidun puriini- tai pyrimidiini-emäksen kanssa Lewis-happo-katalyytin läsnä ollessa joko dipolaarisessa aproottisessa 35 liuottimessa (DMF, HMPA) tai happo-johdannais-liuotti- is 95384 messa kuten asetonitriilissä tai aromaattisessa hiilive-ty-liuottimessa 20-140 °C:ssa 1-48 tunnin ajan, jolloin saadaan jatkokäsittelyn jälkeen tuotteiden XIX anomeeris-ta seosta. Kaavan XIX mukaiset johdannaiset voidaan puh-5 distaa edellä selostetulla tavalla ja muuttaa kaavan I mukaisiksi.

Kaavan I mukaisilla 3'-substituoiduilla metyyli-nukleosideilla on selvä virusvastainen vaikutus ja niitä voidaan käyttää hoidettaessa erilaisia ihmisen ja eläimen 10 sairauksia, joita ovat aiheuttaneet virukset, kuten herpes simplex-virustyypit 1 ja 2. Erityisen ensisijaisia yhdisteitä virusinfektioiden hoitamiseksi ovat kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R on vety ja Q on vety tai hydroksi. Kaavan I mukaisia yhdisteitä annetaan jokaisel-15 la fysiologisesti hyväksyttävällä menetelmällä, esim. pa-renteraalisesti, terapeuttisesti tehoavana määränä. Optimi-annosten määrittäminen on alan asiantuntijain päätettävissä.

Seuraavat esimerkit valaisevat kaavan I mukaisten 20 yhdisteiden valmistusta. Näissä esimerkeissä THF on tet-rahydrofuraani, TMCS on trimetyylisilyylikloridi, AIBN on atsobisisobutyronitriili, DMSO on dimetyylisulfoksidi,

EtOH on etyylialkoholi, iPrOH on isopropyylialkoholi ja HMDS on heksametyyli-disilatsaami.

. 25 Esimerkki 1 1,2-0-di-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-[(bentsyyli-oksi)metyyli]-β-D-ribofuranoosi 1,2-0-isopropylideeni-3-deoksi-3-[(bentsoylioksi)-metyyli)-5-0-bentsyyli-p-D-ribofuranoosia, valmistettu 30 Acton'in ym:n menetelmällä yllä, (52 mg; 0,135 mmoolia) ;lämmitettiin 80-90 °C:ssa 80 %:sessa etikkahapossa (3 ml) 6 tuntia. Haihtuvat aineet poistetaan vakuumissa ja jäännös liuotettiin kuivaan pyridiiniin (2,5 ml). Lisättiin 19 95384 etikkahappoanhydridiä (1 ml) ja seosta pidettiin huoneen lämpötilassa 14 tuntia. Sen jälkeen kun haihtuvat aineet oli poistettu vakuumissa, jäännös suodatettiin piidioksidin läpi (20 % —»25 % etyyliasetaattia heksaanissa), 5 jolloin saatiin otsikon yhdistettä (45 mg; 77,8 %:n saanto), jossa oli noin 30 % α-D-isomeeriä. PMR (360 MHz; CDC13); 7,24-7,34(m, 10, aroin. ), 6,38(d, J = 4,4 Hz, 0,3, H-l α-anomeeri), 6,05(s, 0,7, H-l β-anomeeri), 5,34(dd, Jx 8,6 Hz, J2 - 4,4 Hz, 0,3, H-2 a-anomeeri), 10 5,28(d, J - 4,9 Hz), 4,54(bs, 2,bentsyyli CH2), 4,41(m, 2,bentsyyli CH2), 4,34(m, 0,3, H-4 α-anomeeri), 4,19(m, 0,7 H-4 β-anomeeri), 3,68-3,50(m, 4, H-5 + H-6), 2,79-2,75(m, 1, H-3), 2,01(s, 0,9, OCOCH3, a-anomeeri), 2,00(s, 0,9, OCOCH3 α-anomeeri), 1,99(s, 2,1, 0C0CH3 β-15 anomeeri), 1,91(s, 2,1, 0C0CH3, β-anomeeri).

Esimerkki 2 1,2,5-tri-0-asetyyli-3-deoksi-3-[(asetoksi)metyyli]-β-D-ribofuranoosi a-D-1,2,0-isopropylideeni-3-deoksi-3-C-hydroksi-20 metyyli-ribofuranoosia, valmistettu Acton'in ym:n menetelmällä yllä (4,0 g; 19,59 mmoolia) asetyloitiin ylimääräisen pyridiinin ja etikkahappoanhydridin kanssa yön ajan. Häihduttamalla kuiviin saatiin α-D-l,2,0-isopropy-lideeni-3-deoksi-3-[(asetoksi)metyyli]-5-0-asetyyli-ribo-. 25 furanoosia (5,6 g), jota käytettiin puhdistamatta seuraa- vissa vaiheissa.

PMR(300 MHz; CDC13): 5,81(d, J = 3,6 Hz, 1, H-l), 4,67(bt, J - 3,9 Hz, 1, H-2), 4,36-4,29(m, 2, CH2OCOCH3), 4,15-4,06(m, 2, CH^COC^), 2,25(m, 1, H-3), 2,04(s, 3, 30 OCOCH3), 2,02(s, 3, OCOCH3), l,46(s, 3, asetonidi CH3), l,28(s, 3, asetonidi CH3).

. · · 20 95384 Tämä reaktiotuote liuotettiin 60 %:seen etikkahap-poon (30 ml) ja lämmitettiin 100 °C:ssa 5 tuntia. Haihtuvat aineet poistettiin vakuumissa ja jäännös asetyloi-tiin edellä selostetulla tavalla. Kuiviin haihduttamisen 5 jälkeen raaka tuote suodatettiin piidioksidin läpi (40 % —> 50 % etyyliasetaattia heksaanissa), jolloin saatiin otsikon tuotetta (2,7 g, kokonaissaanto 43,3 %), jossa oli 20 % α-D-isomeeria. PMR (200 MHz; CDC13): 6,38 (d, 0,2, H-l-a-anomeeri), 6,08 (s, 0,8, H-l 6-anomeeri), 10 5,27 (d, J « 4,8 Hz, 0,8 H-2 β-anomeeri), 4,33-4,07 (m, 5, 2 x CHjOCOCHj + H-4), 2,69 (m, 1, H-3), 2,08 + 2,07 + 2,05 + 2,04 (s, 4 x 0C0CH3).

Esimerkki 3

Metyyli-5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-[(bentsyylioksi)me-15 tyyli]-β-D-erytro-pentofuranosidi

Metyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-[(bentsyylioksi)-metyyli]-β-D-ribofuranosidia, valmistettu Acton'in ym:n menetelmällä, yllä, (4,5 g; 12,56 mmoolia) liuotettiin kuiviin THFiiin (100 ml) ja käsiteltiin tiokarbonyyli-20 di-imidatsolin (8,91 g; 50 mmoolia) kanssa. Reaktio- seosta lämmitetitin kiehuttaen 14 tuntia. Liuotin haihdutettiin pois ja jännös puhdistettiin piidioksidilla (10 % —> 18 % etyyliasetaattia dikloorimetaanissa), jolloin saatiin puhdasta 2-0-tiokarbonyyli-imidatsoli-25 johdannaista (5,1 g; saanto 87,6 %). Liuos, jossa oli * tätä ainetta (4,9 g; 10,57 mmoolia) kuivassa tolueenis-sa (300 ml), lisättiin tiputtamalla kiehuvaan liuokseen, jossa oli tributyylitinahydridiä (6,46 ml; 24,00 mmoolia) argonin suojaamana tolueenissa (500 ml). Liuosta lämmi-30 tettiin kiehuttaen 40 tuntia, haihtuvat osat poistet- • t • v 1 : : ant aim i.t t-ai . .

· · 21 95384 tiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin kromatografioi-malla piidioksidilla (heksaani —> 25 1 etyyliasetaattia heksaanissa). Saanto: 2,3 g (63,55 %) otsikon yhdistettä, jonka spektriominaisuudet olivat Acton'in ym:n 5 esittämät, yllä.

Esimerkki 4 1- (2,3-dideoksi-3-C-hydroksimetyyli-g-D-erytro-pentofu-ranosyyli)tyrniini ja 1-(2,3-dideoksi-3-C-hydroksimetyy-li-a-D-erytro-pentofuranosyyli)tyrniini 10 Kuivaa tymiiniä (1,26 g; 10 mmoolia) silyloitiin ja raaka tuote liuotettiin kuivaan 1,2-dikloorietaa-niin (50 ml) yhdessä metyyli-5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi- 3-/lbentsyylioksi) -metyyli/-g-D-erytro-pentofuranksidin (779 mg, 2,275 mmoolia) kanssa. Tähän liuokseen lisät-15 tiin trimetyylisilyyli-triflaattia (1,0 ml? 4,87 mmoolia) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia argonin suojaamana. Lisättiin 1,2-dikloorietaania (50 ml) ja koko seos pesitin kylmällä kyllästetyllä bikarbonaatti-liuoksella. Kuivaamalla ja haihduttamalla 20 kuiviin saatiin 1,1 g raakaa ainetta, joka kromatografi-oitiin huolellisesti piidioksidilla (25 —> 60 % etyyliasetaattia heksaanissa). 0-D- ja a-D-yhdisteet (170 mg) liuotettiin etanoliin (6 ml) ja syklohekseeniin (20 ml), lisättiin 20 %:sta Pd(OH)/C-katalyyttiä (70 mg) ja seos-25 ta lämmitettiin kiehuttaen 45 minuuttia. Suodattamalla

Celite'n läpi (pestiin etanolilla) ja haihduttamalla kuiviin saatiin vapaiden nukleosidien raakaa seosta, joka puhdistettiin C^g^uBibdapak-kolonnissa (19 x 150 mm) käyttämällä 10 % —> 20 % metanolia vedessä. 1-(2,3-dideok- • 30 si-3-C-hydroksimetyyli-oi-D-erytropentofuranosyyli) tymii- * ·· ni eluoitui ensin ja kiteytettiin sen jälkeen metanoli-dietyylieetteri-seokeesta (25 mg? saanto 4,5 %)? 22 95384

Sp. 78-80 ®C. PMR(360 MHz; D20): 7,56(bs, 1, H-6), 6,09(t, J - 7,1 Hz, 1, H-l’), 4,21(m, 1, H-4'), 3,78(dd, Jj = 2,7 Hz, J2 = 12,4 Hz, 1, A ABX H-5'), 3,65(d, J = 3,2 Hz, 2, H-6'), 3T615(dd, Jj * 5,6 Hz, J2 = 5 12,5 Hz, 1, B ABX, H-5'), 2,59(m, 1, H-3'), 2,43(m, 1, H-2' ) , l,95(m, 1, H-2') , l,86(s, 1, CH3). CMR(90,56 MHz; D20): 1 68,24(C-4), 153,21(C-2), 138,79(C-6), 112,62(C-5), 87,89(01'), 84,78(C-4'), 64,06 + 63,13(05' + C-6’) , 42,73(C-3'), 36,13(C-2'), 12,95(CH-). MS-EI(m/e): 10 2.55(M+-H), 224(M+ - CH3OH), 206(M* - OH - CH3OH), 130(M+ - tyrniini).

1-(2,3-dideoks i-3-C-hydrok s imetyy1i-β-D-erytro-pentofuranosyyli)tyrniini eluointi toiseksi ja kiteytettiin metanoli-dietyylieetteriseoksesta (50 mg; 15 saanto 9 %), sp. 122 - 124 °C.

PMR(360 MHz, DjO) : 7,71(bs, 1, H-6), 6,09<dd, Jj = 4,3 Hz, J2 = 7,0, 1, H-l'), 3,93(m, 1, H-4’), 3,87(dd, Jj = 12,6 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1, A ABX, H-5'), 3,715(dd, Jj = 12,6 Hz, J2 = 5,0 Hz, 1, B ABX, H-5'), 3,64(d, J = 5,9 Hz, 1, H-6'), 20 2,46 (m, 1, H-3'), 2,25(m, 2, H-2'), l,85(bs, 3, CH3) .

CMR(90.56 MHz; D20) : 168,04(04), 153,18(02), 139,02(06), 115,41(05), 86,72 + 85,07(01' + C-4'), 63,48 + 63,35(05' + 06'), 41,45 (C-3 ') , 35,78(02'), 12,9 6 (tyrniini CH3).

MS-EI (m/e): 255 (M+ - H),, 224 (M+ -CHjOH) , 206 (M+ - OH - " ^ CHjOH), 130(H - tyrniini). MS-high resolution (FAB—glyseroli) yhdisteelle cnHi7N2°5: lask\ 257-1137. Saatu: 257-1142.

Esimerkki 5 1-^2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-^7asetoksi)metyyli7-6-D-30 ribofuranosyyli)urasiili ’·* Kuivaa urasiilia (100 mg; 0,89 nunoolia) ja β-D- «it 1,2,4-tri-0-asetyyli-3-deoksi-3-^asetoksimetyyli7~B-D-ribofuranoosia, jossa oli 20 % a-D-isomeeria (250 mg; 0,786 mmoolia), käsiteltiin peräkkäin (sekoittaen, ar-35 gonin suojaamana) kuivan asetonitriilin (10 ml) TMCS:n

Il Itlifr HIK

23 9 5 3 8 4 (0,102 ml; 0,80 mmoolia), HMDS:n (0,168 ml; 0,80 mmoo-lia) ja tinatatrakloridln (0,142 ml; 1,0 mmoolia) liuoksen kanssa asetonitiilissä (5 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja laimennettiin di-5 kloorimetaanilla (40 ml). Pesemällä kyllästetyllä bikarbonaatilla, kuivaamalla (Na^O^), ja haihduttamalla kuiviin saatiin raakaa tuotetta (225 mg), joka puhdistettiin sen pikeen piidioksidilla (eluointi seoksin 30 % etyyliasetaattia dikloorimetaanissa —> 60 % etyyli-10 asetaattia ja 4 % etanolia 36 %:ssa dikloorimetaania).

Otsikon tuotteen saanto: 124 mg (41%). PMR(300 MHz; CDC13); 7,42(d, J = 8,4 Hz, 1, H-6), 5,71(dd, ^ « 8,1 Hz, * 2,1 Hz, 1, H-5), is 5t 66(d, J = 2,4 Hz, 1, H-l·), 5,48(dd, = 6,6 Hz, J2 « 2,1

Hz, 1, H-2'), 4,10 - 4,03(m, 5, H-4' + H-5* + H-6'), 2,75(m, 1, H-3'), 2,10(s, 3, OCOCHj), 2,095(s, 3, OCOCHO, 2,025(s, 3, 0C0CH3).

Esimerkki 6 20 1-(3-deoksi-3-C-hydroksimetyyli-6-D-ribofuranosyyli)- urasiili 1-/2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-/Tasetoksi)metyy-li/~ B-D-ribofuranosyyli7urasiili (230 mg; 0,598 mmoolia) ··· liuotettiin metanoliin (15 ml), joka oli kyllästetty huo- 25 neen lämpötilassa ammoniakki-kaasulla. Reaktioseosta sekoi tettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia, haihtuvat osat poistettiin vakuumissa, ja jäännös kiteytettiin uudelleen etanolista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä ( 86,2 mg, saanto 55,82 %).Sp.201-203°C:PMR (300 MHz; D20); : 30 7,98(d, J « 8,1 Hz, 1, H-6), 5,82(d, J - 8,1 Hz, H-5), 5,78(s, 1, H-l'), 4,50(d, J - 5,2 Hz, 1, H-2'), 4f18(m, 1, H-4'), 3,97(dd, ^ - 2,6 Hz, J2 * 13 Hz, 1, H-5'), 3,8? - 3,67 (m, 3, 2 x H-6' + H-5'), 2,33(m, 1, H-3'). Yhdisteelle C10H14N2°6 X 1/3 H2° las1^· 5 45,72% C, 5,57% H, 10,67% Nj 35 saatu: 45,88% C, 5;47% H, 10,62% N.

24 95384

Esimerkki 7 1-^2r5-dl-0-asetyyli-3-deoksi-3-^Tasetoksi)metyyli7-B-D-ribofuranosyyli7sytosiini 1-[2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-£7asetoksi)metyy-5 li7-B-D-ribofuranosyyli7urasiilia (250 mg; 0,65 mmoolia) liuotettuna kuivaan pyridiiniin (5 ml), käsiteltiin 4-kloorifenyyli-fosforidikloridaatin (326^ul; 2,0 mmoolia) ja sublimoidun 1,2,4-triatsolin (277 mg; 4,0 mmoolia) kanssa. Tätä seosta sekoitettiin 16 tuntia argonin 10 suojaamana (huoneen lämpötilassa). Lisättiin dioksaania (3 ml) ja väkevää ammoniakkia (9,7 ml) ja sekoittamista jatkettiin 48 tuntia. Haihtuvat osat poistettiin vakuu-missa, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pyridi-niumhydrokloridi suodatettiin erilleen. Raaka tuote puh-15 distettiin piidioksidilla (5 % metanolia dikloorimetaa-nissa —> puhdas metananoli), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (119 mg; saanto 47,7 %).

PMR(300 MHz; CDC13): 7,53(d, J * 7,5 Hz, 1, H-6), 5,77 (d, J » 7f5 Hz, 1, H—5), 5,67(bs, 1, H-l'), 5,59(bd, 1, H-2'), 20 4,39 - 4,22(m, 5, H-4' + H-5' + H-6'), 2f70(m, 1, H-3’)· CMR (75,46 MHz; CDClj) : 166,79(04), 156,1(02), 141,73(06), 95,27 (05) , 93,02(01'), 81,11(04'), 77,5(02'), 64,29 + 60,12(05' + C-6'), 40,98(05'), 20,97(CH-CO).

··« ~ e » J

25

Esimerkki 8 1 -(3-deoksi-3-Ohydroksimetyyli-8-D-ribofuranosyyli)-sytosiini 1-[2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-£7asetoksi)metyy-.. 30 li7-6-D-ribofuranosyyli7sytosiini (50 mg; 0,13 mmoolia) • liuotettiin metanoliin (5 ml), joka oli kyllästetty ammo niakki-kaasulla. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia, haihtuvat osat poistettiin vakuumissa, ja jäännös kiteytettiin etyyli metanoli - etyyliasetaat-35 ti-seoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (18 mg; il - ttt;t nm iti nt i * m 95384 8,045(d, J - 7,4 Hz, 1, H-6), 7,12 + 7,00 (2 x bs, 2, , 5,65(d, J = 7,4 Hz, 1, H-5), 5,60(s, 1, H-l'), 5,51(d, J * 4,8 Hz, 1, H-2'), 5,06(t, J « 5,1Hz, 1, OH), 4,07(t, J = 5,1 Hz, 1, OH), 3,92(m, 1, H-4’), 3,81 - 3,38(m, 4, H-5' + 5 H-6'), 2,08(m, 1, H-3·).

Laskettu yhdist. C1QH15H305 :46f69% c> 5/88% H> 16t33l N.

Saatu: 46,52% C, 5,91% H, 16,23% N.

Esimerkki 9 10 1-/2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/7bentsyyli- oksi)metyyli7-B-D-ribofuranosyyli7urasiili

Liuokseen, jossa oli 1,2-di-0-asetyyli-5-0-bent-syyli-3-deoksi-3-^lbentsyylioksi)metyyli7-6-D-ribofura-noosia (9,1 g; 21,24 mmoolia) kuivassa asetonitriilis-15 sä (300 ml), lisättiin kuivaa urasiilia (2,576 g; 23 mmoolia), HMDS:ää (5,23 ml; 25 mmoolia) THCS.-ää (3,37 ml; 27 mmoolia) ja trifluorimetaanisulfonihappoa (2,36 ml? 27 mmoolia). Tätä seosta sekoitettiin 3,5 tuntia huoneen lämpötilassa argonin suojaamana ja 20 sitten 40 minuuttia 60 °C:ssa. Ylimääräinen liuotin poistettiin vakuumissa, lisättiin kloroformia (200 ml) ja liuos pestiin kyllästetyllä bikarbonaatilla ja suolaliuoksella. Kuivaamalla ja haihduttamalla kuiviin saatiin raakaa tuotetta (11,85 g), joka puhdistettiin

Itt 25 piidioksidilla (50 % etyyliasetaattia heksaanissa —> 5 % etanolia etvyliasetaatti-heksaani-seoksessa (1:1), jolloin saatiin puhdasta tuotetta (8,05 g; saanto 78,87 %). PMR (300 MHz; CDClj): 7,89(d, J * 8,1 Hz, 1, H-6), 7,36 - 7,23 (m, 10,aroro).

30 5,94(d, J - 2,7 Hz, 1, H-l'), 5,9 (dd, Jj * 2,5 Hz, J2 * 6,1

Hz, 1, H-2')f 5|30(dd, J. - 8,1 Hz, J2 « 2,1 Hz, 1, H-5) 4,52 kapea AB, 2bentsyyli CH2) , 4,45(kapea AB^2, bentsy^li CH2), 4,22(dm, J - 8,4 Hz, 1, H-4’), 3f93(dd, Jj * 2yl Hz, J2 = 10,8 Hz, 1, H-5 *), 3,65 - 3,53(m, 3, 2 x H-6' + H-5’), 35 2,81(m, 1, H-3'), 1,995(8, 3, OCOCH3).

26 95384

Esimerkki 10 1-/5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-£7bentsyylioksi)metyyli?- &-D- ribofuranosyyli/urasiili 1-/2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyy-5 lioksi)metyyli7-B-D-ribofuranosyyli?urasiili (8,0 g; 16,65 mmoolia) liuotettiin metanoliin (175 ml), joka oli kyllästetty ammoniakki-kaasulla ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Haihduttamalla kuiviin saatiin otsikon yhdistfettä (7,32 g; kvant.).

10 PMR(300 MHz; CDC13): 8f17(d, J = 8,1 Hz, 1, H-6), 7,35 - 7,23(m, 10, arom.), 5f72(s, 1. H-l’), 5,21(d, J = 8,1 Hz.

I, H-5) , 4,51 (kapea AB, 2,bentsyyli'CH2) , 4,49(AB , 2 ,'bentsyyli CH2), 4,32(m, 2, H-2’ + H-4’) , 4,0(dd, = 2,1 Hz, J2 = II, 1 Hz, 1, H-5*), 3,80 - 3.58(m, 3, H-5' + 2 x H-6'), 15 2j57(m, 1, H-3').

Esimerkki 11 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-/7bentsyyIloksi)metyyli?- 8-D-erytro-pentofuranosyyli?urasiili 1-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyy-20 li7-6“D-ribofuranosyyli7urasiiliä (3,9 g; 8,894 mmoolia) liuotettuna kuivaan 1,2-dikloorietaaniin (80 ml), käsiteltiin tiokarbonyylidi-imidatsolin (1,786 g; 10 mmoolia) kanssa. Reaktioseosta lämmitettiin kiehuttaen argonin suojaamana 10 minututia. PMR osoitti lähtöaineen 25 muuttuneen täydellisesti 1 -^2-0-imidatsolotiokarbonyyli- 5-O-bentsyyli-3-deoksi-3-/7bentsyylioksi)metyyli?-0-D-ri-bofuranosyyli7urasiiliksi, jota käytettiin puhdistamatta. Liuos, jossa oli tätä ainetta kuivassa THFrssa (45 ml), lisättiin tiputtamalla kiehuvaan liuokseen, jossa oli 30 bistributyylitinaoksidia (20 ml), polymetyylihydroksilok- • · saania (20 ml) ja AIBNtää kuivassa tolueenissa (180 ml) argonin suojaamana. Lämmittämistä jatkettiin edblleen 1,5 tuntia, reaktioseoksen annettiin jäähtyä, ja haihdu-vat aineet poistettiin vakuumissa. Puhdistamalla piidi-35 oksidilla (50 % etyyliasetaattia heksaanissa —> 10 % il Si*li Μ4«· ' ; | 55384 etanolia etyyliasetaatti-heksaani-seokseen 1:1) saatiin otsikon yhdistettä (2/95 g; saanto 78,5 %).PMR (300 MHz, CDC13): 7|99(d, J s 7,0 Hz, 1, H-6), 7,32 - 7f19(m, 10, aroni.) 6,065(bdd, * 3,3 Hz, J2 * 5^4 Hz, 1. H-l'), 5 5,29 (d, J = 7,8 Hz, 1, H-5), 4,53(bs, 2, bentsyyH CIV* 4,48(bs, 2, bentsyyli CHj) , 4,04 (bd, J * 6,9 Hz, 1, H-4'), 3,90 (d, J * 10,2 Hz, 1, H-5'), 3,64(d, J « 11,1 Hz, 1, H-5'), 3,46(m, 2, H-6'), 2,68(m, 1, H-3'), 2,30 - 2f00(m, 2, H-2').

Esimerkki 12 10 1-(2,3-dideoksi-3-0-hydroksimetyyli-3-D-erytro-pentofura- nosyyli)urasiili 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^Tbetsyylioksi)-metyyli?-^-D-erytro-pentofuranosyyli7urasiili (450 mg; 1 ,065 nunoolia) liuotettuna etanoliin (7 ml) ja syklohek- 15 seeniin (20 ml), lämmitettiin kiehuttaen Pd(OH)2/Okata- lyytin (700 mg) kanssa 16 tuntia. Katalyytti suodatettiin pois (Celite) ja tuote puhdistettiin piidioksidilla ja kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (139 mg; saanto 57,4 %) .PMS(300 MHz;DMSO de); 7,98(d,J=

V

20 8,1 Hz, 1, H-6), 5,95(dd, = 4,3 Hz, J2 = 6,8 Hz, 1, H-l·), 5,58 (dd, Jx = 1,9 Hz, J2 * 8,0 Hz, 1, H-5), 5,05 (t, J = 5,1 Hz, 1, OH), 4,79 (t. J = 5,1 Hz, 1, OH), 3,77 (m, 1, H-4'), 3,69 - 3,50(ιη, 2, H-5'), 3,43(m, 2, H-6'), 2,32(m, 1, • · H-3·), 2,16(m, 1, H-2·), 2,00(m, 1, H-2'). CMR (75,46 MHz; 25 D20) : 168,44(04), 153,69(02), 144,07(06), 103,71(05), 87,79 + 85,97 (OI1 + C-4'|, 64^16 + 63^89(0-5' + C-6' ) , 42,06(02'), 36,57 (03 ') . UV(nm): 206 (7195), 264 (8033).

Esimerkki 1 3 \ 30 1-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyyli7“6~D- r ibo f urano s yy1i7“4-1 iourasiili 1-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^Tbentysylioksi)metyy-li7”6-D-ribofuranosyyli7urasiili (480 mg; 1,095 mmoolia), valmistettu esimerkissä 10, luotettiin kuivaan 1,2-dime- 28 95384 toksietaania ja käsiteltiin Lawesson'in reagenssin (480 mg; 1,186 mmoolia) kanssa. Puhdistamalla kroma-tograafisesti piidioksidilla (20 % etyyliasetaattia —> 50 % etyyliasetaattia heksaanissa) saatiin puhdasta 5 tuotetta (385 mg; saanto 84,7 %) PMR(300 MHz, CDCl^): 7,91 (d, 1, H-6); 7,40- 7,20 (m, arom)), 6,03 (m, 2, H-11 + H-5), 4,54 (bs, 2, bentsyyli CH2), 4,48(bs, 2, bentsyyli CH2), 4,07 (m, 1, H-4'), 3,90 (dd, 1, H-5'), 3,64 - 3,40 (m, 3, H-5' + 2 x H-6'), 2,67 (m, 1, H-3'), 10 2,28 (m, 1, H-2'), 2,12(m, 1, H - 2’).

Esimerkki 14 1-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyyli7-β-D-ribofuranosyyli7sytosiini 1-/5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/(bentsyylioksi)metyy-15 li-6-D-ribofuranosyyli74-tiourasiilia (345 mg; 0,787 mmoolia) liuotettiin etanoliin (5 ml) ja kyllästettiin ammoniakki-kaasulla. Reaktioseosta lämmitettiin paine-ampullissa 105 °C;ssa 4 tuntia. Kromatografioimalla piidioksidilla saatiin otsikon yhdistettä (267 mg; 20 saanto 80,3 %). PMR(300 MHz, CDClj): 8,01(d, J - 7,2 Hz, 1, H-6), 7,40 - 7,21(m, 10, arom), 6,06(dd, * 6 , 4 H2, J2 » 3,0 Hz, 1, H-1’), 5,40(d, J = 7,2 Hz, 1,, H-5), 4,53 (kapea AB, 2, bentsyyli CH2> , 4,44 (bs, 2 bentsyyli CH2) , 4t01(dm, J * 5,4 Hz, 1, H-4'), 3,87(dd, * 2,4 Hz, J2 * 25 10,8 Hz, 1, H-5'), 3,65 - 3f37(m, 3, H-5* + 2 x H-6'), 2156(m, 1, H-3'), 2,25(m, 1, H-2*), 2,10(m, 1, H-2')

Esimerkki 15 1-/5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-/7bentsyylioksi)metyy-30 li7~3-D-erytro-pentofuranosyyli7urasiili ja 1-/5-0- bentysyli-2,3-dideoksi-3-^Tbentsyylioksi)metyyli7-d-D- erytro-pentofuranosyyli7urasiili 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-/7bentsyyli)me-tyyli7”^-D-erytro-pentofuranosyyli7urasiili (36 mg; 35 0,085 mmoolia) liuotettiin kuivaan asetonitriiliin

Il M-i imu m i m 95384 (0,8 ml) ja käsiteltiin kuivan urasiilin (22,4 mg; 0,2 mmoolia) HMDS:n (42, ^ul; 0,2 mmoolia), TMCS:n (25^ul; 0,2 mmoolia) ja trifluorimetaanisulfonihapon (17,7^ul; 0,2 mmoolia) kanssa. Reaktioseosta lämmitet- 5 tiin 80 °C:ssa 2 tuntia, annettiin jäähtyä, laimennet tiin dikloorimetaanilla, pestiin kyllästetyllä bikarbo-naatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin. Haihduttamalla kuiviin ja puhdistamalla sen jälkeen kromatogra-fioimalla piidioksidilla, saatiin α-D- ja β-D-nukleosi-10 din seosta suhteessa 2:1 (27 mg; saanto 75 %.

Tätä seosta ei erotettu vaan käytettiin suoraan kehitys ja suojauksen poistojaksossa.

Esimerkki 16 1-(2,3-dideoksi-3-C-hydroksimetyyli-8-D-erytro-pento-15 furanosyyli)sytosiini ja 1-(2,3-dideoksi-3-C-hydroksi- metyyli-a-D-arytropentrofuranosyyli)sytosiini

Seosta, jossa oli 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi- 3-^7bentsyylioksimetyyli7“£-D-erytro-pentofuranosyyli7“ urasiilia ja 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^7bentsyy-20 lioksi)metyyli7“(x-D-erytro-pentofuranosyyli7urasiilia suhteessa 2:1 (260 mg; 0,615 mmoolia), liuotettiin kuivaan pyridiiniin (5 ml) ja käsiteltiin 4-kloorifenyyli-fosforidikloridaatin (65^ul; 4,0 mmoolia) ja sublimoidun triatsolin (553,6 mg; 8,0 mmoolia) kanssa. Reaktio- • · « 25 seosta sekoitettiin argonin suojaamana huoneen lämpö tilassa 16 tuntia, sitten lisättiin dioksaania (10 ml), metanolia (10 ml) ja väkevää ammoniakkia (1 ml). Sekoittamista jatkettiin 24 tuntia, pääosa haihtuvista osista poistettiin vakuumissa ja jäännös jaettiin etyy-; * 30 liasetaattiin ja veteen liukeneviin osiin. Etyyliase taatti-fraktio kromatografioitiin silikageelillä, jolloin saatiin 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^(bentstt-lioksi)metyyli7-8“D-erytro-pentofuranosyyli7sytosiinin ja 1-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^7bentsyylioksi)me-35 tyyli/-a-D-erytro-pentofuranosyyli/sytosiinin saosta suhteessa 2:1 (140 mg; saanto 54 %).

30 95384

Edellä mainittu seos liuotettiin etanoliin (5 ml), syklohekseeniin (3 ml) ja lisättiin Pd(OH)2/C-katalyyt-tiä (355 mg) ja lämmitettiin kiehuttaen 4 tuntia. Haih-tuvatosa poistettiin vakuumissa ja jäännös suodatettiin 5 piidioksidin läpi, jolloin saatiin 1-(2,3-dideoksi-3-C- hydroksimeytyli-B-D-erytro-pentofuranosyyli)sytosiinin ja 1-(2,3-dideoksi-2-C-hydroksimetyyli-a-D-erytro-pen-tofuranosyyli)sytosiinin seost asuhteessa 2:1, joka erotettiin HPLCstä käyttäen C^-koIonissa (0-3 % metano-10 lia 0,05-mol. ammoniumformiaatissa). Lopuksi jäähdytys- kuivattiin muutaman tipan kanssa väkevää ammoniakkia.

1-(2,3-dideoksi-3-C-hydroksimetyyli-#-D-erytro-pentofuranosyyli)sytosiini eluoitui ensin (10 mg; saanto 6,7 %).

15 PMR(300 MHz; CD30D): 7,82 (d, J « 7,6 Hz, 1, H-6), 6,05(t, J = 6,4 Hz, 1, H-l'), 5,95(bd, J = 7,5 Hz, 1, H-5), 4f19(m, 1, H-41), 3,75(dd, J1 = 3,6 Hz, J2 « 12,1 Hz, 1, H-5'), 3,62 - 3,52(m, 3, H-5' + 2 x H-6'), 2,65(m, 1, H-2’), 2,41(m, 1, H-31), 1,84(m, 1, H-2’). CMR(75,47 MHz; D20): 173,9(C-4), 20 164,7(C-2), 148,42(C-6), 102,91(0-5), 94,37(0-1'), 90,52(04'), 69,62 + 68,71 (0-5' + C-6'), 48,11(0-3’), 42,25 (Ct2').

MS-higt resolution (FAB glyserolissa): laskettu yhdisti 25 teelle C.| qH.j gO^N^: 242, 1141; saatu; 242 1133.

1-(2,3-dideoksi-2-C-hydroksimetyyli-B-D-erytro-pentofuranosyyli)sytosiini eluoitui (21 mg; saanto 14,15%).

Sp. 171 - 174eC. PMR(300 MHz; D2<5) : 7^86(d, J = 7,6 Hz, 1, H-6), 6,035(dd, ^ * 4,0 Hz, J2 * 6,9 Hz, H-l'), 5f93(d, 30 j = 7,5 Hz, 1, H-5), 3,95(m, 1, H-4'), 3,86(dd, ^ = 2,9 Hz, J2 " 12f6 Hz' l· 3,70(dd, - 5,4 Hz, Jj - 12,6 Hz, 1, H-5'), 3r62(d, J * 5,7 Hz, 2, H-6’), 2,41 - 2,10(m, 3, H-3' + 2 x H-2’). CMR(75,47 MHz; DzO): 173,2(0-4), 164,6(0-2), 148,6(0-6), 102,8(0-5), 93,3 + 91,0(0-1' + 35 04’), 69,22 + 68,84(0-5' + C-6'), 46,95(0-3’), 42,2(02').

UV(H20): 272(4921).

31 95384 MS - high resolution (FAB glyserolissa): laskettu yhdisteelle C1()H16N304 s 242 1411; saatu: 242 2239.

Esimerkki 17 5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/[7bentsyylioksi)metyyli7"1 , 2-5 anhydro-a-D-ribofuranoosi 1,2-0-isopropylideeni-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)-metyyli7~5-0-bentsyyli-a-D-ribofuranosia (350 mg; 0,91 mmoolia) liuotettuna kloroformiin (10 ml), lämmitettiin kiehuttaen 36 tuntia 10 %:sen ferrikloridi/pii-10 dioksidi-seoksen kanssa. Kiinteät aineet suodatettiin pois, liuotin haihdutettiin pois ja jäännös puhdistettiin piidioksidi-kolonnissa (30 % etyyliasetaattia heksaanissa), jolloin saatiin otsikon tuotetta öljynä (230 mg; saanto 77,4 %). PMR (36 MHz; CDCl-j) : 15 7,34 - 7,22(m, 10, arom.), 5,06(d, «7 = 3,75 Hz, 1, H-l1) , 4,55(s, 2,bentsyyli CH2), 4,45(AB, 2,bentsy#i CH2) , 4,27(m, 1, H-4'), 3,93(dd, = 6,6 Hz, J2 * 3,8 Hz, 1, H-2*), 3,82(m, 2, H-6* + H-5'), 3,53(m, 2, H-5* + H-6’), 20 2,52 (m, 1, H-3 *) . CMR(75,47 MHz; CDClj): 138,89 + 138,40 ( kvat. arom.) , 128,97 - 128,18(tert.arom), 99,45 (01'), 82,2(04'), 73,91 + 73,71 + 73,44(02* + 2 x bentsyyli CH2) , 70,80 + 67,07(05* + 06*), 44,43(03*). MS-FAB (glyseroli-matriisi 327 (M+ + H).

; 25 Esimerkki 18 1-/5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/7bentsyylioksi)metyyli7“6- D-ribofuranosyyli7tymiini

Liuosta, jossa oli persilyloitua tymiiniä (0,9 mmoolia) ja 5-0-bentysyli-3-deoksi-3-^Tbentsyylioksi)metyy-30 li7-1,2-anhydro-a-D-ribofuranosia (100 mg; 0,306 mmoo- . lia) 1,2-dikloorietaani/dikloorimetaani-seoksessa (1:1, 4 ml), käsiteltiin trimetyylisilyyli-trifluorime-taanisulfonaatin (193,3^ul; 1,0 mmoolia) kanssa. 3 tunnin sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa argonin 35 suojaamana, reaktioseos laimennettiin dikloorimetaanilla 32 95384 (10 ml) ja pestiin kylmällä bikarbonaatilla ja vedellä. Kuivaamisen ja kuiviin haihduttamisen jälkeen raaka aine (100 mg) puhdistettiin silikageeli-kolonnissa (30 % —> 60 % etyyliasetaattia heksaanissa). Puhdistus 5 onnistui vain osittain. Nukleosidi-fraktiot puhdistettiin edelleen l!PLC:tä käyttäen^uPorasil-kolonnissa (5 % isopropanolia metyleenikloridissä), jolloin saatiin otsikon tuotetta (11 mg? saanto 7,9 %) PMR (360 MHz; CDCl3): 7,87 (s, 1, H-6), 10 7,36 - 7 24 (m, 10, from.) , 5,76(s, 1, H-l'), 4,56(AB, 2, bent%ryljCH2) , 4,50(s, 2,bentsyyli CHj) , 4,36(m, 2, 11-2' + H-4'), 3,98(D, J » 9,65 Hz, 1, H-6'), 3,775(dd, « 6,05, J2 = 9,5 Hz, 1, 11-5»), 3,63 (m, 2, H-5 · + H-6'), 2,62(m, 1, 11-3') , 1,50 (bs, 3, CHj) . CMR(75.47 MHz; CDClj) : .

15 164,6 (C—4) , 151,9 (C—2) , 138,3 + 138,0 + 136,9 (kvat.

arom + C-6) , 129,14 - 128,20 (tert. arom.), 110,49(C-5), 93,023(C-l'), 83t64(C-4'), 77,72(C-2'), 73,97 + 73,81 (bentsy&iCHj) , 69,54 + 66,88(05' + 06'), 40,88 (C-3'), 12,08(CH3). MS-FAB (glyseroli-matriisi): 453M+ + H) .

20

Esimerkki 19 5'-0-bentysyli-3'-deoksi-3'-/IbentsyyIloksi)metyyli/-2,2'-anhydro-8-D-urIdiini 1-£5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyyIloksi)-25 metyyliZ'-B-D-ribofuranosyyliZurasiilia (11,0 g; 25,1 mmoo-lia) ja 1,1'-tiokarbonyylidi-imidatsolia (5,377 g; 30,1 mmoolia) liuotettiin kuivaan 1,2-dikloorietaaniin (200 ml) ja lämmitettiin kiehuttaen 40 minuuttia. Haihtuvat aineet poistettiin vakuumissa ja jälellä oleva 30 aine liuotettiin kuivaa THFjiin (45 ml). Tämä liuos li-. . sättiin tiputtamalla 40 minuutin aikana liuokseen, jossa • oli tributyylitinahydridiä (40,35 ml; 43,65 g; 140 mmoo lia) ja AIBNrää (500 mg; 3,05 mmoolia) kuivassa tolu-eenissa (250 ml), sekoitettiin voimakkaasti argonin 35 suojaamana ja lämmitettiin kiehuvaksi. Lämmittämistä 95384 jatkettiin kolme tuntia. Haihtuvat osat poistettiin va-kuumissa ja jäännös puhdistettiin silikageelikolonnissa.

1-/5-0-bentsyyli-2,S-dideoksi-S-^lbentsyylioksi)metyyli7~ 6-D-ribofuranosyyli7urasiili elaoitui ensin (2,0 g? 5 18,9 %) seoksella, jossa oli 4 % etanolia etyyliasetaatin ja heksaanin seoksessa 1:1. 5'-0-bentsyyli-3'-deoksi-3-^Tbentsyylioksi)metyyli7~2,2'-anhydro-6-D-uridiini elu-oiuti seoksella, jossa oli 50 % etanolia etyyliasetaatissa (8,0 g; 75,1 %).

1 0 Esimerkki 20 1-£5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyyli7-8-D-arabinofurasyyli7urasiili 5'-0-bentsyyli-3'-deoksi-3'-^7bentsyylioksi)metyy-li/-2,2'-anhydro-8-D-uridiinia (2,0 g; 4,76 mmoolia) 15 liuotettiin etanoliin (100 ml) ja lämmitettiin kiehuttaen 1-norm. natriumhydroksidin kanssa 2 tuntia. Säädettäessä pH arvoon 7,0 80-%:sella etikkahapolla (jäähdy tys vesi-jää-seoksella) seurauksena oli otsikon yhdisteen saostuminen, joka koottiin talteen ja kuivattiin (1,34 g; 20 65,2 %). PMR(300 MHz; CDCl3):7,35-7,16 {m, 11, arom. +

H-6), 6j02(bd, J - 6f3 Hz, 2, H-l* + H-5), 5,24(d, J * 6,0 Hz, 1, H-2 ') , 4,4 9 (.kapea AB, 2,bentsyyli CHj) , 4f41(A of AB, 12;6 Hz, 1, bentsyy1i CH2), 4,28(m, 1, H-4 ’) , 4,26(B of AB, J « 12^0 Hz, l,hentsyyli CHj), 3,62 - 3,57 ja 3,47 -” 25 3,42 (AB ABX, 2, CHjOBn) , 3,36 - 3,31 ja 3,23 - 3,18 (AB

ABX, 2, CHjOBn), 2f78(m, 1, H-3’). CMR(75.47 MHz; CDC13): 173,44 (C-4) , 161,07(02), 137,93 + 137,61 (kvat. arom) , 135,74(06), 129,183 + 129,05 + 128,93 + 128,76 + 128,64 + 128,59 + 128,44 + 128,27 30 ( arom. ), 110,35(05), 91,70(01'), 86,79(04'), 84,63(02'), 73,97 + 73, 76 (ijentsyyliCHj) , 70,64 + 69,75 (05' + C-6 ') , 47,95(03') .

34 95384

Esimerkki 21 1-/2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-£7asetoksi)metyyli7-B-D- arabinofuranosyyli7-4-tiourasiili 1-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^lbentsyylioksi)me-5 tyyli7~P-D-arabinofuranosyyli7urasiilia (647 mg; 1,47 mmoolia) liuotettiin seokseen, jossa oli etanolia (5 ml) ja syklohekseeniä (5 ml) ja kiehutettiin 4 tuntia Pearlman'in katalyytin kanssa (1,0 g). Katalyytti suodatettiin pois (Celite) ja haihtuvat osat poistettiin.

10 Raaka tuote (390 mg) oli riittävän puhdasta seuraaviin vaiheisiin. PMR (300 MHz; DMSO-dg) 7,75(d, J

8fl Hz, 1, H-6), 5f85(d, J = 5,1 Hz, 1, H-l'), 5t51(d, J = 8,1 Hz, 1, H-5) , 5,38(bd, 1, OH), 5,0(bs, 1, OH), 4,8(bs,1, OH), 4,14(m, 1, H-2') , 3f74(m, 1, H-4·), 3,70 - 3,45(m, 4,2 15 x CH2OH), 2,02(m, 1, H-3'). CMR(75,47 MHz; CD3OD): 167,25(04), 153,1(02), 144,95(06), 101,46(0-5), 87,74(0-1'), 82,39(0-4'), 74,21(0-2'), 63,98 + 61,83(0-5')+ 0-6') , 50,57 (0-3').

20 1-(3-deoksi-3-C-hydroksimetyyli-B-D-arabonofuranosyyli)- urasiilia (390 mg) asetyloitiin etikkahappoanhydridin (1 ml) ja pyridiinin (2 ml) kanssa yön ajan, jolloin saatiin triasetaattia, jota käytettiin raakana seuraavassa vaiheessa. PMR(300 MHz; 25 CDClj): 7,48(d, J * 8,1 Hz, 1, H-6), 6,10(d, J ® 4,5 Hz,1, H-l'), 5,68 (d, J - 8,1 Hz, 1, H-5), 5,30(bt, J - 5,1 Hz,1„ CH20Ac), 4^05(m, 1, H-4'), 2,47(m, 1, H-3'), 2,06 + 2,03+ lt93(3xs, 3, CH3CO) . Tämä aine (320 mg? 0,83 mmoolia) liuotettiin kuivaan 1,2-dimetoksietaaniin (10 ml) ja kä- : : 30 siteltiin Lawesson'in reagenssin kanssa (600 ma; 1,33 « - mmoolia) 50 C:ssa 12 tuntia. Haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin silikageeli-kolon-nissa käyttämällä seosta, jossa oli 40 % etyyliasetaattia dikloorimetaanissa. Saanto 265 (79,5 %).

<1 IM » NIMI I Ii 95384 PMR(300 MHz; CDCl-j) : 7f37(d, J » 7,5 Hz, 1, H-6) , 6,40(d, j * 7,5 Hz, 1, H-5), 6,08(d, J = 4,8 Hz, 1, H-l*), 5,37(t, J * 4,8 Hz, 1, H-2'), 4,38 - 4,25(m, 2, H-5'), 4t21(m, 2, H-6'), 4,10(m, 1, H-4') , 2,50(m, 1, H-3'), 2,10(s, 3, OCOCH3), 5 2,07(s, 3, OCOCH3), l,99(s, 3, OCOCH3). CMR(75.47 MHz; CDC13): 190,47(04), 171,54 + 171,39 + 170,14 (3 x CH3CO), 148,22(02), 135,64(06), 113,27(05), 85,1(01'), 77,95 (C-4 ') , 74,25 (02 ') , 64,46 + 62,39(05' + C-6'), 45,31(0-3’), 21,02 + 20,92 + 20,84 (3 x CHjCO).

10

Esimerkki 22 1-(3-deoksi-3-Ohydroksimetyyli-8-D-arabinofuranosyyli)-sytosiini

Ruostumattomaan teräsputkeen (100 ml) pantiin 15 liuos, jossa oli 1-(2,5-di-0-asetyyli-3-deoksi-3-^äse-toksimetyyli7“B-D-arabinofuranosyyli74-tiourasiilia (210 mg; 0,52 mmoolia) metanolissa (20 ml), joka oli kyllästetty ammoniakki-kaasulla 0-5 °Csssa, ja lämmitettiin 100-110 °C:ssa. Haihtuvat osat poistettiin vakuumis-20 sa ja jäännös puhdistettiin piidioksidilla käyttämällä seoksia 10 % metanolia dikloorimetäänissä —> metanolia dikloorimetaanissa. Pääfraktiot kiteytettiin etanoli-dietyylieetteri-seoksesta.

Sp. 179 - 183*C. PMR(300 MHz; CDjOD): 7,71(d, J = 7,4 25 HZ, 1, H-6), 5,79 (d, J = 4,8 Hz, 1, H-l'), 5,64(d, J = 7,6

Hz, 1, H-5), 4(10(bt, J = 4,6 Hz, 1, H-2'), 3f70(m, 1, H-4'), 3,65 - 3,45(m, 4, 2 x CHjOH), l,97(m, 1, H-3').

CMR (75,47 MHz; CD30D) : 168,21(04), 159,27(02), 145,07 (C-6) , 95,44 (05) , 88,55(01'), 82,25(04'), 30 74,10 (02') , 64,24 + 62,07(05' + C-6'), 50,98(03’).

: MS-High Resolution (FAB glyseroli-matriisi): laskettu yhdisteelle 258,1090; saatu: 258,1084.

36 95384

Esimerkki 23 9-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^(ben t syy Iloksi) me tyyli/-|3-D-ribofuranosyyli7adeniini 1,2-di-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-5 ^7bentsyylioksi)metyyli7-B-D-ribofuranoosia (2,01 g; 4,7 mmoolia; 30 % α-isomeeria) ja N-bentsoyyli-kloori-merkuriadeniinia (2,79 g; 5,89 mmoolia) kuivassa 1,2-dikloorietaanissa (200 ml) lämmitettiin kiehuttaen (voimakkaasti sekoittaen, argonin suojaamana) Celite'n 10 (2,8 g) ja titaanikloridin (0,65 ml; 5,93 mmoolia) kans sa. 18 tunnin kuluttua seoksen annettiin jäähtyä ja sitä käsiteltiin kyllästetyn bikarbonaatti-liuoksen (15 ml) kanssa. Sekoittamista jatkettiin 2 tuntia ja seos suodatettiin Celite'n läpi. Orgaaninen kerros konsentroitiin, 15 liuotettiin kloroformiin ja pestiin 30 %:sella kalium-jodidi-liuoksella, vedellä ja kuivattiin. Raaka aines (2,14 g) sisälsi noin 46 % haluttua tuotetta ^H:n perusteella. Kromatografioimalla kolonnissa silikageelillä saatiin 9-^2-0rasetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^7bent-20 syylioksi)metyyli7~ -D-ribofuranosyyli7N-bentsoyyliade-niinia (747 mg; 25,5 %), joka eluoitiin 40 % etyyliasetaattia sisältävän dikloorimetaanin kanssa.

PMR(300 MHz; CDC13;): 9,33(bs, 1, NHBz), 8f75(s, 1, H-8), 25 8f47(s, 1, H-2) , 7,98(d, 2, N-beritsayld) , 7,50(in, 1, N-bentsyyli), 7*43 (m, 2, N-bentsyyli) , 7,32 - 7,20 (m, 10, syyli,arar$, 6,2nd, J « 1,8 Hz, 1, H-l'), 5,73(dd, J, = 1,8

Hz, J2 - 5,7 Hz, 1, H-2'), 4,55 (leveä AB, 2 »bentsyyli CHj)^ 4,46 (kapea ab, 2,bentsyyli CHj) , 4,36 (m, 1, H-4'), 3,88 - 3.84 ja 3.42 - 3,38(AB ABX, 2, CH,OBn), 3,41 - 3,36 ja 30 T ' ' “ * 3«52 - 3,47 (AB ABX, 2, CHjOBn), 3,14(m, 1, H-3'), 2,02(s, 3, CH3CO).

37 95384 Tämä aine (600 mg; 0,96 mmoolia) liuotettiin metanoliin (40 ml) ja liuos kyllästettiin ammoniakki-kaasulla 0 °C:ssa. Tämä liuos pantiin teräsastiaan (100 ml) ja lämmitettiin 130 °C:ssa 4 tuntia. Haihtuvat osat poistet-5 tiin vakuumissa, jolloin saatiin haluttua tuotetta (440 mg; kvant.) PMR(300 MHz; CDCl^): 8,28 + 8,29(2xs, 1, H-8 + H-2) , 7,33 - 7,20(m, 10, bentsyyli aran) · 6j0(d, H * 1,8 Hz. 1, H-l' ), 5,63(Bs, 2, NHj), 4,66(m, 1, H-2'),

4,55 (leveä AB, 2, bentsyyli CH2, 4,50( kapea AB, 2,bentsyyli 10 CH2), 4,47(m, 1, H-4'), 3,88 - 3,84 ja 3,59 - 3,55 (AB

ABX., 2, CH2OBn) , 3,70 (m, 2, CHjOBn), 2,78 (m, 1, H-3').

Esimerkki 24 9-^5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^(bentsyylioksi)metyy-15 li7“8-D-ribofuranosyyli7adeniini 9-^5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^lbentsyylioksi)me-tyyllJ-e-D-ribofuranosyylVadeniinia (440 mg; 0,95 mmoolia) ja tionokarbonyyli-imidatsonia (229,8 mg; 1,287 mmoolia) lämmitettiin kiehuttaen kuivassa 1,2-di-20 kloorietaanissa (25 ml) tunnin ajan. Haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännös (645 mg) liuotettuna kuivaan THFsiin (5 ml), lisättiin tiputtamalla kiehuvaan liuokseen, jossa oli tributyylitinahydridiä (1,5 ml; 5,58 mmoolia) ja atsobisisobutyronitriiliä (AIBN; 50 mg) 25 kuivassa tolueenissa (20 ml) . Kiehuttamista jatkettiin 8 tuntia, haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin silikageeli-kolonnissa käyttämällä seoksia 30 % etyyliasetaattia dikloorimetaanissa —> puhdas etyyliasetaatti* jolloin saatiin otsikon tuotetta 30 (250 mg; 59 %). PMR (300 MHz; CDC13): 8,31 + 8,24 (2 X s, 1, H-8 + H-2), 7,35 - 7,20(m, 10,bentsyyli arat) 6,32(dd, Jx « 3,0 Hz, J2 = 6,6 Hz, 1, H-l'), 5,51 (bs, 2, NH2), 4,57(leveä . AB, 2,bentsyyli CH2) , 4,48(s, 2,bentsyyli CHj) , 4,13(m, 1, H-4'), 3,82 - 3,77 ja 3f67 -35 3,61 (AB of ABX, 2, CHjOBn), 3,50(d, J = 6j3 Hz, 2, CH2OBn), 2,81(m, 1, H-3'), 2,59 - 2,51(m, 1, H-2’), 2{44 - 2,37(m, 1, H-2').

38 95384

Esimerkki 25 9-/2,3-dideoksi-3-Ohydroksimetyyli-β-D-erytro-pentofu-ranosyyli7adeniini 9-/5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-/7bentsyylioksi)-5 metyyli7_B-D-ribofuranosyyli7adeniinia (800 mg; 1,80 mmoo-lia) liuotettuna etanolin (25 ml) ja sykloheksaanin (35 ml) seokseen, lämmitettiin kiehuttaen 9 tuntia Pearlman'in katalyytin (3,85 g) kanssa. Reaktioseos suodatettiin Celite'n läpi ja haihtuvat osat poistettiin 10 vakuumissa. Jäännös puhdistettiin silikageelillä käyttämällä seoksia etyyliasetaatti —> 50 % etanolia etyyliasetaatissa ja päätuotetta sisältävät fraktiot kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin otsikon tuotetta (87 mg; 18,12 %). Sp. 171 - 174eC. PMR(300 MHz; D20): 8,30 + 15 8,16 (2 x s, 1, H-8 + H-2), 6,31(dd, Jj = 2,7 Hz, J2 * 6f6

Hz, 1, H-l1), 4,l(m, 1, H-4'), 3,84 - 3,79 ja 3,66 -3,60(AB ABX, 2, CH20H), 3,71(d, J = 5,5 Hz, 2, CH20H), 2,66 (m, 2, H-3' + H-2’), 2,45(m, 1, H-2.'). CMR(75,47 MHz; CD3OD)s 154,18(02), 141,74(C-8), 87,17 + 86r26(C-l' + 20 C-4 ') , 64,55 + 63f84(C-5' + C-6 ') , 42,58(03'), 37,14(02').

MS high resolution; (FAB glyseroli-matriisi); laskettu yhdisteelle C^H^N-O,; 266,1253; saatu; 266,1256.

4 II Ib o j c IR (KBr; cm ): 3700-3000, 1645. UV(H20; 1,46 x 10 ) : 260 (1 130).

25 laskettu yhdisteelle C,,H.,t-N,.03 x HjO: 46,64 * C; 6,05 % H; 24,72 % N; saatu; 47,11 % C; 5,53 % H; 24,69 % N.

Esimerkki 26 9-(2,3-dideoksi-3-Ohydroksimetyyli-6-D-erytro-pentofura-30 nosyyli)hypoksantiini 9-(2,3-dideoksi-3-Ohydroksimetyyli-6-D-erytro- »au pento-furanosyyll)adeniinia (40 mg; 0,015 mmoolia) haudottiin vedessä (2 ml) yön ajan adenosiini-diaminaasin (1 mg; SIGMA) kanssa. Tuote puhdistettiin HPLCttä käyt-35 täen IBSil-C,g-kolonnissa käyttämällä 2-5 % metanolia = il I ΐιΐιι |.| i n 95384 0,025-mol. ammoniumformiaatissa, ja kiteytettiin etanolista. Saanto: 16 mg (38 %), Sp. > 250 °C, hajoaa > 190 °C:ssa.PMR(300 MHz? DjO) : '8,32 + 8f17(2xs, 1, H-2 + H-8), 6,36(dd, Jx * 3f0 Hz, J2 - 6,6 Hz, 1, H-l'), 4,09(m, 51, H-4'), 3,83 - 3f78 ja 3,67 - 3,62(AB . ABX, 2, CH2OH), 3,71(d, J * 5,5 Hz, 2, CHjOH), 2,66(m, 2, H-3' + H-2'), 2,44 (m, 1, H-2'). CMR(75,47 MHz? CD3OD): 147,20(02), 141,04 (08) , 87,04 + 86,41(01' + 04'), 64,26 + 63,62(05') + 06’), 42,42(03'), 37,42(02').

10 MS high resolution (FAB glyseroli-matriisi): laskettu yhdisteelle C^H^N^O^s 267,1093; saatu: 267,1091.

UV(H20? 4,49 x 10“5M); 250 (9590).

Esimerkki 27 15 5-0-bentsyyli-1,2,O-isopropylideeni-a-D-ksylofuranoosl.

1,2-isopropylideeni-ksylofuranoosiin (10,0 g, 52.6 mmoolia) lisättiin dibutyylitinaoksidia (13,1 g, 52.6 mmoolia) 300 ml:ssa bentseeniä. Liuosta lämmitettiin kiehuttaen 6 tuntia poistamalla vettä aseotrooppises- 20 ti. Liuos konsentroitiin 100 ml:ksi ja lisättiin tetrabu-tyyliammoniumjodidia (4,7 g, 12,7 mmoolia) ja bentsyyli-bromidia (120 ml; 168,4 mmoolia). Liuos palautettiin kiehuvaksi ja pidettiin kiehuvana 72 tuntia. Liuos jäähdytettiin, kaadettiin kyllästettyyn NaHCO^riin ja uutet-, 25 tiin kloroformilla. Orgaaninen fraktio kuivattiin

MgSO^illa, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatografioitiin silikageelillä (heksaani/etyyli-asetaatti 3:1) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 10.7 g monobentsyylieetteriä vahamaisena kiinteänä ai-30 neena (72%); PMR(300 MHz, CDClj) δ 7,31(m, 5H,arom.), 5,95(d, J - 3,7 Hz, 1H, H-l'), 4,58(ABq, J - 12,7, 12,0 Hz, 2H,bentsyyli), 4,48(D, J - 3,5 Hz, 1H, H-2'), 4,26(m, 1H, H-4'), 4,22(m, 1H, H-3'), 3,90(m, 2H, H-5'), 3,56(d, J * 3,3 Hz, 1H, OH), 1,44(s, 3H, CHj), l,28(s, 3H, CH3); 35 CMR(75.5MHz) δ 137,8, 129,1, 128,6, 128,4, 112,1, 105,4, 85,8, 78,6, 76,7, 74,4, 68,6, 27,0, 26,4.

-••ki 40 95384

Esimerkki 28 5-0-bentsyyli-1f 2-0-isopropylideeni-a-D-erytropentofu-ranoosi-3-uloosi

Liuos, jossa oli DMSO:a (2,5 ml, 35,2 mmoolia) 5 15 ml:ssa metyleenikloridia, jäähdytettiin -78 °C:ssa ja lisättiin 10 minuutin aikana trifluorietikkahappo-anhydridiä (3,6 ml, 0,36-mol. C^C^tssa, 3,6 mmoolia).

-78 °Csssa lisättiin liuos, jossa oli esimerkin 27 bent-syylieetteriä (4,8 g, 1,7-mol. CHjC^^ssa, 17,1 mmoolia) 10 ja sekoitettiin 30 minuuttia. Lopuksi lisättiin -78 °Csssa yhtenä eränä trietyyliamiinia (7,1 ml, 50,9 mmoolia), kylmä haude poistettiin, ja liuos lämmitettiin ympäristön lämpötilaan. Liuos laimennettiin eetterillä ja pestiin 10 %:sella HCl:lla, kyllästetyllä NaHCO^tlla ja suola-15 liuoksella. Orgaaninen fraktio kuivattiin MgSO^tlla, ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 4,4 g (92 %) keltaista öljyä, jota ei puhdistettu.PMR(300 MHz, CDClj) δ 7r25(m, 5H, arom.) , 6,10(d, J - 4,4 Hz, 1H, H-l), 4 j 48 (AB, J « 2,7 Hz, 2H,bentsyyli), 4f42(m, 1H, H-4M, 20 4,31(dd, J = 4,4, 1,1 Hz, 1H, H-2'), 3f70(AB, J = 2,4 Hz, 2H, H-5'), 1,43(s, 3H, CH3), l,40(s, 3H, CHj)? CMR(75/5 MHz) 6 138,0, 129,0, 128,5, 128,1, 114,7, 104,1, 80,3, 77,2, 74,1, 70,5, 27,8, 27,2.

. 25 Esimerkki 29 5-0-bentsyyli-1,2-0-isopropylideeni-3-deoksi-3-C-mety-leeni-o-D-ribofuranoosi

Suspensioon, jossa oli metyylitrifenyylifosfo-niumbromidia (189 g, 0,529 moolia) litrassa kuivaa eette-30 riä 0 °C:ssa, lisättiin n-butyylilitiumia (200 ml, 2,5-mol. heksaanissa, 0,50 mmoolia). Oranssinväriseen ylidi-1luokseen lisättiin esimerkissä 28 valmistettua raakaa ketonia (48 g, 0,172 moolia) 250 mlsssa kuivaa eetteriä. Liuoksen oltua 30 minuuttia 0 °C:ssa, se sammutettiin 35 vedellä, orgaaninen kerros erotettiin ja kuivattiin . · « «. * !l ! «H » liiti l i t a i 41 95384

MgSO^tlla. Eetteriliuos suodatettiin Celite-patjän läpi, konsentroitiin ja laimennettiin pentaanilla ja suodatettiin uudelleen, jolloin aatiin 34,5 g (72 %) alkeenia: PMR(300 MHz, CDClj) δ 7.30(m, 5 5 H., arom.), 5,85(d,. J * 4,0 Hz, 1H, H-l»), 5,39 (m, 1H, vinyyli ) ,5,16 (m, 1H,vinyyli) 4,86(m, 2H, H-3' ja H-4 ') , 4,56 (s, 2H bentsyyli),3.64 (dd, J « 10,3, 3,8 Hz, 1H, H-5'a), 3,53 (dd, J - 10,3, 4,8 Hz, 1H, H-5'b), l,47(s, 3H, CH-j) , 1,35(s, 3H, CH3); CMR (75,5 MHz) δ 147,5, 138,6, 129,0, 10 128,2, 112,9, 112,3, 105,2, 82,2, 79,1, 73,8, 72,1, 27f6, 27.4.

Esimerkki 30 5-0-bentsyyli-1,2-0-isopropylideeni-3-deoksi-3-C-hyd-15 roksimetyyli-a-D-rinopentofuranoosi

Liuokseen, jossa oli BH^-THFia (19 ml, 1,0-mol. THFrssa, 19 mmoolia) 0 °C:ssa, lisättiin liuos, jossa oli esimerkissä 29 valmistettua alkeenia 20 ml:ssa THF:a (2,7 g, 9,8 mmoolia) ja pidettiin kylmänä 3 tun-20 tia. Liuos sammutettiin 17 ml:11a THF:n ja veden seosta 1:1 ja sitten sekoitettiin 20 ml:n kanssa 2-norm.

NaOH:a ja 16 ml:n kanssa 30 %:sta HjOj tunnin ajan. Orgaaninen fraktio erotettiin ja pestiin kyllästetyllä Na2S203:lla, kuivattiin MgSO^lla, ja haihdutettiin kui-25 viin. Jäännös kromatografioitiin silikageelillä (heksaa- ni/etyyliasetaatti 2:1, sitten heksaani/etyyliasetaatti 1:1), jolloin saatiin 1,6 g hydroksimetyyli-adduktia valkeana kiinteänä aineena (55 %); sp. 73-74 °C* 73-74°C; PMR(300 MHz, CDCI3 δ 7,30(m, 30 5H, aron.), 5,79(d, j * 3,7 Hz, 1H, H-l')» 4,73(t, J = 4,3 Hz, 1H, H-2') , 4,56(ABq, J = 11,9, 9,8 Hz, 2H, bentsyyU), 4,20 (m, 1H, H-4'), 3,80(m, 2H, H-6'), 3,65(dd, J = 10,2, 4,3 Hz, 1H, H-5'a) , 3,59(dd, J = 10,2, 5,2 Hz, 1H, H-5'b), 2,70(brs, 1H, OH), 2,15(m, 1H, H-3'), l,48(s, 3H, CH3), 35 l,29(s, 3H, CH3); CMR(75,5 MHz) 6 138,2, 129,0, 128,4, 112.4, 105,4, 82,1, 79,3, 74,0, 70,6, 59,5, 48,6, 26,8, ... 26,4.

42 95384

Esimerkki 31 5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^Tbentsoyylioksi)metyyli7-1,2-0-isopropylideeni-a-D-ribofuranoosi

Liuokseen, jossa oli esimerkissä 30 valmistettua 5 primääristä alkoholia (900 mg, 3,05 mmoolia) 10 ml:ssa pyridiiniä, lisättiin bentsoyylikloridia (1,5 g, 10,7 mmoolia). Liuosta sekoitettiin 24 tuntia ympäristön lämpötilassa ja laimennettiin sitten eetterillä ja pestiin kyllästetyllä NaHCOj-liuoksella. Orgaaninen fraktio 10 kuivattiin MgSO^lla, konsentroitiin vakuumissa ja jäännös kromatografioitiin silikageelillä (heksaani/etyyli-asetaatti 3:1), jolloin saatiin 1,1 g (89 %) kirkasta öljyä; PMR(300.1 MHz, CDC13) δ 8,00(m, 2H, arom.), 7,56(111, 1H, arom.), . 7,42(m, 2H, arom.), 7,29(m, 5H, 15 arom.), 5,88(d, J - 3.7Hz, 1H, H-l'), 4f78(t, J = 4,2 Hz, 1H, H-2'), 4|59(dd, J - 11.1, 7,6 Hz, 1H, H-6'a), 4,53(ABq, J 12,2, 8,3 Hz, 2H, bentsyyli), 4,41 (dd, J * 11,1, 6,6 Hz, 1H, H-6'b), 4,16(dt, J = 10,2, 4,1 Hz, 1H, H-4'), 3,80(dd, J - 10,9, 2,9 Hz, 1H, H-5’a), 3,60(dd, J = 10,9, 4,4 Hz, 1H, 20 H-51b), 2,58(m, 1H, H-3’), l,52(s, 3H, CHj), lf34(s, 3H, CH3); CMR(75,5 MHz) δ 167,0, 138,6, 134,2, 133,7, 130,7, 130,2, 129,0, 128,2, 112,6, 105,6, 81,3, 79,6, 74,0, 70,1, 61,7, 44,6, 27,0, 26,6.

25 Analyysi, laskettu yhdisteelle C23H26®6; C, 69,33; H, 6,58; saatu: C, 69,33; H, 6,77.

Esimerkki 32 30 1,2-di-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^Tbentsoyyli- .·. oksi)metyyli7-ct- ja β-D-ribofuranoosi

Liuosta, jossa oli esimerkissä 31 valmistettua 1,2-asetonidia (3,5 g, 8,6 mmoolia) 29 ml:ssa 65 %:sta etikkahappoa (19 ml etikkahappoa/10 ml vettä), lämmitet-35 tiin 100-110 °C:ssa 6 tuntia. Liuos jäähdytettiin ja I»· 43 95384 haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin 30 ml saan pyridiiniä ja sekoitettiin 12 tuntia 5 ml s n kanssa etikkahappoanhydridiä. Haihtuvat osa poistettiin vakuumissa ja jäännös kromatogra-5 fioitiin silikageelillä, jolloin saatiin 3,7 g (95 %) kirkasta öljyä, jossa pääosa oli β-anomeeria: PMR(0 arom.) (300fl MHz, CDClj) δ *7.98(m, 2H, arom.), 1H, arom.), 7r43(m, 2H, arom) 7r32(m, 5H, arom.), 6?11<s' 1H' 5/38(d' 10 j * 4,8 Hz, 1H, H-2'), 4j56(ABq, J - 5,9, 2,3 Hz, 2H, bsntsyyli), 4 f 4 7 (dd, J - 6,6, 2,3 Hz, H-6'a), 4t31(m, 1H, H-4’) , 3166(m, 2H, H-5') , 2,99(m, 1H, H-3’), 2,09(s, 3H, asetaatti), lf95(s, 3H, asötäatti); CMR <75f5 MHz) 6 170»5» 170 r 0, 166 <8, 138,6 133,9, 130,2, 129,1, 129,0, 128,3, 15 128,2, 99,4, 82,2, 77f0, 73f7, 71f8, 61,0, 41,6, 21,2, 20,9.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C24H26°8! C, 65,15; H, 5,92; saatu: C, 65,06; H, 6,16.

Esimerkki 33 20 1- (2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-0-deoksi-3-£Tbentsoyyli- oksi)metyyli/-B“D-ribofuranosyyli)tyrniini

Tymiiniä (840 mg, 6,66 mmoolia) ja esimerkissä 32 valmistettua 1,2-diasetaattia (2,52 g, 5,60 mmoolia) lisättiin 75 ml saan asetonitriiliä. Tähän liuokseen li-25 sättiin HMDSsää (1,4 ml, 6,6 mmoolia) ja TMSCstä « (0,85 ml, 6,8 mmoolia), sen jälkeen SnCl^ liuoksena 25 mlsssa asetonitriiliä (0,9 ml, 7,7 moolia). Liuosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 4 tuntia. Liuos laimennettiin CHCl-j:lla ja pestiin kyllästetyllä 30 NaHCC^slla ja sitten suolaliuoksella. Orgaaninen frak tio kuivattiin MgSO^lla, haihdutettiin kuiviin vakuu-missä, jolloin saatiin 2,6 g valkeata kiinteätä ainetta (91 %), joka kiteytettiin uudelleen heksaani/etyyliase-taatti-seoksesta; sp. 129-130 °C; PMR(300 HMz, CDCl-j):

• · V

95384 44 6 8,19 (s, 1H, NH) , 8f01(mf 2H, aroin.), 7,50(mf 2H, arom. ja H-6) , 7,44 (m, 2H, aroni.) , ' 7,28(m, 5H, aroin.) , 6,02(d, J - 2,8 Hz, 1H, H-l'), 5,57(dd, J = 6,5, 2,9 Hz, 1H, H-2') , 4,58( ABq, J - H,8, 1,1 Hz, 2H ,bentsytf.i), 4,47 (dd, J » 11,5, 6,5 Hz, 1H, H-6’a), 4,37(m, 2H, H-61bja 5 H-4'), 1 f 98(dd, J = 12,9, 2,0

Hz, 1H, H-5'a), 3^67(dd, J - 11,0, 2,4 Hz, ΪΗ, H-51b), 3,12 (m, 1H, H-31), 2,10(8, 3H, asetaatti), l,56(m, 3H, C-5 metyyli); CMR(75,5 MHz) 6 170,3, 166f9, 164,9, 151,2, 137,9, 136,3, 134,0, 130.,2, 130,0, 129,2, 128,7, 128,3, 111,5, 10 89,6, 82,1, 77,1, 74,0, 70,0, 61,1, 40,3, 20,9, 12,6i MS(DCI) m/e 509 (M + 1), 449 (M+ - OAc) , 383 (M+ -tyrniini).

HRMS laskettu yhdisteelle C27H28N2°8 m^e 508,1846.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C27H28N2®8 “ 0,^5 H2®: 15 C, 63,21; H, 5,50; N, 5,46; saatu: C, 63,34; H, 5,74; N, 5,53.

Esimerkki 34 1 - (5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/7bentsoyylioksi)metyyli722-hydroksi-8-ribofuranosyyli)tyrniini 20 Liuos, jossa oli 20 ml metanolia, kyllästettiin ammoniakilla ympäristön lämpötilassa ja jäähdytettiin sitten 0 Crseen. Ammoniakkimetanoliliuokseen lisättiin liuos, jossa oli esimerkissä 33 valmistettua 2-asetyyli-nukleosidia (2,6 g, 5,1 mmoolia) 20 ml:ssa metanolia ja 25 sekoitettiin 2 tuntia 0 °C:ssa. Haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännös suodatettiin silikageelin läpi (heksaani/etyyliasetaatti 2 % etanolia suhteessa 1:2), jolloin saatiin 2,3 g (96 %) deasyloitua adduktia, joka kiteytettiin uudelleen etyylieetteristä, 30 Sp. 119 - 120 °C: PMR(300,1 MHz, CDC13) δ 10,26 (br s, 1H, NH) , 8,02 (m, 2H,arom.), 7,95(s, 1H, H-C), 7,55(m, 1H. arom), 7,40(m, 2H, arom.) , 7,25(m, 5H, arom. ), 5,81(s, 1H, H-l'), 4,74 (dd, J 1 llf.3, 6,7 Hz, 1H, H-6’a), 4,48(m, 4H, H-6‘b, !| : |B1 Silli III#·:· · · 2 « 45 95384 H-2' ja bentsvyli), 4.09(d, J - 10,2 Hz, 1H, H-5'a), 3#71(d, J = 9,7 Hz, 1H, H-5'b), 2,81(m, 1H, H-3'), l,65(br s, 1H, OH), 1,41(8, 3H, C-5metyyli) ; CMR(75,5 MHz) 6 167,0, 165,5, 151,5, 138,0, 136,9, 133,8, 130,5, 130,2, 129,2, 129,0, 5 128,6, 128,3, 110,7, 93,1, 83,5, 77,3, 74,0, 69,2, 61,6, 39,8, 12,O; MS (DCI) ro/e 467(M + 1), 449(M+ - OH), 341(M+ - tyrniini).

Esimerkki 35 1- (5-0-bentsyyli-3- (bentsyloyylioksi)metyyli-2,3-dide-^ oksi-B-D-erytro-furanosyyli)tyrniini

Esimerkissä 34 valmistettuun 2'-hydroksi-nukleosi-dia (400 mg, 0,85 mmoolia), joka oli 10 ml:ssa THF, lisättiin N,N-tiokarbonyylidi-imidatsonia (225 ma 1,1 mmoolia) ja liuosta lämmitettiin kiehuttaen 3 tuntia.

15 Liuos jäähdytettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös kromatografioitiin silikageelillä (seoksella heksaani/etyyliasetaatti 10 % etanolia suhteessa 1:2). Jäännös liuotettiin 20 ml:aan vedetöntä, kuivatislattua dioksaania typen suojaamana, johon lisättiin 2 ml po-20 lymetyylihydroksiloksaania ja 10 mg AIBN:ää. Liuosta lämmitettiin kiehuttaen tunnin ajan, jäähdytettiin ja liuos suodatettiin Celite-patjän läpi. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös kromatografioitiin ·*· silikageelillä (heksaani/etyyliasetaatti 5:1, sitten 25 heksaani/etyyliasetaatti 10 % etanolia 1:1), jolloin saatiin 353 mg valkeata kiinteätä ainetta (92 %), joka kiteytettiin uudelleen metanolista, sp.

143-144 6eC: PMR(300,1 MHz, CDCl-jl δ 8,19(s, 1H, NH), 8,00(m, 2H, arom.), 7,73(s, 1H, H-6), 7,56(m, 1H, * 30 arom. ) , 7,43(m, 2H, arom.), 7,30(m, 5H, arom.), 6,18(dd, J - 6,7, 3,8 Hz, 1H, H-l'), 4,56(ABq, J - 11,7, 5,4 Hz, 2H,b6ntsyyli), 4f42(dd, J - 11,3, 5,6 Hz, 1H, H-6’a), 4,30(dd, J * 11,3, 6,5 Hz, 1H, H-6*b), 4;08(dt, J = 7,8, 2,4 Hz, 1H, H-4'), 3^95(dd, J * 10,9, 2,2 Hz, H-5'a), 3,68(dd, J 35 . 10.9, 2,6 Hz, 1H, H-5'b), 2,95(m, 1H, H-3'), 2,37(m, 1H, • · i * 46 95384 H-2'a), 2,26(m, 1H, H-2'b), 1,56(8, 3H, C-5 metyyli), CMR(75,5 MHz) 6 167,0, 164,9, 151,2, 138,0, 136,6, 134,0, 130.2, 129,2, 129,2, 128,7, 128,3, 110,9, 85,5, 83,2, 74,0,^ 70.2. 64,9, 37,3, 36,8, 12,3; MS(DCI) m/e 451(M + 1), 325(M+ 5 - tyrniini).

Esimerkki 36 2,3-dideoksi-3-hydroksimetyyli-8-D-erytro-pentofura-nosyyli)tyrniini

Liuokseen, jossa oli esimerkissä 35 valmistettua 10 bis-suojattua nukleosidia (510 ma, 1,13 mmoolia) 10 ml:ssa etanolia, lisättiin 5 ml syklohekseeniä ja 140 mg Pearlman'in katalyyttiä (20 % Pd hiilellä) ja liuosta kiehutettiin 6 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla Celite-kerroksen läpi ja suodos haihdu-15 tettiin kuiviin, jolloin saatiin debentsyloitua nukleo sidia valkeana kiinteänä aineena. 340 mg, 83 %): PMR(300 MHz, CDClj) δ 8.15(br s, 1H, NH), 8.00(m, 2H, arom.), 7,57(m, 2H, H-5 ja arom.), 7,44(m, 2H, arom.), 6,13(t, J « 5.3 Hz, 1H, H-l*), 4,42(dd, J « 112,5, 5 Hz, 1H, H-6’a), 20 4,32 (dd, J - 11,2, 6,3 Hz, 1H, H-6'b), 4,,05(dd, J = 11,5, 2.4 Hz, 1H, H-5'a), 4,02(m, 1H, H-4'), 3,82<dd, J * 11,5, 2.4 Hz, 1H, H-5’b), 2,90(m, 1H, H-3'), 2,34(m, 2H, H-2'), 1,90 (s,' 3H, C-5 metyyli).

Debentsyloitua adduktia ei puhdistettu edelleen vaan :: 25 käytettiin suoraan. Kiinteä aine liuotettiin 2 ml:aan metnaolia ja sekoitettiin ympäriöstn lämpötilassa.

Sen aikana NaH (60 % öljyssä, 70 mg, 1,75 mmoolia) pestiin kahdella 5 ml;n erällä pentaania ja lisättiin 2 ml metanolia. Tämä metylaatti-liuos lisättiin debentsyloi-30 tuun nukleosidiin ja sekoitettiin 2 tuntia. Liuos neut- !. raloitiin pH-arvoon 7 etikkahapolla ja liuos konsentroi tiin vakuumissa. Jäännös pantiin silikageeli-kolonniin ja eluoitiin metyleenikloridilla ja sitten seoksella me-tyleenikloridi/10 % metanolia, jolloin saatiin 193 mg 35 täysin suojaamatonta ainetta (kokonaissaanto 66 %): • · t «7 95384 PMR(300 MHz, D20) δ 7,71(8, 1H, H-6) , 6r09(br t, J - 619 Hz, 1H, H-l1), 3T92(m, 1H, H-4'), 3,87(dd, J - 12,6, 2f8 Hz, 1H, H-5’a), 3,71(dd, J = 12,6, 4,9 Hz, 1H, H-5’b), 3»64(d, J = 6,1 Hz, 2H, H-6) ,. 2,45 (m, 1H, H-31), 2f25(m, 211, 5 H-2'), 1^85(s, 3H, C-5 metyyli).

Esimerkki 37 1-(5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3(metaanisulfonyyli)metyyli- β-D-erytro-furanosyy li) tyrniini

NaH (60 %, 70 mg, 1,75 mmoolia) pestiin pentaanil-10 la ja lisättiin hitaasti 3 ml metanolia. Tähän natrium- metylaatti-liuokseen lisättiin esimerkin 35 bis-suojat-tua nukleosidia (540 mg, 1,20 mmoolia) 7 ml:ssa metanolia. Liuosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 90 minuuttia, neutraloitiin etikkahapolla, ja haihdutettiin 15 kuiviin vakuumissa.

PMR(300 MHz, CDClg) 6 8,77(br s, 1H, NH), 7,64 (s, 1H, H-6), 7,30(m, 5H, arom.) , 6,10(dd, J 6,6, 4,7 Hz, 1H, H-l'), 4,57 (Afiq, J 1 11,8, 2,7 Hz, 2H,bentsyyli), 4,01 (dt, J 1 6r3, 3,0 Hz, 1H, H-4'), 3,83(dd, J - 10,6, 3,0 Hz, 1H, H-51a), 20 3,66(m, 3H, H-61 ja H-51b), 2,56(m, 1H, H-31), 2,24(m, 1H, H-2’a) , 2,08(m, 1H, H-21b), 1.58(s, 3H, C-5 metyyli).

Jäännös liuotettiin 10 ml:aan metyleenikloridia ja 10 ml:aan pyridiiniä ja jäähdytettiin 0 °C:seen.

0 °C:ssa lisättiin metaanisulfonyylikloridia (0,30 ml, 25 3,88 mmoolia) ja sekoitettiin 0 °C:ssa tunnin ajan ja sen jälkeen lämmitettiin ympäristön lämpötilassa 2 tuntia. Liuos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös liuotettiin metyleenikloridiin ja pestiin kyllästetyllä NaHCO-j:lla. Orgaaninen fraktio kuivattiin MgSO^:lla, 30 haihdutettiin kuiviin ja jäännös kromatografioitiin sili- kageelillä (etyyliasetaatti), jolloin saatiin 439 mg (86 %) valkeata vaahtoa, joka kiteytettiin uudelleen metanolista. Sp. 68 - 70 °C: PMR(300,1 MHz, CDC13) δ; CMR(75r5 MHz) δ 165,0, 151,4, 35 138,1, 136v5, 129,2, 128,6, 128,3, 111,1, 85,4 , 82,2, 74,0, 70,3, 69,4, 38,0, 37,7, 35,9, 12,3.

48 95384

Esimerkki 38 1-(2,3-dideoksi-3-atsidometyyli-6-D-erytro-furanosyyliity mi ini

Esimerkin 37 mesylaattiin (340 mg, 0,80 mmoolia) 5 lisättiin 7 ml etanolia, 4 ml syklohekseeniä, ja 90 mg Pearlman’in katalyyttiä (20 % Pd hiilellä). Liuosta lämmitettiin kiehuttaen 4 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla Celite'n läpi ja suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin 5 ml:aan DMF ja li-10 sättiin NaN3 (180 mg, 2,76 mmoolia). Liuosta lämmitettiin 80 °C:ssa 2 tuntia, jäähdytettiin, suodatettiin lasivillan läpi ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageelillä (etyyliasetaatti), jolloin saatiin 172 mg kirkasta öliyä (76 %): 15 PMR(300 MHz, D20) 7.71(s, 1H, H-6), 6,16(t, J « 5f 5 Hz, 1H, H-l'), 3,99(m, 1H, H-4'), 3,86(ddd, 2H, H-5f), 3,55(m, 2H, H-6M, 2,58(m, 1H, H-3’), 2,34(m, 2H, H-2') ja l,91(s, 3H, CH3). CMR(75,5 MHz, CDC13), 165,32, 151,38, 137,28, 110,97. .85,61, 84,33, 62,34, 20 52,74, 37,64, 36,51 ja 12,56. Mässaspektri M + H = 281.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C,,Η,^Ν^Ο^: C, 46,97; H, 5,38; N, 23,90; saatu: C, 46,71; H, 5,57; N, 24,48.

25 Esimerkki 39 N^-asetyyli-0-(3-deoksi-3-^Tbentsyylioksi)metyyli7~8-D- ribopentofuranosyyli)guaniini 2 N -asetyyliguaniini (966 mg; 5,0 mmoolia) persily-loitiin lämmittämällä 120 °C:ssa neutraalissa atmosfää-30 rissä bis-trimetyylisilyyliasetamidin (12,4 ml; 50 mmoo- • lia) kanssa 0,5 tuntia. Haihtuvat osat poistettiin perusteellisesti suurtyhjössä 3 tunnin aikana. Jäännös ja 1,2-di-0-asetyyli-5-0-bentsyyll-3-deoksi-3-/lbentsyyli-oksi)metyyli-8~D-ribofuranoosi (1,45 g; 3,38 mmoolia) 35 liuotettiin neutraalin atmosfäärin suojaamana kuivaan 1 · i 49 95384 1,2-dikloorimetaaniin (35 ml), käsiteltiin sekoittaen trimetyylisilyyli-triflaatin (1,5 ml; 7,76 mmoolia) kanssa ja seosta lämmitettiinkiehuttaen 1,5 tuntia.

Lisättiin dikloorimetaania (50 ml) ja liuos pestiin 5 natriumbikarbonaatti-liuoksen ja suolaliuoksen kanssa, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös (2,0 g) puhdistettiin kromatografioimalla huolellisesti silika-geelikolonnissa (50 % etyyliasetaattia heksaanissa, jossa oli 0-25 % etanolia). M2-asetyyli-7-(2-0-asetyyli-10 5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-^Tbentsyylioksi)metyyli-6-D- ribo-pentofuranosyyli)guaniini eluoitui ensinja kiteytettiin etanoli-dikloorimetaani-seoksesta (460 mg; 24,2 %).

Sp- 136-138" C. H1 NMR 300 MHz; DMSO-dg)s 8f42 (s, 1H, H-8), 7f35-7,20 (m, 10 H, arom.), 6,25 (d, Jj, 2, » 2,4 15 Hz, 1H, H-l'), 5,59 (dd, Jj, 3, «6,4 Hz, Jj, i· - 2,4 Hz, 1H, H-2') , 4,48 (br s, 2H, bektsyyli) ti^) , 4f24 (m, 1H, H-4') , 3,79 (dd, Jgem = 11,0 Hz, J5^ 4, * 2,4 Hz, 1H, H-5'), 3,64 - 3,44 (m, 3H, H-5’ + 2 x H-6’), 2,94 (m, 1H, H-3'), 2,13 (s, 3H, NHC-OCHj), 1,98 (s, 3H, OC=OCH3).

20

Sen jälkeen eluoitui haluttua tuotetta sisältäviä 2

sekafraktioita 3a N-asetyyli-9-(2-0-asetyyli-5-0-bent-syyli-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyyli7~6“D-ribo-pentofuranosyyli)guaniinia (250 mg) ja sitten puhdasta ,·, 25 N9-isomeeria (360 mg; 19,0 %). H1NMR

(300 MHz; DMSO-dg) : 8,02 (br s, 1H, H-8), 7^5-7,20 (m, 10 H, arom.), 5,90 (d, Jj , 2, * 2,7 Hz' 1H’ 5,62 (dd, J2, 3, - 6,5 Hz, J2, lt » 2,6 Hz, 1H, H-2'), 4,52 (m, 4H, bentsyvli Cfi2) , 4,19 (m, 1H, H-4’), 3,73 (dd, A ABX, Jgem 30 * 11.0 Hz, J5, 4, = 2,6 Hz, 1H, H-5'), 3,64-3,50 (m, 3H, h-5' + 2 x H-6'), 3,08 (m, 1H, H-3’), 2,10 (br s, 3H, NHOOCH3) , 1,98 (s, 3H, OOOCILj) .

t · « 95384 50

Esimerkki 40 N^-asetyyli-9-(2-0-asetyyli-3-deoksi-3-C-hydroksimetyy-li7~B“D-ribo-pentofuranosyyli)guaniini N2-asetyyli-9-(2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-5 3-^Tbentsyylioksi)metyyli7” -D-ribo-pentofuranosyyli)- guaniini (320 mg; 0,57 mmoolia) liuotettiin etanolin (3 ml) ja syklohekseenin (10 ml) seokseen. Lisättiin Pearlman'in katalyyttiä (600 mg) neutraalin atmosfäärin suojaamana sekoittaen ja seosta lämmitettiin kiehuttaen 10 16 tuntia. Seos suodatettiin Celite'n läpi (pesemällä kuumalla metanolilla), haihtuvat osat poistettiin va-kuumissa ja jäännös puhdistettiin silikageeli-kolonnis-sa (5-25 % metanolia dikloorimetaanissa), jolloin saatiin haluttua tuotetta (100 mg; 46 %). NMR (300 MHz, 15 DMSO-dg): 8,26 (br s, 1H, H-8), 5f94 (d, Jj, 2, - 3f7 Hz, 1H, H-l'), 5,53 (dd, J2, 3, « 6,8 Hz, J2, * 3,7 Hz, 1H, H-2’), 5,07 (br t, J - $^5 Hz, 1H, OH), 4^80 (br t, J = 5,5 Hz, 1H, OH), 4,05 (m, 1H, H-4’), 3,70-3,45 (m, 4H, 2 x H-5* + 2 x H-6'), 2,77 (m, 1H, H-3‘)f 2,14 (br s, 3H, NHC=OCH3), 20 2,02 (s, 3H, 0C-0CH3).

Esimerkki 41 9-(3-deoksi-3-C-hydroksimetyyli-6-D-ribo-pentofurano- syyli)guaniini 2 N -asetyyli-9-(2-0-asetyyli-3-deoksi-3-C-hydrok-, 25 simetyyli)-$-D-ribo-pentofuranosyyli)guaniini (90 mg; 0,236 mmoolia) liuotettiin metanoliin, joka oli kyllästetty ammoniakilla 0 °C:ssa (5 ml) ja sekoitettiin 14 tuntia huoneen lämpötilassa. Havaittiin muodostuvan sakkaa. Reaktioseosta trituroitiin vesi-etaboli-seoksen 30 kanssa ja tuote suodatettiin erilleen (36 mg; .· 51.3%). H1 NMR (300 MHz, DjO) : 8,01 (s, 1H, H-8), 5,94 (d,

Jlt 2, = 2,1 Hz, 1H, H-l’), 4,26 (m, 1H, H-4’), 3,99 - 3,89 + 3,87 - 3,68 (m, 4H, 2 x H-5’ + 2 x H-6'), 2,65 (m, 1H, H-3'), Anal. <C11H15N505 x 0.75 HjO) C, H, N.

51 95384

Esimerkki 42 9-(5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/TbentsyyIloksi)metyyli/-β~ D-ribopentofuranosyyli)guaniini 2 N -asetyyli-9-(2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-5 3-ZTbentsyylioksi)metyyli7~B"D“ribo-pentofuranosyyli)guaniini suspendoitiin metanoliin,joka oli kyllästetty ammoniakilla 0 °C:ssa, ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Liuotin poistettiin v.vfekuumissa ja jäännös kiteytettiin, jolloin saatiin puhdasta tuotetta (500 mg, 10 NMR (30Q MHz, DMSCHJg): 7,83 (s, 1H, H-8) , 7,42-7,20 (m,10 H, aroin.), 6,42 (br s, 2, NH2> , 5,¢8 (d, ^, 2, = 2,1 Hz, 1H, H-l *) , 4 f 40-4150 (m, 5H, H-2' + bentsyyli)4,14 (m, 1H, H-4'), 3f78-3,65 -f 3f58-3,45 (m, 4H, 2 x H-5’ + 2 x H-6’), 2,62 (m, 1H, H-l'), 2,62 (in, 1H, H-3')..

15 Esimerkki 43 9-(3-deoksi-3-C-hydroksimetyyli-6-D-ribo-pentofuranosyyli)- guaniini 9-(5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-ZTbentsyylioksi)metyy-li7~8“D-ribopentofuranosyyli)guaniini (300 mg; 0,63 mraoo-20 lia) yhdistettiin neutraalin atmosfäärin suojaamana

Pearlman'in katalyytin (2,0 g) kanssa. Lisättiin etanolia (5 ml) ja syklohekseeniä (15 ml) ja seosta lämmitettiin kitehuttäen ja sekoittaen 14 tuntia. Seos suodatettiin Celite'n läpi, konsentroitiin vakuumissa ja laskettiin 25 sitten lyhyen C^g-kolonnin läpi. Haihtuvat osat poistet tiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin HPLCitä käyttäen. Kiteytettäessä vesi-metanoli-seoksesta saatiin tuotetta (67 mg; 35,8 %), joka oli identtistä esimerkissä 41 saadun aineen kanssa.

30 Esimerkki 44 • > 9-(5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-Z7bentsyylioksi)metyyli7- β-D-ribo-pentofuranosyyli)guaniini 9-(5-0-bentsyyli-3-deoksi-3~Z(bentsyylioksl)metyy-li7“$-D-ribo-pentofuranosyyli)guaniinl (500 mg; 1,05 mmoo-35 lia) liuotettiin kuivaan 1,2-dikloorimetaania (25 ml) ja M* .

52 95384 käsiteltiin neutraalin atmosfäärin suojaamana N,N-tio-karbonyyli-di-imidatsolin (214,6 mg; 1,2 mmoolia) kanssa.

Seosta lämmitettiin kiehuttaen ja sekoittaen tunnin ajan ja haihtuvat aineet poistettiin vakuumissa. Lisättiin 5 ksyleeniä (20 ml) ja toistettiin kuiviin haihduttaminen, pidettiin sen jälkeen 2 tuntia suurtyhjössä, jolloin saatiin raakaa 9-(2-0-imidatsolotiokarbonyyli-5-0-bentsyy-li-3-deoksi-3-^7bentsyylioksi)metyyli- -D-ribo-pentofura-nosyyli)guaniinia, jota käytettiin puhdistamatta seuraa-10 vassa vaiheessa H^NMR (300 MHz; DMSO—dg); 8,49 (s, 1H, H-8), 6,55 (br s, 2H, NHj), 6,26 (dd, J2,3, * 6,3 Hz, J_, = 1.2 Hz, 1H, H-21), 6f08 (d, J., « 1,5 Hz, 1H, L· f 1 * ^ * H-l'), 3,44 (m, 1H, H-3')· Raaka tuote liuotettiin neutraalin atmosfäärin suojaamana kuivaan 1,4-dioksaa-15 niin (15 ml), jossa oli AIBN:ää (45 mg) ja sekoittaen lisättiin tri-n-butyylitinahydridiä (1,0 ml; 3,71 mmoolia) . Seosta lämmitettiin kiehuttaen 12 tuntia ja haihtuvat osa poistettiin vakuumissa. Kromatografioimalla jäännös kolonnissa (2-10 % metanolia dikloorimetaanissa) 20 saatiin haluttua tuotetta (220 mg; kokonaissaanto 45,5 %).

H1 NMR (300 MHz; DMSO-dg)s 7,85 (br s, 1H, H-8), 7,4-7,2 (m, 10 H, arom.), 6,42 (br s, 2H, NHj), 5,99 (dd. Jllf2A' = 7*5 HZr J1',2B' “ 3’6 HZf 1H' Η"1’*' 4.48 (kapea AB, 2H,bentyyli) » 4,44 (kapea AB, 2H, 25 bentsyyli),3,98 (m, 1H, H-4'), 3,67 (dd, AB ABX, 1H, H—5') , 3,55-3,45 (m, 3H, H-5' + 2 x H-6’), 2,7 (m, 1H, H-3'), 2,5-2,36 (m, 1H, H-2’), 2,30-2,20 (m, 1H, H-2').

Esimerkki 45 9-(2,3-dideoksi-3-C-hydroksimetyyli-B-D-ribo-pentofura-3Q nosyyli)guaniini : : 9-(5-0-bentsyyli-2,3-dideoksi-3-^Tbentsyylioksi) *·* metyyli-6-D-ribo-pentofuranosyyli)guaniini (200 mg; 0,433 mmoolia) yhdistettiin neutraalin atmosfäärin suojaamana Pearlman'in katalyytin (600 mg) kanssa. Lisät-tiin etanolia (2 ml) ja syklohekseeniä (10 ml) ja seosta 53 95384 lämmitettiin kiehuttaen ja sekoittaen 14 tuntia. Seos suodatettiin Celite'n läpi (pesemällä kuumalla metano-lilla) ja haihtuvat aineet poistettiin vakuumissa.

Jäännös (85 mg) puhdistettiin käyttämällä C^g HPLC:tä 5 ja pääfraktiot kiteytettiin uudelleen vesimetanoli-eta-noli-seoksesta, jolloin saatiin haluttua tuotetta (51 mg; 41,9 %). H1 NMR (300 MHz; D20): 8,01 (s, 1H, H-9), 6,20 (dd, Jj, 2A, * 7,5 Hz,

Jl· 2B' * 3f4 Hz' 1H' Π*1**» 4707 <m' 3l83 (dd, A

10 -> ABX, = 12,6 Hz, J--, - 3-0 Hz, 1H, H-5A’) , 3,65 ^6RI ' jA ^ 4 ' (B ABX, J_ « 12,7 Hz, J_Bf - 5.3 Hz, 1H, H-5B’), gem db ,4 1 3,73 (d, J6A, 3, * J6B, 3, - 5,4 Hz, 2H, 2 x H-6’), 2,7-2,6 (m, 2H, H-3' + H-2'), 2^48-2,38 (m, 1H, H-2').

(C11H15N5°4 X °12 H2a) Cr H' N* 15

Esimerkki 46 1-(2-0-asetyyli-5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-£Tbentsyyliok-si)metyyli7-8-D-ribofuranosyyli)urasiili

Tinakloridia (1,45 ml, 12,4 mmoolia) lisättiin 20 liuokseen, jossa oli esimerkin 1 asetaattia (3,7 g, 8,23 mmoolia), CH3CN (180 ml), urasiilia (1,16 g, 10,3 mmoolia), heksametyylidisilatsaania (1,94 ml, 9,20 mmoolia) ja klooritrimetyylisilaania (1,25 ml, 9,85 mmoolia). Liuosta sekoitettiin ympäristön lämpöti-• 25 lassa 4 tuntia ja laimennettiin sitten CHCljilla. Seos pestiin sitten kyllästetyllä NaHC03:lla ja suolaliuoksella, ja orgaaninen fraktio kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografioimalla silikageeli-kolonnissa eluoimalla 30 seoksella 3 % metanolia - 97 % CH2CI2» jolloin jälelle jäi valkeata kiinteätä ainetta (3,2 g, 79 %); Sp.46-47 °C; 54 95384 *H NMR (300,1 MHz, CDClj) 6 8,93 (s, 1H, NH) , 7,98 (m, 2H, arom.), 7,87 (d, J 8,2 Hz, 1H, H-6), 7T56 (m, 1H, arom-.) , 7,43 (ra, 2H, arom.), 7,29 (m, 5H, arom.) 5,97 (d, J - 2,3 Hz, 1H, H-l'), 5,54 (dd, J 6,1, 2,3 Hz, 5 1H, H-2'), 5,32 (dd, J - 8,1, 1,8 Hz, 1H, H-5), 4,51 (s, 2H, bent^yyli),4,46 (m, 2H, H-4' ja H-6'), 3,98 (dd, J * 11,0, 1,9 Hz, 1H, H-5'a), 3,68 (dd, J * 11,0, 2,3 Hz, 1H, H-5'b), 3,04 (m, 1H, H-3') , 2,08 (s, 3H, asetaatti);13C NMR (75,5 MHz, CDClj) 6 169,3, 166,1, 163,1, 150,0, 140,0, 137,0, 10 133,4, 129,6, 129,4, 128,7, 128,5, 128,4, 102,1, 89,4, 82,0, 76,8, 73,8, 69,3, 60,5, 39,7, 20,7; IR(KBr) 1750, 1718, 1690 cm-1; MS (DCI) m/e 495(M+1), 435(M+-OAc), 383 (M+- urasiili).

Esimerkki 47 15 1-(5-0-bentsyyli-3-deoksi-3-/7bentsoyylioksi)metyyli7-2- hydroksi-B-D-ribofuranosyyli)urasiili

Liuos, jossa oli esimerkin 46 asetaattia (0,260 q, 0,526 mmoolia) metanolissa (4 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen ja kyllästettiin sitten ammoniakilla. Seosta sekoitettiin 20 tunnin ajan 0 °C:ssa ja 1,5 tuntia 20 °C:ssa. Sitten liuotin poistettiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin flash-kromatografioimalla silikageelillä seoksen 5 % ...< metanolia 95 % CHjClj ollessa eluenttina, jolloin jälelle jäi valkeata kiinteätä ainetta 25 (0,173 g, 73%); 67-70°C; *H NMR (300,1 MHz, (CDC13) δ 10,05 (s, 1H, NH), 8,17 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-6), 7,99 (m, 2H, arom.), 7,55 (m, 1H, arom.), 7f41 (π», 2H, arom.), 7f26 (m, 5H, arom.), 5,77 (s, 1H, H-l'), 5,19 ; (dd, J - 8,1, 2,1 Hz, 1H, H-5), 4,92 (d, J - 2y6 Hz, 1H, 30 OH), 4,71 (dd, J * 11,3 6,8 Hz, 1H, H-6'a), 4,43 (m, 5H, H-2' , H-4' , H-6'b,bentsyyli), 4,07 (d, J 9,6 Hz, 1H, H-5'a), 3,73 (d, J * 9,5 Hz, 1H, H-5'b), 2,73 (m, 1H, H-3‘); 13C NMR (75.5 MHz, CDC13) 6 167,0, 164,9, 151,6, 141γ3, 137f8, an * am» iiri «a 55 95384 133.8, 138,3, 130,2. 129,1, 129,0, 128,8, 128,5. 101,9, 93,3, 83,6. 77,3, 74,1, 69,1. 61,4. 39,6, IMJcalvo, 3398.

3212, 1700 cm"1, MS(DCI) m/* 453(M 1), 43SIM -OHI, 341(M+- urasiili).

5 Esimerkki 48 1-(5-0-bentsyyli-3/Mbentsoyylioksi)metyyli7“2,3-dideoksi- 8-D-erytro-furanosyyli)urasiili

Tiokarbonyyli-di-imidatsolia (1,8 g, 10,0 mmoolia) lisättiin liuokseen, jossa oli esimerkin 47 alkoholia 10 (1,82 g, 4,02 mmoolia) THF:ssa (45 ml). Seosta lämmitet tiin kiehuttaen 7 tuntia, jäähdytettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatog-rafioimalla silikageelillä seoksen 3 % metanolia - 97 S CH2Cl2 ollessa eluenttina, jolloin jälelle jäi valkeata 15 kiinteätä ainetta (1,635 g 72 %); AH NMR (300,1 MHz, CDClj), 6 9r10 (s, 1H, NH), 7,96 (m, 2H, .arom.) , 7,78 (d, J * 8,2 Hz, 1H, H-6), 7 j 52 (m, 1H, arom.), 7f38 (m, 2H, arom.), 7,27 (m, 6H, arom.), 6,02 (d, J - 2,5 Hz, lH,imidatsoli), 5,98 (dd, J 20 » 6,0, 2f5 Hz, 1H, H-l»), 5,30 (dd, J « 8,1, lf9 Hz, 1H, H-5) , 4,48 (m, 3H, bentsyyli, H-6'a) , 4,34 (m, 2H, H-4', H-6'b), 3,95 (m, 3H, H-2', H-5’a), 3,66 (dd, J * 10,9, 2,3 Hz, H-5 *b), 3,15 (m, 1H, H-3'); 13C NMR (75,5 MHz, CDClj) δ 195,1, 166,1, 163,2, 150,0, 140,4, 137,1, 133,4, 129f7, 25 129f4, 128.7, 128,5, 128,3, 128,0, 102,3, 89,3, 84,7, 82,0, 73.8, 69,6, 60,5, 60,3, 40,1; IR(KBr) 1720, 1690 ero"1.

Liuosta, jossa oli edellä valmistettua bentsoaattia, dioksaania (70 ml), bis(tributyylitina)oksidia (7 ml), ja polymetyylihydroksiloksaania (7 ml), käsiteltiin .· 30 AIBN:n (0,032 g, 0,195 mmoolia) kanssa. Seosta lämmitet tiin 100 °C:ssa 2 tuntia, jäähdytettiin ja seos laskettiin sitten Celite'n läpi. Suodos haihdutettiin kuiviin ja jäännös puhdistettiin flash-kromatografioimalla silikageeli-kolonnissa seoksen 3 % metanolia - 97 % 35 CH2C^2 °Hessa eluenttina, jolloin jälelle jäi valkeata 95384 56 !; kiinteätä ainetta (1,15 gf 94 %); 1H NMR (300,1 MHz, CDC13)6 9,23 (s, 1H, NH), 7,96 (m, 3H, H-6, arom.), 7,56 (m, 1H, arom.), 7,42 (m, 2H, arom.), ^ 7,30 (m, 5H, arom.)/ 6^14 (dd, J 6,6, 3,1 Hz, 1H, H-l') , 5,31 (dd, J - 8,2, lf8 Hz, 1H, H-5), 4,51 (s, 2H, bentsyyli), 4,40 (dd, J * 11,4, 5,6 Hz, 1H, H-6'a), 4,28 (dd, J = 11,4, 6,4 Hz, 1H, H-6'b) , 4,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-4') , 3-94 (dd, J - 10-8, 2.1 Hz, 1H, H-5'a), 3-70 (dd, J « 10.8, υ 2y 4 Hz, 1H, H-5'b), 2,89 (m, 1H, H-3 *) , 2f29 (τη, 2H, H-2'); 13C NMR (75.5 MHz, CDC13> 6 167,0, 164^3, 151fl, 141,1, 137,9, 134,0, 130,2, 129,3, 129,2, 128,8, 128,5. *02,0, 86,0, 83,5, 74,2, 70,0, 64,7, 37,0, 36,9; IR (kalvo) 1710, 1684; MS(DCI) m/e 437(M+-1), 325 (M+-urasiili) .

15

Biologiset kokeet

Yhdisteiden testaus ja arviointi herpes-viruksien vastaisina aineina A. Täplien vähentyrniskoe 20 Herpes Simplex-virus(HSV)-kantoja kasvatettiin ja titrattiin 37 °C:ssa vero-soluissa (Afrikan vihreän apinan munuaissoluissa) ja käytettiin virus-työskentelyssä ennen kymmentä läpikulkua.

Soluja kasvatettiin ja säilytettiin Earle's Mini-25 mum Essential Medium'issa (EMEM), Gibco Laboratories, jo- ·· hon oli lisätty 0,75 % natriumbikarboanattia. 2 mmoolia 1-glutamiinia, Pen-strep'iä ja 5-10 % vasikan sikiön seerumia.

HSV-kantojen tiitteri on määritetty täplä-titraus-30 menetelmällä (Roizman and Roane, "Virology", 15:75-79, • > 1961). Kudosviljelmään siemennettiin 24-syvennyksissä

Petri-astioissa soluja ja käytettiin kokeisiin, joissa oli suunnilleen 75 % monolayeriä. Kuhunkin kolmoissyven- 57 95384 nyksistä istutetaan viruskannan logaritmisia laimennuksia (0,1 ml), ja imeytetään tunnin ajan ravistellen rajoittein. Sen jälkeen istute poistetaan ja lisätään 1 ml 5-10 %:sta ENEM'iä, joka sisältää 0,3 % ihmisen immuuni-5 seerumi-globuliinia. 40-tuntisen hautomisajan jälkeen 37 °C:ssa 5 %:sessa C02-atmosfäärissä, päällä oleva väliaine poistetaan ja solulevyt värjätään Giemsa-värillä. Lasketaan täplien lukumäärä, arvioidaan kolmoissyvennys, ja lasketaan täplän muodostavien yksiköiden lukumäärä milli-10 litraa kohden.

Yhdisteiden aktiivisuus herpes simplex-kantoja vastaan koestetaan käyttämällä kunkin yhdisteen vastaval-mistettua varastoliuosta. Ennen käyttöä kustakin yhdisteestä valmistetaan sopivia laimennuksia 10 %:seen 15 ENEM:ään. Kunkin yhdisteen viruksen vastainen tehokkuus määritetään käyttämällä edellä selostettua täplien vähen-tymiskoetta. Lyhyesti sanottuna, kudosviljemän 24-syven-nyksisiin levyihin, joissa on suunnilleen 75 % solu-mono-layreriä, istutetaan suunnilleen 50 täplän muodostavaa 20 HSV-yksikköä millilitraa kohden, ja virusten annetaan imeytyä tunnin ajan, ravistelemalla ajoittain. Istutteen poistamisen jälkeen, kolmoissyvennyksiin lisätään 1 ml 10 %:sta EMEM:ää, joka sisältää kaksinkertaisin laimennuksin sopivaa lääkeainetta. Kolmoissyvennys/levyyn ei 25 panna lääkeainetta ja niitä käytetään viruskontrollina.

48-tuntisen hautomisajan jälkeen 37 °C:ssa 5 %:sessa C02-atmosfäärissä, pinnalla oleva väliaine poistetaan, solut värjätään edellä selostetulla tavalla, ja lasketaan täplät. Arvioidaan kolmoissyvennysten keskiarvo, ja laske-30 taan kussakin lääkeaine-laimennuksessa olevien täplien lukumäärä.

58 95384 Lääkeaineen viruksen vastainen tehokkuus määritetään IDgQ-arvona, lääkeaineen konsentraationa, joka tarvitaan vähentämään täplien lukumäärää 50 % virus-kontrollivlljelmien täplien lukumäärään verrattuna.

5 B. Kolorimetrinen värin-yhteys-koe

Alkuseulonta kolorimetristä värin-yhteys-koetta varten (McLaren, C., ym., "Antiviral Research", 3:323, 1983) suoritetaan käyttämällä nopeasti kasvavia vero-soluja. Lyhyesti sanoen, soluja, yhdistettä ja virus-10 laimennuksia lisätään 96-syvennyksisiin kudosviljelmä- levyille samanaikaisesti käyttämällä soluja, viruksia ja väliainetta edellä selostetulla tavalla. 48-tunti-sen hautomisen jälkeen 30 °C:ssa 5 %:sessa CC^-atmos-fäärissä, päällä oleva väliaine poistetaan ja solule-15 vyt värjätään 0,04 %:sella neutraalilla punaisella liuoksella. 30 minuutin hautomisen jälkeen 30 °C:ssa, solulevyt pestään ja väri eluoidaan 0,05-molaarisen natriummonofosfaatin kanssa 47 %:sessa etanolissa ja 0. D. määritetään 540 nm;n aallonpituuden kohdalta.

20 50 %:n inhiboiva annos (ID^q) kunkin lääkeaineen osalta määritetään lineaarisen regressioanalyysin avulla.

C. Yhdisteiden koestus ja arviointi ihmisen sytomegalo-viruksen vastaisina aineina : Ihmisen sytomegalovirus (HCMV)-kantaa (AD169) kas- 25 vatettiin ja titrattiin 37 °C:ssa ihmisen aikakautisis sa keuhko-(parikromosomisissa) soluissa, MRC-5-, ja käytettiin viruksen vastaisessa kokeessa.

Yhdisteiden aktiivisuutta koestettiin HCMV:tä vastaan käyttämällä edellä selostettua täplien vähen-V ‘ 30 tymiskoetta.

D. Yhdisteiden koestus ja arviointi hiiren retrovirus-ten vastaisina aineina

Yhdisteiden virusvastaista aktiivisuutta arvioitiin hiiren leukemiavirus (MuLV)-kantoja vastaan käyttä-35 mällä UV-XC-täpläkoetta (Rowe, ym., "Virology",

Il ! Iti 1 liiti I ! i «t . . i 55 95384 42:1136/ 1970). MULV-kantoja kasvatettiin kesyttämättö-män hiiren soluissa (SC-1) ja käytettiin virusvastaisis-sa kokeissa käyttämällä UV-XC-täpläkoetta. Lyhyesti sanoen, SC-1-soluja kasvatetaan monoleyer'einä 4-syvennyk-5 sisissä kudosviljelylevyissä ja niihin istutettiin suun nilleen 50-100 täplän muodostavaa MuLV-yksikköä 0,5 ml:ssa 5 %:sta EMEMrää, jossa oli 20^ug/ml DEAE/ dekstraania. Tunnin adsorption kuluttua istute poistettiin ja lisättiin 5 ml 5 %:sta EMEMiää, joka sisälsi 10 kolminkertaisina laimennuksina sopivaa lääkeainetta.

Viiden päivän kuluttua viljelmiä UV-säteillytettiin ultraviolettilampulla ja viljelmiin lisätään rotan XC-sarkoomasoluja. Kolme - neljä päivää UV-säteillytyksen jälkeen soluviljelmät värjätään Giemsa-värillä ja las-15 ketään täplät. Virusvastainen aktiivisuus ilmoitetaan lääkeaineella käsitellyissä, virus-infektioiduissa viljelmissä lasketun UV-XC-täplien keskimääräisen lukumäärän vähenemisenä, verrattuna täplien keskimääräiseen lukumäärään, jotka on laskettu käsittelemättömissä, 20 viruksen infektoimissa kontrolli-viljelmissä.

E . yhdisteiden koestus ja arviointi HIV:n vastaisina aineina_ HIV/LAV:n vastainen aktiivisuus määritettiin CEM-F-solujen viljelmissä. CEM-solut infektioitiin » ·« 25 suunnilleen 30 TCID^illä (50 %:sesti kudosviljelmälle infektion aiheuttava annos) HIV:tä (LAV-kantaa). Soluja haudottiin sitten 45 minuuttia 37 °C:ssa. Infektioitui-hin soluihin lisättiin koeyhdisteitä viljelyväliainees-sa, erilaisin konsentraatioin ja sitten haudottiin : ‘ 30 edelleen kahdeksan päivää. Kahdeksan päivän kuluttua viruksen vastainen aktiivisuus arvioitiin viljelmä-väliaineen pinnalla olevasta osasta p-24-gag-proteiinin osalta entsyymin sieppauskokeen avulla (ELISA). Virusvastainen aktiivisuus ilmoitettiin annoksena, joka eh-35 käisee 50 %:sesti viruksen ilmenemisen (IDj-q trooleina), todettuna selostetun kokeen avulla. ^ 60 95384

Eräitä tyypillisiä virusvastaisen kokeen arvoja on esitetty taulukossa 1 .

Taulukko 1

5 merkki H8V-1* HSV-21 MuLV HIV fiCMV

43 146 130 >32 42 17,1 >131 17f7 >10 8 >133 >133 >100 0,8 12 >166 >166 83 >10

Ig2 1^5 37 0,06 >0*1 1.7 163 >50 >50 - 25 >165 >124 - >10 >100 26 >166 >166 5,0 >10 >100 15 AZT4 - - 0,0066 1,0 ACV5 1 " “ 2'3 1. Määritettynä täplien vähenemiskoknen tai värin yhtey-tyskokeen avulla 20 2. β-isomeeri 3. a-isomeeri 4. 3'-etsido-3'-deoksitymidiini 5. Acyclovir < • s \ \

t « I

Il - 34» i l 4 S* - ,

Claims (5)

1. 61 95384
2. 1. Menetelmä 3'-deoksi-3'-substituoitujen metyyli-nukleosidien valmistamiseksi, joiden kaava on 10 r2o-* Q ! jossa B osoittaa, että B voi olla joko a tai β; B on valittu ryhmästä pyrimidiini- ja puriininuk-15 leosidiemäkset, jotka ovat liittyneet tetrahydrofuraani-renkaaseen pyrimidiinin N^heterosyklisen typpiatomin tai puriinin N9- tai N7-heterosyklisen typpiatomin välityksellä, mukaan lukien luonnossa esiintyvät nukleosidi-emäkset ja 5-fluori-, 5-bromi-, 5-jodi-, 5-kloori-, 5-20 trifluorimetyyli-, 5-etyyli- ja 5-(2-bromivinyyli)urasii-li, triatsolikarboksiamidi, 2-aminopuriini, 2,6-diamino-puriini, 4-klooripyrimidiini, pyrimidiini, atsapyrimidii-ni, puriini, 2,6-diklooripuriini, 2-amino-6-klooripuriini ja deatsapuriini; 25. ja Q tarkoittavat vetyä tai toinen symboleista R ja Q on hydroksi ja toinen on vety; ja R1 ja R2 tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä tai hydroksisuojaryhmää, tunnettu siitä, että 1,2-isopropylideeni-3-deoksi-3-R20-metyyli-5-0-R1-a-D-ri-30 bofuranoosi, jonka kaava on - '^v Xll 62 95384 jossa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, muutetaan nukleosidiemäksen suhteen reaktiiviseksi välituotteeksi, jonka kaava on 5 Β’°Ί o R‘°>V Rf(H Oasvyli \ IV XI ° »-0R1 joissa kaavoissa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, Z on nukleosidiemäksen kanssa reagoiva esteri ja asyyli 15 on alkanoyyli- tai aroyyliryhmä, jossa on enintään 7 hiiliatomia, ja kaavan IV tai XI mukainen välituote saatetaan kosketukseen edellä määriteltyä ryhmää B vastaavan nukleosidiemäksen tai sen aktivoidun johdannaisen kanssa reaktio-olosuhteissa, minkä jälkeen haluttaessa, suoja-20 ryhmät poistetaan, jolloin saadaan 3'-deoksi-3'-hydroksi-metyyli-nukleosidianalogi, jonka kaava on °W H(HXOH 30 ja haluttaessa 2'-0H-ryhmä korvataan sinänsä tunnetulla » 4 tavalla vedyllä. ia ·« * un i.i t n «3 95384
3. 2. Yhdiste, jonka kaava on >v Rt0J 0 \ m 10 jossa R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.
4. 3. Yhdiste, jonka kaava on “ 1’°>v - . ...HL
5. 20 IV XI ° ‘—OR1 joissa kaavoissa R1, R2, Z ja asyyli tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1. • · · 64 95384