FI95032C - Uusi fluoresoiva väriaine - Google Patents
Uusi fluoresoiva väriaine Download PDFInfo
- Publication number
- FI95032C FI95032C FI903773A FI903773A FI95032C FI 95032 C FI95032 C FI 95032C FI 903773 A FI903773 A FI 903773A FI 903773 A FI903773 A FI 903773A FI 95032 C FI95032 C FI 95032C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- pur
- solution
- dye
- methyl
- fluorescent dye
- Prior art date
Links
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 4
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-M D-glucopyranuronate Chemical compound OC1O[C@H](C([O-])=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-M 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 20
- 101710146400 Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- -1 3,7-dimethylthio-6- (methylthio) purine p-toluenesulfonate Chemical compound 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- JZJPPRVXJHAHQM-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-6-methylsulfanylpurine Chemical compound N1=CN(C)C2=NC=NC2=C1SC JZJPPRVXJHAHQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VZRIFNLQJXPRJI-UHFFFAOYSA-M 2,3-dimethyl-1,3-benzothiazol-3-ium;iodide Chemical compound [I-].C1=CC=C2[N+](C)=C(C)SC2=C1 VZRIFNLQJXPRJI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000004694 iodide salts Chemical group 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical class CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- VUQUOGPMUUJORT-UHFFFAOYSA-N methyl 4-methylbenzenesulfonate Chemical compound COS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VUQUOGPMUUJORT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical compound CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DXYYSGDWQCSKKO-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(C)=NC2=C1 DXYYSGDWQCSKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001274216 Naso Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M iodide Chemical compound [I-] XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M thiazole orange Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1.C1=CC=C2C(C=C3N(C4=CC=CC=C4S3)C)=CC=[N+](C)C2=C1 ACOJCCLIDPZYJC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GYHJFWZSCIYJKD-UHFFFAOYSA-M 2,3-dimethyl-1,3-benzothiazol-3-ium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound C1=CC=C2[N+](C)=C(C)SC2=C1.CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 GYHJFWZSCIYJKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIJIQXGRFSPYQW-UHFFFAOYSA-N 6-methylthiopurine Chemical compound CSC1=NC=NC2=C1N=CN2 UIJIQXGRFSPYQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC=NC2=C1 IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004189 ion pair high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/02—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups
- C09B23/04—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups one >CH- group, e.g. cyanines, isocyanines, pseudocyanines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
- C12Q2304/10—DNA staining
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Coloring (AREA)
Description
! 95032
Uusi fluoresoiva väriaine Tämä keksintö koskee uutta fluoresoivaa väriainetta ja tarkemmin, se koskee uutta fluoresoivaa väriainetta, joka vär-5 jää edullisesti nukleiinihappoja.
Verisyntyiset parasiitti-infektiot edustavat pääasiallista terveysongelmaa useilla alueilla maailmassa. Monilta näiltä alueilta puuttuvat sekä varusteet että taitavat teknikot, 10 jotka käyttävät varusteita, joita on saatavilla sellaisten parasiittien havaitsemiseksi biologisesta näytteestä, kuten veri tai sen komponentti. Jotta voitaisiin kamppailla näitä ongelmia vastaan, on kehitetty tiettyjä instrumentteja, joilla on alhainen kustannustaso ja alhainen ammattitaitoa 15 vaativa taso, mutta joista saadaan tarkkoja, helposti luettavia tuloksia. Eräs sellainen instrumentti sisältää kapil-laariputken, jossa on yleisesti sylinterimäinen massa, jonka ominaispaino on sellainen, että se kelluu yhdessä solu-kerroksista, kun verinäyte erotetaan sentrifugoimalla. Mas-20 sa valitaan niin, että se muodostaa ohuen rengastilan putkessa, johon parasiittejä sisältävät solut kerääntyvät, täten lisäten parasiittien konsentraatiota rajoitetulla alueella. Sitten putkesta tutkitaan mikroskoopin avulla parasiittien läsnäolo rengasalueelta. U.S patentti nr. 4190328 25 kuvaa erästä sellaista keksintöä, jossa käytetään tätä me-: netelmää. QBC'-systeemi (Becton Dickinson Primary Care Diag nostics) käyttää tätä menetelmää kaupallisesti.
Tämän menetelmän haittapuoli on kuitenkin, että väriaineen, 30 joka tuo esiin parasiitin läsnäolon missä tahansa solussa, puuttuminen tekee sellaisten parasiittien havaitsemisen vaikeaksi. Parasiitit saattavat läpäistä useita erilaisia kehitysvaiheita tietyssä isännässä. Vaiheiden erottaminen on usein vaikeata ja vaatii jossain määrin tiettyä taitoa 35 ja käytäntöä. Tietyn vaiheen läsnäolo tai puuttuminen voi olla viittaava infektion suhteellisesta vakavuudesta tai vaiheesta.
2 95032 U.S. patentissa nr. 4190328 akridiinioranssi esitetään membraania läpäisevänä väriaineena, joka värjää parasiittien nukleiinihapot. Akridiinioranssi läpäisee kuitenkin myös 5 muissa verisoluissa ja värjää jossakin määrin tumallisia valkoisia verisoluja. Täten, jos kliinikko ei ole taitava erottamaan infektion vaiheita, saattaa esiintyä vääriä positiivisia käyttämällä akridiinioranssin kaltaisia väriaineita.
10
Toinen menetlmä, jolla analysoidaan verisyntyisiä parasiittejä, ei sovellu kenttäkäyttöön, mutta sitä voidaan soveltaa tutkimuskäyttöön. Tähän menetelmään kuuluu virtaussyto-. metrin käyttö ja membraanin läpäisevä, nukleiinihappoväri, 15 kuten tiatsolioranssi. Makler et ai., Cytometry, 8:568 (1987), kuvasivat tämän menetelmän äskettäin.
Yleensä, tähän menetelmään kuuluu, että eristetään kokove-rinäyte potilaasta ja värjätään solut tiatsolioranssilla.
20 Sitten värjättyjen solujen annetaan mennä virtaussytometrin lävitse, kuten rACScen'" (Bercton Dickinson Immunocytometry Systems). Kun solut läpäisevät virtaussytometrin, ne menevät tunnustelualueen läpi, pääpiirteittäin yksi kerrallaan, jolloin jokainen solu pyyhkäistään valolla, jolla on kiih-25 dytysaallonpituus, tyypillisesti valo 488 nm:ssä argonla-serista. Valo, joka sirottuu, ja fluoresoiva valo, joka lähtee jokaisesta solusta, havaitaan tunnustelukeinoin, kuten valodetektorilla, ja jokainen solu tunnistetaan perustuen kaikkiin havaittuihin valosignaaleihin.
30
Kuten viitteesä huomautettiin, tumallisten solujen (sekä kypsymättömien punasolujen että kaikkien valkosoluvaihei-den) taustan värjääminen tapahtuu kuten verihiutaleiden. Vaikka valkoisten verisolujen värjääminen voidaan sulkea 35 pois soluanalyysistä, tumallisten punasolujen ja verihiutaleiden värjäystä ei voida sulkea pois ja antaa täten taus-tafluoresenssiä, joka voi vaikuttaa parasiittejä sisältävi- 3 95032 en solujen tunnistamiseen.
Siispä, mitä vaaditaan menetelmän parantuneeseen käytännön suoritukseen, kuten edellä kuvatut, on väriaine, joka edul-5 lisesti värjää verisyntyisten parasiittien nukleiinihapot, niin että tumallisia punaisia ja valkoisia verisoluja ja verihiutaleita värjäytyy hieman tai ei lainkaan.
Tämä keksintö sisältää nukleiinihappovärin, jonka yleinen 10 kaava on: /“λ /}-CH=( N-R I 1
H
L r Jn jossa R on CH3 ja X' on halidi, sulfaatti, fosfaatti, oksa-15 laatti tai D-glukuronaatti ja n on kokonaisluku. R:n ei tarvitse olla sama joka asemassa.
Väriaine virittyy 488 nmrssä (maksimaalisen virityksen ollessa 460 nm:ssä) ja säteilee fluoresenssiä nukleiinihappojen läsnä-20 ollessa 470-550 nm:ssä maksimaalisen säteilyn ollessa 478 nm. Väriaine värjää selektiivisesti sekä RNA- että DNA-nukleiinihappo j a.
Esillä olevan keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty 23 oheisissa patenttivaatimuksissa.
Kuvio 1 on piirros absorbanssi versus aallonpituus (nm) PUR-i jodidisuolaliuokselle RNA:n kanssa ja ilman.
30 Kuvio 2 on piirros fluoresenssi versus aallonpituus PUR-1 p-tolueenisulfonaattisuolaliuokselle RNA:n kanssa ja ilman.
4 95032 Tämä keksintö sisältää uuden fluoresoivan väriaineen, joka värjää edullisesti nukleiinihappoja. Se virittyy 488 nm:ssä ja säteilee maksimaalisesti 478 nm:ssä. RNA:n läsnäollessa 5 väriaineen fluoresenssin lisäys on suurempi kuin 7000 kertainen. Väriaineen kvanttituotto on noin 0,4.
Väriaine syntetisoitiin seuraavalla tavalla, jota esitetään lisää taulukossa I. Ellei muuten mainita, kaikkia tässä 10 mainittuja yhdisteitä saadaan Aldrich Chemical Corsta. Välituotteet 2 ja 3 valmistettiin modifioimalla hieman Neiman et ai. esittämiä menetelmiä, Israel J. Chem. 3:161 (1965). Välituote 4 valmistettiin Brooker et ai. menetelmän-mukaisesti, J. Am. Chem. Soc., 67:1889 (1945).
15
Sulamispisteet määritettiin Thomas Hooverin kapillaarisula-mispistelaitteella ja ovat korjaamattomia. NMR-spektrit tallennettiin IBM WP-200SY:llä ja kemialliset siirtymät raportoitiin suhteessa tetrametyylisilaaniin. Analyyttinen 20 käänteisfaasi-ionipari HPLC suoritettiin Waters 860 kaksi- pumppusysteemillä, jossa ol*i valodiodijärjestelmäilmaisu (200-600 nm) käyttämällä Brownlee syaano 4,6 x 220 mm pylvästä seuraavissa olosuhteissa: ensin pidettiin 5 min 50 mM:ssa trietyyliammoniumasetaatissa vedessä pH 6,5, jonka 25 jälkeen seurasi lineaarinen gradientti 50 mM trietyyliammo-niumasetaattiin asetonitriilissä yli 1 h ajan. Suuren erotuskyvyn massaspektri saatiin Duke yliopiston Mass Spectrometry Facilitystä.
Taulukko I
5 95032 SCH, SCH, 5 λ Λ (Γ'ΧΛ _suif°naatti_=, i
2. NaOH ΊΓ N
I I
H CH, 10 1 2
Metyyli- SCH, CH, SCH. CH.
1 \ i i p-tolueeni- ^ N^ 15 sulfonaatti I 11 \ 4-^ fi f y N+ N Ίί / / CH, CH, 3 20 f Γ>- CH, / l+ / CH, / 25 -» f }T \-CH= l KF-CH,
. NEt, /CH, OH
\η.
H,C
Pur-1 30 6 95032 3-metvvli-6-(metyylitio)puriinin (2) valmistus:
Pyöreäpohjäinen pullo täytettiin 3 g:lla 6-(metyylitio)purii-nia (1), 3,7 g:lla metyyli-p-tolueenisulfonaattia ja 6 ml:lla 5 dimetyyliformamidia. Seosta kuumennettiin 51jyhauteessa 110 'C:ssa 2,5 h, kunnes siitä tuli kellertävä kirkas liuos.
Jäähdytyksen jälkeen lisättiin 20 ml vettä liuokseen, joka uutettiin sitten kolmella 200 ml:n annoksella eetteriä rea-10 goimattoman lähtömateriaalin poistamiseksi. Yhdistetyt eette-riannokset uutettiin uudestaan 20 ml :11a vettä, vesikerros pestiin 20 ml :11a eetteriä ja yhdistettiin sitten alkuperäiseen vesipitoiseen liuokseen. Sitten liuos tehtiin emäksisek^-si, pH 13, lisäämällä KOH:ta. Useiden minuuttien jälkeen 15 liuoksesta saostui valkoinen kiteinen kiinteä aine. Kiinteä aine suodatettiin ja pestiin vedellä ja kuivattiin ilmassa. Valkoiset kiteet tunnistettiin 3-metyyli-6-(metyyylitio)pu-riiniksi (2).
20 3,7-dimetvvlitio-6-(metvvlitio)puriini-p-tolueenisulfonaatin (3) valmistus:
Pyöreäpohjäinen pullo täytettiin 0,80 g:lla 3-metyyli-6-(metyylitio)puriinia (2) ja 0,95 g:lla metyyli-p-tolueenisul-fonaattia. Seosta kuumennettiin lyhyesti öljyhauteessa 100'C: 25 ssa. Homogeeninen liuos jäähdytettiin ja pestiin sitten ase-• tonilla ja eetterillä. Pesun jälkeen reaktioseos oli amorfi nen valkoinen kiinteä aine. Orgaaniset pesuvedet yhdistettiin ja muodostui valkoinen kiinteä aine. Tämä materiaali (3) yhdistettiin amorfisen kiinteän aineen kanssa ja käytettiin il-30 man puhdistusta PUR-l:n synteesissä.
2,3-dimetyylibentsotiatsoliumjodidin (4) valmistus: 4,8 g metyylijodidia ja 5 g 2-metyylibentsotiatsolia yhdistettiin pyöreäpohjäisessä pullossa, jossa oli metallinen 35 sekoitussauva ja palautusjäähdytin. Pulloa kuumennettiin 80'C öljyhauteessa 16 h. Vaaleanpuna-valkoinen kiinteä aine (4) jäähdytettiin, rouhittiin, pestiin asetonilla ja suodatet- % li 95032 7 tiin.
PUR-1:n valmistaminen
Pyöreäpohjäinen pullo, jossa oli magneettisekoitussauva ja 5 palautusjäähdytin, täytettiin 1,28 g:lla 2,3-dimetyylibentso-tiatsoliumjodidia (4), noin 1,50 g:lla (4,4 mM) karkeata 3,"-dimetyyli-6-(metyylitio)puriini-p-tolueenisulfonaattia (3), 20 ml:lla metanolia ja 0,5 mlrlla trietyyliamiinia. Seosta palautusjäähdytettiin noin 45 min, jolloin muodostui punainen 10 liuos, jossa oli keltaista kiinteätä ainetta. Materiaali jäähdytettiin, suodatettiin ja pestiin metanolilla ja eetterillä, jolloin saatiin kelta-oranssi kiinteä aine, joka tunnistettiin kaavasta: “ Olr-Ch \h, fi^Jh -r - CHj 20 Tämä materiaali tunnistettiin 3-metyyli-2-[(3,7-dimetyyli-6-purinyylideeni)-metyyli)]-bentsotiatsoliumiksi (PUR-1). PUR-1 on väriaineen edullinen suoritusmuoto ja sillä on seuraavat ominaisuudet: sp= 340-345‘C, nmr (CDjOD) δ 3,97 (s, 3H) , 3,99 25 (s, 3H), 4,27 (s, 3H), 6,56 (s, 1H), 7,39 (t, 1H), 7,57 (d, ., 1H), 7,80 (d, 1H), 8,04 (d, 1H), 8,54 (s, 1H) ja 8,85 (s, 1H); HPLC (30 min retentaatioaika yhdelle komponentille), UV maks. = 448 nm; korkea erotus FAB-MS Ο^Η,,Ν,,ε,,Ι,, (M11+) laskettu - 310,1126, havaittu - 310,1136.
30 p-tolueenisulfonaattisuola voidaan valmistaa korvaamalla 2,3-dimetyylibentsotiatsolium-p-tolueenisulfonaatti 2,3-dimetyy-libentsotiatsoliumjodidilla. PUR-1:n p-tolueenisulfonaatti-suolalla on seuraavat ominaisuudet, kun se tunnistettiin 200 35 MHz NMR-spektroskopialla; (CDjOD) δ 8,66 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 7,9-7,2 (m, 8H); 6,55 (s, 1H); 4,28 (s, 3H); 4,03 (s, 3H); 3,98 (s, 3H); 2,30 (s, 3H).
• * i 3 95032
Muita suolamuotoja voidaan tehdä jodidimuodosta anioninvaih-tomenetelmällä. Lyhyesti, eluentti pumpattiin Brownlee Aqua-pore anionipylvään, 10 x 250 mm, läpi 2,0 ml/min. Pylvästä 5 suihkutettiin noin 100 ml:11a vettä ja sen jälkeen tasapainotettiin 10 ml:11a 1,0 M vaihdettavan anionin natriumsuolaliu-oksella. Ylimääräinen puskuri suihkutettiin pylväästä 200 ml:lla vettä. Väriaineen jodidisuola injektoitiin pylvääseen ja eluoitiin vedellä 1:1 liuoksella vesi ja asetonitriili.
10 Käyttämällä tätä menetelmää tehtiin seuraavat taulukossa II esitetyt PUR-l:n suolat:
Taulukko II 15
Tasapainottava Eluoiva Lopullinen suolamuoto suola liuotin 1.0 M NaPHO< Vesi (PUR-1) NaPH0< 1.0 M NaSO, Vesi (PUR-1 )NaSO, 20 1,0 M Na-oksalaatti Vesi:aseto- (PUR-1)oksalaatti nitriili 1.0 M Na-D-gluku- Vesi:aseto- (PUR-1)-D-glukuronaatti ronaatti nitriili 25 Havaittiin, että PUR-1 :n PO/*- ja S04*'-muodot, jotka muodos-tuivat tällä menetelmällä, olivat liukoisempia kuin PUR-1:n jodidimuodot. Siispä voi olla toivottavampaa käyttää näitä PUR-l-muotoja kuin jodidimuotoa, kun päällystetään kapillaa-riputkia, joihin veri tai muut verikomponentit myöhemmin li-30 sätään analyysiä varten.
PUR-1:n jodidimuodon liukoisuutta voidaan myös parantaa korvaamalla CHjCOO':lla mikä tahansa tai kaikki typpeen kiinnittyneet metyyliryhmät. Tämä voidaan tehdä korvaamalla bromoe-35 tikkahapolla metyyli-p-tolueenisulfonaatti synteesiyhdistees-sä 3.
9 95032
Viitaten kuvioon 1 valmistettiin metanolissa PUR-l:n p-tolu-eenisulfonaattisuolan 1 mM liuos. Liuos laimennettiin 2xl0'! M konsentraatioon fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS) tai 2 x 10'! M konsentraatioon PBS-liuoksessa, jossa oli 5 RNA:ta {torulahiiva, Sigma Chemical Co.) 1 mg/ml konsentraa-tiona. Absorbanssimaksimi RNA:n puuttuessa oli 448 nm (ε = 6,3x10* M‘l cm'1) ja absorbanssimaksimi RNA:n läsnäollessa oli 459 nm (ε = 6,0 x 10* M'1 cm'1) .
10 Viitaten kuvioon 2 valmistettiin PUR-l-liuos PBS:ssä (lOOuM). 3 ml:n kyvettiin lisättiin 2,97 ml PBS:ää ja 30 ml PUR-1-liuosta. Liuoksen fluoresenssiemissio mitattiin 460 nm:n kiihdytysaallonpituudella. RNA:n puuttuessa ei havaittu fluoresenssiä. Toiseen kyvettiin lisättiin 2,97 ml PBSrää, 15 RNA-liuosta (1 mg/ml, 0,30 ml) ja 30 μΐ PUR-l-liuosta. Fluo-resenssiviritys mitattiin kuten edellä. Mitattiin leveä vi-rityskäyrä, jolla oli maksimi 478 nm:ssä ja likimääräinen kvanttituotto oli 0,4.
20 Kaikki julkaisut ja patenttihakemukset, jotka on mainittu tässä esityksessä, ovat viittaavia alan, mihin tämä keksintö kuuluu, tavallisen taidon tasolla. Kaikki julkaisut ja patenttihakemukset ovat tässä liitetty viitteeksi samassa laajuudessa kuin jokainen yksittäinen julkaisu tai patentti-25 hakemus oli tarkoitus spesifisesti ja yksittäin liittää viitteeksi.
Alan tavalliselle ammattimiehelle on selvää, että keksinnössä voidaan tehdä monia muutoksia ja modifikaatioita 30 ilman, että poiketaan liitettyjen patenttivaatimusten hengestä ja puitteista.
Claims (7)
- 95032
- 1. Yhdiste, jonka kaava on: /=\ a>-CH=( N-R I *" 1 H L R R^N\^ J n 5 jossa R on CH3 ja X' on halidi, sulfaatti, fosfaatti, oksa-laatti tai D-glukuronaatti ja n on kokonaisluku.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, 10 että X' on I".
- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että X‘ on PO43· tai SO42'.
- 4. Menetelmä nukleiinihappojen värjäämiseksi biologisessa näytteessä, tunnettu siitä, että saatetaan mainittu näyte kosketuksiin patenttivaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen kanssa. 20 : 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että näyte on veri tai sen komponentti.
- 6. Yhdiste, jolla on kaava: . f^r\ /N=\ • · /)-CH=( N-CH3 I ^ H
- 25 CH’ chTN\^ u 95032
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US38690489 | 1989-07-28 | ||
| US07/386,904 US4937198A (en) | 1989-07-28 | 1989-07-28 | Novel fluorescent dye |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI903773A0 FI903773A0 (fi) | 1990-07-27 |
| FI95032B FI95032B (fi) | 1995-08-31 |
| FI95032C true FI95032C (fi) | 1995-12-11 |
Family
ID=23527562
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI903773A FI95032C (fi) | 1989-07-28 | 1990-07-27 | Uusi fluoresoiva väriaine |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4937198A (fi) |
| EP (1) | EP0410806B1 (fi) |
| JP (1) | JPH064768B2 (fi) |
| KR (1) | KR930008197B1 (fi) |
| AP (1) | AP165A (fi) |
| AT (1) | ATE101182T1 (fi) |
| AU (1) | AU630582B2 (fi) |
| CA (1) | CA2015325C (fi) |
| DE (1) | DE69006417T2 (fi) |
| DK (1) | DK0410806T3 (fi) |
| ES (1) | ES2062383T3 (fi) |
| FI (1) | FI95032C (fi) |
| HU (1) | HUT58738A (fi) |
| IE (1) | IE66053B1 (fi) |
| NO (1) | NO173096C (fi) |
| NZ (1) | NZ233389A (fi) |
| OA (1) | OA09220A (fi) |
| PH (1) | PH26501A (fi) |
| ZA (1) | ZA903477B (fi) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5312921A (en) * | 1990-03-14 | 1994-05-17 | Regents Of The University Of California | Dyes designed for high sensitivity detection of double-stranded DNA |
| DE69326731T2 (de) | 1992-09-04 | 2000-05-18 | Becton Dickinson And Co., Franklin Lakes | Kontroll-Teilchen für die Zellzählung und Instrumentenlinearität |
| US5436134A (en) * | 1993-04-13 | 1995-07-25 | Molecular Probes, Inc. | Cyclic-substituted unsymmetrical cyanine dyes |
| US5545535A (en) * | 1993-04-13 | 1996-08-13 | Molecular Probes, Inc. | Fluorescent assay for bacterial gram reaction |
| US5534416A (en) * | 1993-04-13 | 1996-07-09 | Molecular Probes, Inc. | Fluorescent viability assay using cyclic-substituted unsymmetrical cyanine dyes |
| US5445946A (en) * | 1993-04-13 | 1995-08-29 | Molecular Probes, Inc. | Intravacuolar stains for yeast and other fungi |
| US5658751A (en) * | 1993-04-13 | 1997-08-19 | Molecular Probes, Inc. | Substituted unsymmetrical cyanine dyes with selected permeability |
| EP0684316B1 (en) * | 1994-04-29 | 2004-10-20 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Homogeneous method for assay of double-stranded nucleic acids using fluorescent dyes and kit useful therein |
| US5691204A (en) * | 1995-04-21 | 1997-11-25 | Abbott Laboratories | Compositions and methods for the rapid analysis of reticulocytes |
| JP3425830B2 (ja) * | 1995-10-06 | 2003-07-14 | シスメックス株式会社 | 新規化合物とその用途 |
| SE506700C2 (sv) * | 1996-05-31 | 1998-02-02 | Mikael Kubista | Sond och förfaranden för analys av nukleinsyra |
| US6664047B1 (en) * | 1999-04-30 | 2003-12-16 | Molecular Probes, Inc. | Aza-benzazolium containing cyanine dyes |
| US6916492B2 (en) | 2001-03-30 | 2005-07-12 | Council Of Scientific & Industrial Research | Natural nontoxic multicolor fluorescent protein dye from a marine invertebrate, compositions containing the said dye and its uses |
| US6689391B2 (en) | 2001-03-30 | 2004-02-10 | Council Of Scientific & Industrial Research | Natural non-polar fluorescent dye from a non-bioluminescent marine invertebrate, compositions containing the said dye and its uses |
| US6956122B2 (en) | 2001-09-05 | 2005-10-18 | Council Of Scientific & Industrial Research | Multiple fluorescent natural dye compound from a marine organism |
| US7582429B2 (en) | 2002-10-23 | 2009-09-01 | University Of Utah Research Foundation | Amplicon melting analysis with saturation dyes |
| US7776529B2 (en) | 2003-12-05 | 2010-08-17 | Life Technologies Corporation | Methine-substituted cyanine dye compounds |
| US7387887B2 (en) | 2004-04-20 | 2008-06-17 | University Of Utah Research Foundation | Nucleic acid melting analysis with saturation dyes |
| US9657347B2 (en) | 2004-04-20 | 2017-05-23 | University of Utah Research Foundation and BioFire Defense, LLC | Nucleic acid melting analysis with saturation dyes |
| US7671218B2 (en) | 2004-08-13 | 2010-03-02 | Elitech Holdings B.V. | Phosphonate fluorescent dyes and conjugates |
| US7598390B2 (en) * | 2005-05-11 | 2009-10-06 | Life Technologies Corporation | Fluorescent chemical compounds having high selectivity for double stranded DNA, and methods for their use |
| US7737281B2 (en) * | 2005-05-24 | 2010-06-15 | Enzo Life Sciences, Inc. C/O Enzo Biochem, Inc. | Purine based fluorescent dyes |
| US7569695B2 (en) * | 2005-05-24 | 2009-08-04 | Enzo Life Sciences, Inc. | Dyes for the detection or quantification of desirable target molecules |
| EP2087043B1 (en) * | 2006-11-02 | 2010-08-04 | Roche Diagnostics GmbH | New ds dna binding fluorescent dyes |
| US7943320B2 (en) * | 2008-12-30 | 2011-05-17 | Canon U.S. Life Sciences, Inc. | Unsymmetrical cyanine dyes for high resolution nucleic acid melting analysis |
| US9034596B1 (en) | 2014-04-17 | 2015-05-19 | Kuwait University | Method for fluorescent staining of cellular and intracellular membranes |
| EP3795999A1 (en) | 2014-07-15 | 2021-03-24 | Valitacell Limited | A method of determining the abundance of a target molecule in a sample |
| WO2024170742A1 (en) | 2023-02-17 | 2024-08-22 | Danmarks Tekniske Universitet | Copolymer-drug conjugate for treatment of tumours |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3385850A (en) * | 1964-03-11 | 1968-05-28 | Ciba Geigy Corp | Nu-substituted bicyclic azacycles |
| DE2833137A1 (de) * | 1978-07-28 | 1980-02-07 | Agfa Gevaert Ag | Lichtempfindliches fotografisches aufzeichnungsmaterial |
| US4544546A (en) * | 1980-04-21 | 1985-10-01 | Abbott Laboratories | Fluorescent nucleic acid stains |
| US4637988A (en) * | 1981-07-01 | 1987-01-20 | Eastman Kodak Company | Fluorescent labels for immunoassay |
| GB2114542A (en) * | 1982-01-30 | 1983-08-24 | Leonard Thomas Johns | Tool box trays |
| US4659678A (en) * | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
| US4665020A (en) * | 1984-05-30 | 1987-05-12 | United States Department Of Energy | Flow cytometer measurement of binding assays |
| GB2190189B (en) * | 1986-03-21 | 1990-06-13 | Block Myron Jacques | Assay for polynucleotides |
| DE3839397A1 (de) * | 1988-11-22 | 1990-05-31 | Europ Lab Molekularbiolog | Verfahren zur sequenzierung von nukleinsaeuren |
-
1989
- 1989-07-28 US US07/386,904 patent/US4937198A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-04-18 IE IE137990A patent/IE66053B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-04-20 NZ NZ233389A patent/NZ233389A/en unknown
- 1990-04-24 CA CA002015325A patent/CA2015325C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-05-02 PH PH40456A patent/PH26501A/en unknown
- 1990-05-04 AU AU54714/90A patent/AU630582B2/en not_active Ceased
- 1990-05-08 ZA ZA903477A patent/ZA903477B/xx unknown
- 1990-05-21 NO NO902236A patent/NO173096C/no unknown
- 1990-06-16 JP JP2158538A patent/JPH064768B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-26 AP APAP/P/1990/000195A patent/AP165A/en active
- 1990-07-27 DK DK90308294.9T patent/DK0410806T3/da active
- 1990-07-27 EP EP90308294A patent/EP0410806B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-27 ES ES90308294T patent/ES2062383T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-27 HU HU904669A patent/HUT58738A/hu unknown
- 1990-07-27 AT AT90308294T patent/ATE101182T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-07-27 OA OA59824A patent/OA09220A/xx unknown
- 1990-07-27 DE DE69006417T patent/DE69006417T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-27 FI FI903773A patent/FI95032C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-07-28 KR KR1019900011547A patent/KR930008197B1/ko not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO902236D0 (no) | 1990-05-21 |
| HUT58738A (en) | 1992-03-30 |
| ATE101182T1 (de) | 1994-02-15 |
| IE901379A1 (en) | 1991-06-19 |
| HU904669D0 (en) | 1991-01-28 |
| ES2062383T3 (es) | 1994-12-16 |
| EP0410806B1 (en) | 1994-02-02 |
| JPH064768B2 (ja) | 1994-01-19 |
| AP9000195A0 (en) | 1990-07-31 |
| AU630582B2 (en) | 1992-10-29 |
| KR910003377A (ko) | 1991-02-27 |
| CA2015325A1 (en) | 1991-01-29 |
| DK0410806T3 (da) | 1994-03-07 |
| AU5471490A (en) | 1991-01-31 |
| NO902236L (no) | 1991-01-29 |
| JPH0366763A (ja) | 1991-03-22 |
| CA2015325C (en) | 1995-07-11 |
| US4937198A (en) | 1990-06-26 |
| KR930008197B1 (ko) | 1993-08-26 |
| NO173096B (no) | 1993-07-19 |
| EP0410806A1 (en) | 1991-01-30 |
| AP165A (en) | 1992-01-12 |
| NO173096C (no) | 1993-10-27 |
| PH26501A (en) | 1992-08-07 |
| NZ233389A (en) | 1992-04-28 |
| OA09220A (en) | 1992-06-30 |
| IE66053B1 (en) | 1995-12-13 |
| FI903773A0 (fi) | 1990-07-27 |
| DE69006417D1 (de) | 1994-03-17 |
| DE69006417T2 (de) | 1994-06-01 |
| FI95032B (fi) | 1995-08-31 |
| ZA903477B (en) | 1991-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI95032C (fi) | Uusi fluoresoiva väriaine | |
| US9315465B2 (en) | Photostable AIE luminogens for specific mitochondrial imaging and its method of manufacturing thereof | |
| JP4831914B2 (ja) | 未成熟赤血球細胞における核酸の検出用色素及び方法 | |
| CA2382593C (en) | Red-emitting [8,9]benzophenoxazine nucleic acid dyes and methods for their use | |
| EP2778161B1 (en) | Two-photon fluorescent probe using naphthalene as matrix and preparation method and use thereof | |
| US7709653B2 (en) | Asymmetric cyanine compounds, their preparation methods and their uses | |
| WO2016165487A1 (en) | Real-time monitoring mitophagy process by fluorescent photostable mitochondrial specific bioprobe with aie characteristics | |
| CN110143966B (zh) | 一种螺吡喃-萘酰亚胺衍生物及其合成方法和应用 | |
| CN102382641A (zh) | 检测次氯酸的荧光探针及其制备方法 | |
| Zhang et al. | Synthesis, spectral properties of cell-permeant dimethine cyanine dyes and their application as fluorescent probes in living cell imaging and flow cytometry | |
| CN113336723A (zh) | 一类花菁荧光探针、其制备方法及应用 | |
| EP1885718B1 (en) | Fluorescent chemical compounds having high selectivity for double stranded dna, and methods for their use | |
| WO2022027174A1 (zh) | 一种细胞核荧光染料及其染色方法 | |
| CN110487761B (zh) | 检测汞离子的荧光探针及其制备方法与使用方法 | |
| Diana et al. | Benzodifuran-based fluorescent brighteners: A novel platform for plant cell wall imaging | |
| US4820637A (en) | Detection of fungi and/or algae with stilbene having at least 4 sulpho groups | |
| CN102766346B (zh) | 一种菁类荧光染料 | |
| CN114671893B (zh) | 一种基于开-闭环的铁离子探针及其合成方法 | |
| EP2367805B1 (en) | Modified actinomycin-based nucleic acid stains and methods of their use | |
| JP2001056327A (ja) | アクリジン誘導体を用いた微量水分の検出、定量方法 | |
| CN109030156B (zh) | 一种流式分析用染色液 | |
| CN108164509B (zh) | 一种多模式分子探针 | |
| CN120097975A (zh) | 一种新型菁近红外荧光染料及其制备方法和应用 | |
| Leif et al. | OE/LASE ‘94, Biomedical Optics Ultrasensitive Clinical Laboratory Diagnostics,[2136-28], Los Angeles CA, 26 Jan. 1994 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BECTON, DICKINSON AND COMPANY |