FI94488B - Menetelmä rokotteen, joka suojaa kissoja kissojen tarttuvalta peritoniitilta, valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä rokotteen, joka suojaa kissoja kissojen tarttuvalta peritoniitilta, valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI94488B FI94488B FI884521A FI884521A FI94488B FI 94488 B FI94488 B FI 94488B FI 884521 A FI884521 A FI 884521A FI 884521 A FI884521 A FI 884521A FI 94488 B FI94488 B FI 94488B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- virus
- fip
- cats
- vaccinated
- vaccination
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/23—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
94488
Menetelmä rokotteen, joka suojaa kissoja kissojen tarttuvalta peritoniitilta, valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää, jonka avulla voidaan valmistaa rokotetta, jota voidaan käyttää kissojen immunisointiin kissojen tarttuvaa peritoniitti (FIP) -virusta vastaan. Tarkemmin sanottuna se koskee menetelmlää heikennetyn, lämpöherkän rokotetteen, joka suojaa tehokkaasti kissoja FIP:Itä, valmistamiseksi.
Kissojen tarttuva peritoniitti (FIP) on sekä koti- että villikissojen sairaus. Virus iskee eläimen useimpiin sisäelimiin ja on lähes aina tappava. Virus on erittäin tarttuva sekä kissanpentuihin että täyskasvuisiin kissoihin.
FIP-virus on identifioitu koronavirukseksi, Horzinek ja Os-terhaus, Arch. Virol. 59.:1 (1979). FIP-virus on sukua tarttuvalle sikojen gastroenteriittivirukselle (TGEV), koirien lavantautikoronavirukselle ja ihmisen hengityselinten ko- • · ronavirukselle. On olemassa myös kissojen lavantautikorona-virus (FECV), joka replikoituu pääasiassa suolistossa ja aiheuttaa vain lievän ripulitaudin. Lutz et ai., J. Small Animal Pract. 27:108 (1986).
V Vaikka on tunnettua, että koronavirus aiheuttaa FIP:n, ovat tapa, jolla infektio leviää kissojen joukossa, ja taudin synty vielä heikosti ymmärrettyjä. Sairauden patogeneesi on hyvin kompleksinen ja tutkimukset osoittavat, että isäntä-eläin, virus ja ympäristötekijät vaikuttavat osaltaan sairauden muotoon ja sen kehittymiseen. Pedersen et ai., 34. Annual Symposium, Viral Diseases of Small Animals 2:1001 (1985).
FIP voi esiintyä kahdessa eri muodossa: märkä eli vuotava muoto, jolle on ominaista fibriininen vatsakalvontulehdus-neste, ja kuiva eli peruskudoksinen muoto, jolle on ominaista eri elinten granulomaattinen tulehdus ja vähän tai ei ollenkaan tulehdusnestettä. Lutz et ai., edellä.
2 . 94488
Koska on olemassa muita kissojen koronavirusinfektioita, esimerkiksi FECV, jotka ovat antigeenisesti sukua FIP-viruk-selle, on FIP:n patogeneesi ollut vaikea karakterisoida. Tämän vuoksi on sairauden diagnoosia varten tehdyistä serologisista testeistä puuttunut spesifisyyttä ja ne ovat hämmentäneet aikaisempien tutkimusten tulkintaa. Pederson, Feline Practice 13: 13 (1983).
Tähän asti on suojaava aktiivinen immunointi FIP:ä vastaan ollut mahdotonta. Päinvastoin ovat rokotetut kissat olleet vastaanottavaisempia sairaudelle. Pedersen et ai., Am. J. Vet. Res. 44:229 (1983); Weiss et ai., Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis. 4:175 (1981); Weiss et ai., Am. J. Vet. Res. 41:663 (1980).
Kissat saavat tartunnan oronasaalista tietä. FIP-virus lisääntyy epiteelisoluissa ylemmällä hengityselinten alueella ja suolistossa. Kliinisesti näkyvä FIP tulee esiin sen jälkeen, kun virus lävistää limakalvoesteen ja aiheuttaa immuu-nivälitteisen sairauden. Lutz et ai., edellä; Weiss et ai., Am. J. Vet. Res. 42:382 (1981).
Nenän limakalvon immuunivasteen stimulointi saadaan aikaan parhaiten antamalla intranasaalisesti rokotetta. Bienenstock et ai., Immunology 4.1:249 (1980); Murray, The Veterinary Re-cord, 10. marraskuuta: 500 (1973).
Limakalvon B-lymfosyytit, jotka on stimuloitu erittämään anti-FIP-viruksen IgA-vasta-ainetta, valuvat myös suolen limakalvoon ja aikaansaavat myös paikallista suolen im-muunisuutta. Murray, edellä.
Keksinnön eräs suoritusmuoto on menetelmä oraalisesti tai intranasaalisesti annettavan FIP-rokotteen valmistamiseksi, joka pystyy indusoimaan immuunisuuden FIP-virusinfektiota vastaan kissoissa ilman vakavia sivuvaikutuksia. Menetelmän avulla valmistettava rokote käsittää vaikuttavan määrän läm-pöherkkää (ts) FIP-virusta.
3 94488
Keksinnön toisessa suoritusmuodossa tehdään selkoa menetelmästä, jonka avulla voidaan valmistaa rokotetta FIP-virusta vastaan heikentämällä FIP-virus hyvin useilla käynneillä sopivissa soluissa; antamalla mutageenisen aineen vaikuttaa heikennettyyn FIP-virukseen; viljelemällä heikennettyä FIP-virus ta, joka mutageenisen aineen vaikutuksen jälkeen on nyt lämpöherkkä; ja ottamalla talteen heikennetty ts-FIP-virus.
Tehokkaan FIP-rokotteen tulisi stimuloida voimakas limakalvon immuunivaste estämään infektion pääsy limakalvoesteen läpi ja soluvälitteinen immuunivaste (CMI), joka välittömästi pysäyttää viruksen leviämisen, jos se läpäisee limakalvon. Keksinnön mukaisen menetelmän avulla saatu lämpöherkkä FIP-virus (ts-FIP-virus) voidaan antaa intranasaalisesti tai oraalisesti. Keksinnön parhaana pidetyssä suoritusmuodossa ts-FIP-virus annetaan intranasaalisesti. Kun se annetaan intranasaalisesti, niin ts-FIP-virus, joka kykenee kasvamaan nasofarynx-alueella vallitsevissa lämpötiloissa, lisääntyy helposti ja stimuloi CMI-vasteen ja paikallisen immuunivas-.· teen. Lisäksi ts-FIP-virus stimuloi CMI-vasteen FIP-viruk-selle testauksen jälkeen, jota ei ole löydetty kissoissa, jotka on rokotettu systeemisesti tai kissoissa, jotka ovat saaneet tartunnan virulenteista FIP-viruksista.
Tämän keksinnön mukaisen rokotteen valmistukseen käytettyä FIP-virusta eristetään virusinfektion saaneiden eläinten elimistä tai kudoksista, mieluimmin maksasta. Elimet tai kudokset jauhetaan ja niitä annetaan oraalisesti koe-eläi-mille, mieluimmin spesifisesti patogeenivapaille kissoille (SPF) .
Useiden in vivo käyntien jälkeen tartunnan saaneissa elimissä, mieluimmin viiden in vivo käynnin jälkeen tartunnan saaneissa pernoissa tai maksoissa, FIP-virus eristetään. FIP-virus eristetään infektoituneista elimistä tekniikasta tunnettujen standardimenetelmien avulla ja viljellään yhdessä kissan solujen kanssa. FIP-virus kasvaa helposti kissan solujen kanssa, . 94488 4 jotka ovat mistä tahansa lähteestä, esimerkiksi pernasta, suoliliepeen lymfaeolmusta, endoteelisoluista tai embryon so-luvi1jelyietä, kuten on esitetty US-patenteissa 4 303 644 ja 4 571 386. Keksinnön parhaana pidetyssä suoritusmuodossa FIP-virus eristetään sairaan kudoksen soluista ja viljellään yhdessä kissan munuaissolujen kanssa.
Sairaista kudoksista uutettu virus viljellään yhdessä kissan solujen kanssa, jotta virus sopeutuisi lisääntymään in vitro.
In vitro lisääntymisen näkyvänä todisteena on monitumaisten syncytiumsolujen muodostuminen yhdessä muiden koronaviruksil-le tyypillisten tunnettujen sytopaattisten vaikutusten ("cpe") kanssa. Viruksen käyntejä jatketaan, kunnes se heikkenee ja sen jälkeen saadaan aikaan sen mutaatio, jolloin siitä tulee lämpöherkkä. Heikennetty tarkoittaa tekniikassa virusta, jota on muunneltu siten, että se ei enää pysty aiheuttamaan sairautta. Lopuksi heikennettyä, lämpöherkkää virusta annetaan kissoille joko oraalista tai intranasaalista tietä.
Parhaana pidetyssä suoritusmuodossa FIP heikennetään runsaiden, esimerkiksi ainakin 60 käynnin avulla, mieluimmin 95-100 käynnin avulla kissan munuaissoluissa. Lämpöherkän FIP-virukeen kehittämiseksi tasamäärä vi1jelynestettä, jolla on korkea käyntiluku, saatetaan mutageenisen aineen vaikutuksen alaiseksi, esimerkiksi kemiallisen aineen tai säteilytyksen, mieluimmin ultraviolettisäteilytyksen vaikutuksen alaiseksi, o kunnes viruksen tiitteri 1isäännyttyään noin 31 C:ssa on aina-‘ 5 kin 1 xo10 TCIDjjq, mieluimmin noin 1 x 10 TCID^q suurempi kuin 39 C:ssa. (TCID^q on kudosviljelyssä infektion aiheuttava annos, joka saa aikaan sytopaattisen vaikutuksen 50 %:ssa . viruksen vaikutuksen alaisiksi joutuneista viljellyistä so luista . )
Viruksen optimaalisen elinvoimaisuuden saamista varten virusnesteet kootaan joka viides minuutti ia varastoidaan o 0-7 -70 C: sea. Kymmenkertaiset sarjalaimennukset (10 -10 ) kus- il · - Mife Mfc l i ; . , - 94488 5 takin 5 minuutin näytteestä testataan viruksen elinvoimaisuuden suhteen toisiinsa yhtyviin kissan munuaissolujen yksiker- roelevyihin. Optimaalinen näyte, mieluimmin 5 minuutin näyte, o valitaan ja sitä lieäännytetään 31 C:ssa useilla eri laimennuksilla. Kootaan virusnesteet kuoppalevyistä, jotka sisältävät yksinkertaisia plakkeja.
Taulukko 1 osoittaa uitraviolettisäteilytyksen vaikutuksen o
FlP-viruksen virulenttiin kantaan (DF2-FIP-virus) 31 C:ssa.
FIP muuttui täysin inaktiiviseksi, kun se oli ollut ultraviolettivalossa 10 minuuttia.
Taulukko 1 UV-säteilytysajän vaikutus viruksen tiitteriin Viruksen infektoimien kuoppien lukumäärä/laimennus TCIDcn- 0 -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 00 Näyte 10 10 10 10 10 10 10 10 tiitteri
Ennen __ a 6,67 UV: ä 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 1/4 ?-10 —· 133 5 min 4/4 3/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 10 10 min 0/4 0/4 0/4 0/4 0 15 min 0/4 0/4 0/4 0/4 0 a FIPV-infektoituneiden kuoppien lukumäärä/kuoppien kokonaislukumäärä - ,* FlP-virusnesteet laimennuksella 1:16, joille annettiin ultra- violettisäteilytystä 5 min ajan, sisälsivät virueplakkeja. Yksittäisten plakkien annetaan lisääntyä suurimmassa osassa kuoppia.
6 94488
Yksittäisiä plakkeja titrataan erikseen kymmenkertaisella lai--3-8 o o mennuksella <10 -10 ) 24 kuoppalevyssä 31 C:ssa, 37 C ja o 39 C:ssa (taulukko 2).
Taulukko 2 o UV-eäteilytettyjen virusplakkien titraaminen 31 C:ssa, o o 37 C:ssa ja 39 C:ssa
Plakin Lämpö- Viruksen infektoimien kuoppien no tila lukumäärä/laimennus TCIDcn" o -3 -4 -5 -6 -7 -8 50 C 10 10 10 10 10 10 tiitteri 1 31 4/4 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4 7,00 37 4/4 4/4 4/4 4/4 0/4 0/4 6,50 39 4/4 4/4 4/4 2/4 1/4 0/4 6,23 2 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 0/4 7,50 37 4/4 4/4 4/4 4/4 3/4 0/4 7,33 39 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4 0/4 6,00 3 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 1/4 7,67 37 4/4 4/4 4/4 4/4 1/4 1/4 6,88 39 4/4 4/4 4/4 3/4 0/4 0/4 6,33 4 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 0/4 7,50 37 4/4 4/4 4/4 3/4 1/4 0/4 6,50 a b 39 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 £3,50 a
Neljässä kuoppalevyn kuopassa näkyi arpia tai merkkejä aikaisemmasta parantuneesta infektiosta.
b
Kolmessa kuoppalevyn kuopassa näkyi arpia tai merkkejä aikaisemmasta parantuneesta infektiosta.
7 94488
Viruksen lisääntymisen optimiolosuhteet perustuvat sen kykyyn o lisääntyä sallituissa lämpötiloissa. 39 C:ssa TCIDgg on ainakin noin 1 x 10 yksikköä alhaisempi kuin TCID50 31 C:ssa ja se on mieluimmin ainakin noin 1 x 10 yksikköä alhaisempi.
Taulukko 3 Lämpöherkän plakista eristetyn FIPV:n lisääntymisen vertailu o o 5 in vitro -käyntikerran suhteen lämpötiloissa 31 C ja 39 C.
Käynti- Lämpö- Viruksen infektoimien kuoppien kerta tila lukumäärä/laimennus TCIDcn* o -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 50 C 10 10 10 10 10 10 10 10 tiitteri a 1 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 3/4 0/4 0/4 6,33 39 4/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 1,50 2 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 1/4 0/4 0/4 5,67 39 4/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 1,50 3 31 4/4 4/4 4/4 4/4 3/4 1/4 0/4 0/4 5,50 39 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 ^1,50 4 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 1/4 0/4 0/4 5,67 39 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 £1,50 5 31 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 2/4 0/4 0/4 6,00 39 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 £1,50 a • # FIPV:n infektoimien kuoppien lukumäärä/kuoppien kokonaislu kumäärä * e - 94488
Esillä olevan keksinnön mukaista heikennettyä lämpöherkkää FlP-virusta voidaan antaa kissoille suojaamaan eläimiä FIP-virukselta. Valitaan annostus, joka on turvallinen, so. ei aiheuta vakavia sivuvaikutuksia ja on tehokas, so. aikaansaa suojaavan solu- ja paikallisen immuunivasteen sen antamisen jälkeen.
FIP-rokotetta voidaan antaa intranasaa1ieesti tai oraalisesti. Parhaana pidetty antomuoto on intranasaalisesti ja tyypillinen annos on 10 -10 TCID^q 0,5-1,5 ml:n tilavuudessa,
Annos voidaan antaa yhtenä annoksena tai useampana laimennet- 5,5 tuna annoksena jonkin ajanjakson kuluessa. Yksittäinen 10 TCID5Q-virusannos 0,5 ml:ssa kantajaa on parhaana pidetty ja puolet siitä eli 0,25 ml esimerkiksi spray-pul1osta tai ko-koonpuristettavasta pullosta tai tiputuslaitteesta annetaan kumpaankin eläimen sieraimeen. Koetulokset osoittavat, että tehokas rokoteannos voidaan antaa yhtenä annoksena, mutta kahta annosta pidetään parempana.
FIP-rokote voidaan antaa suoraan, so. virus kasvatetaan solu-viljelynesteeesä ja vi1jelynestettä käytetään sitten kantajana rokotetta annettaessa. Viljelyneste voidaan laimentaa tai konsentroida standarditekniikkaa käyttäen halutun konsentraa-tion saamiseksi heikennetylle ts-FIP-virukselle. Vaihtoehtoisesti voidaan saada aikaan farmaseuttisesti sopiva ts-FIP-valmiste uuttamalla heikennetty lämpöherkkä virus soluvilje-lystä esimerkiksi sakkaroosin tiheyssentrifugointi-erotus-tekniikan avulla ja sekoittamalla sopivaan kantajaan esimerkiksi veteen, suolaliuokseen, koleratoksoidiin tai ovalbu-miiniin tai lisäaineeseen, kuten esimerkiksi Quil A:han, al-hydrogeeliin tai ö1jyemulsioon.
Parhaana pidetyssä suoritusmuodossa virus annetaan viljely-nesteessä ja valmistetaan taeamääriä yksittäisannosmääristä.
Il IBII lii» ί:ΙΙι« i 94488
Ei-virulentti te-FIP-virus voidaan myös lyofilisoida ykeit-täisannosmäärissä ja varastoida käyttöön asti. Kun rokote varastoidaan lyofi1isoituna jauheena, se rekonstituoidaan ennen antamista veteen, suolaliuokseen, viljelynesteeseen tai muihin sopiviin kantajiin, joita voidaan antaa suoraan intrana-saalisesti kissoille.
Vasta-ainevasteen mittaukset suoritetaan standardimenetelmien avulla, joita ovat entsyymisidos-immunosorbenttikoe (ELISA) ja seerumin virusneutralointi<VN)-koe ja ne suoritetaan yksittäisten eläinten verinäytteistä. Mittaukset tehdään optimaalisesti näytteistä rokottamisen ja testauksen jälkeen.
Lymfosyyttiblastogeneesi-menetelmää, josta on tehnyt selkoa Pedersen et ai., The Compendium on Continuing Education 7_: 1001 (1985), käytetään osoittamaan soluvälitteinen (lymfosyytti) vaste rokottamisen ja testauksen jälkeen.
Tämän keksinnön aspektina on vielä yhdistelmärokotteiden valmistus ja käyttö, jotka muodostuvat rokotemääristä ts-FIP-virusta ja yhdestä tai useammasta tunnetusta kissan viruksesta. Esimerkiksi voidaan valmistaa yhdistelmärokotteita oraalisesti tai intranasaalisesti annettaviksi, jotka sisältävät ts-FIP-viruskomponentin ja yhtä tai useampaa kissan virusta, joiden tiedetään olevan hengityselinten infektioiden aiheut-tajia, esimerkiksi kalicivirus, kissan herpes(rhinotrachei-tis)virus.
Myös muita yhdistelmärokotteita, jotka pystyvät indusoimaan immuunisuuden kissoissa FlP-viruksen ja yhden tai useamman muun patogeenisen organismin tai virusten aiheuttaman infek-• , tion suhteen voidaan valmistaa käyttämällä ts-FIP-viruskompo- nenttia ja muita viruskomponentteja, jotka eivät liity hengityselinten infektioihin, tai patogeenisiä organismeja, esimerkiksi kissan panieukopenia, klamydia, kissan leukemia.
,0 94488
Voidaan valmistaa myöe alayksikkörokotteitta. ts-FIP-virue voidaan yhdistää tapettujen tai heikennettyjen patogeenien alayksikön kanssa kuten kissan panleukopeniavirus-, kalici-virus-, kissan herpesvirus- tai muun sellaisen alayksikkö-komponentin kanssa parenteraalisesti tai intranasaa1isesti annettavaksi. ts-FIP-virus voidaan yhdistää myös kissan leu-kemiavirusrokotteen kanssa parenteraalisesti annettavaksi.
Tällaisten yhdistelmärokotteiden valmistus ja käyttö tapahtuvat edellä selostettujen menetelmien mukaisesti tai rokotteiden valmistus- ja käyttötekniikan asiantuntijoiden tietämien menetelmien mukaisesti.
Seuraavat esimerkit ovat asiaa valaisevia eivätkä rajoita keksintöä.
Esimerkki 1: Tehokkuustesti 1 Käytettiin neljäätoista SPF koiraskissaa <26 kk ikäisiä) Liberty Labsista (Liberty, New Jersey) ensimmäisessä rokotus-testauskokeessa. Rokotettuja kissoja pidettiin yhdessä eristetyssä huoneessa, ei-rokotettuja toisessa.
Kymmenen kissaa rokotettiin 3 kertaa intranasaalisesti (IN) 3 viikon välein ts-FIP-viruksen avulla. Viisi kissaa rokotet- 5,5 o tiin te-FIP-virustiitterillä 10 TCIDcn/ml 31 C:sea ja vii- 3,5 DU o ei kissaa virustiitterillä 10 TCID50/ml 31 C:ssa. Kymmentä rokotettua ja neljää vertailukiseaa testattiin oraalisesti käyttäen 1 ml laimennuksella 1:600 virulenttia FIP-virusta 2,68 (FIP-virus-DF2, 10 käyntikertaa, testaustiitteri = 10 TCIDgQ/ml) kaksi viikkoa myöhemmin.
Serologinen IgG-vaste FIP-virukse1le määrättiin ELISAn avulla, Osterhaus et ai.. Veterinary Quarterly 1.:59 (1979). VN-tiitterit (Pedersen et ai., Am. J. Vet . Res . 4j|:229 ( 1983) määrättiin myös.
11 94488 te-FIP-virukse1la rokotettujen IgG-ELISA-tiitterit on esitetty taulukossa 4. Rokotettujen kissojen tiitterit ennen rokotusta otettiin sinä päivänä, kun ne siirrettiin eristetyistä häkeistä. Vertailukissojen ennen rokotusta otetut ELISA-tiit-terit otettiin 15 päivää sen jälkeen, kun ne siirrettiin pois eristyehäkeietä. Vertailukissojen IgG-vaste FIP-virukselle johtuu vasta-aineista ristiin reagoivalle kissan lavantauti-koronavirukselle <FECV), joka oli kokeissa käytetylle SPF-kissakolonialle ominainen tauti. Rokotettujen kissojen IgG-vaste johtuu siis sekä FECVtstä että rokoteviruksesta.
Virusta neutraloivat tiitterit, jotka olivat päin vastoin kuin IgG-ELISA-tiitterit negatiivisia ennen rokottamista (taulukko 5) kasvoivat jokaisen rokotuksen jälkeen. Seerumia ei koottu testaamisen jälkeen vasta-aineiden titraamiseen. Rokotettujen ja vertailukissojen saattaminen etukäteen FECV:n vaikutuksen alaisiksi vaikutti vain vähän tai ei laisinkaan testaamiseen, koska molemmat ryhmät olivat kehittäneet ristiin reagoivan vasta-ainevasteen FIP-virukselle. Kolme neljästä ei-rokotetusta vertailukissasta kehitti FIP:ä ja kuoli. Neljäs kissa, LK2, sai kliinisen arvosanan 13 (mitä korkeampi luku, sitä vakavampi symptomi, ja kuolema luokiteltiin numerolla 50), kolme kertaa niin korkean kuin yksikään yhdeksästä suojarokotetusta.
Esimerkki 2: Tehokkuustesti 2 Käytettiin kaksitoista koronavirus-negatiivista SPF-koiras-kissaa (12 kk ikäisiä) Liberty Labsista toisessa rokotus-testauskokeessa. Kaikki kissat oli pantu eristyshäkkeihin (kolme kissaa per häkki).
Kuusi kissaa rokotettiin kolme kertaa IN kolmen viikon välein ts-FIP-viruksella. Kolme kissaa rokotettiin kaksi kertaa ts- FIP-virukse1la IN ja kerran oraalisesti, ts-FIP-virustiitteri 5,5 oli 10 TCIDgQ/ml. Kolme ei-rokotettua vertailukissaa pidettiin häkissä erillään rokotetuista.
,2 . 94488
Yhdeksän rokotettua ja kolme vertailukiseaa testattiin oraalisesti käyttäen 1 ml laimennuksella 1:600 virulenttia FIP-virusta (FIP-virue-DF2, 10 käyntikertaa, testaustiitteri = 10 ' TCI Dg o/ml) .
Taulukossa 6 on esitetty ELISAn avulla rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin IgG anti-FIP-viruksen vasta-ainevaste. IgG-vasta-ainetiitterin suurin kasvu nähtiin ensimmäisen ja toisen rokotuksen jälkeen. Tiitterin kasvua ei ilmennyt niissä kissoissa, jotka rokotettiin IN kolmannen kerran, mikä vahvisti sen että yksi tai korkeintaan kaksi annosta riittää tuomaan suojauksen. IgG-vasta-ainetiitterit kohosivat jyrkästi testaamisen jälkeen. Virusta neutraloivat vaeta-ainetiitterit kohosivat kunkin kolmen rokotuksen ja testaamisen jälkeen.
Kaksi kolmesta ei-rokotetusta vertailukissasta kehitti FIP:ä ja kuoli. Kaikki rokotetut kissat jäivät eloon. Kahdella rokotetulla kissalla, SN1 ja SY1 oli tilapäinen veridyskrasia, etupäässä ns. Doehle Bodies, alhaiseksi puristunut solun tilavuus ja kohonnut ruumiinlämpö. Niissä ei kuitenkaan ollut mitään merkkiä ikteruksesta, mikä on hyvä lähestyvän kuoleman ilmaisija.
Esimerkki 3: Tehokkuustesti 3 Käytettiin kahdeksaatoista koronavirus-negatiivista SPF-koiraskissaa <12 kuukauden ikäisiä) Liberty Labsieta. Kaikki kissat pantiin eristyshäkkeihin (kaksi kissaa per häkki).
Kuusi kissaa rokotettiin kahdesti IN kolmen viikon välein ts- FIP-viruksella. Kuusi kissaa rokotettiin kerran IN. ts-FIP- 5,5 virustiitteri oli 10 TCID^Q/ml. Vielä kuusi kissaa rokotettiin subkutaaniseeti ts-FIP-virukse1la, jossa oli apuna <SC) Concanavalin A (Con A) ja pidettiin eristyshäkeissä erillään IN rokotetuista. Kuusi ei-rokotettua vertailukiseaa pidettiin häkeissä erillään rokotetuista.
,3 94488
Kaksitoista rokotettua ja kuusi vertailukiesaa testattiin oraalisesti kolme viikkoa myöhemmin käyttäen i ml l:600-lai- mennuksella virulenttia FIP-virusta <FIP-virus-DF2, 10 käynti- 2,61 kertaa, testaustiitteri = 10 TCIDgg/ml).
Taulukossa 8 ovat IN ja subkutaanisesti ts-FIP-viruksella rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen ELISA-IgG-tiitterit. Kissoilla, jotka oli rokotettu kahdesti IN ja jopa kerran IN, oli korkeammat keskimääräiset tiitterit kuin kissoilla, jotka oli rokotettu SC-testauksen aikoihin. Kissoilla, jotka saivat kaksi IN-annosta ts-FIP-virusrokotetta oli myös korkeammat VN-tiitterit kuin kissoilla, jotka saivat yhden ainoan IN-annoksen ennen testaamista (taulukko 9). Vieläpä yksi annos ts-FIP-virusta annettuna IN stimuloi korkeammat VN-tiitterit kuin kaksi annosta annettuna SC.
Viiden kissan kuudesta, jotka oli rokotettu kahdesti IN, peri-feriset veren lymfosyytit reagoivat FlP-virukselle lymfosyyt-tiblastogeneesitestissä ennen testaamista. Kolme kissaa, jotka oli rokotettu kerran IN ja ainoastaan yksi kissa, joka oli rokotettu kahdesti subkutaanisesti, esittivät samanlaisen vasteen.
Kaksi viidestä, 2 annosta IN-rokotetta saanutta, jotka esittivät lymfosyyttiblastogeneesivasteen ennen testaamista sekä yksi 2 annosta rokotetta IN saanut, jolla ei esiintynyt vastetta, esittivät voimakkaan blastogeneesivasteen testaamisen jälkeen. Ainoastaan yhden kissan lymfosyytit, joka oli rokotettu kerran IN, mutta ei yhdenkään kissan lymfosyytit, jotka oli rokotettu kahdesti SC, esittivät vasteen FIP-virukselle testaamisen jälkeen.
Kaikki kuusi kissaa, jotka oli rokotettu kahdesti IN, olivat hyvin suojattuja FIP-virustestauksen suhteen. Yhdellä kuudesta kissasta (UX6), jotka oli rokotettu kerran IN, oli veren 14 94488 dyskraeia, joka ilmaisee FIP:n, mutta jäi eloon. Päinvastoin kaksi neljästä ei-rokotetusta kissasta ja viisi kuudesta sub-kutaaniseeti rokotetusta kissasta kehitti FIP:ä ja kuoli. Toisella kahdesta eloon jääneestä vertailukissasta CHI2) oli veren dyskraeia, joka viittasi FIPthen. Useimmat subkutaanises-ti rokotetut kissat kehittivät FIP:ä nopeammin kuin ei-rokotetut kissat.
Esimerkki 4: Yhdistelmärokotteen valmistaminen
Yhdistelmärokotetta, joka sisältää ts-FIP-viruksen yhdistettynä kaliciviruksen ja kissan herpesviruksen (rhinotracheitis) kanssa intranasaalisesti annettavaksi, voidaan valmistaa. Yhdistelmärokote voidaan kokoonpanna seuraavasti: 7,2 0,5 ml kissan herpesvirusta (TCIDgg =10 ) 7,9 0,50 ml kalicivirusta (TCID gg = 10 ) 5,5 0,5 ml ts-FIP-virusta (TCIDgg =10 ) 0,8 ml stabiloivaa ainetta <NZ-amiini, gelatiini tai sakkaroosi)
Yhdistelmärokote voidaan lyofilisoida laivausta ja varastointia varten. Ennen käyttämistä yhdistelmärokotteeseen liitetään uudelleen vettä 1,0 mitään asti esimerkiksi vettä, suolaliuosta tai muuta sopivaa laimennusainetta oraalista tai intrana-saalista antamista varten.
Esimerkki 5: Alavksikkörokotteen valmistaminen Immunogeeninen ts-FIP-viruksen alayksikkö voidaan yhdistää kissan panleukopeniavirus-, kalicivirus-, kissan herpesvirus-, kissan leukemiavirus- ja klamydiarokotteen kokovirus-tai alaykeikkökomponenttiin ja antaa parenteraalisesti tai intranasaalisesti. Tämän tyyppinen alayksikkö-yhdistelmärokote voidaan kokoonpanna seuraavasti: 94488 5,5 0,2 ml te-FIP-virueta (TCIDgg = 10 > f $ L· 0,5 ml kissan herpesvirusta (TCIDgg = 10 ) 0,25 ml kissan panleukopeniavirueta <TCID5q = 10 ) 7 ; y 0,25 ml kalicivirueta (TCIDgg = 10 ) 0,5 ml kissan leukemiavirusta <500-3000 ,ug gp 70 proteiinia 6,5 0,25 ml klamydiaa (TCIDgg = 10 )
Eri kissan virusten konsentraatio on se määrä, jonka tiedetään aikaansaavan tehokkaan immuunivasteen. Konsentroitu virus valmistetaan mieluimmin edellä suositelluissa tilavuuksissa, jotta komponentit saadaan pienessä tilavuudessa, joka soveltuu annettavaksi.
Esimerkki 6: Kaksikomponenttinen alavksikkörokote Kaksikomponenttinen alayksikkörokote parenteraalista antoa varten voidaan valmistaa käyttäen ts-FIP-viruksen immunogee-nistä alayksikköä yhdistettynä immunogeenisen kissan leuke-miavirusrokotteen kanssa. Alayksikkö-yhdistelmärokote voidaan kokoonpanna seuraavalla tavalla: 5,5 0,4 ml (TCIDgg =10* > ts-FIP-virusta 0,4 ml (25-1000 /ug> kissan leukemiavirus-alayksikköä . 0,2 ml apuainetta <aluminiumhydroksidia, saponiinia)
Esimerkki 7: Rokotteiden antaminen kahteen kohtaan ts-FIP-virusrokotetta voidaan antaa intranasaalisesti <0,5 ml per sierain) samanaikaisesti kuin annetaan parenteraa1isesti kalicivirus-, kissan herpesvirus-, kissan panleukopeniavi-rus-, kissan leukemiavirus- ja klamydia-<kissan pneumonitis) yhdistelmärokotetta. Eri komponenttien konsentraatiot voisivat olla kuten on selostettu esimerkissä 4, mutta ts-FIP tulisi antaa intranasaalisesti erillään muista viruskomponen-teieta.
Taulukko ^ 16 94488 te-FIP-viruksella rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin IgG-anti-FIP-virus-vasta-ainevasteet tehokkuustes-tissä 1.
ELISA-tiitteri viikkoa rokottamisen jälkeen_
Kissan Rokotteen abc n<2_t liiteri_0__3_g_8 5,5 d,e KU4 10 TCID50/ml >1,50 >1,50 1,260 >1,50 6 KV4 0,145 0,748 0,806 1,183 e LZ4 0,080 0,590 0,719 1,201 e MJ5 0,040 0,557 0,747 1,075 e MM5___0.070_0.449 0.787_1,015
Aritmeettinen keskiarvo 0.367_0.769_0.864_1.195 3 5 e KT4 10 ' TCID50/ml 0,074 0,602 0,787 1,420 KU2 0,129 0,439 0,650 1,179 e LC5 0,095 0,505 0,788 0,914 e LR7 0,364 0,698 0,676 1,024 e MG 2_0 095_0.676 0.845_1.298
Aritmeettinen keskiarvo 0.151_0,584_0.749_1.167 f KT3 Ei mitään 0,483f 0,881 0,823 1,031 KV2 0,392f 0,715 0,827 1,202 LD4 0,348f 0,702 0,842 0,973 LK2_0 499_0.724 0.903_0.925
Aritmeettinen keskiarvo 0,430 0,755 0,849 1,033 a
Ensimmäinen rokotus b
Toinen rokotus c
Kolmas rokotus d
Absorboitumisarvot mitattu aallonpituudella 405 nm.
Arvot ^1300 ovat positiivisia e
Seerumi koottu ensimmäisenä rokotuspäivänä f
Seerumi koottu 15 päivän kuluttua ensimmäisestä rokotuksesta * 94488
Taulukko 5 ts-FIP-viruksella rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin viruksen neutraloinnin anti-FIP-viruksen vasta-aine-tiitterit tehokkuustestissä 1
Vastaava viruksen neutralointi-tiitteri viikkoa rokotuksen jälkeen
Kissan Rokotteen abc no_t i itter i_0_3_6_8 5.5 d
KU4 10 TCI Dg g /ml <2^ 64 192 NT
KV4 <2 24 128 512 LZ4 NT 16 128 256 d MJ5 <2 192 192 384 d MM5_<2_16_48_512
Geometrinen keskiarvo_<2_38_124_4 01 3.5 d KT4 10 TCIDg g/ml <2 96 192 384 KU2 <2 48 96 512
LC5 NT 96 384 NT
d LR7 <2 64 96 192 d MG 2_<2_9J>_256_768
Geometrinen keskiarvo_2_77__177_413 e KT3 0 <2 <C2 <2 <2 * · Θ * KV2 <2 <2 έ.2 <2 e LD4 <2 <2 ^~2 <2 e LK2_<2_<2_<2_<- 2
Geometrinen keskiarvo <2 ^2 ^ 2 <, 2 a
Ensimmäinen rokotus : b
Toinen rokotus c
Kolmas rokotus d
Seerumi otettu ensimmäisenä rokotuspäivänä e
Seerumi otettu 15 päivän kuluttua ensimmäisestä rokotuksesta ,p 94488
Taulukko 6 tβ-FIP-virukse1la rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin IgG-anti-FIP-viruksen vasta-ainevaste tehokkuustes-tiesä 2 .
ELISA-t i itteri viikkoa rokottamisen jälkeen_
Kissan IN—rokotus— a bed no_kertojen no_zl_3_3_3_12 18 e SD1 0,110 0,348 0,689 0,633 1,078 1,249 SL2 0,135 0,346 0,669 0,482 1,089 1,264 SN1 3 0,086 0,483 0,812 0,776 1,094 1,397 S02 0,196 0,321 0,573 0,620 1,095 1,094 ST2 0,164 0,268 0,609 0,532 1,275 1,229 SY3__ 0.147 0.532 1.013 0.768 1.232 1.424
Aritmeettinen keskiarvoO.140 0.383 0,726 0.635 1.144 1.273 RY5 0,106 0,383 0,740 0,725 0,987 1,003 S12 2 0,282 0,299 0,718 0,738 1,130 1,054 SY1__0.106 0.383 0.868 0.792 1.271 1.421
Aritmeettinen keskiarvoO.165 0.355 0.775 0.752 1.129 1.162 RZ3 0,123 0,052 0,063 0,073 0,589 Kuollut SH4 0 0,074 0,030 0,047 0,049 0,417 Kuollut . I SL5_0.155 0.051 0.074 0.040 0.291 0.609
Aritmeettinen keskiarvoO,117 0,044 0,061 0,054 0,432 0,609 a
Ensimmäinen rokotus b
Toinen rokotus c
Kolmas rokotus d
Testattu 4 viikkoa kolmannen rokotuksen jälkeen e
Absorboitumisarvot mitattuna aallonpituudella 405 mm. Ar-vot >300 ovat positiivisia.
Kolmannen kerran rokotettu oraalisesti.
Il iMik Uit il* ' < f
Taulukko 7 a 1a 94488 te-FIP-virukeella rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin viruksen neutralointi-anti-FIP-viruksen vasta-aineen tiitterit tehokkuustestissä 2
Vastaava viruksen neutralointi-tiitteri viikkoa rokotuksen jälkeen
Kissan IN-rokotusker- a bed no_to ien no_zl__3_6_9_12_18 SD1 1 0 64 384 NT 192 96 SL2 0 96 1024 240 7200 9600 SN1 0 48 256 360 4800 9600 S02 0 48 192 NT 900 192 ST2 0 192 768 120 NT 64 SYJ_0 48 768 360 7200 7200
Geometrinen keskiarvo_0_71 474 247 2122_960 e RY5 2 0 48 192 NT 192 600 S12 0 48 256 120 128 64 SY1_0 96 1024 360 900 9600
Geometrinen keskiarvo_0_60 369 208 281_717 RZ3 0 0080 900 Kuollut SH4 0 010 600 Kuollut ^ * SL5_0_0 10_2_3
Geometrinen keskiarvo 0 0 2 0 81 3 a
Ensimmäinen rokotus b
Toinen rokotus c
Kolmas rokotus ·· ; d : · Testattu 4 viikkoa kolmannen rokotuksen jälkeen e
Kolmannen kerran rokotettu oraalisesti 20 94488
Taulukko 8 ts-FIP-viruksella intranasaalisesti ja subkutaanisesti rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin IgG-anti-FIP-virukeen vasta-ainevaste tehokkuusteetissä 3
Kissan Rokotustie/ Viikkoa rokotuksen jälkeen_ _ ^ - no_rokotuksen no 0 3_8_11_M_16 cl SU4 IN/1 0,028 0,012 0,399 0,476 0,334 0,474 TR3 0,017 0,007 0,603 0,552 0,428 0,697 TT2 0,018 0,011 0,592 1,153 0,745 1,321 UN3 0,012 0,010 0,674 0,948 0,673 1,400 U04 0,064 0,021 0,329 0,414 0,397 0,269 UX6_0.035 0.020 0.683 1.116 0.856 1.475
Aritmeett.keskiarvo 0.029 0,014 0.547 0.776 0.574 0.939 0H2 IN/2 0,016 0,351 0,858 0,537 0,443 0,878 PQ4 0,104 0,095 0,578 0,682 0,610 0,704 QK4 0,013 0,191 0,660 0,502 0,498 0,727 UE1 0,029 0,223 0,881 1,193 0,885 1,543 US1 0,018 0,151 0,796 1,212 0,934 1,629 US2_0.016 0.176 0.773 0.731 0.514 0.866
Aritmeett.keskiarvo 0.033 0.198 0.758 0.809 0.647 1.061 QG2 SC/2 0,030 0,021 0,229 Kuollut Kuollut Kuollut QJ1 0,125 0,142 0,235 0,828 Kuollut Kuollut : I QY3 0,189 0,108 0,603 1,034 Kuollut Kuollut RG3 0,017 0,150 0,516 0,981 1,37 Kuollut TU4 0,031 0,042 0,235 0,495 0,135 0,121 UG1_0.018 0.243 0.507 1.388 Kuollut Kuollut
Aritmeett.keskiarvo 0.068 0.118 0.388 0.945 0.752 0.121 e HH5 vertailu NT 0,041 0,042 0,403 Kuollut Kuollut .·· HJ4 NT 0,015 0,062 0,561 NT 1,205 HG2 NT 0,030 0,059 0,744 0,743 Kuollut HI 2_NT_0.007 0.048 0.298 0.514 1.225
Aritmeett.keskiarvo 0,023 0,053 0,501 0,629 1,215 1 94488 a 2 annosta saavien kissojen ensimmäinen rokotus.
* b 2 annosta saavien kissojen toinen rokotus ja yhden annoksen saavien kissojen ensimmäinen rokotus, c
Tiitterit yksi viikko ennen testausta, d
Absorboitumisarvot mitattu aallonpituudella 405 nm. Arvot 300 ovat positiivisia, e
Ei testattu. 1 ♦ · · m m
Taulukko 9 22 94488 ts—FIP—virukse11a intranasaalisesti ja subkutaanieeeti rokotettujen ja ei-rokotettujen kissojen seerumin viruksen neutraloinnin anti-FIP-viruksen vasta-ainetiitterit tehokkuustes-tissä 3
Vastaava viruksen neutralointi-tijtteri viikkoa rokotuksen jälkeen
Kissan Rokotustie/ abc no_rokotuksen no -0_3_8 11_14_16_ SU4 IN/1 <4 <8 64 30 20 20 TR3 <2 <8 256 120 120 40 TT2 <2 <8 96 1920 640 480 UN3 <2 <8 512 320 3840 1280 U04 3 8 48 40 30 20 UX6_4 8 192 960_960 1920_
Geometrinen keskiarvo <2 ·<8 140_210_235_163_ 0H2 IN / 2 «£.2 48 256 120 60 80 PQ4 <£2 96 512 120 60 60 QK4 <2 96 192 80 40 120 UE1 1£ 2 128 768 1920 2560 2560 US 1 -<2 96 512 160 640 960 US2_C 2 64 512 120_240_80_
Geometrinen keskiarvo ^2 84-4JL4-ULZ-L9§-22.0- , qq2 1 SC ^2 ^8 8 Kuollut Kuollut Kuollut qjj ^2 <.8 <8 1280 Kuollut Kuollut QY3 ^2 ^ 8 128 640 Kuollut Kuollut RG3 24 8 64 1920 Kuollut Kuollut TU4 <£2 <8 12 <20 20 <20 yG j 2 1 ? 32 640_Kuollut Kuollut ** Geometrinen keskiar»» 1^2 ^ <£8--24 3-^2-—-^20- ' HH5 kontrolli HT NT <2 12° Kuollut Kuollut HJ4 NT NT <”2 120 4Θ0 480 NT NT <2 86° Kuollut Kuollut HI2 NT NT 42_140--640_ „ <C2 240 1292 554
Geometrinen keskiarvo ii ia.» «*·»» ».*«-" * 23 94488 a 2 annosta saavien kissojen ensimmäinen rokotus * b 2 annosta saavien kissojen toinen rokotus ja yhden annoksen saavien kissojen ensimmäinen rokotus c
Tiitterit yksi viikko ennen testausta d
Ei testattu
Keksintö ja sen parhaina pidetyt toteutusmuodot tulevat täydellisesti esiin edellä olevasta selostuksesta ja esimerkeistä. Selostettujen menetelmien muunnelmat, jotka ovat pieneläinten käyttöön tarkoitettujen rokotteiden valmistustekniikkaan perehtyneille ilmeisiä, ovat mukana seuraavien patenttivaatimusten piiriin kuuluvia.
Claims (7)
- 24 9 4 4 8 8
- 1. Menetelmä, jonka avulla voidaan valmistaa rokotetta FIP-virusta vastaan, tunnettu siitä, että: 1. heikennetään FIP-virus käyttämällä useita kertoja sopivissa kissan soluissa, 2. saatetaan heikennetty FIP-virus mutageenisen aineen, esimerkiksi kemiallisen aineen tai säteilytyksen vaikutuksen alaiseksi, 3. viljellään heikennettyä vaiheesta 2 saatua FIP-virusta, joka on lämpöherkkää, ja 4. kootaan talteen heikennetty ts-FIP-virus.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että FIP-virus eristetään virulentin FIP:n kanssa in-fektoidun kissan kudoksesta tai elimistä ennen heikentämistä.
- 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että FIP-virus heikennetään käyttämällä peräkkäin ai-nakin noin • 60 kertaa kissan munuaissoluissa.
- 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että FIP-virus tehdään lämpöherkäksi saattamalla useita kertoja soluissa käytetty FIP-virus mutageenisen aineen vaikutuksen alaiseksi.
- 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että FIP-virus tehdään lämpöherkäksi antamalla ultra-violetti-valon vaikuttaa useita kertoja soluissa käytettyyn FIP-viruk-seen 3-5 min ajan. • • · i
- 41 Itf i iilti I I I M i t 25 · 94488
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10314487A | 1987-10-01 | 1987-10-01 | |
| US10314487 | 1987-10-01 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI884521A0 FI884521A0 (fi) | 1988-09-30 |
| FI884521A FI884521A (fi) | 1989-04-02 |
| FI94488B true FI94488B (fi) | 1995-06-15 |
| FI94488C FI94488C (fi) | 1995-09-25 |
Family
ID=22293621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI884521A FI94488C (fi) | 1987-10-01 | 1988-09-30 | Menetelmä rokotteen, joka suojaa kissoja kissojen tarttuvalta peritoniitilta, valmistamiseksi |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0310362B1 (fi) |
| JP (1) | JP2608935B2 (fi) |
| KR (1) | KR890006255A (fi) |
| AT (1) | ATE103496T1 (fi) |
| AU (1) | AU620819B2 (fi) |
| CA (1) | CA1337116C (fi) |
| DE (1) | DE3888775T2 (fi) |
| DK (1) | DK175715B1 (fi) |
| ES (1) | ES2063048T3 (fi) |
| FI (1) | FI94488C (fi) |
| HU (1) | HU205264B (fi) |
| IL (1) | IL87911A0 (fi) |
| NO (1) | NO177555C (fi) |
| NZ (1) | NZ226353A (fi) |
| PT (1) | PT88592B (fi) |
| ZA (1) | ZA887263B (fi) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5667785A (en) * | 1987-10-01 | 1997-09-16 | Pfizer Inc. | Vaccine for protection of cats against feline infectious peritonitis |
| NZ240558A (en) | 1990-11-14 | 1994-11-25 | Smithkline Beecham Corp | Recombinant feline coronavirus s proteins useful in diagnosis and vaccination against feline peritonitis virus disease |
| JPH07504897A (ja) * | 1992-02-18 | 1995-06-01 | パーヘリオン コーポレーション | ネコ感染性腹膜炎ワクチンおよび調製方法 |
| US5670156A (en) * | 1993-02-18 | 1997-09-23 | Parhelion Corporation | Feline infectious peritonitis vaccine and method of preparation |
| TW377373B (en) * | 1993-09-22 | 1999-12-21 | Wyeth Corp | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline infectious peritonitis virus disease |
| WO1998027433A1 (en) * | 1996-12-18 | 1998-06-25 | Engene Biotechnologies, Inc | A specific diagnostic for antibodies to feline infectious peritonitis virus |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4195130A (en) * | 1978-04-20 | 1980-03-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Propagation of feline infectious peritonitis virus in tissue cultures |
| ES486442A0 (es) * | 1978-11-30 | 1980-12-16 | Wellcome Found | Un metodo de preparar una vacuna que contiene una cepa ate- nuada de virus de peritonitis infecciosa felina. |
| US4303644A (en) * | 1979-10-16 | 1981-12-01 | Norden Laboratories, Inc. | Feline infectious peritonitis virus vaccines |
| CA1303500C (en) * | 1986-02-06 | 1992-06-16 | Charles A. Baldwin | Feline infectious peritonitis vaccine |
-
1988
- 1988-09-25 IL IL87911A patent/IL87911A0/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 1988-09-26 PT PT88592A patent/PT88592B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-09-26 CA CA000578409A patent/CA1337116C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-09-27 NZ NZ226353A patent/NZ226353A/en unknown
- 1988-09-28 ZA ZA887263A patent/ZA887263B/xx unknown
- 1988-09-28 DK DK198805406A patent/DK175715B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-09-28 AU AU22931/88A patent/AU620819B2/en not_active Expired
- 1988-09-29 KR KR1019880012657A patent/KR890006255A/ko not_active Application Discontinuation
- 1988-09-29 EP EP88309003A patent/EP0310362B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-09-29 DE DE3888775T patent/DE3888775T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-09-29 AT AT88309003T patent/ATE103496T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-09-29 ES ES88309003T patent/ES2063048T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-09-30 NO NO884340A patent/NO177555C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-09-30 FI FI884521A patent/FI94488C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-09-30 JP JP63248942A patent/JP2608935B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-09-30 HU HU885100A patent/HU205264B/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01113321A (ja) | 1989-05-02 |
| FI884521A (fi) | 1989-04-02 |
| ES2063048T3 (es) | 1995-01-01 |
| NZ226353A (en) | 1991-07-26 |
| HUT47867A (en) | 1989-04-28 |
| IL87911A0 (en) | 1989-03-31 |
| NO884340L (no) | 1989-04-03 |
| DK540688D0 (da) | 1988-09-28 |
| NO884340D0 (no) | 1988-09-30 |
| PT88592B (pt) | 1993-03-31 |
| DK175715B1 (da) | 2005-01-31 |
| ATE103496T1 (de) | 1994-04-15 |
| FI884521A0 (fi) | 1988-09-30 |
| KR890006255A (ko) | 1989-06-12 |
| DE3888775T2 (de) | 1994-07-14 |
| NO177555C (no) | 1995-10-11 |
| DK540688A (da) | 1989-04-02 |
| EP0310362B1 (en) | 1994-03-30 |
| DE3888775D1 (de) | 1994-05-05 |
| PT88592A (pt) | 1988-10-01 |
| FI94488C (fi) | 1995-09-25 |
| EP0310362A2 (en) | 1989-04-05 |
| ZA887263B (en) | 1989-09-27 |
| HU205264B (en) | 1992-04-28 |
| CA1337116C (en) | 1995-09-26 |
| NO177555B (no) | 1995-07-03 |
| JP2608935B2 (ja) | 1997-05-14 |
| AU620819B2 (en) | 1992-02-27 |
| AU2293188A (en) | 1989-04-06 |
| EP0310362A3 (en) | 1990-03-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hooks et al. | The foamy viruses | |
| Takada et al. | Protective immune response of chickens against Newcastle disease, induced by the intranasal vaccination with inactivated virus | |
| Zissis et al. | Protection studies in colostrum-deprived piglets of a bovine rotavirus vaccine candidate using human rotavirus strains for challenge | |
| Murakami et al. | Serotypes of bovine rotaviruses distinguished by serum neutralization | |
| Hägglund et al. | Bovine respiratory syncytial virus ISCOMs—protection in the presence of maternal antibodies | |
| JP2006524224A (ja) | ウシの繁殖疾患を防止する方法 | |
| FI94488B (fi) | Menetelmä rokotteen, joka suojaa kissoja kissojen tarttuvalta peritoniitilta, valmistamiseksi | |
| SHIBATA et al. | Passive protection against porcine epidemic diarrhea (PED) virus in piglets by colostrum from immunized cows | |
| Barthold et al. | Virus strain specificity of challenge immunity to coronavirus | |
| EP0975360B1 (en) | Bovine respiratory and enteric coronovirus as a vaccine | |
| KR100302522B1 (ko) | 고양이장코로나바이러스로부터의개코로나바이러스왁찐 | |
| Grant et al. | Protection of cats against progressive fibrosarcomas and persistent leukemia virus infection by vaccination with feline leukemia cells | |
| JPH0710775A (ja) | ネコ腸内コロナウイルス由来のイヌコロナウイルスワクチン | |
| Möstl | Coronaviridae, pathogenetic and clinical aspects: an update | |
| Crick | The vaccination of man and other animals against rabies | |
| US5667785A (en) | Vaccine for protection of cats against feline infectious peritonitis | |
| Yousif et al. | Oral administration of hyperimmune IgY: an immunoecological approach to curbing acute infectious bursal disease virus infection | |
| Homberger et al. | Passively acquired challenge immunity to enterotropic coronavirus in mice | |
| Gough et al. | A viral subunit immunogen for porcine transmissible gastroenteritis | |
| HU214739B (hu) | Eljárás kutya coronavírus vakcina előállítására | |
| US20200384102A1 (en) | Swine vaccine | |
| Waldman et al. | Oral immunization against influenza. | |
| Nedrud et al. | Oral immunization with Sendai virus in mice | |
| Hazlett et al. | The protective effect of two porcine enterovirus vaccines in swine. | |
| EP0881911B1 (en) | Immunogenic complex, iscom, for use in preparing a vaccine for juvenile individuals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: PFIZER INC. |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: PFIZER INC. |
|
| MA | Patent expired |