FI90553B - Menetelmä istukan kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi - Google Patents
Menetelmä istukan kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI90553B FI90553B FI883450A FI883450A FI90553B FI 90553 B FI90553 B FI 90553B FI 883450 A FI883450 A FI 883450A FI 883450 A FI883450 A FI 883450A FI 90553 B FI90553 B FI 90553B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mol
- carrier
- sulphate
- process according
- bound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Description
Menetelmä istukan kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi 1 90553
Keksintö koskee menetelmää istukan kudosproteiinin PP4, jolla on hyytymistä estäviä ominaisuuksia, puhdista-5 miseksi.
Kudosproteiinia PP4 on kuvattu DE 3 315 000 A l:ssä (US-patenttijulkaisu 4 507 229) seuraavilla parametreillä: elektroforeettinen liikkuvuus alueella, joka on alfax- ja alfa2-globuliinien välillä; 10 isoelektroninen piste 4,85 ± 0,15; sedimenttikerroin S20~2 zu'w 3,3 ± 0,2S; natriumdodekyylisulfaatti( SDS)-pitoisessa polyak-ryyliamidigeelissä määritetty molekyylipaino 35 000 ± 5 000; 1% 15 ekstinktiokerroin E. (280 nm) 5,9 ± 0,6; T.cm hiilihydraattiosa 2,4 ± 0,94 % (g/100 g) mannoosi 0,3 ± 0,2 %, galaktoosi 0,4 ± 0,2 %, ksyloosi 0,1 ± 0,04 %, glukoosi 0,2 ± 0,1 %, glukosamiini 1,0 ± 0,2 %, neura-miinihappo 0,4 ± 0,2 %) ja 20 seuraava aminohappokoostumus:
Ryhmiä 100 ryhmää kohti
Aminohappo (mooli-%) Variaatio- kerroin
Lysiini 6,95 1,14 25 Histidiini 0,97 17,40
Arginiini 5,44 1,77
Asparagiinihappo 11,41 1,68
Treoniini 6,78 2,40
Seriini 6,21 2,26 30 Glutamiinihappo 12,25 0,43
Proliini 1,96 6,20
Glysiini 6,68 3,83
Alaniini 7,92 1,67
Kystiini 1/2 0,77 19,50 35 Väliini 5,34 3,80 2 90553
Metioniini 1,98 6,00
Isoleusiini 5,21 2,23
Leusiini 11,50 0,45
Tyrosiini 3,55 4,21 5 Fenyylialaniini 4,07 3,77
Tryptofaani 0,93 23,90 Tähän saakka tunnetut PP4:n puhdistusmenetelmät, kuten esimerkiksi immunoadsorptio, geelisuodatus jne. 10 (Bohn et ai., 1985, Arch. Gynaecol. 236, 225 - 233), eivät ole soveltuneet PP4:n teolliseen eristämiseen.
Keksinnön tehtävänä on täten menetelmän kehittäminen PP4:n puhdistamiseksi.
Nyt havaittiin yllättäen, että PP4 osoittaa kal-15 siumionien läsnä ollessa affiniteettia sakkaridien poly-rikkihappoestereihin tai sulfatoituihin sokereihin ja voidaan sitoa kantajaan sidottuihin sakkaridien polyrikkihap-poestereihin tai sulfatoituihin sokereihin.
Keksinnön kohteena on täten menetelmä PP4:n puhdis-20 tamiseksi, jolle on tunnusomaista, että PP4-pitoinen liuos saatetaan kalsiumionien läsnäollessa konsentraationa 0,001 - 0,2 mol/1 kontaktiin kantajaan sidotun sakkaridin poly-rikkihappoesterin tai sulfatoidun sokerin kanssa, päällä oleva neste erotetaan, PP4:n sisältävä kantajamatriisi 25 pestään mahdollisesti ja PP4 eluoidaan.
Veteenliukenemattomana kantajamatriisina, johon sakkaridin polyrikkihappoesteri tai sulfatoitu sokeri voidaan sitoa kovalenttisesti, käytetään esimerkiksi liukenematonta agaroosia, dekstraania, polyakryyliamidia tai po-30 lyetyleeniglykolin, pentaerytriitin ja metakrylaatin kopo-lymeerejä tai myös näiden kombinaatioita.
Sakkaridin polyrikkihappoesterin tai sulfatoidun sokerin liittäminen sellaiseen kantajaan voidaan suorittaa tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi käyttäen 35 reaktiota CNBr:llä tai epoksidilla esiaktivoidun kantaja-
H
3 90553 hartsin kanssa tai karbodi-imidisidoksella aminofunktiona-lisoituun kantajahartsiin.
Edullisessa menetelmätavassa PP4-pitoinen liuos, jonka pH on 5,5 - 9,5 ja joka sisältää edullisesti 0,01 -5 50 mg PP4/ml ja 0,001 - 0,2 mol/1 kalsiumioneja, esimer kiksi kalsiumkloridin, kalsiumasetaatin tai kalsiumlaktaa-tin muodossa, saatetaan kontaktiin kantajaan sidotun sak-karidin polyrikkihappoesterin tai kantajaan sidotun sulfa-toidun sokerin kanssa, esimerkiksi kantajaan sidotun hepa-10 riinin, dekstraanisulfaatin, heparaanisulfaatin, kondroi-tiinisulfaatin, kerataanisulfaatin tai dermataanisulfaatin kanssa, päällä oleva liuos erotetaan, PP4:n sisältävä kanta jamateriaali pestään mahdollisesti puskurilla, jonka pH on 5,5 - 9,5 ja joka sisältää 0,001 - 0,2 mol/1 kalsium-15 ioneja ja 0,001 - 0,4 mol/1 suolaa, esimerkiksi NaCl, KC1 tai LiCl ja PP4 eluoidaan käyttäen Stepwise- tai gradient-tieluointia suolakonsentraatiota kohottaen.
Erityisen edullisessa menetelmätavassa PP4:n sisältävä liuos, jonka pH on 7,0 - 9,0 ja joka sisältää 0,003 -. . 20 0,02 mol/1 kalsiumioneja, saatetaan kontaktiin kantajaan sidotun hepariinin tai dekstraanisulfaatin kanssa, aivan erityisen edullisesti kuitenkin kantajaan sidotun hepariinin kanssa, seosta inkuboidaan esimerkiksi 5 - 300 minuuttia 4-30 “C:ssa, päällä oleva liuos erotetaan PP4:n si-25 sältävästä kantajahartsista, pestään mahdollisesti liuok sella, jonka pH on 7,0 - 9,0 ja joka sisältää 0,003 - 0,02 mol/1 kalsiumioneja ja 0,05 - 0,3 mol/1 NaCl, KC1 tai LiCl ja PP4 liuotetaan pois kantajahartsista lisäämällä suolakonsentraatiota 0,35 - 1,5 mol/1 Stepwise- tai gradient-30 tieluutiota käyttäen.
Mahdollisesti voidaan liittää esimerkiksi myös uu- delleenkromatografointi toisella kantajaan sidotulla sak-karidin polyrikkihappoesterillä tai kantajaan sidotulla sulfatoidulla sokerilla.
35 Keksinnön mukaiselle menetelmälle on luonteenomais- 4 90553 ta, että PP4 on mahdollista eristää muutamissa vaiheissa puhtauden ollessa hyvin korkea myös teollisessa mittakaavassa .
Seuraavat esimerkit valaiskoot keksintöä.
5 Esimerkki 1 3 1 fenyyli-RSepharose-eluaattia, joka oli valmistettu DE-A-3 643 182:n esimerkin 1 mukaisesti (160 pg PP4/ml), dialysoitiin puskuria A (50 mmol/1 Tris/HCl, 25 mmol/1 NaCl, 5 mmol/1 CaCl2/ pH 8,0) vastaan. Liuokseen 10 lisättiin batch-menetelmässä 300 ml hepariini-RSepharosea (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi, tilausnumero 17-0467-01), sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja päällä oleva liuos erotettiin. Adsorbentti pestiin sen jälkeen puskurilla A ja PP4 eluoitiin käyttäen NaCl-Stepwise-gra-15 dientteja (180 mmol/1, 3 000 mmol/1 ja 1,5 mol/1 NaCl). Mahdollisesti voidaan näin saatu PP4-materiaali kromato-grafoida uudelleen jatkopuhdistusta varten dekstraanisul-faatti-RSepharosella puskurissa A ilman CaCl2:ta. Tällä tavalla puhdistettu PP4 antoi tulokseksi SDS-polyakryyliami-20 digeelielektroforeesissa vyöhykkeen, jonka molekyylipaino oli noin 32 kd.
Esimerkki 2 1 litra fenyylieluaattia (kuten esimerkissä 1) dialysoitiin puskuria A vastaan. Dialysaatti otettiin 200 25 ml: aan dekstraanisulfaatti-RSepharosea (epoksiaktivoitu
Sepharose 6B, dekstraanisulfaatti, Pharmacia, Uppsala, Ruotsi, tilausnumerot 17-0480-01, 17-0340-01; substanssien liittäminen tapahtui tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi kuten Lundberg, L., Porath, J. (1974) J. Chro-30 matogr. 90, 87 - 98 ovat kuvanneet, joka oli tasapainotettu puskurilla A ja pestiin. PP4 eluoitiin NaCl-gradienttia käyttäen. PP4:n sisältävät fraktiot kromatografoitiin uudelleen esimerkiksi hepariini-RSepharosella dialyysin jälkeen puskuria A vastaan. PP4-materiaali antoi tulokseksi 35 SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesissa vyöhykkeen, jonka molekyylipaino oli noin 32 kd.
li
Claims (6)
1. Menetelmä kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi, tunnettu siitä, että PP4-pitoinen liuos saatetaan 5 kosketukseen kalsiumionien läsnäollessa konsentraationa 0,001-0,2 mol/1 kantajaan sidotun sakkaridin polyrikkihap-poesterin tai sulfatoidun sokerin kanssa, päällä oleva neste erotetaan, PP4:n sisältävä kantajamatriisi pestään mahdollisesti ja PP4 eluoidaan.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että kantajamateriaali on liukenematon agaroosi, dekstraani, polyakryyliamidi, aminofunktionali-soitu kantajahartsi tai polyetyleeniglykolin, pentaeryt-riitin ja metakrylaatin kopolymeeri tai näiden kombinaa- 15 tio.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sakkaridin polyrikkihappoesteri on hepariini, dekstraanisulfaatti, heparaanisulfaatti, kon-droitiinisulfaatti, kerataanisulfaatti tai dermataanisul- 20 faatti.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kantajaan sidottua hepa-riinia tai dekstraanisulfaattia, edullisesti kantajaan sidottua hepariinia.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että pestään puskurilla, jonka pH on 5,5-9,5 ja joka sisältää 0,001-0,2 mol/1, edullisesti 0,003-0,02 mol/1 kalsiumioneja ja 0,001-0,4 mol/1, edullisesti 0,05-0,3 mol/1 NaCl, KC1 tai LiCl.
6 90553
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873724726 DE3724726A1 (de) | 1987-07-25 | 1987-07-25 | Verfahren zur reinigung des plazentaren gewebeproteins pp4 |
| DE3724726 | 1987-07-25 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883450A0 FI883450A0 (fi) | 1988-07-21 |
| FI883450A FI883450A (fi) | 1989-01-26 |
| FI90553B true FI90553B (fi) | 1993-11-15 |
| FI90553C FI90553C (fi) | 1994-02-25 |
Family
ID=6332384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883450A FI90553C (fi) | 1987-07-25 | 1988-07-21 | Menetelmä istukan kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4990597A (fi) |
| EP (1) | EP0301374B1 (fi) |
| JP (1) | JP2511500B2 (fi) |
| KR (1) | KR970001810B1 (fi) |
| AT (1) | ATE85344T1 (fi) |
| AU (1) | AU620553B2 (fi) |
| CA (1) | CA1327675C (fi) |
| DE (2) | DE3724726A1 (fi) |
| DK (1) | DK411088A (fi) |
| ES (1) | ES2038721T3 (fi) |
| FI (1) | FI90553C (fi) |
| GR (1) | GR3007613T3 (fi) |
| PT (1) | PT88067B (fi) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3643182A1 (de) * | 1986-12-18 | 1988-06-30 | Behringwerke Ag | Arzneimittel enthaltend das gewebeprotein pp4, verfahren zur herstellung von pp4 und zu seiner pasteurisierung sowie die verwendung von pp4 |
| US5225330A (en) * | 1988-08-01 | 1993-07-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Diagnostic kit and diagnostic method utilizing carbohydrate receptors |
| US5136026A (en) * | 1989-04-10 | 1992-08-04 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Process for removing toxins from protein solutions |
| DE3911629A1 (de) * | 1989-04-10 | 1990-10-11 | Behringwerke Ag | Verfahren zur abtrennung von toxinen aus proteinloesungen |
| DE3939169A1 (de) * | 1989-11-27 | 1991-05-29 | Behringwerke Ag | Verfahren zur reinigung von lipocortinen |
| DE4003773A1 (de) * | 1990-02-08 | 1991-08-14 | Behringwerke Ag | Verfahren zur reinigung von lipocortinen |
| BE1004336A3 (fr) * | 1991-01-15 | 1992-11-03 | Analis Sa | Procede de separation et de quantification de l'hemoglobine glycosylee hb a1c. |
| US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US5968477A (en) * | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| AU744290B2 (en) * | 1997-08-26 | 2002-02-21 | Ranbar Electrical Materials, Inc. | Varnish compositions, methods of making and components made therefrom |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ180198A (en) * | 1976-03-04 | 1978-11-13 | New Zealand Dev Finance | Cationic ion exchanger with a cross-linked carbohydrate marix |
| DE3315000A1 (de) * | 1983-04-26 | 1984-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| NZ208241A (en) * | 1984-05-22 | 1987-09-30 | John Stephen Ayers | Purification of blood plasma or serum: selective removal of (very) low density lipoproteins (ldl and vldl) |
| DE3533516A1 (de) * | 1984-09-21 | 1986-04-03 | Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim | Blutgerinnungshemmende proteine, verfahren zur herstellung sowie deren verwendung |
| DE3519011A1 (de) * | 1985-05-25 | 1986-11-27 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung eines materials zur affinitaetschromatographie |
| CA1265446A (en) * | 1985-09-30 | 1990-02-06 | Masahiro Maki | Anticoagulating substance, process for preparing same and anticoagulant comprising same as an effective component |
-
1987
- 1987-07-25 DE DE19873724726 patent/DE3724726A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-07-19 ES ES198888111576T patent/ES2038721T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-19 AT AT88111576T patent/ATE85344T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-07-19 DE DE8888111576T patent/DE3878075D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-07-19 EP EP88111576A patent/EP0301374B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-21 FI FI883450A patent/FI90553C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-07-22 AU AU19735/88A patent/AU620553B2/en not_active Ceased
- 1988-07-22 JP JP63181948A patent/JP2511500B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-22 US US07/222,998 patent/US4990597A/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-07-22 DK DK411088A patent/DK411088A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-07-22 PT PT88067A patent/PT88067B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-07-23 KR KR1019880009268A patent/KR970001810B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-07-25 CA CA000572953A patent/CA1327675C/en not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-04-09 GR GR930400521T patent/GR3007613T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0301374A3 (en) | 1990-01-31 |
| FI90553C (fi) | 1994-02-25 |
| EP0301374B1 (de) | 1993-02-03 |
| DE3724726A1 (de) | 1989-02-02 |
| AU1973588A (en) | 1989-01-27 |
| KR890002228A (ko) | 1989-04-10 |
| DK411088D0 (da) | 1988-07-22 |
| DE3878075D1 (de) | 1993-03-18 |
| GR3007613T3 (fi) | 1993-08-31 |
| PT88067A (pt) | 1989-06-30 |
| KR970001810B1 (ko) | 1997-02-15 |
| EP0301374A2 (de) | 1989-02-01 |
| AU620553B2 (en) | 1992-02-20 |
| JP2511500B2 (ja) | 1996-06-26 |
| ES2038721T3 (es) | 1993-08-01 |
| PT88067B (pt) | 1995-03-01 |
| JPS6435000A (en) | 1989-02-06 |
| DK411088A (da) | 1989-01-26 |
| FI883450A (fi) | 1989-01-26 |
| CA1327675C (en) | 1994-03-08 |
| FI883450A0 (fi) | 1988-07-21 |
| US4990597A (en) | 1991-02-05 |
| ATE85344T1 (de) | 1993-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Veis et al. | The phosphoprotein of the dentin matrix | |
| Masaki et al. | M-protein | |
| Silvestri et al. | The C1q inhibitor in serum is a chondroitin 4-sulfate proteoglycan. | |
| Weaver et al. | The structural basis of ankyrin function. II. Identification of two functional domains. | |
| Baker et al. | The purification and cyanogen bromide cleavage of the ‘link proteins’ from cartilage proteoglycan | |
| FI90553B (fi) | Menetelmä istukan kudosproteiinin PP4 puhdistamiseksi | |
| Thonar et al. | Maturation-related changes in proteoglycans of fetal articular cartilage | |
| US4446126A (en) | Antithrombin-heparin complex and method for its production | |
| Matsuda et al. | Studies on the Structure of γ-Glutamyltranspeptidase: I. Correlation between Sialylation and Isozymic Forms | |
| KR0131204B1 (ko) | 암 면역치료용 보조제 | |
| CA1211371A (en) | Method of producing an antithrombin iii-heparin concentrate or an antithrombin iii-heparinoid concentrate | |
| JPS6019719A (ja) | 抗腫瘍活性を有する蛋白質 | |
| Stanescu et al. | Characterization of a proteoglycan of high electrophoretic mobility | |
| Davie et al. | Chemical characterization of glycopeptides from human γM-globulins | |
| Myllylä et al. | Isolation of collagen glucosyltransferase as a homogeneous protein from chick embryos | |
| EP0048898B1 (en) | Method for the production of an antithrombin-heparin complex and pharmaceutical compositions containing the complex | |
| Miyamoto et al. | Isolation and characterization of proteodermatansulfate from rat skin | |
| Radhakrishnamurthy et al. | Organization of glycosaminoglycan chains in a chondroitin sulfate-dermatan sulfate proteoglycan from bovine aorta | |
| US5807982A (en) | Affinity purified heparin | |
| US4309339A (en) | Leucine-rich 3,1-S-α2 -glycoprotein, process for isolating it and its use | |
| Lyon et al. | A rapid purification of bovine testicular hyaluronidase by chromatography on dermatan sulphate-substituted 1, 6-diaminohexane–sepharose 4B | |
| AU778915C (en) | Process for the purification of antithrombin-III | |
| Ohkubo et al. | Purification and characterization of human plasma Zn-α2-glycoprotein | |
| JP3386498B2 (ja) | ヒトＴＧＦ−βの精製法 | |
| CA2035927A1 (en) | Process for purifying lipocortins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |