FI88931C - Nya enzymer foer uppspjaelkning av lignin - Google Patents
Nya enzymer foer uppspjaelkning av lignin Download PDFInfo
- Publication number
- FI88931C FI88931C FI871088A FI871088A FI88931C FI 88931 C FI88931 C FI 88931C FI 871088 A FI871088 A FI 871088A FI 871088 A FI871088 A FI 871088A FI 88931 C FI88931 C FI 88931C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- rldm
- oxidation
- lignin
- oxidative
- amino acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
- D21C—PRODUCTION OF CELLULOSE BY REMOVING NON-CELLULOSE SUBSTANCES FROM CELLULOSE-CONTAINING MATERIALS; REGENERATION OF PULPING LIQUORS; APPARATUS THEREFOR
- D21C5/00—Other processes for obtaining cellulose, e.g. cooking cotton linters ; Processes characterised by the choice of cellulose-containing starting materials
- D21C5/005—Treatment of cellulose-containing material with microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Paper (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 88931
Uusia entsyymejä ligniinin hajottamista varten
Keksinnön tausta Tässä esitetty keksintö on käyttökelpoinen useissa 5 prosesseissa selluloosa- ja paperiteollisuudessa. Selluloosan keitossa täytyy selluloosakuidut vapauttaa niitä ympäröivästä ligniinimatriisista, siten että ne voivat liittyä yhteen, jolloin saadaan lujuutta lopulliseen tuotteeseen. Tämä polymeerierotus voidaan suorittaa poistamalla ligniini 10 kuten kemiallisissa massoissa tai säilyttäen ligniini kuten mekaanisissa massoissa. Valkaisuprosessin aikana ligniini poistetaan ja tällöin sellu puhdistuu.
Puun sekundaarinen soluseinä, joka koostuu selluloo-sakuiduista, hemiselluloosasta ja ligniinistä, antaa puu-15 kasveille fysikaalista lujuutta ja jäykkyyttä. Selluloosa-kuidut on pakattu tiheästi solun ympärille säännöllisiin yhdensuuntaisiin jonoihin tai ristikkäin oleviin kerroksiin. Näitä kuituja pitää yhdessä hemiselluloosan ja ligniinin muodostama matriisi.
20 Selluloosa on runsaimmin esiintyvä aineosa puukudok- sessa, ja sitä on 35-45 % kuivapainosta. Selluloosa on glukoosimonomeerien parien järjestäytynyt lineaari polymeeri y£-1,4-sidoksin. Hemiselluloosat ovat haaroittuneita polymeerejä, jotka koostuvat pentoosi (5-hiili) monomeereis-25 ta, tavallisesti ksyloosista ja arabinoosista; ja heksoosi (6-hiili) monomeereista, koostuen glukoosista, galaktoo-sista, mannoosista ja substituoidusta uronihaposta.
Ligniini on erityisen monimutkainen polymeeri, joka on muodostunut substituoitujen kinnamyylialkoholiedeltäjien 30 vapaaradikaalipolymeroinnilla. Ligniiniä on 15-35 % puun kuivapainosta.
Ligniini on erittäin kestävää biologisia hyökkäyksiä vastaan; tämä ei ole yllättävää kun otetaan huomioon lignii-nirakenteen monimutkaisuus ja stabiilisuus. Minkään orga-35 nismin ei ole esitetty kasvavan siten, että ligniini on ainoana hiililähteenä. Monimutkainen ligniinipolymeeri 2 88931 hajoaa kuitenkin täysin erilaisten korkeampien sienien puh-dasviljelyjen vaikutuksesta. Viittauksina katso Higuchi (1982) Experientia 38: 159-166, ja Janshekar, H. ja Fiechter, A. (1983) "Advances in Biochemical Engineering/Biotechno-5 logy", A. Fiechter ja T.W. Jeffries, Eds., Voi. 27, sivut 119-178, Springer, Berlin; Kirk, T.K. (1984), "Biochemistry of Microbial Degradation", D.P. Gibson, Ed., sivut 399-437, Marcel Dekker, N.Y. Pääasiallisia "täysin lignifioidun" kudoksen (ligniiniä >20 %) hajoittajia ovat basidiomykeetat, 10 jotka aiheuttavat valkolahon tyyppistä puun hajoamista.
Tehokkaimmat fysiologiset tutkimukset ligniinin biohajoit-tamisesta valkolaho-sienen avulla on suoritettu yksittäisillä heimon Corticeaceae yksittäisellä jäsenellä Phanerochaete chrysosporium Burds.
15 Vaikka P. chrysosporium pystyy täysin hajoittamaan ligniinin, ei puhdistettu ligniini tue sen kasvua. Puhdistettu selluloosa on kuitenkin tämän sienen kasvuravinto-aine. Ligniinin ha joittaminen antaa tälle sienelle mahdollisuuden saada esille selluloosaruokalähde, joka sisältyy 20 ligniinimatriisiin. Määrätyissä laboratorio-olosuhteissa ei sienien ligniinin hajoitusta havaita noin 3 ensimmäisen kasvatuspäivän aikana. Seurauksena kasvustolta puuttuu hiiltä tai typpeä. Ligniinin hajoittaminen havaitaan vasta päivä tai kaksi myöhemmin ja se on suurimmillaan 6 päivässä. 25 Ligniinihajoamisen induktio vastauksena hiilen ja typen puutteessa indikoi sitä, että sienen ligniinimetabolismi on sekundaarinen metabolinen tapahtuma (Keyser, P., Kirk, T.K. ja Zeikus, J.G. (1978) J. Bacteriol. 135:790-797).
Sienen ligniinihajoitus on kaupallisesti epäkäytän-30 nöllistä monesta syystä. Ligniinin hajoamisnopeus on liian hidas, koska ligninolyyttinen aktiivisuus täytyy indusoida puutteen avulla. Lisäksi sieni metabolisoi selluloosakuitu-ja pääasiallisena ruokalähteenään, josta aiheutuu pienempi sellun saanto ja huonompi selluloosatuote.
35 Tarkasteltaessa pää-C-C ja C-O-C alayksikön sisäisiä sidoksia, on tärkeää huomata, että noin 80 % alayksikön 3 88931 sisäisistä sidoksista vaatii- sidoksia - ja C^g -hiiliin.
Tien ja Kirk ovat esittäneet valmisteen, joka pystyy hapettavasti lohkaisemaan -C^ -sidoksia ligniinimalli-yhdisteissä (Tien, M. ja Kirk, T.K. (1984) Proc. Natl. Acad.
5 Sei. 81:2280-2284). Tässä valmisteessa on SDS-polyakryyli-amidigeelissä pääosin yksi proteiini, jonka näennäinen mo-lekyylipaino on 42 kilodaltonia, ja useita toisarvoisia ketjuja. Siten valmiste on proteiinien seos ja mitään menetelmiä ei ole ehdotettu pääproteiinin eristämiseksi tois-10 arvoisista ketjuista. Seurauksena tämän julkaisun julkaisemisesta julkaistiin useita tieteellisiä julkaisuja, jotka esittivät kykenemättömyyttä eristää pääproteiini seoksesta. Nämä artikkelit ovat seuraavat: Huynh, V-B ja Crawford, R.L. (1935). FEMS Microbiology Letters 28:119-123; Leisola, 15 M. et ai. (1985) Lignin Biodegradation Workshop; ja Gold, M.H. et ai. (1985) Lignin Biodegradation Workshop.
Nämä proteiinin eristämiset on suoritettu joko ionin-vaihtokromatografiällä tai koon mukaan poissulkevalla ionin-vaihto-pylväskromatografiällä. Fraktiot, jotka sisältävät 20 esitetyn aineosan, on analysoitu isoelektrisellä fokusoivalla tai SDS-polyakryyliamidi-geeli-elektroforeesilla, ja niissä on ollut useita proteiineja. Tämän työn suorittaneet tutkijat ovat ligniinientsyymikentän eturintamassa, jota osoittaa heidän osallistumisensa Lignin Biodegradation 25 Workshop:iin, joka pidettiin Vancouverissa, BC, 1985. Nämä epäonnistumiset viittaavat nähtävästi voittamattomaan ongelmaan hajoitettaessa näitä seoksia.
Aktiivisen aineosan eristäminen Tien ja Kirk seoksesta on erittäin haluttua, koska muun muassa sellaisten 30 seosten luonteen on havaittu oleellisesti estävän niiden käytännöllisen käytön. Erityisesti Tien ja Kirk seosten ja samanlaisten seosten on havaittu olevan erittäin pysymät-tömiä käytännön varastointilämpötiloissa ja niissä lämpötiloissa, jotka ovat sopivia vaikuttamaan niiden käytännön 35 aktiivisuuteen. Erityisesti Tien ja Kirk seoksen käyttökelpoinen aktiivisuus alenee noin 2 päivässä huoneenlämpö- 4 88931 tilassa oleellisesti ja tällaisten seosten on havaittu sisältävän hävittäviä tai proteiinia hajoittavia luontaisia proteaaseja kuten osoitetaan hyvin tunnetulla azocoll-kokeella.
5 Lisäksi on olemassa selvä tarve eristää ja identi fioida muita entsyymejä, joita voidaan käyttää katalysoimaan ligniini hajoittamista ja modifioimista.
Keksinnön lyhyt yhteenveto Tässä esitetty keksintö on menestyksellisesti rat-10 kaissut ongelman tuottamalla oleellisesti puhdasta entsyy-mivalmistetta, jota tässä on merkitty rLDM 6:ksi, joka on pääosin puhdasta destabiloivista proteaaseista. Edullisesti kyseisen keksinnön rLDM 6 valmisteella on haluttuja ominaisuuksia käytännön käyttöä varten, joita ei ole Tien ja 15 Kirk valmisteella.
Myös ottamalla talteen uuden lajin Phanerochaete chrysosporium kasvatuksen solujen ulkopuolinen neste tämän
jälkeen esitetyllä tavalla, emme ole eristäneet ainoastaan TM
rLDM 6:ta, joka on ilmeinen Tien 3a Kirk seoksen pää-20 proteiini, josta on puhuttu edellä, vaan joukon muita erillisiä ligniiniä hajoittavia entsyymejä, joissa ei oleellisesti ole destabiloivia luontaisia proteaaseja. Näillä entsyymeillä on stabiilisuus, joka sopii käytännön käyttöön, ne ovat välittömästi aktiivisia ja ne eivät vaadi metabo-25 lista induktiota.
Keksinnössä esitetyt entsyymit eivät ainoastaan hajoita ligniiniä ja vaikuta erilaisissa reaktioissa kuten esitetään ligniinimalliyhdisteillä, vaan ne lisäksi eivät vaikuta selluloosaan tai hemiselluloosaan ja ne on lisäksi 30 indikoitu, jolla on erityistä merkitystä, olevan käyttökelpoisia ligniinin selektiivisessä hajoittamisessa ja modifioinnissa ja siten indikoitu käytettäväksi toiminnoissa sellu- ja paperiteollisuudessa, joissa tällaisia tuloksia on haettu. Tämän keksinnön entsyymivalmisteen erilai-35 sista ominaisuuksista on niiden oleellisella puhtaudella, joka vapauttaa entsyymit aktiivisuutta pienentävistä luontaisista proteiineista, erityistä etua tällaisessa käytössä.
5 88931
Siten keksintö koskee uusia ligniiniä hajoittavin
TM TM
entsyymejä, joita kutsutaan nimillä rLDM 1, rLDM 2,
TM TM TM TM
5 rLDM 3, rLDM 4, rLDM 5 ja rLDM 6, kukin oleellisesti vapaana luontaisesta proteiinista, joka luontaisesti hajoittaa näitä entsyymejä. Keksinnön mukaisille entsyymeille on tunnusomaista se, mitä vaatimuksissa esitetään. Näiden uusien yhdisteiden ominaisuuksiin kuuluu 10 edullisesti 1) ligniinimäärän pienentäminen kraftmassassa, 2) kuumahierteen (TMP) lujuusominaisuuksien parantaminen
ja 3) kraftligniinin valkaisu. Keksinnön kohteena olevat TM
rLDM :t on karakterisoitu tässä kriittisellä ominaisuudella, jonka mukaisesti se pystyy katalysoimaan veratryyli-15 alkoholin hapetusta veratryylialdehydiksi, ja seuraavilla fysikaalisilla parametreillä: 1) molekyylipaino, kuten määritetään SDS-PAGE:11a; 2) aminohappokoostumus; 3) hemipitoisuus; 20 4) vasta-ainereaktiivisuuden vastaavuus; 5) aktiivisuuden spesifisyys ligniinimalliaineita vastaan; ja 6) eluutio FPLC-pylväästä tietyillä natriumasetaatti-molaarisuuksilla.
25 Tämän keksinnön ligniiniä hajoittaviin entsyymeihin,
TM
joita tässä on merkitty rLDM :ksi, on etuoikeusjulkaisuissa
TM
viitattu nimellä Puplases
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
TM
Keksinnön kohteena olevan uuden rLDM :n eristäminen 30 suoritettiin käyttämällä uutta pysyvää Phanerochaete chrysosporium:n mutanttikantaa, joka vapauttaa suuriä määriä ligninolyyttisiä entsyymejä fermentointiväliaineeseen. Uusi mutanttilaji, jota on merkitty SC26, on tallennettu pysyvään julkiseen viljelmävarastoon säilytettäväksi vähintään 35 10 vuotta. Viljelmävarasto on Northern Regional Research
Laboratory, U.S. Department of Agriculture, Peoria, Illinois 61604, USA. Talletusnumero on NRRL 15978 ja talletuspäivä 6 88931 heinäkuun 3, 1985. Tämä talletettu viljelmä on julkisesti saatavissa patenttilain mukaisesti. Kuitenkin tulisi ymmärtää, että viljelmän saatavuus ei sisällä oikeutta käyttää kyseistä keksintöä patenttioikeuksia loukaten, jotka on myön-5 netty hallinnollisin toimin. NRRL 15978 on tarkemmin kuvattu julkaisussa Enzyme Microb. Technol. 8(1) (1986) 27-32.
Uusi mutantti SC26 saatiin UV-mutageneesillä villi-tyyppisestä Phanerochaete chrysosporium, ATCC 24725:stä.
Uusi mutantti SC26 kasvatettiin typpirajoitteisessa 10 hivenaineväliaineessa, jossa oli glukoosia ja joka oli puskuroitu pH-arvoon 4,5.
Fermentointiväliaineen ligninaasiaktiivisuus mitattiin jaksottain standardivälineillä mitaten veratryylialko- holin hapetusnopeus veratryylialdehydiksi.
TM
15 Kyseisen keksinnön uuden rLDM :n eristäminen ja puhdistaminen fermentaation solunulkopuolisesta nesteestä suoritettiin ultrasuodatuksella ja FPLC:llä käyttäen anio-ninvaihtopylvästä.
Seuraavassa on esimerkkejä, jotka valaisevat uusia 20 entsyymejä ja menetelmiä, esittäen myös keksinnön parhaan suoritusmuodon. Kaikki prosentit ovat painon mukaan laskettuja ja kaikki liuotinseososuudet ovat tilavuusosuuksia, ellei toisin ole esitetty.
Esimerkki 1 25 Mutantin SC26 kasvatus (NRRL 15978), jotta tuotetaan uusia ligninaaseja sisältävä fermentaatioväliaine Siirrosta valmistettiin homogenisoimalla 50 ml mutantin SC26 1,5 päivän kasvustoa, joka oli kasvatettu 1 litran pulloissa, joissa oli seuraavaa väliainetta, jota 30 on merkitty typpirajoitteiseksi BUI/glukoosiväliaineeksi: Bill väliaine sisältää 1,08 x 10 M ammoniumtart-raattia, 1,47 x 10~2 M KH2PC>4, 2,03 x 10~3 M MgS04-7H20, 6,8 x 10-4 M CaCl2-2H20, 2,96 x 1θ”6 M tiamiini-HCl ja 10 ml L ^ hivenaineliuosta. Hivenaineliuos sisältää 7,8 x 35 ίο M nitriloetikkahappoa, 1,2 x 10 M MgS04’7H20, 7 88931 1,7 x 10-2 M NaCl, 3,59 x 10_4 M FeS04*7H20, 7,75 x 10~4 M CoCl2, 9,0 x 10“4 M CaCl2, 3,48 X 10~4 M ZnS04'7H20, 4 x 10‘5 M CuSO.·5Ho0, 2,1 x 10~5 M A1K(SO-)~* 12H90, 1,6 x -4 4 z _5 4 ^ -3
10 M H3B03, 4,1 x 10 M NaMo04*2H20 ja 2,9 x 10 J M
5 MnS04*H20.
Väliaineeseen lisättiin 10 % (paino/litra) glukoosia.
Väliaine puskuroitiin käyttäen 10 mM transakoniit-tihappoa, pH 4,5.
Pulloihin (125 ml, sisältäen 10 ml steriiliä liuosta, 10 jolla on edellä esitetty koostumus) ympättiin kukin 0,5 ml:11a edellistä homogenaattia ja pidettiin stationaarisena 39°C:ssa. Pulloihin laskettiin päivinä 0, 3 ja 6 vedellä kyllästettyä happea. Vaihtoehtoisesti pyörivää biologista kontraktoria (RBC) käytettiin sienen kasvattamiseen. 2,5 15 litraa edellä esitettyä väliainetta ympättiin 100 ml:11a edellistä homogenaattia ja kasvatettiin 39°C:ssa RBC:11a pyörittäen 1 rpm jatkuvasti hapettaen.
Ligninaasiaktiivisuus mitattiin jaksoittain määrittäen veratryylialkoholin hapetusnopeus veratryylialdehydik-20 si. Reaktioseokset sisälsivät 275 1 solunulkopuolista nestettä (pulloista tai RBC:sta), 2 mM veratryylialkoholia, 0,4 mM H202 ja 0,1 mM natriumtartraattia, pH 2,5 0,5 ml:n lopputilavuudessa. Reaktiot aloitettiin lisäämällä H202 välittömästi puskurin lisäämisen jälkeen ja seurattiin 25 310 nm:11a. Proteiini määritettiin Bradfordin mukaisesti (Bradford, M.M. (1976) Anal. Biochem. 72:248-252) käyttäen karjaseerumialbumiinia (Sigma Chemical, St. Louis, MO) standardina.
Esimerkki 2 TM
30 Uuden rLDM :n eristäminen ja puhdistaminen
Edellä esitetyllä tavalla pulloissa kasvatettujen viljelmien solunulkopuoliset kasvuväliaineet otettiin talteen sentrifugoimalla 5000 x G, 10 min, 4°C. Tämän jälkeen solujenulkopuolinen kasvuväliaine konsentroitiin ultra- 35 suodatuksella 10K suodattimen läpi. Saatua seosta kutsutaan
TM TM
ligninolyyttiseksi seokseksi . Ligninolyyttinen seos β 88931
TM
voi sisältää yhden tai useamman rLDM :n tai muita ligni-
TM
nolyyttisiä entsyymejä erilaisina osuuksina. rLDM , joka
TM
sisältyy tähän ligninolyyttiseen seokseen , erotettiin FPLC-menetelmällä käyttäen Pharmacia Mono Q pylvästä 5 (Pharmacia, Piscataway, NJ) ja gradienttina natriumasetaat-
TM
tipuskuria, pH 6, 10 mM:sta 1 M:iin. rLDM 1, 2, 3, 4, 5 ja 6 eluoituivat pylväästä tyypillisessä valmistuksessa seuraavilla natriumasetaatti-molaarisuuksilla, vastaavasti: 0,16, 0,18, 0,34, 0,40, 0,58 ja 0,43 M, jolloin saatiin TM TM .....
10 oleellisesti puhdasta rLDM 1-6:ta. Kukin rLDM on pääosin
TM
vapaa muista rLDM :sta ja luontaisista proteiineista mukaan lukien pääasiallinen puhtaus ei-toivotuista luontaisista hajoittavista proteaaseista. Näistä proteaaseista on merkkejä raakaseoksissa, ja niitä on vaikea erottaa
TM
15 (kukin huomattavan puhdas rLDM antaa negatiivisen tuloksen Azocoll-kokeessa).
TM
Uuden rLDM :n karakterisointi TM
rLDM on karakterisoitu käyttäen seuraavia kriteereitä : 20 1) kyky katalysoida veratryylialkoholin hapetusta veratryylialdehydiksi; 2) molekyylipaino kuten määritetään SDS-PAGE:11a; 3) aminohappokoostumus; 4) hemipitoisuus; 25 5) vasta-ainereaktiivisuuden vastaavuus; 6) aktiivisuuden spesifisyys ligniinimalliaineita vastaan; ja 7) eluoituminen FPLC-pylväästä tietyllä natriumase- taattimolaarisuudella.
TM
30 Kaikki rLDM :t katalysoivat veratryylialkoholin hapetusta veratryylialdehydiksi kuten on havaittu spektro- fotometrisesti aallonpituudella 310 nm. Aktiivisuusyksikkö
on määritetty 1 mikromoolin veratryylialdehydin tuotolla TM
rl.DM katalysoimassa reaktiossa. Spesifiset aktiivisuudet 35 tyypillisille valmisteille noin 24°C:ssa ovat seuraavat: rLDM 11^456
Spesifinen aktiivisuus 2,6 17,1 5,1 9,7 9,4 12,4 yksikköä/mg/minuuttia 9 88931
TM
5 Molekyylipaino 38 38 42 42 43 42 kilodaltonia
Aminohappokoostumus
Aminohappokoostumus määritettiin muunnelmalla Jones et al.:n menetelmästä (Jones, B.N., Paabo, S. ja Stein, S.
10 (1981) J. Liquid Chromatography 4:565-586). Aminohappojen suhde on lähes seurausta käytetyn tekniikan rajoituksista ja proteiinin määrästä jota on käytetty määrityksessä.
Katso taulukko I.
ίο 88931
vO
r ω "Τ
ν' rC
?α 0 mcOvD<T)cO<7^OOOO’ir^i',sjrr,,,,,— Ζ3 w
U
U^i 2: dj __ ί— o ^ r“i ^ r- αθ σΟ o lo cp ο O cp y X ·>-*#*' A ^
f") P IT) 0s* ΓΜ ^ -C* «O* cP n ίΛ o (N
J Hl H CM H c ^-* rp n v TJ <r co o ^ o ο^οίΝ^ΟπίΛ^ V* «C: ·» ·<» ^ ' »'Λ «S ft «\ A A % <^ ,->3 up lO «^T Γ·*-* <r γΜαΤ^^γ-αΓ-ά-αχΟγμ ET; ^ ^ CM r-i V-(
CM
_- fl) OCs.,—4 CVi Γ-» LO CM C^ OOCMOO
___ I I
p· *Q ^ n K A A
£\ CMP'^'O'H^Lom»—tr*·. cm ffi csj cm ·—i o ^
w P
3 3
-P
tn o — o Σ ^ -j o <~1 >T ^ (''J —' n esi νΟ^ουΛνη O C-* A * A ♦» *« A A, «* < a A A A ^
W4 Σ 'S r—«vO-^AJ^-OCM^r-AO ,—4 r—* .—< ·—* O
Dj O 3 to _: tn x: p o c
•H
ε
H (0 C
D-
O C Q
M " tö DC
>; S Ä tn -· 3 E-· O « cl i—I S D ^ - 3Q-H Q.cuwi^'-ootTjijij^ajajCui (Od S n—i 4j ·η ·—iiXtw^-i^ajrcX'—1 <U >> Ε-ι >-i «; rcaOwxicjOi-j^tttuc^o.·^·'-·'-4 11 88931
Hemi- ja hiilihydraattipitoisuus TM , ...
rLDM 1, 2, 3, 4, 5 ja 6 sisältävät kukin yksittäisen protohemi-IX osan. Kaikki glykolysoituvat jaksottaisen happovärjäyksen (PAS) mukaisesti ja sitoutuvat Con A-sepha-5 rosiin (Sigma).
Immunotäplitysmenetelmä Tätä menetelmää käytettiin edelleen karakterisoimaan TM . .
rLDM :a. Se on standardimenetelmä, jonka ovat esittäneet
Towbin et ai. (Towbin, H., Staehelin, T. ja Gordon, J.
10 (1979) Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 76:4350). Menetelmään kuuluu proteiinien erottaminen elektroforeesilla geelissä, proteiinien siirto kiinteään matriisiin ja reaktio 1) pri-maarisen koettimen, jäniksen anti-rLDM vasta-aineen kanssa ja 2) sekundaarisen koettimen, vuohen anti-jänis vasta- 15 aineen kanssa liitettynä piparjuuriperoksidaasiin.
TM
rLDM 1, 3, 4, 5 ja 6 reagoivat polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 2:lie ja 6:lie, käyttäen edellä esitettyä immunotäplitysmentelmää.
TM
rLDM 2 samassa menetelmässä reagoi polyklonaalisten vas-
TM
20 ta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 6:lie.
. TM
Kaikilla tässä esitetyillä rLDM :11a on seuraavat ainutlaatuiset aktiivisuudet ligniinimalliaineille, siis veratryylialkoholille, 1-(3',4'-dimetoksifenyyli)glyseroli- β-guaiasyylieetterille, fenolille, metoksyloiduille bent- 25 seeneille kuten 1,4-dimetoksibentseeneille: 1) hapettava C-C katkeaminen; 2) bentsyylimetyleeniryhmien hydroksylaatio; 3) bentsyylialkoholien hapetus aldehydeiksi; 4) fenolihapetus; ja 30 5) metoksyyliryhmien hapettava katkeaminen.
"Ligniinimalliaineet" ovat kemikaaleja, jotka
muistuttavat osia ligniinistä. Malliyhdisteiden reaktio-TM
tuotteet rLDM :ien kanssa voivat olla käytännössä käyttökelpoisia erityisesti, kuitenkin rajoittamatta, ruokaan, 35 farmaseuttisiin aineisiin ja kemianteollisuudessa kemialli sina syötettävinä raaka-aineina. Edellä esitetyt aktiivi- mu suudet ovat ominaisia tässä esitetylle rLDM :lle.
12 88931
Esimerkki 3
Kraftsellun valkaisu rLDM™: 11a TM
rLDM 1-6 yksin tai seoksena on lisätty kraftsel-luun, jolla on karakteristinen ruskea väri, sisältäen 3 %
5 10 mM transakoniittihappoa, pH 4,5, 400^,uM ja 100^,uM
MnSO^. Selluloosalietteeseen johdetaan C^a ja inkuboidaan hitaasti ravistaen 39°C:ssa 12 tuntia, jonka jälkeen kraft-selluliuos dekantoidaan ja selluloosaan lisätään 1 M NaOH-liuos ja inkuboidaan 60 min 65°C:ssa. Tämä dekantoidaan 10 seuraavaksi ja kraftsellu pestään vedessä- Saadulla kraft-sellulla ei enää ole tummanruskeaa väriä, vaan sillä on haluttu vaaleampi väri.
MnSO^rn käyttäminen on valinnaista.
Esimerkki 4
TM
15 Kuumahierteen (TMP) käsittely rLDM :11a
TM
rLDM 1-6 yksin tai seoksena lisätään 10 mg:aan TMP:ta (kuivapaino), sisältäen 3 % 10 mM transakoniittihappoa, pH 4 ,5, 400^,uM H2O2 ja 100^,uM MnSO^. Selluliettee-seen johdetaan C^sa ja inkuboidaan hitaasti ravistaen 20 39°C:ssa 12 tuntia, jonka jälkeen TMP pestään vedellä.
Vedonkesto, repäisy- ja murtoindeksit kuten myös sellun katkeamispituus on mitattu ja niiden on havaittu olevan parempia kuin käsittelemättömällä näytteellä. Käsitellyn näytteen kirkkausreversio on pienempi kuin käsitte-
25 lemättömän näytteen; siten kirkkausstabiilisuus on kasva-TM
nut rLDM käsittelyllä.
MnSO.:n käyttäminen on valinnaista.
4 TM
Kyseisen keksinnön rLDM voidaan käyttää puhdiste-
TM
tussa muodossa, jolloin kukin rLDM on huomattavan vapaa TM
30 muista rLDM :sta ja luontaisista proteiineista, 3a niiden seoksina. Lisäksi on alan ammattilaisen säädettävissä
TM TM TM
rLDM -määrät rLDM -valmisteen mukaisesti. rLDM voidaan yhdistää erilaisiin laimentimiin, lisäaineisiin ja muihin kemikaaleihin mukaan lukien proteiinit, jotka eivät ole
TM
35 haitallisia rLDM :lie tai niiden käytölle, erilaisissa tarkoituksissa kuten valmistettaessa markkinoitavia muotoja ja niiden käytön lisäämiseksi.
13 88931 "Luontaisilla proteiineilla" tässä käytettynä tarkoitetaan muita solunulkopuolisessa fermentointiliuoksessa läsnäolevia proteiineja kuten edellä on esitetty.
Esimerkki 5
TM
5 Havupuukraftmassan käsitteleminen rLDM :11a Käsitellään yksi osa havupuukraftmassaa noin 10 x
-6 -6 TM
10 - noin 20 x 10 osalla rLDM :aa noin 40 mMrssa transakoniittihappoa, pH 4,5, noin 39°C:ssa noin 1-6 tuntia. Tämän jälkeen massa pestään noin 1M NaOHrssa noin 10 65°C:ssa noin yksi tunti ja huuhdotaan vedellä. Tällä havupuukraftmassan käsittelyllä poistetaan noin 1/3 ligniinistä, kuten todistetaan kappaluvun pienenemisellä noin 18:sta noin 13:een.
Claims (7)
14 88 951 l. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 1, tunnet-t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero-5 chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet: a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta vera-tryylialdehydiksi noin 2,6 yksikköä/mg-min; 10 b) molekyylipaino on noin 38 kilodaltonia; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; d) on glykosyloitu; e) sisältää seuraavan aminohapposuhteen: Aminohappo rLDM 1
15 Suhde asp/asn 1,4 glu/gln 6,0 ser 4,3 his 4,4 20 gly 6,5 thr 2,2 arg 1,1 ala 7,3 tyr 0,2 25 met ei määritetty vai 1,6 phe 1,1 ile 1,0 leu 1,5 30 lys 0,5 f) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 2:lie ja 6:lie immunotäplitys-menetelmässä; g) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-35 suudella noin 0,16; ja 15 88931 h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli-aineille: 1. hapettava Ca - C6:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi; 5 3) bentsyylialkoholien hapetus aldehydeiksi; 4. fenolihapetus; ja 5. metoksyyliryhmien hapettava katkaisu.
2. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 2, tunnet-t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero-10 chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet : a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta verat-ryylialdehydiksi noin 17,1 yksikköä/mg»min; 15 b) molekyylipaino on noin 38 kilodaltöniä; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; d) on glykosyloitu; e) sisältää seuraavan aminohapposuhteen: Aminohappo rLDM 2
20 Suhde asp/asn 2,0 glu/gln 7,7 ser 4,1 his 3,2 25 gly 5,7 thr 3,5 arg 1,2 ala 7,9 tyr ei määritetty 30 met ei määritetty vai 2,6 phe 3,0 ile 2,2 leu 2,6 35 lys 1,0 16 8 8 931 f) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 6:lie immunotäplitysmenetelmäs-sä; g) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-5 suudella noin 0,18; ja h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli-aineille: 1. hapettava Ca - CO:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi; 10 3) bentsyylialkoholien hapettaminen aldehydeiksi; 4. fenolihapettaminen; ja 5. metoksyyliryhmien hapettava katkaisu.
3. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 3, tunnet-t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero- 15 chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet: a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta verat-ryylialdehydiksi noin 5,1 yksikköä/mg-min; 20 b) molekyylipaino on noin 42 kilodaltonia; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; d) on glykosyloitu; e) sisältää seuraavan aminohapposuhteen: 17 8893Ί Aminohappo rLDM 3 Suhde asp/asn 5,4 glu/gln 16,8 5 ser 14,0 his 7,3 gly 24,0 thr ei määritetty arg 2,9 10 ala 14,4 tyr 1,0 met 1,2 vai 7,4 phe 7,0 15 ile 4,1 leu 6,5 lys 2,5 f) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 2:lie ja 6:lie immunotäplitys- 20 menetelmässä; g) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-suudella noin 0,34; ja h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli-aineille: 25 1) hapettava Ca - C6:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi ; 3. bentsyylialkoholien hapettaminen aldehydeiksi; 4. fenolihapetus; ja 5. metoksyyliryhmien hapettava katkaisu.
4. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 4, tunnet- t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero-chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet : ie 88931 a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta verat-ryylialdehydiksi noin 9,7 yksikköä/mg-min; b) molekyylipaino on noin 42 kilodaltonia; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; 5 d) on glykosyloitu; e) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 2:lie ja 6:lie immunotäplitys-menetelmässä; f) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-10 suudella noin 0,40; ja h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli-aineille: 1. hapettava Ca - CB:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi; 15 3) bentsyylialkoholien hapetus aldehydeiksi; 4. fenolihapetus; ja 5. metoksyyliryhmien hapettava katkaisu.
5. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 5, tunnet-t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero-20 chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet : a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta verat-ryylialdehydiksi noin 9,4 yksikköä/mg min; 25 b) molekyylipaino on noin 43 kilodaltonia; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; d) on glykosyloitu; e) sisältää seuraavan aminohapposuhteen: 19 88931 Aminohappo rLDM 5 Suhde asp/asn 5,0 glu/gln 19,9 5 ser 22,3 his 15,9 gly 44,7 thr ei määritetty arg 4,8 10 ala 13,8 tyr 1,0 met ei määritetty vai 6,5 phe 3,3 15 ile 3,6 leu 6,0 lys 2,3 f) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, jotka on valmistettu rLDM 2:lle ja 6:lie immunotäplitys- 20 menetelmässä; g) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-suudella noin 0,58; ja h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli-aineille: 25 1) hapettava Ca - Cfl:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi; 3. bentsyylialkoholien hapettaminen aldehydeiksi; 4. fenolihapetus; ja 5. metoksyyliryhmien hapettava katkaisu.
6. Ligninolyyttinen entsyymi rLDM 6, tunnet- t u siitä, että se on valmistettavissa kannan Phanero-chaete chrysosporium NRRL 15978 avulla ja että se ei sisällä proteaaseja, ja että sillä on seuraavat ominaisuudet: 20 88 951 a) katalysoi veratryylialkoholin hapetusta verat-ryylialdehydiksi noin 12,4 yksikköä/mgmin; b) molekyylipaino on noin 42 kilodaltonia; c) sisältää yksittäisen protohemi-IX osan; 5 d) on glykosyloitu; e) sisältää seuraavan aminohapposuhteen: Aminohappo rLDM 6 Suhde asp/asn 3,0 10 glu/gln 8,0 ser 6,8 his 3,2 gly 8,3 thr 4,9 15 arg 1,3 ala 6,7 tyr 0,2 met 0,14 vai 4,2 2. phe 3,2 ile 2,4 leu 3,3 lys 1,0 f) reagoi polyklonaalisten vasta-aineiden kanssa, 25 jotka on valmistettu rLDM 2:lle ja 6:lie immunotäplitys- menetelmässä; g) eloituu FPLC-pylväästä natriumasetaattimolaari-suudella noin 0,43; ja h) sillä on seuraavat aktiivisuudet ligniinimalli- 30 aineille: 1. hapettava Ca - CB:n katkaisu; 2. bentsyylin metyleeniryhmien hydroksylointi; 3. bentsyylialkoholien hapettaminen aldehydeiksi; 4. fenolihapetus; ja 35 5) metoksyyliryhmien hapettava katkaisu. 2i 8 8 9 61
7. Phanerochaete chrysosporium'n biologisesti puhdas mutanttiviljelmä, merkitty mutantiksi SC26, ja jolla on viljelmätalletusnumero NRRL 15978; joka mutantti kasvatettuna sopivassa väliaineessa vapauttaa väliaineeseen 5 rLDM 1:n, rLDM 2:n, rLDM 3:n, rLDM 4:n, rLDM 5:n ja rLDM 6 :n. 22 8 8 9 5 I
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US75524285A | 1985-07-15 | 1985-07-15 | |
| US75524285 | 1985-07-15 | ||
| US06/845,655 US4687741A (en) | 1985-07-15 | 1986-03-28 | Novel enzymes which catalyze the degradation and modification of lignin |
| US84565586 | 1986-03-28 | ||
| PCT/US1986/001471 WO1987000550A1 (en) | 1985-07-15 | 1986-07-11 | Novel enzymes for degradation of lignin |
| US8601471 | 1986-07-11 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI871088A FI871088A (fi) | 1987-03-12 |
| FI871088A0 FI871088A0 (fi) | 1987-03-12 |
| FI88931B FI88931B (fi) | 1993-04-15 |
| FI88931C true FI88931C (fi) | 1993-07-26 |
Family
ID=27116051
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI871088A FI88931C (fi) | 1985-07-15 | 1987-03-12 | Nya enzymer foer uppspjaelkning av lignin |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4687741A (fi) |
| EP (1) | EP0229171B1 (fi) |
| KR (1) | KR900007645B1 (fi) |
| AT (1) | ATE76660T1 (fi) |
| AU (1) | AU602869B2 (fi) |
| BR (1) | BR8606809A (fi) |
| CA (1) | CA1268132A (fi) |
| DE (1) | DE3685487D1 (fi) |
| DK (1) | DK129587D0 (fi) |
| ES (1) | ES2000510A6 (fi) |
| FI (1) | FI88931C (fi) |
| GR (1) | GR861828B (fi) |
| HK (1) | HK94495A (fi) |
| IN (1) | IN167742B (fi) |
| NO (1) | NO871060D0 (fi) |
| NZ (1) | NZ230982A (fi) |
| OA (1) | OA08538A (fi) |
| PH (1) | PH22286A (fi) |
| PT (1) | PT82979B (fi) |
| TR (1) | TR23883A (fi) |
| WO (1) | WO1987000550A1 (fi) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU606081B2 (en) * | 1986-09-12 | 1991-01-31 | Sandoz Ag | Recombinant ligninase |
| US5203964A (en) * | 1986-10-24 | 1993-04-20 | Call Hans Peter | Process for producing cellulose from lignin containing raw materials using an enzyme or microorganism while monitoring and maintaining the redox potential |
| US4960699A (en) * | 1988-05-09 | 1990-10-02 | Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Enzymatic depolymerization of coal |
| ZA894239B (en) * | 1988-06-08 | 1990-03-28 | Int Paper Co | Enzymatic delignification of lignocellulosic material |
| US5427945A (en) * | 1988-11-23 | 1995-06-27 | Sandoz Ltd. | White-rot fungus and uses thereof |
| US5853537A (en) * | 1989-02-13 | 1998-12-29 | Clariant Finance (Bvi) Limited | Process for treating pulpwoods and pulps with a pitch degrading fungus of the genus Ophiostoma |
| DE4008893A1 (de) * | 1990-03-20 | 1991-09-26 | Call Hans Peter | Verfahren zum enzymatischen bleichen von zellstoffen |
| WO1992017550A1 (en) * | 1991-03-27 | 1992-10-15 | Idaho Research Foundation, Inc. | Biodegradable azo dyes |
| US5498534A (en) * | 1992-03-25 | 1996-03-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method of removing color from wood pulp using xylanase from streptomyces roseiscleroticus NRRL B-11019 |
| US5369024A (en) * | 1992-03-25 | 1994-11-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Xylanase from streptomyces roseiscleroticus NRRL-11019 for removing color from kraft wood pulps |
| WO1993020959A1 (en) | 1992-04-16 | 1993-10-28 | Promega Corporation | Method and device for bioremediation |
| US5785811A (en) * | 1992-11-09 | 1998-07-28 | The Mead Corporation | Process for treating lignocellulosic material with soybean peroxidase in the presence of peroxide |
| WO1994029474A1 (en) * | 1993-06-11 | 1994-12-22 | Midwest Research Institute | Treatment of lignocellulose to minimize binding of cellulase |
| US5824842A (en) * | 1996-07-26 | 1998-10-20 | North Carolina State University | Method of altering lignin in trees |
| WO2007120505A1 (en) | 2006-03-31 | 2007-10-25 | C. R. Bard, Inc. | Catheter including arcuate transition region |
| US10252023B2 (en) | 2013-01-11 | 2019-04-09 | C. R. Bard, Inc. | Curved catheter and methods for making same |
| CN105803017B (zh) * | 2016-04-14 | 2020-07-07 | 南京林业大学 | 一种提高木质纤维原料酶水解糖化效率的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE411463B (sv) * | 1973-04-16 | 1979-12-27 | Svenska Traeforskningsinst | Forfarande for framstellning av cellulosamassa medelst mikroorganismer |
| US4554075A (en) * | 1984-05-29 | 1985-11-19 | North Carolina State University | Process of degrading chloro-organics by white-rot fungi |
| FR2574427B1 (fr) * | 1984-12-12 | 1987-08-07 | Agronomique Inst Nat Rech | Micro-organismes de souche phanerochaete chrysosporium et leur utilisation |
| NZ216726A (en) * | 1985-07-15 | 1990-08-28 | Repligen Corp | Use of lignin-degrading enzymes from phanerochaete chrysosporium for treatment of wood pulp and e1 effluent |
-
1986
- 1986-03-28 US US06/845,655 patent/US4687741A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-07-02 NZ NZ230982A patent/NZ230982A/en unknown
- 1986-07-09 OA OA58901A patent/OA08538A/xx unknown
- 1986-07-11 BR BR8606809A patent/BR8606809A/pt not_active Application Discontinuation
- 1986-07-11 WO PCT/US1986/001471 patent/WO1987000550A1/en active IP Right Grant
- 1986-07-11 AU AU61385/86A patent/AU602869B2/en not_active Ceased
- 1986-07-11 AT AT86904671T patent/ATE76660T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-07-11 KR KR1019870700219A patent/KR900007645B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-07-11 IN IN532/MAS/86A patent/IN167742B/en unknown
- 1986-07-11 DE DE8686904671T patent/DE3685487D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-07-11 EP EP86904671A patent/EP0229171B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-07-11 PH PH34007A patent/PH22286A/en unknown
- 1986-07-14 PT PT82979A patent/PT82979B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-07-14 GR GR861828A patent/GR861828B/el unknown
- 1986-07-15 TR TR39486D patent/TR23883A/xx unknown
- 1986-07-15 ES ES8600310A patent/ES2000510A6/es not_active Expired
- 1986-07-15 CA CA000513786A patent/CA1268132A/en not_active Expired - Fee Related
-
1987
- 1987-03-12 FI FI871088A patent/FI88931C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-03-13 DK DK129587A patent/DK129587D0/da unknown
- 1987-03-13 NO NO871060A patent/NO871060D0/no unknown
-
1995
- 1995-06-15 HK HK94495A patent/HK94495A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK94495A (en) | 1995-06-23 |
| OA08538A (en) | 1988-09-30 |
| AU602869B2 (en) | 1990-11-01 |
| KR880700065A (ko) | 1988-02-15 |
| CA1268132A (en) | 1990-04-24 |
| NO871060L (no) | 1987-03-13 |
| FI871088A (fi) | 1987-03-12 |
| FI88931B (fi) | 1993-04-15 |
| DK129587A (da) | 1987-03-13 |
| EP0229171A1 (en) | 1987-07-22 |
| PH22286A (en) | 1988-07-14 |
| FI871088A0 (fi) | 1987-03-12 |
| TR23883A (tr) | 1990-10-17 |
| DK129587D0 (da) | 1987-03-13 |
| AU6138586A (en) | 1987-02-10 |
| IN167742B (fi) | 1990-12-15 |
| PT82979A (en) | 1986-08-01 |
| NO871060D0 (no) | 1987-03-13 |
| NZ230982A (en) | 1992-08-26 |
| US4687741A (en) | 1987-08-18 |
| ES2000510A6 (es) | 1988-03-01 |
| GR861828B (en) | 1987-08-26 |
| PT82979B (pt) | 1988-07-01 |
| EP0229171B1 (en) | 1992-05-27 |
| BR8606809A (pt) | 1987-10-13 |
| KR900007645B1 (ko) | 1990-10-17 |
| WO1987000550A1 (en) | 1987-01-29 |
| ATE76660T1 (de) | 1992-06-15 |
| DE3685487D1 (de) | 1992-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI88931C (fi) | Nya enzymer foer uppspjaelkning av lignin | |
| US4687745A (en) | Use of rLDM™ 1-6 and other ligninolytic enzymes in the treatment of mechanical pulps | |
| US4690895A (en) | Use of rLDM™ 1-6 and other ligninolytic enzymes in the bleaching of kraft pulp | |
| Jäger et al. | Production of ligninases and degradation of lignin in agitated submerged cultures of Phanerochaete chrysosporium | |
| Kantelinen et al. | Production of lignin peroxidase and laccase by Phlebia radiata | |
| Huynh et al. | Novel extracellular enzymes (ligninases) of Phanerochaete chrysosporium | |
| Nerud et al. | Ligninolytic properties of different white-rot fungi | |
| JPH05500899A (ja) | 有効成分としてヘムペプチドを含むミクロペルオキシダーゼ製剤 | |
| CA2019411A1 (en) | Enzymatic delignification of lignocellulosic material | |
| Kantelinen et al. | Comparison of two lignin-degrading fungi: Phlebia radiata and Phanerochaete chrysosporium | |
| JPH0280687A (ja) | リグノセルロース材料の酵素脱リグニン方法 | |
| DE69633873T2 (de) | Alkalische cellulase und verfahren zu deren herstellung | |
| US5369024A (en) | Xylanase from streptomyces roseiscleroticus NRRL-11019 for removing color from kraft wood pulps | |
| Kelley et al. | Characterization of glucose oxidase-negative mutants of a lignin degrading basidiomycete Phanerochaete chrysosporium | |
| AU589668B2 (en) | Process for the use of ligninolytic enzymes | |
| US4692413A (en) | Use of rLDM™ 1-6 and other ligninolytic enzymes for the decolorization of E1 effluent | |
| US5081027A (en) | Method for producing pulp by treatment using a microorganism, and its related enzymes | |
| US5149648A (en) | Enzymes employed for producing pulps | |
| JP2763551B2 (ja) | ピラノースオキシダーゼおよびその製造法 | |
| Prasertsan et al. | Isolation and selection of cellulolytic fungi from palm oil mill effluent | |
| Johansson | A comparison between the cellulolytic activity of white and brown rot fungi. I. The activity on insoluble cellulose | |
| KR930009270B1 (ko) | rLDM^TM 1-6 및 다른 리그닌 분해 효소에 의한 크래프트펄프의 표백방법 | |
| JPS63500632A (ja) | 新規なリグニン分解酵素 | |
| JPH02259180A (ja) | 微生物処理によるパルプの製造方法 | |
| JP2573610B2 (ja) | リグニンパ−オキシダ−ゼｃｈおよびその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: REPLIGEN CORPORATION Owner name: THE UNITED STATES OF AMERICA AS |