FI84273C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 6-substituerad androsta-1,4-dien-3,17 dionderivat. - Google Patents

Description

1 84273

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 6-subs-tituoitujen androsta-1,4-dieeni-3,17-dionijohdannaisten valmistamiseksi 5 Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten 6-substi- tuoitujen androsta-1,4-dieeni-3,17-dionijohdannaisten ja niiden isomeerien ja farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistusta, 0 (I)

R

jossa R on (1) -N3; // Rl (2) ryhmä -N , jossa toinen symboleista R3 ja R2 20 \r2 on vety ja toinen on vety tai substituoimaton C1.4-al-kyyli; (3) ryhmä -NHCOR3, jossa R3 on (a) vety, 25 (b) substituoimaton C1.4-alkyyli, tai (c) ryhmä -N , jossa Rx ja R2 tarkoittavat r2 samaa kuin edellä.

30 Näillä yhdisteillä on aromataasia inhiboiva vaiku tus .

Kaavassa I ja jäljempänä esitetyissä kaavoissa esiintyvä aaltoviivasidos (r\y-w) tarkoittaa sitä, että substituentilla voi olla joko α-konfiguraatio (so ekvato-35 reaalisessa asemassa) tai B-konfiguraatio (so aksiaalises- 2 84273 sa asemassa) tai molempia. Siis aina kaavan sisältäessä substituentin, joka on sitoutunut aaltoviivasidoksella, kyseinen kaava voi esittää yhdistettä, jossa substituen-tilla on yksinomaan α-konfiguraatio tai yksinomaan B-kon-5 figuraatio, tai kaava voi esittää näiden yhdisteiden seosta.

Alkyyliryhmät voivat olla haarautuneita tai suora-ketjuisia.

Termi C^-alkyyliryhmä tarkoittaa edullisesti me-10 tyyliä tai etyyliä.

R:n tai R3:n ollessa ryhmä -N . , R3 ja R2 ovat kumpikin edullisesti vety.

15 R:n ollessa ryhmä -NHC0R3, R3 on edullisesti vety tai substituoimaton C1.4-alkyyli.

Edullisia kaavan I mukaisten yhdisteiden suoloja ovat suolat, joita sellaiset kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R on edellä esitetyn määritelmän mukainen 20 Rj ryhmä -N ' , muodostavat farmaseuttisesti hyväksyt- ' *2 tävien happojen kanssa, sekä epäorgaanisten happojen, kuten esimerkiksi suola-, rikki- tai fosforihapon, että or-25 gaanisten happojen, kuten esimerkiksi sitruuna-, fumaa-ri-, maleiini-, omena-, askorbiini-, meripihka-, viini-, bent-soe-, etikka-, fenyylietikka-, sykloheksyylietik-ka-, 3-sykloheksyylipropioni-, metaanisulfoni-, etaanisul-foni-, bentseenisulfoni-, p-tolueenisulfoni- tai p-nitro-30 bentseenisulfonihapon kanssa.

Myös sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden,

Ri joissa R on ryhmä -N^ , kvaternaariset ammonium- r2 35 suolat ja -hydroksidit kuuluvat yhdisteryhmän piiriin; 3 84273 lat, esim. metyyli-, etyyli- tai setyyliammoniumsuolat, esim. -jodidit, -bromidit tai -kloridit, ja -hydroksidit.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat optisesti aktiivisia yhdisteitä, ja renkaiden yhtymäkohtien stereokemia on 5 niillä sama kuin luonnon androstaanisarjalla.

Esimerkkejä yksittäisistä edullisista yhdisteistä ovat seuraavat yhdisteet, sekä puhtaina 6a- tai 6B-epimee-reinä että mainittujen epimeerien muodostamana 6 (a, 6)- seoksena: 10 6-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6-metyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6-etyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6-formyyliaminoandrosta-14-dieeni-3,17-dioni, 6-asetyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 15 6-propionyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden isomeerejä ja farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmis- 20 taa siten, että (A) yhdiste, jonka kaava on 0 25 (ii)

L

30 jossa L on nukleofiilisellä substituutiolla korvattavissa oleva poistuva ryhmä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 35 M - N3 (III) 4 jossa M on alkalimetalli- tai ammoniumkationi tai trial-kyylisilyyliryhmä, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on -N3, tai

(B) kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on -N3, 5 pelkistetään kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R

Ri on ryhmä -N , jossa R3 ja R2 tarkoittavat samaa kuin x r2 edellä, tai 10 (C) kaavan (X) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä

Ri -N ^ , jossa R3 ja R2 tarkoittavat kumpikin vetyä, r2 alkyloidaan, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, 15 jossa toinen symboleista Rx ja R2 on vety ja toinen on substituoimaton C1.4-alkyyli, tai (D) kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä Ri -N , jossa Rj ja R2 tarkoittavat kumpikin vetyä, 20 R2 asyloidaan asylointiaineella, joka sisältää ryhmän -C0R3, jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä -NHC0R3, jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä; 25 ja haluttaessa saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muutetaan suolaksi tai kaavan (I) mukaisen yhdisteen suola muutetaan vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukaisten isomeerien seos jaetaan yksittäisiksi isomeereikseen.

30 Kaavan (II) mukaisissa yhdisteissä poistuva ryhmä L

voi olla halogeeniatomi tai alkoholin reaktiivisesta esteristä, joko sulfonihappoesteristä tai karboksyylihappo-esteristä, muodostunut tähde. L:n ollessa halogeeni jodi, bromi ja kloori ovat edullisia.

35 Ollessaan edellä määritellyn kaltainen esteritähde , 84273 b L on edullisesti ryhmä R5S02-0-, jossa R5 on mahdollisesti halogeenisubstituoitu C1.4-alkyyli, erityisesti metyyli tai trifluorimetyyli, tai mahdollisesti C^-alkyyli- tai nit-rosubstituoitu, fenyyli, erityisesti p-tolyyli tai p-nit-5 rofenyyli; tai ryhmä R6-COO-, jossa R6 tarkoittaa samaa kuin R5, jolloin R6 on edullisesti metyyli, trifluorimetyyli tai p-nitrofenyyli.

Kun M kaavan (III) mukaisessa yhdisteessä on alka-limetallikationi, se on edullisesti natrium- tai litium-10 kationi.

Ollessaan trialkyylisilyyliryhmä M on edullisesti trimetyylisilyyli-, trietyylisilyyli- tai dimetyyli-t-bu-tyylisilyyliryhmä. Edullisia kaavan (III) mukaisia yhdisteitä ovat siis natriumatsidi, litiumatsidi, trimetyyli-15 silyyliatsidi, trietyylisilyyliatsidi, dimetyyli-t-butyy- lisilyyliatsidi ja näiden lisäksi ammoniumatsidi.

Kaavan (II) mukaisen yhdisteen ja kaavan (III) mukaisen yhdisteen reaktio toteutetaan edullisesti orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi N,N-dimetyyliform-20 amidissa, N,N-dimetyyliasetamidissa tai dimetyylisulfoksi- dissa; haluttaessa voidaan lisätä vähän vettä tai alkoholin, esimerkiksi metanolin tai etanolin, vesiliuosta, jotta saadaan lisätyksi kaavan (III) mukaisen alkalimetalli-atsidin liukenevuutta reaktiovällaineeseen. Reaktio voi-25 daan toteuttaa missä lämpötilassa tahansa suunnilleen huoneen lämpötilasta käytettävän liuottimen kiehumispisteeseen, ja reaktioaika voi vaihdella muutamasta minuutista useaan tuntiin.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä 30 -N3, pelkistys sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen, R1 jossa R on -N ^ , jossa sekä Rx että R2 on vety, r2 aikaansaamiseksi voidaan toteuttaa tunnetuin menetelmin 35 monilla eri pelkistimillä, kuten esimerkiksi propaani-1,3- 6 84273 ditioli-trietyyliamiiniyhdistelmällä [menetelmän, jonka ovat esittäneet Hagan Bayley et ai., Tetr.Lett. 39 (1978) 3633, mukaisesti] tai ditiotreitolilla vesiliuoksessa tai merkaptoetikkahappotrietyyliamiiniyhdistelmällä tai trife-5 nyylifosfiinilla vesiliuoksessa [esim. menetelmän, jonka ovat esittäneet N. Knouzi et ai., Bull. Soc. Chim. Fr. 1985, 815, mukaisesti], tai katalyyttistä pelkistystä käyttäen, esimerkiksi H2:lla Pd- tai Lindlar-katalysaatto-ria käyttäen orgaanisessa liuottimessa, esimerkiksi alko-10 holiväliaineessa, esim. metanolissa tai etanolissa, esimerkiksi huoneen lämpötilan ja noin 100°C:n välillä olevassa lämpötilassa ja reaktioajan vaihdellessa muutamasta minuutista useaan tuntiin.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä 15 -N3, pelkistys sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen,

Ri jossa R on ryhmä -N , jossa toinen Rx:stä ja R2:sta r2 on vety ja toinen on substituoimaton C1.4-alkyyli, aikaan-20 saamiseksi voidaan toteuttaa esimerkiksi antamalla mainitun lähtöaineen reagoida tri-C1.4-alkyyliboraanin kanssa, esim. trimetyyli- tai trietyyliboraanin kanssa, edullisesti inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi bentseenissä, tolueenissa, ksyleenissä tai n-heksaanissa, 25 huoneen lämpötilan ja liuottimen kiehumispisteen välillä olevassa lämpötilassa.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä

Ri -N ^ , jossa sekä Rx että R2 on vety, alkylointi vas- 30 R2 taavan kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa ainakin toisen Rx:stä ja R2:sta on Cx.4-alkyyli, aikaansaamiseksi voidaan toteuttaa antamalla mainitun lähtöaineen reagoida sopivan alkyloivan aineen kanssa, joka voi olla esimer-35 kiksi Cj.4-alkyylihalogenidi, erityisesti -jodidi, tai di- 7 84273 alkyylisulfaatti; esimerkiksi sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä Rl -N , jossa ainakin toinen R^stä ja R2:sta on metyy- 5 R2 li tai etyyli, valmistukseen soveltuvia alkylointiaineita ovat esimerkiksi metyylijodidi ja dimetyylisulfaatti tai, vastaavasti, etyylijodidi ja dietyylisulfaatti.

Voidaan noudattaa reaktio-olosuhteita, jotka ovat 10 alan ammatti-ihmisille tuttuja ja joita on kuvattu laajasti orgaanisessa kemiassa; ks esimerkiksi Lucier et ai., Org. Synth. 44 (1964) 72.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä Ri 15 -N. , jossa sekä Rx että R2 on vety, asylointi vas- R2 taavan kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä -NHCOR3, aikaansaamiseksi voidaan toteuttaa, kuten jo mainittiin, käyttämällä sopivaa asylointiainetta, joka sisäl-20 tää halutun ryhmän -C0R3.

Siten esimerkiksi kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R on ryhmä -NHC0R3, jossa R3 on edellä kohdassa (b) esitetyn määritelmän mukainen, valmistamiseksi sopiva asy-lointiaine voi olla karboksyylihappo, jonka kaava on 25 R3-COOH, jossa R3 on edellä ilmoitetun kaltainen, tai edullisesti sen reaktiivinen johdannainen, kuten esimerkiksi halogenidi, erityisesti kloridi, tai sen anhydridi tai seka-anhydridi.

Karbamiinihapon alkyloitujen johdannaisten muodos-30 tamaa halogenidia, esim. kloridia, voidaan käyttää sellaisten kaavan (I) mukaisten yhdisteiden, joissa R on

Ri ryhmä -NHC0R3, jossa R3 on ryhmä -N , jossa R: R2 35 ja R2 ovat edellä esitetyn määritelmän mukaisia, valmistamiseen.

84273 8 ja Rj ovat edellä esitetyn määritelmän mukaisia, valmistamiseen.

Asylointireaktion tapahtuessa happokomponentin eli-minaation kautta on emäksen, edullisesti orgaanisen emäk-5 sen, kuten trietyyliamiinin tai pyridiinin, mukanaolo yleensä tarpeen; kun emäksenä on pyridiini, tämä voi toimia myös liuottimena, muussa tapauksessa voidaan käyttää jotakin sopivaa inerttiä, edullisesti vedetöntä, liuotinta, kuten esimerkiksi tolueenia, bentseeniä, dioksaania, 10 tetrahydrofuraania, N,N-dimetyyliformamidia tai dimetyyli- sulfoksidia.

Reaktiolämpötila voi vaihdella esimerkiksi noin 0°C:sta noin 100°C:seen, ja reaktioajat voivat olla noin tunnista noin 48 tuntiin.

15 Kaavan (I) mukaisen yhdisteen muuttamiseen suolak- seen ja vapaan kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseen suolastaan voidaan käyttää tavanomaisia menetelmiä, ja tavanomaisia menettelytapoja, kuten jakokiteytystä ja kromatografiaa, voidaan noudattaa myös jaettaessa kaavan 20 (I) mukaisten isomeerien seosta erillisiin isomeereihin.

Kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa L on halogeeni, voidaan valmistaa halogenoimalla yhdiste, joka vastaa kaava IV

oCtj tunnetuin menetelmin, esimerkiksi käsittelemällä se N-30 halogeenisukkinimidillä tai -asetamidilla, esim. N-bromi-sukkinimidillä tai N-bromiasetamidilla, halogenoidussa orgaanisessa liuottimessa, esim. hiilitetrakloridissa, noudattaen menettelytapaa, jonka ovat esittäneet Djerassi et ai artikkelissa J. Am. Chem. Soc., 72 (1950) 4531.

35 Kaavan (II) mukaiset yhdisteet, joissa L on edellä esitetyn määritelmän mukainen, alkoholin reaktiivisesta 9 84273 esteristä muodostunut tähde, ovat tunnettuja yhdisteitä tai valmistettavissa tunnetuin menetelmin tunnetuista yhdisteistä.

Myös kaavan (III) mukaiset yhdisteet ovat tunnet-5 tuja yhdisteitä, jotka ovat joko kaupallisesti saatavia tuotteita tai tunnetuin menetelmin valmistettavia yhdisteitä.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on voimakas aroma-taasia inhiboiva vaikutus. Aromataasi (estrogeenisyntetaa-10 si) on estrogeenien biosynteesin viimeisestä vaiheesta vastaava entsyymi; kuten tiedetään, aromataasi, mikroso-maalinen P450 entsyymi, joka vaikuttaa androgeenisubst-raattiin, toimii välittäjänä androgeenien muuttumisessa estrogeeneiksi (esim. androsteenidionin ja testosteronin 15 muuttumisessa estroniksi ja estradioliksi). Aromataasitoi-minnan tuote, so estrogeenit, voi sen ohella, että se on olennainen lisääntymisen kannalta, olla myös vastuussa hormonisidoksisten kasvainten kasvusta.

Edellä kerrotun valossa kaavan I mukaisilla aro-20 mataasi-inhibiittori-yhdisteillä voi olla käyttöä pitkälle kehittyneiden, hormonisidoksisten kasvainten, erityisesti esimerkiksi rinta-, munasarja-, kohtu- ja haimasyövän, hoidossa. Aromataasi-inhibitio-ominaisuuksiensa vuoksi kaavan I mukaisilla yhdisteillä voi olla käyttöä myös 25 prostatan hyperplasian, johon liittyy eturauhasen hyvän laatuinen suureneminen, hoidossa.

Lisäksi kaavan I mukaiset yhdisteet vähentävät est-radiolin muodostumista ja voivat siten olla käyttökelpoisia urosten hedelmällisyyshäiriöiden hoidossa (drugs 28 30 (1984) 263).

Kaavan I mukaisten yhdisteiden aikaansaama aromaa-si-inhibiitio määritettiin sekä in vitro (ihmisen istukan aromataasi) että in vivo (munasarjan aromataasiaktiivi-suus) rotilla.

35 Kaavan I mukaisten yhdisteiden todettiin olevan 10 84273 erityisen voimakkaita aromataasi-inhibiittoreita, erityisesti in vivo.

Aromataasi-inhibitio in vitro määritettiin seuraavasti : 5 Entsyymisysteemi eristettiin ihmisen istukkakudok sen mikrosomijakeesta tavanomaista menettelytapaa noudattaen. Käytettiin Thompsonin ja Siiterin määritystä [E. A. Thompson ja P.K. Siiteri, J. Biol. Chem. 249 (1974) 5364], jolla määritetään aromatisoitumisaste mitattuna 10 4-[1β,2β-3Η]androsteeni-3,17-dionista tapahtuvan 3H20:n va pautumisen perusteella. Kaikki inkuboinnit toteutettiin 37°C:ssa vesihauteessa, jota ravistettiin, ilmassa 10 mM kaliumfosfaattipuskurissa, pH 7,5, joka sisälsi 100 mmol/1 KCl:ä, 1 mmol/1 EDTAa ja 1 mmol/1 ditiotreitolia. Kokeet 15 suoritettiin 1 ml:n inkubointitilavuudella, johon sisältyi 50 nmol/1 4-[3H]androsteenidionia, vaihtelevia pitoisuuksia inhibiittoreita, 100 pmol/l NADPH:ta ja 0,05 mg mikrosomi-proteiineja. 15 minuutin inkuboinnin jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä kloroformia (5 ml). Kiihtyvyydellä 20 1500 x g suoritetun 5 minuutin sentrifugoinnin jälkeen vesifaasista erotettiin tasaosa (0,5 ml) muodostuneen 3H20:n määrittämistä varten. Se kunkin yhdisteen pitoisuus, joka vaaditaan vähentämään verta luaromataasiaktiivisuutta 50 % (IC50), määritettiin piirtämällä käyrä, joka esitti 25 prosentuaalisen inhibition inhibiittoripitoisuuden logaritmin funktiona. Kunkin yhdisteen suhteellinen voimakkuus yhdisteeseen 4-OH-A verrattuna laskettiin seuraavasti: 4-0H-A:n IC50

Suhteellinen voimakkuus = --------------- 30 Testiyhdisteen ICr,0

Aromataasi-inhibitio in vivo määritettiin rotilla seuraavaa menettelytapaa käyttäen: Täysikasvuisille naarasrotille annettiin kahdesti 4 35 vuorokauden välein ihon alle 100 ky tiineiden tammojen seerumin gonadotropiinia (PMSG) munasarjan aromataasiak-tiivisuuden lisäämiseksi, Brodien menetelmän mukaisesti 11 84273 [AMH Brodie et al., Steroids 38 (1981) 693]. Kolmen vuorokauden kuluttua toisesta PMSG-käsittelystä ryhmille, joissa kussakin oli 6 eläintä, annettiin suun kautta väliainetta (0,5 %:nen Methocel) tai inhibiittoria seuraavassa 5 taulukossa ilmoitetuina annoksina. 24 tuntia myöhemmin eläimet tapettiin, mikrosomit eristettiin munasarjoista, ja niiden aromataasiaktiivisuus määritettiin käyttäen samanlaista menetelmää kuin se, jota on kuvattu edellä in vitro aktiivisuuden arvioinnin yhteydessä. Inkuboinnit 10 suoritettiin 1 ml:n inkubointitilavuudella, johon sisältyi 0,1 mg mikrosomiproteiineja 100 nmol/1 4-[3H]-androstee-nidionia ja 100 pmol/l NADPH:ta, inkubointiajan ollessa 30 minuuttia. Laskettiin vertailuaromataasiaktiivisuuden prosentuaalinen inhibitio.

15 Vaikkakin kaavan I mukaiset yhdisteet ovat ehkä in vitro ainoastaan yhtä voimakkaita tai heikompia kuin ver-tailuyhdisteet, ne ovat kuitenkin voimakkaampia aromataa-si-inhibiittoreita in vivo.

Seuraava taulukko ilmoittaa esimerkiksi kaavan I 20 mukaisten yhdisteiden 6a-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni (sisäinen koodi FCE 24403) ja 6a-aminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni (sisäinen koodi FCE 24968) in vivo-vai-kutuksen verrattuna tunnettujen aromataasi-inhibiittorei-den 4-hydroksiandrosta-4-eeni-3,17-dioni (4-OH-A) [A.M.H. 25 Brodie, Cander Research (Suppl.) 42 (1982) 3312s], D-homo-17a-oksa-androsta-l,4-dieeni-3,17-dioni (testolaktoni) [A.M.H. Brodie, Cancer Research (Suppl.) 42 (1982) 3312s ja F.F. Covey ja W.F. Hood, Cancer Research (Suppl.) 42 (1982) 3327s] ja androsta-1,4-dieeni-3,17-dioni [D.F. Co-30 vey ja W.F. Hood,.Cancer Research (Suppl.) 42 (1982) 3327s] in vivo -vaikutukseen.

12 84273

Taulukko

Rotan munasarjan aromataasin inhibitio in vivo Yhdiste Annos Prosentuaalinen mg/kg aromataasi-inhi- 5 _p.o. bitio__ 4-hydroksiandrosta-4-eeni- 100 21 N.S.

3.17- dioni (4-OH-A) 30 7 N.S.

D-homo-17a-oksa-androsta- 30 2 N.S.

1,4-dieeni-3,17-dioni 10 (testolaktoni)

Androsta-1,4-dieeni-3,17- 30 37 * dioni βα-atsidoandrosta-l,4- 30 89 ** dieeni-3,17-dioni 10 81 ** 15 (FCE 24403) 6a-aminoandrosta-l,4-dieeni- 10 53 ** 3.17- dioni (FCE 24968) N.S = merkityksetön; * p < 0,05; ** p > 0,01 väliaineella käsiteltyyn ryhmään verrattuna 20

Vaikka yhdisteet FCE 24403 ja FCE 24968 ovat heikompia in vitro kuin esimerkiksi 4-OH-A, ne ovat erittäin tehokkaita, kun niitä annetaan in vivo suun kautta esimerkiksi 10 mg/kg, poikkeuksellisen maksametaboliaresistens-25 sin johdosta, kun taas 4-OH-A on tehoton jopa 10 kertaa suurempana annoksena (100 mg/kg).

Suurin haittapuoli käytettäessä 4-OH-A:ta terapeuttisesti syöpälääkkeenä naisilla on parenteraalisen annon tarve, sillä yhdiste konjugoituu voimakkaasti suun kautta 30 antamisen jälkeen (R.C. Coombs et ai.. Lancet II 1984, 1237) .

Tässä kuvattu uusi aromataasi-inhibiittoreiden ryhmä tarjoaa suuren parannuksen estrogeenisidoksista sairauksien, kuten ennen menopaussia esiintyvän ja menopaus-35 sin jälkeisen rintasyövän, munasarjasyövän, kohtusyövän.

i3 84273 haimasyövän, eturauhasen liikakasvun ja muiden estrogeeniin yhteydessä olevien sairauksien, oraaliseen hoitoon.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa monenlaisissa annostusmuodoissa, esimerkiksi suun kautta tab-5 lettien, kapseleiden, sokeri- tai kalvopäällysteisten tablettien, nestemäisten liuosten tai suspensioiden muodossa; rektaalisesti peräpuikkojen muodossa; parenteraalisesti, esimerkiksi lihakseen tai laskimoinjektiona tai -infuusio-na; tai paikallisesti.

10 Annostus riippuu potilaan iästä, painosta ja tilas ta sekä antotiestä; esimerkiksi aikuisille ihmisille suun kautta annettavaksi soveltuva annostus voi vaihdella noin 10 mg:sta/annos noin 200 mg:aan/annos 1-5 kertaa vuorokaudessa annettuna.

15 Kaavan I mukaisia yhdisteitä sisältävät farmaseut tiset koostumukset valmistetaan tavallisesti tavanomaisin menetelmin ja annetaan farmaseuttisesti sopivassa muodossa.

Esimerkiksi kiinteät, suun kautta annettaviksi tar-20 koitetut muodot voivat sisältää yhdessä vaikuttavan yhdisteen kanssa laimennusainetta, esimerkiksi laktoosia, dekstroosia, sakkaroosia, selluloosaa, maissitärkkelystä tai perunatärkkelystä; liukastusaineita, esimerkiksi sili-kaa, talkkia, steariinihappoa, magnesium- tai kalsiumstea-25 raattia ja/tai polyetyleeniglykoleja; sideaineita, esi merkiksi tärkkelyksiä, arabikumeja, gelatiinia, metyyli-selluloosaa, karboksimetyyliselluloosaa tai polyvinyyli-pyrrolidonia; aggregoitumista estäviä aineita, esimerkiksi tärkkelystä, algiinihappoa alginaatteja tai natrium-30 tärkkelysglykolaattia; poreseoksia; väriaineita, makeutus- aineita, kostutusaineita, kuten lesitiiniä, polysorbaatte-ja tai lauryylisulfaatteja; ja yleensäkin sellaisia myrkyttömiä ja farmakologisesti tehottomia aineita, joita käytetään farmaseuttisissa formuloissa.

35 Mainittuja farmaseuttisia valmisteita voidaan val mistaa tavanomaisella tavalla, esimerkiksi rakeistus-, 14 84273 tabletointi-, sekoitus-, sokeripäällystys- tai kalvo-päällystysprosesseja käyttäen.

Suun kautta annettaviksi tarkoitetut nestemäiset dispersiot voivat olla esimerkiksi siirappeja, emulsioita 5 tai suspensioita. Siirapit voivat sisältää kantaja-aineena esimerkiksi sakkaroosia tai sakkaroosia sekä glyserolia ja/tai mannitolia ja/tai sorbitolia; erityisesti sokeri-tautipotilaille annettavaksi tarkoitettu siirappi voi sisältää kantaja-aineina ainoastaan tuotteita, jotka eivät 10 metaboloidu glukoosiksi tai metaboloituvat vain hyvin pie nessä määrin glukoosiksi, esimerkiksi sorbitolia. Suspensiot ja emulsiot voivat sisältää kantaja-aineena luonnon kumia, agaria, natriumalginaattia, pektiiniä, metyylisel-luloosaa, karboksimetyyliselluloosaa tai polyvinyylialko-15 holia.

Lihaksensisäisiin injektioihin tarkoitetut suspensiot ja liuokset voivat sisältää yhdessä vaikuttavan yhdisteen kanssa jotakin farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta, esimerkiksi steriiliä vettä, oliiviöljyä, 20 etyylioleaattia, glykoleja, esim. propyleeniglykolia, ja haluttaessa sopivan määrän lidokaiinihydrokloridia.

Laskimoinjektioihin tai -infuusioihin tarkoitetut liuokset voivat sisältää kantaja-aineena esimerkiksi steriiliä vettä, tai ne voivat edullisesti olla steriilien, 25 että sisältävien, isotonisten suolaliuosten muodossa.

Peräpuikot voivat sisältää yhdessä vaikuttavan yh disteen kanssa jotakin farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta, esimerkiksi kaakaovoita, polyetyleeniglyko-lia, pinta-aktiivista polyoksietyleenisorbitaanirasvahap-30 poesteriä tai lesitiiniä.

Paikallisesti käytettävät koostumukset, kuten voiteet, maidot ja tahnat, voidaan valmistaa esimerkiksi sekoittamalla vaikuttava aineosa tavanomaiseen rasvaiseen tai emulgoivaan täyteaineeseen.

35 Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.

15 84273

Esimerkki 1

Liuosta, joka sisältää 10 g androsta-1,4-dieeni- 3,17-dionia 95 ml:ssa hiilitetrakloridia, refluksoidaan 6,4 g:n kanssa N-bromisukkinimidiä ja 0,4 g:n kanssa bent-5 soyyliperoksidia 75 minuuttia. Sukkinimidin suodattamisen jälkeen suodosta jäähdytetään, kunnes kiteytyminen on täydellistä. Sen jälkeen seos suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 9,8 g seuraavaan vaiheeseen kelpaavaa puhdis-tamatonta 6-bromiandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia. Analyy-10 sinäyte kiteytetään dietyylieetterin ja n-heksaanin seoksesta; sp 188-190°C; [a]^0’ = +116°; UV (95 %:nen EtOH): max = 250 nm-

Esimerkki 2

Liuokseen, joka sisältää 6B-bromiandrosta-l,4-di-15 eeni-3,17-dionia (5,0 g) 250 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 1,15 g jauhettua natriumatsidia liuotettuna 14 ml:aan vettä, ja seos lämmitetään 100°C:seen ja pidetään kyseisessä lämpötilassa 120 minuuttia sekoittaen samalla. Koko seos kaadetaan sitten 1 litraan vettä, ja seos uute-20 taan neljällä 200 ml:n erällä etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutteet pestään natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella ja kuivataan. Sen jälkeen liuotin poistetaan alipaineessa, jolloin saadaan raakatuotetta, joka puhdistetaan kromatografisesta käyttäen adsorbenttina Al203:a (aktiivisuus-25 luokka neutraali) ja eluenttina etyyliasetaatin ja n-heksaanin seosta suhteessa 40:60, jolloin saadaan 3,4 g puhdasta 6a-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia. Analyysi-näyte kiteytetään metanolista, sp 168-170°C; [a]*0 = +93,2° (c = 1, CHC13); 30 UV (95 %: nen EtOH): max = 244 nm, = 17420; NMR (CDC13) δ : 0,98 (3H s), 1,3 (3H, s), 4,31 (H, ddd), 6,44 (1H, dd), 6,26 (1H, dd), 7,02 (1H, d).

Vastaavaa menettelytapaa noudattaen voidaan valmistaa 66-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni käyttäen 35 lähtöaineena 6a-bromiandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia.

16 84273

Esimerkki 3

Liuokseen, joka sisältää 66-metaanisulfonyloksi-androsta-1,4-dieeni-3,17-dionia (3,0 g) 150 ml:ssa dime-tyyliformamidia, lisätään 0,67 g natriumatsidia liuotet-5 tuna 8,5 ml:aan vettä, ja seos lämmitetään 100°C:seen ja pidetään kyseisessä lämpötilassa 90 minuuttia sekoittaen samalla. Koko seos kaadetaan 600 ml:aan vettä ulkopuolelta samalla jäähdyttäen ja uutetaan neljällä 150 ml:n erällä etyyliasetaattia. Yhdistetyt uutteet pestään natrium-10 kloridin kylläisellä vesiliuoksella mahdollisesti jäljellä olevan dimetyyliformamidin poistamiseksi ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistetaan sitten alipaineessa, jolloin saadaan raakatuotetta, joka puhdistetaan kromatografisesti käyttäen absorbenttina Al203:a 15 (aktiivisuusluokka neutraali) ja eluenttina etyyliasetaa tin ja n-heksaanin seosta suhteessa 40:60, jolloin saadaan 1,95 g puhdasta 6a-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia, sp 167-169°C; [a]*0’ = +92,8° (c = 1, CHC13).

Vastaavalla tavalla voidaan saada aikaan 6(α,β)-20 atsidoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dioni.

Esimerkki 4

Seokseen, joka sisältää 6a-atsidoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia (0,61 g) tetrahydrofuraanissa (3 ml) ja jota sekoitetaan, lisätään trifenyylifosfiinia (0,79 25 g). Typen kehittymisen lakattua reaktioseos laimennetaan vedellä (1 ml), ja sitä refluksoidaan 24 tuntia. Jäähdytetty reaktioseos kaadetaan HCl:n 1 N vesiliuokseen (50 ml), ja seos pestään metyleenikloridilla. Vesikerroksen pH säädetään arvoon 10 NaOH:n vesiliuoksella, ja se uutetaan 30 perusteellisesti metyleenikloridilla. Orgaaninen faasi kuivataan CaCl2:lla ja haihdutetaan alipaineessa, jolloin saadaan keltaista vaahtoa (0,44 g), joka liuotetaan di-etyylieetteriin (30 ml) ja käsitellään HCl-kaasulla. Syntyvä sakka erotetaan suodattamalla ja kuivataan, ja sille 35 suoritetaan partitio metyleenikloridin ja NaOH:n 2 N ve- 17 84273 siliuoksen kesken. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan CaCl:lla ja haihdutetaan alipaineessa, jolloin saadaan 6a-aminoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dionia (0,40 g), sp 186- 191°C; 5 NMR (CDC13) δ : 0,93 (3H, s), 1,25 (3H, s), 3,71 (1H, ddd) , 6,26 (1H, dd), 6,39 (1H, dd), 7,01 (1H, d), IR (KBr): 3450, 3380, 3000, 2940, 2860, 1730, 1655, 1615, 1600 cm'1.

Vastaavalla tavalla voidaan valmistaa 6B-aminoand-10 rosta-1,4-dieeni-3,17-dioni ja myös 6(α,β)-aminoandrosta- 1,4-dieeni-3,17-dioni.

Esimerkki 5

Liuokseen, joka sisältää 6a-aminoandrosta-l,4-di-eeni-3,17-dionia (1,4 g) 5,5 ml:ssa kuivaa pyridiiniä ja 15 jota sekoitetaan, lisätään pisaroittain huoneen lämpötilassa 2,8 ml etikkahappoanhydridiä. Liuosta sekoitetaan 90 minuuttia, ja sen jälkeen jäähdytettyyn (0°C:seen) liuokseen lisätään pisaroittain vettä. 10 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos uutetaan viidellä 100 ml:n eräl-20 lä etyyliasetaattia, jotka kerätään yhteen ja kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistetaan sitten alipaineessa, jolloin saadaan raakatuotetta, joka puhdistetaan kromatografisesti käyttäen adsorbenttina silika-geeliä, jolloin saadaan 1,30 g puhdasta 6a-asetyyliamino-25 androsta-1,4-dieeni-3,17-dionia, NMR (CDCI3) δ : 2,03 (3H, s), 4,20 (1H, m), 6,25 (1H, dd), 6,45 (1H, ddd), 6,50 (1H, m), 7,01 (1H, dd).

Vastaavaa menettelytapaa noudattaen ja asianmukaista anhydridiä tai asyylikloridia käyttäen voidaan valmis-30 taa seuraavat 6-asyyliaminojohdannaiset: 6a-propionyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6a-formyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6B-asetyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6B-propionyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 35 6B-formyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, is 84273 ja kaikkien edellä mainittujen yhdisteiden 6(α,β)-seokset. Esimerkki 6 Jäähdytettyyn (0°C:seen) liuokseen, joka sisältää 6a-aminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia (1,2 g) CH2Cl2:ssa 5 (20 ml) ja jota sekoitetaan, lisätään pisaroittain tri- etyyliamiinia (1,1 ml) ja dimetyylikarbamoyylikloridia (0,6 ml). Lisätään myös katalyyttinen määrä 4-dimetyyli-aminopyridiiniä, ja seosta pidetään 0°C:ssa 3 tuntia, jonka jälkeen sen annetaan lämmetä huoneen lämpötilaan. Reak-10 tioseos laimennetaan etyyliasetaatilla, ja seos pestään muutamaan kertaan vedellä ja sen jälkeen kylläisellä nat-riumkloridiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, ja liuotin poistetaan alipaineessa, jolloin saadaan raakatuotetta, joka puhdistetaan 15 flash-kromatografiakäsittelyllä, jolloin saadaan 1,05 g puhdasta 6α-(Ν',N'-dimetyylikarbamido)androsta-l,4-di-eeni-3,17-dionia, NMR (CDClj) 6: 2,95 (6H, s), 4,22 (1H, m), 6,26 (1H, dd), 6,43 (1H, ddd), 6,48 (1H, m), 7,02 (1H, d).

20 Samaa menetelmää noudattaen ja dietyylikarbamoyyli- kloridia käyttäen saadaan aikaan 6α-(Ν',N'-dietyylikarb-amido)androsta-l,4-dieeni-3,17-dioni.

Vastaavaa menettelytapaa noudattaen voidaan valmistaa seuraavat yhdisteet: 25 6a-etoksikarbonyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni , 6a-metaanisulfonyyliaminoandrosta-l, 4-dieeni-3,17-dioni , 6a- ( p-tolueenisulfonyyli)aminoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dioni , 6B-etoksikarbonyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 30 63-metaanisulfonyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 63-(p-tolueenisulfonyyli)aminoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dioni , ja kaikkien edellä mainittujen yhdisteiden 6(a,3)-seokset. Esimerkki 7 35 Kuivaan, typellä huuhdottuun pulloon laitetaan ksy- ie 84273 leeniä (10 ml) ja trietyyliboraania (10 mmol). Liuos, jota sekoitetaan, kuumennetaan kiehuvaksi palautusjäähdyttäjän alla, ja sitten siihen lisätään 6a-atsidoandrosta-l,4-di-eeni-3,17-dionia. Typen kehittymisen lakattua liuos jääh-5 dytetään, siihen lisätään 30 ml dietyylieetteriä, ja amiini uutetaan suolahapon 6N vesiliuoksella. Vesifaasi pestään dietyylieetterillä. Liuos tehdään sitten emäksiseksi natriumhydroksidilla, ja amiini uutetaan neljällä 200 ml: n erällä etyyliasetaattia, jotka kerätään yhteen ja kuiva-10 taan vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistetaan alipaineessa, jolloin saadaan raakatuotetta, joka puhdistetaan flash-kromatografiakäsittelyllä, jolloin saadaan 2,45 g puhdasta 6a-etyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia; 15 NMR (CDC13) 6: 1,02 (3H, d), 2,54 (2H, m), 3,65 (1H, m), 6,27 (1H, dd), 6,40 (1H, ddd), 7,03 (1H, d).

Vastaavaa menettelytapaa noudattaen voidaan valmistaa seuraavat yhdisteet: 6a-metyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 20 6ö-metyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, öS-etyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, 6a-propyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni, ja 6B-propyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dioni.

Esimerkki 8 25 Liuokseen, joka sisältää 0,65 g 6a-aminoandrosta- 1,4-dieeni-3,17-dionia 30 ml:ssa etanolia, lisätään 21,71 ml HCl:n 0,1 N vesiliuosta. Keltainen liuos tehdään värittömäksi, jonka jälkeen se suodatetaan ja alkoholi poistetaan alennetussa paineessa. Tuloksena oleva vesiliuos 30 kylmäkuivataan, jolloin saadaan 0,7 g kuivaa 6c/-aminoand-rosta-1,4-dieeni-3,17-dionihydrokloridia kellertävänä jauheena.

Vastaavaa menettelytapaa noudattaen valmistetaan esimerkkien 4, 7 ja 9 mukaisesti valmistettujen 6-amino-35 johdannaisten hydrokloridit.

Samalla tavalla voidaan valmistaa kaikkien, samois- 20 84273 sa esimerkeissä 4, 7 ja 9 mainittujen yhdisteiden rikkihappo-, fosforihappo-, sitruunahappo-, fumaarihappo-, me-ripihkahappo-, omenahappo- ja viinihapposuolat.

Esimerkki 9 5 30 ml:aan kuivaa bentseeniä liuotetaan astiassa, joka on jäähdytetty 5°C:seen ulkopuolisella jäähauteella, bentsaldehydiä (0,166 g) ja 6a-aminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia (0,299 g), seosta sekoitetaan sitten 2 tuntia huoneen lämpötilassa, liuotin poistetaan tislaamalla, ja 10 epäpuhdas jäännös puhdistetaan kiteyttämällä se etyyliasetaatin ja n-heksaanin seoksesta. N-bentsylideeni-6-ami-noandrosta-1,4-dieeni-3,17-dionia kuumennetaan 1,56 g: n kanssa metyylijodidia paineastiassa 100°C:ssa 24 tuntia, ja tumma öljy kaadetaan 50 ml:aan jäävettä. Tuloksena ole-15 va seos pestään dietyylieetterillä, ja vesifaasia kuumennetaan sitten 100°C:ssa 20 minuuttia, siihen lisätään 0,10 g natriumhydroksidia ja lämmittämistä jatketaan 2 tuntia samalla sekoittaen. Seos jäähdytetään ja uutetaan etyyliasetaatilla, liuotin poistetaan alipaineessa, ja jäännös 20 puhdistetaan kromatografisesti, jolloin saadaan 0,15 g puhdasta 6a-metyyliaminoandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia.

Vastaavalla tavalla voidaan saada aikaan 66-metyy-liaminoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dioni ja 6(α,β)-metyyli-aminoandrosta-1,4-dieeni-3,17-dionia.

25

Claims (7)

1. 21 84273 Patenttivaatimus Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 6-substituoitujen androsta-1,4-dieeni-5 3,17-dionijohdannaisten ja niiden isomeerien ja farma seuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, 10 m f jossa R on R 15 (1) -N3; (2) ryhmä ' jossa toinen symboleista Rt ja R2 ^R2 on vety ja toinen on vety tai substituoimaton C^-al-20 kyyli; (3) ryhmä -NHC0R3, jossa R3 on (a) vety, (b) substituoimaton C^-alkyyli, tai 25 (c) ryhmä -N^ , jossa R3 ja R2 tarkoittavat ^ r2 samaa kuin edellä, tunnettu siitä, että (A) yhdiste, jonka kaava on 30 O L 35 (ii) 22 8 4 2 7 3 jossa L on nukleofiilisellä substituutiolla korvattavissa oleva poistuva ryhmä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on
2. 5 M - N3 (III) jossa M on alkalimetalli- tai ammoniumkationi tai trial-kyylisilyyliryhmä, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on -N3, tai 10 (B) kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on -N3, pelkistetään kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R on ryhmä -N , jossa Rx ja R2 tarkoittavat samaa kuin 15 edellä, tai (C) kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä /R‘ -N , jossa R3 ja R2 tarkoittavat kumpikin vetyä, 20 alkyloidaan, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa toinen symboleista R3 ja R2 on vety ja toinen on substituoimaton C1.4-alkyyli, tai (D) kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä /^Rl
3. 25 -N , jossa R3 ja R2 tarkoittavat kumpikin vetyä, ^2 asyloidaan asylointiaineella, joka sisältää ryhmän -C0R3, jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on ryhmä -NHC0R3, 30 jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä; ja haluttaessa saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muutetaan suolaksi tai kaavan (I) mukaisen yhdisteen suola muutetaan vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukaisten isomeerien seos 35 jaetaan yksittäisiksi isomeereikseen. 23 84273 Förfarande för framställning av nya terapeutiskt användbara 6-substituerade androsta-1,4-dien-3,17-dionde-5 rivat med formeln I och isomerer och farmaceutiskt godtag-bara salter därav, 0
4. 10 I <x> R 15 väri R är (1) -N3; (2) en grupp -N , där den ena av symbolerna R3
5. 20. R2 och R2 är väte och den andra är väte eller en icke-substi-tuerad C1.4-alkyl; (3) en grupp -NHCOR3 där R3 'är (a) väte, 25 (b) en icke-substituerad Cj_4-alkyl, eller Ri (c) en grupp -N , där R3 och R2 be- ^ r2 tecknar sarama som ovan, 30 kännetecknat därav, att (A) en förening med formeln 0 L
6. 35. UI) 24 84273 där L är en avgäende grupp, som kan ersättas medelst nuk-leofil substitution, omsätts med en förening med formeln M - N3 (III) 5 där M är en alkalimetall- eller ammoniumkatjon eller tri-alkylsilylgrupp, varvid erhälls en förening med formeln I, där R är -N3, eller (B) en förening med formeln (I), där R är -N3, redu-10 ceras tili en förening med formeln I, där R är en ^Ri grupp -N , där R3 och R2 betecknar samma som ovan, ^ R2 eller 15 (C) en förening med formeln I, där R är en grupp ^Ri -N , där Rj och R2 bäda betecknar väte, alkyleras, R2 varvid erhälls en förening med formeln I, där den ena av 20 symbolerna Rx och R2 är väte och den andra är en icke-subs-tituerad C^-alkyl, eller (D) en förening med formeln I, där R är en grupp Ri -N , där Rx och R2 bäda betecknar väte, acyleras med
7. 25 R2 ett acyleringsmedel, som innehäller en grupp -C0R3, där R3 betecknar samma som ovan, varvid erhälls en förening med formeln I, där R är en grupp -NHC0R3, där R3 betecknar samma som ovan; 30 och, om sä önskas, omvandlas en erhällen förening med formeln I tili ett sait eller omvandlas ett sait av en förening med formeln I tili en fri förening med formeln I och/eller, om sä önskas, uppdelas en blandning av isomerer med formeln I i enskilda isomerer. 35