FI83517B - Foerfarande foer framstaellning av hoegervridande optisk isomer av (+-)-2,6-dimetyl-4-(m-nitrofenyl)-1,4 -dihydropyridin-3,5-dikarboxylsyra-3-(1-bensylpyrrolidin-3-yl) ester -5-metylester (ym-09730) av a-diastereomer. - Google Patents

Description

1 83517 (±)-2,6-dimetyyli-4-(m-ni trofenyyli)-1,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyylihappo-3-(l-bentsyylipyrrolidin-3-yyli)esteri-5-metyy1iesterin (YM-09730) A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin valmistusmenetelmä - Förfarande för fram-ställning av högervridande optisk isomer av (±)-2,6-dimetyl- 4-(m-nitrofenyl)-l,4-dihydropyridin-3,5-dikarboxy1syra-3-(1-bensylpyrrolidin-3-yl)ester-5-metylester (YM-09730) av A-diastereomer Tämän keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokasta (+_)-2,6-dimetyyl i-4-(m-ni trof enyyl i )-1,4-dihydropyridiini -3,5-dikarboksyylihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrol idin-3-yyli)esteri-5-metyyli-esterin A-diastereoisomeerin (I) f^”02 (I) H3COOC ,>/^,000 -1-f ΪΙ Ό oikealle kääntävää optista isomeeriä, jonka hydrokloridin sulamispiste on 223 - 230°C (hajoaa) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa. Tämä isomeeri on hyödyllinen verisuonia laajentavana aineena.

2,6-dimetyyli-4-(m-nitrofenyyli)-1,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyyl ihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)esteri-5-metyyliesterillä (YM-09730) ilmoitetaan olevan verisuonia laajentava aktiivisuus ja verenpainetta alentava aktiivisuus ja samalla pitkä vaikutusaika (US-patentti 4.220.649).

2 83517 ΥΜ-09730-yhdisteessä on kaksi asymmetristä hiiliatomia. Näihin asymmetrisiin hiiliatomeihin perustuen uskotaan stereokemian kannalta isomeerien olemassaoloon. Isomeerien mukanaoloa ei kuitenkaan ole todistettu, koska mainitussa julkaisussa ei ole kuvattu näitä isomeerejä.

Esillä olevan keksinnön keksijät ovat havainneet, että A-diastereomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri, jonka hydrokloridin sulamispiste on 223 - 230°C (hajoaa), voidaan valmistaa menetelmällä, jossa saatetaan reagoimaan m-nitro-bentsa1dehydi, 1-bentsyyli-3-asetoasetoksipyrrolidiini ja metyyli-3-aminokrotonaatti, näin saatu YM-09730 pyiväskromato-grafoidaan käyttämällä kantajana silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaatti-etikkahappoa A-diastereomeerin erottamiseksi ja sen jälkeen erotetaan A-diastereomeeri optisesti käyttämällä L-(-)-maleiinihappoa. Näin saadulla isomeerillä on paljon paremmat ja erilaiset farmakologiset ominaisuudet kuin vasem-. malle kääntävällä optisella isomeerillä tai näiden kummankin isomeerin seoksella (Eurooppa-patenttihakemus nro 85302666.4).

YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin tämän uuden ja hyödyllisen oikealle kääntävän optisen isomeerin valmistusmenetelmää tutkittaessa on löydetty menetelmä, jolla voidaan parantaa halutun isomeerin saantoa ja joka muodostaa esillä olevan keksinnön.

A-diastereomeeri (dl-seos), jonka hydrokloridin sulamispiste ;· on 200 - 206°C (hajoaa), voidaan selvästi erottaa B-diastereo-. meerista, jonka hydrokloridin sulamispiste on 180 - 185°C (hajoaa).

Edellä jo mainittiin, että A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridin sulamispiste on 223 - 230°C (hajoaa). Esillä oleva keksintö tuo esiin uuden menetelmän 3 83517 valmistaa YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin hydrokloridinsa mainitun sulamispisteen avulla määriteltyä, oikealle kääntävää optista isomeeriä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa.

Tässä yhteydessä tarkoitettu farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola voi olla orgaanisen hapon suola, kuten L-(-)-maleaatti jne. ja mineraalihapon suola, kuten hydro-kloridi jne.

Esillä olevan keksinnön mukainen A-diastereomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri (I) voidaan valmistaa saattamalla kaavan (II) mukainen 5-metoksikarbonyyli-2,6-dimetyyli-4-(m-nitrofenyyli)-l,4-dihydropyridiini-3-karboksyylihapon vasemmalle kääntävä, optinen isomeeri tai rasemaatti n°2 JL (II>

H3COOC COOH

H3C H CH3 tai sen reaktiivinen johdos reagoimaan kaavan (III) mukaiSen bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinin vasemmalle kääntävän odh lsen isomeerin tai rasemaatin kanssa

HO

U

N

ch2^3 4 83517 Tässä reaktiossa muodostuu karboksyylihappoesteri ja tällöin voidaan käyttää yleisesti sovellettavissa olevia menetelmiä. Tässä reaktiossa ei tapahdu mitään stereokemial1ista inversiota. Yhdisteen (II) reaktiivisesta johdoksesta ovat esimer-kejä happohalogenidi, kuten happokloridi, happobromidi jne.; happoanhydridi, seka-happoanhydridi, aktiivinen esteri ja vastaava. Siinä tapauksessa, että yhdistettä (II) käytetään vapaana karboksyylihappona, reaktio suoritetaan kondensointi-aineen, kuten disykloheksyylikarbodi-imidin jne. läsnäollessa.

Reaktio suoritetaan edullisesti orgaanisessa 1iuottimessa, kuten metyleenikloridissa, dimetyy1iformamidissa jne. jäähdyttäen tai huoneen lämpötilassa.

Kun molemmat lähtöaineet, yhdiste (II) ja (III) ovat vasemmalle kääntäviä optisia isomeerejä, reaktiotuote muodostuu oleellisesti vain A-diastereomeerin oikealle kääntävästä optisesta isomeeristä. Isomeeri voidaan tarvittaessa eristää tavalliseen . . tapaan reaktioseoksesta, kuten uuttamalla, väkevöimällä jne. tai pyiväskromatograafisesti. Kun ainakin toinen yhdisteistä (II) ja (III) on rasemaatti, saatu reaktioseos sisältää A-diastereomeerin haluttua oikealle kääntävää optista isomeeriä sekä sen vasemmalle kääntävää optista isomeeriä B-diastereomeerin vasemmalle tai oikealle kääntäviä isomeerejä. Haluttua isomeeri voidaan eristää reaktioseoksesta pyiväskromatograafisesti tai fraktiokiteyttämäl1ä.

YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen . isomeerin ja vasemmalle kääntävän optisen B-isomeerin saatu seos voidaan esimerkiksi pyiväskromatografoida käyttämällä kantajana silikageelia ja eluenttina etyyliasetaatti-etikka-happoa, minkä avulla voidaan seoksesta erottaa yhdisteen YM-09730 A-diastereomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri. Seos saatetaan vaihtoehtoisesti reagoimaan L-(-)-maleiinihapon 5 83517 kanssa ja B-diastereomeerin vasemmalle kääntävän optisen isomeerin näin saadut L-(-)-maleaatit fraktiokiteytetään niin, että saadaan A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-maleaatti.

Pyiväskromatograafisesti erotettaessa saadaan A-diastereomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri ensimmäisestä eluaatista ja B-diastereomeerin vasemmalle kääntävä optinen isomeeri myöhemmässä eluaatista. Kantajana käytettyä silika-geelia ei ole millään tavoin rajoitettu, mikäli sitä on yleisesti käytetty pyiväskromatografiässä. Etyyliasetaatin ja etikkahapon eluenttina käytetyn seoksen sekoitussuhdetta ei ole myöskään erityisesti rajoitettu, mutta yleensä on suositeltavaa, että pääkomponenttina käytetään etyyliasetaattia ja sen kanssa sekoitetaan pieni määrä etikkahappoa. Sekoitussuhde on edullisesti noin 1-10 v/v etikkahappoa ja 30 - 50 v/v etyyliasetaattia. Kun sekoitetun etikkahapon määrää pienennetään, kasvaa halutun komponentin eluoimiseen tarvittava aika.

Käsittelyn eluoitumisnopeus ja lämpötila voidaan valita sopivalla tavalla.

Menetelmää, jossa käytetään L-(-)-maleiinihappoa, voidaan toisaalta soveltaa myös A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin fraktiokiteyttämällä tapahtuvassa erottamisessa, koska A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-maleaatti on kiteinen. Fraktiokiteytyksessä käyttökelpoisina liuottiminia voidaan mainita metanoli, etanoli, asetoni, asetonitrii1i jne.

. . A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin näin saatua L-(-)-maleaattia voidaan käyttää sellaisenaan lääkkeinä, mutta tämän isomeerin asetaatti tai vastaava voidaan valinnaisesti käsitellä emäksellä niin, että muodostuu vapaa muoto, 6 83517 josta saadaan sopivia muita suoloja käsittelemällä sopivalla hapol1 a.

YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditio-suolat, jotka ovat esillä olevan keksinnön mukaisia kohdeyhdis-teitä, ovat uusia yhdisteitä, joita ei ole kuvattu missään julkaisussa. Niiden pinta-alasuhde on noin 40 kertaa suurempi kuin vasemmalle kääntävällä optisella isomeerillä (1-muoto) ja 2,5 kertaa suurempi kuin kummankin isomeerin (dl-muoto) vastaavalla seoksella, kun sydämen verenvirtausta lisätään antamalla suoraan sydänvaltimoihin. Niillä on lisäksi suuri affiniteetti sydänvaltimoon.

Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin oikealle kääntävää optista isomeeriä, joka on uusi ja hyödyllinen, valmistaa selektiivisesti hyvällä saannolla. Menetelmä on erittäin käyttökelpoinen teolliselta kannalta.

Seuraavan kokeen avulla on havainnollistettu keksinnön mukaan saadun ja tunnettujen yhdisteiden farmakologisia aktiivisuuksia.

Sydämen verisuonia laajentava vaikutus anestetisoidui11 a koi ri11a:

Koirissa, joiden rintakehät oli avattu ja jotka oli anesteti-soitu 30 mg/kg i.v. pentobarbitaalinatriumi11 a, johdettiin karotidivaitimosta valtimoverta vasemman sydänvaltimon kierto-haaraan kehonulkoi sen silmukan avulla. Hiiriin liitettiin servosäädetty pumppu (malli 1215D, Harvard Apparatus) pitämään 120 mmHg perfuusiopaine vakiona pumpun säätölaitteen avulla (SCS-22, Data Graph Co., Tokuya Tukada et ai., Folia Pharmacol.

7 83517

Japon, 74., 49, 1978). Sydämen verivirran tallentamiseksi piiriin laitettiin myös kehon ulkopuolista tyyppiä oleva sähkömagneettinen virtauselektrodi (MF-25, Nihon Koden). Testattavaa yhdistettä annettiin 1 pm annoksena suoraan sydänvaltimoon ja sen jälkeen seurattiin verenvirtausta sydämessä, kunnes verenvirtaus palautui käsittelyä edeltävään arvoon. Laskettiin pinta-ala käyrän, joka esitti prosentuaalista verenvirtauksen lisäystä sydämessä sydämensisäisen ruiskeen jälkeen, alla ja tätä arvoa käytettiin indeksinä verenvirtauksen kokonaiskasvusta sydämessä. Tulokset on esitetty taulukossa 1.

Taulukko 1

Sydämen verisuonia laajentava aktiivisuus anestetisoidui11 a koi ri11 a

Veren virtauksen kokonaiskasvu sydämessä 1 pg annoksella (%, min.) Vaikutusaika A-diastereoisomeeri (d-muoto)-hydrokloridi 4559 ± 894 120 A-diastereoisomeeri (1-muoto)-hydrokloridi 120 ±21 5

Diastereoisomeerien A (dl-muoto) ja B (dl-muoto) hydrokloridien 1:1 seos 129 + 47 10 A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän isomeerin aiheuttama sydämen verivirtauksen kokonaiskasvu oli noin 35 kertaa korkeampi kuin kasvu, jonka aiheutti A- ja B-isomeerien seoksen yhtä suuret annokset. Tämä osoittaa, että optinen A-isomeeri11 a 8 83517 on suurempi affiniteetti sydänvaltimoon. Lisäksi A-diastereo-isomeerin oikealle kääntävän isomeerin sydämen verisuonia laajentava vaikutus oli kestoajaltaan selvästi pidempi kuin käytettäessä A- ja B-diastereoisomeerien seosta. Tällainen suuri affiniteetti sydänvaltimoon nähden ja pitkä kestoaika osoittavat, että A-isomeeri-hydrokloridi on hyödyllinen hoidettaessa sydämen vaitimotautia, kuten angina pectorista.

Jäljempänä esillä olevaa keksintöä on kuvattu yksityiskohtaisemmin esimerkkeihin viitaten. Esillä olevassa keksinnössä käytetyt puhdistamattomat yhdisteet (II) ja (III) ovat tunnettuja yhdisteitä; esillä olevan keksinnön mukaisessa sovellu-tuksesa nämä puhdistamattomat yhdisteet voidaan kuitenkin valmistaa uusilla hyödyllisillä menetelmillä, joita on esitetty vertai 1uesimerkeissä.

Vertai 1uesimerkki 1 (1) Liuosta, joka sisälsi 6,04 g m-nitrobentsa1dehydiä, 5,32 g tert-butyyliasetoasetaattia, 0,17 g piperidiiniä ja 0,6 ml etikkahappoa 20 mltssa bentseeniä, kuumennettiin refluksoiden 6 tuntia käyttämällä aseotrooppiseen vedenpoistoon tarkoitettua laitetta. Jäähdyttämisen jälkeen lisättiin 10 ml vettä ja bentseenikerros fraktioitiin. Bentseenikerros pestiin peräkkäin natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja natrium-kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, minkä jälkeen bentseenikerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, minkä jälkeen saatu jäännös pyiväskromatografoitiin si 1ikageeli11ä. Kiteet, jotka oli saatu n-heksaani:etyy1iasetaati11 a (5:1 tilavuussuhde) . eluoidusta osasta, pestiin n-heksaani11 a. Näin saatiin 5,82 g tert-butyyli 2-(m-nitrobentsy1ideeni)asetoasetaatin geometristen isomeerien seosta värittöminä kiteinä.

Sulamispiste: 33 - 36°C

9 83517 (2) Seosta, joka sisälsi 3,56 g kohdassa (1) saatua t-butyyli 2- (m-nitrobentsylideeni)asetoasetaattia ja 1,41 g metyyli 3- aminokrotonaattia 7 ml:ssa tert-butanolia, kuumennettiin refluksoiden 20 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa. Näin saatu öljymäinen jäännös käsiteltiin n-heksaa-nilla, jolloin saatiin 4,6 g haluttua 2,6-dimetyyli-4-(m-nitro-fenyyli)-1,4-dihydropyridi ini-3,5-dikarboksyy1ihappo-3-tert-butyyliesteri-5-metyyliesteriä.

Sulamispiste: 120 - 122°C

(3) 2,5 g kohdassa (2) saatua 2,6-dimetyyli-4-(m-nitrofenyyli)- l,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyy1ihappo-3-tert-butyyli- esteri - 5-metyy1iesteriä 5 ml:ssa tolueenia lisättiin tipottain 5 ml:aan 25-prosenttista bromivedyn jäävedellä jäähdytettyä liuosta etikkahapossa. Seosta sekoitettiin 5 minuuttia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen seos kaadettiin 50 ml:aan jäävettä. Seos tehtiin alkaliseksi 10-prosenttisel1 a natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin tolueenilla. Vesikerros tehtiin happameksi väkevällä suolahapolla ja saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla. Kiteet pestiin eetterillä, jolloin saatiin 1,24 g haluttua 5-metoksikarbonyyli-2,6-dimetyyli-4-(m-nitro-fenyyli)1,4-dihydropyridiini-3-karboksyy1ihappoa (rasemaatti).

Sulamispiste: 203 - 204°C (hajoaa).

Vertai 1uesimerkki 2

Liuosta, joka sisälsi 55 g m-nitrobentsaldehydiä, 5,75 g metyyli 3-aminokrotonaattia ja 7,90 g tetr-butyy1iasetoasetaat-tia 25 ml:ssa tert-butanolia, kuumennettiin 22 tuntia refluksoiden. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, minkä jälkeen saatu jäännös liuotettiin 150 ml:aan tolueenia. Liuos pestiin peräkkäin 10-prosenttisel1 a suolahapolla, natriumvety-karbonaatin kyllästetyllä vesi 1uoksel1 a ja natriumkloridin 10 8351 7 kyllästetyllä vesiliuoksella ja liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, jolloin saatiin 19,62 g öljymäistä ainetta. Tämä öl jy-mäinen aine liuotettiin 20 ml:aan tolueenia ja liuos lisättiin jäissä jäähdyttäen ja tipottain 20 mlraan 25-prosenttista vety-bromidia etikkahapossa. Seos sekoitettiin 5 minuuttia samassa lämpötilassa, minkä jälkeen seos kaadettiin 200 ml:aan jää-vettä. Seos tehtiin alkaliseksi lisäämällä 250 ml 10-prosent-tista natriumhydroksidi1iuosta, minkä jälkeen seos pestiin 100 ml :11a tolueenia. Vesikerros tehtiin happameksi väkevällä suolahapolla ja saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 4,51 g haluttua 5-metoksikarbonyyli- 2,6-dimetyyli-4-(m-nitrofenyyli)-1,4-dihydropyridiini-3-karbok-syylihappoa (rasemaatti).

Tämän rasemaatin kumpikin optinen isomeeri voidaan saada seuraavalla menetelmällä: T. Shibanuma et ai, Chem. Pharma. Bull. 28, 2809(1980).

Vertai 1uesimerkki 3 (1) 17,7 g dl-1-bentsyy1i-3-hydroksipyrrolidiinia ja 15,2 g D-(-)-mantelihappoa liuotettiin kuumentamalla 66 ml:aan asetonia. Liuoksen annettiin seistä yön yli 40°C:ssa. 8,5 g saostuneita kiteitä kiteytettiin uudelleen 26 ml:sta asetonia, jolloin saatiin 5,1 g (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrroli- 20 diinin (D)-(-)-mandalaattia. Ominaiskääntökyky [a] ^ +45,5° (C=l, metanoli). Kiteytettiin vielä kerran uudelleen, mutta ominaiskääntökyvyssä ei havaittu mitään muutosta.

Sulamispiste: 101 - 102°C

NMR-spektrissä havaittiin N-CH.2-Ph:n signaali kohdassa 4,03 ppm (singletti, 2H), mutta (R)-(-)-muodon AB-tyyppistä kvartettia (J=12,4Hz) kohdassa 4,01 ppm ei havaittu.

li 8351 7 (2) 22 g (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinin (D)—(—)— mandalaattia liuotettiin 50 ml:aan kloroformia. Kloroformi-kerros pestiin liuoksella, joka sisälsi 14,4 g vedetöntä natriumkarbonaattia 90 ml:ssa vettä, ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Kloroformi poistettiin tislaamalla, minkä jälkeen jäännös tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 11,5 g S-(-)-1-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinia. Kiehumispiste on 109°C/0,65 mmHg. [a]D -3,77° (C=%, metanoli). Vertailuesimerkki 4 75 g (S)-(-)-maleiinihappoa ja 75 ml bentsyyliamiinia saatettiin reagoimaan 3 tunnin ajan 170°C:ssa, jolloin saatiin 52,7 g (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksisukkinimidiä (sulamispiste 20 99 - 101°C; ominaiskääntökyky [α]β -51,5° (C=l, metanoli)).

9,73 g litiumalumiinihydridiä suspendoitiin 340 ml:aan absoluuttista tetrahydrofuraania ja suspensioon lisättiin jäissä jäähdyttäen ja tipottain liuos, joka sisälsi 20,5 g imidiä 200 ml:ssa absoluuttista tetrahydrofuraania. Kuumennettiin 3 tuntia refluksoiden, minkä jälkeen seos jäähdytettiin ja lisättiin 100 g natriumsulfaatti-dekahydraattia. Seos sekoitettiin yön yli jäissä jäähdyttäen. Liukenematon aines poistettiin suodattamalla ja liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa. Jäännös tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 13,8 g (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinia, jonka kiehumis- 20 piste oli 109 - 115°C/0,8 mmHg ja ominaiskääntökyky [a]^ -3,0°.

Näin saatu (S)-(-)-muoto sisälsi 10 % R-(+)-muotoa laskettuna 3-aseman vedyn NMR-spektrin perusteella käytettäessä siirtorea-genssia (EuTFMC (III)). (S)-(-)-muoto muunnettiin vertailuesi-merkissä 3 kuvatulla tavalla D-(-)-mandalaatiksi, joka kiteytettiin uudelleen kolminkertaisesta etanolitilavuudesta ja sen jälkeen kuusinkertaisesta etanolin ja tolueenin (1:5) tilavuu- i2 8351 7 20 desta. Näin saatu mandalaatti ([a]D -45,2°) käsiteltiin edellä mainitulla tavalla, jolloin saatiin 8,6 g (S)-(~)-1-bentsyyli- 3-hydroksipyrrolidiinia (kiehumispiste 115-120°C/1,2-1,5 mmHg, [o]p° -3,77o (c=5, metanoli)).

Vertailuesimerkki 5 3,4 g 2-(+)-pineeniä lisättiin 50 mlraan 9-borabisyklo-3.3.3-nonaania (0,5M tetrahydrofuraaniliuos) ja seosta sekoitettiin 5 tuntia 60°C:ssa. Seos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja siihen lisättiin 1,75 g 1-bentsyyli-3-pyrrolidinonia. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 päivää, minkä jälkeen seokseen lisättiin 0°C:ssa 1,3 ml asetonialdehydiä. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa ja jäännökseen lisättiin 20 ml eetteriä. Seos jäähdytettiin 0°C:een ja seokseen lisättiin 1,5 ml 2-aminoetanolia. Seosta sekoitettiin. Muodostunut sakka poistettiin tislaamalla. Eetteriliuos uutettiin IN suolahapolla. Suolahappokerros tehtiin alkaliseksi natriumkarbonaatilla ja uutettiin dikloorimetaani11 a. Uute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,1 g puhdatamatonta tuotetta. Puhdistamaton tuote tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 0,6 g puhdasta tuotetta. Kiehumispiste 106°C/0,9 mmHg. Näin saadussa (S)-(-)-1-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinissa oli 30 % ylimäärä enantiomuotoa (e.e.), laskettuna 3-aseman vedyn NMR-spektrin perusteella siirtorea-genssin (Eu-TFMC (III)) lisäämisen jälkeen.

Esimerkki 1 332 mg 5-metoksikarbonyy1i-2,6-dimetyyli-4-(m-nitrofenyyli)- l,4-dihydropyridiini-3-karboksyylihappoa liuotettiin 3 mlraan dikloorimetaania ja liuokseen lisättiin 250 mg fosforipentaklo-ridia samalla sekoittaen ja jäähdyttäen jäissä. Seosta sekoi- is 8351 7 tettiin vielä 1 tunti samassa lämpötilassa. Reaktioseos jäähdytettiin -30°C:een ja lisättin 177 mg (S)-1-bentsyy1i-3-hydrok-sipyrrolidiinia. Sekoitettiin 2 tuntia -30°C:ssa, minkä jälkeen reaktioseos pestiin vedellä ja sen jälkeen natriumvetykarbonaa-tin kyllästetyllä vesiliuoksella. Liuotin poistettiin tislaamalla, jolloin saatiin öljymäistä ainetta. Tämä öljymäinen aine pyiväskromatografoitiin si 1ikageeli11ä eluoimalla etyyliase-taattietikkahapolla (5:1 v/v), jolloin saatiin YM-09730-yhdis-teen A-diastereomeerin oikealle kääntävää optista isomeeriä (I), jonka retentioaika oli 28 minuuttia suurinopeuksisessa nestekromatografia järjestelmässä. [Kolonni: Nucleosil<R> 5 Ci e 4,6 mm $ x 300 mm, kolonnin lämpötila: 30°C, liikkuva faasi: 0,05 moolia divetykaliumfosfaattia (pH 3)-asetonitriili (80:2 = v/v), jossa tetra-n-pentyy1iammoniumbromidia, virtausnopeus: 0,9 ml/min., UV-detektori (>.254 nm)]. Näin saatu isomeeri käsiteltiin kloroformissa natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen laimealla suolahapolla, jolloin saatiin 161 mg YM-09730-yhdisteen diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridia. Sulamispiste: 228 - 230°C (hajoaa).

20

Ominaiskääntökyky: [a]D + 116,3° (C=0,5, metanoli).

Esimerkki 2 332 mg (-)-5-metoksikarbonyyli-2,6-dimetyy1i-4-(m-nitrofe-nyyli)-1,4-dihydropyridiini-3-karboksyy1ihappoa liuotettiin 3 ml:aan dikloorimetaania ja liuokseen lisättiin sekoittaen ja jäissä jäähdyttäen 250 mg fosforipentakloridia. Seosta : sekoitettiin vielä 1 tunti samassa lämpötilassa. Reaktioseos jäähdytettiin -30°C:een ja seokseen lisättin 177 mg (S)—1— bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinia. Sekoitettiin 2 tuntia -30°C:ssa, minkä jälkeen reaktioseos laimennettiin 5 ml :11a dikloorimetaania ja pestiin peräkkäin vedellä ja kaksi kertaa i4 8351 7 natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella 5 ml ran erissä. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, jolloin saatiin öljymäistä ainetta. Tämä öljymäinen aine pylväskro-matografoitiin si 1ikageeli11ä (15 g) eluoimalla tolueenin ja etikkahapon seoksella (4:1 v/v). Haluttua isomeeriä sisältävä jae väkevöitiin alipaineessa ja saatu jäännös liuotettiin 5 mlraan kloroformia. Kloroformi1 luokseen lisättiin 1 ml 0,8 N kloorivedyn liuosta etanolissa, minkä jälkeen liuos jälleen väkevöitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin 2 mlraan metanolia ja liuoksen annettiin seistä yön yli jäissä jäähdyttäen. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 550 mg YM-09730-yhdisteen A-diastereo-meerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridia.

Sulamispiste: 226 - 228°C (hajoaa) 20

Ominaiskääntökyky: [α]β + 116,4° (C=l, metanoli) NMR (CDsDD, TM® sisäinen standardi, öppm): 1,80 - 2,70 (2H, leveä m, C4'-H2) 2,32, 2,34 (6H, s, C2,e-CH3) 3,0 - 4,0 (4H, m, 02·5·-Η2) 3,64 (3H, s, -COOCH3) 4,42 (2H, s, -CH2|J) 5,08 (1H, s, C4-H) 5.30 (1H, m, C3·-H) 7.30 - 8,20 (9H, m, bentseenirengas-H)

Esimerkki 3 840 mg (-)-5-metoksikarbonyy1i-2,6-dimetyy1i-4-(m-nitrofe-. nyyli)-1,4-dihydropyridiini-3-karboksyylihappoa suspendoitiin 6 mlraan dikloorimetaanin ja N,N-dimetyy1iformamidin seosta (4:1 v/v) ja liuokseen lisättiin jäähdyttäen 0,2 ml tionyyli-kloridia. Seosta sekoitettiin 1 tunti samassa lämpötilassa.

is 8351 7

Reaktioseokseen lisättiin tipottain 450 mg (S)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinia 3 ml:ssa dikloorimetaania samalla jäähdyttäen jäissä. Saatua seosta sekoitettiin vielä 15 tuntia jäissä jäähdyttäen ja sen jälkeen reaktioseos laimennettiin 10 ml :11a dikloorimetaania. Saatu liuos pestiin peräkkäin 10 ml :11a vettä ja 10 ml :11a natriumvetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja liuos kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alipaineessa, jolloin saatiin öljymäistä ainetta. Tämä öljymäinen aine pyiväskromatografoitiin silikageelillä (40 g) eluoimalla tolueenin ja etikkahapon seoksella (4:1 v/v, sen jälkeen 1:1 v/v). Haluttua isomeeriä sisältävä jae väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin 990 mg väkevöityä öljymäistä ainetta. Tämä öljymäinen aine liuotettiin 10 ml:aan kloroformia. Lisättiin 2,6 ml 0,8 N kloorivedyn liuosta etanolissa, minkä jälkeen liuos väkevöitiin jälleen alipaineessa. Saatu jäännös liuotettiin 5 ml:aan metanolia ja liuoksen annettiin seistä yön yli jäissä jäähdyttäen. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 850 mg YM-09730-yhdisteen A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridia.

Sulamispiste: 226 - 228°C (hajoaa).

20

Ominaiskääntökyky: [a] +116,4° (C=l, metanoli)

D

NMR-spektrit vastasivat esimerkissä 2 valmistetun tuotteen spektrejä.

Esimerkki 4 1) 990 mg väkevöityä öljymäistä ainetta, joka oli saatu noudattamalla esimerkin 3 menetelmää, liuotettiin 10 ml:aan etanolia ja liuos väkevöitiin jälleen alipaineessa. Saatu jäännös liuotettiin 5 ml:aan etanolia ja liuoksen annettiin seistä yön yli jäissä jäähdyttäen. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodat- ie 8351 7 tamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 730 mg YM-09730-yhdis-teen A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin vapaata emästä.

Sulamispiste: 137 - 139°C

20

Ominaiskääntökyky: [a]D +64,8° (C=l, metanoli) NMR (CDCls, TMS sisäinen standardi, 6ppm) 1.4 - 3,0 (6H, m, C2',4·,5 *-H2) 2,34, 2,36 (6H, s, C2,6-CH3) 3,65 (5H, s, -COOCH3 ja -CH2/6) 5,10 (1H, s, C4-H) 5,12 (1H, m, C3*-H) 5,78 (1H, leveä s, NH) 7,16 - 8,24 (9H, m, bentseenirengas-H) 2) 700 mg edellä saatua vapaata emästä liuotettiin 10 ml:aan kloroformia ja 1,8 ml:aan 0,8 N kloorivety1iuosta etanolissa ja liuos väkevöitiin alipaineessa. Saatu jäännös liuotettiin 3.5 ml:aan metanolia ja liuoksen annettiin seistä yön yli jäissä jäähdyttäen. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 630 mg YM-09730-yhdis-teen A-diastereomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridia.

Sulamispiste: 228 - 230°C (hajoaa) 20

Ominaiskääntökyky: [a]D +116,7° (C=l, metanoli) NMR-spektri vastasi esimerkissä 2) valmistetun tuotteen spektriä.

Claims (1)

1. i7 8351 7 Patenttivaatimus Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokasta (+_)-2,6-dime-tyy1i-4-(m-ni trofenyyli) — 1,4-dihydropyridiini-3,5-dikarbok-syylihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)esteri-5-metyy1i-esterin A-diastereoisomeerin (I) T (i) H3COOC --r Il IJ oikealle kääntävää optista isomeeriä, jonka hydrok1oridin sulamispiste on 223 - 230°C (hajoaa) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa, tunnettu siitä, että kaavan (II) mukainen yhdiste N02 (II) HjCOOCv/X/COOH H3C Jv N i^CH3 H saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa HO Ό 18 8351 7 jotka lähtöaineet (II, III) ovat vasemmalle kääntäviä optisia isomeerejä tai rasemaatteja, ja, kun kummatkin yhdisteet (II) ja (III) ovat vasemmalle kääntäviä aineita, eristetään oikealle kääntävä optinen isomeeri (I) saadusta reaktioseoksesta, tai kun ainakin toinen näistä yhdisteistä (II) ja (III) on rase-maatti, eristetään oikealle kääntävä optinen isomeeri (I) saadusta reaktioseoksesta pyiväskromatograafisesti tai frak-tiokiteytt ämä11ä. i9 8351 7 Förfarande för framställning av en farmakologiskt värdefull högervridande optisk isomer (I) av (±)-2,6-dimetyl-4-(m-nitro-feny1)-1,4-dihydropyridin-3,5-dikarboxylsyra-3-(l-bensylpyrro-lidin-3-yl)ester-5-mety1esterns Ä-diastereoisomer m2 (I) H3COOC -- X X Η3^Ν CH3 I /-V H vars hydroklorids smältpunkt är 224 - 230°C (sönderfai 1er) eller dess farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalt, k ä n -netecknat därav, att en förening med formeln (II) N02 ( II ) H3COOCv^As^COOH 1 Ϊ h3c/Vn ^ch3 H bringas att reagera med en förening med formeln (III) HO I-hQ 20 8351 7 vilka utgängsämnen är vänstervridande isomerer eller racemat, och, dä vardera föreningen (II, III) är vänstervridande ämnen, isoleras den högervridande optiska isomeren (I) frän den erhällna reaktionsblandningen, eller da ätminstone den ena av dessa föreningar (II) och (III) är ett racemat, isoleras den högervridande optiska isomeren (I) frän den erhällna reaktions-blandningen koionnkromatografiskt eller genom fraktionskris-tal1isation.