FI83516B - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefull 2,6-dimetyl-4-(3-nitrofenyl)-1,4 -dihydropyridin-3,5-dikarboxylsyra-3-(1-bensylpyrrolidin-3-yl)-ester-5 -metylesters a-diastereoisomer. - Google Patents

Description

1 83516

Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokasta 2,6-dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-l,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyylihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)-esteri-5-metyyliesterin A-diaste-reoisomeeria - Förfarande för framställning av farmakologiskt värdefull 2,6-dimetyl-4-(3-nitrofenyl) -1,4-dihydropyridin-3,5-dikarboxylsyra-3-(1-bensy1 pyrrol idin-3-y1)-ester-5-metylesters A-diastereoisomer

Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokasta 2,6-dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-1,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyylihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)-esteri-5-metyyliesterin A-diaste-reoisomeeria, tämän A-diastereoisomeerin oikealle kääntävää optista isomeeriä tai tämän diastereoisomeerin tai optisen isomeerin farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa.

2,6-Dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-l,4-dihydropyridiini-3,5-dikar-boksyy1ihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)-esteri-5-metyyli-esterillä (YM-09730) on kaava , N°2 P" CH300C\A/ COO-γ-j 3 1 H ^2-0 YM-09730 syntetisoitiin ensin meidän toimestamme. Sillä on kauan säilyvä vasodi1atoiva ja hypotensiivinen aktiivisuus (US-patentti 4.220.649; UK-patentti 2.014.134).

YM-09730-yhdisteessä on kaksi asymmetristä hiiliatomia, mutta edellä mainituissa patenteissa ei isomeerejä ole kuvattu eikä isomeerien olemassaoloa ole aikaisemmin vahvistettu. Diastereo-isomeeripari11 a on erona erilainen kääntökyvyn absoluuttinen 2 83516 arvo ja monet fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet (päinvastoin kuin yleensä optisilla antipodei11 a). Siten isomeerejä ei voida saada erikseen näiden ominaiserojen perusteella ellei näitä ominaisuuksia ole selvitetty.

Olemme nyt onnistuneet erottamaan YM-09730-yhdisteen isomeerit A ja B ja niiden yksittäiset optiset isomeerit ja havainneet, että "isomeerillä A" (tätä nimitystä käytetään tässä yhteydessä tarkoittamaan sekä diastereoisomeeria A että sen oikealle kääntävää optista isomeeriä) on suuremmt spesifiset farmaseuttiset vaikutukset kuin "isomeerillä B" (jota nimitystä käytetään tässä yhteydessä tarkoittamaan sekä diastereoisomeeria B että sen optisia isomeerejä) tai diastereoisomeerien A ja B seoksella (YM-09730 ). Di astereoisomeerin A hydrokloridin sulamispiste on 200 - 206°C (hajoaa), ja sen oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrok1 or idin sulamispiste on 223 - 230°C (hajoaa). Tämän keksinnön kohteena ovat siten yhdisteen YM-09730 diastereomeeri A ja sen oikealle kääntävä isomeeri (tunnistetaan hydroklori-. diensa sulamispisteiden avulla) ja myös näiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat.

Tässä keksinnössä sopiviin farmaseuttisesti hyväksyttäviin happoaddi t i osuol oihin kuuluvat malonaatit, oksalaatit, p-nitro-bentsoaatit, 2-ketoglutaraatit, maleaatit, 1-malaatit, hydro-kloridit, sulfaatit, p-tolueenisulfonaatit, fosfaatit ja sukki-naatit.

Jäljempänä kuvatuissa famakologisissa kokeissa lisäsivät tämän keksinnön mukainen isomeeri A ja sen farmaseuttisesti hyväksyt-. . tävät happoadditiosuolat verenvirtausta sydämessä 15 - 38 kertaa . niin paljon kuin diastereosiomeeri B ja 14 - 35 kertaa niin • · paljon kuin diastereosiomeerien A ja B yhtä suuri seos annettaessa suoraan sydänva1timoihin. Tämä osoittaa tämän keksinnön ’ mukaisen isomeerin A suuren affiniteetin sydänva1timoihin.

3 83516

Toisaalta B-isomeeri11 a oli lähes sama vaikutus kuin isomeerien seoksella. Tämän merkitsee sitä, että YM-09730-yhdisteen farmakologinen vaikutus ei ole isomeerin vaikutusten yksinkertainen keskiarvo. Famakologiassa on uusi tieto se, että isomeerillä A ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävillä happoadditiosuo1 oi 11 a on suuri affiniteetti sydänvaltimoihin. Tämä lisää mahdollisuutta käyttää tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä lääkeaineina.

A-isomeerin ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien happoaddi-tiosuolojen valmistaminen voi tapahtua seuraavasti: I. A-diastereoisomeerin valmistaminen YM-09730 voidaan valmistaa Hantzch'in synteesillä (Ann. Chim., 215, 1( 1982 )) seuraavassa vertai 1uesimerkissä 1 annetulla tavalla, jolloin saadaan A-diastereoisomeerin ja B-diastereo-isomeerin 1:1 seos.

A-diastereoisomeeri voidaan sen jälkeen saada seuraavasti: (a) Diastereosiomeerien seos py1väskromatografoitiin käyttämällä kantajana silikageelia ja eluointiaineena etyyliasetaatin ja etikkahapon sekaliuosta. A-diastereoisomeeri saatiin aikaisemmasta eluaatista ja B-diastereoisomeeri myöhemmästä eluaatista.

Pyiväskromatografiässä voidaan käyttää si 1ikageeli-kantajana mitä tahansa tarkoitukseen sopivaa tavanomaista silikageelia. Myöskään eluenttina käytetyn etyyliasetaatin ja etikkahapon sekoitussuhdetta ei ole millään tavoin rajoitettu, vaan tavallisesti käytetään sekaliuotinta, joka sisältää pienen määrän etikkahappoa. Sekoitussuhde on esimerkiksi 30 - 50 v/v etyyliasetaattia ja noin 1-10 v/v etikkahappoa. Jos etikkahapon pitoisuutta pienennetään, halutun yhdisteen eluointiaika kasvaa. Eluointinopeus ja käsittely1ämpöti1 a voidaan valita halutulla taval1 a.

4 83516 (b) Toisessa menetelmässä saadaan A-dia stereoisomeerin happoadditiosuola muuntamalla diastereoisomeerien seos happoadditiosuo1 oik si ja fraktiokitey11ämä11ä suolojen seos.

Tässä menetelmässä sopivia happoadditiosuoloja ovat esimerkiksi malonaatti, p-nitrobentsoaatti , maleaatti jne.

Nämä happoadditiosuolat ovat kiteisiä suoloja. A-diastereo-isomeerin ja B-diastereoisomeerin liukoisuus orgaaniseen liuottimeen on erilainen, jolloin on mahdollista valmistaa A-diastereoisomeeriä frnktiokiteyttämällä. Erityisen sopiva happoadditiosuola on malonaatti. Malonaattia käytettäessä voidaan yhdellä uude 11eenkiteytykse 11ä saada kiteitä, jotka sisältävät erittäin runsaasti A-diastereoisomeeriä. Menetelmässä käytettäväksi sopivia liuottimia ovat esimerkiksi me t a 11 o 1i , etanoli, asetoni, asetonitriili jne.

VM-09 7 3 0-y hd i s t e en A-diastereoisomeeriri happoadditiosuola, joka on saatu edellä mainitulla menetelmällä, voidaan happovaihtaa toiseksi halutuksi happoadditiosuolaksi muun-.: t a m a 11a vapaaseen muotoon ja saattamalla reagoimaan toisen hapon kanssa.

II. Oikealle kääntävän optisen isomeerin A valmistaminen: (a) A_diastereoisomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri voidaan saada saattamalla diastereoisomeerien A ja B seoksena olevat vapaat emäkset tai YM-09730-yhdisteen A-diastereo-isomeerin happoadditiosuolan vapaa emäs, joka on saatu edellä mainitulla menetelmällä 1, reagoimaan L-(-)-maleiinihapon kanssa ja sen jälkeen erottamalla tuote - - optisesti tavalliseen tapaan, kuten jäljempänä on kuvattu.

:‘ * (h) Parhaana pidetyssä menetelmässä A-diastereoisomeerin : oikealle kääntävä optinen isomeeri erotetaan seoksesta (jonka kaava 1 jäljempänä), jossa on U-diastereoisomeerin 5 83516 vasemmalle kääntävää optista isomeeriä Q"N°2 /H ^1) CH^OOC^^X^-COO^ H Vh

3 3 CH —O

(jossa aaltomainen sidos tarkoittaa α-sidosta tai β-sidosta, paksulla nuolella esitetty sidos on β-sidos ja pyrrolidiini-renkaan 3-asemassa oleva sidos on spesifinen β-sidos).

Lähtöaineena käytetty yhdiste (I) voidaan valmistaa (i) saattamalla reagoimaan kaavan (II) mukainen m-nitro-bentsaldehydi [; V*

CHO

: : Kaavan (III) mukainen S-(3-asetoasetok si-1-bentsyy1ipyr- ro1 id i ini

CH3COCH7COO

V? m. »-o ·'. ja kaavan (IV) mukainen 3-ami nok ro t on ihappo-met y y lies t er i * 83516

CH C=CHCOOCH

3| 3 (IV);

Nl(? (ii) Saattamalla reagoimaan kaavan (II) mukainen m-nitro-bentsaldehydi, kaavan ( V) mukainen asetoetikkahappo-metyyliesteri ch3coch2cooch3 (v) ja kaavan (VI) mukainen (S ) - 3 -(3-aminokrotonoyylioksi)-1-bentsyylipyrrolidiini CHsC = CHCOC) _

u V

^-O

: (iii) Saattamalla reagoimaan kaavan (VII) mukainen (S)-i- : ·, - bentsyyli-3-/2 - (m-nitrobensylideeni )asetoasetoksi/pyrrolidiini ςτ ·

CH

s CHjCOCCOO-s__.

(VII) ,

··;; -.-O

joka on aikaisemmin saatu saattamalla reagoimaan edellä mainittu m-nitrobentsaldehydi (II) ja edellä mainittu (S)-3-asetoasetoksi-l-bentsyylipyrrolidiini (III) ja edellä mainittu 3-aminokrotonihappo-metyyliesteri (IV); tai 7 83516 (iv) Saattamalla reagoimaan kaavan (VIII) mukainen 2-(m-nitrobentsylideeni)asetoetikkahappa-metyyliesteri 0no2 (VIII)

CH

tl CH3COCCOOCH3 joka on aikaisemmin saatu saattamalla reaqoimaan m-nitro-hents a Idehydi (II) ja asetoetik k ahappo-metyyliesteri (V) ja (S)-3-(3-aminokrotonoyylioksi)-l-bentsyylipyrrolidiini (V) .

Nämä reaktiot tapahtuvat ilman liuotinta, mutta on edullista suorittaa reaktio liuottimessa, joka ei ota osaa reaktioon, kuten· alkoholissa, dioksaanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyy1isu 1 fok sidissa, as etonitrii1issä , vedessä jne.

Reaktio suoritetaan kuumentamalla kunkin komponentin seosta, jossa komponentteja on suurin piirtein yhtä suuret mool i -; määrät.

: . r d e 11 ä mainittu yhdiste (IV) tai (VI) voidaan saada s a a t -lamalla yhdiste (V) tai (I I I ) reagoimaan ammoniumasetaatin : : ja etikkahapou kanssa heritseenissä ja poistamalla tuotteesta vesi aseotrooppisesti. Näin saatu yhdiste (IV) tai (VI) viedään edellä kuvattuun reaktioon (i) tai (ii) sen jälkeen, kun se on eristetty reaktioseoksesta tai eristämättä sitä.

. . Yhdiste (VII) tai (VIII), joka on menetelmän (iii) tai *.. (iv) ensimmäisen vaiheen reaktiotuote, voidaan viedä vii-;·. meiseen vaiheeseen eristämisen jälkeen tai ilman eristämistä.

A-d ia s t ereo 1 someer ien oikealle kääntävän optisen isomeerin ; · ja B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävän optisen isomeerin * näin saatu seos oy 1väskromatogra foidaan käyttämällä kantajana 8 83516 silikageeliä ja eluointiaineena etyyliasetaatin ja etikkahapon seosta oikealle kääntävän optisen isomeerin erottamiseksi; tai edellä kuvattu seos saatetaan reagoimaan L-(-)-ma 1 eiini-hapon kanssa niin, että muodostuu A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin l-(-)-m»laatin ja B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-ma la atin seos, jolloin A_diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-malaatti voidaan saada fraktiokiteyttämällä seos.

Pylväskromatograafisesti erotettaessa saadaan A-diastereo-isomeerin oikealle kääntävä optinen isomeeri ensimmäisestä eluaatista ia B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävä oppinen isomeeri myöhemmästä °luaatista.

S ' 1 ikag*‘el i kunta jana voidaan käyttää mitä tahansa s’li-kaneeliä, jota yleisesti käytetään pv 1 väsk routa t ogra f ia «sa . Etyyliasetaatin ja etikrkahapon eluenttina käytetyn seoksen sekoitussuhdetta ei ole millään tavoin erityisesti rajoitettu, ‘ mutta hyvänä pidetään sekaliuotinta, joka sisältää pienen määrän et ikkahappoa . Edullista on, että sekoitussuhde on 30 - 50 v/v etyyliasetaattia ja noin 1 - 10 v/v etikka-happoa. Kun etikkahapon pitoisuutta pienennetään edelleen, ; - pitenee halutun yhdisteen eluoint iaika. Eluointiaika ja käsittely lämpötila voidaan valita halutulla tavalla.

Menetelmää, jossa käytetään L-(-)-maleiinihappoa, voidaan myös käyttää A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin erottamiseen kiteyttämällä, koska A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin : : L-(-)-ma la a11i on kiteinen. Fraktiokiteytyksessä käy- .* * tettäväksi sopivia liuottimia ovat esimerkiksi metanoli, etanoli, asetoni, asetonitriili jne.

: ' A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin ;**. näin saatua L - ( - )-ma laat t ia voidaan käyttää lääkeaineena, mutta tarvittaessa se voidaan muuntaa asetaatiksi tai 9 83516 muuksi sopivaksi suolaksi käsittelemällä emäksellä niin, että muodostuu vapaa yhdiste, ja käsittelemällä tämä sopivalla hapolla.

Edellä mainitussa menetelmässä erotettu B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävä optinen isomeeri voidaan hydrolysoida, jolloin saadaan talteen (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksi-pyrrolidiiniä, jota voidaan käyttää uudelleen lähtöaineena kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistuksessa.

Seuraavien testien avulla on havainnollistettu keksinnön mukaisten yhdisteiden farmakologisia aktiivisuuksia, akuuttia toksisuutta ja kliinisiä annoksia.

(1) Sydämen verisuonia laajentava vaikutus anestetisoiduilla koirilla :

Koirissa, joiden rintakehät oli avattu ja jotka oli anestetisoitu 3 U mg/kg i.v. pentobarbitaalinatriumilla, *: johdetttiin karotidivaltimosta valtimoverta vasemman ·'· sydänvaltimon kiertohaaraan kehonulkoisen silmukan avulla. Hiiriin liitettiin servosäädetty pumppu (malli 1215D,

Harvard Apparatus) pitämään 120 mmHg perfuusiopaine ( vakiona pumpun säätölaitteen avulla (SCS-22, Data Graph Co., Tokuya Tukada et ai., Folia Pharmacol. Japon, 74, 49, 1978 ). Sydämen verivirran tallentamiseksi piiriin laitettiin myös kehon ulkopuolista tyyppiä oleva sähkömagneettinen virtauselektrodi (M F - 2 9 , Nihon Koden). Testattavaa yhdistettä annettiin 1 ^jg annoksena suoraan * ·· sydänvaltimoon ja sen jälkeen seurattiin verenvirtausta sydämessä, kunnes verenvirtaus palautui käsittelyä edel--· tavaan arvoon. Laskettiin pinta-ala käyrän, joka esitti ’ prosentuaalista verenvirtauksen lisäystä sydämessä sydämen-sisäisen ruiskeen jälkeen, alla ja tätä arvoa käytettiin ;V indeksinä verenvirtauksen kokonaiskasvusta sydämessä.

Tulokset on esitetty taulukossa 1.

8351 6

Taulukko 1. Sydämen verisuonia laajentava aktiivisuus anestetisoiduilla koirilla

Veren virtauksen Vaikutusaika kokonaiskasvu sydämessä 1 ug annoksella (%, min.) A-diastereoisomeeri (d1— muoto )-hydrokloridi 1816 + 377 60 A-dia stereoisomeeri (d- muoto )-hydrokloridi 4559 + 894 120 A-diastereoisomeeri (1- muoto )-hydrokloriidi 120 + 21 5 B-diastereoisomeerx (dl- muoto)-hydrokloridi 120+ 28 5

Dia stere oisomeerien A (dl-muoto) ja B (dl-muoto) hydrokloridien 1:1 seos 129+ 47 10 A-isomeeri-hydrokloridin aiheuttama sydämen verivirtauksen "" kokonaiskasvu oli noin 15 - 38 kertaa korkeampi kuin 1 kasvu, jonka aiheutti yhtä suuret annokset B-isomeeri---- hydrokloridia ja A- ja B-isomeerien yhtä suuri seos.

; . Tämä osoittaa, että A-isomeeri-hydrokloridillä on suurempi affiniteetti sydänvaltimoon. Lisäksi A-isomeeri-hydroklo-: : ridin sydämen verisuonia laajentava vaikutus oli kesto- ajaltaan selvästi pidempi kuin käytettäessä B-isomeeri-hydrokloridia ja A- ja B-isomeerien seosta. Tällainen suun affiniteetti sydänvaltimoon nähden ja pitkä kestoaika osoittavat, että A-isomeeri-hydrokloridi on hyödyllinen hoidettaessa sydämen va11imotautia , kuten angina pectorista.

:*·. (2) Hypotensiivinen vaikutus anestetisoiduilla rotilla: .* * Verenpaine mitattiin uretaanilla anestetisoiduilla rotilla. *** Testattavaa yhdistettä annettiin intravenöösisti yhä *-' kasvavat annokset 20 minuutin välein. Annos-reaktiokayristä n 83516 laskettiin kunkin yhdisteen se annos, joka tarvittiin alentamaan verenpainetta 30 mmHg (ED 30 mmHg). Nämä annokset on esitetty taulukossa 2 .

Taulukko 2. Hypotensiivinen aktiivisuus anestetisoiduilla rotilla ED30 mmHg (mg/kg i.v.) A-diastereoisomeeri (d1 — inuoto)-hydroklondi 0,002 B-diastereoisomeeri (d1 — muoto )-hydro k 1 oridi 0,14 Γuulukosta 2 vo idaan havaita, että A-diastereoisomeeri-hydiokloridin hypotensiivinen aktiivisuus oli noin 70 kertaa tehokkaampi kuin B-diastereoisomeeri-hydrokloridin vaikutus.

(3) Akuutti toksisuus hiirillä: Käytettiin kuuden viikon vanhoja ICR-koi rash iiriä, joiden - paino oli 27 - 29 a. Testattava yhdiste suspendoitiin : 0,5-prosenttiseen me ty y 1 i se 1 lu loos a 1 iuokse en ja annettiin oraalisesti hiirille. Yhdisteiden LD^-arvot laskettiin Litchfield & Wilcoxon’in menetelmällä (Journal of Pharmacol. & Ex. Therap., 96., 99-113, 1949). Tulokset on annettu taulukossa 3.

12 8351 6

Taulukko 3. Akuutti toksisuus hiirillä lD50 mg/kg p.o.

A-diastereoisomeeri (dl-muoto)- hydrokloridi 293 (242-360) A-diastereoisomeeri (d-muoto)- hydrokloridi 190 (138-228) (4) Kliiniset annokset: Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden kliiniset annokset riippuvat potilaan painosta ja taudin tilasta. Optimaaliset annokset intravenöösissä injisoinnissa ovat tavallisesti 0,1 - 2 mq ja oraalisessa antamistavassa 5 - 20 mg kerran tai kaksi kertaa päivässä.

Seuraavissa esimerkeissä ja formulointiesimerkeissä on havainnollistettu tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä, niiden valmistamista ja niitä sisältäviä lääkeaineita.

• '-Raaka-aineena käytetyn A-dia stereoisomeerin ja B-diastereo-:: isomeerin seoksen valmistaminen on havainnollistettu ·’' ve r t a i lues imerk i ssä 1 ja myös raaka-aineena käytetyn :(S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinin valmistaminen on esitetty vertailuesimerkeissä 2 - 4.

Vertai1uesimerkki 1 1,51 g (0,01 moolia) 3-nitrobentsladehydiä, 2,61 q (0,01 moolia) 1-bentsyy1l-3 - a setoasetok sipyrro 11diini a ja 1,15 g (0,01 moolia) 3-aminok ro t oniha ppo-me t y y 1 ies t er i ä liuotettiin 5 ml: aa n isopropanolia ja näin saatua liuosta ... re f lukso i t i in 8 tuntia. Sen jälkeen liuotin tislattiin "Γ. pois alipaineessa, näin muodostunut jäännös liuotettiin ’.·. kloroformiin ja liuos pestiin peräkkäin laimealla suola- i3 8351 6 hapolla, vedellä ja natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, jolloin saatiin 4,91 g karamellimaista 2,6-dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-l,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyylihappo 5-(l-bentsyylipyrrolidin-3-yyli ) e s t e r i 5-metyyliesteriä.

Puhdistamattomana emäksenä saatujen d ia s t ereo i s omee r i en su ti de analysoitiin käänteisfaasisella suuren suorituskyvyn ionipari-nestekromatografialla (HPLC) seuraa vissa olosuhteissa:

Kolooni: 4,6 mm x 3 00 mm, pakkausaine Nucleosil^^ 5 C1Q, kolonnin lämpötila: 30°C, liikkuva faasi: aseto-nitrii li-0,05 m kaliumdivetyfosfaatti (pH 3) (20:80 v/v), jossa vastaionina tetra-n-p^ntyyliammoniumbromidia (3 mi 11imoolia ) , virtausnopeus: 0,9 ml/min., monitori: uitravio1 e11idetektori (λ 254 nm).

A-dia stereoisomeerin ( re tentioaika 28 min.) suhde B-: diastereoisomeeriin (retentioaikä 29 min.) oli 1:1.

: .- NMR-ana 1yys in perusteella vahvistettiin, että A-dia- stereoisomeerillä ja B-diastereoisomeerillä on erilaiset . ’ kemialliset siirtymät YM-09730-yhdisteen N-bentsyyliryhmaän metyleeriiprotonien suhteen. Kun mittaus suoritetaan raskaassa metanolissa d^ (CD^OD) Jeo 1 NMR-spektrometrillä FX-900, A-i soinee r i 11 ä ja B-i someer i 11 ä on vastaavasti siriglettisignaalit, jotka vastaavat kahta protonia 4,40 ppm ja 4,30 ppm.

Vertailuesimerkki 2 (1) 17,7 g d 1 -1 - ben t sy y 1 i - 3 - h^tfj-oks ip y r ro 1 i d i in ia ja "·-· 15,2 g D-( - )-mant el ihappoa liuotettiin 66 ml:aan asetonia :V kuumentaen ja liuoksen annettiin seistä yön yli 4°C:ssa i4 83 51 6 kiteiden laskeuttamiseksi ; 8,5 g näin muodostuneita kiteitä otettiin talteen ja kiteytettiin uudelleen 26 ml: sta asetonia, jolloin saatiin 5,1 q (S)-(-)-l-bentsyyli- 3-hydi’oksipyrroiidiinin D-(-)-mandelaattia. Ominaiskään-tökyky /a/^ oli -45,5° (c = l, metanoli). Kun uudelleen-kiteyttäminen toistettiin, ominaiskääntokyky ei muuttunut. Sulamispiste oli 101-102°C.

NMR-analyysissä N-CJ1 -Ph:n ((5)-(-)-muodon näin saadun mandelaatin) signaali havaittiin kohdassa 4,03 ppm (sinalet-ti, 2H). (R)-(-)-muodon AB-tyyppisen kvartetin (J = 12,5

Hz) signaalia kohdassa 4,01 ppm ei havaittu.

(2) 22 g (5)-(-)-1-bent syy1i-3-hdyroksipyrrolidiinin D-(-)-mandelaattia liuotettiin 50 ml:aan kloroformia ja näin muodostunut kloroformiliuos pestiin liuoksella, joka sisälsi 14,4 g natriumkarbonaattia 90 mltssa vettä, ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Kloroformin listaamisen jälkeen jäännös tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 11,5 g (5)-(-)-1-bentsyy1i-3-hydroksidi-

O

pyrro 1idiinia. Kiehumispiste oli 109°C/0,65 mmHg ja /<Vjj "** oli -3,77° (c = 5, metanoli).

Vertailuesimerkki 3 : ' 75 g ( S ) - ( - )-ma le i i nihappoa ja 75 ml ben t s y y 1 iarni i n ia ;*:* saatettiin reagoimaan 3 tunnin ajan 170°C:ssa, jolloin saatiin 52,7 u (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksi-sukkinimidiä (sulamispiste 99-101°C. Ominaiskääntokyky /n./^ -51,1°, (c= 1, metanoli)). 9,73 q 1itiumalumiinihydridiä suspen-doitiin 340 m1:a a n vedetöntä tetrahydrofuraania ja suspensioon lisättiin jäissä jäähdyttäen liuos, joka sisälsi 20,5 g edellä kuvattua imidiä 200 ml:ssa vedetöntä tetra-: ·. hydrofuraania. Seosta refluksoitiin 3 tuntia, minkä jälkeen seokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 100 g natrium-sulfaatt.i-dekahydraattia ja saatua seosta sekoitettiin yön yli jäissä jäähdyttäen. Liukenematon aines erotettiin i5 8351 6 suodattamalla, liuotin haihdutettiin suodoksesta alipaineessa ja jäännös tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 13,0 g (5)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiinia, jonka kiehumispiste oli 109 - 11 5 °C/ 0,8 mm H g ja o m i n a i s k ää n t ök y k y /a /j^ -3,0° ( c = 5 , me ta noli). Analysoiman a N M R : n avulla 3-asema käyttämällä siirtoreagenssina tu-TMPC ( 111) : a vahvistettiin, että edellä saatu (S)-(-)-muoto sisälsi 10% R-(+)~l-bentsyyli- 3-hydroksipyriolidiinia. Tuote muunnettiin D-(-)-mande-laatiksi vertailuesimerkissä 2 kuvatulla tavalla. Mandelaatti / /^ -45,2° (c=l, MeOH), joka oli saatu kiteyttämällä uudelleen kolminkertaisesta etanolitilavuudesta ja sen jälkeen kuusinkertaisesta etano 1i-1o 1ueenitilavuudesta (1:5 v/v), käsiteltiin kloroformilla ja vesipitoisella natriumkarbonaatti1iuokseila vertailuesimerkissä 2 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 8,6 g (S)-(-)-1-bentsyyli-3-hydroksipyrro 1idiinia ; kiehumispiste 115 - 120°C/1,2 - 1,5 mmHg, /a/^° -3,77° (c=5, metanoli).

Uertailuesimerkki 4 3,4 g 2-(-)-pineeniä lisättiin 50 ml:aan 9-borabisyklo/3,3,l/ no naan ia (0,5M tetrahydrofuraaniliuos) ja seosta sekoitettiin ( _ 5 tuntia 60°!· : osa . t;eos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen siihen lisättiin .1,75 g l-bentsyyli-3-pyrro- : . lidinonia. Seosta sekoitettiin 4 päivää huoneen lämpötilassa, :.: minkä jälkeen lisättiin 1,3 ml asetaldehydiä 0°C:ssa.

: Sen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa ja jään nökseen lisätiin 20 ml eetteriä. Seos jäähdytettiin 00 C:e e n ja sen jälkeen siihen lisättiin 1,5 ml 2-aminoetanolia ja saatua seosta sekoitettiin. Muodostuneet sakat erotettiin suodattamalla. Suodoksena talteenotettu eetteriliuos . . uutettiin 1 N suolahapolla ja näin muodostunut suola-. happokerros tehtiin alkaliseksi natriumkarbonaatilla : - ja uutettiin dikloorimetaanilla. Näin muodostunut uute : kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin, • · jolloin saatiin 1,1 g puhdistamatonta tuotetta. Puhdistamaton tuote tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 0,6 g 83 51 6 puhdistettua tuotetta - kiehumispiste ,106°C/Q,9 mmHci.

Nain saatu (S)-(-)-l-bentsyyli-3-hydroksipyrrolidiini oli 30-proscnttista analysoituna NMR-spektrien avulla 3-aseinari protonin suhteen käyttämällä tu-TFMC( 1 I I ) -siirrosreagenssia.

A-diastereoisomeerin valmistaminen Esim erkk i 1.

4,91 g vertailuesimerkissä 1 saatua YM-09730-yhdisteen puhdistamato nta vapaata emästä liuotettiin 25 ml:aan kloroformia, tähän lisättiin 15 ml 10-prosenttista suolahappoa ja sen jälkeen sekoitettiin hyvin ja näin saatu orgaaninen faasi erotettiin. Orgaaninen kerros käsiteltiin uudelleen edellä kuvatulla tavalla 10 m 1:11 a 10-prosenttista suolahappoa, käsitelty tuote kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois alipaineessa. Näin saät.u jäännös liuotettiin 10,4 ml: aan asetonia ja liuoksen annettiin seistä, jolloin saatiin 3,5 n kiteistä -f YM-U9730-yhditeen hydroklondia. Tuote liuotettiin 1,8 ;·. m 1 : a a n metanolia ja kiteytettiin uudelleen lisäämällä - - 8 ml asetonia. Kiteyttämällä vielä kerran saatiin 2,38 g ! ‘. YM-09730-yhdisteen hydrokloridia. A-diastereoisomeerin ; ; suhde B-diastereoisomeeriin oli hydrokloridissa 65,6:34,4 HPL C-mä är i t y ksen perusteella. 2,15 g edellä mainittua ·.·. suolaa liuotettiin 25 ml:aan kloroformia, näin saatu liuos pestiin kaksi kertaa 15 ml:lla natriumvetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja muodostunut orgaaninen kerros otettiin talteen ja kuivattiin vedettömällä magnesium-. .. sulfaatilla. Liuotin tislattiin pois alipaineessa. 2 a • - näin saatua vapaata emästä py 1 v ä sk ro ma t o g ra f o i t i i n silika-*. . aeelillä (pylväs-LiChroprep^^ S i 6 0 , C-koko; eluointiaineena ·. * etyy1ia s etaa11i/etikkahappo, 30:5 v/v), jolloin saatiin ”... A-diastereoisomeerin öljymäistä asetaattia.

Tuote liuotettiin 10 ml:aan kloroformia. Muodostunut J7 8351 6 1 j uoii pestiin peräkkäin 10 m 1 : 11 a natr iumuetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta, 10 ml :11a vettä ja 10 m 1 : 11 a 10-proscnttista suolahappoa ja kuivattiin vedettömällä mayn esiurnsu 1 f aa111la . Πen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa ja näin saatu jäännös käsiteltiin 0,B m 1 : 11 a asetonia, jolloin saatiin 0,4 g A-diastereoisomeerin hydrokloridia .

Esimerkki 2 4.91 g vertailukesimerkissä 1 saatua YM-09730-yhdisteen puhdistamaton ta vapaata emästä ja 1,04 q malonihappoa liuotettiin ja saadun liuoksen annettiin seistä yön yli 0 - 5°C:ssa. Näin muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin pienellä määrällä kylmää asetonit-rilliä, jolloin saatiin 2,03 g YM-09730-yhdisteen malonaattia (A-diastereoisorneerin suhde B-diastereoisomeeriin oli 09,1:10,9). luote kiteytettiin kaksi kertaa uudelleen 25-kertaisesta inetanolitilavuudesta, jolloin saatiin 1,0 g YM-0973Q-yhdisteen 100-prosenttisen A-diastereoisomeerin malonaattia.

L s i m e r k k i 3 4.91 g vertailuesimerkissä 1 saatua YM-09730-yhdisteen puhdistamatonta vapaaa emästä ja 1,04 y malonihappoa liuotettiin kuumentaen 19 ml:aan metanolia ja näin muodostuneen liuoksen annettiin seistä yön yli 0 - 5°C:ssa. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin metanolilla ja kuivattiin alipaineessa, jolloin saatiin 1,88 q YM-09730-yhdisteen malonaattia. Näin saatujen kiteiden diastereoiso-meerien A:B suhde oli 90,7:9,3. Kiteet kiteytettiin kaksi . kertaa uudelleen metanolista, jolloin saatiin A-diastereo-isomeerin malonaattia, joka ei sisältänyt lainkaan B-iso-: m e o r i ;i.

Esimerkki 4 1,1 83516

Noudatettiin samaa menettelyä kuin esimerkissä 3, mutta in etanolin asemeta kätettiin asetonit rilliä. Malonaattia saatiin 2,03 q. Dia stereomeerien A:B suhde oli 89,1:10,9. luote kiteytettiin uudelleen 23-kertaisesta metanoiiti la-vuudesta, jolloin saatiin 1,57 g A- ja B-diastereoisotneerien malonaattia suhteessa 99,5:0,5. Kun tuote kiteytettiin vielä uudelleen 25-kertaisesta metano 1iti1 avuudesta, saatiin 1,27 g YM-Q973U-yhdisteen malonaattia (jossa HPLC:llä ei havaittu ö-diastereoisomeeriä). 1,27 g malonaattia suspendoi ti in 5 inl:aan kloroformia; kl oro formisuspensio käsiteltiin peräkkäin kaksi kertaa natriumkarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella, kaksi kertaa 2,5 m1:11a vettä ja sen jälkeen kaksi kertaa 2,5 ml:lia 10-prosenttista suolahappoa; näin saatu kloroformiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin alipaineessa. Näin muodostunut jäännös liuotettiin 2 ml.-aan asetonia. Liuoksen annettiin seistä, jolloin saostui 1,09 g YM-09730-yhdisteen A-dia stereoisomeerin •: hydrokloridia.

: Esimerkki 5 595 mg YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin malonaattia --- suspendoitiin 5 ml:aan kloroformia. Saatu suspensio käsi-'.'. teltiin kaksi kertaa 2,5 ml :11a natriumvetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja sen jälkeen kaksi kertaa 5 ml:lla vettä. Saatu kloroformiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa kuiviin, . .. jolloin saatiin 491 mg A-diastereoisomeerin vapaata emästä .·.· karamelli maisena aineena. Tuote ja 126 mg oksaalihappo- dihydraattia liuotettiin 3 m1 : a a n asetonia, muodostuneen * liuoksen anneltiin seistä 4°'C: saa ja erottuneet kiteet "... otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 400 my .·. YM-09 7 id - y hd ι s t. ecu A - cl i a s I e re o i s o me e r ,i n uksaluattia.

Esimerkki 6 ^ 83516

Noudatettiin esimerkin 5 menetelmää, mutta oksaalihapon asemesta käytettiin 146 my 2-ketoglutaarihappoa, jolloin saatiin 250 mg YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin 2-ketoglutaraattia.

Esimerkki 7

Noudatettiin esimerkin 5 menetelmää, mutta oksaalihapon asemesta käytettiin 167 mg p-nitrobentsoehappoa, jolloin saatiin 530 mg YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin p-nitrobentsoaattia.

Esimerkki B

Noudatettiin esimerkin 5 menettelyä, mutta oksaalihapon asemesta käytettiin 116 my maleiinihappoa, jolloin saatiin 300 mq YM-09730-yhdisteen Adiastereoisomeerin maleaattia.

. f. s i in e r k k i 9 491 mq YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeeriä liuotettiin - - 2 ml:aan asetonia, lisättiin 1 ml fosforihapon (1 mooli) ; . metanoliliuosta ja liuoksen annettiin seistä 4°C;ssa.

Eronneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, jolloin : ; saatiin 4Θ0 mq YM-09730-yhdisten A-diastereoisomeerin fosfaattia.

Seuraajassa taulukossa on annettu esimerkeissä 1 - 9 saatujen haluttujen yhdisteiden ominaisuudet.

20 8351 6

Ominaisuudet

Tuote Kaava sp. Alkuaineanalyysi CU) HU) NU) Cl (%)

Fosfaatti C27H29N3°6 216-218 54,39 5,56 6,96 •H3P04.1/2H20 54,18 5,56 7,02

Hydrokloridi G27^29^3G6 203-205 61.59 5,71 8,08 6,90 •HC1 (haj.) 61,42 5,73 7,96 6,71 p-nitrobentsoaatti ('27^29N3°6 150~151 61,58 5,20 8,32 •C7H5N04-1/4H20 61,58 5,24 8,32

Maleaatti G27H29N3°6 168-169 61,40 5.49 6,85 •C4H404 61,28 5^47 6,92 2-keto- C27H29N3°6 160-161 60,36 5,48 6,52 glutaraatti ·03Η403 60,28 5,53 6,59

Oksalaatti C27H29N3°6 179-180 60,14 5.62 6,93 •C,H,0. 60,36 5.70 6.88 l 2 4

Malonantti ^27^29^3^ 1®1ϊ ^ ~ 69/89 5,37 7,23 ,c H 0 182,5 60,50 5,58 7.06 344 (naj.) (Ylempi: Saatu arvo)

Hydrokloridi: NMR (CD OD, ΤΜς (Alempi: Laskettu arvo) sisäinen standardi, öpprn) 1,80-2,70 (2H, leveä m, C4'-H2) 2.32,2,34 (6H,s, C2f6-CH3) jfY™2 3,0-4,0 ( 4H, m, C2'f5*-H2) \ : 3,63 (3H, s -COOCH3) 4,40 (2H, s, -ch2- φ ) V°2C^^co2^l__4.

5,08 UH, s , C4-H) h C^H^CH 2'^5' 5,30 (1H, », C3.-H) 3 3 7,30-8,20 (9H, m, bentseeni- -HC1 ' .

renkaan h) 8351 6

Esimerkki ID

1,5 g esimerkissä 3 tai 4 saadun A-diastereoisomeerin maloriaattia suspendoitiin 5 ml:aan kloroformia ja suspensio käsiteltiin peräkkäin kaksi kertaa 3 ml:lla natrium-vety k a r b ona a t i n kyllästettyä vesiliuosta ja sen jälkeen kaksi kertaa 3 ml:lla vettä. Kloro formi1iuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa. Saatuun jäännökseen lisättiin 6 ml etanolia ja seoksen annettiin seistä yön yli 5°C;ssa, jollain saatiin 0,86 o VM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin vapaata emästä kiteinä.

Sulamispiste: 145 - 148°C

Alkuaineanalyysi (C H0QN 0,)

C i Lj j O

C ( 8 ) H ( 8 ) N ( 8 )

Lask.: 65,98 5,95 8,55

Saatu: 66,04 6,00 8,53 NMR (CDCl TMS sisäinen stadardi, 6ppm): ! 1,40 - 2,96 ( 6 H , m, ^ , 4 ' , 5 ''H2 } i.j 2,34, 2,36 ( 6H, s, C2 Ich^) 3,65 ( 5 H , s, -COOCH^ ja - C H 2 jzi) ; ; 3,10 (1H, s, C^H) ly 3,12 (1H, m, C -H) 5,78 (1H, leveä s, NH) 7,18 - 8,25 (9H, m, bentseenirenkaan H) , ψ V· H3C°2C^^SKC02v^J_4, 2 CH 2'^n^5 3 1 Λ :V CH2-<p 22 83 5 1 6

Oikealle kääntävän isomeerin A valmistaminen Esimerkki 11 (1) 4,91 q vertailuesimerkissä 1 saatua puhdistamatonta vapaata emästä ja 1,04 g malonihappoa liuotettiin 15 ml:aan asetonitriiliä. Liuoksen annettiin seistä yön yli 0 -5°C:ssa. Nain eronneet kiteet otettiin talteen suodattamalla (2,03 g) ja kiteytettiin kaksi kertaa uudelleen 25-kertaisesta metanolitilavuudesta, jolloin saatiin 1,27 g YM-U9730-yhdisteen A-diastereoisomeerin malonaattia, joka ei sisältänyt lainkaan B-diastereoisomeeriä. Tuotteen sulamispiste oli 181,5 - 182,5°C (hajoaa). 1,27 g näin saatua malonaattia suspendoitiin 5 ml:aan kloroformia ja suspensio pestiin peräkkäin kaksi kertaa 2,5 mltlla natriumvetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta, kerran 2,5 m 1:11a vettä ja sen jälkeen kaksi kertaa 2,5 ml:lla vesipitoista lO-p^osenttista suolahappoliuosta. Kloroformiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa kuiviin. Muodostunut jäännös liuotettiin 2 ml:aan asetonia ja liuoksen annettiin seistä. Otettiin talteen 1,09 q YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin näin eronnutta hy drok lor id ia .

(2) 4,67 g YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin hydro- * ; kloridia käsiteltiin kyllästetyllä vesipitoisella natrium-vetykarbonaatilla, jolloin saatiin 4,35 g vapaata emästä.

Sen jälkeen liuotettiin 4,35 g nain saatua vapaata emästä ja 1,18 g L-(-)-maleiinihappoa 28 ml:aan etanolia kuumentaen ja liuoksen annettiin seistä yön yli 0 - 5uC:ssa. Näin eronneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, . .. jolloin saatiin 2,43 g YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L - ( - )-ma 1 aa 11 ia .

• Kiteet kiteytettiin uudelleen 85 m1 : s t a etanolia, jolloin . · saatiin 2,21 g L-(-)-malaattia. Ominaiskääntokyky / a / ^ ·... oli +82,2° (c - 0,5, metanoli). Kun tämä tuote kiteytettiin etanolista, e i havaittu mitään muutosta omina iskääni ö kyvyssä.

23 8351 6

Sulamispiste: 190 - 191°C (hajoaa).

Alkuaineanalyysi (C27H29N306,C4H6°5^ C ( % ) H ( % ) N ( S )

Saatu: 3 9,72 S, 8 0 6,7 3

La s k.: 59,5 1 3,64 6,72

Esimerkki 12 4,91 g vertailuesimerkissä 1 saatua YM-09730-yhdisteen vapaata puhdistamatonta emästä ja 1,34 g L-(-)-maleiinihappoa liuotettiin 23 ml:aan asetonia. Muodostunutta liuosta sekoitettiin 48 tuntia 0 - 5°C:ssa. Eronneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja pestiin pienellä määrällä kylmää asetonia, jolloin saatiin 0,57 g YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin I. - ( - )-mu 1 au 11 ι s . Um1 naisk ääntökyky /a/j^ oli +78,3° (c = 0,5, metanoli).

Tuote kiteytettiin uudelleen 50-kertäisestä etanoliti-lavuudesta, jolloin saatujen kiteiden (0,44 a) ominais-kääntökyky /a/j^ 0ϋ +82,2° (c = 0,5, metanoli).

-- Sulamispiste: 190 - 191°C (haj.).

Esimerkki 13 2,21 g esimerkissä 11 saatua YM-0 97 3 0-y h d i s t een A-dia- · stereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L —( — ) — mala allia suspendoitiin 8 ml:aan kloroformia ja suspensio käsiteltiin peräkkäin kaksi kertaa 4,3 ml :11a natriumvety-karbonaatin kyllästettyä vesiliuosta, kerran 4,3 ml:lla vettä ja sen jälkeen kaksi kertaa 4,3 m1:11a 10-prosenttista . . suolahappoa. Kloro formi1iuos kuivattiin vedettömällä magnesium-. sulfaatilla. Suodattamisen jälkeen liuos haihdutettiin kuiviin alipaineessa. Muodostunut jäännös liuotettiin : 3,5 ml:aan asetonia ja näin saadun liuoksen annettiin - seistä, jolloin saatiin 1,64 g YM-09730-yhdisteen A- 24 8351 6 diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin hydrokloridisakkaa .

Ominaiskääntökyky /a/pU oli +116,5° (c z 0,5, metanoli). Sulamispiste: 223 - 225°C (haj.)

Alkuaineanalyysi (Co.,HoqN,0,.HC1)

l i L7 J O

0(¾) H(5) N(Ä) 01(¾)

Saatu: 61,35 5,55 8,01 6,96 L a s k . : 61,42 5,73 7,96 6,71 WMR (CD^OD, TM^ sisäinen standardi, <5ppm): 1,80-2,70 ( 2H, leveä m, 0^,-H ) 2,32, 2,34 (6H, s, C2 6-CH3) 3,0-4,0 (4H, m, C2,>5’-H2) 3,64 (3 H , s, -COOCH ^) 4,4 2 (2 H, s, -CH (i) 5,08 (1H, s, C4-ll) 5,3 0 ( 1 H , m, 1.:,,-11) 7,30-8,20 (9 H , m, Bentseenirenkaan H)

Esimerkki 14 5 ml : aan isopropanola liuotettiin (S )-3-asetoasetoksi-1-- - bentsyyliμyrvalidiinia (saattamalla reagoimaan 1,77 g ·- · ( S ) - ( - )-1-ben t s y y 1 i-3-hydr oksipy rrol idi inia (/a/^ -3,77°, : ; 0=5, metanoli) ja 0,84 a diketeeniä 3 tunnin ajan 70 - 80°C:ssa), 1,51 u m-nitrobentsladehydiä ja 1,15 g 3-amino-''· kr o t on ihappo-me t y y 1 ies t er i ä , ja liuosta ref luksoi t i in 8 tuntia. Sen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa.

Näin saatu jäännös liuotettiin kloroformiin. Muodostunut . -· liuos pestiin peräkkäin laimealla suolahapolla, vedellä .·.· ja sen jälkeen natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä v es i-- · liuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla.

' Sen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa, jolloin ·... saatiin 4,91 g YM-097 30-yhdisteen A-diastereoisomeerin ..* oikealle kääntävän optisen isomeerin ja B-diastereoisomeerin 2> 8351 6 vasemmalle kääntävän optisen isomeerin seosta karame 11imaisena aineena. Näin saatu puhdistamaton vapaa emäs pylväskromatogra-foitiin si 1ikageeli11ä (kolonni - Wakogel C-200, 2.000 a; eluentti - etyy1ia se ta a11i/etikkahappo, 6:1 v/v), jolloin saatiin YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin öljymäistä asetaattia, jonka retentioaika HPLC-kromatogra f iassa oli 28 minuuttia.

Tuote käsiteltiin kloroformissa natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen laimealla suolahapolla, jolloin saatiin 1,68 a YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin 2 0 hydroklondia. Omiriaiskääntökyky /a/^ oli +116,5 (c = 0,5, me La no li).

Esimerkki 15 A,9 y esimerkissä JA saatua puhdistamatonta vapaata emästä liuotettiin 25 ml: aan kloroformia, lisättiin 15 ml 10-prosenttista suola ti appoa ja saatua seosta sekoitettiin hyvin. Näin muodostunut orgaaninen kerros erotettiin, pestiin jälleen 10 ml :11a 10-p r osen 11 is ta suolahappoa : ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Tämän -· . jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa. Muodostunut ; * jäännös liuotettiin 10 mitään asetonia ja liuoksen annettiin ; seistä 2 päivää 4°C:ssa, jolloin saatiin 2,7 a hydrokloridia ''· ottamalla talteen muodostuneet kiteet. B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävän optisen isomeerin poistamista varten käsiteltiin näin saatu tuote kyllästetyllä vesipitoisella natriumvetykarbonaati11a kloroformissa, jolloin muodostui *· vapaata emästä. Lisättiin 0,68 g L-(-)-ma leiinihappoa 15 ml : ssa etanolia ja saadun seoksen annettiin seistä .· - 2 päivää 4°C:ssa. Näin eronneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kiteytettiin uudelleen etanolista, jolloin saatiin 1,33 g YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-malaattia, 26 8351 6 jolla HPLC-kromatogra fiässä oli retentioaika 28 minuuttia. Ominaiskääntökyky /ol/q® +82,1° (c = 0,5, metanoli).

Esimerkki 16 1,25 g YM-09730-yhdisteen A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-malaattia suspendoitiin 5 ml:aan kloroformia ja näin saatu suspensio käsiteltiin peräkkäin kaksi kertaa 3 mltlla natriumvetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja sen jälkeen kaksi kertaa 3 ml:lla vettä. Kloro formiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sen jälkeen liuotin tislattiin alipaineessa. Näin saatuun jäännökseen lisättiin 6 ml etanolia ja suukoen annettiin seistä yön yli 5°C:ssa, jolloin saatiin 0,8 A g kiteistä YM-09730-yhdisteen A-dia-stereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin vapaata emästä.

Sulamispiste: 13B - 1A0°C.

Alkuaineanalyysi (CHOQN,0, ) L/ LJ J 6 C (% ) H (» ) N ( % )

Lask. : 65,98 5,95 8,55 : Saatu: 66,0A 5,96 8,51 NMR (CDCl^, ΤΜς sisäinen standardi, 6ppm) : - 1,40 - 3,0 (6H, m, c2.fa,5,-H2) :Y 2,3 A , 2,36 (6H , s, Γ £ ^-CH3) 3,65 (5H, s, -C00CH3 ja -CH^) 5,10 (1H, s, f ^-H) 5,12 (1H, m, C3,-H) 5,78 (1H, leveä s, -NH) 7,16 - 8,2A (9H, m, bentseenirenkaan H) 27 8351 6

Formulaatioesimerkki 1 (tabletit)

Yksi tabletti 5000 tablettia A-isomeeri-hycfrokloridi 10,0mq 50 q

Laktoosi 101,0 mg 505 g

Maissitärkkelys 25,3 mg 126,5 g II y d r o k s ι p r o p y y ] i. s e 1.1 u 1 o o s a 3 , 0 m g 15 g M a g n e s ι u m a l e u r a a L l :i 0 , 7 m g 3 , 5 a 140 mg 700 g 150 q vesipitoista 10-prosenttista hydroksipropyyliselluloosaa lisättiin yhtenäsieen seokseen, joka sisälsi 50 g A-isomeeri-hydrokloridia, 505 a laktoosia ja 126,5 g maissitärkkelystä, ja seosta vaivattiin ja rakeistettiin. Kuivaamisen jälkeen granu1a a11iin lisättiin 3,5 g magnesiumstearaattia, rakeet sekoitettiin homogeenisiksi ja sen jälkeen muodostettiin 140 mg painoisiksi tableteiksi.

Formulaatioesimerkki 2 (kapselit) ;; Yksi kapseli 1000 kapselia A-isomeeri-hydrokloridi 10,0 mg 10 g

Kiteinen laktoosi 189,0 mg 189 g

Magnesiumsteara a11i 1,0 mg 1 g 200 mg 200 a

Edellä mainitut komponentit sekoitettiin tasaisesti ja 200 mg seosta täytettiin kuhunkin kapseliin, jolloin saatiin kapselin muutoista lääkettä.

F ormu 1 a alioesimerkki 3 (ruiske) ·. A-isomeeri-hydrokloridi 1 mg D-sorbitoli 100 mg

Mainitut komponentit liuotettiin tislattuun injektioveteen 28 8351 6 ja pH säädettiin suolahappolisäyksen avulla arvoon 4, minkä jälkeen kokonaistilavuus säädettiin 2 ml:ksi lisäämällä tislattua injektiovettä.

Claims (2)

29 83 51 6

1. Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokasta 2,6-dime-tyyli-4-(3-ni t rofenyy1i)-1,4-dihydropyridi ini-3,5-dikarboksyy-1ihappo-3-(1-bentsyy 1ipyrrolidin-3-yyli)-esteri-5-metyyli -esterin A-diastereoisomeeria, tämän A-diastereoisomeerin oikealle kääntävää optista isomeeriä tai tämän diastereoiso-meerin tai optisen isomeerin farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa, tunnettu siitä, että a) 2,6-dimetyyli4-(3-nitrofenyyli)-l,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyylihappo-3-(1-bentsyy1ipyrrolidin-3-yyli)-esteri-5-metyyliesterin A- ja B-diastereoisomeerien seos py1väskromato-grafoidaan käyttämällä kantajana silikageeliä ja eluointiai-neena etyyliasetaatin ja etikkahapon seosta, ja otetaan talteen : A-diastereoisomeerin eluoitunut asetaatti, b) fraktiokiteytetään 2,6-dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-1,4-dihydropyridiini-3,5-dikarboksyy1ihappo-3-(1-bentsyy 1ipyrroli-din-3-yy1i)-esteri-5-metyyliesterin A- ja B-diastereoisomeerien happoadditiosuolan seos niin, että saadaan A-diastreoisomeeriä vastaava suola, c) muodostetaan A-diastereoisomeeri menetelmävaihtoehdoi11 a a) tai b) ja sen jälkeen saatu A-diastereoisomeeri saatetaan reagoimaan L-(-)-maleiinihapon kanssa A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-ma 1eaatin erottamiseksi, minkä jälkeen L-(-)-maleaatti käsitellään emäksellä, d) muodostetaan 2,6-dimetyyli-4-(3-nitrofenyyli)-1,4-dihydro-pyridiini-3,5-dikarboksyy1ihappo-3-(1-bentsyy 1ipyrrolidin-3-yyl i)-esteri-5-metyyliesterin ^ NO, pr ^ H (T ) Il ^C(X) ^ XI Tl ^ H ^ 30 8351 6 jossa aaltoviivan esittämä sidos on a- tai β-sidos ja paksun nuolen esittämä sidos on fl-sidos, A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin ja B-diastereoisomeerin vasemmalle kääntävän optisen isomeerin seos, jolla on kaava I, ja (a) seos pyiväskromatografoidaan käyttämällä kantajana silikageeliä ja eluointiaineena etyyliasetaatin ja etikkahapon seosta A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin asetaatin erottamiseksi, tai (b) mainittu seos saatetaan reagoimaan L-(-)-maleiinihapon kanssa A-diastereoisomeerin oikealle kääntävän optisen isomeerin L-(-)-maleaatin erottamiseksi , e) saatetaan reagoimaan kaavan (II) mukainen m-nitrobents-aldehydi N°2 CT CHO kaavan (III) mukainen (S)-3-asetoasetoksi-1-bentsyyli-pyrroli-diini CH3COCH2COCU_ Π (m), N C o jossa paksun nuolen esittämä sidos on α-sidos, ja kaavan (IV) mukainen 3-aminokrotonihappo-metyyliesteri 3i 83516 CH3C=CHC00CH3 ·~: I (IV), .3 NH2 f) saatetaan reagoimaan edellä olevan kaavan (II) mukainen m-nitrobentsaldehydi, kaavan (V) mukainen asetoetikkahappo- metyy1iesteri — CH3COCH2COOCH3 (V), ja kaavan (VI) mukainen (S)-3-( 3-aminokrotonoyy 1 ioksi )-1-bentsyyl ipyrrol idiini ch3c=chcoov NH2 j (vi), -‘I N P- g) saatetaan reagoimaan (5)-1-bentsyy1i-3-/2-m-nitrobentsy1i-deeni)asetoasetoksi/pyrrolidiini, jolla on kaava (VII) ςρ CH CH 3COCCOOV_ (VII), = H2 -(3 32 8 351 6 ja joka on saatu saattamalla reagoimaan edellä olevan kaavan (II) mukainen m-nitrobentsaldehydi ja edellä olevan kaavan (III) mukainen (S)-3-asetoasetoksi-1-bentsyy1ipyrrolidiini, ja edellä olevan kaavan (VI) mukainen 3-aminokrotonihappo-metyy1iesteri; tai h) saatetaan reagoimaan 2-(m-nitrobentsylideeni)asetoetikka-happo-metyyliesteri , jolla on kaava (VIII) N02 (Vili), CH II CH 3COCCOOCH 3 joka on aikaisemmin saatu saattamalla reaqoimaan edellä olevan kaavan (II) mukainen m-nitrobentsaldehydi ja edellä olevan kaavan (V) mukainen asetoetikkahappo-metyyliesteri) ja edellä olevan kaavan (VI) mukainen (S)-3-(3-aminokrotonoyylioksi)-1-bentsyylipyrrolidiini, minkä jälkeen valinnaisesti käsitellään suola emäksellä ja valinnaisesti edel1eenkäsitel 1 ään saatu A-diastereoisomeeri farmaseuttisesti hyväksyttävällä hapolla.

2. Patenttivaatimuksen Ib mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fraktiokiteytettävä happoadditiosuola on malo-naatti, p-nitrobentsoaatti tai maleaatti. 33 8 3 51 6