FI81587B - Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt anvaendbara n6-substituerade deoxiribosanaloger av adenosiner. - Google Patents

Description

81 E87

Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten adenosiinien N6-substituoitujen deoksiriboosianalogien valmistamiseksi -Förfarande för framställning av farmaceutiskt användbara N6-substituerade deoxiribosanaloger av adenosiner

Hollantilaisessa patenttihakemuksessa 67:14189 on esitetty N®-sykloalkyyliadenosiinit kardioaktiivisina yhdisteinä. US-patentin 3,851,056 mukaan adenosiineilla, joilla on kaavan -ch-ch2-^^ ch3 mukainen N®-substituentti, on antilipolyyttisiä ja antihy-perlipeemisiä ominaisuuksia.

US-patentissa 3,575,959 on esitetty 5'-deoksi-5'-merkapto-N®-(alempialkyyli tai bentsyyli)-adenosiinit antiviraalisina yhdisteinä. US-patentissa 4,373,097 on kuvattu kaavan

NHR

($0 -,1¾

HO OH

mukaisia yhdisteitä, jossa kaavassa n on 0,1 tai 2, Rj[ on alkyyli ja R on vety, alifaattinen tai aromaattinen asyyli. Näillä yhdisteillä esitetään olevan anti-inflammatorista ja analgeettista aktiivisuutta.

5'-deoksi-51-alkyylitio-N®-(tyydyttynyt tai tyydyttymäton, suoraketjuinen tai haarautunut alifaattinen hiilivety)-ade-nosiineja, joilla on verenpainetta alentavaa ja verisuonia laajentavaa aktiivisuutta, on kuvattu US-patentissa 3,475,408.

2 81 587

Kaavan

NH

r' ii

—N

H,C

$

HO OH

mukaisia 5'-deoksiriboosijohdannaisia on japanilaisessa patenttijulkaisussa n:o 55 8162-598 esitetty käytettäviksi tromboosin ja embolian hoitoon.

5'-modifioidun riboosin sisältäviä N6-bisyklo[2.2.1Iheptyy-liadenosiineja, joilla on analgeettisia ja anti-inflammato-risia ominaisuuksia, on esitetty patenttihakemuksessa US 665,216, jolla on tällä hetkellä tämän hakemuksen kanssa samanaikaisesti vireillä oleva jatkohakemus. US-patentissa 4 ,501,735 on lopuksi esitetty N^-d- ja 2-bentsosykloalkyy-li)-adenosiinit.

Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä, adenosiinien N6-substituoiduilla deoksiriboosianalogeilla esitetään olevan analgeettista, neuroleptista ja antihypertensiivistä aktiivisuutta. Analogeihin kuuluvat 5'-deoksi-, S'-deoksi-S'-me-• tyylitio- ja 5'-deoksi-51-haloadenosiinit.

Tämä keksintö koskee siten kaavan

NHR

lCD

Q

II

3 81587 mukaisia yhdisteitä, jossa kaavassa R on kolmesta yhteentoista jäsenisen renkaan omaava sykloalkyyli tai kaavojen β-' -fr , v. * t.i o

Y

Ib Ie Ie mukainen ryhmä, joissa kaavoissa n on yksi, kaksi tai kolme; X ja Y ovat kumpikin, toisistaan riippumatta H, alempialkyy-li, hydroksi, alempialkoksi, bentsyylioksi, nitro, amino, trifluorimetyyli tai halogeeni; Q on kaavan n R3° OR^ mukainen, jossa kaavassa Z on CH3, CI^Hal tai CH2SCH3; R2' tai R3* ovat kumpikin, toisistaan riippumatta H, alempial-kyyli, alempialkanoyyli, bentsoyyli, alempialkyylillä, alem-pialkoksilla tai halogeenilla substituoitu bentsoyyli tai ne muodostavat yhdessä alempialkylideenin kuten esimerkiksi isopropyylideenin tai jonkin sen alempialkanoyyli- tai bent-soyyliesterin; niiden diastereomeerejä tai näiden seoksia, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuolo-ja.

Tämä keksintö koskee myös farmaseuttista koostumusta, joka koostuu terapeuttisesti vaikuttavasta määrästä edellä esitettyä kaavan I mukaista yhdistettä ja farmaseuttisesti « 81587 hyväksyttävästä kantoaineesta, sekä nisäkkäiden hoitomenetelmää, jossa tällaisille nisäkkäille annetaan edellä määritellyn kaavan I mukaista yhdistettä annostelumuodossa.

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä tarkoitetaan termillä "alem-pialkyyli" suoraketjuista tai haarautunutta alkyyliryhmää, jossa on yhdestä kuuteen hiiliatomia, kuten esimerkiksi metyyliä, etyyliä, propyyliä, isopropyyliä, butyyliä, sec-bu-tyyliä, isobutyyliä, tert-butyyliä, amyyliä, isoamyyliä, ne-opentyyliä, heksyyliä ja vastaavia.

Hai tai halogeeni tarkoittaa erityisesti fluoria, klooria tai bromia. Alempialkoksi on O-alkyyli, jossa on yhdestä kuuteen hiiliatomia, ja joka on edellä esitetyn "alempial-kyylin" määrittelyn mukainen.

0

II

Alempialkanoyylioksi on suoraketjuinen tai haarautunut C-alkyyliryhmä, jossa on yhdestä kuuteen hiiliatomia edellä olevan määrittelyn mukaisessa alkyyliketjussa.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää sekä vapaassa emäsmuodossa että happoadditiosuolojen muodossa. Molemmat muodot kuuluvat keksinnön piiriin. Suolamuodon käyttäminen on käytännössä määrällisesti yhtä suurta kuin emäsmuodon. Keksinnön piiriin kuuluvia sopivia farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat suolat, jotka on johdettu mineraaliha-poista kuten esimerkiksi kloorivetyhaposta ja rikkihaposta; ja orgaanisista hapoista kuten esimerkiksi etaanisulfoniha-posta, bentseenisulfonihaposta, p-tolueenisulfonihaposta ja vastaavista, jolloin saadaan vastaavasti hydrokloridia, sul-famaattia, etaanisulfonaattia, bentseenisulfonaattia, p-tolueenisulfonaattia ja vastaavia.

Mainittujen emäsyhdisteiden happoadditiosuolat valmistetaan joko liuottamalla vapaaemäsmuoto veteen tai alkoholin vesi 5 81587 liuokseen tai muuhun sopivaan liuottimeen, joka sisältää tarvittavan hapon, ja eristämällä suola haihduttamalla liuosta, tai antamalla vapaan emäksen ja hapon reagoida orgaanisessa liuottimessa, missä tapauksessa suola erottuu suoraan tai se voidaan saada erottumaan konsentroimalla liuosta.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voivat sisältää asymmetrisiä hiiliatomeita. Keksintöön sisältyvät yksilölliset diastereo-meerit ja niiden seokset. Yksilölliset diastereomeerit voidaan valmistaa tai eristää alalla tunnetuilla menetelmillä.

Tämän keksinnön edullinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ia mukainen ja jossa X, Y, Q, r2'» r3' 3a r5* ovat kuten edellä on määritelty, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Toinen edullinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ia mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q, R21, r3' ja Rg' ovat kuten edellä on määritelty.

Eräs toinen edullinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ia mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q on 5'-deoksi-g-D-rihoosi, 5'-deoksi-5'-metyylitioriboosi tai 5'-deoksi-5'-klooririhoosi ja R2' ja R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety, asetyyli, bentsoyyli, alempial-kyylillä, alempialkoksilla tai halogeenilla substituoitu bentsoyyli tai ne muodostavat yhdessä alkylideenin, erityisesti propylideenin.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-N6-(2,2-difenyy-lietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-metyylitio-N6-(2,2-difenyylietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

6 81587

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-kloori-N^-(2,2-difenyylietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Tämän keksinnön toinen yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ib mukainen ja X, Y, Q, R2', R31 ja R5' ovat kuten edellä on määritelty, ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Eräs toinen edullinen yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ib mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q, R2'# R3' ja £5' ovat kuten edellä on määritelty.

Vielä eräs toinen yleinen edullinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ib mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q on 5'-deoksi-fj-D-rihoosi, 5'-deoksi-5'-me-tyylitioriboosi tai 5'-deoksi-5'-klooririboosi tai jokin näiden asetyyliesteri, ja R21 ja R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety, asetyyli, bentsoyyli tai ne muodostavat yhdessä isopropylideenin.

Kaavan I, jossa R^ on kaavan Ib mukainen, mukaisten yhdisteiden erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-N^-Cl-in-danyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-metyylitio-N®-(1-indanyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-kloro-N^-(in-danyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

7 815S7 Tämän keksinnön kolmas yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen ja X, Y, Q, R2*, R3' ja R5‘ ovat kuten edellä on määritelty, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Kolmannen yleisen suoritusmuodon toinen edullinen muoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q, R2*, R3' ja R5* ovat kuten edellä on määritelty.

Kolmannen yleisen suoritusmuodon vielä eräs edullinen muoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q on 5'-deoksi-3-D-riboosi, 5'-deok-si-5·-metyylitioriboosi tai 5'-deoksi-5'-klooririboosi tai jokin näiden asetyyliestereistä, ja R21 ja R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety, asetyyli, bentsoyyli tai ne muodostavat yhdessä isopropylideenin.

Kaavan I, jossa R on kaavan Ie mukainen, mukaisten yhdisteiden eräs suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-N6-(l-metyyli-2-fenyylietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-metyylitio-N6-(l-metyyli-2-fenyylietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-kloori-N®-(l-metyyli-2-fenyylietyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Tämän keksinnön neljäs yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kolmesta yhteentoista hiiltä renkaassaan sisältävä sykloalkyyli ja Q, R2', R3' ja R5' ovat kuten edellä on määritelty, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

8 81 587

Edullinen neljäs yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on 5-7 hiiltä renkaassaan sisältävä syklo-alkyylitähde ja Q, R2', R3* ja Rs' ovat kuten edellä on määritelty.

Toinen edullinen neljäs yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on 5-7 hiiltä renkaassaan sisältävä sykloalkyyliradikaali ja Q on 5'-deoksi-B-D-riboosi, 5'-deoksi-5'-metyylitioriboosi tai 51-deoksi-5'-klooriri-boosi tai näiden asetyyliestereistä jokin ja R21 ja R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety, asetyyli, bentsoyyli tai ne muodostavat yhdessä isopropyylideenin.

Kaavan I, jossa R kaavan Id mukainen, mukaisten yhdisteiden erityinen suoritusmuoto on 5'-deoksi-N^-(syklopentyyli)-adenosiini tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5'-deoksi-5'-metyylitio-N^-(syklopentyyli)-adenosiinin t»i sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Erityinen suoritusmuoto sisältää 5' -deoksi-5' -kloori-N*»-(syklopentyyliJadenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

Tämän keksinnön viides yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen ja X, Y, Q, R2'' R3' ja r5' ovat kuten edellä on määritelty, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Toinen edullinen neljäs yleinen suoritusmuoto on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q, R2'f 83' ja R5' ovat kuten edellä on määritelty.

9 81 587

Er&s viidennestä yleisestä edullisesta suoritusmuodosta on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on kaavan Ie mukainen, X ja Y ovat vetyjä ja Q on 5'-deoksi-$-D-riboosi, 5'-deoksi-5'-metyylitioriboosi tai 5'-deoksi-5'-klooririboosi tai jokin näiden asetyyliesteri, ja R21 ja R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety, asetyyli, bentsyyli, tai ne muodostavat yhdessä isopropylideenin.

Kaavan I, jossa Ri on kaavan Ie mukainen, mukaisten yhdisteiden erityinen suoritusmuoto sisältää N^-Q-naftyylimetyy-li-51-deoksiadenosiinin tai N^-a-naftyylimetyyli-5'-deoksi-adenosiini-21,3'-di-O-asetyylin.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan syntetisoida helposti antamalla sopivan N-6-substituoidun puriinin II reagoida suojatun deoksisokerin III, lila tai Illb kanssa seuraavasti :

N_1 III

NHR | I

ACO OhC

w · — H H2 B’cs 'rV'0*' Π Ula

A CO OAC

K2

Hai C o.

CV*0*' Γ1 IIIb

ACO OAC

10 81 587

Kaavan II, jossa R on kuten edellä on määritelty, mukaisen yhdisteen annetaan reagoida kaavan III, lila tai Illb mukaisen yhdisteen kanssa tasaisessa sulatteessa ja kuumennetaan noin yhdestä kahteentoista tuntia. On edullista lisätä katalyyttinen määrä happoa.

Kaavan Illb mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa seuraavan kaavion mukaisesti: H01 Ov I^N^woac 1) mesylaattikloridi y Illb H—V 2) halogeenianioni

AcO OAC

Ne voidaan myös syntetisoida tunnetuista 6-klooripuriinibo-sideista, kuten kaaviossa I on esitetty.

u 81587 KAAVIO 1

Cl NHR

fVV HH2R fY\ ^ «Γ- '

“Tpl '·· ""“O

HO OH HO OH

NHR

MeO^^-OMe

O

/^'katal. H°“|^j SOBr, tai S0C1, ® ,° iv —h^ä—1 y 1) SOCl-tai SOBr,

V -*-*- I

2) HCOjH, H20 1) SOC1,tai SOBr, v 2) ca3s--*- 1 3) HCOjH, H20 1) CH3S-SCH3 P(nBu), V ---— I 2 2

HCOjH, HjO

12 81 587

Kaavan IV mukaiset yhdisteet valmistetaan antamalla 6-kloo-ripuriiniribosidin ja amiinin NH2R, jossa R on kuten edellä on määritelty, reagoida keskenään inertissä liuottimessa ja emäksen, kuten esimerkiksi trietyyliamiinin läsnäollessa. Yhdiste IV voidaan muuttaa isopropylideenianalogikseen V antamalla sen reagoida 2,2-dimetoksipropaanin kanssa asetonissa ja happokatalysaattorin, kuten esimerkiksi bis-(p-nitro-fenyyli)-fosfaattihydraatin (Hamptonin reagenssi) läsnäollessa. Kaavan I mukaiset 5'-deoksi-5'-kloori- ja 5'-deoksi-5'-bromiyhdisteet syntetisoidaan antamalla sopivan yhdisteen V reagoida tionyylikloridin tai tionyylibromidin kanssa ja käsittelemällä tämän jälkeen muurahaishapolla ja vedellä isopropylideenin erottamiseksi, jolloin tuloksena saadaan yhdiste I. Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa myös käsittelemällä yhdiste IV suoraan tionyylikloridilla tai tionyylibromidilla heksametyylifosfoamidissa (HMPA).

5'-deoksi-5'-metyylitioadenosiiniyhdisteet valmistetaan jom-malla kummalla seuraavasta kahdesta tavasta. N^-substituoitu 5*-deoksi-5'-klooriadenosiini-isopropylideeniyhdiste voidaan käsitellä tiometoksidilla kloori-ryhmän poistamiseksi ja tämän jälkeen muurahaishappo-vesi -seoksella suojaryhmän poistamiseksi, jolloin tuloksena saadaan kaavan I mukainen yhdiste. Vaihtoehtona on yhdisteen V käsittely dimetyylidisul-fidilla tri-n-butyylifosfiinin läsnäollessa ja tämän jälkeen suojauksen poisto muurahaishappo-vesi -seoksella, jolloin tuloksena saadaan kaavan I mukaisia yhdisteitä, jossa z on CH2SCH3.

Tämän lisäksi voidaan kaavan I, jossa Z on F, mukaiset yhdisteet valmistaa seuraavalla reaktiolla: 1 2 3 mesyylikloridi

V----------------------► I

2 F“ 3 HC02H/H20 i3 81 587

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on havaittu olevan toisistaan poikkeavia affiniteetteja adenosiinireseptoreihin (tässä merkitty termeillä A^ ja A2 mukavuussyistä). Nämä yhdisteet ovat aktiivisia eläinkokeissa, jotka osoittavat neu-roleptisen aktiivisuuden yleisimpien psykoosien kuten esimerkiksi skitsofrenian hoitoon käytettäväksi. Näillä yhdisteillä on myös analgeettisia ominaisuuksia, ja niitä voidaan siten käyttää kivun hoitoon.

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää myös antihypertensiivisinä aineina korkean verenpaineen hoidossa.

FARMAKOLOGINEN ARVIOINTI

Adenosiini-reseptorisitoutuminen-Ai-reseptoriaffiniteetti (RBAj)

Membraanien valmistaminen

Long Evans -urosrottien (150-200 g) kokoaivot, joista oli poistettu pikkuaivot ja aivorunko, homogenoitiin 30-kertai-sessa tilavuudessa jääkylmää 0,05-M Tris-HCl-puskuria, pH 7,7,Brinkmanin Polytron PT-10 -laitteella (asetusarvolla 6; 20 sekuntia) ja sentrifugoitiin kymmenen minuuttia kierros-nopeudella 20 000 x g (Sorvali RC-2) 4 °C:ssa. Supernatantti kaadettiin pois ja pelletti suspendoitiin uudelleen ja 20 ml:aan Tris-HCl -puskuria, jossa oli kaksi kansainvälistä yksikköä IU/ml adenosiinideaminaasia (Sigma, tyyppi III, valmistettu vasikansuolen limakalvosta), inkuboitiin 37 °C:ssa 30 minuuttia ja tämän jälkeen 0 °C:ssa kymmenen minuuttia. Homogenaatti sentrifugoitiin uudelleen, ja tuloksena saatu pelletti suspendoitiin uudelleen jääkylmään 0,05-M Tris-HCl -puskuriin, pH 7,7, sellaiseksi pitoisuudeksi, joka vastasi 20 mg/ml alkuperäisen kostean kudoksen painoa, ja käytettiin välittömästi.

14 81 587

Koeolosuhteet

Kudoshomogenaattia (10 mg/ml) inkuboitiin 0,05-M Tris-HCl -puskurissa, jonka pH3 oli 7,7 ja jossa oli 1,0-nM [3H]-N6-sykloheksyyliadenosiinia ([3H]-CHA) testattavien yhdisteiden läsnäollessa tai ilman niitä kolmena rinnakkaiskokeena yhden tunnin ajan 25 eC:ssa. Inkubointitilavuus oli 2 ml. Sitoutumaton [3H]-CHA erotettiin suodattamalla nopeasti alipaineessa Whatmanin lasikuitusuodattimen (GP/B) läpi. Suodattimet pestiin kolme kertaa 5 ml s 11a jääkylmää 0,05-M Tris-HCl -puskuria, pH 7,7,. Suodattimelle jäänyt radioleimattu li-gandi mitattiin nestetuikespektrofotometrillä sen jälkeen, kun suodattimia oli ravisteltu yhden tunnin ajan tai kauemmin mekaanisella ravistelijalla 10 ml:ssa Beckmanin Ready-Solv HP -tuikeliuosta.

Laskelmat

Ei-spesifinen sitoutuminen määritettiin sinä sitoutumisena, joka tapahtui 1-mM teofylliinin läsnäollessa. Se testattavan yhdisteen pitoisuus, joka inhiboi 50% spesifisestä sitoutumisesta (IC5Q), määritettiin epälineaarisen tietokonekäyrän avulla. Scatchardin käyrä laskettiin lineaarisen regression avulla pisteistä, jotka esittivät sitoutuneen radioiigandin määrän (pmoolia/kudosgramma) lausekkeen {sitoutunut radioligandi] vapaa radioiigandi funktiona. Koska sitoutunutta radioligandia oli vain pieni osa lisätystä kokonaismäärästä, määriteltiin vapaa radioli-gandi inkubointiseokseen lisätyn radioligandin pitoisuutena (nM). Hill'in kerroin laskettiin lineaarisen regression avulla pisteistä, jotka esittivät sitoutuneen radioligandin logaritmin lausekkeen log [sitoutunut radioliqandi1

Bmax_sitoutunut radioligandi is 81587 funktiona. Sitoutumispaikkojen maksimimäärä (Β^χ) laskettiin Scatchardin käyrästä.

Adenosiini-reseptorisitoutuminen-A2-reseptoriaffiniteetti (RBA2)

Kudosvalmiste

Kumpaakin sukupuolta olevien Sprague-Dawley -rottien, paino 200-500 g, aivot hankittiin Pel-Freez'ilta (Rogers, Arkansas). Long-Evans mustapäisten (hooded) urosrottien tuoreilla aivoilla (Blue Spruce Farms, Altamont, NY) saatiin pääosin identtiset tulokset. Aivot sulatettiin, ja niitä pidettiin jäissä aivojuovioiden leikkaamisen ajan. Aivojuoviot hajotettiin 10-kertaisessa tilavuudessa jääkylmää 50-mM Tris-HCl -puskuria (pH 7,7 25 eC:ssa, pH 8,26 5 °C:ssa) (=Tris-pus-kuri) 30 sekunnin ajan Polytron-PT-10 -laitteella (Brinkman) asetusarvolla 5. Suspensio sentrifugoitiin kierrosnopeudella 50 000 x g kymmenen minuuttia, supernatantti kaadettiin pois, pelletti suspendoitiin uudelleen 10-kertaiseen tilavuuteen jääkylmää edellä esitettyä Tris-HCl -puskuria sentrifugoitiin uudelleen, suspendoitiin uudelleen pitoisuudeksi 1 g/5 ml ja säilytettiin pienissä muovipulloissa -70 °C:ssa (stabiili vähintään kuusi kuukautta). Tarpeen vaatiessa kudos sulatettiin huoneen lämpötilassa, hajotettiin Polytron-laitteella ja pidettiin jäissä, kunnes se käytettiin.

Inkubointiolosuhteet

Kaikki inkuboinnit kestivät 60 minuuttia ja ne tehtiin 25 °C:ssa 12x75 mm lasiputkissa, joissa oli 1 ml Tris -puskuria ja 5 mg rotan aivojuoviokudoksen alkuperäistä määrää vastaava määrä aivojuoviokalvoja, 4-nM [^HJ-N-etyyliadenosiini-5'-karboksiamidia ([3h]NECA), 50-nM N^-syklopentyyliadenosiinia (A^-reseptorisitoutumisen estämiseksi), 10-mM MgCl2, 0,1 ie 81587 yksikköä/ml adenosiinideaminaasia sekä 1 % dimetyylisulfoksidia. N^-syklopentyyliadenosiini liuotettiin 0,02-N HCl:oon pitoisuuteen 10 mM ja laimennettiin Tris -puskurilla. N*>-syklopentyyliadenosiinin varastoliuoksia ja laimennoksia voitiin säilyttää -20 eC:ssa useita kuukausia. Testattavat yhdisteet liuotettiin dimetyylisulfoksidiin pitoisuuteen 10-mM samana päivänä, kun koe suoritettiin, ja laimennettiin dimetyylisulfoksidilla pitoisuudeksi, joka oli 100 x lopullinen inkubointipitoisuus. Kontrolli-inkubointeihin laitettiin yhtäläinen tilavuus (10 μΐ) dimetyylisulfoksidia; tuloksena saadulla dimetyylisulfoksidipitoisuudella ei ollut vaikutusta sitoutumiseen. I3h]NECA laimennettiin Tris-pus-kurilla 40-nM pitoisuuteen. Membraanisuspensio (5 mg/0,79 ml) sisälsi riittävästi MgCl2:a ja adenosiinideaminaasia, jotta lopullisiksi inkubointipitoisuuksiksi saatiin 10-mM ja 0,1 yksikköä/ml, vastaavasti. Niiden testiyhdisteiden kohdalla, joiden ICsQ-arvot olivat alle 1 μΜ, lisäysjärjestyk-set olivat testiyhdiste (10 μΐ), N<>-syklopentyyliadenosiini (100 μΐ); [3hJNECA (100 μΐ) ja kalvot (0,79 ml). Niiden testiyhdisteiden kohdalla, joiden IC5Q-arvot olivat yli l-μΜ ja joilla oli rajallinen liukoisuus veteen, lisäysjärjestykset olivat (samat tilavuudet) testiyhdiste, kalvot, N^-syklopen-tyyliadenosiini ja [^hINECA. Kaikkien lisäysten jälkeen koe-putkitelineellinen vortex-sekoitettiin ja putkia inkuboitiin 60 minuuttia 25 °C:ssa ravistelevassa vesihauteessa. Koeput-kitelineellinen vortex-sekoitettiin toisen kerran inkuboin-nin puolivälissä.

Inkuboinnit lopetettiin suodattamalla 2,4 cm:n 6F/B -suodattimen läpi alipaineessa. Kukin putki suodatettiin seuraavasti: putken sisältö kaadettiin suodattimelle, putkeen lisättiin 4 ml jääkylmää Tris -puskuria ja sisältö kaadettiin suodattimelle, suodatin pestiin kaksi kertaa 4 ml:11a jääkylmää Tris -puskuria. Suodatustapahtuma kesti kokonaisuudessaan noin kaksitoista sekuntia. Suodattimet siirrettiin 17 81 587 tuikeputkiin, lisättiin 8 ml Formula 947 -tuikenestettä, ja putkien annettiin seistä yön yli» ravisteltiin ja laskettiin nestetuikelaskijalla 40%:n teholla.

Tulosten analyysit

Ei-spesifinen sitoutuminen määriteltiin sitoutumisena» joka tapahtui 100-μΜ N^-syklopentyyliadenosiinin läsnäollessa» ja spesifinen sitoutuminen määriteltiin kokonaissitoutuminen miinus ei-spesifinen sitoutuminen. IC50 laskettiin sovittamalla painotettu epälineaarinen pienimpien neliösummien käyrä massa-vaikutus -yhtälöön

Y « T - S· D

D + K

jossa Y on cpm sitoutunut T on cpm kokonaissitoutuminen ilman lääkeainetta S on cpm spesifinen sitoutuminen ilman lääkeainetta D on lääkeaineen pitoisuus ja K on lääkeaineen IC50 -arvo

Korjaustekijät laskettiin olettaen» että standardipoikkeama oli verrannollinen Y:n odotusarvoon. Ei-spesifistä sitoutumista käsiteltiin tietokoneanalyysissä kuten lääkeaineen erittäin suurta (ääretöntä) pitoisuutta.

Adenosiinin Αχ- ja A2-reseptoriaffiniteettien IC5q -arvot (nM) on esitetty taulukossa.

ιβ 81587

Esimerkki Reseptorisitoutuminen numero_RBA-1 (nM)_RBA-2 (nM) 1 227 1110 2 1680 21200 3 40 5700 4 556 20000 5 16 17200 6 52 21400 7 51 6300 8 700 44000 9 9 7400 10 13 7200 11 660 2000 12 1490 58200 13 53 240 14 218 8650 15 3 1600 16 35 7900 17 2 2700 18 1,2 2800 19 1370 71300 20 1010 323 21 2520 NT*

22 607 NT

23 80 3040 *NT ei testattu

ANTIPSYKOOTTINEN ARVIOINTI

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat uusia kemiallisia aineita, joita voidaan käyttää farmaseuttisina aineina psykoosien hoidossa. Keksinnön mukaisten yhdisteiden antipsykoottinen aktiivisuus todettiin seuraavassa esitetyllä "Mouse Activity and Screen Test" -menetelmällä (MAST) (Hiiren aktiivisuus ja verkkotesti -menetelmä).

19 81 s 8 7

Eläimet

Yhdeksän paastoamatonta, noin 20-30 g painoista Swiss-Webster -uroshiirtä jaetaan tasapuolisesti kolmeen ryhmään jokaista testattavaa lääkeaineannosta varten. Jokaisen an-nostason arvot saatiin siten kolmella erillisellä ryhmällä, joissa kussakin oli kolme hiirtä.

Lääkeaineet

Jokaisella lääkeaineella testataan vähintään kolme annosta-soa (10, 30 ja 100 mg/kg). Lääkeaineet annetaan intraperito-neaalisesti tunti ennen testiä. Kaikki annokset lasketaan perusyhdisteenä ja annetaan tilavuuksina 10 ml/kg. Yhdisteet liuotetaan tai suspendoidaan 0,2-%:iseen Methoceliin. Kont-rollieläimille annetaan Methocel-injektio.

Testaus

Kaksiosainen testausmenetelmä aloitetaan yksi tunti injektion jälkeen. Ensimmäiseksi suoritetaan verkkotesti (ST) (Phar-mac. Biochem. Behav. 6, 351-353, 1977). Tässä testissä, lyhyesti kuvattuna, hiiret testataan yksittäisille metalliverkoille, joita käännetään tämän jälkeen 180° 60 sekunnin tarkkailujakson alussa. Käännetyltä verkolta pudonneiden hiirten lukumäärä lasketaan.

Verkkotestin jälkeen aloitetaan välittömästi testauksen loppuosa, asettamalla kukin kolmen hiiren ryhmä yhteen aktofo-tometriin (Life Sciences, 22, 1067-1076, 1978). Aktofotomet-ri muodostuu lieriömäisestä kammiosta, jonka keskellä on toinen lieriö, joka sisältää valonlähteen kammion seinämällä oleville kuudelle valokennolle. Kuusi valonsäteen katkaisua vastaa yhtä sykäystä. Liikkumisaktiivisuus rekisteröidään tietokoneella kymmenen minuutin välein 60 minuutin aikana.

20 81 587

Tulokset

Verkkotestistä saadut tulokset ilmoitetaan verkolta pudonneiden hiirien prosenttimäärinä. Lääkeaineella käsiteltyjen hiirien liikkumisaktiivisuudesta saatuja tuloksia verrataan kantaja-aineella käsiteltyjen eläinten aktiivisuuteen ja ilmoitetaan spontaanin liikkumisen estoprosenttina. Kaikki liikkumisen estolle (LI) esitetyt prosenttiarvot perustuvat tuloksiin, jotka on saatu yhden tunnin aikana. Testauksen kumpikin osa on jaettu luokkiin: A=60-100%? 031-59%? ja N=0-30%. Kokonaisannoksen luokitus saadaan seuraavilla kriteereillä: liikkumisen eston verkkotestin epä- annos- luokitus_+ onnistumisluokitus * luokitus

A - N tai C * A

A - A « C

C - N tai C * C

_kaikki muut yhdistelmät *_N_ LAD tarkoittaa alhaisinta annosta, jolla saavutetaan A-luo-kitus. Aktiivisiksi katsotaan yhdisteet, joiden kokonaisannoksen luokitus oli A annoksella 100 mg/kg tai vähemmän. Tällä menetelmällä saatiin taulukossa esitetylle yhdisteelle taulukossa esitetyllä annoksella kokonaisannoksen luokitus A. Yhdisteet on identifioitu esimerkeissä.

21 81587

Esimerkki Annos (mg/kg) Hiiren Verkko- liikkumis- testin aktiviteetin epäonnistu-esto minen 1 3 29« 11« 10 30« 0« 30 65« 11« 2 10 16« 0« 30 52« 0« 100 80« 11« 3 10 19« 0« 30 68« 22« 100 96% 100% 4 10 -16« 0« 30 20« 0« 100 56« 0« 5 1 25« 0% 3 58« 11« 10 69« 22« 30 96« 100« 100 99« 100« 6 1 12« 0« 3 49« 0« 10 83« 88« 30 92« 99% 22 81 587

Esimerkki Annos (mg/kg) Hiiren Verkko- liikkumis- testin aktiviteetin epäonnistu-esto minen 7 10 9% 0% 30 -50% 0% 100 38% 0% 8 10 22% 11% 30 39% 0% 100 29% 0% 9 0,3 1% 0% 1.0 46% 0% 3.0 36% 22% 10 90% 77% 30 92% 99% 100 97% 99% 10 10 41% 0% 30 78% 55% 100 99% 99% 11 10 -4% 0% 30 34% 0% 100 90% 0% 12 3 44% 0% 10 37% 0% 30 59% 0%

II

23 81 587

Esimerkki Annos (mg/kg) Hiiren Verkko- liikkumis- testin aktiviteetin epäonnistu-esto minen 13 10 -13% 0% 30 39« 11« 100 63« 0« 14 10 57% 0% 30 69« 0« 100 96« 0« 15 10 65« 67« 30 96« 100« 100 100% 100« 16 10 2« 0« 30 51« 11« 100 17 0,3 44« 11« 1.0 · 83% 55« 3.0 95« 99% 10 89« 99« 30 100« 99% 100 100« 99« 18 0,1 12« 0« 0,3 25« 11« 1.0 39« 11« 3.0 52« 22% 10 93« 78« 30 94« 100« 100 98« 100« 24 81 587

Esimerkkki Annos (mg/kg) Hiiren Verkko- liikkumis- testin aktiviteetin epäonnistu-esto minen 19 3 36% 11% 10 55% 0% 30 83% 0% 20 3 -1* 0% 10 49% 0% 30 81% 0% 23 0,3 -2% 0% 1 9% 0% 1 7% 0% 3 48 0% 10 76 0% 30 81 0%

Keksinnön mukaisen tyypillisen yhdisteen (identifioitu esimerkissä 5) antipsykoottinen aktiivisuus testattiin myös seuraavalla menetelmällä (SIDR). Esitetyllä yhdisteellä on osoitetut ED50 -arvot (mg/kg) ja sen katsotaan olevan aktiivisen antipsykoottisena aineena testimenetelmässä.

Menetelmä Täysi-ikäisiä Long-Evans -urosrottia tai silkkiapinoita opetetaan painamaan vipua tuskallisen jalkaan kohdistuvan sähköiskun välttämiseksi. Jos eläin ei onnistu painamaan vipua, se saa sähköiskun joka kymmenes sekunti kunnes vipua painetaan. Sähköiskut voidaan lopettaa painamalla vipua. Tämän jälkeen sähköiskuja ei tule, mikäli vipua painetaan vähintään kerran joka 20. sekunti.

25 81 587

Kukin eläin toimii omana kontrollinaan; yksi jakso viikossa käytetään peruskäyttäytymisen vakiinnuttamiseen ja toinen jakso myöhemmin viikossa lääkejaksona. Heti, kun väistämis-mallit ovat vakiintuneet, tutkitaan standardiyhdisteiden ja tuntemattomien yhdisteiden vaikutukset.

Yhdisteen (esimerkki 5) ED50 -arvo on 2,8 mg/kg väistämisen ehkäisemiselle ja 10%:n vaste annoksella 4 mg/kg pakenemisen ehkäisemiselle.

ANTIHYPERTENSIIVINEN ARVIOINTI (AHP3) Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden sopivuus antihyperten-siivisinä yhdisteinä käytettäviksi voidaan osoittaa näiden yhdisteiden tehokkuutena tavanomaisissa farmakologisissa testeissä; ne esimerkiksi alentavat merkittävästi tajuissaan olevien rottien keskimääräistä valtimoverenpainetta. Tämä testimenetelmä on kuvattu seuraavissa kappaleissa.

Tajuissaan olevien rottien aorttaverenpaineen ia sydämen lyöntinopeuden suoratarkkailumenetelmä

Sykkivän verenpaineen (BP) mittaaminen vapaina ja tajuissaan olevilta rotilta, joille oli asennettu kirurgisesti polye-teenikanyylit, suoritettiin tietokoneavusteisen tiedonkeruu-ohjelman (CADCS) avulla. Menetelmän perusosina ovat kany-lointimenetelmä ja CADCS.

Menetelmä

Kanylointimenetelmä

Rotat nukutettiin telatsolilla (1:1 tiletamiini-HCl ja tsol-atsepuami-HCl); 20-40 mg/kg IM, ja laskeva aortta paljastettiin keskiviivaviillolla. Polyeteeniputkesta valmistetut kanyylit asennettiin aorttaan munuaisvaltimoiden alapuolisen 26 81 587 pienen punktioreiän kautta. Punktioreikä tehtiin 23 Gin kertakäyttöneulalla siten, että osa aortasta oli puristettu kiinni punktioreiän ylä- ja alapuolella. Kanyylit, jotka muodostuivat PG100 -rungosta (0,86 mm ID) ja PE50 -kärjestä (0,58 mm ID), kiinnitettiin troakaareen, vietiin lannelihak-sen läpi, kuljetettiin subkutaanisesti selän keskiviivan suuntaisesti ja johdettiin ulos korvien välistä. Kanyylit kiinnitettiin lannelihakseen sekä lapaluiden väliin (3-0 vihreä punottu ompelulanka). Keskiviivan viilto suljettiin kahdessa vaiheessa (ensiksi lihas, sitten iho) yhtäjaksoisella over-and-over -ompeleella (4-0 pitkäaikainen). Tämän jälkeen annettiin kullekin rotalle subkutaanisesti 30000 yksikköä penisilliiniä (penisilliini G - prokaiini -steriili suspensio).

Rotat varustettiin vaijas-jousi-nivel -laitteella, joka oli suunniteltu suojaamaan kanyylia ja sallimaan rotalle suhteellisen vapaan liikkumisen. Valjaat valmistettiin nylon -tarranauhasta, joka oli kiinnitetty metallilevyyn, johon jousilangat (18-8 ruostumatonta terästä) oli messinkinivelin kiinnitetty. Jokainen polyeteenikanyyli pujotettiin jousen läpi ja liitettiin nivelen kautta paineenmuuntimeen (malli P23Gb; Statham Instruments? Hato Rey, Puerto Rico) ja infuu-siopumppuun (Sage malli 234-7; Orion Research, Cambridge, ΜΆ) PE100 -putkien avulla. Testin aikana jokainen rotta sai heparinoitua fysiologista suolaliuosta jatkuvana hitaana in-fuusiona (noin 400 1 tai 40 yksikköä hepariinia 24 tunnin aikana) hyytymien muodostumien estämiseksi. Aortan verenpaineen (systolinen miinus diastolinen) ollessa alle 25 mmHg suurennettiin kanyylin kautta annettavaa heparinoidun suolaliuoksen annostusta hetkellisesti.

li 27 81 587

CADCS

Kaikkien 32 rotan sykkivää verenpainetta ja sydämen lyönti-nopeutta seurattiin kerran minuutissa kahdella laboratorio-mikrotietokoneella, jotka olivat suorassa kommunikointiyh-teydessä tietoja keräävään tietokoneeseen. Tiedot tallennettiin ensiksi tietolevykkeelle ja siirrettiin sitten magneettinauhalle tutkimuksen päätietokoneen analysoitavaksi ja raportoitavaksi. Koko ohjelma käsitti paineenmuuntimelta tulevan primäärisen signaalin moduloimisen, systolisen, diastolisen ja keskimääräisen verenpaineen minuuttiarvojen primaa-ritiedoston muodostamisen laboratorion mikrotietokoneella sekä tallentamisen, analysoinnin ja raportoinnin tutkimuksen päätietokoneella.

Paineenmuuntimet liitettiin analogisignaalien vakiointimo-duleihin. Moduleilla saatiin muuntimille säädetty viritys-jännite, mikroprosessoriliitäntään vaadittava vahvistus sekä taipuisan, nesteen täyttämän kapean kanyylin tuoman paine-aaltomuotoisen häiriön kompensointiin tarvittava aktiivinen alipäästösuodatus. Häiriö on 22-26 Hz, ja tällä saatiin luotettava arvio sekä systoliselle että diastoliselle verenpaineelle.

Mikrotietokoneet (yksi kumpaakin 16 rotan ryhmää varten) liitettiin syöttökomponentteihin liitäntäyksikkömoduleiden välityksellä, paineaaltomuotoisen signaalin analogi-digi-taal imuun tiineen ja annos-tapahtuma -markkerikytkimien digi-taalisyöttöön.

Mikrotietokone ohjasi tietojen perättäistä keruuta liitän-täyksikkömoduuleilta sisäisen, synkronisen reaaliaikaisen kellonaikageneraattorin avulla. Kellonaikageneraattorin avulla voitiin verenpainearvot ja markkerikytkimen tila kullakin 32 asemalla kerätä joka kymmenes millisekunti. Mikro- 2β 81587 tietokone muutti jokaisen vastaanotetun verenpainearvon sydämen lyöntinopeuden sekä keskimääräisen, systolisen ja diastolisen verenpaineen "juokseviksi keskimääräisiksi" arvoiksi .

Seuraavilla yhdisteillä saatiin edellä esitetyllä menetelmällä testattuna seuraavat muutokset sydämen lyöntinopeuteen (HR, heart rate) ja keskimääräiseen valtimoverenpaineeseen (MAP, mean arterial pressure).

Esimerkki mg/kg Tunti numero ^ 2 ^ η g 2 10 MAP +18% +13 + 4 +5 +9 HR +10% 0 + 7 +14 +12 3 10 MAP +17 +9 +6 +11 +6 HR +18 +9 +6 +5 +10 4 10 MAP +2 +3 +15 +1 +8 HR + 3 + 9 + 8 +17 + 7 5 10 MAP +36 *23 +20 *19 +18 HR +65 +60 +46 +39 +41 7 10 MAP +8% +5% +8% +10% +5% HR +4% +5% +16% +25% +12% 30 MAP +24% +14% +4% +1% 0% HR +27% +9% +7% +22% +14% 8 10 MAP +1% +10% +2% +3% +4% HR +9% +14% +6% +17% +17% 30 MAP +5% +5% +5% +8% +5% HR +5% +1% +2% +6% +3%

II

29 81 587

Esimerkki mg/kg Tunti numero 1 3 5 7 9 9 10 MAP 420« 425« 413« 413« 47« HR 446« 443« 433« 421« 44« 10 3 MAP 411« 0« 47« 47« 47% HR 429« 411« 46« 415% 420% 10 MAP 421% 413« 45% 49% 46% HR 443% 428% 413« 49% 46% 11 10 MAP 43% 42% 42% 0% 47% HR 41% 46% 46% 41% 410% 12 10 MAP 416% 44% 47% 46% 41% HR 419% 49% 0% 46% 44% 14 10 MAP 412« 49« 41% 47% 42% HR 423« 49% 0% 43% 417% 15 10 MAP 424% 433% 429% 426% 414% HR 444% 455% 453% 442% 429% 16 10 MAP 414% 413% 414% 413% 46% HR 423% 420% 412% 410% +2% 17 10 MAP 442« 441% 437% 436% 432% HR 464« 464« 461« 458« 453% 18 10 MAP 443« 430« 423« 426« 423% HR 463« 458« 447« 445« 440% 30 81 587

Esimerkki mg/kg Tunti numero 1 3 5 7 9 19 10 MAP +32* +20* +20» +20* +12* HR +6» +4* +4* +5* +1* 20 10 MAP +16* +15* +15» +15* +15% HR +15* +19* +13* +15* +9% 21 10 MAP 0* +11* +15* +18» +9% HR +23* +13* +3* +8» +14* 22 10 MAP +21* +8* +17* +17* +20% HR +7* +23* +8* +14* +8% 23 10 MAP +3* +5» *4» +4* +16* HR +19* +11* +6* +8* +15*

ANALGEETTINEN ARVIOINTI

Kouristuksenestotestillä voidaan arvioida alustavasti potentiaalisia analgeettista aktiivisuutta omaavia yhdisteitä. Testi suoritetaan Swiss-Webster -uroshiirillä. Yhdisteet annetaan subkutaanisesti 0,2 » metyyliselluloosan vesiliuoksessa tai muussa sopivassa kantoaineliuoksessa tilavuusmää-rinä 10 ml/kg. Annokset tarkoittavat aktiivista aineosaa.

Etikkahappoa (0,6 %, 10 ml/kg) injisoidaan intraperitoneaa-lisesti 20 minuutin kuluttua adenosiiniantagonistin anta- 3i 81587 misesta. Kouristusliikkeitä lasketaan viiden minuutin ajan, ja laskeminen aloitetaan seitsemän minuutin kuluttua etikka-hapon injisoinnista. Kouristus määritellään vatsanpohjankou-ristuksina ja ruumiin sekä takajalkojen oikenemisena selän samanaikaisesti kaartuessa taaksepäin. Tulokset ilmoitetaan ED50 -arvoina, jolloin ED50 on se annos, joka tarvitaan estämään kouristelu 50-%:eesti verrattuna kantoainekontrollei-hin. ED50 -arvot on laskettu epälineaarisen regressioanalyysin avulla. Esimerkissä 5 esitetyllä yhdisteellä edustavalla 5'-deoksi-NÖ-syklopentyyliadenosiinilla on esimerkiksi ED50 -arvo 0,9 mg/kg intraperitoneaalisesti hiirelle annettuna.

Esimerkin 12 yhdisteellä on, samoin intraperitoneaalisesti annettuna, ED5q -arvo 3,0 mg/kg, ja 5'-kloori-N6-(R)-fenyy- li-isopropyyli-adenosiinin (esimerkki 15) ED50 on 1,8 mg/kg intraperitoneaalisesti annettuna.

Tämä keksintö koskee siten myös psykoosien, kivun tai hypertonian hoitoon tarkoitettua farmaseuttista koostumusta, joka sisältää vastaavan antipsykoottisesti, analgeettisesti tai antihypertensiivisesti vaikuttavan määrän kaavan I mukaista yhdistettä, kuten edellä on määritelty, sekä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen.

Tämä keksintö käsittää lisäksi psykooseista, kivusta tai hypertoniasta kärsivien nisäkkäiden hoitomenetelmän, jossa näille nisäkkäille annetaan joko oraalisesti tai parenteraa-lisesti vastaavaa farmaseuttista koostumusta, joka sisältää kaavan I mukaisen yhdisteen, kuten edellä on määritelty, sopivana yksikköannosmuotona.

Farmaseuttisten koostumuksien valmistukseen tässä keksinnössä kuvatuista yhdisteistä voidaan käyttää joko kiinteitä tai nestemäisiä inerttejä, farmaseuttisesti hyväksyttyjä 32 81 587 kantoaineita. Kiinteämuotoisiin valmisteisiin kuuluvat jauheet, tabletit, dispergoituvat rakeet, kapselit, tärkkelys-kapselit ja peräpuikot. Kiinteä kantoaine voi koostua yhdestä tai useammasta aineesta, jotka voivat toimia myös lai-mennusaineina, flavoriaineina, liuottavina aineina, voiteluaineina, suspendointiaineina, sideaineina tai tablettia hajottavina aineina; se voi olla myös kapselointiainetta. Jauheissa kantoaine on hienoksi jauhettu kiinteä aine, johon on sekoitettu hienoksi jauhettu aktiivinen yhdiste. Tabletissa on aktiivinen yhdiste sekoitettu sellaiseen kantoaineeseen, jolla on vaaditut sitomisominaisuudet sopivissa suhteissa ja joka on puristettu halutun kokoiseksi ja muotoiseksi. Jauheet ja tabletit sisältävät edullisesti mielellään viidestä tai kymmenestä noin 70 prosenttiin aktiivista ainesosaa. Sopivia kiinteitä kantoaineita ovat magnesiumkarbonaatti, mag-nesiumstearaatti, talkki, sokeri, laktoosi, pektiini, deks-triini, tärkkelys, gelatiini, tragantti, metyyliselluloosa, natriumkarboksimetyyliselluloosa, alhaisessa lämpötilassa sulava vaha, kaakaovoi, ja vastaavat. Termillä "valmiste" tarkoitetaan myös formulaatiota, joka koostuu aktiivisesta yhdisteestä ja kantoaineena olevasta kapselointiaineesta, joka muodostaa kapselin, jonka sisällä olevaa aktiivista komponenttia (yksin tai muiden kantoaineiden kanssa) ympäröi kantoaine, joka täten on liittynyt aktiiviseen aineeseen. Samalla tavalla sisältyvät tärkkelyskapselit termiin. Tabletteja, jauheita, tärkkelyskapseleita ja kapseleita voidaan käyttää oraalisesti annettavaksi sopivina annosmuotoi-na.

Peräpuikkoja valmistettaessa sulatetaan ensin alhaisessa lämpötilassa sulava vaha kuten esimerkiksi rasvahappoglyse-ridien seos tai kaakaovoi, ja aktiivinen ainesosa dispergoi-daan tähän homogeenisesti esimerkiksi sekoittamalla. Sulanut homogeeninen seos valetaan sitten sopivan kokoisiin muotteihin, annetaan jäähtyä ja samalla jähmettyä.

Il 33 81 587

Nestemäisiin valmisteisiin kuuluvat liuokset, suspensiot ja emulsiot. Esimerkkinä voidaan mainita parenteraaliseen injektioon tarkoitetut vesi- tai vesi-propyleeniglykoliliuok-set. Nestemäiset valmisteet voidaan myös formuloida polyety-leeniglykolin vesiliuoksissa. Oraaliseen käyttöön sopivat vesiliuokset voidaan valmistaa liuottamalla aktiivinen aine veteen ja lisäämällä sopivia väriaineita, flavoriaineita, stabilointi- ja paksunnosaineita tarpeen mukaan. Oraaliseen käyttöön sopivat vesisuspensiot voidaan valmistaa dispergoi-malla veteen hienoksi jauhettu aktiivinen aine sekä viskoosi aine, esim. luonnon- tai synteettiset kumit, hartsit, metyy-liselluloosa, natriumkarboksimetyyliselluloosa ja muut tunnetut suspendointiaineet.

Keksintöön kuuluvat myös kiinteässä muodossa olevat valmisteet, jotka on tarkoitus muuttaa vähän ennen käyttöä joko oraalisesti tai parenteraalisesti annettaviksi nestemäisiksi valmisteiksi. Näihin nestemäisiin muotoihin kuuluvat liuokset, suspensiot ja emulsiot. Tällaiset erityiset kiinteät valmisteet valmistetaan edullisimmin yksikköannosmuodossa, jolloin ne ovat sellaisinaan käytettävissä yksittäisinä nestemäisinä annosteluyksikköinä.

Vaihtoehtoisesti voidaan valmistaa sen verran kiinteää valmistetta, että kun se on muutettu nestemäiseksi, siitä saadaan useita yksittäisiä nestemäisiä annoksia mittaamalla ennalta-annetut tilavuudet nestemäistä valmistetta esimerkiksi ruiskulla, teelusikalla tai muulla tilavuusannosteli-jalla. Kun on valmistettu tällaisia moninkertaisia nestean-noksia, on suositeltavaa säilyttää mainitun nesteen käyttämätöntä osaa alhaisessa lämpötilassa (esim. jääkaapissa) mahdollisen hajaantumisen välttämiseksi. Tällaiset kiinteässä muodossa olevat valmisteet, jotka on tarkoitettu muutettavaksi nestemäisiksi, voivat sisältää edellä mainittujen aineiden lisäksi flavoriaineita, väriaineita, stabilointiai- 34 81 587 neita, puskureita, keinotekoisia tai luonnollisia makeutu-saineita, dispergointiaineita, paksunnosaineita, liuottavia aineita ja vastaavia. Nestemäisen valmisteen valmistukseen käytettävä neste voi olla vesi, isotoninen vesi, etanoli, glyseroli, propyleeniglykoli ja vastaava tai myös näiden seos. Nestettä valittaessa otetaan luonnollisesti huomioon annostelutapa, suuria määriä etanolia sisältävät nestemäiset valmisteet eivät esimerkiksi sovellu parenteraaliseen käyttöön.

Farmaseuttinen valmiste on edullisesti yksikköannostusmuo-dossa. Tällaisessa muodossa on valmiste jaettu edelleen yk-sikköannoksiin, jotka sisältävät sopivan määrän aktiivista ainetta. Yksikköannosmuoto voi olla pakattu valmiste, erillisiä valmistemääriä sisältävä pakkaus, esimerkiksi pakatut tabletit, kapselit, tai jauheet pienissä pulloissa tai ampulleissa. Yksikköannosmuoto voi olla myös kapseli, tärkke-lyskapseli tai pelkästään tabletti tai se voi olla sopiva määrä mitä tahansa näistä pakatussa muodossa.

Aktiivisen yhdisteen määrä valmisteen yksikköannoksessa voi olla valittavissa tai se voidaan säätää 1 mg:sta 500 mg:aan, edullisesti 5-100 mg, kyseessä olevan sovellutuksen tai ja aktiiviseen aineen tehon mukaan. Koostumus, jos niin halutaan, sisältää myös muita yhteensopivia terapeuttisia aineita.

Nisäkkään annosalue edellä esitetyssä terapeuttisessa käytössä on 70 kg:n painoiselle potilaalle 0,1-150 mg/kg ruumiinpainoa päivässä tai edullisesti 1-50 mg/kg ruumiinpainoa päivässä. Annostusta voidaan kuitenkin muutella riippuen potilaan vaatimuksista, hoidettavan tilan vakavuudesta ja käytettävästä yhdisteestä. Kyseessä olevaan tilanteeseen sopivan annostuksen määrittäminen on alalla tunnettua. Hoito aloitetaan yleensä pienemmillä annostuksilla, jotka ovat 35 81 587 pienempiä kuin yhdisteen optimiannos. Tämän jälkeen annostusta suurennetaan pienin lisäyksin kunnes saavutetaan kyseisissä olosuhteissa tilanteeseen soveltuva optimaalinen vaikutus. Päivittäinen kokonaisannos voidaan mukavuussyistä jakaa ja antaa annoksina päivän mittaan, jos niin halutaan.

Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen keksintöä.

ESIMERKKI 1 N*»- [2,2-difenyylietyyli ]-51 -deoksiadenosiini

Seos, jossa oli N6-(2,2-difenyylietyyli)-puriinia (31,5 g, 10 mmoolia) ja triasetaattisokeri III:a (Kiss, J., D'Souza, R., Koereringe, J. A., Arnold, W.; Hely. Chim. Acta., 65, (5), 1522-1537 (1982)) (2,6 g, 10 mmoolia), kuumennettiin 180 °C:ssa. Tähän lisättiin yksi mikrotippa f^SO^a, ja sulatetta sekoitettiin 180 - 195 °C:ssa neljä tuntia. Sulate sai jäähtyä huoneen lämpötilaan, jolloin se muuttui kiinteäksi. Tämä liuotettiin etyyliasetaattiin ja puhdistettiin silikageeli-pikakromatografiällä. Uusi yhdiste eristettiin haihduttamalla liuotin pois ja siirrettiin metanolin (70 ml) ja natriummetoksidin (0,05 g, 1 mmoolia) liuokseen. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa neljä tuntia. Reaktio pysäytettiin Dowex 50:11a (H+ -muoto) säätämällä pH arvoon pH-6. Hartsi poistettiin suodattamalla ja liuotin erotettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin hygroskooppinen vaahto. Vaahto haihdutettiin yhdessä metanolin kanssa kuivaksi, saanto 0,26 g (8%): sp 185-187,5 °C.

Analyysi (C24H25N5O3); laskettu C - 58.81, H - 5.61, N « 20.52, saatu C = 59.00, H - 5.32, N * 19.62.

1H NMR (DMSO-d6, 200 MHz): δ 1.2 (d, 3H), δ 3.9 (m, 2H), 6 4.1 (bs, 2H), δ 4.6 (m, 2H), δ 5.2 (d, 1H), 6 5.4 (d, 1H), 36 8 1 5 8 7 65.8 (d, 1H), 6 7.1-7.3 (m, 10H), δ 7.8 (bs, 1H), δ 8.3 (bs, 2H).

Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin seuraavasti: Seosta, jossa oli 2,2-difenyylietyyliamiinia (7 g, 35,5 mmoo-lia), trietyyliamiinia (3,6 g, 35,5 mmoolia) ja 6-klooripu-riinia (5,5 g, 35,5 mmoolia) etanolissa (250 ml), sekoitettiin palautusjäähdyttäen yli yön. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan. Saostunut kiinteä aine otettiin talteen ja pestiin etanolilla (100 ml). Likaisenvalkoinen kiinteä aine kuivattiin tyhjössä huoneen lämpötilassa; saanto 6,5 g (58%): sp = 232-233 °C.

Analyysi (C19H17N5), laskettu C = 72.36, H = 5.43, N » 22.21; saatu C * 72.05, H = 5.42, N « 21.99.

ESIMERKKI 2 N6-[1-indanyyli]-51-deoksiadenosiini

Otsikon yhdiste valmistettiin kuten esimerkissä 1 käyttäen 2,5 g, 10 mmoolia N6(l-indanyyli)-puriinia ja 4,0 g, 15 mmoolia triasetaatti-5-deoksisokeria. Hydrolyysiin käytettiin 0,25 g natriummetoksidia, jolloin saanto oli 0,7 g (19%) erittäin hygroskooppista siirappia.

Analyysi (C19H21N5O3); laskettu C = 62.11, H - 5.76, N = 19.06; saatu C = 60.67, H = 6.14, N = 18.26.

iH NMR (DMSO-dg, 90 MHz): δ 1.25 (d, 3H), δ 2.0-2.2 (m, 2H), 6 2.8-3.1 (m, 2H), δ 3.8-4.0 (m, 2H), 6 4.6 (m, 1H), 6 5.05 (d, 1H), δ 5.3 (d, 1H), δ 5.8 (d, 1H), δ 5.8-6.0 (bs, 1H), δ 7.0-7.3 (m, 4H), δ 7.9 (br.d, 1H), δ 8.15 (s, 1H), δ 8.2 (s, 1H).

37 81 587 Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin kuten esimerkissä 5 käyttäen 1-aminoindaania (1,3 g, 10 mmoolia), trietyyliamii-nia (1,1 g, 10 mmoolia) ja 6-klooripuriinia (1,5 g, 10 mmoolia); saanto 1,6 g (64%): sp = 247-248 °C.

Analyysi (C14H13N5), laskettu C 66.91, H = 5.21, N = 27.87; saatu C - 66.46, H « 5.26, N « 27.54.

ESIMERKKI 3 (R)-N6-[fenvvli-isopropyvli1-51-deoksiadenosiini

Reaktio suoritettiin kuten esimerkissä 1 käyttäen N6-(fe-nyyli-isopropyyli)-puriinia (4,5 g, 17,8 mmoolia) ja 4,6 g (17,8 mmoolia) deoksisokeria. Hydrolyysiin käytettiin 0,3 g natriummetoksidia, jolloin tuloksena saatiin 1,8 g (28%) hygroskooppista kiinteää ainetta, sp = n. 70 °C.

lH NMR (DMSO-d6), 200 MHz): δ 1.1 (d, 3H), δ 1.2 (d, 3Η),δ 2.7-2.8 (m, 1H), δ 3.0 (m, 1H), δ 3.95 (m, 2H), δ 4.5 (m, 2H), δ 5.2-5.6 (br.s, 2H), δ 5.9 (d, 1H), δ 7.0-7.2 (m, 5H), δ 7.6 (br.d, 1H), δ 8.3 (s, 1H), δ 8.5 (s, 1H).

Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin seuraavasti: seosta, jossa oli £-amfetamiinia (13,6 g, 0,1 mmoolia) ja 6-kloropuriinia (7,73 g, 0,05 mmoolia) etanolissa (250 ml), sekoitettiin refluksoiden 72 tuntia. Liuos jäähdytettiin 45 °C:n, ja etanoli poistettiin tyhjössä. Jäännös kaadettiin kloroformin ja veden seokseen (100 ml). Orgaaninen kerros erotettiin ja kuivattiin MgSO^lla, ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin valkoinen kiinteä aine, joka kuivattiin tyhjössä huoneen lämpötilassa yön yli; saanto 11 g (887%): sp - 190-193 °C.

38 81 587

Analyysi (CHH15N5), laskettu C = 66.38, H = 5.97, N = 27.65; saatu C - 66.10, H = 5.96, N 27.14.

[a]D = -114.8 (c 1.08, MeOH).

ESIMERKKI 4 (S)-N6-[fenyyli-isopropyyli]-51-deoksiadenosiini

Otsikon yhdiste valmistettiin kuten esimerkissä 1 käyttäen 5,0 g, 19,7 moolia N6-(S)-fenyyli-isopropyylipuriinia ja 5,2 g, 19,7 moolia triasetaatti-5-deoksisokeria. Hydrolyysiin käytettiin 0,3 g natriummetoksidia, jolloin tuloksena saatiin 1,3 g (19%) erittäin hygroskooppista siirappia.

Analyysi (C19H23N5O3); laskettu C = 61.77, H = 6.27, N = 18.96; saatu C = 60.52, H = 6.52, N * 17.28.

1h NMR (DMSO-dg, 200 MHz): δ 1.1 (d, 3H) , δ 1.2 (d, 3H), δ (m, 1H), δ 2.9-3.0 (m, 1H), δ 3.95 (d, 2H), δ 4.6 (m, 2H), δ 5.8 (D, 1H), δ 7.0-7.2 (m, 5H), δ 8.1-8.2 (br.s, 2H), δ 8.3 (s, 1H).

Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin kuten esimerkissä 3 on lähtöaineelle esitetty käyttäen d-amfetamiinia (13,3 g, 0,098 moolia) ja 6-kloropuriinia (7,73 g, 0,05 moolia); saanto 8,7 g, (69%): sp = 190-192,5 °C.

Analyysi (C14H15N5), laskettu C = 66.38, H 5.97, N » 27.65; saatu C - 66.20, H = 6.01, N « 27.52.

I a]D = +87.0(c 1.19, MeOH).

ESIMERKKI 5 N*»- [ syklopentyyli ]-51 -deoksiadenosiini 39 81 587

Reaktio suoritettiin kuten esimerkissä 1 käyttäen 5,0 g, 24.6 mmoolia N^-syklopentyylipuriinia ja 6,4 g, 24,6 mmoolia triasetaatti-5-deoksisokeria. Hydrolyysiin käytettiin 0,5 g natriummetoksidia, jolloin tuloksena saatiin 2,6 g (33%) erittäin hygroskooppista siirappia.

Analyysi (C15N21N5O3); laskettu C - 56.41, H = 6.63, N 21.93; saatu C - 54.65, H * 6.45, N = 19.59.

i-H NMR (DMSO-dg, 90 MHz): δ 1.3 (d, 3H), δ 1.3-2.0 (m, 8H) , δ 3.9-4.0 (m, 2H), δ 4.3-4.9 (m, 4H), δ 5.8 (d, 1Η),δ 7.5- 7.6 (d, 1H), δ 8.1 (s, 1H), δ 8.2 (s, 1H).

Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin seuraavasti: liuosta, jossa oli syklopentyyliamiinia (4,3 g, 50 mmoolia), tri-etyyliamiinia (5,05 g, 50 mmoolia) ja 6-klooripuriinia (7,73 g, 50 mmoolia) etanolissa (250 ml); sekoitettiin palautus-jäähdyttäen yli yön. Liuos jäähdytettiin 45 eC:seen ja etanoli poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin kloroformiin ja pestiin kerran vedellä. Kloroformi haihdutettiin tyhjössä, ja jäännös sekoitettiin veteen. Saostunut kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin 45 °C:ssa tyhjössä yli yön; saanto 6,7 g (66%): sp * 187-191 °C.

Analyysi (Cioh13n5>* laskettu C 59.09, H - 6.45, N = 34.46, saatu C » 58.75, H = 6.18, N - 34.37.

ESIMERKKI 6 N^-[sykloheksyyli 3-51-deoksiadenosiinl

Otsikon yhdiste valmistettiin kuten esimerkissä 1 käyttäen 2,2 g 10 mmoolia N^-sykloheksyylipuriinia ja 3,1 g, 12 mmoo- 40 81 587 lia triasetaatti-5-deoksisokeria, ja puhdistettiin silika-geelikromatografiällä liuottimena 10 % MeOH:CHCl3. Hydrolyy-siin käytettiin 0,25 g natriummetoksidia, jolloin tuloksena oli 0,61 g (18%) erittäin hygroskooppista siirappia.

Analyysi (Ci6H23N503Ή2Ο)? laskettu C - 54.69, H = 7.17, N - 19.93; saatu C = 54.92, H - 7.28, N « 15.90.

1h NMR (DMSO-dg, 90 DMHz): 6 1.2 (d, 3H), 6 1.1-2.0 (m, 8H), 63.2-3.5 (m, 2H), 64.5-5.3 (m, 6H), 65.7 (d, 1H),67.3- 7.5 (d, 1H), 6 8.05 (s, 1H), 6 8.15 (s, 1H).

Lähtöaineena oleva puriini valmistettiin kuten lähtöaine esimerkissä 5 käyttäen sykloheksyyliamiinia (2,0 g, 20 mmoolia), trietyyliamiinia (2,2 g, 20 mmoolia) ja 6-kloori-puriinia (3,1 g, 20 mmoolia); saanto 3,4 g (79%)s sp = 199-201 °C.

ESIMERKKI 7 (R) -n6-[fenyyli-isopropyyli1-51-deoksi-51-tiometyyliadenosiini

Otsikon yhdiste valmistettiin kuten esimerkissä 11 käyttäen 5,0 g (12,9 mmoolia) (R)-n8-[fenyyli-isopropyyliJ-adenosii-nia, 13,2 g (65 mmoolia) tri-n-butyylifosfiinia ja 6,1 g (65 mmoolia) dimetyylidisulfidia, saanto 28%.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C20H25I,5®3^ laskettu C, 57.81; H, 6.06; N, 16.86; S, 7.72; saatu C, 57.71; H, 6.28; N, 16.49; S, 8.07.

ESIMERKKI 8 (S) -n8-[fenyyli-isopropyyli]-51-deoksi-51-tiometyyliadenosiini „ 81587 41 Välituote (S)-N6-[fenyyli-isopropyyliJ-adenosiini-2',3·-isopropylideeni valmistettiin kuten esimerkissä 12 on esitetty käyttäen (S)-N6-[fenyyli-isopropyyli]-adenosiinia (8f4 g, 22 mmoolia), dimetoksipropaania (25 ml) ja Hamptonin rea-genssia (8,5 g, 25 mmoolia). [see J. Am. Chem. Soc. 83, 3640 (1961)]. Saanto 61%; tämä yhdiste (13,3 mmoolia) käsiteltiin sitten esimerkissä 12 esitetyllä tavalla tionyylikloridilla (1,8 g, 15 mmoolia); tämä yhdiste (3,7 g, 8,3 mmoolia) käsiteltiin sitten litiummetyylimerkaptaanilla (2,3 g, 42 mmoolia) (saanto 53%), jonka jälkeen suojaava ryhmä poistettiin kuten esimerkissä 12, jolloin saatiin 61% lopputuotetta, sp 23-24 °C.

Analyysi, laskettu yhdisteelle: C20H25N5®3S laskettu C, 57.81; H, 6.06; N, 16.86; S, 7.72; saatu C, 56.81; H, 5.77; N, 15.83; S, 8.74.

1 NMR (DMSO-dg, 90 MHz): 6 1.2 (d, 3H), 6 2.0 (s, 3H), δ 2.6-3.0 (m, 4H), δ 4.1 (m, 2H), δ 4.6 (m, 2H), δ 5.2 (d, 1H), δ 5.4 (d, 1H), δ 5.85 (d, 1H), δ 7.0-7.3 (m, 5H), δ 7.6 (br.d, 1H), δ 8.15 (s, 1H), δ (s, 1H).

ESIMERKKI 9 n6—[sykloheksyyli]-51-deoksi-5 *-tiometyyliadenosiini N®-[sykloheksyyli]-5'-deoksi-5'-tiometyyliadenosiini valmistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 12 käyttäen 5,0 g NÖ-[sykloheksyyli]-5'-deoksi-5'-klooriadenosiini-2',31-iso-propylideeniä ja litiummetyylimerkaptidia (2,7 g), jolloin saatiin 51-tiometyyli-isopropylideeni -välituote, jonka jälkeen suojaava ryhmä poistettiin ja tuloksena saatiin lopputuote, saanto 58%.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C17H25N5O3S laskettu C, 53.81; H, 6.64; N, 18.46; S, 8.48; 42 81 587 saatu C, 53.00; H/ 6.66; N/ 18.19; S, 6.88; vesi 2.35.

lH NMR (DMSO-dg, 90 MHz); δ 1.1-2.0 (m, 10H), δ 2.0 (s, 3H), δ 2.8 (m, 1H), δ 3.8-4.3 (m, 4H), δ 4.65 (m, 1H), δ 5.1-5.4 (m, 2H), <5 5.85 (d, 1H), δ 7.4 (br.d, 1H), δ 8.1 (s, 1H), δ 8.25 (s, 1H).

N® — [sylcloheksyyli]-51 -deoksi-5'-klooriadenosiini-2' ,3'-iso-propylideeni syntetisoitiin kuten esimerkissä 12 käyttäen 12,5 g N6-[sykloheksyyli]-adenosiinia, dimetoksipropaania 80 ml ja Hamptonin katalysaattoria 15,2 g, jolloin tuloksena saatiin isopropylideeni, ja sen jälkeen käsiteltiin 5,3 g tionyylikloridilla. Yhdiste eristettiin hydrokloridisuolana.

ESIMERKKI 10 r6-[syklopentyyli1-51-deoksi-51-tiometyyliadenosiini

Otsikon yhdiste valmistettiin kuten esimerkissä 12 käyttäen n6-[syklopentyyli]-5'-deoksi-5'-klooriadenosiini-2',3'-isopropyl ideeniä (5,7 g, 13,2 mmoolia) ja litiummetyylimerkap-tidia (4,3 g, 80 mmoolia), saanto 74%. Tästä poistettiin suojaava ryhmä kuten esimerkissä 12, jolloin tuloksena saatiin N®-[syklopentyyli1-5'-deoksi-5'-tiometyyliadenosiini, saanto 69%.

Analyysi, laskettu yhdisteelle: C15H23N5O3S laskettu C, 52.59; H, 6.34; N, 19.16; S, 8.77; saatu C, 51.67; H, 6.67; N, 17.25; S, 8.59.

J-H NMR (DMSO-d6, 90 MHz): δ 1.4-2.1 (m, 8H), δ 2.0 (s, 3H), δ 2.8 (m, 2H), δ 3.9-4.2 (m, 2H), δ 4.5-4.8 (m, 3H), δ 5.85 (d, 1H), δ 7.6 (br.d, 1H), δ 8.2 (s, 1H), δ 8.3 (s, 1H).

5'-deoksi-5'-kloori-isopropylideeni -välituote syntetisoitiin kuten esimerkissä 12 käyttäen Ne-fgy^iQpentyyiij-ade-

II

43 81 587 nosiinia (5 g, 15 mmoolia), dimetoksipropaania (18 ml) ja Hamptonin reagenssia (6,3 g, 19 mmoolia), saanto 86%; tämän jälkeen suoritettiin käsittely 4,1 g (10 mmoolia) tionyylik-loridilla, jolloin välituote voitiin eristää hydrokloridi-suolana (saanto 49%).

ESIMERKKI 11 N**- [2,2-difenyyli ]-51 -deoksi-51 -tiometyyliadenosiini

Seosta, jossa oli N*>-(2,2-difenyylietyyli )-adenosiinia (4,7 g, 10,5 mmoolia) ja tri-n-butyylifosfiinia (10,8 g, 53 mmoolia) DMF:ssa (20 ml), sekoitettiin ^-atmosfäärissä huoneen lämpötilassa 48 tuntia. Reaktioseos laimennettiin vedellä (20 ml) ja liuottimet poistettiin tislaamalla (<90 °C, 1 mmHg). Kiiltävänmusta jäännös puhdistettiin silikageelikro-matografiällä eluoimalla etyyliasetaatilla. Pääfraktio eristettiin haihduttamalla liuotin pois, jolloin tuloksena saatiin valkoinen vaahto; saanto 1,4 g (28%), sp 70-90 °C.

Analyysi, laskettu yhdisteelle: C25H27N5O3S laskettu C, 62.87; H, 5.70; N, 14.66; S, 6.71; saatu C, 62.32; H, 5.73; N, 14.25; S, 6.72.

1h NMR (DMSO-dg, 200 MHz): δ 2.0 (s, 3H), δ 2.8 (m, 2H), 6 4.0-4.2 (m, 4H), δ 4.6 (m, 1H), δ 4.7 (m, 1H), δ 5.3 (d, 1H), δ 5.5 (d, 1H), δ 5.9 (d, 1H), δ 7.1-7.4 (m, 10H), δ 7.8 (br.s, 1H), δ 8.3 (br.s, 2H).

N^-(2,2-difenyylietyyli)-adenosiini valmistettiin seuraavasti: seosta, jossa oli 14,3 g 6-klooripuriiniribosidia, 9,8 g (2,2-difenyyli)-etyyliaminia ja 5,0 g trietyyliamiinia 250 ml:ssa absoluuttista etanolia, keitettiin palautusjäähdyttäen 18 tuntia. Liuos jäähdytettiin 8 °C:seen ja kiinteät aineet otettiin talteen suodattamalla. Kiinteät aineet erotettiin seoksessa, jossa oli 100 ml metyleenikloridia ja 100 ml «4 81 587 vettä. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin vaahto, jota kuivattiin suurtyhjössä neljä tuntia, sp 88-101 °C.

Analyysi, laskettu yhdisteelle: 024^5^07^0.5820 laskettu C, 63.14; H, 5.74; N, 15.34; saatu C, 62.82; H, 5.71; N, 15.10.

ESIMERKKI 12 N^-Il-indanyyli1-51-deoksi-5*-tiometyyliadenosiini

Seosta, jossa oli N^-[l-indanyyli1-5'-deoksi-5'-kloori-2',3'-isopropylideeniadenosiinia (3,3 g, 6,9 mmoolia) ja litium-metyylimerkaptidia (2,2 g, 40 mmoolia) THF:ssa (200 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen ja sekoitettiin 72 tuntia. Reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja reaktio lopetettiin vedellä (100 ml). THP poistettiin tyhjössä ja liuos uutettiin metyleenikloridilla (100 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:lla ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin vaahto. Vaahto, 5'-SMe-5'-deoksi-isopropylideenijohdannainen kuivattiin suurtyhjössä huoneen lämpötilassa 4 tuntia; saanto 1,2 g (39%). Tämä aine sekoitettiin muurahaishapon 50% vesiliuokseen (100 ml), jota sekoitettiin 50 °C:ssa neljä tuntia. Muurahaishappo/vesi poistettiin tyhjössä ja jäännös haihdutettiin kuiviin yhdessä metanolin kanssa, jolloin tuloksena saatiin vaahto. Vaahto puhdistettiin silikageelikromatografiällä eluoimalla asetonilla, ja päätuote eristettiin haihduttamalla liuotin pois. Tuloksena saatu hygroskooppinen keltainen vaahto kuivattiin suurtyhjössä huoneen lämpötilassa; saanto 1,3 g (81%).

Analyysi, laskettu yhdisteelle: C20H23N5O3SH2O laskettu C, 55.67; H, 5.61; N, 16.23; S, 7.41; saatu C, 56.41; H, 5.91; N, 15.17; S, 5.74.

45 81587 !η NMR (DMSO—dg, 200 MHz): δ 2.0 (s, 3H), δ 2.8-3.1 (m, 5H), δ 4.0-4.2 (m, 2Η),δ 4.5 (m, 1Η),δ 4.8 (m, 1Η),δ 5.3 (d, 1H), δ 5.5 <d, 1H), δ 5.9 <d, 1H), δ 5.9-6.0 (br.s, 1H), 6 7.1-7.3 (m, 4H), δ 8.1 (br.d, 1H), δ 8.3 (br.s, 1Η),δ 8.5 (s, 1H).

Lähtöaine valmistettiin seuraavasti: seosta, jossa oli dime-toksipropaania (30 ml), N6-(1-indanyyli)-adenosiinia (9,0 g, 23,5 mmoolia) ja Hamptonin reagenssia (bis-p-nitrofenyylifos-faatti hydraatti) [J. Am. Chem. Soc. H3# 3640 (1961)], (9,6 g, 28 mmoolia) asetonissa (150 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa kosteudelta suojattuna yli yön. Reaktio lopetettiin ~ 5* NaHC03-liuoksella (125 ml) ja liuosta sekoitettiin puoli tuntia. Asetoni poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin metanoliin. Metanoliliuos kaadettiin Dowex 1x8 (NH4+HCO3-) -kolonniin, eluoitiin metanolilla (300 ml). Me-tanoli poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin isop-ropylideeni, saanto 6,4 g (65%). Isopropylideeni (6,1 g, 14,4 mmoolia) liuotettiin THF:iin (150 ml) ja käsiteltiin tionyylikloridilla (2,4 g, 20 mmoolia). Liuosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen yksi tunti, jäähdytettiin sitten huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin yli yön. THF poistettiin tyhjössä 40 eC:ssa, ja jäännös liuotettiin metyleeniklori-diin (150 ml). Liuos pestiin vedellä (2 x 100 ml) ja kuivattiin Mg-S04:lla. Liuotin poistettiin sitten tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin keltainen vaahto, N®-(l-indanyyli)-5'-deoksi-5'-kloori-isopropylideeniadenosiini 0,8 HC1, saanto 5,5 g (81%).

N*>-(1-indanyyli )-adenosiini valmistettiin puolestaan seuraavasti: Seosta, jossa oli neljä grammaa 6-klooripuriiniribosi-dia, 2,32 g 1-aminoindaania ja 2,11 g trietyyliamiinia 100 ml:ssa absoluuttista etanolia, keitettiin palautusjäähdyttäen typpiatmosfäärissä 20 tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 20 ml:aan 2-propanolia ja laimennettiin 46 8 1 5 8 7 200 ml:lla vettä. Kirkas vesiliuos dekantoitiin pois ja jäljelle jäänyt öljyinen aine pestiin kylmällä vedellä. Haihduttamalla yhdessä etanolin kanssa useita kertoja saatiin tuloksena kiinteä aine. Kiteyttämällä CH3/2-propanolista (10:1) ja heksaanista saatiin tuloksena 3,0 g (56,2%) N^-(1-indanyyli)-adenosiinia, jonka sulamispiste oli 120-122 eC (vaahto).

Analyysi, laskettu yhdisteelle: Ci9H21N5®4 laskettu C, 59.52; H, 5.52; N, 18.26; saatu C, 59.37; H, 5.48; N, 18.00.

ESIMERKKI 13 N^-[2,2-difenyylietyyli]-51-deoksi-51-klooriadenosiini Välituote N<>- (2,2-difenyylietyyli )-5' -deoksi-5' -klooriade-nosiini-2',3'-isopropylideeni syntetisoitiin esimerkin 14 tavalla N*>-(2,2-dif enyylietyyli )-adenosi inistä (2,2 g, 4,7 mmoolia), dimetoksipropaanista (8 ml) ja Hamptonin reagens-sista (J. Am. Chem. Soc., 83, 3640 (1961)) (1,9 g, 5,6 mmoolia), (saanto 1,8 g, 78%), ja käsiteltiin tämän jälkeen 1,5 x ekvivalentilla tionyylikloridia (saanto 59%). Isopropylideeni hydrolysoitiin lopputuoteyhdisteeksi kuten esimerkissä 14 on esitetty (saanto 36%), sp 180-183 °C.

Analyysi, yhdisteenä (C24H24CIN5O3) laskettu C, 61.87; H, 5.19; N, 15.03; Cl, 7.61; saatu C, 61.48; H, 5.19; N, 14.62; Cl, 8.51.

lH NMR (DMSO-dg, 200 MHz): 63.8-3.9 (m, 2H), 64.0-4.2 (m, 3H), 6 4.6 (m, 2H), 6 4.7 (d ja d 1H), 6 5.4 (d, 1H), 6 5.55 (d, 1H), 65.9 (d, 1H), 67.1-7.3 (m, 10H), 67.8 (br.s, 1H), 6 8.2 (s, 2H).

Lähtöaine N*>-(2,2-difenylietyyli )-adenosiini valmistettiin seuraavasti: 47 81587

Seosta, jossa oli 14,3 g 6-klooripuriiniribosidia, 9,8 g (2,2-difenyyli)-etyyliamiinia ja 5,0 g trietyyliamiinia 250 ml etanolissa, keitettiin palautusjäähdyttäen 18 tuntia. Liuos jäähdytettiin 8 *C:seen, ja kiinteät aineet erotettiin suodattamalla. Kiinteät aineet erotettiin seoksessa, jossa oli 100 ml metyleenikloridia ja 100 ml vettä. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin vaahto, joka kuivattiin suurtyhjössä neljä tuntia.; sp 88-101 °C.

Analyysi (024^5^07^0.51120) laskettu C, 63.14; H, 5.74; N, 15.34; saatu C, 62.82; H, 5.71; N, 15.10.

ESIMERKKI 14 N6-[1-indanyyli1-51-deoksi-5 *-klooriadenosiini

Liuosta, jossa oli dimetoksipropaania (30 ml), N^-(l-inda-nyyli)-adenosiinia (9,0 g, 23,5 mmoolia) ja Hamptonin rea-genssia (J. Am. Chem. Soc., 83, 3640 (1961)) (bis-p-nitro-fenyylifosfaatti hydraatti) (9,6 g, 28 mmoolia) asetonissa (150 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa kosteudelta suojattuna yli yön. Reaktio lopetettiin ~ 5* NaHCC>3 -liuoksella (125 ml) ja liuosta sekoitettiin puoli tuntia. Asetoni poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin metanoliin. Me-tanoliliuos kaadettiin Dowex 1x8 (NH4+HCO3-) -kolonniin, eluoitiin metanolilla (300 ml). Metanoli poistettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin isopropylideeni, saanto 6,4 g (65%). Isopropylideeni (6,1 g, 14,4 mmoolia) sekoitettiin THF:n (150 ml) ja käsiteltiin tionyylikloridilla (2,4 g, 20 mmoolia). Liuosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen yksi tunti ja jäähdytettiin sitten huoneen lämpötilaan sekä sekoitettiin yli yön. THF poistettiin tyhjössä 40 °C:ssa, ja jäännös liuotettiin metyleenikloridiin (150 ml). Liuos pes- 48 81587 tiin vedellä (2 x 100 ml) ja kuivattiin MgSO^lla. Liuotin poistettiin sitten tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin keltainen vaahto, 5'-kloori-5'-deoksi-isopropylideeni · 0,8 HC1, saanto 5,5 g (81%). Suojattu 5'-klooriyhdiste (2,0 g, 4,2 mmoolia) liuotettiin sitten muurahaishapon 50% vesiliuokseen (110 ml) ja liuosta kuumennettiin 60 °C:ssa neljä tuntia. Muurahaishappo/vesi poistettiin tyhjössä ja jäännös haihdutettiin kuivaksi yhdessä metanolin kanssa, jolloin tuloksena saatiin valkoinen vaahto. Tämä vaahto puhdistettiin silikageelikromatografiällä, eluoimalla asetonilla. Pääkom-ponentti eristettiin haihduttamalla asetoni pois, jolloin tuloksena saatiin erittäin hygroskooppinen valkoinen kiinteä aine, joka kuivattiin tyhjössä huoneen lämpötilassa yli yön; saanto 0,85 g (50%).

Analyysi (C19H20CIN5O3Ή2Ο), laskettu C, 54.35; H, 5.04; N, 16.68; Cl, 8.44; saatu C, 54.52; H, 5.40; N, 15.47; Cl, 8.54.

1h NMR (DMSO-dg, 100 MHz): δ 1.0-1.5 (m, 2H), δ 2.8-3.1 (m, 2H), δ 3.9 (d ja d, 2H), δ (4.0-4.3 (m, 2H), δ 4.8 (d ja d, 1H), δ 5.5 (d, 1H), δ 5.6 (d, 1H), δ 5.95 (d, 1H), δ 7.1-7.3 (m, 4H), δ 8.2 (br.d, 1H), δ 8.3 (s, 1H), δ 8.35 (s, 1H).

(J. Am. Chem. Soc., 83, 3640 (1961)).

(J. Am. Chem. Soc., 83, 3640 (1961)).

Lähtöaine N^-(l-indanyyli)-adenosiini valmistettiin seuraavasti:

Seosta, jossa oli neljä grammaa 6-klooripuriiniribosidia, 2,32 g 1-aminoindaania ja 2,11 g trietyyliamiinia 100 ml:ssa absoluuttista etanolia, keitettiin palautusjäähdyttäen typ-piatmosfäärissä 20 tuntia. Haihtuvat aineet poistettiin. Jäännös liuotettiin 20 ml:aan 2-propanolia ja laimennettiin 200 ml:11a H20:a. Kirkas vesiliuos dekantoitiin ja jäljelle jäänyt öljyinen aine pestiin kylmällä vedellä. Haihduttamal 49 81587 la yhdessä etanolin kanssa useita kertoja saatiin tuloksena kiinteä aine. Kiteyttämällä CHCl3/2-propanolista (10:1) ja heksaanista saatiin tuloksena 3,0 g (56,2%) N6-(1-indanyy-li)-adenosiinia, jonka sulamispiste oli 120-122 °C (vaahto).

Analyysi (C19H21N5O4) laskettu C, 59.52; H, 5.52; N, 18.26; saatu C, 59.37; H, 5.48; N, 18.00.

ESIMERKKI 15 (R)-N^-[fenyyli-isopropyyli]-5'-deoksi-S’-kloori-adenosiini

Tionyylikloridin (8,3 g, 70 mmoolia) HMPA (25 ml) -liuokseen lisättiin (R)-N6-(fenyyli-isopropyyli)-adenosiinia (5 g, 13 mmoolia), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Reaktio lopetettiin vedellä (80 ml) ja seos neutraloitiin ammoniumhydroksidilla. Muodostunut kumi erotettiin liuoksesta ja pestiin vedellä (30 ml). Kumi liuotettiin etanoliin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin vaahto. Yhdiste liuotettiin etanoliin (20 ml) ja liuos kaadettiin silikageeliin, eluoitiin etanolilla (100 ml). Etanoli haihdutettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin metyleeniklo-ridiin ja kuivattiin MgSO^lla, haihdutettiin tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin keltainen vaahto; saanto 1,65 g (31%): sp - 83-86 eC.

Analyysi (C19H22CIN5O3) laskettu C, 56.50; H, 5.49; N, 17.34; Cl, 8.78; saatu C, 56.34; H, 5.60; N, 17.37; Cl, 8.41.

ESIMERKKI 16 (S )-N*>- [ fenyyli-isopropyyli 1-51 -deoksi-51 -klooriadenosiini so 81587

Otsikon yhdiste syntetisoitiin kuten esimerkissä 15 on esitetty käyttäen (S)-N6-(fenyyli-isopropyyli)-adenosiinia (15,4 g, 40 mmoolia), HMPA:a (80 ml) ja tionyylikloridia (25,5 g, 215 mmoolia); saanto 11%, sp 75-110 °C.

Analyysi yhdisteelle (C19H22CIN5O3) laskettu C, 56.60; H, 5.49; N, 17.34; Cl, 8.78; saatu C, 56.14; H, 5.42; N, 16.99; Cl, 8.77.

1h NMR (DMSO-dg, 90 MHz): δ 1.2 (d, 3H), 6 2.7-3.2 (m, 2H), δ 3.9-4.0 (m, 2H), δ 4.05-4.4 (m, 2H), δ 4.8 (d ja d, 2H), δ 5.5 (d, 1H), 6 5.6 (d, 1H), δ 6.0 (d, 1H), δ 7.1-7.4 (m, 5H), δ 7.7 (br.d, 1H), δ 8.2 (s, 1H), δ 8.3 (s, 1H).

ESIMERKKI 17 N*>-[sykloheksyyli ]-5'-deoksi-51 -klooriadenosiini N6-(sykloheksyyli)-5'-deoksi-5'-klooriadenosiini syntetisoitiin kuten esimerkissä 14 on esitetty käyttäen 12,5 g N*>-(sykloheksyyli)-adenosiinia, dimetoksipropaania 80 ml ja Hamptonin katalysaattoria 15,2 g, jolloin tuloksena saatiin isopropylideeni, ja käsittelemällä sitten 5,3 g tionyyliklo-ridillä ja poistamalla suojaava ryhmä. Saanto 40 %, sp 65-85 °C.

Analyysi, yhdisteelle (CigH22N503Cl) laskettu C, 52.24; H, 6.03; N, 19.04; Cl, 9.64; saatu C, 51.20; H, 5.72; N, 17.26; Cl, 13.32.

1h NMR (DMSO-dg, 90 MHz): δ 1.1-2.0 (m, UH), δ 3.8-4.0 (m, 2H), δ 4.0-4.3 (m, 2H), δ 4.75 (d ja d, 1H), δ 5.45 (d, 1H), δ 5.55 (d, 1H), δ 5.9 (d, 1H), δ 7.5 (br.d, 1H), δ 8.2 (s, 1H), δ 8.3 (s, 1H).

ESIMERKKI 18 N*>- [ syklopentyyli 1-51 -deoksi-51 -klooriadenosiini 51 81587

Isopropylideenivälituote syntetisoitiin kuten esimerkissä 14 on esitetty käyttämällä N6-(syklopentyyli)-adenosiinia (5 g, 15 mmoolia), dimetoksipropaania (18 ml) ja Hamptonin rea-genssia (6,3 g, 19 mmoolia), saanto 86%. 5'-kloori-5'-deok-si-isopropylideenianalogi syntetisoitiin kuten esimerkissä 14 on esitetty käyttämällä 4,1 g (10 mmoolia) N6-(syklopen-tyyli)-adenosiini-2',3'-isopropylideenia ja 1,3 g (10 mmoolia) tionyylikloridia, ja eristettiin hydrokloridisuolaan (saanto 49%). Tämä hydrolysoitiin kuten esimerkissä 14 on esitetty, jolloin tuloksena saatiin N6-(syklopentyyli)-5'-deoksi-5'-klooriadenosiini. Sp ~ 70 °C.

Analyysi (C15H20CIN5O3) laskettu C, 50.92; H, 5.70; N, 19.80; Cl, 10.02; saatu C, 50.54; H, 5.84; N, 19.12; Cl, 10.64.

H NMR (DMSO-dg, 90 MHz): 6 1.4-2.1 (m, 9H), δ 3.85 (m, 3H), δ 4.2 (m, 2H), 6 4.6 (m, 2H), δ 5.9 (d, 1H), δ 8.4 (s, 1H), δ (s, 1H), δ 8.6 (s, 1H), δ 9.5 (s, 1H).

ESIMERKKI 19 N^-l-tetralinyyli-51-deoksiadenosiini

Seosta, jossa oli 6-klooripuriinia (7,7 g, 50 mmoolia), trietyyliamiinia (5,1 g, 50 mmoolia) ja 1-aminotetraliinia (7,4 g, 50 mmoolia), sekoitettiin palautusjäähdyttäen 150 ml:ssa etanolia yli yön. Liuos jäähdytettiin 0 °C:seen, ja sakka erotettiin suodattamalla. Sakka pestiin 50 ml:lla kylmää (0 °C) etanolia ja kuivattiin 60 °C:ssa tyhjössä neljä tuntia, jolloin tuloksena saatiin 4,2 g (32%) valkoista kiinteää ainetta. Sp 232,5-234 °C.

Analyysi C15H35N5 laskettu C, 67.90; H, 5.70; N, 26.40 saatu C, 67.99; H, 5.62; N, 26.41.

52 81 587

Adeniini (5,3 g, 20 mmoolia) ja 5'-deoksiriboositriasetaatti (6,5 g, 25 mmoolia) sulatettiin ja sekoitettiin 190 °C:ssa. Sulatteeseen lisättiin yksi mikrotippa konsentroitua rikkihappoa ja muodostunut etikkahappo poistettiin lievästi ty-pettämällä. Liuosta sekoitettiin neljä tuntia ja jäähdytettiin sitten huoneen lämpötilaan. Lasimainen jäännös rikottiin ultraäänen avulla 20 ml:ssa etyyliasetaattia. Liuos puhdistettiin sitten kromatografisesti, jolloin liuottimen poishaihdutuksen jälkeen saatiin tuloksena 4,7 g vaaleanruskeaa vaahtoa, joka identitioitiin myöhemmin esimerkissä 22 yhdisteeksi D. Vaahto (4,0 g, 8,6 mmoolia) liuotettiin sitten 100 ml:aan metanolia ja natriummetoksidi lisättiin (0,5 g, 8,6 mmoolia). Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa neljä tuntia. Reaktioseos neutraloitiin Dowex 50 x 8(H+ -muoto) -hartsilla pH-arvoon 7 ja hartsi suodatettiin pois. Suodos haihdutettiin tyhjössä, ja jäännös sekoitettiin 4,0 ml:aan asetonia; kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin 40 eC:ssa yli yön, jolloin tuloksena saatiin 1,95 g (30%) hygroskooppista valkoista kiinteää ainetta, sp 159-162 °C.

Analyysi C2oH23N5°3 laskettu C, 62.98; H, 6.08; N, 18.36 saatu C, 62.87; H, 6.21; N, 18.18.

ESIMERKKI 20 n6-g-naftyylimetyyli-5 *-deoksiadenosiini

Seosta, jossa oli 6-klooripuriinia (7,6 g, 50 mmoolia), trietyyliamiinia (5,1 g, 50 mmoolia) ja a-naftyylimetyyli-amiinia (7,9 g, 50 mmoolia) 150 ml:ssa etanolia, sekoitettiin palautusjäähdyttäen yli yön. Liuos jäähdytettiin 0 °C:seen, sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin kylmällä etanolilla. Kiinteä aine kuivattiin huoneen lämpö- 53 81 587 tilassa tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin 10,6 g (77%) valkoista kiinteää ainetta, sp 250-252,5 °C.

Adeniini (5,5 g, 20 mmoolia) ja 5'-deoksiriboosi (6,5 g, 25 mmoolia) sulatettiin ja sekoitettiin 200-220 °C:ssa. Sulatteeseen lisättiin yksi mikrotippa konsentroitua rikkihappoa, ja muodostunut etikkahappo poistettiin lievästi typettämäl-lä. Liuosta sekoitettiin kuusi tuntia, jonka jälkeen se jäähdytettiin huoneen lämpötilaan. Lasimainen jäännös rikottiin 30 ml:ssa etyyliasetaattia ultraäänen avulla. Liuos puhdistettiin tämän jälkeen kromatografisesti, jolloin liuottimen poishaihdutuksen jälkeen tuloksena saatiin 3,9 g valkoista vaahtoa, joka oli jäljempänä identifioitu yhdisteeksi 21. Vaahto (3,0 g, 6,3 mmoolia) liuotettiin sitten 100 ml:aan metanolia, ja natriummetoksidi (0,4 g, 6,3 mmoolia) lisättiin. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa neljä tuntia. Reaktioseos neutraloitiin Dovtex 50 x 8 (H+ -muoto) -hartsilla pH-arvoon 7, ja hartsi suodatettiin pois. Suodos haihdutettiin vakuumissa ja jäännös kiteytettiin uudelleen 30 ml:sta etanolia. Kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin 40 °CiSsa tyhjössä yli yön, jolloin tuloksena saatiin 1,9 g (31%) hygroskooppista vaaleanruskeaa kiinteää ainetta, sp 124-128 °C.

ESIMERKKI 21 N^-g-naftvvlimetvvl1-21,3 *-di-O-asetyvli-51-deoks iadenos i i n i

Esimerkissä 20 esitetty yhdiste 21 oli analyysin perusteella yhdiste N*>-(a-naftyyli)metyyli-5,-deoksi-2' ,3'-diasetyyli-adenosiini, jota saatiin 3,9 g (41%), sp. 70-78 °C.

Analyysi C25H25N5O5 laskettu C, 63.15? H, 5.30? N, 14.73 saatu C, 62.91? H, 5.50? N, 14.57 t 54 81 587 ESIMERKKI 22 N6-l-tetralinyyli-21,31-di-O-asetyyli-51-deoksiadenosiini

Esimerkissä 19 esitetty yhdiste D oli analyysin perusteella yhdiste N*»-(1-tetralinyyli )-51 -deoksi-21 ,3'-diasetyyliade-nosiini, jota saatiin 4,7 g (51%), sp. 70-72 °C.

Analyysi C24H27N5°5 laskettu C, 61.92; H, 5.85; N, 15.05 saatu C, 61.98; H, 6.05; N, 14.96 ESIMERKKI 23 (R)-n6-(1-indanyyli)-51-deoksi-51-klooriadenosiini

Liuosta, jossa oli dimetoksipropaania (25 ml), Nt>-(R)-l-in-danyyliadenosiinia (9,6 g, 25 mmoolia) ja bis-p-nitrofenyy-lifosfaatti hydraattia (9,5 g, 28 mmoolia) asetonissa (200 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Liuokseen lisättiin vettä (150 ml) reaktion keskeyttämiseksi, ja asetoni haihdutettiin tyhjössä. Vesiliuosta uutettiin metylee-nikloridilla (2x150 ml) ja orgaaninen liuos pestiin vedellä (100 ml) ja sen jälkeen kyllästetyllä suolaliuoksella (100 ml). Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin metanoliin (75 ml) ja liuos kaadettiin sitten lyhyeen Dotrex 1x8 (nat-riumbikarbonaattimuoto) -ioninvaihtohartsilla pakattuun kolonniin. Kolonni pestiin metanolilla (yhteensä 580 ml). Me-tanoli haihdutettiin tämän jälkeen tyhjössä, jolloin tuloksena saatiin isopropylideenianalogi, 8,8 g (83%). Isopropy-lideeni (7,5 g, 17,7 mmoolia) sekoitettiin THFsiin (100 ml), lisättiin tionyylikloridi (3,2 g, 26,5 mmoolia), ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Liuos haihdutettiin tyhjössä kuiviin ja jäännös liuotettiin metyleenikloridiin 55 81 587 (100 ml). Orgaaninen liuos pestiin vedellä (100 ml), kyllästetyllä suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin magnesium-sulfaatilla. Liuottimet haihdutettiin tyhjössä ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti, jolloin tuloksena saatiin haihduttamalla liuotin RI-aktiivisesta pääfraktiosta 5,5 g (71%) vaaleankeltaista vaahtoa. Vaahto (4,8 g, 10,9 mmoolia) liuotettiin sitten 50 % muurahaishappoon (100 ml), ja liuosta sekoitettiin 50 °C:ssa 4,5 tuntia. Liuos haihdutettiin vakuumissa kuivaksi ja jäännös puhdistettiin kromatografi-sesti. Kun liuotin oli haihdutettu pois RI-aktiivisesta pääfraktiosta, saatiin tuloksena 2,5 g (57%) valkoista vaahtoa, sp. 94-97 °C.

Analyysi (C19H20CIN5O3) laskettu C, 56.79? H, 5.02; N, 17.43 saatu C, 56.60; H, 5.18; N, 17.60.

Claims (1)

1. 56 81 587 Patenttivaatimus: Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten adenosiinien N6-substituoitujen deoksiriboosianalogien valmistamiseksi, joilla on kaava MH* & Π *i° o*j jossa kaavassa R on kolmesta yhteentoista jäsenisen renkaan omaava sykloalkyyli tai kaavojen 0“x "QV «H. . ~ -CKj-CM (Qj CHf_^ Y tal U Ib le 11 mukainen ryhmä, joissa kaavoissa n on yksi, kaksi tai kolme; X ja Y ovat kumpikin, toisistaan riippumatta H, alempialkyy-li, hydroksi, alempialkoksi, bentsyylioksi, nitro, amino tai halogeeni; Z on CH3, CH2Ha3. tai CH2SCH3; R2' tai R3' ovat kumpikin, toisistaan riippumatta vety tai alempialkanoyyli, jonkin niiden diastereomeereistä tai näiden seoksen, tai 11 57 81 587 niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että annetaan kaavan m* m u mukaisen N6-substituoidun puriinin, jossa kaavassa R tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoida kaavan AcO OAc mukaisen yhdisteen kanssa, jossa kaavassa z tarkoittaa samaa kuin edellä, korkeassa lämpötilassa noin yhdestä kahteentoista tuntia ja, mikäli niin halutaan, tuloksena saatu vapaa emäs muutetaan tunnetuin menetelmin farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolakseen. 58 81 587 Förfarande för framställning av farmaceutiskt användbara N6-substituerade deoxiribosanaloger av adenosiner med formeln NHR (&> d *J° ORJ i vilken formel R är en cykloalkyl med en ring med 3-11 med-lemmar eller en grupp med formlerna "CT g*,, λf' -rö la Ib Ie i vilka formler n är ett, tvä eller tre; X och Y är bäda, oberoende av varandra H, lägalkyl, hydroxi, lägalkoxi, ben-syloxi, nitro, amino eller halogen; Z är CH3, CH2Hal eller CH2SCH3; R2' eller R3' är bäda, oberoende av varandra, väte eller lägalkanoyl, nägon av deras diastereomerer eller bland-ningar av dessa, eller farmaceutiskt godtagbara syraadditions-salter därav, kännetecknat därav, att N6-subs-tituerad purin med formeln II 59 81587 ma m u i vilken formel R betecknar detsamma som ovan, omsätts med en förening med formeln |fp0AC' AcO OAc i vilken formel Z betecknar detsamma som ovan, vid en hög temperatur frän ca en tili tolv timmar och, om sä önskas, den erhällna fria basen omvandlas med kända metoder tili sitt farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalt.