NO165495B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive n6-substituerte deoksyriboseanaloger av adenosiner. - Google Patents

Description

Nederlandsk patentansøkning 67.14189 beskriver N -cyklo-alkyladenosiner som kardioaktive forbindelser. US-patent 3.851.056 omtaler at adenosiner som har en N -substituent med

formel

har antilipolytiske og antihyperlipe-

miske egenskaper.

5'-Deoksy-5<1->merkapto-N^-(lavere alkyl eller benzyl)-adenosiner er beskrevet som antivirale midler i US-patent 3.575.959. US-patent 4.373.097 beskriver forbindelser med formel

hvori n er 0,1 eller 2, R, er alkyl og R er hydrogen, alifatisk eller aromatisk acyl. Disse forbindelsene vises å ha anti-inflammatorisk og analgesisk virkning.

5'-Deoksy-5'-alkyltio-N^-(mettet eller umettet, rett

eller forgrenet alifatisk hydrokarbon)adenosiner som har blod-trykknedsettende og blodkarutvidende virkning, er beskrevet i US-patent 3.475.408.

5 *-Deoksyribose-derivater med formel

er omtalt i Japansk patentpublikasjon nr. 55 8162-598 til be-

handling av trombose og emboli.

N 6 -Bicyklo r [2 . 2 . 1tJ heptyladenosiner som-har en 5' modifisert ribose, har analgesiske og antiinflammatoriske egenskaper og er omtalt i US serienr. 665.216 som nå har enrCIP til behandling sammen med denne anmeldelsen. Til slutt,,N -(1- og 2-benzo-cykloalkyl) adenosiner er omtalt i US 4.5CML735 .

Forbindelsene fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse, er N -substituerte deoksyribose^analoger av adenosiner, som har analgetisk, nevroleptisk og-antihypertensiv virkning. De analoge omfatter 5 '-deoksy ,,. 5 '-deoksy-5 '-deoksy-5'-metyltio og 5<1->deoksy-5'-halogenadenosiner.

I henhold til dette tilveiebringer f6religgende oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling avven forbindelse med

formel

hvori R er cykloalkyl som har en tre- til åtte- leddet ring, eller en gruppe med formel hvori n er én, to eller tre:,. Q er formelen

hvori Z er CH3; CH2Hal eller CH2SCH3; R2' eller R3' er begge uavhengig H eller lavere alkanoyl, eller når de tas sammen, lavere alkyliden, såsom isopropyliden; dens diastereomere eller blandinger derav, eller et farmasøytisk godtagbart syreaddisjonssalt derav.

Et farmasøytisk preparat kan inneholde en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel I ovenfor, med et farmasøytisk godtagbart bærestoff, og kan benyttes til behandling av pattedyr ved å administrere til slike pattedyr en do-seringsform av en forbindelse med formel I som beskrevet ovenfor .

Hal omfatter særlig fluor, klor eller brom. Q

Lavere alkanoyl er en rett eller forgrenet £-alkyl-

gruppe med fra 1 til 6 karbonatomer i alkylkjeden.

Forbindelsene med formel I er nyttige både i form av den frie base og i form av syreaddisjonssalter. Begge former er innen denne oppfinnelsens område. I praksis vil bruken av salt-formen være lik bruken av baseformen. Passende farmasøytisk godtagbare salter innen oppfinnelsens område, er de som er av-ledet fra mineralsyrer såsom saltsyre, og svovelsyre, og organiske syrer såsom etansulfonsyre, benzensulfonsyre, p-toluen-sulfonsyre og lignende, som gir henholdsvis hydrogenkloridet, sulfamatet, etansulfonatet, benzensulfonatet, p-toluensulfonatet og lignende.

Syreaddisjonssaltene av de nevnte basiske forbindelser fremstilles enten ved å løse opp den frie base i vandig eller vandig alkoholisk oppløsning eller andre egnede oppløsnings-midler som inneholder en passende syre, og isolere saltet ved å dampe inn oppløsningen, eller ved å omsette den frie base og syre i et organisk oppløsningsmiddel, i hvilket tilfelle saltet skilles ut direkte eller kan fåes ved å konsentrere oppløsnin-gen .

Forbindelsene fremstilt i henhold til oppfinnelsen kan inneholde asymmetriske karbonatomer. Oppfinnelsen omfatter fremstilling av de individuelle diastereomere og blandinger derav. De individuelle diasteromere kan fremstilles eller isoleres ved fremgangsmåter som er kjent innen faget.

En foretrukket forbindelse er en forbindelse med formel I, hvori R er som i formel Ia og Q, R2 ' og-R^', er som definert ovenfor, eller et farmasøytisk godtagbartv.:salt derav.

En annen foretrukket forbindelse erren forbindelse med formel I, hvori R er som i formel Ia, og

Q er 5'-deoksy-g-D-ribose, 5<1->deoksy-5'-metyltio-ribose eller 5'-deoksy-5'-klor-ribose og, R2' og R^<1> begge uavhengig er hydrogen, acetyl, benzoksyl, benzoyl substituert med lavere alkyl, lavere alkoksy, halogen, eller når.rde tas sammen, er alkyliden, særlig isopropyliden.

En spesiell forbindelse er 5'-deoksy7N -(2,2-difenyletyl)-adenosin eller et farmasøytisk godtagbarttsalt derav.

En spesiell forbindelse er 5'-deoksy-5'-metyltio-N^-(2,2-difenyletyl)adenosin eller et farmasøytisk-godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse er 5'-deoksy-5'-klor-N^-(2,2-di-fenyletyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En annen gruppe forbindelser er forbindelser med formel

I, hvori R er som i formel Ib og Q, R2' og R3' er som

definert ovenfor, eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

Enda en annen gruppe foretrukne forbindelser er forbindelser med formel I hvori R er som i formel Ib,

og Q er 5<1->deoksy-g-D-ribose, 5'-deoksy-5'-metyltioribose eller 5<1->deoksy-5<1->klor-ribose eller acetylestere derav, og R^' og R3' er uavhengig hydrogen, acetyl, eller når de tas

sammen, isopropyliden.

En spesiell forbindelse med formel I hvori R, er som i formel lb, omfatter 5'-deoksy-N -(1-indanyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En særlig forbindelse omfatter 5'-deoksy-5'-metyltio-N^-(1-indanyl)adenosin eller et farmasøytisk .godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse omfatter 5<1->déoksy-5<1->klor-N<6->

(1-indanyl)-adenosin eller er farmasøytisk;:godtagbart salt derav.

En tredje gruppe forbindelser er forbindelser med formel I, hvori R er som i formel Ic og Q, R2' og R^<1> er som definert ovenfor eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En annen foretrukket tredje gruppe forbindelser er forbindelser med formel I hvori R er som i formel Ic, og Q, R2<1>, R^' og R^' er som definert ovenfor.

Enda en annen foretrukket tredje gruppe forbindelser,

er forbindelser med formel I hvor R er som i formel Ic, og Q er 5'-deoksy-$-D-ribose, 5<1->deoksy-5'-metyltio-ribose

eller 5<1->deoksy-5'-klor-ribose eller acetylestere derav,

og R2' og R^' begge uavhengig er hydrogen, acetyl, eller når de tas sammen, er isopropyliden.

En spesiell forbindelse med formel I hvori R er som i formel Ic, omfatter 5<1->deoksy-N<6->(l-metyl-2-fenyletyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse omfatter 5'-deoksy-5'-metyltio-N<6->(l-metyl-2-fenyletyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse omfatter 5'-deoksy-5'-klor-N -

(l-metyl-2-fenyl-etyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En fjerde gruppe av forbindelser er forbindelser med formel I-, hvori R er cykloalkyl som har tre til åtte ledd i ringen, og Q, R2' og R3<*> er som definert ovenfor eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En foretrukket fjerde gruppe forbindelser er forbindelser med formel I hvori R er et cykloalkylradikal med 5-7 ledd og Q, R2' og R^' er som definert ovenfor.

En annen foretrukket fjerde gruppe forbindelser er forbindelser med formel I hvori R er et cykloalkylradikal med 5-7 ledd og Q er 5<1->deoksy-B-D-ribose, 5<1->deoksy-5<1->metyltioribose eller 5•-deoksy-5*-klor-ribose eller acetylestere derav og R2' og R3' begge uavhengige er hydrogen, acetyl, eller når de tas sammen, er isopropyliden.

En spesiell forbindelse med formel I, hvori R har formel Id, er 5'-deoksy-N -(cyklopentyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse omfatter 5'-deoksy-5'-metyltio-N<6->

(cyklopentyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt

derav. ' og R,,' er som definert ovenfor eller et farma-søytisk godtagbart salt derav.

En spesiell forbindelse omfatter 5'-deoksy-5<1->klor-N^-(cyklopentyl)adenosin eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En femte gruppe forbindelser er forbindelser med formel I, hvori R har formel le og Q, R.>' og R^' er-som definert ovenfor eller et farmasøytisk godtagbart salt derav.

En annen femte gruppe forbindelser er forbindelse med formel I hvori R har formel le, og Q er 5'-deoksy-3-D-ribose, 5'-deoksy-5<1->metyltioribose eller 5'-deoksy-5'-klor-ribose eller acetylestere derav, og R2' og R^' er begge uavhengig hydrogen, acetyl, eller når de tas sammen, er isopropyliden.

En spesiell forbindelse med formellI hvori R har formel le, omfatter- <N>^-a-naftylmetyl-5'-deoksyadenosin eller N^-a-naftyl-mety1-5'-deoksyadenosin-2',3<1->di-O-acetyl.

Forbindelsene med formel I kan hensiktsmessig syntetiseres ved å omsette det passende N-6-substituerte purin II med det beskyttede deoksy-sukker III, Illa eller Illb, på følgende måte:

Forbindelser med formel II hvor R er som definert ovenfor, omsettes med forbindelsen med formel III, Illa eller Illb i en ren smelte med oppvarming i omtrent 1 til 12 timer. Tilsetning av en syre i katalytiske mengder er nyttig.

Forbindelsene med formel Illb kan fremstilles etter føl-gende skjema:

De kan også syntetiseres ut fra det kjente 6-klorpurinriboside som vist i skjema I.

Forbindelser med formel IV dannes ved å omsette 6-klorpu-rinribosider med aminet NI^R der R er som definert ovenfor, i et inert oppløsningsmiddel og i nærvær av en base såsom trietylamin. Forbindelse IV kan overføres til den isopropyliden-analoge V ved omsetning med 2,2-dimetoksypropan i aceton og i nærvær av en syrekatalysator såsom et bis-(p-nitrofenyl)fosfat-hydrat (Hampton's reagens). 5'-Deoksy-5'-klor- og 5<1->deoksy-5<1->brom-forbindelsene med formel I syntetiseres ved omsetning av den passende forbindelse V med tionylkorid eller tionylbromid etterfulgt av behandling med maursyre og vann for å fjerne isopropylidenet og gi forbindelse I. Forbindelser med formel I kan også dannes ved å behandle IV direkte med tionylklorid eller tionylbromid i heksametylfosfoamid (HMPA).

5'-Deoksy-5<1->metyltioadenosinforbindelser fremstilles på én av to måter. Den N<6->substituerte 5'-deoksy-5'-kloradenosin-isopropyliden-forbindelse kan behandles med tiometoksyd for å erstatte klor-delen, etterfulgt av fjerning av beskyttelse med maursyre-vann, slik at forbindelser med formel I dannes. Alternativt kan en forbindelse med formel V behandles med dimetyldisulfid i nærvær av tri-n-butylfosfin, etterfulgt av fjerning av beskyttelsen med maursyre-vann, under dannelse av forbindelser med formel I hvori Z er Cf^SCH-^.

Forbindelsene med formel I er funnet å ha varierende affinitet til adenosin-reseptorer (betegnet A^- og A2_reseptorer for letthets skyld). Disse forbindelsene er aktive i dyrefor-søk, noe som kan tyde på nevroleptisk aktivitet til behandling av større psykoser såsom schizofreni. Disse forbindelsene har også analgesiske egenskaper og er som sådanne nyttige ved behandling av smerter.

I tillegg er forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen, nyttige som antihypertensive midler til behandling av høyt blodtrykk .

FARMAKOLOGISK VURDERING-'.

Adenosin reseptor— binding- A^ reseptor- affinitet ( RBA1) Tilberedning av membraner

Hele hjerner minus lillehjernen og hjernestammen fra Long Evans hanrotter (150-200g) ble homogenisert i 30 volum iskald 0,05 M Tris-HCl-buffer pH 7,7 ved å bruke en Brinkman Polytron PT-10, (stilling nr. 6 i 20 sekunder) og ..'sentrifugert i ti minutter ved 20.000 x g (Sorvall RC-2), 4<?>C. Væsken over ble kastet og den sammenpressede masse ble suspendert igjen og sentrifugert som før. Den faste massen ble igjen suspendert i 20 ml Tris-HCl-buf f er som, inneholdt to..;internas jonale enheter/ml adenosindeaminase (Sigma type^III fra slimhinne fra kalvetarmer), inkubert ved 37°C i 30 minutter, deretter ved 0°C

i ti minutter. Det homogenerte ble igjen sentrifugert og den endelige faste massen ble igjen suspendert.i iskald 0,05 M Tris-HCl-buffer pH 7,7 til en konsentrasjon på 20 mg/ml av opp-rinnelig vekt av vått vev, og brukt straks.

Analyse- betingeIser

Vevshomogenat (10 mg/ml) ble inkubert i 0,05 M Tris-HCl-buf f er pH 7,7 som inneholdt" 1,0 nM [~3h] -N;—cykloheksyladenosin ([<3>hJ-CHA) med eller uten teststoffene i<:>tre paralleller i én time ved 25°C. Inkuberingsvolumet var 2Tml. Ubundet ^hJ-CHA ble skilt fra ved rask filtrering under■redusert trykk gjennom Whatman glassfiberfiltre (GF/B). Filtrene, ble renset tre ganger med 5 ml iskald, 0,05 M> Tris-HCl-buffér pH 7,7. Den radio-merkede ligand som var igjen på filteret;.ble målt ved flytende scintillasjonsspektrofotometri etter rysting av filtrene i én time eller lengre i en mekanisk ryster i 10 ml Beckman Ready-Solv HP scintillation cocktail.

Beregninger

Ikke-spesifikk binding ble definert' som den binding som skjedde i nærvær av ImM teofyllin. Konsentrasjonen av test-forbindelsen som hindret 5>0'% av den spesifikke binding ( 1C^ Q) ble bestemt ved ikke-lineær computer-kurvetilpassing. Scatchard-plot ble beregnet ved lineær regressjon av.linjen som ble oppnådd ved å plotte mengden av radioliganddsom var bundet ( p mol/-

"bundet radioligand

mot —; . Ettersom mengden av radioligand som ..fri radioligand

var bundet var en liten andel av den totale mengden tilsatt,

ble fri radioligand definert som konsentrasjonen (nM) av radioligand tilsatt til inkuberingsblandingen. Hill-koeffisienten ble beregnet ved lineær regressjon av linjen som ble oppnådd ved plotting av log av den bundne radioligand mot

1 bundet radioligand

g B - bundet radioligand

U max =

Det maksimale antall binding^ ssteder (B max ) ble bereg^net fra Scatchard-plottet.

Adenosinreseptor- binding- ÅT reseptor- affinitet ( RBA2)

Vevspreparering

Hjernen fra Sprague-Dawley-rotter av blandet kjønn, på

200 til 500 g , ble kjøpt fra Pel-Freez (Rogers, Arkansas). Friske hjerner fra hvite Long-Evans hanrotter med sort hode (Blue Spruce Farms, Altamont, NY) ga omtrent identiske resultater. Hjernene bli tinet og deretter holdt på is mens striata ble dissekert ut. Striata ble knust i 10 vol iskald 50 mN Tris.HCl (pH 7,7 ved 25°C, pH 8,26 ved 5°C) (Tris) i 30 sekunder i en Polytron PT-10 (Brinkmann) ved innstilling 5. Suspensjonen ble sentrifugert ved 50.000 xg i ti minutter, væsken over ble kastet, den faste massen ble igjen suspendert i 10 vol iskald Tris som ovenfor, sentrifugert påny, suspendert igjen til 1 g/5ml, og lagret i plastikampuller ved -70°C (stabile i minst seks måneder). Når det skulle brukes, ble vevet tint ved romtemperatur, knust i en Polytron og holdt på is inntil det ble brukt.

Inkuberingsforhold

All inkubering skjedd i 60 minutter ved 25°C i 12 x 75 mm glassrør som inneholdt 1 ml Tris med 5 mg vekt av originalt vev av striata-membran.er fra rotter, 4 nM [<3>h]-N-etyladenosin-5'-karboksamid ( [3H]NECA) , 50 nM N<6->cyklopentyladenosin (for å eliminere Al-resej->tor-binding) , 10 mM MgCl9, 0,1 enheter/ml adenosin-deaminase og 1% dimetylsulfoksyd. N 6-Cyklopentyl-adenosin ble løst opp til 10 mM i 0,0 2 N HC1 og fortynnet i Tris.

Stamoppløsninger og fortynninger av N^-cyklopentyladenosin kan lagres ved -20°C i flere måneder. Testforbindelser ble løst opp til 10 mM i dimetylsulfoksyd på samme dag som eksperimentet og fortynnet i dimetylsulf oksyd til 100 x'-den endelige inkube-ringskonsentrasjonen. Kontrollinkuberingerrfikk det samme volum-(10 yl) dimetylsulfoksyd; den resulterendéckonsentrasjonen av dimetylsulf oksyd hadde ingen virkninger på.<r>bindingen. [3h] NECA ble fortynnet til 40 nM i Tris. Membransuspensjonen (5 mg/0,79ml) inneholdt tilstrekkelig MgCl2 og adenosindeaminase til å gi henholdsvis 10 mM og 0,1 enheter /ml, som^endelig konsentrasjon i inkuberingen. For testforbindelser med .IG^g-verdier mindre enn 1 yM, var rekkefølgen av tilsetning, téstforbindelse (10 yl), N<6->cyklopentyladenosin (100 yl), [^h] NE CA (100 yl) og membraner (0,79 ml). For testforbindelser med IC^Q-verdier større enn 1 uM og begrenset vannoppløselighet, var rekkefølgen av tilsetning (samme volumer) testforbindelse, membraner, N -cyklo-pentyladenosin og [3hJneCA. Etter alle tilsetninger ble. stativet med rør gitt en spinnende bevegelse og rørene ble deretter inkubert i 60 minutter ved 25°C i et riste-vannbad. Stativet med rør ble spunnet en gang til halvveis i inkuberingen.

Inkuberingen ble avsluttet ved filtrering gjennom 2,4 cm GF/B-filtere under redusert trykk. Hvert rør ble filtrert på følgende måte: innholdet av røret ble helt på filteret, 4 ml iskald Tris ble tilsatt til røret og innholdet helt på filteret, og filteret ble vasket to ganger med 4 ml iskald Tris. Filtre-ringen var fullstendig på ca. tolv sekunder. Filtrene ble plassert i scintillasjonsrør, 8 ml Formula 947 scintillation-fluid ble tilsatt og rørene fikk stå natten over, ble rystet og tellet i en flytende scintillasjons-teller med 40% effektivi-tet .

Data- analyse

Ikke-spesifikk binding ble definert som binding i nærvær

av 100 yM il^-cyklopentyladenosin og spesifikkbinding ble definert som total binding minus-, ikke-spesif ikk binding. IC5q ble beregnet ved avveid ikke-lineær minste kvadraters kurve-tilpas-ning til massevirkningsligningen.

der Y er cpm bundet,

T er cpm total binding uten medikament,

S er cpm spesifik binding uten medikament,

D er konsentrasjonen av medikament, og

K er IC^Q av medikamentet.

Vekttall ble beregnet under den forutsetning at standardavvik var proporsjonale med den antatte verdi av Y. Ikke-spesifikk binding ble behandlet som en meget stor (uendelig) konsentrasjon av medikament i computeranalysen.

ICcjQ-verdiene (nM) for adenosin A-^- og <A>2~reseptor-affinitet er angitt i tabellen.

ANTIPSYKOTISK EVALUERING

Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er nye kjemiske substanser som er nyttige som farmasøytiske midler til behandling av psykoser. Den antipsykotiske virkning av de representa-tive forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen, ble fastslått ved "Mouse Activity and Screen Test"-prosedyren (MAST) som er beskrevet nedenfor.

Dyr

Ni ikke fastende Swiss-Webster hanmus som veier 20-30 g blir likt fordelt i tre grupper for hver-. medikament-dose som skal testes. Det vil si, data for hvertcdoseringsnivå ble dannet av tre separate grupper på tre mus hver.

Medikament

Et minimum på tre doseringsnivåer (10,30 og 100 mg/kg) undersøkes for hvert medikament. Behandlingen administreres intraperitonalt én time før testen. All1dosering beregnes som opphavsforbindelsen og gis i volum på 10>" ml/kg. Forbindelser løses opp eller suspenderes i 0,2% Methocel. Kontrolldyr injiseres med Methocel.

Testing

En todelt test-fremgangsmåte startes- én time etter injeksjonen. Først utføres "screen test" (ST") > (se Pharmac. Biochem. Behav. 6, 351-353, 1977). I korthet består denne testen i at musene plasseres på individuelle metallnett som deretter roteres 180 grader ved begynnelsen av en 60 sekunders observasjonsperio-de. Antall mus som faller av det opp-ned-snudde nettet, registreres .

Umiddelbart etter "screen test", staxtes den sLste fase av testen ved at hver gruppe på tre mus plasseres i et actofoto-meter (Life Sciences, 22, 1067-1076 , 1978;). Ac to f o tome te ret består av et sylindrisk kammer i hvis sentrum det står en annen sylinder som inneholder belysningen for:: seks. fotoceller som er lokalisert til kammerets omkrets. Seks lysstråle-avbrudd utgjør én telling. Lokomotorisk aktivitet registreres med computer i ti minutters intervall i 60^ minutter.

Data: Data som kommer fra "screen testen" uttrykkes som prosent mus som faller ned fra nettet. Data som kommer fra lokomotorisk aktivitet av medikament-behandlede mus sammenlignes med aktivi-teten til mus behandlet med hjelpestoff, og uttrykkes som prosent hindring av spontan bevegelse. Alle prosenter som angis for bevegelseshindring (LI) er basert på data samlet opp i løpet av én time. Begge testfaser gis karakterer: A = 60-100%; C = 31-59% og N = 0-30%. En total dosevurdering gis ved de følgende kriterier:

LAD refererer til den laveste dose hvorved det oppnås karakter A. Forbindelser som viser en generell dose-karakter på A ved en dose på 100 milligram/kilogram eller mindre, er å betrakte som aktive. Ved å bruke denne fremgangsmåten, ble det oppnådd en total dose-karakter på A for den anførte forbindelse ved den indikerte dose. Forbindelsene er identifisert i eksemplene.

En representativ forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen (identifisert i eksempel 5) ble også testet for antipsykotisk aktivitet i henhold til den følgende fremgangsmåte (SIDR). Den anførte forbindelse har de indikerte ED^^-verdier (mg/kg) og anses å være virkningsfulli som- et antipsykotisk middel i test-fremgangsmåten.

Fremgangsmåte

Voksne Long-Evans hanrotter eller ekornaper er opplært til å trykke på et håndtak for å unngå et smertefullt elektrisk sjokk i føttene. Hvis dyret ikke trykker på håndtaket, får det et sjokk hvert tiende sekund inntil håndtaket blir trykket. Sjokkene kan avsluttes ved å trykke på håndtaket. Deretter, så lenge som håndtaket blir trykket minst én gang hver 20 sekund, blir det ikke noe sjokk.

Hvert dyr virker som sin egen kontroll; en ukentlig periode brukes for å fastslå basislinje-oppførsel og en annen periode senere i uken, brukes som medikament-periode. Såsnart unn-vikelsesmønstre er etablert, undersøkes virkningene av standard

og ukjente forbindelser.

Forbindelsen (eksempel 5) hadde en-ED^q på 2,8 mg/kg for blokkering av unnvikelse med en respons ^på .10% ved 4 mg/kg for blokkering av unnslipping.

ANTIHYPERTENSIV EVALUERING (AHP3)

Nytten av forbindelsene fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse som antihypertensive midler,, . demonstreres ved deres virkning i standard farmakologiske.ufremgangsmåter, f.eks. ved å skape en signifikant minskning i' midlere arterie-blodtrykk nos bevisste rotter. Denne forsøksfremgangsmåten er beskrevet i de følgende paragrafer.

£, n fremgangsmåte for direkte overvåking./ av blodtrykk i aorta og Hjertefrekvens hos bevisste.- rotter

Den kontinuerlige overvåking av det ^.pulserende blodtrykk (BP) hos frie bevisste rotter som operativt er utstyrt med polyetylenkanyler, ble gjennomført ved hjelp av et komputer-assistert datainnsamlingssystem (CADCS) .. Hovedelementer ved fremgangsmåten-er fremgangsmåten ved innsetning av kanylen og

CADCS.

F remgangsmåte

Innsetting av kanyle: Rotter ble bedøvet-med Telazol (1:1 tilet-amin HC1 og zolazepam HC1); 20-40 mg/kg IM og den nedstigende aorta blottlagt ved et midtlinjesnitt. Kanyler fabrikert fra polyetylenrør ble ført inn i aorta via et trangt punktert hull nedenfor nyrearteriene. Det punkterte hull ble laget med en 23 G engangsnål med et parti av aorta avsnørt ovenfor og nedenfor punkteringsområdet. Kanylene som besto av en PE100 (0,86 mm ID) hoveddel og en PE50 (0,58 mm ID) spiss, ble festet til en trokar, ført inn gjennom psoasmuskelen og ført subkutant langs ryggens midtlinje og ført ut-mellom ørene. Kanylene ble festet, til psoasmuskelen og mellom skulderbladene (3-0 "green braided"-sutur). Midtlinjesnittettble lukket i to trinn (først muskel, siden skinn) ved å benytte kontinuerlig over-og-over-sutur. Hver rotte fikk deretter penicillin 30.000 enheter subkutant (Penicillin G Proacaihe Sterile Suspensjon).

Rottene ble utstyrt med et fjærendecdreibart seletøy skapt for å beskytte kanylen og gi rotten relativ bevegelsesfrihet. Seletøyet ble fremstilt av nylon "hook and loop"-tape sementert til en metallplate hvortil fjærende metalltråder (18-8 rustfritt stål) ble festet til messing svivel. Hver polyetylenkanyle ble ført gjennom en fjær og forbundet gjennom et universalledd til en trykkoverfører (Model P23Gb; Statham Instruments; Hato Rey, Puerto Rico) og en infusjonspumpe (Sage model 2 34-7;

Orion Research, Cambridge, MA) ved hjelp av PE 100-rør. Mens den ble testet, fikk hver rotte en kontinuerlig sakte infusjon med heparinisert saltoppløsning (omtrent 400 1 eller 40 enheter heparin pr. 24 timers periode) for å hindre at det dannes levrer. I tillegg ble det foretatt gjennomskylling av kanylen med heparinisert saltvann når pulstrykket i aorta (systolisk minus diastolisk) var mindre enn 25 mm Hg.

CADCS; Det pulserende blodtrykk og hjertefrekvensen hos hver

av de 32 rottene ble overvåket hvert minutt ved hjelp av to laboratorie-mikrocomputere med direkte forbindelse til en data-konsentrator-computer. Data ble først lagret på datakonsentra-tor-disken og deretter overført til en magnetisk tape for analyse og utregning av resultater i hoved-forskningscomputeren. Det totale skjema omfatter modulering av det primære signal fra trykkoverføreren, generering av ett-minuttsverdier for systolis-ke, diastoliske og midlere blodtrykk og hjertefrekvens av laboratorie-mikrocomputeren, og lagring, analyse og utregning av resultater av hoved-forskningscomputeren.

Transduktorene ble forbundet med analoge signalomformende moduler. Modulene ga en regulert magnetiseringsspenning for transduktorene, forsterkning etter behov for å "interface" mikro-prosessorene og et aktivt lavpassfilter for å kompensere for trykkbølgens formforvrengning forårsaket av den fleksible væske-fylte trange kanyle. Forvrengningen var 2 2-26 Hz og dette ga en pålitelig vurdering av både systolisk og diastolisk blodtrykk .

Mikrocomputere (én for hver av to grupper på 16 rotter) ble forbundet med input-komponentene gjennom "modul-interface"-enhetene, en analog-til-digital-omformer for trykkbølge-signaler og de digitale inputs for dose og forsøksmarkeringsvelgere. Mikrocomputeren kontrollerte den fortløpende innsamling av data fra modulenes "interface"-enheter ved hjelp av en intern synkron tid-på-dagen klokke/tidsbasegenerator. Ved å bruke tidsbase-generatoren som referanse, ble blodtrykksverdiene og markerings-velger-status for hver av de 32 stasjoner målt for hvert 10 msek. Mikrocomputeren behandlet hver blodtrykksmåling ettersom den ble mottatt og ga "løpende middelverdier" for hjertefrekvens og midlere, systolisk og diastolisk blodtrykk.

Når de ble testet ifølge fremgangsmåten^ovenfor, ga de følgende forbindelser de følgende forandringer i MAP (midlere arterietrykk) og hjertefrekvens.

ANALGESISK EVALUERING

"Antiwrithing"-testen (AW) gir foreløpig vurdering av forbindelser med mulige analgesiske virkninger. Testen foregår med Swiss-Webster han-mus. Forbindelsene administreres subkutant i vandig 0,2% metylcellulose eller andre passende hjelpe-stoffer i volum på 10 ml/kg. Doseringen representerer den aktive bestanddel.

Eddiksyre (0,6%, 10 ml/kg) injiseres intraperitonalt 20 minutter etter administrering av adenosinagonisten. "Writhing"-bevegelser telles i fem minutter med start syv minutter etter injeksjonen av eddiksyre. "Writhing" defineres som sammentrek-ning av underlivet og strekking av kroppen og bakbena med konkav bøyning av ryggen. Data uttrykkes som ED5g-verdier, der ED,-q er dosen som er nødvendig for å undertrykke "writhing" med 50%

i forhold til kontroller med hjelpestoff. ED5q verdier beregnes ved ikke-lineær regressjonsanalyse. For eksempel hadde 5'-deoksy-N^-cyklopentyladenosin, en representativ forbindelse vist som eksempel 5 i den foreliggende oppfinnelse, en ED^q på 0,9

mg/kg når det ble administrert intraperitonalt til mus.

Også administrert peritonalt, hadde forbindelsen fra eksempel 12 en ED5Q på 3,0 mg/kg og 5'-klor-N -(R)fenyliso-propyladenosin (eksempel 15) hadde en ED^q på 1,8 mg/kg når det ble administrert intraperitonalt.

I samsvar med dette, omfatter et farmasøytisk preparat til behandling av psykoser, smerte eller hypertensjon, en korrespon-derende antipsykotisk, analgesisk eller antihypertensivt effektiv mengde av en forbindelse med formel I som definert ovenfor sammen med et farmasøytisk godtagbart bærestoff.

En fremgangsmåte for behandling av psykoser, smerte eller hypertensjon hos pattedyr som lider av dette, omfatter at det til slike pattedyr administreres enten oralt eller parentalt et tilsvarende farmasøytisk preparat som inneholder en forbindelse med formel I som definert ovenfor i form av en passende doseringsenhet.

Til fremstilling av farmasøytiske preparater ut fra forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen, kan inerte, farmasøy-tisk godtagbare bærestoffer være enten faste eller flytende. Preparater i fast form omfatter pulvere, tabletter, disperger-bare granulater, kapsler av forskjellige typer, og suppositorier. Et fast bærestoff kan være en eller flere substanser som også kan fungere som fortynningsmidler, smaksstoffer, oppløsnings-hjelpestoffer, smøremidler, suspensjonsmidler, bindemidler eller tablettsprengende midler, det kan også være innkapslingsmateriale. I pulvere er bærestoffet et finfordelt fast stoff som er blandet med den finfordelte aktive forbindelse. I tablet-ten blandes den aktive forbindelse med bærestoff som har de nød-vendige bindeegenskaper, i passende forhold, og presses i den ønskede form og størrelse. Pulvere og tabletter inneholder fortrinnsvis fra 5 eller 10 til rundt 70 prosent av den aktive ingrediens. Egnede faste bærestoffer er magnesiumkarbonat, mag-nesiumstearat, talk, sukker, laktose, pektin, dekstrin, stivelse, gelatin, tragakant, metylcellulose, natriumkarboksymetylcellulose, en lavt smeltende voksart, kakaofett og lignende. Uttryk-ket "fremstilling" er ment å omfatte tillaging, av den aktive forbindelse med innkapslingsmateriale som bærestoff under dannelse av en kapsel hvori den aktive forbindelse (med eller uten andre bærestoffer) omgis av bærestoff som på denne måten er i kontakt med det. Tilsvarende omfattes andre kapsler. Tabletter, pulvere, kapsler av forskjellig type kan brukes som faste doseringsformer, egnet til oral administrering.

Til fremstilling av suppositorier, smeltes først en lavt smeltende voksart, såsom en blanding av fettsyreglyserider eller kakaofett, og den aktive ingrediens dispergeres homogent deri ved røring. Den smeltede homogene blandingen helles deretter i former av passende størrelser, får bli avkjølt og stivner derved.

Preparater i flytende form omfatter oppløsninger, suspensjoner og emulsjoner. Som et eksempel kan nevnes vann- eller vann-propylenglykol-oppløsninger til parenteral injeksjon. Flytende preparater kan også lages til i oppløsning i vandig polyetylenglykoloppløsning. Vandige oppløsninger egnet til oralt bruk kan fremstilles ved å løse opp den aktive komponent i vann og tilsette egnede farvestoffer, smaksstoffer, stabiliseringsmidler og fortykningsmidler etter ønske. Vandige suspensjoner egnet til oralt bruk kan fremstilles ved å dispergere den finfordelte aktive komponent i vann med viskøst materiale, dvs. naturlige eller syntetiske gummier, resiner, metylcellulose, natriumkarboksymetylcellulose og andre velkjente suspensjonsmidler.

Preparater i fast form kan overføres kort før bruk, til preparater i flytende form til enten oral eller parenteral administrering. Slike flytende typer omfatter oppløsninger, suspensjoner og emulsjoner. Disse spesielle preparatene i fast form lages mest hensiktsmessig i enhetsdoseform og brukes som sådanne til å gi en enkelt flytende doseringsenhet. Alternativt kan tilstrekkelig fast stoff tilveiebringes slik at etter over-føring til flytende form, kan multiple individuelle flytende doser oppnås ved å måle opp på forhånd bestemte volum av preparatet i flytende form med sprøyte, teskje eller annen volumet-risk beholder. Når multiple flytende doser fremstilles slik,

er det å foretrekke å holde den ubrukte porsjon av nevnte flytende doser ved lav temperatur (dvs. under nedkjøling) for å forsinke mulig dekomponering. Preparatet i fast form som er tenkt å skulle overføres til flytende form, kan inneholde i tillegg til det aktive materialet, smaksstoffer, farvestoffer, stabiliseringsmidler, buffere, kunstige og naturlige søtnings-

midler, dispergeringsmidler, f ortykningsmidler., oppløsnings-hjelpestoffer og lignende. Væsken som brukes for å fremstille preparatene i flytende form, kan være vann, isotonisk vann, etanol, glycerin, propylenglykol og lignende, samt blandinger derav. Naturligvis må væsken som benyttes velges med hensyn til administreringsrute, for eksempel er flytende preparater som inneholder store mengder etanol, ikke egnet til parenteralt bruk.

Fortrinnsvis er de farmasøytiske preparater i enhetsdoseform. I slik form, er preparatet delt opp i enhetsdoser som inneholder passende mengder av den aktive komponent. Enhetsdose-formen kan være et pakket preparat, pakken inneholder separate mengder av preparat, for eksempel, pakkede tabletter, kapsler og pulvere i glass eller ampuller. Enhetsdoseformen kan også være en kapsel av forskjellig type eller tablett selv, eller den kan være det passende antall av noen av disse i pakket form.

Mengden av aktiv komponent i en enhetsdose preparat, kan variere eller justeres fra 1 mg til 500 mg, fortrinnsvis 5 til 100 mg i henhold til den spesielle anvendelse og styrken av den aktive ingrediens. Preparatet kan, om ønsket, også inneholde andre dermed forenelige terapeutiske midler.

I terapeutisk bruk, som beskrevet ovenfor, er doserings-området for et pattedyr på 70 kg, fra 0,1 til 150 mg/kg kroppsvekt pr. dag eller fortrinnsvis 1 til 50 mg/kg kroppsvekt pr. dag. Doseringene kan imidlertid varieres alt etter pasientens behov, alvoret av tilstanden som behandles og forbindelsen som brukes.

Bestemmelse av den rette dosering i en spesiell situasjon er innenfor fagets muligheter. Vanligvis starter behandlingen med små doser som er mindre enn de optimale doser av forbindelsen. Deretter øker doseringen med små tillegg inntil den optimale effekt under forholdene, er nådd. Av hensiktsmessige grunner kan den totale dagsdose deles og administreres i por-sjoner i løpet av dagen, om ønsket.

De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen ytterligere.

EKSEMPEL 1

N^- [ 2 , 2- DifenyletylJ - 5 ' - deoksyadenosin

En blanding av N -(2,2-difenyletyl)purin (31,5 g, 10 mmol) og triacetatsukkeret III"'" (2,6 g, 10 mmol) ble varmet ved 180°C. Til dette ble det tilsatt en mikrodråpe t^SO^ og smeiten ble rørt ved 180-195 C i fire timer. Smeiten ble avkjølt til romtemperatur, stivnet. Det faste løstes opp i etylacetat og ble renset ved "flash kromatografering" på silikagel. Den nye forbindelsen ble isolert ved å dampe bort oppløsningsmidlet, og tatt opp i en oppløsning av metanol (70 ml) og natriummetoksyd (0,05 g, 1 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i fire timer. Reaksjonen ble stoppet med Dowex 50 (H + form) til pH=6. Resinet ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og ga et hygroskopisk skum. Skummet ble dampet inn til tørrhet sammen med Metanol, utbytte 0,26 g (8%): sm.pkt. 185-187,5.

Anal (C24H25<N>5<0>3)<;>

ber.: C = 58,81, H = 5,61, N = 20,52

funnet: C = 59,00, H = 5,32, N = 19,62.

1H NMR (DMSO-d6 , 200 MHz): <5 1,2 (d,3H), 6 3,9(m,2H), 6 4,l(bs, 2H), 6 4,6(m,2H), 6 5,2(d, 1H), 6 5,4(d,.lH),6 5,8(d, 1H), 6 7,l-7,3(m, 10H),6 7,8(bs, 1H), 6 8,3(bs,2H).

Purinet som det startes med, fremstilles som følgende: en oppløsning av 2,2-difenyletylamin (7 g, 35,5 mmol), trietylamin (3,6 g, 35,5 mmol) og 6-klorpurin (5,5 g, 35,5 mmol) i etanol (250 ml) ble rørt med tilbakeløp over natten. Oppløsningen ble avkjølt til romtemperatur. Det utfelte faste stoff ble samlet og vasket med etanol (10 0 ml). Det hvitaktige faste stoffet ble tørret i vakuum ved romtemperatur; utbytte 6,5 g (58%) : smeltepkt. 232-233°C.

Ana<l> (<C>19H17<N>5)

ber.: C = 72,36, H = 5,43, N = 22,21

funnet: C = 72,05, H = 5,42, N. = 21,99.

EKSEMPEL 2

N^- [ i- Indanyll - 5 '- deoksyadenosin

^' Kiss, J., D'Souza, R.,Koereringe, J.A., Arnold, W.: Heiv. Chim. Acta., 65, (5), 1522-1537 (1982).

Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1, ved å bruke 2,5 g, 10 mmol av N^-(1-indanyl)purin og 4,0 g, 15 mmol av triacetat-5-deoksysukkeret. Hydrolysen brukte 0,25 g natriummetoksyd og ga 0,7 g (19%) som en ualminnelig hygroskopisk sirup. Ana<l> (<c>19<H>2i<N>5°3)

ber.: C = 6 2,11, H = 5,76, N = 19,06,

funnet: C = 60,67, H = 6,14, N = 18,26.

<1>H NMR (DMSO-db,, 90 MHz): 6 l,25(d,3H), 6 2,0-2,2(m,2H), 6 2,8-3,l(m,2H), 6 3,8-4,0(m,2H), 6 4,6(m,lH), 6 5,05(d,lH), 6 5,3 (d,lH), 6 5,8(d,lH), 6 5,8-6,0 (bs,lH), 6 7,0-7,3(m,4H),

6 7,9(br.d,lH), 6 8,15(s,lH), 6 8,2(s,lH).

Purinet som det ble startet med, ble fremstilt som i eksempel 5, med bruk av 1-aminoindan (1,3 g, 10 mmol), trietylamin (1,1 g, 10 mmol) og 6-klorpurin (1,5 g, 10 mmol); utbytte 1,6 g (64%): smeltepkt. = 247-248°Cd.

Ana<l> (<C>14<H>13<N>5),

ber.: C = 66,91, H = 5,21, N = 27,87;

funnet: C = 66,46, H = 5,26, N = 27,54.

EKSEMPEL 3

( R) - N^- [ Fenylisopropyl] - 5 ' - deoksyadenosin

Reaksjonen foregikk som i eksempel 1, med N^- [fenylisopropyl]purin (4,5 g, 17,8 mmol) og 4,6 g (17,8 mmol) av deoksy-sukkeret. Hydrolysen brukte 0,3 g natriummetoksyd og ga 1,8 g (28%) hygroskopisk fast stoff, sm.pkt.~70°C.

"""H NMR (DMSO-d6, 200 MHz): 6 l,l(d,3H), 6 l,2(d,3H), 6 2,7-2,8 (m 1H), 6 3,0(m,lH), 6 3,95(m,2H), 6 4,5(m,2H), 6 5,2-5,6(br.s, 2H), 6 5,9(d,lH), <5 7,0-7,2(m,5H), 6 7,6(br.d,1H),.6 8,3(s,lH),

6 8,5(s,lH).

Purinet som det startes med, ble fremstilt som følgende:

en oppløsning av £-amfetaminet (13,6 g, 0,1 mmol) og 6-klorpurin (7,73 g, 0,05 mmol) i etanol (250 ml) ble rørt med til-bakeløp i 72 timer. Oppløsningen ble avkjølt til 45°C og etanolen ble fjernet i vakuum. Det gjenværende ble helt i en blanding av kloroform og vann (100 ml). Det organiske ble skilt fra og tørret over MgSO^ og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og det ga et hvitt fast. stoff som ble tørret i vakuum, ved RT, over natten; utbytte 11 g (87%): sm.pkt. 190-193°C.

Anal (C14H15<N>5)

ber.: C = 66,38, H = 5,97, N = 27,65;

funnet: C = 66,10, H = 5,96, N = 27,14.

[a] = -114,8 (c l,08,MeOH).

EKSEMPEL 4

( S)- N^- [ Fenylisopropyl]- 51- deoksyadenosin

Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1, med bruk av 5,0 g, 19,7 mol N -(S)-fenylisopropylpurin og 5,2 g, 19,7 mol av triacetat-5-deoksy-sukkeret. Hydrolysen brukte 0,3 g natriummetoksyd og ga 1,3 g (19%) som en meget hygroskopisk sirup. Ana<l> (<C>19<H>23<N>5<0>3)<;>

ber.: C = 61,77, H = 6,27, N = 18,96;

funnet: C = 60,52, H = 6,52, N = 17,28.

<1>H NMR (DMSO-dg, 200 MHz): 6 l,l(d,3H), 6 l,2(d,3H), 6 (m,lH),

6 2,8(m,lH), 6 2,9-3,0(m,1H), 6 3,95(d,2H), 6 4,6(m,2H), 6 5,8 (d,lH), 6 7,0-7,2(m,5H), 6 8,1-8,2(br.s,2H), 6 8,3(s,lH).

Purinet som det ble startet med, ble fremstilt som beskrevet for utgangsmaterialet i eksempel 3, med bruk av d-amfetamin (13,3 g, 0,098 mol) og 6-klorpurin (7,73 g, 0,05 mol), utbytte 8,7 g (69%): sm.pkt. 190-192,5.

Ana<l> (<C>14<H>15<N>5),

ber.: C = 66,38, H = 5,97, N = 27,65;

funnet: C = 66,20, H = 6,01, N = 27,52.

[a]D = +87,0(c 1,19, MeOH).

EKSEMPEL 5

N^- [ Cyklopentyl] - 5 ' - deoksyadenosin

Reaksjonen foregikk som i eksempel 1, med 5,0 g, 24,6 mmol N -cyklopentylpurin og 6,4 g, 24,6 mmol av triacetat-5-deoksy-sukkeret. Hydrolysen brukte 0,5 g natriummetoksyd og ga 2,6 g (33%) ekstremt hygroskopisk sirup.

Anal (C15H2]<N>5<0>3),

ber.: C = 56,41, H = 6,63, N = 21,93,

funnet: C = 54,65, H = 6,45, N = 19,59.

<1>H NMR (DMSO-d6, 90 MHz): 6 l,3(d,3H), 6 1,3-2,0(m,8H),

6 3,9-4,0(m,2H), 6 4,3-4,9(m,4H), 6 5,8(d,lH), 6 7,5-7,6(d,1H),

6 8,l(s,lH), 6 8,2(s,lH).

Purinet som det startes med, ble fremstilt som følgende: en oppløsning av cyklopentylamin (4,3 g, 50 mmol), trietylamin

(5,05 g, 50 mmol) og 6-klorpurin (7,73 g, 50 mmol) i etanol (250 ml) ble rørt med tilbakeløp over natten. Oppløsningen ble avkjølt til 45°C og etanolen ble fjernet i vakuum. Det gjenværende ble løst opp i kloroform og vasket én gang med vann. Kloroformen ble dampet bort i vakuum og det gjenværende ble rørt i vann. Det bunnfelte faste stoffet ble samlet ved filtrering og tørret ved 45°C i vakuum over natten. Utbytte 6,7 g (66%): sm.pkt. 187-191°C.

Ana<l> (<C>1QH13<N>5)<:>

ber.: C = 59,09, H = 6,45, N = 34,46;

funnet: C = 58,75, H = 6,18, N = 34,37.

EKSEMPEL 6

N^- [ bykloheksyl] - 5'- deoksyadenosin

Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1, med bruk av 2,2 g, 10 mmol N^-cykloheksylpurin og 3,1 g, 12 mmol av triacetat-5-deoksy-sukkeret, og renset ved å bruke 10% MeOH:CHCl3-oppløsningsmiddel til silikagel-kromatografering. Hydrolysen brukte 0,25 g natriummetoksyd og ga; 0,61g (18%), en ekstremt hygroskopisk sirup.

Anal (C16H23<N>5°3-H20)'

ber.: C = 54,69, H = 7,17, N=19,93;

funnet: C = 54,92, H = 7,28, N = 15,90.

<1>H NMR (DMSO-d6,90 MHz): 6 l,2(d,3H), 6 1,1-2,0(m,8H), 6 3,2-3,5(m,2H), <5 4 , 5-5 , 3 (m, 6H) , 6 5,7(d,lH), 6 7 , 3-7 , 5 (d, 1H) , 6 8,05 (s,lH) , 6 8,15(s,1H) .

Purinet som det ble startet med, ble fremstilt som utgangsmaterialet i eksempel 5, ved å bruke cykloheksylamin (2,0 g,

20 mmol), trietylamin (2,2 g, 20 mmol) og 6-klorpurin (3,1 g

20 mmol); utbytte 3,4 g (79%): sm.pkt. = 199-201°C.

EKSEMPEL 7

( R)- N6 LFenylisopropyll - 5'- deoksy- 5'- tiometyladenosin Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 11, med bruk av 5,0 g (12,9 mmol) (R)-N^-[fenylisopropyl]adenosin, 13,2g (65 mmol) tri-n-butylfosfin og 6,1 g (65 mmol) dimetyldisulfid, utbytte 28%.

Anal. ber. for: C20<H>25<N>5°3S

ber.: C = 57,81, H = 6,06, N = 16,86, S = 7,72;

funnet: C = 57,71, H = 6,28, N = 16,49, S = 8,07.

EKSEMPEL 8

( S)- N^-{ Fenylisopropyl)- 5'- deoksy- 5'- tiometyladenosin

Utgangsforbindelsen (S)-N - [fenylisopropylj-adenosin-2', 3<1->isopropyliden ble fremstilt som i eksempel 12, med bruk av (S)-N^- [ f enylisopropyl]-adenosin (8,4 g, 22 mmol), dimetoksypropan (25 ml) og Hampton's reagens (8,5 g, 25 mmol). f Se J. Am.Chem.Soc. 8_3 , 3640 (1961)]. Utbytte 61%; denne forbindelse ble deretter behandlet med tionylklorid (1,8 g, 15 mmol) på den måten som er beskrevet i eksempel 12; denne forbindelsen (3,7 g, 8,3 mmol) ble deretter behandlet med litiummetylmerkap-tan (2,3 g, 42 mmol) (utbytte 53%), og beskyttelsen ble fjernet som i eksempel 12 og ga 81% sluttprodukt, sm.pkt. 23-24°C.

Anal. beregn.for: C2QH25N5<O.>3<S>

beregn.: C = 57,81; H = 6,06; N = 16,86; S = 7,72;

funnet: C = 56,81; H = 5,77; N = 15,83; S = 8,74.

"""H NMR (DMSO-dg, 90 MHz): 6 l,2(d,3H), 6 2,0(s,3H), 6 2,6-3,0 (m,4H), 6 4,l(m,2H), <5 4,6(m,2H), 6 5,2(d,lH), <5 5,4(d,lH), 6 5,85(d,lH), 6 7,0-7,3(m,5H), 6 7,6(br.d,1H), 6 8,15(s,lH),

6 (s,lH) .

EKSEMPEL 9

N^- [ cykloheksyl] - 5'- deoksy- 5'- tiometyladenosin

N^-[cykloheksylj-5<1->deoksy-5'-tiometyladenosin ble fremstilt på tilsvarende måte som i eksempel 12, med bruk av 5,0 g N^-Jcykloheksylj-5'-deoksy-5<1->kloradenosin-2',3'-isopropyliden og litiummetylmerkaptid (2,7 g) og ga 5<1->tiometylisopropyliden-utgangsforbindelsen, etterfulgt av fjerning av beskyttelsen for å gi sluttproduktet, utbytte 58%.

Anal. beregn.for: ci7H25N5°3<S>

beregn. C =53,81; H= 6,64; N = 18,46; S = 8,48;

funnet: C = 53,00; H = 6,66; N = 18,19; S = 6,88;

vann 2,35.

<1>H NMR (DMSO-dg, 90 MHz): 6 1,1-2,0(m,10H), & 2,0(s,3H),

6 2,8(m,lH), 6 3,8-4,3(m,4H), & 4,65(m,lH), 6 5,1-5,4(m,2H),

6 5,85(d,lH), 6 7,4(br.d,1H), 6 8,l(s,lH), 6 8,25(s,lH).

N^- [CykloheksylJ-5'-deoksy-5<1>kloradenosin-2<1>,3<1->isopropyliden ble syntetisert som i eksempel 12 med bruk av 12,5 g N - [cykloheksyl] adenosin, dimetoksypropan 80 ml og Hampton1 s katalysator 15,2 g for å danne isopropylidenet, etterfulgt av behandling med 5,3 g tionylklorid. Forbindelsen ble isolert som hydrogenklorid-saltet.

EKSEMPEL 10

N<6-> [ Cyklopentyl]- 5'- deoksy- 5'- tiometyladenosin

Tittelforbindelsen ble fremstilt ved å bruke N^- [cyklopentyl]-5 1-deoksy-5 1-kloradenosin-2 1 , 3 '-isopropyliden (5,7 g, 13,2 mmol) og litiummetylmerkaptid (4,3 g, 80 mmol) som i eksempel 12, utbytte 74%'. Her ble beskyttelsen fjernet som i eksempel 12 og det ga N^-[cyklopentyl}-5'-deoksy-5'-tiometyladenosin, utbytte 69%.

Anal.beregn.for: cigH23N5°3<S>

beregn: C = 52,59; H = 6,34, N = 19,16, S = 8,77;

funnet: C = 51,67; H = 6,67; N = 17,25; S = 8,59.

■"■H NMR (DMSO-d6, 90MHz): 6 1,4-2,1 (m, 8H) , 5 2,0(s,3H), 6 2,8 (m,2H), 6 3,9-4,2 (m,2H) , 6 4, 5-4 , 8 (m, 3H) , <S 5,85(d,lH), 6 7,6 (br.d,lH), 6 8,2(s,lH), 6 8,3(s,lH).

5'-deoksy-5'-klorisopropylidenintermediatet ble syntetisert som i eksempel 12, med bruk av N<6->[cyklopentyl]-adenosin (5g, 15 mmol), dimetoksypropan (18 ml) og Hampton<1>s reagens (6,3 g, 19 mmol), utbytte 86%; denne behandlingen etterfølges av behandling med 4,1 g (10 mmol) tionylklorid og forbindelsen, som skal bearbeides videre, isoleres som hydrogenklorid-saltet (utbytte 49%) .

EKSEMPEL 11

N 6 - r [ 2 , 2- dif enyletylN] - 5 '- deoksy- 5'- tiometyladenosin

N<6->(2,2-difenyletyladenosin) (4,7 g, 10,5 mmol), dimetyldisulfid (0,94 g, 10,5 mmol) og tri-n-butylfosfin

(10,8 g, 54 mmol) i DMF (20 ml) ble rørt under N2 ved romtemperatur i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet

med vann (20 ml) og oppløsningsmidlene ble fjernet ved destillering (< 90°C, 1 mm Hg). Det blanke sorte residuet ble renset med silikagel-kromatografering og utvasking med etylacetat. Hovedfraksjonen ble isolert ved å dampe bort oppløsningsmidlet og det ga et hvitt skum; utbytte

1,4 g (28%), sm.pkt. 70-90°C.

Anal.beregn, for: C25H2.7<N>t.O2S.

beregn.: C = 62,87; H = 5,70; N = 14,66; S = 6,71;

funnet: C = 62,32; H = 5,73; N = 14,25; S = 6,72.

<1>H NMR (DMS0-dc, 200 MHz): 6 2,0(s,3H), 6 2,8(m,2H), 6 4,0-4,2 (m,4H), 6 4,6(m,lH), 6 4,7(m,lH), 6 5,3(d,lH), 6 5,5(d,lH), 6 5,9(d,lH), 6 7,1-7,4(m,10H) , 6 7,8 (br.s,1H) , 6 8,3(br.s,2H) .

N -(2,2-difenyletyl)adenosin ble fremstilt som følgende:

I 250 ml absolutt etanol ble 14,3 g 6-klorpurinribosid, 9,8 g (2,2-difenyl)etylamin og 5,0 g trietylamin varmet med tilbake-løp i 18 timer. Oppløsningen ble avkjølt til 8°C og de faste stoffer samlet ved filtrering. De faste stoffer ble skilt mellom 100 ml metylenklorid og 100 ml vann. Det organiske ble tørret over magnesiumsulfat og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og det ga et skum som ble tørret ved høyt vakuum i fire timer, sm.pkt. 88-101°C. Anal .beregn. for : C24H25N5°7 " ® ' H20

beregn.: C =63,14; H = 5,74; N = 15,34;

funnet : C = 62,82; H = 5,71; N = 15,10.

EKSEMPEL 12

N^- Q.- IndanylJ - 5 ' - deoksy- 5 ' - tiometyladenosin

N^- D--Indanyl]-5'-deoksy-51-klor-21,3'-isopropylidenadeno-sin (3,3 g, 6,9 mmol) og litiummetylmerkaptid (2,2g, 40 mmol) i THF (200 ml) ble varmet til tilbakeløp og rørt i 72 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og reaksjonen ble stoppet med vann (100 ml). THF ble fjernet i vakuum og opp-løsningen ble ekstrahert med metylenklorid (100 ml). Det organiske ble tørret over MgSO^ og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og det ga et skum. Skummet, 5'-SMe-5'-deoksy-isopropyliden-derivatet, ble tørret ved høyt vakuum ved romtemperatur, 4 timer, utbytte 1,2 g, (39%). Dette materialet ble rørt i 50% vandig maursyre (100 ml) og rørt ved 50°C i fire timer. Maur-syren/vannet ble fjernet i vakuum og det gjenværende ble dampet inn til tørrhet sammen med metanol, og det ga et skum. Skummet ble renset ved silikagel-kromatografering og utvasking med aceton, og hovedkomponenten ble isolert ved at oppløsningsmidlet ble dampet bort. Det resulterende hygroskopiske gule skum ble tørret ved høyt vakuum ved romtemperatur; utbytte 1,3 g (81%).

Anal.beregn.for: C20H23N,-O3S .H20

beregn.: C 55,67; H = 5,61; N = 16,23; S = 7,41;

funnet: C = 56,41; H = 5,91; N = 15,17; S = 5,74.

■"■H NMR (DMSO-dg, 200 MHz): 6 2,0(s,3H), 6 2,8-3,1 (m, 5H) ,

<5 4,0-4,2(m,2H), 6 4,5(m,lH), 6 4,8(m,lH), S 5,3(d,lH), 6 5,5(d,lH), 6 5,9(d,lH), 6 5,9-6,0(br.s, 1H), 6 7,1-7,3(ra,4H), 6 8,1(br.d,lH), 5 8,3 (br.s,1H) , 6 8,5(s,lH).

Utgangsmaterialet ble fremstilt som følgende: En oppløs-ning av dimetoksypropan (30ml), N -(1-indanyl)adenosin (9,0 g, 23,5 mmol) og Hampton's reagens (bis-p-nitrofenylfosfathydrat), [j.Am.Chem.Soc. £3, 3640 (1961)], (9,6 g, 28mmol) i aceton (150 ml) ble rørt ved romtemperatur, med fravær av fuktighet, over natten. Reaksjonen ble stoppet med -5% NaHCO-^oppløsning (125 ml) og oppløsningen ble rørt i en halv time. Acetonen ble fjernet i vakuum og det gjenværende ble løst opp i metanol. Den metanoliske oppløsning ble helt gjennom en Dowex 1x8 (NH^"<*>" HCO-j )-kolonne, vasket ut med metanol. Metanolen ble fjernet

i vakuum og det ga isopropylidenet, utbytte 6,4 g(65%). Isopropylidenet (6,1 g, 14,4 mmol) ble tatt opp i THF (150 ml) og behandlet med tionylklorid (2,4g, 20 mmol). Oppløsningen ble varmet til tilbakeløp i én time og deretter avkjølt til romtemperatur og rørt over natten. THF ble fjernet i vakuum ved 40°C og det gjenværende ble løst opp i metylenklorid (150 ml). Oppløsningen ble vasket med vann (2 x 100 ml) og tørret over MgSO.. Oppløsningsmidlet ble deretter fjernet i vakuum og det ga et gult skum, N 6- (indanyl)-5'-klor-51-deoksy-isopropyliden-adenosin 0,8 HC1, utbytte 5,5 g (81%).

N^-(1-Indanyl)adenosin ble i sin tur fremstilt som følgende: Fire gram 6-klorpurinribosid, 2,32 g 1-aminoindan og 2,11 g trietylamin ble varmet med tilbakeløp i 100 ml absolutt etanol under nitrogen i 20 timer. Flyktige stoffer ble dampet bort inntil resten var tørt. Det gjenværende ble løst opp i 20 ml 2-propanol og fortynnet med 200 ml H2O. Den klare vandige opp-løsning ble dekantert og det gjenværende oljeaktige materialet ble vasket med kaldt vann. Inndamping sammen med etanol flere ganger ga fast materiale. Krystallisering fra CHCl^/2-propanol (10:1) og heksan ga 3,0 g (56,2%) N 6-(1-indanyl)adenosin som hadde et smeltepkt. på 120-122°C. (skum).

Anal.beregn, for: ci9H21<N>5°4

beregn.: C =59,52; H = 5,52; N = 18,26;

funnet : C =59,37; H = 5,48; N = 18,00.

EKSEMPEL 13

N^- [ 2 , 2- Dif enyletyl] - 5 '- deoksy- 5 '- kloradenosin

Utgangsforbindelsen N6-{2,2-difenyletyl]-51-deoksy-51 - kloradenosin-2',3'-isopropyliden ble syntetisert som i eksempel 14 ut fra N - [ 2, 2-dif enyletyl] -adenosin (2,2 g, 4,7 mmol), dimetoksypropan (8 ml) og Hampton's reagens (1,9 g, 5,6 mmol), (utbytte 1,8 g, 78%), etterfulgt av behandling med 1,5 ekviva-lenter tionylklorid (utbytte 59%). Isopropylidenet ble hydrolysert med maursyre til sluttproduktet som i eksempel 14 (utbytte 36%), sm.pkt. 180-183°C.

Analyse som (C24H24ClN,-03)

Beregn.:C = 61,87; H = 5,19; N = 15,03; Cl = 7,61;

Funnet: C = 61,48; H = 5,19; N = 14,62; Cl = 8,51.

■"■H NMR (DMSO-d6, 200 MHz): 6 3 , 8-3 , 9 (m, 2H) , 6 4 ,0-4 , 2 (m, 3H) ,

6 4,6(m,2H), 6 4,7(d av d,lH), 6 5,4(d,lH), 6 5,55(d,lH),

6 5,9(d,lH), 6 7,1-7,3(m,10H), 6 7,8(br.s,1H), 6 8,2(s,2H).

N^-(2,2-Difenyletyl)adenosinet som det startes med, ble fremstilt som følgende: I 250 ml absolutt etanol ble 14,3 g 6-klorpurinribosid, 9,8 g (2,2-difenyl)etylamin og 5,0 g trietylamin varmet med tilbakeløp i 18 timer. Oppløsningen ble avkjølt til 8°C og faste stoffer samlet ved filtrering. De faste stoffer ble fordelt mellom 100 ml metylenklorid og 100 ml vann. Det organiske ble tørret over magnesiumsulfat og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og det ga et skum som ble tørret ved høyt vakuum i fire timer, sm.pkt. 88-101°C.

Ana<l.> (<C>24<H>25<N>5<O>?.<0>,5H2O)

Beregn.: C = 63,14; H = 5,74; N = 15,34;

Funnet: C = 62,82; H = 5,71; N = 15,10.

EKSEMPEL 14

N6- [ l- Indanyl]- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin

En oppløsning av dimetoksypropan (30 ml), N^-(1-indanyl)-adenosin (9,0 g, 2 3,5 mmol) og Hampton<1>s reagens (bis-p-nitrofenylfosfathydrat) (9,6 g, 28 mmol) i aceton (150 ml) ble rørt ved romtemperatur, med utelukking av fuktighet, over natten.

-Kj.Am.Chem.Soc., 83, 3640 (1961)

■"•J.Am.Chem.Soc., 83, 3640(1961)

Reaksjonen ble stoppet med -5% NaHCO-j-oppløsning (125 ml) og oppløsningen rørt i en halv time. Acetonen ble fjernet i vakuum og det gjenværende løst opp i metanol. Den metanoliske oppløsning ble helt gjennom en Dowex 1x8 (NH4+HC03 )-kolonne, vasket ut med metanol (300 ml). Metanolen ble fjernet i vakuum og ga isopropylidenet, utbytte 6,4 g (65%). Isopropylidenet (6,1 g, 14,4 mmol) ble tatt opp i THF (150 ml) og ble behandlet med tionylklorid (2,4 g, 20 mmol). Oppløsningen ble varmet med tilbakeløp i én time og deretter avkjølt til romtemperatur og rørt over natten. THF ble fjernet i vakuum ved 40°C og det gjenværende ble løst opp i metylenklorid (150 ml). Oppløsningen ble vasket med vann (2 x 100 ml) og tørret over MgS04. Oppløs-ningsmidlet ble deretter fjernet i vakuum og det ga et gult skum, S^klor-S^deoksyisopropyliden^O^HCl, utbytte 5,5 g (81%). Den beskyttede 5'-klorforbindelse (2,0 g, 4,2 mmol) ble deretter løst opp i 50% vandig maursyre (110 ml) og oppløsningen ble varmet til 60°C i fire timer. Maursyren/vannet ble fjernet i vakuum og det gjenværende ble dampet inn til tørrhet sammen med metanol og det ga et hvitt skum. Dette skummet ble renset ved silikagelkromatografering og utvasking med aceton. Hovedkomponenten ble isolert ved å dampe bort acetonen og det ga et meget hygroskopisk hvitt stoff, tørret i vakuum ved romtemperatur over natten; utbytte 0,85 g (50%).

Anal. (C19H20<C>lN5O3.H2O),

Beregn: C = 54,35; H = 5,04; N = 16,68; Cl = 8,44;

Funnet: C = 54,52; H = 5,40; N = 15,47; Cl = 8,54.

<1>H NMR (DMSO-d6, 100 MHz): 6 1,0-1,5(m,2H), 6 2,8-3,1(m,2H), 6 3,9(d av d,2H), 6 4,0-4,3(m,2H), 6 4,8(d av d,lH), 6 5,5 (d,lH), 6 5,6(d,lH), 6 5,95(d,lH), 6 7,1-7,3(m,4H), 6 8,2(br.d, 1H), 6 8,3(s,lH), 6 8,35(s,lH).

N(6)-(1-Indanyl)adenosinet som det ble startet med, ble fremstilt på følgende måte: Fire gram 6-klorpurinribosid, 2,32 g 1-aminoindan og 2,11 g trietylamin ble varmet med tilbakeløp i 100 ml absolutt etanol under nitrogen i 20 timer. Flyktige forbindelser ble fjernet. Det gjenværende ble løst opp i 20 ml 2-propanol og fortynnet med 200 ml H20. Den klare vandige oppløsningen ble dekantert og det gjenværende oljeaktige materialet vasket med kaldt vann. Fordamping sammen med etanol flere ganger, ga fast materiale. Krystallisering fra CHCl3/2-propanol (10:1) og heksan ga 3,0 g (56,2%) N(6)-(1-indanyl)adenosin som hadde et smeltepunkt på 120-122°C (skum).

Ana<l.> (<c>19<H>2i<N>5°4)

Beregn.: C = 59,52; H = 5,52; N = 18,26;

Funnet : C = 59,37; H = 5,48; N = 18,00.

EKSEMPEL 15

( R)- N - [ Fenylisopropyl]- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin

En oppløsning av tionylklorid (8,3 g, 70 mmol) i HMPA

(25 ml) ble behandlet med (R)-N^-(fenylisopropyl)adenosin (5g, 13mmol) og blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonen ble stoppet med vann (80 ml) og nøytrali-sert med ammoniumhydroksyd. Gummien som ble dannet, ble skilt fra oppløsningen og vasket med vann (30 ml). Gummien ble løst opp i etanol og dampet inn i vakuum og det ga et skum. Forbindelsen ble løst opp i etanol (20 ml) og sendt gjennom silikagel, utvasking med etanol (100 ml). Etanolen ble dampet bort i vakuum. Det gjenværende ble løst opp i metylenklorid og tør-ret over MgSO^ og dampet inn i vakuum og det ga et gult skum; utbytte 1,65 g(31%): sm.pkt. 83-86. Ana<l> (<C>igH22ClN503) beregn.: C = 56,50; H = 5,49; N = 17,34; Cl = 8,78;

funnet : C = 56,34; H = 5,60; N = 17,37; Cl = 8,41.

EKSEMPEL 16

( S)- N^~ [ Fenylisopropyll- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin Tittelforbindelsen ble syntetisert som i eksempel 15 med bruk av (S)-N -(fenylisopropyl)adenosin (15,4 g, 40 mmol),

HMPA (80 ml) og tionylklorid (25,5 g, 215 mmol); utbytte 11%, sm.pkt. 75-110°C. Analyse for (C19H22C1N503)

beregn.: C = 56,60; H = 5,49; N = 17,34; Cl = 8,78;

funnet : C =56,14; H = 5,42; N = 16,99; Cl = 8,77.

<1>H NMR (DMSO-dg, 90 MHz): 6 l,2(d,3H), 6 2,7-3,2(m,2H), 6 3,9-4,0(m,2H), 6 4,05-4,4(m,2H), 6 4,8(d av d,2H), 6 5,5(d, 1H), 6 5,6(d,lH), 6 6,0(d,lH), 6 7,1-7,4(m,5H), 6 7,7(br.d,1H),

6 8,2(s,lH), .6 8,3 (s,lH) .

EKSEMPEL 17

N^~ ( Cykloheksyl]- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin

N^- [cykloheksyl1-5'-deoksy-5'-kloradenosin ble syntetisert på samme måte som i eksempel 14, ved å bruke 12,5 g N - [cykloheksyl] adenosin, dimetoksypropan 80 ml og Hampton's katalysator 15,2 g for å gi isopropylidenet, etterfulgt av behandling med 5,3 g tionylklorid og fjerning av beskyttelsen. Utbytte 40% sm.pkt. 65-85°. Analyse for (C16H22<N>5<0>3C1)

Beregn.: C = 52,24; H = 6,03; N = 19,04; Cl = 9,64;

Funnet : C = 51,20; H = 5,72; N = 17,26; Cl = 13,32.

<1>H NMR (DMS0-d6, 90MHz): 6 1,1-2,0(m,11H), 6 3,8-4,0(m,2H), 6 4,0-4,3(m,2H), 6 4,75(d av d,lH), 6 5,45(d,lH), 6 5,55(d,lH), 6 5,9(d,lH), 6 7,5 (br.d,lH) , 6 8,2(s,lH), 6 8,3(s,lH).

EKSEMPEL 18

N^- [ Cyklopentyl]- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin

Isopropyliden-utgangsstoffet ble syntetisert som i eksempel 14, med bruk av N^- [cyklopentyl]-adenosin (5g, 15mmol) , dimetoksypropan (18 ml) og Hampton's reagens (6,3 g, 19 mmol) utbytte 86%. Den 5<1->klor-5<1->deoksyisopropylidenanaloge ble syntetisert på samme måte som i eksempel 14, med bruk av 4,1 g (10 mmol) N - [cyklopentyl]adenosin-2'-3'-isopropyliden og 1,3 g (10 mmol) tionylklorid, og ble isolert som hydrogenkloridsaltet (utbytte- 49%). Dette ble hydrolysert som i eksempel 14, og ga N 6 - [*c• yklopentyl]-5'-deoksy-51-kloradenosin. Sm.pkt. ~ 70 oC. Ana<l.> (<C>15<H>20ClN5O3),

Beregn.: C = 50,92; H = 5,70; N = 19,80; Cl = 10,02;

funnet : C = 50,54; H = 5,84;N = 19,12; Cl = 10,64.

<1>H NMR (DMSO-do,, 90 MHz): 6 1,4-2,1(m,9H), 6 3,85(m,3H), 8 4,2 (m,2H), 6 4,6(m,2H), 6 5,9(d,lH), 6 8,4(s,lH), 6 (s,lH), 6 8,6 (S,1H) , <5 9,5(s,lH) .

EKSEMPEL 19

N^- l- Tetralinyl- 5'- deoksyadenosin

6-Klorpurin (7,7 g, 50 mmol), trietylamin (5,1 g, 50 mmol) og 1-aminotetralin (7,4 g, 50 mmol) ble rørt med tilbakeløp i 150 ml etanol over natten. Oppløsningen ble avkjølt til 0°C og filtrert fri for bunnfall. Bunnfallet ble vasket med 50ml kald (0°C) etanol og tørret ved 60°C i vakuum i fire timer og det ga 4,2 g (32%) av et hvitt fast stoff, sm.pkt. 232,5-234°C. Anal ci5H15<N>5

Beregn.: C = 67,90; H = 5,70; N = 26,40;

funnet : C = 67,99; H = 5,62; N = 26,41.

Adeninet (5,3 g, 20 mmol) og 5-deoksyribosetriacetatet (6,5 g, 25 mmol) ble smeltet og rørt ved 190°C. Til smeiten ble tilsatt én mikrodråpe konsentrert svovelsyre og eddiksyren som ble dannet, ble fjernet i en forsiktig strøm av nitrogen. Oppløsningen ble rørt i to timer før avkjøling til romtemperatur. Det glassaktige residuet ble brutt opp i 20 ml etylacetat i et ultrasonisk bad. Oppløsningen ble deretter renset ved kromatografering og ga etter inndamping av oppløsningsmidlet, 4,7 g av et lyst brunt skum, identifisert her senere som forbindelsene D i eksempel 22. Skummet (4,0 g, 8,6 mmol) ble deretter løst opp i 100 ml metanol og natriummetoksyd (0,5 g, 8,6 mmol) ble tilsatt. Oppløsningen ble rørt ved romtemperatur i fire timer. Reaksjonen ble nøytralisert med Dowex 50 x 8

(H+ form) til pH 7 og resinet ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble dampet inn i vakuum og det gjenværende rørt i 4,0 ml aceton og det faste stoffet samlet ved filtrering og tørret ved 40°C over natten, og det ga 1,95 g (30%) av et hygroskopisk hvitt fast stoff, sm.pkt. 159-162°C.

Ana<l.><C>20<H>23<N>5<O>3

Beregn.: C = 62,98; H = 6,08; N = 18,36;

funnet : C = 62,87; H = 6,21; N = 18,18

EKSEMPEL 20

N^- g- Naftylmetyl- 5'- deoksyadenosin

6-Klorpurin (7,6 g, 50 mmol), trietylamin (5,1 g, 50 mmol) og a-naftylmetylamin (7,9 g, 50 mmol) ble rørt med tilbakeløp, i 150 ml etanol over natten. Oppløsningen ble avkjølt til 0°C og filtrert fri for bunnfall og det bunnfelte faste stoffet ble vasket med kald etanol. Det faste stoffet ble tørret ved romtemperatur i vakuum over natten og ga 10,6 g(77%) av et hvitt fast stoff, sm.pkt. 250-252,5°C.

Adeninet (5,5 g, 20 mmol) og 5'-deoksyribose (6,5g, 25 mmol) ble smeltet og rørt ved 200-220°C. Til smeiten ble tilsatt én mikrodråpe konsentrert svovelsyre og eddiksyren som ble dannet ble fjernet i en forsiktig strøm av nitrogen. Oppløsningen ble rørt i seks timer før avkjøling til romtemperatur. Det glassaktige residuet ble brutt opp i 30 ml etylacetat i et ultrasonisk bad. Oppløsningen ble deretter renset ved kromatografering og ga etter at oppløsningsmidlet var dampet bort, 3,9 g av et hvitt skum som er forbindelsen identifisert som 21 her-etter. Skummet (3,0 g, 6,3 mmol) ble deretter løst opp i 100 ml metanol, og natriummetoksyd ble tilsatt (0,4 g, 6,3 mmol). Oppløsningen ble rørt ved romtemperatur i fire timer. Reaksjonen ble nøytralisert med Dowex 50 x 8 (H+ form) til pH 7

og resinet fjernet ved filtrering. Filtratet ble dampet inn i vakuum og det gjenværende ble krystallisert fra 30 ml etanol. Det faste stoff ble samlet ved filtrering og tørret ved 40°C i vakuum over natten, og det ga 1,9 g (31%) av et hygroskopisk lyst brunt fast stoff, sm.pkt. 124-128°C.

EKSEMPEL 21

N - g- Naftylmetyl- 2', 3'- di- O- acetyl- 5'- deoksyadenosin

Forbindelse 21 fra eksempel 20 ble analysert og ga produktet N<6->(a-naftyl)metyl-5'-deoksy-2',3'-diacetyladenosin 3,9 g (41%), sm.pkt. 70-78°C.

Anal. C,11-Ho,-Nc0c

/b flo b b

beregn.: C = 63,15; H = 5,30; N = 14,73;

funnet : C = 62,91; H = 5,50 ; N = 14,57.

EKSEMPEL 2 2

N^- l- Tetralinyl- 2', 2'- di- O- acetyl- 5'- deoksyadenosin

Forbindelse D fra eksempel 19 ble analysert til å gi produktet N -(1-tetralinyl)-5'-deoksy-21,31-diacetyladenosin 4,7 g(51%), sm.pkt. 70-72°C.

Anal. C24<H>27<N>505

Beregn.: C = 61,92; H = 5,85; N = 15,05;

funnet : C = 61,98; H = 6,05; N = 14,96.

EKSEMPEL 23

( R)- N 6( 1- indanyl)- 5'- deoksy- 5'- kloradenosin

En oppløsning av dimetoksypropan (25 ml), N -(R)-1-indanyl-adenosin (9,6 g, 25 mmol) og bis-p-nitrofenylfosfat-hydrat (9,5 g, 28 mmol) i aceton (200 ml) ble rørt ved romtemperatur over natten. Oppløsningen ble kjølnet med vann (150 ml) og acetonet ble dampet bort i vakuum. Den vandige oppløsningen ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 150 ml) og den organiske oppløsningen vasket med vann (100 ml) og deretter mettet salt-oppløsning (100 ml) og deretter mettet saltoppløsning (100 ml). Den organiske oppløsningen ble tørret over magnesiumsulfat og oppløsningsmidlet ble dampet bort i vakuum. Det gjenværende ble løst opp i metanol (75 ml) og sendt gjennom en kort kolonne med Dowex 1x8 (natriumbikarbonat-form) jonebytter-resin. Kolonnen ble vasket med metanol (580 ml totalt). Metanolen ble deretter dampet bort i vakuum og ga den isopropyliden-analoge 8,8 g (83%). Isopropylidenet (7,5 g, 17,7 mmol) ble tatt opp i THF (100 ml) behandlet med tionylklorid (3,2 g, 26,5 mmol) og rørt ved romtemperatur over natten. Oppløsningen ble dampet inn i vakuum til tørrhet og det gjenværende ble løst opp i metylklorid (100 ml). Den organiske oppløsning ble vasket med vann (100 ml), mettet saltoppløsning (100 ml) og tørret med magnesiumsulfat. Oppløsningsmidlene ble dampet bort i vakuum og det gjenværende ble renset ved kromatografering og det ga etter inndamping av oppløsningsmiddel fra den største RI-aktive fraksjon, 5,5 g (71%) av et lyst gult skum. Skummet (4,8 g, 10,9 mmol) ble deretter løst opp i 50% maursyre (100 ml) og rørt ved 50°C i 4,5 timer. Oppløsningen ble dampet inn i vakuum til tørrhet og det gjenværende ble renset ved kromatografering. Dette ga, etter at oppløsningsmidlet var dampet bort fra den største RI-aktive fraksjon, 2,5 g (57%) av et hvitt skum, sm.pkt. 94-97°C.

Anal.(C19H20ClN5O3)

Beregn.: C = 56,79; H = 5,02; N = 17,43;

funnet : C = 56,60; H = 5,18; N = 17,60.

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av en terapeutisk aktiv forbindelse med formel:

   hvor R er cykloalkyl med tre til åtte ledd eller en gruppe med én av formlene:

   hvor n er 1, 2 eller 3;

   hvor Z er CH3, CH2Hal eller CH2SCH3; og

   R2' eller R3' er begge uavhengig, H eller lavere alkanoyl, eller tatt sammen, er lavere alkyliden; dens diastereomere eller blandinger derav, eller et farmasøytisk godtagbart syre-addis jonssalt derav, karakterisert veda) omsetning av et N-6-substituert purin med formel:

   hvor R er som definert ovenfor, med en forbindelse med formel:

   hvor Z er som definert ovenfor, og Ac er lavere alkanoyl, ved forhøyede temperaturer fra rundt én til rundt tolv timer, eller b) omsetning av en forbindelse med formelen:

   med en forbindelse med formelen NH2R / hvor R er som ovenfor, i nærvær av en base for å danne en forbindelse med formelen:

   som omsettes medA) tionylklorid eller tionylbromid i heksametylfosfoamid, eller med B) tionylklorid eller tionylbromid, eller med C) tionylklorid eller tionylbromid og derefter tiometoksyd, eller med D) dimetyldisulfid i nærvær av tri-n-butylfosfin, eller med E) 2,2-dimetoksypropan i aceton i nærvær av en syrekatalysator for å danne en forbindelse med formelen:

   som underkastes en av omsetningene B, C eller D, med eventuell påfølgende fjernelse av isopropylidengruppen med maursyre og vann,

   og om ønsket, ved kjente fremgangsmåter, overføring av den resulterende frie base til et farmasøytisk godtagbart syre-addis j onssalt derav.