FI78305C - Foerfarande foer framstaellning av vasotocin-derivat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av vasotocin-derivat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI78305C FI78305C FI834634A FI834634A FI78305C FI 78305 C FI78305 C FI 78305C FI 834634 A FI834634 A FI 834634A FI 834634 A FI834634 A FI 834634A FI 78305 C FI78305 C FI 78305C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- peptide residue
- tyr
- vasotocin
- derivatives
- residue
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/15—Oxytocin or vasopressin; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
78305
Menetelmä vasotosiini-johdannaisten valmistamiseksi -Förfarande för framställning av vasotocin-derivat Tämä keksintö koskee menetelmää uusien vasotosiini-johdannaisten, nimittäin sellaisten vasotosiini-johdannaisten valmistamiseksi, jotka eroavat luontaisesta hormonista siten, että vasotosiinin rakennetta on muutettu asemissa 1, 2 ja mahdollisesti 4 ja/tai 8. Uudet johdannaiset ovat kompe-titiivisia inhibiittoreita, jotka salpaavat kehon reseptorit ja vaikeuttavat siten kehon endogeenisten hormonien agonis-tivaikutusta. Tarkemmin määritellen on näillä uusilla johdannaisilla estävä vaikutus kodunsupistuksiin, ja niiden estävää vaikutusta vasopressiinin ja oksitosiinin indusoimiin kohdunsupistuksiin on tutkittu rotalla.
Merkityksellistä on myös se, että uudet johdannaiset estävät myös kohdun spontaaneja supistuksia.
Uusilla vasotosiini-johdannaisilla on seuraava kaava:
Mpa-A - Ile- B - Asn - Cys - Pro - C - Gly-NH
1 | 2 3 4 5 61 7 8 9 missä
Mpa on 3-merkaptopropionyylitähde (-S-CH2-CH2-CO-); A on L- tai D-tyrosiini-O-etyylieetterin (L- tai D-Tyr(Et): :n), tai D-tyrosiinin (D-Tyr) tai D-tryptofäänin (D-Trp) peptiditähde;
Ile on isoleusiinin peptiditähde; B on glutamiinin (Gin), treoniinin (Thr) tai valiinin (Vai) peptiditähde;
Asn on asparagiinin peptiditähde;
Cys on kysteiinin peptiditähde;
Pro on proliinin peptiditähde; C on L- tai D-arginiinin (Arg), ornitiinin (Orn) tai sitrulliinin (Cit) peptiditähde; ja Gly-NH2 on glysiiniamidin peptiditähde.
Uusilla vasotosiisi-johdannaisilla voi luontaisen hormo- 2 78305 nin tavoin olla L-arginiini asemassa 8, mutta myös D-argi-niini, L-ornitiini tai L-sitrulliini. Samoin kuin luontaisella vasotosiinilla, voi uusilla yhdisteillä olla asemassa 4 glutamiinin peptiditähde tai treoniinin tai valiinin pep-tiditähde. Käsiteltävänä olevissa yhdisteissä on vasotosii-nin asemassa l olevan kysteiiinin deaminointi merkitty 3-merkaptopropionyyliryhmällä (tai dNI^)·
Ominaisuus non-transdusoivana agonistina perustunee luontaisen hormonin asemassa 2 olevan aminohapon muuntamiseen, jolla samoin kuin muilla aivolisäkkeen takalohkon hormoneilla otaksutaan olevan suuri vaikutus biologiseen aktiivisuuteen. Jos tässä asemassa muutetaan normaalin amianohapon sivuketjua, ei reseptori hyväksy molekyyliä agonistiksi. Siksi on luontaisessa vasotosiinisa oleva tyrosiini joko O-alky-loitu tai on käytetty sen D-konfiguraatiota (tai käytetty molempia muutoksia). Yllä olevasta selityksestä ilmenee, että tähän 2-asemaan voidaan liittää myös muita hydrofobisia D-aminohappoja. Esimerkkinä näistä muista hydrofobisista aminohapoista on kokeellisessa osassa käytetty tryptofaania.
Vasotosiini-hormoni eroaa oksitosiini-hormonista vain asemassa 8 olevan aminohapon suhteen. Oksitosiinissa on leu-siini asemassa 8 ja vasotosiinissa on arginiini asemassa 8. Monista tunnetuista oksitosiinijohdannaisista, joilla on antagonistinen vaikutus oksitosiinin aikaansaamiin kohdunsu-pistuksiin, on l-desamino-(2-0-etyylitryrosiini)-oksitosiini (tässä Antocin) US-patenttimme n:o 4,402,942 mukaan se yhdiste, joka on lähimpänä kyseessä olevia uusia vasotosiini-johdannaisia.
Tähän asti tunnettuja lääkkeitä, jotka pystyvät vastustamaan kohdun voimakkaat lihassupistukset, ovat β-resepto-ri-agonistit, prostaglandiinisynteesi-estäjät, kalsiumanta- 3 78305 gonistit ja etanoli. Näiden aineiden vaikutukset eivät ole spesifisiä ja ne aiheuttavat siten sivuvaikutuksia.
Kyseessä olevilla vasotosiini-johdannaisilla on merkittävä kliininen merkitys synnytyksissä ja kuukautisten 5 yhteydessä esiintyviin liian aikaisiin supistuksiin tai voimakkaisiin kouristustiloihin kohdussa (partus prematurus, dyssmenorrhea). Myös Antocinilla on ilmoitettu olevan nämä ominaisuudet, mutta kyseessä olevalla ryhmällä vasotosiini-johdannaisia on Antocin'iin nähden se etu, että ne ovat kah-10 desta aina noin kahdeksaantoista kertaan vaikuttavampia kuin Antocin (in vivo-kokeissa rotan kohdulla). Tästä seuraa, että kyseessä olevia vasotosiinijohdannaisia tarvitaan vain puolet - noin 1/18 Antocin'iin määrästä aikaansaamaan sama vaikutus, mikä tekee kyseessä olevat vasotosiini-joh-15 dannaiset potentiaalisesti hyvin edullisiksi lääketieteelliseltä ja myös taloudelliselta kannalta.
Keksinnön tunnusmerkit ilmenevät jäljenp^nä seuraavis-ta patenttivaatimuksista.
Keksinnön mukaisia vasotosiini-johdannaisia voidaan 20 käyttää farmaseuttisten valmisteiden muodossa, joissa on myös farmaseuttisesti hyväksyttäviä lisäaineita ja/tai lai-mentimia. Sopivimmin annetaan vasotosiini-johdannaiset liuotettuina fysiologiseen suolaliuokseen injektiona, infuusio-na tai intranasaalisesti.
25 Keksinnön mukaisia vasotosiini-johdannaisia voidaan valmistaa yhdenmukaisesti peptidikemiasta hyvin tunnettujen menetelmien kanssa.
Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa tavanomaiseen tapaan esimerkiksi kytkemällä aminohappoja toisiin-30 sa vaiheittain nestefaasissa, esim. siten kun on kuvattu seuraavissa julkaisuissa Law, H.B. & Du Vigneaud, V., Journal of the American Chemical Society (J2, (1960) 4579-4581 ; Zhuze, A.L. Jöst, K., Kasaflrek, E. & Rudinger, J., Collection of Czechoslovak Chemical Communications 2j), (1963), 35 2648-2662, ja modifioituna seuraavan julkaisun mukaisesti
Larsson, L.-E., Lindeberg, G., Melin, P. & PliMka, V., 4 78305
Journal of Medicinal Chemistry 2_1_, (1978), 352-356. Aminohappojen kytkeminen toisiinsa, missä syntyy nk. peptidi-sidoksia, voidaan myös suorittaa aloittaen kiinteästä faasista (tavallisesti hartsista) johon kytketään ensimmäisen 5 aminohapon C-pää, jonka jälkeen seuraavan aminohapon C-pää kytketään ensimmäisen aminohapon N-päähän jne. Lopuksi vapautetaan valmiiksi rakennettu peptidi kiinteästä faasista. Alla olevassa esimerkissä on tätä nk. kiinteäfaasitekniik-kaa käytetty hyväksi kuten seuraavissa julkaisuissa on ku-10 vattu: Merrifield, R.B., J. Am. Chem. Soc. (1963) 8!5, 2149
Merrifield, R.B., Biochemistry (1964), 3^, 1385 ja König, W., Geiger, R., Chem. Ber. (1970), 103, 788.
Synteesissä on käytetty 1 % ristisidottua polystyree-nihartsia (BioRac^S-XI), jonka kloorimetyyliaktiivisuus oli 15 1,2 mekv/g. Tämän hartsin annettiin kytkeytyä DMFtssä (di- metyyliformamidi) olevan BocGly:n kanssa KF:n (kaliumfluo-ridi) toimiessa katalysaattorina (Horiki, K. et ai, Chemistry Letters, (1978), 165-168) jolloin muodostui BocGly-O-hartsia, jonka kloorimetyyliaktiivisuus oli noin 1 mekv/g.
20 Tämä tuote oli kaikkien seuraavien synteesien lähtö aineena. Synteesit kuvataan alla olevissa esimerkeissä. Kaikilla käytetyillä aminohapoilla oli L-konfiguraatio, ellei erityisesti muuta mainita.
Esimerkki 1: 25 1-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-fenyyljalaniini-8-ornitiini-vasotosiini (x=H, A=Tyr(Et); B=Gln; C=Orn)
BocGly-hartsi (3,0 g, 3 mekv) pantiin reaktioastiaan, joka kuului Vega mallia 50 olevaan puoliautomaattiseen pep-30 tidisynteesilaitteeseen. Peptidi rakennettiin vaiheittain hartsiin seuraten taulukoissa 1 ja 2 esitettyä kaaviota. Aminohapon aktivointi suoritettiin liuottamalla 10 mekv sopivasti suojattua aminohappoa, 15 mekv hydroksibentsotri-atsolia ja 10 mekv disykloheksyylikarbodi-imidiä DMF:ssä 35 (70 ml), minkä jälkeen seos sai seistä huoneenlämmössä 1 h
II
5 78305 (asparagiini ja glutamiini aktivoitiin 0°C:ssa 15 min), minkä jälkeen sakka suodatettiin pois ja suodos käsiteltiin kuten aktivoitu aminohappo taulukossa 1 (vaihe 7). Kytkentä-vaiheen päättyminen tarkistettiin Kaiser'in menetelmällä 5 ((Anal. Biochem. 3£, 595 (1970)) sen jälkeen kun prosessi-sykli oli lopetettu (vaihe 9). Jos koe oli positiivinen (kytkentäsaanto alhaisempi kuin 99 %) toistettiin sykli alkaen vaiheesta 7. Jos koe oli negatiivinen suoritettiin terminointimenetelmä niin kuin taulukossa 2 esitetään.
10 Kun koko sekvenssi oli kytketty asetettiin hartsi suodattimelle ja se pestiin useita kertoja metanolilla. Kuivattu tuote asetettiin lasiastiaan ja jäähdytettiin etanoli-kuiva jäähauteessa sekä suspendoitiin metanoliin (noin 100 ml). Seos kyllästettiin sitten natriumilla kuivatulla ammoniakil-15 la noin 50% väkevyyden aikaansaamiseksi. Tämän jälkeen asetettiin astia teräspommiin ja jätettiin huoneenlämpötilaan 2 vuorokauden ajaksi. Paineen päästön jälkeen tuote suodatettiin ja jäännös uutettiin kuumalla (n. 100°C) DMF:llä (2 x 100 ml). Suodos ja uutteet yhdistettiin ja haihdutettiin.
20 Jäännös liuotettiin pieneen määrään kumaa DMF ja metanolia lisättiin samennukseen asti. Muodostunut sakka kerättiin suodattaen ja pestiin suodattimena metanolilla. Tyhjössä suoritetun kuivauksen jälkeen tarkastettiin puhtaus ohut-levykromatografiällä. Saanto n. 2,8 g.
25 100 mg yllä mainittua suojattua peptidiä pantiin 100 ml:n pyörökolviin ja tämän kautta johdettiin kuivaa typpikaasua n. 15 min. ajan. 50 ml natriumilla kuivattua ammoniakkia tislattiin astiaan ja suojaryhmä poistettiin tuotteesta lisäämällä natriumia kunnes liuoksessa pysyi 30 sininen väri n. 15 s ajan. Natriumylimäärä hävitettiin lisäämällä ammoniumkloridia. Ammoniakki poistettiin typpivir-rassa ja jäännös liuotettiin 1 litraan metanolia. Liuoksen pH säädettiin arvoon n. 4 väkevällä etikkahapolla ja sen jälkeen liuos titrattiin 0,1 mM:sella jodin metanoliliuok-35 sella kunnes saavutettiin ruskehtava väri. Seosta sekoitettiin 10 min ajan huoneen lämmössä 3 g:n kanssa Dowex 50 x 2 6 78305 ioninvaihdinta, joka oli kloridimuodossa. Ioninvaihdin poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 3 ml:aan 20%:sta etikkahappoa ja puhdistettiin kromatografisesti Sephade#G-25:llä käyttäen eluointi-5 aineena 20%:sta etikkahappoa. Lopullinen puhdistus suoritettiin käänteisfaasi-HPLC:llä.
Tuotteen puhtaus määritettiin μ-Bondapakr* C-18 HPLC-pylväällä käyttäen 45 % etanolia ja 55 % 5 mM trifluorietik-kahappoa vedessä. Yllä mainitun pylvään toimitti Water Asso-10 ciates, Inc., Millford, Mass., USA. Tuotteen puhtaus ilmeni myös aminohappoanalyysistä.
Aminohappoanalyysi: Asp: 1,04, Glu: 1,04, Pro: 1,00, Gly: 1,01, Ile: 1,02, Tyr: 0,91, Orn: 0,98.
Käyttäen samoja menetelmiä kuin esimerkissä 1 on ku-15 vattu, syntetisoitiin alla olevissa esimerkeissä mainitut keksinnön mukaiset yhdisteet.
Esimerkki 2: 1-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini-8-arginiini-vasotosiini 20 (A=H, A=D-Tyr(Et); B=Gln; C=Arg);
Aminohappoanalyysi: Asp: 1,00, Glu: 1,01, Pro: 0,98, Gly: 0,95, 1/2 Cys: 1,06, Ile: 1,02, Tyr: 1,00, Arg: 0,98.
Esimerkki 3: 1-3-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-fenyylialaniini-8-25 sitrulliini-vasotosiini (A=Tyr(Et); B=Gln; C=Cit);
Asp: 1,0, Glu: 0,87, Pro: 0,9, Gly: 1,0, Ile: 0,83, Tyr: 0,52, Cit: 0,73, NH3: 3,2 Esimerkki 4: 30 1-3-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-fenyylialaniini-4- valiini-8-arginiinivasotosiini (A=Tyr(Et); B=Val; C=Arg);
Asp: 0,94, Pro: 0,94, Gly: 1,0, Vai: 1,10, Ile: 0,98, Tyr: 0,89, Arg: 1,01, NH3: 2,1 7 78305
Esimerkki 5: 1-3-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-fenyylialaniini-4-treoniini-8-arginiinivasotosiini (A=Tyr(Et); B=Thr; C=Arg); 5 Asp: 0,99, Thr: 0,89, Pro: 1,10, Gly: 1,0, Ile: 0,95,
Tyr: 0,90, Arg: 1,05, NH3: 2,2 Esimerkki 6: 1-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-fenyylialaniini-4-valiini-8-ornitiinivasotosiini 10 (A=Tyr(Et); B=Val; OOrn) ;
Aminohappoanalyysi: Asp: 1,07, Pro: 1,05, Gly: 1,11;
Vai: 0,87, Ile: 0,87, Tyr: 1,02, Orn: 1,02 (Val:ia häiritsee piikki } Cys:n ja Val:n välissä)
Esimerkki 7: 15 1-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini-8- arginiinivasotosiini (A=D-Tyr(Et)? B=Gln; C=Arg);
Aminohappoanalyysi: Asp: 1,00; Glu: 1,01, Pro: 0,98, Gly: 0,95, 1/2 Cys: 1,06, Ile: 1,02, Tyr: 1,00, Arg: 0,98.
20 Esimerkki 8: 1-8-merkaptopropionihappo-2-D-tryptofaani-4-valiini-8-argi- niinivasotosiini (A=D-Trp; B=Val; C=Arg);
Aminohappoanalyysi: Asp: 0,99, Vai:1,01, Pro: 0,94, Gly: 25 1,00, 1/2Cys: 1,95, Ile: 0,80, Arg: 1,03
Esimerkki 9: 1-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini-4-valiini-S-D-arginiinivasotosiini (A=D-Tyr(Et); B=Val; C=D-Arg); 30 Aminohappoanalyysi: Asp: 0,99, Pro: 0,90, Gly: 1,00, Vai: 0,98, Ile: 0,81, Tyr: 0,84, Arg: 1,03.
Esimerkki 10: 1-3-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini- 4-valiini-8-ornitiinivasotosiini 35 (A=D-Tyr(Et); B=Val; C=Orn} 8 78305
Aminohappoanalyysi: Asp: 0,99, Pro: 1,00, Gly: 1,00, 1/2 Cys: 1,00, Val: 0,98, He: 0,80, Tyr: 0,85, Orn: 0,94 Esimerkki 11: 1-3-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini-5 4-treoniini-8-ornitiinivasotosiini (A=D-Tyr(Et); B=Thr; C=Orn)
Aminohappoanalyysi: Asp: 0,92, Thr: 0,93, Pro: 0,94,
Gly: 1,00, 1/2 Cys: 0,92, He: 0,95, Tyr: 0,86, Orn: 1,01 Esimerkki 12: 10 1-g-merkaptopropionihappo-2-D-tryptofaani-4-treoniini-8-D- arginiinivasotosiini (A=D-Trp; B=Thr; C=D-Arg)
Aminohappoanalyysi: Asp: 0,98, Thr: 0,98, Pro: 0,99, Gly: 1,00, 1/2 Cys: 1,08, He: 0,95, Trp: 0,64, Arg: 0,99 15 Esimerkki 13: 1-8-merkaptopropionihappo-2-D-tyrosiini-4-valiini-8-orni- tiini-vasotosiini (A=D-Tyr: B=Val; C=Orn)
Aminohappoanalyysi: Asp: 0,99, Pro: 0,91, Gly: 1,00, 1/2-20 Cys: 1,00, Val: 0,97, He: 0,80, Tyr: 0,95, Orn: 0,98
Alla olevien esimerkkien 14 ja 15 yhdisteitä on valmistettu myös esimerkissä 1 mainitun menetelmän mukaisesti, mutta yhdisteiden aminohappoanalyysiä ei ole suoritettu. Esimerkki 14: 25 1-β-merkaptopropionihappo-2-D-tryptofaani-4-väliini-8-orni- tiini-vasotosiini (A=D-Trp; B=Val; C=Orn)
Esimerkki 15: 1-8-merkaptopropionihappo-2-D-tryptofaani-4-treoniini-8-30 ornitiinivasotosiini (A=D-Trp; B=Thr; C=Orn)
II
9 78305
Taulukko 1
Kiinteäfaasisynteesin kaavio
Vaihe Liuotin/reagenssi Tila- Aika Syklien vuus imin) lukumää-(ml) rä 1 Dikloorimetaan! 70 3 2 2 50% trifluorietikkahappo/ dikloorimetääni 70 15 2 3 Isopropanoli 70 3 2 4 Dikloorimetaani 70 3 2 5 10% Di-isopropyylietyyliamii- ni dikloorimetaanissa 70 3 3 6 Dikloorimetaani 70 3 2 7 Aktivoitu aminohappo 70 120* 1 8 Isopropanoli 70 3 2 9 Dikloorimetaani 70 3 2 * BocAsn ja BocGln 30
Taulukko 2
Terminointimenetelmä
Vaihe Liuotin/reagenssi Tila- Aika Syklien vuus (min) lukumäärä (ml) 1 1M Imidatsoli: 70 dikloorimetaani + etikkahappoanhydridi 7 30 1 2 Isopropanoli 70 3 2 3 Dikloorimetaani 70 3 4
Yllämainituissa esimerkeissä valmistetut yhdisteet säilytettiin pakastekuivattuina kunnes ne käytettiin alla mainittuihin farmakologisiin kokeisiin.
Farmakologiset kokeet 5 Keksinnön yhdisteiden uterotooninen teho tutkittiin eristetyllä rotan kohdulla käyttäen oksitosiinia standardina. Yhdisteiden antagonistiset ominaisuudet määritettiin myös tämän valmisteen avulla. Myös in vivo-kokeita suoritettiin käyttäen oksitosiinia agonistina ja kokeessa saatu-10 ja tuloksia verrattiin Antocin'illa saatuihin tuloksiin.
10 78305
In vitro-koe rotalla
Sprague Dawley rottia (paino n. 250 g) luonnollisessa kiimatilassa valittiin emättimen sivellinvalmisteen perusteella. Kohdunsarven keskiosasta preparoitiin n. 20 mm pit-5 kä leike ja asetettiin elinhauteeseen, jossa oli 10 ml modifioitua Locke'n liuosta, jonka koostumus oli seuraava (mM:NaCl 153, KC1 5,63, CaCl2 0,541 , NaHCC>3 5,95 ja glukoosi 2,78). Liuosta kaasutettiin happikaasulla, jossa oli 5 % C02:a 30°C:ssa. Kohdunsupistuksien annettiin tasaantua 30 10 min ajan. Supistukset rekisteröitiin isometrisesti 1,5 g:n kuormituksella Grass-jännitysanturilla (Ft. 03) avulla. Analogien antagonistinen teho määritettiin niiden pA2~arvoina (Rudinger, J. & Krejci, I. Experientia J_8, (1962), 585-588). pA2 on peptidin estävän vaikutuksen mitta ja Schild (Schild, 15 H.O. British Journal of Pharmacology, 2, (1947), 189-206) määrittelee antagonistin sen molaarisen konsentraation negatiiviseksi logaritmiksi, joka vähentää agonistin annoksen vaikutuksen puoleen. Antagonistien mahdollisia agonistisia vaikutuksia tutkittiin lisäämällä kohtupreparaattihauteeseen 20 eri määriä peptidiä, suurimman konsentraation ollessa 4 yg/ml. Missään tapauksessa ei havaittu agonistivaikutusta.
In vivo kokeet rotalla
Sprague Dawley rottia (250 g) luonnollisessa kiimatilassa nukutettiin Inaktin'illa (0,5 mg/100 g ruumiin pai-25 noa i.p.). Kohtulihaksen aktiivisuus mitattiin katetrilla, joka oli kiinnitetty kohtuonteloon ja täytetty modifioidulla Locke'n liuoksella. Katetri liitettiin Statham P23d paineanturiin ja supistukset rekisteröitiin Grass-polygraafilla (malli 7D). Oksitosiinia ruiskutettiin laskimonsisäisesti 30 (0,05 yg/min/100 g ruumiin painoa). Kun säännölliset supis tukset oli saavutettu johdettiin antagonistia laskimonsisäisesti (0,8-8,0 yg/100 g ruumiin painoa) 0,2 ml:n tilavuudessa. Mitattu käyrä integroitiin 15 min aikana välittömästi ennen antagonistin injisointia ja sen jälkeen. Kohdunsupis-35 tuksien voimakkuuden lisääntymisen estymistä, jonka oksito-
II
11 78305 siini-infuusio oli aiheuttanut, verrattiin Antocin' iin aiheuttamaan estymiseen, jolle annettiin arvo 1.
Taulukko 3
Vasotosiini-johdannaiset, joiden antagonistinen aktiviteetti on määritetty rotan kohdulla in vitro ja in vivo
Esi- Peptidi Ad Vai- Kohtu Kohtu merk- ku- in vit- in vivo ki tuk- ro anta- verrat- n:o set gonistin tuna An- veren- pA~ tocin:iin pai- _neessa___ äNH -2Tyr(Et)-0T <0,2 <0,1 7,2 1 (Antocin) 1 dNH -2Tyr(Et)-8- <1,3 1,4 8,4 5
-Orfi-VT
2 dNH -2-D-Tyr(Et)- 1,0 1,8 8,7 9,4
-8-Arg-VT
3 dNH -2Tyr(Et)-8- 0,4 <0,03 8,5 2
-Cit-VT
4 dNH -2Tyr(Et)-4-Val- 7 0,5 8,5 5
-B-Ärg-VT
5 dNH -2Tyr(Et)-4-Thr- 3,2 13,6 8,0 4 -8-Ärg-Vt 6 dNH-2Tyr(Et)-4- 0,4 0,9 7,6 6,0
-VaI-8-Orn-VT
7 dNH -2Tyr(Et)-8- 37,9 2,5 8,4 2
-Arg-VT
8 dNH -2-D-Trp-4-Val- 0,1 0,12 8,4 11
-B-Arg-VT
9 dNH -2-D-Tyr(Et)- 0,5 0,3 8,6 15
-4-va1-8-D-Arg-VT
10 dNH -2-D-Tyr(Et)- 0,4 0,2 7,9 12,1
-4-Va1-8-Orn-VT
11 dNH -2-D-Tyr(Et)- 2,5 2,4 8,3 4,0
-4-Thr-8-Orn-VT
12 dNH -2-D-Trp-4- 0,1 0,12 8,0 6,3
-Thr-8D-Arg-VT
13 dNH -2-D-Tyr-4- 1,2 0,6 8,2 4,4
-Va1-8-Orn-VT
14 dNH -2-D-Trp-4- 0,03 0,03 7,9 17,9
-Vaf-8-Orn-VT
15 dNH -2-D-Trp-4- 0,1 0,05 8,5 7,8
-Thr-8-0rn-VT
VT = vasotosiini, OT = oksitosiini, au = antiaiureettiset vaikutukset 12 78305
Kaikki tutkitut vasotosiini-johdannaiset, samoin kuin Antocin, aiheuttivat kilpailevan estymisen oksitosiinin vaikutukseen nähden, mikä ilmenee niiden pA2_arvoista yllä-olevassa taulukossa 3. (Tässä yhteydessä voidaan mainita, 5 että eri laboratorioissa saadut pÄ2~arvot eivät ole vertailukelpoisia, johtuen siitä, että koeolosuhteet eivät koskaan ole täysin samanlaiset). Saadut antogonistiarvot pA2 osoittavat, että keksinnön mukaisten johdannaisten arvot ovat korkeampia kuin Antocin'in, ja ne ovat siten vielä 10 tehokkaampia antagonisteja. In vivo-kokeista ilmenee, että keksinnön mukaiset johdannaiset ovat kahdesta aina noin 18 kertaa tehokkaampia antagonisteja kuin Antocin.
Taulukossa 3 luetellut vasotosiini- johdannaiset kykenivät in vivo-kokeissa täydellisesti estämään kohdun supis-15 tukset, ts. ne estivät myös elimen spontaanin lihasaktii- visuuden eikä vain oksitosiinin aikaansaamaa aktiivisuutta. Käytetyt annokset olivat 2 ja 20 yg rottaa kohden.
Yllä olevassa taulukossa on esitetty myös antidiureet-tiset vaikutukset (AD) sekä pressorvaikutukset (ts. vaiku-20 tukset verenpaineeseen) osoittamaan, että saadut arvot useimmissa tapauksissa ovat niin alhaiset, ettei näitä vaikutuksia tarvitse ottaa huomioon kun keksinnön mukaisia vasotosiini- johdannaisia annetaan estämään kohdunsupistuksia. Merkityksellistä on myös, ettei millään vasotosiini-johdan-25 naisella ollut agonisti-vaikutusta rotankohtupreparaattiko-keessa in vitro. Näin ollen voidaan odottaa, että johdannaiset eivät tule aiheuttamaan sivuvaikutuksia.
Esimerkki farmaseuttisen seoksen valmistuksesta 0,5 mg vasotosiini-johdannaista ja 5 mg mannitolia liuo-30 tetaan tislattuun veteen. Liuos kaadetaan ampulliin, joka suljetaan ja pakastekuivataan. Ampullin sisältö varastoidaan pakastekuivattuna ja se voidaan tarvittaessa laimentaa isotonisella suolaliuoksella sopivaan antoväkevyyteen.
Claims (4)
1. Menetelmä vasotosiini-johdannaisen valmistamiseksi, jonka kaava on Mpa-A - Ile- B - Asn - Cys - Pro - C - Gly-NH 1 | 2 3 4 5 61 7 8 9 missä Mpa on 3-merkaptopropionyylitähde (-S-CH2-CH2-CO-); A on L- tai D-tyrosiini-O-etyylieetterin (L- tai D-Tyr(Et): :n), tai D-tyrosiinin (D-Tyr) tai D-tryptofaanin (D-Trp) peptiditähde; Ile on isoleusiinin peptiditähde; B on glutamiinin (Gin), treoniinin (Thr) tai valiinin (Vai) peptiditähde; Asn on asparagiinin peptiditähde; Cys on kysteiinin peptiditähde; Pro on proliinin peptiditähde; C on L- tai D-arginiinin (Arg), ornitiinin (Orn) tai sitrulliinin (Cit) peptiditähde; ja Gly-NH2 on glysiiniamidin peptiditähde, tunnettu siitä, että johdannaiseen sisältyvä aminohapposekvenssi rakennetaan sinänsä tunnetulla tavalla vaiheittain kytkemällä yksi aminohappo seuraavaan amidisidosten muodostamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä varsotosii-ni-johdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan l-8-merkaptopropionihappo-2-(4-etoksi)-D-fenyylialaniini-4-treoniini-8-ornitiini-vasotosiini.
3. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä varsotosii-ni-johdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että valmistetaan l-8-merkaptopropionihappo-2-D-tyrosiini- 4-valiini-8-ornitiini-vasotosiini.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä varsotosii-ni-johdannaisen valmistamiseksi, tunnettu siitä, U 78305 että valmistetaan l-3-merkaptopropionihappo-2-D-tryptofaani- 4-valiini-8-ornitiini-vasotosiini.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8207277 | 1982-12-21 | ||
| SE8207277A SE8207277L (sv) | 1982-12-21 | 1982-12-21 | Vasotocin-derivat |
| SE8302505 | 1983-05-03 | ||
| SE8302505A SE8302505L (sv) | 1982-12-21 | 1983-05-03 | Vasotocin-derivat |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI834634A0 FI834634A0 (fi) | 1983-12-16 |
| FI834634A FI834634A (fi) | 1984-06-22 |
| FI78305B FI78305B (fi) | 1989-03-31 |
| FI78305C true FI78305C (fi) | 1989-07-10 |
Family
ID=26658329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI834634A FI78305C (fi) | 1982-12-21 | 1983-12-16 | Foerfarande foer framstaellning av vasotocin-derivat. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4504469A (fi) |
| EP (1) | EP0112809B1 (fi) |
| AT (1) | ATE20072T1 (fi) |
| AU (1) | AU564255B2 (fi) |
| CA (1) | CA1216843A (fi) |
| DE (2) | DE10075020I2 (fi) |
| DK (1) | DK163186C (fi) |
| ES (1) | ES8607990A1 (fi) |
| FI (1) | FI78305C (fi) |
| IL (1) | IL70498A (fi) |
| NL (1) | NL300012I2 (fi) |
| NO (1) | NO160144C (fi) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4599324A (en) * | 1984-11-21 | 1986-07-08 | Smithkline Beckman Corporation | V1-vasopressin antagonists |
| US4711877A (en) * | 1985-09-18 | 1987-12-08 | Smithkline Beckman Corporation | 6-pen-vasopressin compounds |
| FR2597483B1 (fr) * | 1986-04-18 | 1993-09-10 | Flork Michel | Nouveaux peptides diuretiques et natriuretiques. |
| US5055448A (en) * | 1987-06-25 | 1991-10-08 | Medical College Of Ohio | Linear derivatives of arginine vasopressin antagonists |
| AT398766B (de) * | 1988-05-26 | 1995-01-25 | Gebro Broschek Gmbh | Verfahren zur intramolekularen oxidation von zwei -sh gruppen in einer peptidverbindung zu einer disulfidbrücke |
| ATE113606T1 (de) * | 1989-04-15 | 1994-11-15 | Nippon Chemiphar Co | Peptide und diese peptide enthaltende wirkstoffe gegen dementia. |
| US5225528A (en) * | 1990-02-27 | 1993-07-06 | Merck & Co., Inc. | Cyclic hexapeptide oxytocin antagonists |
| SE9002384D0 (sv) * | 1990-07-09 | 1990-07-09 | Ferring Ab | Derivat av baklobshormoner |
| US20030166147A1 (en) * | 2001-12-14 | 2003-09-04 | Lee Chichang | Clonal myeloma cell lines useful for manufacturing proteins in chemically defined media |
| US20040152170A1 (en) * | 2001-12-14 | 2004-08-05 | Lee Chichang | Clonal myeloma cell lines useful for manufacturing proteins in chemically defined media |
| WO2003052064A2 (en) * | 2001-12-14 | 2003-06-26 | Centocor Inc. | Clonal myeloma cell lines useful for manufacturing proteins in chemically defined media |
| EP1555029A1 (en) | 2004-01-19 | 2005-07-20 | Ferring B.V. | Use of substances having oxytocin antagonistic properties for the preparation of a medicament for treating hypertension |
| US8030446B2 (en) * | 2006-02-10 | 2011-10-04 | Trustees Of Dartmouth College | Mutant proline-and-arginine rich peptides and methods for using the same |
| CN101357937B (zh) * | 2007-07-31 | 2012-11-07 | 上海苏豪逸明制药有限公司 | 固相多肽合成阿托西般的制备方法 |
| CN102127146B (zh) * | 2010-12-24 | 2013-04-24 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备醋酸阿托西班的方法 |
| CN102584953B (zh) * | 2012-02-09 | 2014-01-01 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种阿托西班的纯化方法 |
| LT3397622T (lt) | 2016-01-04 | 2022-06-27 | ObsEva S.A. | Hidroksipropiltiazolidino karboksamido darinio alfa-amino esterio ir tokolitinio agento įvedimas kartu |
| WO2018015497A2 (en) | 2016-07-21 | 2018-01-25 | ObsEva S.A. | Oxytocin antagonist dosing regimens for promoting embryo implantation and preventing miscarriage |
| CN114667141A (zh) | 2019-09-03 | 2022-06-24 | 奥布赛瓦股份公司 | 用于促进胚胎移植和预防流产的催产素拮抗剂给药方案 |
| US20230102503A1 (en) | 2020-02-10 | 2023-03-30 | ObsEva S.A. | Biomarkers for oxytocin receptor antagonist therapy |
| CN116723838A (zh) | 2020-11-16 | 2023-09-08 | 艾克索玛(美国)有限责任公司 | 用于治疗或预防早产的组合物和方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL130081C (fi) * | 1963-04-05 | |||
| NL129421C (fi) * | 1963-08-30 | 1900-01-01 | ||
| CH442342A (de) * | 1964-07-17 | 1967-08-31 | Sandoz Ag | Verfahren zur Herstellung eines neuen Polypeptids |
| CH495957A (de) * | 1966-09-15 | 1970-09-15 | Ceskoslovenska Akademie Ved | Verfahren zur Herstellung eines antidiuretisch wirksamen Polypeptids |
| ZA733419B (en) * | 1972-07-04 | 1974-03-27 | Hoffmann La Roche | Nonapeptides and process for the preparation thereof |
| US4081533A (en) * | 1976-09-01 | 1978-03-28 | Regents Of The University Of California | Method of reducing mammalian fertility and drugs therefor |
| US4163011A (en) * | 1978-08-28 | 1979-07-31 | Orts Richard J | Peptide compounds and compositions |
| SE430885B (sv) * | 1980-03-24 | 1983-12-19 | Ferring Ab | Oxytocin-derivat |
| US4367225A (en) * | 1981-03-24 | 1983-01-04 | The Medical College Of Ohio | Novel antagonists of the antidiuretic and/or vasopressor action of arginine vasopressin |
-
1983
- 1983-12-15 DE DE2000175020 patent/DE10075020I2/de active Active
- 1983-12-15 DE DE8383850335T patent/DE3363830D1/de not_active Expired
- 1983-12-15 US US06/561,920 patent/US4504469A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-12-15 EP EP83850335A patent/EP0112809B1/en not_active Expired
- 1983-12-15 AT AT83850335T patent/ATE20072T1/de active
- 1983-12-16 CA CA000443490A patent/CA1216843A/en not_active Expired
- 1983-12-16 FI FI834634A patent/FI78305C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-12-19 NO NO834691A patent/NO160144C/no unknown
- 1983-12-20 DK DK586783A patent/DK163186C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-12-20 IL IL70498A patent/IL70498A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-12-20 AU AU22577/83A patent/AU564255B2/en not_active Expired
- 1983-12-20 ES ES528211A patent/ES8607990A1/es not_active Expired
-
2000
- 2000-07-13 NL NL300012C patent/NL300012I2/nl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE20072T1 (de) | 1986-06-15 |
| IL70498A (en) | 1987-09-16 |
| ES8607990A1 (es) | 1986-06-01 |
| FI78305B (fi) | 1989-03-31 |
| ES528211A0 (es) | 1986-06-01 |
| IL70498A0 (en) | 1984-03-30 |
| NL300012I2 (nl) | 2001-02-01 |
| US4504469A (en) | 1985-03-12 |
| DK163186C (da) | 1992-06-22 |
| FI834634A0 (fi) | 1983-12-16 |
| FI834634A (fi) | 1984-06-22 |
| DE10075020I2 (de) | 2003-01-09 |
| CA1216843A (en) | 1987-01-20 |
| EP0112809A1 (en) | 1984-07-04 |
| NO160144B (no) | 1988-12-05 |
| NO834691L (no) | 1984-06-22 |
| DK163186B (da) | 1992-02-03 |
| EP0112809B1 (en) | 1986-05-28 |
| AU2257783A (en) | 1984-06-28 |
| NO160144C (no) | 1989-03-15 |
| DE10075020I1 (de) | 2000-09-21 |
| DK586783A (da) | 1984-06-22 |
| DK586783D0 (da) | 1983-12-20 |
| DE3363830D1 (en) | 1986-07-03 |
| NL300012I1 (nl) | 2000-10-02 |
| AU564255B2 (en) | 1987-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI78305C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av vasotocin-derivat. | |
| RU2180668C2 (ru) | Гептапептидные аналоги окситоцина | |
| FI56676C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya amidderivat av nonapeptid som befraemjar loesgoerandet av aeggceller | |
| FI104252B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien kemialliseksi syntetisoimiseksi kiinteässä faasissa | |
| JPH0219397A (ja) | アルギニンバソプレシン拮抗剤の新規線形誘導体類 | |
| US4604378A (en) | Basic V1 -vasopressin antagonists | |
| US4481193A (en) | Des-proline vasopressin antagonists | |
| US4481194A (en) | Des-proline-des-glycine vasopressin antagonists | |
| FI95913B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen syklisen neurokiniini A -peptidin valmistamiseksi | |
| US4684622A (en) | Compositions and methods for producing vasodilation and antioxytocic activity | |
| US4599324A (en) | V1-vasopressin antagonists | |
| US4597901A (en) | β-indolylalanyl or β-indolylglycinyl vasopressin antagonists | |
| CA2076749C (en) | Vasoactive vasotocin derivatives | |
| HU199881B (en) | Process for producing new basic peptides with vasopressin antagonist effect | |
| EP1261626A1 (en) | Bombesin analogs for treatment of cancer | |
| IE912378A1 (en) | Derivatives of pituitary posterior lobe hormones | |
| US4684621A (en) | Methods of producing vasodilation or antioxytocic activity | |
| US4719199A (en) | Diuretic compositions and methods of producing diuresis | |
| JPH0364516B2 (fi) | ||
| US4684716A (en) | Polypeptide intermediates | |
| US5470948A (en) | Vasopressin and vasotocin derivatives | |
| US4826813A (en) | 4'-Methyl-β-mercapto-β,β-cyclopentamethylenepropionic acid vasopressin antagonists | |
| JPH03500409A (ja) | 血管作動性ペプチド | |
| US4658015A (en) | Polypeptide intermediates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: FERRING AB |