FI75834C - Foerfarande foer framstaellning av antracyklinglykosidfoereningar. - Google Patents

Description

75834

MENETELMÄ ANTRASYKLIINIGLYKOSIDIYHDISTEIDEN VALMISTAMISEKSI -FÖRFARANDE FÖR FRAMSTÄLLNING AV ANTRACYKLINGLYKOSIDFÖRENINGAR

Keksintö koskee analogiamenetelmää terapeuttisesti vaikuttavien antrasykliiniglykosidiyhdisteiden valmistamiseksi.

Keksintö tarjoaa menetelmän yleisen kaavan I tai yleisen kaavan II mukaisten antrasykliiniglykosidien valmistamiseksi 1 1 Coen n I I .

R, O OH · J' R JL ί 2 · "j ° O· i (X) OH <„) joissa R^ on vetyatomi tai hydroks i ryhmä ja R^ on vetyatomi tai metoksiryhmä. Menetelmässä kondensoidaan alla olevan kaavan III mukainen antrasyklinoni, jossa R on vetyatomi tai tert.-butyyli-difenyy1isiloksiryhmä ja R2 edellä määritelty, alla olevan kaavan IV mukaisen 3,4-di-0-asetyyli-2,6-dideok-si-(X-L-arabino-heksopyranosyyli- kloridin kanssa ja poistetaan asetyylisuojaryhmä(t) ja tarvittaessa poistetaan myös tert.-butyyli-difenyylisilyylisuojaryhmä näin saaduista kaavojen V ja VI mukaisista antrasykliiniglykosideista, joissa Rl ja R2 ovat ede11ämääriteltyjä. Menetelmää valaistaan seu-raavalla reaktiokaaviolla: 2 75834

O · OH

rj^xVjC"2’1. ’Hgf.(ivi I II I ' OOCCH, Ä2 O OH OH 3 j

^*2 OH J Rj O OH I

'“Id -1Ö (v) (VI) OOCCH3 suojauksen suojauksen poisto poisto (I) (m Lähtöaineena käytetyistä antrasyklinoneista III ovat ennestään tunnettuja yhdisteitä daunomysinoni (III, RfH, R2=CH30; jäljempänä käytetään merkintää Ula) ja 4-demetok-si-daunomysinoni (III, P]=R2=H; jäljempänä käytetään merkintää Illb) ja uusia yhdisteitä 14-0-(tert.-butyyli-dife-nyyli-silyyli)-adriamysinoni (III, R=tert.-butyyli-difenyy-li-siloksi, R^CH^O; jäljempänä käytetään merkintää IIIc) ja 14-0-(tert.-butyyli-difenyyli-silyyli)-4-demetoksi-ad-riamysinoni (III, Rftert.-butyyli-difenyyli-siloksi, R2=H; jäljempänä käytetään merkintää Illd). Kaavojen IIIc ja Illd mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kondensoimalla ennestään tunnetut yhdisteet adriamysinoni ja 4-demetoksi-adriamysinoni tert.-butyyli-difenyyli-kloorisilaanin kanssa liuottimessa, kuten vedettömässä dimetyyliformamidissa, orgaanisen emäksen, kuten imidatsolin, läsnäollessa. Tert.-

Il 3 75834 butyyli-difenyyli-silyyli-suojaryhmä on sikäli edullinen, että se pysyy muuttumattomana koko kondensoinnin ja ase-tyylisuojaryhmän(ien) poiston ajan ja lohkeaa helposti, kun käsitellään tetra-n-butyyliammoniumfluoridilla. Toinen lähtöaine, joka on suojattu kloorisokeri, on myös ennes-rään tunnettu yhdiste (H.S. El Khadem et ai., Carbohydr.

Res. 58, 1977, 230).

Kondensointi voidaan suorittaa modifioiduissa Koenigs-Knorr-reaktio-olosuhteissa liuottamalla antrasyklinoni III liuottimeen, kuten dikloorimetaaniin, ja saattamalla se reagoimaan kloorisokerin IV kanssa heterogeenisessa faasissa käyttämällä katalyyttinä elohopea(2)bromidia tai elohopea (2)oksidia tai homogeenisessa faasissa käyttämällä katalyyttinä hopeatrifluorimetaanisulfonaattia. Näin saadaan kaavojen V ja VI mukaisten antrasykliiniglykosidien seos. Tarkemmin sanottuna, käytettäessä antrasyklinonia lila saadaan antrasykliiniglykosidien V, RfH, R^CH^O (jäljempänä käytetään merkintää Va) ja VI, RfH, R^CH^O (jäljempänä käytetään merkintää Via) seos; käytettäessä antrasyklinonia Illb saadaan antrasykliiniglykosidien V, RfR2=H (käytetään jäljempänä merkintää Vb) ja VI, RfR2=H (käytetään jäljempänä merkintää VIb) seos; käyttämällä antrasyklinonia IIIc saadaan antrasykliiniglykosidien V, Rf tert.-butyyli-difenyyli-siloksi, R2=CH^O (käytetään jäljempänä merkintää Vc) ja VI, Rftert.-butyyli-difenyyli-siloksi, R2=CH20 (käytetään jäljempänä merkintää Vie) seos; ja käyttämällä antrasyklinonia Illd saadaan antrasykliiniglykosidien V, Rj= tert.-butyyli-difenyyli-siloksi, R2=H (käytetään jäljempänä merkintää Vd) ja VI, Rftert.-butyyli-difenyyli-siloksi, R2= H (käytetään jäljempänä merkintää Vld) seos.

Antrasykliiniglykosidiseokset Va ja Via, Vb ja VIb,

Vc ja Vie ja Vd ja Vld voidaan erottaa vastaaviin komponent-tehinsa fraktionaalisella kiteytyksellä tai kromatografisilla menetelmillä. Kun asetyylisuojaryhmä(t) poistetaan käsittelemällä katalyyttisellä määrällä natriummetoksidia metanolissa tai natriumhydroksidin vesiliuoksella, saadaan 4 75834 yhdisteistä Va, Vb, Via ja VIb vastaavasti antrasykliini-glykosidit 7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyranosyy-li)-daunomysinoni (I, R^=H, R2=CH.jO; käytetään jäljempänä merkintää Ia), 4-demetoksi-7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyraosyyli)-daunomysinoni (I, R.j=R2=H; käytetään jäljempänä nimitystä Ib), 7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-daunomysinoni (II, R^=H, R2=CH.jO; käytetään jäljempänä merkintää Ha) ja 4-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-daunomysinoni (II, R^=R2=H; käytetään jäljempänä merkintää Ilb) .

Kun poistetaan asetyylisuojaryhmä(t) edelläkuvatulla tavalla ja sen jälkeen poistetaan tert.-butyyli-difenyyli-silyylisuojaryhmä käsitteltmällä tetra-n-butyyli-ammonium-fluoridilla tetrahydrofuraanissa saadaan yhdisteistä Vc, Vd, Vie ja VId vastaavasti antrasykliiniglykosidit 7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyranosyyli)-adriamysinoni (I, R^=0H, R2-CK^0; käytetään jäljempänä merkintää Ie); 4-demetoksi-7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyranosyyli)-adriamysinoni (I, R^OH, R2=H; käytetään jäljempänä merkintää Id), 7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-enopyrano-=yyli)-adriamysinoni (II, R^=0H, R^CH^O; käytetään jäljempänä merkintää Ile) ja 4-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi-tr-L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-adriamysinoni (II, R^ = CH, R2=H; käytetään jäljempänä merkintää Ild).

Kaavojen Ia ja Ie mukaiset yhdisteet ovat tunnettuja yhdisteitä, joita on selostettu brittiläisessä patenttihakemuksessamme no. 8128252. Muut antrasykliiniglykosidit I ja II eli yhdisteet Ib, Id, Ha, Ilb, Ile ja Ild ovat uusia yhdisteitä ja kuuluvat tämän keksinnön kattamaan alaan. Kuten yhdisteillä Ia ja Ie on myös näillä ominaisuuksia, jotka ovat hyödyllisiä eräiden kasvainten hoidossa eläimillä ja näin ollen tämä keksintö tarjoaa myös farmaseuttisen seoksen, jossa on antrasykliiniglykosidia Ib,

Id, Ha, Ilb, Ile tai Ild sekoitettuna farmaseuttisesti hyväksyttävään laimennus- tai kanto-aineeseen.

tl 5 75834

Seuraavista esimerksitä numerot 3-6 edustavat keksintöä ja numerot 1 ja 2 eräiden lähtöaineiden valmistusta.

Esimerkki 1 14-0-(tert.-butyyli-difenyyli-silyyli)-adriamysinonin (IIIc) valmistus

Liuokseen, jossa oli 0,414 g adriamysinonia 20 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia, lisättiin 0,28 ml tert.-butyyli-difenyyli-kloori-silaania ja 0,15 g imidatsolia. Reaktioseos jätettiin seisomaan yön ajaksi huoneenlämpö-tilaan ja sen jälkeen lisättiin 200 ml vettä ja liuos uutettiin metyleenikloridilla. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Sitten jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelin avulla käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti-tolueeniseosta (1:2 tilavuusosina). Puhtaan yhdisteen IIIc (0,46 g) sulamispiste on 208-209°C, FD-MS: m/z 652 (M+‘).

PMR (CDC13): mm. 1,14 δ(s, ((¾) 3~C) , 3,98 δ(s, CH30) ]a 4,89 (s, CH2-Si-).

Esimerkki 2 4-demetoksi-14-0-(tert.-butyyli-difenyyli-silyyli)-adriamysinonin (Illd) valmistus

Liuokseen, jossa oli 0,385 g 4-demetoksiadriamysinonia 15 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia, lisättiin 0,3 ml tert.-butyyli-difenyyli-kloori-silaania ja 0,15 g imidatsolia. Reaktioseos jätettiin 4 tunniksi huoneenlämpötilaan, sen jälkeen lisättiin 200 ml vettä ja liuos uutettiin me-tyleenidiklorid.illa. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Sitten jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelin avulla käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (95:5 tilavuusosina).

6 75834

Puhtaan yhdisteen Illd (0,6 g) sulamispiste on 101-102°C. FD-MS: m/z 622 (M+*).

PMR (CDC13): mm. 1,13 6(s, (CH.^, 3,416 (d, OH-C-7), 4,87 δ(s, CH2-Si-), 5,24 δ(m, C-H-7).

Esimerkki 3 7-0-(2,6-dideoksi-cx-L-arabinoheksopyranosyyli)-daunomysi-nonin (Ia) ja 7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-eno-pyranosyyli-daunomysinonin (Ha) valmistus

Liuokseen, jossa oli 2 g daunomysinonia (lila) 200 ml:ssa vedetöntä metyleenidikloridia, lisättiin 1,25 g 3,4-di-0-asetyyli-2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyrano-syylikloridia (IV) liuotettuna 30 ml:aan metyleenidikloridia molekyyliseulan (12 g, 4A Merck) läsnäollessa. Saatuun seokseen lisättiin 1,28 g hopeatrifluorimetaanisulfo-naattia liuotettuna 30 ml:aan vedetöntä dietyylieetteriä.

5 minuutin kuluttua reaktioseos neutraloitiin 0,65 ml:11a vedetöntä kollidiinia. Seosta pidettiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa ja sen jälkeen orgaaninen liuos pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, vedellä, 0,1 N kloorivetyhapon vesiliuoksella ja lopuksi vedellä. Orgaaninen faasi erotettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti pii-happopylväässä käyttämällä eluenttina etyyliasetaatti-syklo-heksaaniseosta(1:1 tilavuusosina). Näin saatiin erikseen 0,9 g tuotetta Va, sp. 117-118°, PMR (CDC13): mm. 1,23 f (d,CH3-C-5 ') , 1 ,95 6 (s, CH-jCOOC) , 2,07 6 (s, CH^COOC) , 2,4 3 δ(s, CH3CO) , 5,20 (CH -7) ja 5,5 3 δ(CH-1 ') , ja 0,9 g tuotetta Via, sp. 83-84°.

Tuote Va (0,7 g) liuotettiin asetoniin (45 ml) ja käsiteltiin 50 ml:11a natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta huoneenlämpötilassa. Tunnin kuluttua liuoksen pH säädettiin arvoon 7 ja uutettiin kloroformilla. Kun orgaaninen liuotin haihdutettiin vakuumissa, saatiin puhdas yhdiste Ia kvantitatiivisella saannolla: sp. 161-162°C,

II

7 75834 FD-MS: m/z 528 (M+*). Vastaavasti saatiin yhdisteestä Via emäskäsittelyllä edellämainituissa olosuhteissa puhdas yhdiste Ha: sp. 181-182°C, FD-MS: m/z 510 (M+‘).

PMR (CDC13): mm. 1,40 ö(d, ΟΗ^-Ο-δ'), 2,42 6(s, CH3CO), 5,33 6(CH-7), 5,58 6(CH-1') ja 5,5-6,0 δ (m, CH-2'), CH-3’).

Esimerkki 4 4-demetoksi-7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyra-nosyyli)-daunomysinonin (Ib) ja 4-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-daunomysinonin (Hb) valmistus

Liuokseen, jossa oli 0,74 g 4-demetoksi-daunomysi-nonia (Illb) vedettömässä metyleenidikloridissa (70 ml), lisättiin 0,65 g halogeenisokeria IV 10 ml:ssa metyleeni-kloridia molekyyliseulan (5 g, 4A Merck) läsnäollessa. Seokseen lisättiin liuos, jossa oli 0,64 g hopeatrifluori-metaanisulfonaattia 15 ml:ssa vedetöntä dietyylieetteriä.

5 minuutin kuluttua reaktioseos neutraloitiin 0,4 ml:11a vedetöntä kollidiinia. Saatua orgaanista liuotinta pidet-riin 1 tunti huoneenlämpötilassa ja sen jälkeen se pestiin r.airiumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella, vedellä, kloorivetyhapon 0,1 N vesiliuoksella ja lopuksi vedellä. Orgaaninen faasi erotettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Saatu jäännös puhdistettiin kromatografisesta piihappopylväässä käyttämällä eluenttina kloro-formi-asetoniseosta (96:4 tilavuusosina). Näin saatiin 0,48 g tuotetta Vb; sp. 65-66°C. FD-MS: m/z 582 (M+‘), ja 0,45 g tuotetta VIb. Yhdiste Vb liuotettiin 20 ml:aan asetonia ja lisättiin 20 ml natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta huoneenlämpötilassa. 1 tunnin kuluttua liuoksen pH säädettiin arvoon 7 ja uutettiin kloroformilla. Kun orgaaninen liuos haihdutettiin vakuumissa, saatiin puhdas yhdiste Ib kvantitatiivisella saannolla, sp. 165-166°C, FD-MS: m/z 498 (M+*). Kun yhdiste VIb käsiteltiin vastaavasti emäksellä edellämainituissa olosuhteissa, saa- 8 75834 tiin yhdiste Hb puhtaana. PMR (CDCl^) mm. 1,39 (CH^-C-5') , 2,42 δ(s,(CH3-CO), 3,50-4,00 δ(m, C-F--4' ja C-F-5*), 4,08 ö(s, CH3O), 5,33 S(bsr C-H-7), 5,58 Ö(bs, C-H-1'), 5,65δ(d, C-H -3'), 5,93 Ö(d, C-H -2').

Esimerkki 5 7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyranosyyli)-adriamysi-nonin (Ie) ja 7-0-(2,3,6-trideoksi-oi-L-erytro-heks-2-enopyra-nosyyli)-adriamysinonin (Ile) valmistus

Liuokseen, jossa oli 1,25 g yhdistettä IIIc, joka oli valmistettu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, 100 mlrssa vedetöntä metyleenidikloridia, lisättiin 2,4 g merkuri-oksidia, 0,75 g merkuribromidia, 8 g molekyyliseulaa (4Ä Merck) ja 0,85 g kloorisokeria IV. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli ja sen jälkeen se suodatettiin. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin kromatograisesti piihappopyl-väässä käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (9:1 tilavuusosina). Näin saatiin 1,2 g tuotetta Vc, sp.

55-56°C, FD-MS: m/z 866 (M+') ja 0,15 g tuotetta Vie, sp. 3o-89°C. Yhdiste Vc (0,87 g) liuotettiin vedettömään metyleenidikloridiin (10 ml) ja lisättiin 200 ml liuosta, jossa oli o,o1 N natriummetoksidia vedettömässä metanolis-sa. Kun seosta oli pidetty 3 tuntia huoneenlämpötilassa, olivat suojaryhmät poistuneet. Reaktioseos tehtiin happamaksi etikkahapolla ja haihdutettiin vakuumissa. Saatu öljy liuotettiin 200 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisättiin 0,7 g tetra-n-butyyliammoniumfluoridia. 1,5 tunnin kulut tua oli tert.-butyyli-difenyyli-silyyliryhmän hydrolyysi tapahtunut täydellisesti. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti sili-kageelipylväässä käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (1:1 tilavuusosina), jolloin saatiin puhdas yhdiste Ie (0,35 g); sp. 189-190°C, PMR (CDC13) mm. 1,34 δ (d, CH3-C-5'), 4,08 δ(3, CH00), 4,77δ (s, CH2OH), 5,30δ (d, CH-7) ,5,50 δ(d,CH-1') .

9 75834

Kun yhdisteestä Vie hydrolysoitiin suojaryhmät vastaavalla tavalla, saatiin yhdiste Ile; sp. 205-207°C, PMR (CDC13) mm. 1,38 δ (d, CH3-C-5r), 3,25-4,00 δ (m, C-H-4' ja C-H-5 *) , 4,08 δ(s, 0^0), 4,76 δ (d, CH2OH) , 5,36 fi(leveä s, C-H-7), 5,57 δ (leveä s, C-H1'), 5,63 δ(ά, C-H -3'), 5,93 δ(a, C-H -2’).

Esimerkki 6 4-demetoksi-7-0-(2,6-dideoksi-a-L-arabino-heksopyra-nosyyli)-adriamysinonin (Id) ja 4-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi-a-L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-adrianysi-nonin (Ild) valmistus

Liuokseen, jossa oli 0,63 g esimerkin 2 mukaisesti valmistettua yhdistettä Ild 50 ml:ssa vedetöntä mety-leenidiklroidia, lisättiin 1,2 g merkurioksidia, 0,4 g merkuribromidia, 8 g molekyyliseulaa (4 A Merck) ja 0,75 g kloorisokeria IV. Seosta sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa yön yli ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin vakuumissa ja jäännös puhdistettiin piihappopylväässä käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (96:4 ti-iavuusosina). Näin saatiin 0,585 g tuotetta Vd, sp.

2Ί2-213°, FD-MS: m/z 236 (M+*) ja 0,200 g tuotetta VId.

Tuote Vd (0,5 g) liuotettiin vedettömään metyleenidiklo-ridiin (10 ml) ja lisättiin 150 ml liuosta, jossa oli 0,01 N natriummetoksidia vedettömässä metanolissa. Kun seosta oli pidetty 3 tuntia huoneenlämpötilassa, olivat asetyylisuojaryhmät poistuneet. Reaktioseos tehtiin happamaksi etikkahapolla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin 100 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisättiin 0,5 g tetra-n-butyyli-ammoniumfluoridia. Tert.-butyyli-difenyyli-silyyliryhmät olivat hydrolysoituneet täydellisesti 2 tunnin kuluttua. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatogra-fisesti silikageelipylväässä käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (1:1 tilavuusosina), jolloin saatiin 0,2 g puhdasta yhdistettä Id, sp. 204-206°C, FD-MS m/z 75834 10 514 (M+ *) . PMR (CDC13) : mm. 1,3 δ (d, g^-C-5'), 4,78 6 (s, CH2OH ), 5,34 δ (leveä s, CH-7) , 5,54 δ (bs, C-H-1') . Kun suojaryhmät hydrolysoitiin vastaavalla tavalla yhdisteestä VId, saatiin yhdiste Ild, sp. 166-167°C, PMR (CDC13): mm. 1,39 δ (d, CH-j-C-5'), 3,96 δ (d,C-H4'), 4,77 δ(s, CH20H), 5,35δ (leveä s, C-H-7), 5,55 6(leveä s, C-H-1'), 5,71 δ (m, CH-3'), 5,95 δ (d, C-H-2’).

Yhdisteiden Ha, Ib, Ile ja Id biologinen aktiivisuus

Yhdisteet Ha ja Ile testattiin daunorubisiiniin (DNR) ja doksorubisiiniin (DX) verrattuina vastaavasti "in vitro" ja "in vivo" sytotoksisuuden ja antitumorivaikutuksen toteamiseksi.

Taulukossa 1 on esitetty vaikutus HeLa-solujen kloo-nautumistehokkuuteen "in vitro".

Yhdiste Ha on noin 25 kertaa vähemmän sytotoksinen kuin DNR ja yhdiste Ile on noin 5 kertaa vähemmän syto-teksinen kuin DX.

Esiseulonta "in vitro" suoritettiin CDF-1-hiirillä, joilla oli askiittinen P388-leukemia (10^ solua/hiiri). Tulokset on esitetty taulukossa 2. Sekä Ha että Ile suspensoidiin 1O-prosenttiseen Tween 80:een ja injektoitiin intraperitoneaalisesti. Molemmat yhdisteet olivat vähemmän myrkyllisiä ja voimakkaita kuin kantayhdisteet DNR ja DX. Ha oli inaktiivinen askiittisen P388-leukemian suhteen molemmilla koeannoksilla, mukaanluettuna maksimaalinen siedetty annos (Mx TD) 100 mg/kg, kun taas yhdistellä Ile havaittiin olevan tietty antitumorivaikutus, joka on pienempi kuin yhdisteen DX vastaava.

Yhdisteet Ib ja Id tutkittiin "in vitro" HeLa-solujen ja DX:n suhteen sensitiivisten (P388) ja DX:n suhteen resistenttien (P388/DX) P388-leukemiasolujen suhteen ja "in vitro" P388- ja Gross-leukemian suhteen. Taulukossa 3 esitetyt tulokset osoittavat, että HeLa-solujen kloo-nautumistehokkuuden suhteen testattu yhdiste Ib "in vitro"

II

11 75834 verrattuna kantayhdisteisiin DNR ja 4-demetoksi-DNR (4-dm DNR) on 3 ja 6 kertaa vähemmän sytotoksinen kuin DNR ja 4-dm DNR vastaavasti, kun taas yhdiste Id on yhtä sytotoksinen kuin DX samassa kokeessa.

Yhdistettä Ib on tutkittu P388/DX:n suhteen "in vitro".

P388- ja P388/DX-leukemiasolut otettiin talteen hiirten vesivatsanesteestä ja sopeutettiin kasvamaan suspensiossa "in vitro". Sytotoksisuuskokeet suoritettiin altistamalla solut eri lääkeväkevyyksille 48 tunnin ajaksi; altistusajan lopussa solut laskettiin coulter-solulaski-mella ja ID^-arvot (annos joka saa aikaan 50% pienenemisen solujen lukumäärässä verrattuna käsittelemättömiin verrokkeihin) laskettiin.

Taulukosta 4 ilmenee, että yhdiste Ib oli suunnilleen yhtä sytotoksinen kuin DNR P388-leukemiasolujen suhteen ja erittäin aktiivinen P388/DX-leukemiasolujen suhteen.

DNR oli noin 500 kertaa vähemmän aktiivinen resistantin kuin sensitiivisen solulinjan suhteen.

Taulukossa 5 on esitetty tulokset primäärisestä seulonnasta, joka suoritettiin CDF-1-hiirillä, joilla oli P338-askiittinen leukemia, ja joille annettiin koeyhdis-tettä i.p. vuorokauden kuluttua kasvaimen siirrostuksesta.

Yhdiste Ib osoittautui 2 kertaa voimakkaammaksi kuin DNR ja noin 1,5 kertaa voimakkaammaksi kuin 4-dm DNR;

Mx TD-arvojen vertailu osoittaa, että yhdiste on vähemmän aktiivinen kuin DNR ja 4-dm DNR. Yhdiste Id oli noin 5 kertaa voimakkaampi kuin DX. Antileukemia-aktiivisuus P388:n suhteen oli hyvä, mutta alempi verrattuna yhdisteen DX vastaavaan.

Taulukossa 6 on esitetty tulokset, jotka suoritettiin C3H/Me-hiirillä, joilla oli i.v. siirrostettu Gross-leu-kemia, ja joille annettiin koeyhdistettä siirrostaraisesta seuraavana vuorokautena. Sekä Ib että Id olivat myrkyl-lisempiä ja voimakkaampia kuin kantayhdisteet. Mx TD- 75834 12 arvojen vertailu osoittaa, että Ib on aktiivisenpi kuin DNR ja yhdisteellä Id on hyvä antitumoriaktiivisuus, joka on samaa suuruusluokkaa kuin DX:n vastaava. Yhdisteet Ib ja Id tutkittiin tarkemmin oraalisen aktiivisuuden suhteen Gross-leukemiassa, joka oli siirrostettu i.v., verrattuna yhdisteisiin DNR ja DX, jotka oli annettu i.v., ja yhdisteeseen 4-dm DNR, joka oli annettu suun kautta.

Taulukossa 7 esitetyt tulokset osoittavat, että yhdisteellä Ib on hyvä antitumoriaktiivisuus annettuna oraalisesti päivänä no. 1, joka aktiivisuus on verrattavissa yhdisteen 4-dm DNR (jo osoitettu aktiiviseksi oraalisesti annettuna) ja i.v. injektoidun:yhdisteen DNR vastaaviin .

Taulukossa 7 on esitetty yhdisteen Id antitumorivai-kutus annettuna päivänä no. 1 tai 1,2,3 kasvaimen siir- rostamisen jälkeen.

Annettaessa oraalisesti päivänä 1 oli yhdiste Id ii:; TD-annoksena vähemmän aktiivinen kuin DX i.v. Käytettäessä erilaista antoaikataulua (1,2,3) oli yhdisteen aktiivisuus kuitenkin suurempi kuin i.v. annetun DX:n vastaa-

II

75834 13

Taulukko 1. Pesäkkeiden inhibointikoe HeLa-solujen suhteen "in vitro" (käsittelyaika 24 tuntia)

Yhdiste Annos (ncr/ml) %a ID50 DNR 25 12 12.5 74 r- 16 6.2 106

Yhdiste Ha 400 146 100 136 400 25 143 6.2 127 1.5 120 DX 25 24 10 12.5 40 6.2 69

Yhdiste Ile 400 4 100 33 ^ 50 25 65 6.2 68 1.5 86 a) “esäkemäärä; % käsittelemättömistä verrokeista 14 75834

Taulukko 2. Antituumcrivaikutus askiittisen P 388-leukemian suhteen Käsittely i.p. päivänä 1.

3 b

Yhdiste Annos T/C LTS mvrkytvs- (mg/kg) % kuolemia c DNR 2.9 160 0/10 0/10 4.4d 165-170 0/10 0/20 6.6d 150-160 0/10 7/20

Yhdiste Ha 75 120 0/5 0/5 100 90 0/10 1/10 DX 4.4d 220-227 2/18 0/18 6.6e 227-305 2/26 0/26 10e 268->610 7/26 3/26

Yhdiste Ile 17.6 118 0/8 0/8 23 127 0/7 0/7 30d 125-136 0/17 0/17 45 130 0/10 0/10 67.5 140 0/10 0/10 100 150 0/7 0/7 a) keskimääräinen elossapysymisaika; % käsittelemättömien verokkien suhteen b) pitkäaikaisesti eloonjääneet (^60 vrk) c) arvioitu kuolleiden hiirien ruumiinavaushavainnoista d) kahden kokeen tulokset (alue) e) kolmen kokeen tulokset (alue)

II

15 75834

Taulukko 3. Pesäkkeiden inhibointikoe HeLa-solujen suhteen "in vitro" (käsittely 24 tuntia)

Yhdiste Annos (ησ/ml) %a “^50 DNR 25 9 12.5 51 ^12 6.2 83 4-dm DNR 25 0 12.5 18 6.3 6.2 53 3.1 84

Yhdiste Ib 100 0 25 67 Λ* 35 6.2 87 1.5 107 DX 25 0 12.5 28 /v/ 7.5 6.2 59

Yhdiste Id 100 0 25 0 1 6.2 59 1.5 106 a) Pesäkemäärä; % käsittelemättömistä verrokeista 16 75834

Taulukko 4. Vaikutus sensitiivisen ja doksorubisiinille resistantin P 388-leukemian suhteen "in vitro"

Yhdiste IDj-q R^

P388b P388/DXC

DNR 1.7 800 470

Yhdiste Ib 1.2 30 25 a) Annos, joka saa aikaan 50 % pienenemisen solumäärässä verrattuna käsittelemättömiin verrokkeihin b) DX:n suhteen sensitiiviset P 388-leukemiasolut c) DX:n suhteen resistentit P 388-leukemiasolut d) ΰ 388/DX:n suhteen saadun ID^^-arvon ja P 388:n suhteen saadun ID_g-arvon suhde

II

17 75834

Taulukko 5. Yhdisteiden Ib ja Id antituumorivaikutus askiit-tisen P 388-leukemian suhteen Käsittely i.p. päivänä 1.

Yhdiste Annos T/Ca LTS*3 myrkytys- c (mg/kg) % kuolemat DNR 2.9d 159-194 0/18 0/8 d 4.4 140-184 0/18 7/18 4-dm DNR 0.75 163 0/8 0/8

Yhdiste Ib 1.25 140 0/8 0/8 2.5 163 0/9 3/9 5 63 0/10 10/10 DX 4.4 220 1/10 0/10 6.6 305 0/10 0/10 10 >610 5/10 0/10

Yhdiste Id 1.12 170 0/10 0/10 1.68 185 0/10 0/10 2.53 230 1/10 2/10 a, b, c, d ks. taulukko 2.

I; _____ 18 75834

Taulukko 6. Antituurnoriaktiivisuus Gross-leukenian suhteen i.v. Koevhdiste annettiin i.v. päivänä 1.

3 b

Yhdiste Annos T/C nyrkytyskuolemat (mg/kg) % DNR 15 171 0/8 22.5 171 0/8

Yhdiste Ib 2.9 214 0/7 4.4 100 7/8 DX 10 171 0/10 13 200 0/10 16.9 207 3/10

Yhdiste Id 1.2 171 1/10 2.16 200 1/10 3.8 114 5/9 a, b ks. talukko 2.

75834 19

Taulukko 7. Yhdisteiden Ib ja Id oraalinen aktiivisuus Gross-leukemian suhteen Käsittely T/c %b myrkvtys-

- -- i . , . . Q

kuolemat antotapa aikataulu yhdiste annos (mg/kcj) i.v. +1 DNR 15 200 0/10 22.5 125 6/10 oraalinen +1 4-dm DNR 3 150 0/6 3.6 150 0/6 4.3 216 0/3 oraalinen +1 yhdiste Ib 2.9 167 0/10 4.4 208 0/10 6.6 116 4/9 i.v. +1 DX 10d 171-171 1/20 13d 200-200 1/20 16.9d 200-207 3/13 oraalinen +1 yhdiste Id 1.2 171 0/9 2.1 185 0/8 3.8 214 3/8 oraalinen 1/2,3 yhdiste Id 0.48 183 0/10 0.62 208 0/10 0.8d 233-258 2/20 a) vuorokausia kasvaimen siirrostamisesta b-c) ks. taulukko 2.

d) kahden kokeen tulokset (alue)

Claims (5)

20 75834

1. Analogiamenetelmä yleisen kaavan (A) mukaisen antrasykliini-glykosidiyhdisteen valmistamiseksi *2 OH · i jossa R^ on vety tai hydroksi, R2 on vety tai metoksi, x on hydroksi ja Y on vety tai X ja Y yhdessä muodostavat toisen C-C sidoksen, edellyttäen, että X:n ollessa hydroksi ja Y:n ollessa vety R2 on vety, tunnettu siitä, että A) Yleisen kaavan III mukainen antrasyklinoni r II 75834 21 I) OH CCaXJ^" r2 o oh oh (III) jossa R^on hydroksi ja R^ voi olla vety tai metoksi, liuotettuna vedettömään dimetyyliformamidiin saatetaan ensin huoneenlämpötilassa reagoimaan tert.-butyylikloori-difenyylisilaanin kanssa imidatsolin läsnäollessa niin, että saadaan vastaava 14-tert.-butyyli-difenyylisilyyli-eetteri, joka kondensoidaan vedettömässä metyleeniklori-dissa 3,4-di-0-asetyyli-2,6-dideoksi-^L-arabino-hekso-pyranosyylikloridin kanssa, jonka kaava on IV OOCCH3 käyttämällä reaktiossa merkuribromidin ja merkurioksidin seosta ja molekyyliseulaa, jolloin saadaan kaavojen V ja VI mukaisten suojattujen glykosidien seos ° t M.CCOO _0 I (v) («) OOCCMj 22 75834 joissa on tert.-butyyli-difenyyli-siloksi ja R2 on vety tai metoksi, jotka erotetaan toisistaan ja puhdistetaan kromatogra-fisesti silikageelipylväässä käyttämällä eluenttina tolueeni-asetoniseosta (1:1 tilavuusosina), poistetaan O-asetyylisuoja-ryhmä(t) kustakin sokeriryhmästä käsittelemällä katalyyttisellä määrällä natriummetoksidia metanolissa ja sen jälkeen poistetaan 1^-tert.-butyyli-difenyyli-silyylisuojaryhmä kustakin aglykoniosasta käsittelemällä tetra-n-butyyli-ammonium-flucj-ridilla tetrahydrofuraanissa, jolloin saadaan puhtaassa muodossa kaavojen I ja II mukaiset glykosidit, »J O OH j »J " £ O ja ho · I Td u (1) OH · I u > joissa R1 on hydroksi ja R2 on joko vety tai metoksi; tai B) Yleisen kaavan III mukainen antrasyklinoni, jossa R1 on vety ja R2 voi olla vety tai metoksi, saatetaan metyleenikloridiin liuotettuna hopeatrifluorometaanisulfonaatin läsnäollessa ja käyttäen molekyyliseulaa reagoimaan kaavan IV mukaisen 3»^-di- o-asetyyli-2,S-dideoksi-* -L-arabinoheksopyranosyylikloridin kanssa, jolloin saadaan kaavojen V ja VI mukaisten suojattujen glykosidien seos, joissa kaavoissa R^ on vety ja R2 voi olla vety tai metoksi, jotka erotetaan toisistaan ja puhdistetaan kromatografisesti silikageelipylväässä käyttämällä eluenttina etyyli-asetaatti-sykloheksaaniseosta (1:1 tilavuusosina), poistetaan o-asetyylisuojaryhmä(t) kustakin sokeriosasta käsittelemällä natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuoksella huoneenlämpö- 23 75834 tilassa, jolloin saadaan kaavojen I ja II mukaiset puhtaat gly-kosidit, joissa kaavoissa R1 on vety ja R- on vety tai metoksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä että vaihtoehdon B mukaisesti valmistetaan 7-0-(2,3,6-trideoksi-O- -L-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-daunomysinoni, jolloin yleisen kaavan III mukaisena antrasyklinonina käytetään daunomysinonia.

3· Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaihtoehdon B mukaisesti valmistetaan 4-demetoksi- 7-0-(2,6-dideoksi-tt -L-arabinoheksopyranosyyli)-daunomysinoni sekä ^-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi- cX -L-erytro-heks-2-enopy-ranosyyli)-daunomysinoni, jolloin yleisen kaavan III mukaisena antrasyklinonina käytetään 4-demetoksidaunomysinonia.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaihtoehdon A mukaisesti valmistetaan 7-0-(2,3,6-trideoksi-1X-erytro-heks-2-enopyranosyyli)-adriamysinoni, jolloin yleisen kaavan III mukaisena antrasyklinonina käytetään adriamysinonia.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaihtoehdon A mukaisesti valmistetaan 4-demetoksi- 7-0-(2,6-dideoksi- (A -L-arabinoheksopyranosyyli)-adriamysinoni sekä Ji-demetoksi-7-0-(2,3,6-trideoksi-^. -L-erytro-heks-2-eno-pyranosyyli)-adriamysinoni, jolloin yleisen kaavan III mukaisena antrasyklinonina käytetään 4-demetoksiadriamysinonia. 24 75834