FI75349B - Foerfarande foer separering av blandningar av insulin, insulinderivat och eventuella foeroreningar. - Google Patents
Foerfarande foer separering av blandningar av insulin, insulinderivat och eventuella foeroreningar. Download PDFInfo
- Publication number
- FI75349B FI75349B FI824135A FI824135A FI75349B FI 75349 B FI75349 B FI 75349B FI 824135 A FI824135 A FI 824135A FI 824135 A FI824135 A FI 824135A FI 75349 B FI75349 B FI 75349B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- insulin
- volume
- parts
- insulinderivat
- eventuella
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
- C07K14/625—Extraction from natural sources
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 75349
Menetelmä insuliinista, insuliinijohdannaisista ja mahdollisista epäpuhtauksista koostuvien seosten erottamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä insuliinista, insulii-5 nijohdannaisista ja mahdollisista epäpuhtauksista koostuvien seosten erottamiseksi.
On tunnettua muuttaa luonnon sianinsuliini puolisynteettistä menetelmää käyttäen ihmisen insuliiniksi vaihtamalla kemiallisesti tai entsymaattisesti B30-asemassa oleva 10 alaniini treoniiniin Zks. esimerkiksi: Obermeier, R., Geiger, R. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chemie 357 (1976) 759-767; Ruttenberg, M.A.Science 177 (1972) 623-626; Morihara, K.,
Oka, T. Tsuzuki, H. Nature 280 (1979) 412-413; Inouye, K.
J. Am. Chem. Soc. 101 (1979) 751-752; Schmitt, E., Gattner, 15 H.G. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 359 (1978) 799-802;
Bromer, W.W., Chance, R.E. Biochem. Biophys. Acta 133 (1967) 219-2237.
Tämän muutoksen päämääränä on voida käyttää ihmisen sokeritaudin hoidossa immunologisista syistä lajinmukaista 20 insuliinia.
Tämän hoidon edut voivat päästä oikeuksiinsa ainoas-taan silloin, kun puolisynteesin raaka-aineesta onnistutaan erottamaan insuliini-johdannaiset ja epäpuhtaudet varmasti erilleen ihmisen insuliinista.
25 Tunnettuja erotusmenetelmiä käytettäessä ei voida var muudella taata ihmisen insuliinin erottumista sianinsuliini-komponenteista. Kirjallisuudessa julkaistujen aminohappoana-lyysien perusteella voidaan päätellä, että puolisynteettisessä ihmisen insuliinissa sekoittuminen sianinsuliinin 30 kanssa voi olla jopa 25 prosentin suuruusluokkaa.
Jotta vältettäisiin ihmisen insuliinin likaantuminen sianinsuliinilla tai entsyymeillä käytettäessä uudelleen regeneroituvia täytemateriaaleja kromatografiapylväissä, on edullista käyttää optimaalisen erotuskyvyn omaavaa, halpaa 35 kertakäyttö-materiaalia pylvään täytteenä. Analyyttisessä korkeapainenestekromatografiassa saavutetaan korkeatasoinen 2 75349 kromatograafinen erotus yksinomaan hydrofobisella, orgaanisella ryhmillä derivoidulla silikageelillä preserved phase” (käänteisfaasi)7· Tämän materiaalin suuret kustannukset estävät kuitenkin sen käytön kertakäyttöpylvästäytteenä.
5 Nyt todettiin, että insuliinin entsymaattisista puoli- synteeseistä peräisin olevien raakaseosten kromatograafinen erottaminen pylväillä, jotka on täytetty kaupallisella silikageelillä, käyttäen määrättyjä orgaanisia liuotinseoksia kuten esimerkiksi kloroformi/metanoli/vesi/trietyyliamiini/-10 muurahaishappoa, on kaikkia muita erotusmenetelmiä selvästi parempi. Tämä ylivoimaisuus on tuloksena toisaalta osaksi suurista eroista erottuvien seosten komponenttien retentio-ajoissa, toisaalta pylväsajon nopeudesta. Yhden ajon jälkeen poisheitetyn silikageelin aiheuttamat kustannukset voidaan 15 työstetyn insuliinin arvoon verrattuna mitättöminä jättää huomiotta.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle insuliinista, insuliini johdannaisista ja mahdollisista epäpuhtauksista koostuvien seosten erottamiseksi on tunnusomaista, että seokset 20 kromatografioidaan silikageelillä täytetyllä pylväällä, jolloin silikageeliä ei ole derivoitu orgaanisilla ryhmillä, ja että kromatografointiin käytetään eluenttiseosta, joka koostuu kloroformin, metanolin, veden, trietyyliamiinin ja mahdollisesti muurahaishapon seoksesta.
25 Menetelmä soveltuu erityisesti insuliinin puhdistami seen ja insuliinin tai sen hajoamistuotteiden erottamiseen trypsiinistä tai vastaavaista fermenteistä ja insuliinies-tereiden tai muiden insuliini-johdannaisten erottamiseen.
Pylvään täytteenä tulevat kyseeseen kaupalliset sili-30 kageelit, esimerkiksi kauppatuote βΐί^βΟ, firmasta Merck & Co., Darmstadt.
Eluointiaineena voidaan kromatografiässä käyttää kaikkia niitä eluointiaineseoksia, joissa insuliiniestereillä tai insuliinijohdannaisilla toisaalta ja insuliinilla tai 35 sen hajoamistuotteilla toisaalta on kaupallisilla ohutker-roskromatografia-levyillä eri Rf-arvot.
Il 3 75349
Erittäin hyvä erotusvaikutus saavutetaan, jos raaka-tuote kromatografioidaan eluenttiseoksessa, joka koostuu 1500-2100 tilavuusosasta kloroformia, 1000-1500 tilavuus-osasta metanolia, 350-450 tilavuusosasta vettä, 35-55 tila-5 vuusosasta trietyyliamiinia ja 0-15 tilavuusosasta muurahaishappoa .
Menetelmä on erittäin edullinen erotettaessa ihmisen insuliini-B 30-di-tert-butyyli-treoniini sianinsuliinista ja trypsiinistä; seos, jollainen esiintyy muutettaessa 10 entsymaattisesti sianinsuliini ihmisen insuliiniksi.
Käyttöesimerkit 1. 4 g seosta, joka koostuu 70 %:sta ihmisen insuliini-B 30-di-tert-butyyli-treoniinia ja 30 %:sta sianinsuliinia, liuotetaan 20 ml:aan liuotinta, jossa on kloroformirmetano-15 li:vesi:trietyyliamiinirmuurahaishappoa = 1800:1500:375:45:9 (v/v) ja asetetaan kertakäyttö-ruiskun avulla kuivalle Lobar^ valmispylväälle, suuruusluokkaa C. Pylväs kehitetään samalla liuottimena. Liuotinrintaman ilmestyttyä kerätään yksittäiset fraktiot (10 ml).
20 Ihmisen insuliini-B30-(But)2 ilmestyy fraktioissa 37- 53. Nämä yhdistetään ja haihdutetaan kiertohaihduttimessa 30-50 ml:n tilavuusmäärään. Tähän liuokseen lisätään noin 500 ml asetonia ja saostunut tuote eristetään sentrifugoi-malla.
25 Sian insuliini eluoidaan fraktioissa 120-137 ja eris tetään kuten edellä kuvattiin. Molemmat tuotteet kuivataan pienessä vakuumissa.
Saanto: 2,59 g ihmisen insuliini-B30-(But)2Jta 1,03 g insuliini (S):ää.
30 2. N (XB^-tert-butyylioksikarbonyyli-B30-di-tert-butyy- li-treoniini-insuliinia (4 g) liuotetaan kuten esimerkissä 1 ja asetetaan 300 g:lla silikageeli SiO2~60^:ää täytetylle pylväälle (2,5 x 50 cm), joka tasapainotettiin kloroformilla. Pylväs eluoidaan samalla liuotinseoksella kuin esi-35 merkissä 1. Ensimmäisenä ilmestyvä piikki sisältää B^-BOC-insuliini-B30-(But)2=ta, sianinsuliini eluoidaan myöhemmissä fraktioissa. Edelleenkäsittely tapahtuu kuten esimerkissä 1.
4 75349 3. Vastaavanlainen seos, kuin esimerkissä 1 (4 g) asetetaan Lobarvalmispylväälle C, tasapainotettu 70 %:lla etanolia/30 %:lla tris-puskuria (0,05 M, pH 8,0) ja kromato-grafioidaan samalla eluointiaineella. Vastaavia fraktioita, 5 jotka sisältävät toisistaan erotettuina ihmisen insuliini B30-di-tert-treoniinia ja sianinsuliinia, käsitellään vastaavalla tavalla kuten esimerkissä 1 kuvattiin.
4. Puhdistamaton sianinsuliini (4 g) liuotetaan seokseen, joka koostuu kloroformi:metanoli:vesi:trietyyliamiini: 10 muurahaishaposta = 1200:1100:370:47:11 ja kromatografioidaan silikageelipylväällä kuten esimerkissä 2 kuvattiin. 10 ml:n annoksina fraktioitua eluaattia käsitellään vastaavasti kuten esimerkissä 1. Fraktiot, jotka sisältävät nestekromato-grafia- ja polyakryyliamidi-geelielektroforeesi-tutkimusten 15 mukaan puhdasta sianinsuliinia, yhdistetään.
Saanto: 3,61 g.
Il
Claims (2)
1. Menetelmä insuliinista, insuliinijohdannaisista ja mahdollisista epäpuhtauksista koostuvien seosten erottamiseksi, tunnettu siitä, että seokset kromato-5 grafioidaan silikageelillä täytetyllä pylväällä, jolloin silikageeliä ei ole derivoitu orgaanisilla ryhmillä, ja että kromatografointiin käytetään eluenttiseosta, joka koostuu kloroformin, metanolin, veden, trietyyliamiinin ja mahdollisesti muurahaishapon seoksesta.
^ 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kromatografointiin käytetään eluenttiseosta, joka koostuu 1500-2100 tilavuusosasta kloroformia, 1000-1500 tilavuusosasta metanolia, 350-450 tilavuusosasta vettä, 35-55 tilavuusosasta trietyyliamii-15 nxa ja 0-15 tilavuusosasta muurahaishappoa.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19813147842 DE3147842A1 (de) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | "verfahren zur trennung von gemischen aus insulin, insulinderivaten und gegebenenfalls verunreinigungen" |
| DE3147842 | 1981-12-03 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI824135A0 FI824135A0 (fi) | 1982-12-01 |
| FI824135L FI824135L (fi) | 1983-06-04 |
| FI75349B true FI75349B (fi) | 1988-02-29 |
| FI75349C FI75349C (fi) | 1988-06-09 |
Family
ID=6147790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI824135A FI75349C (fi) | 1981-12-03 | 1982-12-01 | Foerfarande foer separering av blandningar av insulin, insulinderivat och eventuella foeroreningar. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4677192A (fi) |
| EP (1) | EP0082359B1 (fi) |
| JP (1) | JPS58103323A (fi) |
| KR (1) | KR880002607B1 (fi) |
| AR (1) | AR230430A1 (fi) |
| AT (1) | ATE18057T1 (fi) |
| AU (1) | AU563350B2 (fi) |
| CA (1) | CA1245633A (fi) |
| DE (2) | DE3147842A1 (fi) |
| DK (1) | DK162104C (fi) |
| ES (1) | ES8607343A1 (fi) |
| FI (1) | FI75349C (fi) |
| GR (1) | GR77764B (fi) |
| IL (1) | IL67378A (fi) |
| ZA (1) | ZA828864B (fi) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| DE4028120C2 (de) * | 1990-09-05 | 1996-09-19 | Hoechst Ag | Verfahren zur Reinigung von Insulin und/oder Insulinderivaten |
| US5278284A (en) * | 1992-05-14 | 1994-01-11 | Miller Brewing Company | Protein purification method |
| US5451660A (en) * | 1993-12-13 | 1995-09-19 | Genentech, Inc. | Method for purifying polypeptides |
| DE19652713C2 (de) * | 1996-12-18 | 2001-11-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verfahren zur Reinigung von Insulin und Insulinderivaten durch Chromatographie an stark saurem Kationenaustauscher |
| US10155799B2 (en) | 2014-07-21 | 2018-12-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Chromatography process for purification of insulin and insulin analogs |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS532492A (en) * | 1976-06-26 | 1978-01-11 | Shimizu Seiyaku Kk | Process for preparing pure insuline |
| JPS5542185A (en) * | 1978-09-22 | 1980-03-25 | Kawasaki Heavy Ind Ltd | Detecting device for arc welding or the like |
| JPS6016673B2 (ja) * | 1978-12-25 | 1985-04-26 | 川崎重工業株式会社 | サ−ボ系における被検体認識装置 |
-
1981
- 1981-12-03 DE DE19813147842 patent/DE3147842A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-11-30 DE DE8282111061T patent/DE3269252D1/de not_active Expired
- 1982-11-30 AT AT82111061T patent/ATE18057T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-11-30 EP EP82111061A patent/EP0082359B1/de not_active Expired
- 1982-12-01 GR GR69942A patent/GR77764B/el unknown
- 1982-12-01 ES ES517844A patent/ES8607343A1/es not_active Expired
- 1982-12-01 FI FI824135A patent/FI75349C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-12-01 AR AR291468A patent/AR230430A1/es active
- 1982-12-01 IL IL67378A patent/IL67378A/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-12-02 DK DK536282A patent/DK162104C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-12-02 AU AU91102/82A patent/AU563350B2/en not_active Ceased
- 1982-12-02 ZA ZA828864A patent/ZA828864B/xx unknown
- 1982-12-02 CA CA000416875A patent/CA1245633A/en not_active Expired
- 1982-12-02 JP JP57210699A patent/JPS58103323A/ja active Granted
- 1982-12-03 KR KR8205395A patent/KR880002607B1/ko active
-
1985
- 1985-12-04 US US06/804,325 patent/US4677192A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1245633A (en) | 1988-11-29 |
| KR880002607B1 (ko) | 1988-12-04 |
| AR230430A1 (es) | 1984-04-30 |
| FI75349C (fi) | 1988-06-09 |
| ZA828864B (en) | 1984-05-30 |
| GR77764B (fi) | 1984-09-25 |
| IL67378A0 (en) | 1983-05-15 |
| DK162104B (da) | 1991-09-16 |
| JPS58103323A (ja) | 1983-06-20 |
| IL67378A (en) | 1985-12-31 |
| DE3147842A1 (de) | 1983-06-23 |
| FI824135L (fi) | 1983-06-04 |
| EP0082359A1 (de) | 1983-06-29 |
| EP0082359B1 (de) | 1986-02-19 |
| AU563350B2 (en) | 1987-07-09 |
| ES517844A0 (es) | 1986-05-16 |
| US4677192A (en) | 1987-06-30 |
| DK162104C (da) | 1992-02-17 |
| ATE18057T1 (de) | 1986-03-15 |
| JPH0354678B2 (fi) | 1991-08-20 |
| FI824135A0 (fi) | 1982-12-01 |
| ES8607343A1 (es) | 1986-05-16 |
| DE3269252D1 (en) | 1986-03-27 |
| AU9110282A (en) | 1983-06-09 |
| KR840002771A (ko) | 1984-07-16 |
| DK536282A (da) | 1983-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Plummer et al. | The isolation of ribonuclease B, a glycoprotein, from bovine pancreatic juice | |
| Elliott et al. | The isolation of bradykinin, a plasma kinin from ox blood | |
| Johns et al. | Improved fractionations of arginine-rich histones from calf thymus | |
| Gray et al. | Conotoxin MI. Disulfide bonding and conformational states. | |
| Carra | Purification and N-terminal analyses of algal biliproteins | |
| Gesquiere et al. | Slow isomerization of some proline-containing peptides inducing peak splitting during reversed-phase high-performance liquid chromatography | |
| Hnilica | Studies on nuclea proteins I. Observations on the tissue and species specificity of the moderately lysine-rich histone fraction 2b | |
| FI75349B (fi) | Foerfarande foer separering av blandningar av insulin, insulinderivat och eventuella foeroreningar. | |
| Stellwagen et al. | Degradation of histones during the manipulation of isolated nuclei and deoxyribonucleoprotein | |
| Vidali et al. | A comprehensive fractionation procedure for avian erythrocyte histones | |
| Berchtold et al. | Ca2+-binding proteins: a comparative study of their behavior during high-performance liquid chromatography using gradient elution on reverse-phase supports | |
| Synge et al. | Some adsorption experiments with amino-acids and peptides, especially compounds of tryptophan | |
| Belliardo et al. | Determination of α-amanitin in serum by HPLC | |
| Whiting | Isolation of lysinoalanine from the protein—polysaccharide complex of cartilage after alkali treatment | |
| Dahlqvist | The separation of intestinal invertase and three different intestinal maltases on TEAE-cellulose by gradient elution, frontal analysis and mutual displacement chromatography | |
| Chaga et al. | Isolation and characterization of catalase from Penicillium chrysogenum | |
| Watanabe et al. | Flammulin, an antitumor substance | |
| Bellair et al. | The Fractionation of?-Histone from Chicken Erythrocyte Nuclei | |
| Aubert et al. | Glycosylated proline‐rich peptide of human parotid saliva. Circular dichroism study | |
| Brunner et al. | Fractionation of Tyrosine‐Rich Proteins from Oxidized Wool by Ion‐Exchange Chromatography and Preparative Electrophoresis | |
| OHKUMA et al. | Sialoglycopeptides released by ficin from human erythrocytes | |
| US3503950A (en) | Lipolytic peptide and process for production | |
| Welinder et al. | Binding affinity of monoiodinated insulin tracers isolated after reversed-phase high-performance liquid chromatography | |
| Samuelsson | Chromatography of Viscotoxin and oxidized Viscotoxin on phosphate cellulose | |
| Riesen et al. | Fractionation of Indian cobra venom by column chromatography: I. Dextran gels |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT |