FI66727B - Foerfarande foer destabilisering av mikrobrennin - Google Patents
Foerfarande foer destabilisering av mikrobrennin Download PDFInfo
- Publication number
- FI66727B FI66727B FI801029A FI801029A FI66727B FI 66727 B FI66727 B FI 66727B FI 801029 A FI801029 A FI 801029A FI 801029 A FI801029 A FI 801029A FI 66727 B FI66727 B FI 66727B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- rennin
- enzyme
- acid
- destabilization
- activity
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
Κ55^Π m fm*UULUTUSJULKAISU fL&non jSTZ l#J Π1) UTLÄCCNINCSSKIUFT 00/2/ •jg® c W> Patentti ayönnetty 10 12 193· (A Patent oeddelat T i (51) K»j?/te*.a.3 A 23 C 19/032 SUOMI—FINLAND gi) 801029 (22) HibiMhpM — «mlMv*· 01.04.80 1P,,‘ (21) AtapaM—Glkfcteadag 01.04.80 (41) Tatet |«MmW—MMt oteMRg . ftn
Patentti- ja raUsterihamt·· /AA ._____________ ______________
Patent· och ragtetentyralaan W A-eta. JL* 31.08.84 (32)(33)(31) *n*«*r>»«M***** 09.04.79
Tanska-Danmark(DK) 1457/79 Toteennäytetty-Styrkt (71) Novo Industri A/S, NovoAlld, DK-2880 Bagsvaerd, Tanska-Danmark(OK) (72) Sven Branner-J^rgensen, Charlottenlund, Palle Schneider, Ballerup, Peter Eigtved, Ktfbenhavn, Tanska-Danmark(DK) (74) Berggren Oy Ab (54) Menetelmä mikrobirenniinin destabiloimiseksi -Förfarande för destabi1isering av mikrobrennin Tämä keksintö koskee mikrobirenniinin termistä destabilointi-menetelmää. Renniiniksi kutsutaan maitoa koaguloivaa entsyymi-tuotetta .
Juustonvalmistuksessa maito koaguloidaan, jotta juoksutettu maito voidaan erottaa herasta. Tähän tarkoitukseen on pitkään käytetty tuotteita, jotka sisältävät renniiniä, joka on vasikan mahasta eristetty maitoa koaguloiva entsyymi. Aikaisemmin ren-niinin kysyntä pystyttiin tyydyttämään vasikan renniinillä, mutta viime vuosina useita vasikan renniinin korvikkeita on kehitetty, joista erikoisesti mainittakoon Mucor miehein ja Mucor pusilluksen mikrobirenniinit. Mucor miehein renniini on edullinen juustoalalla alhaisen hintansa, alhaisen epäspesifisen proteolyyttisen aktiivisuutensa ja kalsiumioniherkkyy-den suhteen vasikan renniinin kanssa läheisen samankaltaisuutensa vuoksi. Mucor miehei renniinin erinomainen varastointi-kestävyys on myös etu, joka ainakin osittain on luettu sen korkean termisen stabiliteetin ansioksi.
66727
Osa pastöroidusta herasta käytetään lisäaineena kokomaitoon, esimerkiksi herajauheen muodossa, jolloin saadaan rikastettua maitoa, esimerkiksi vauvanruoaksi. Mucor miehei renniinin avulla valmistetusta juustosta saatu pastöroitu hera saattaa vielä sisältää jonkin verran renniiniaktiivisuutta Mucor miehei renniinin korkean termisen stabiilisuuden vuoksi. Herajauheen vähäinenkään jäännösrenniiniaktiivisuus ei ole toivottavaa, koska proteiinien koagulaatiota ei enää haluta tapahtuvan. Proteiinien koaguloitumista voisi tapahtua jos herajauhetta käytetään rikastetun maidon valmistukseen vauvanruoaksi. Rikastettu maito saattaa kokkaroitua ennenkuin se ehtii vauvan vatsaan, esimerkiksi syöttöpuIloon, jolloin maito ei pääse virtaamaan pullosta ulos.
Julkaisun Biochem. Biophys. Acta 271 (1972) 93-101 (W.S. Richert, Structural and Functional Determinants of Mucor miehei protease, I. Modification of the NH2 terminus and lysine residues by carbamylation) mukaan Mucor miehei proteaasi (Mucor miehei renniinin aktiivinen komponentti) voidaan karbamyloida kaliumsyanaatin kanssa ja karbamyloitu tuote osoittautuu jonkin verran termisesti epästabiiliksi. Käytännön kokeet ovat osoittaneet, että karbamyloidun entsyymin terminen epästabiilisuus on liian vähäistä edellä mainitun renniiniaktiivisuus-ongelman ratkaisemiseksi pastöroidussa herassa. Asiaa on lähestytty myös belgialaisessa patentissa n:o 6/47048, jonka mukaan entsyymi asyloidaan destabilointia varten.
Tämän keksinnön sovellutuksen kaltaisessa menetelmässä mikro-birenniiniä käsitellään vetyperoksidilla, joko vetyperoksidia lisäämällä tai käyttämällä systeemissä syntyvää vetyperoksidia. Tämä menetelmä on esitetty brittiläisessä patenttihakemuksessa n:o 2 024 828 A.
Tämän keksinnön tarkoituksena on saada aikaan sellainen taloudellisesti toteutettavissa oleva mikrobirenniinin terminen destabilointimenetelmä siinä laajuudessa, että pastöroidun heran jäännösmikrobirenniiniaktiivisuudesta aiheutuvat haitat on olennaisesti voitettu.
Tämän keksinnön mukaan on havaittu, että käyttämällä erikoisesti valittua peroksiyhdisteiden ryhmää, jonka kemiallinen 66727 luonne eroaa edellä mainitun brittiläisen patenttihakemuksen peroksiyhdisteistä, terminen destabilointi on mahdollista käyttämällä peroksiyhdistettä moolisuhteessa kokonaisproteii-nimäärään, joka määrä on huomattavasti alhaisempi kuin edellä mainitun brittiläisen patenttihakemuksen mukainen vastaava vetyperoksidin määrä.
Keksintö koskee näin ollen menetelmää mikrobiologisen renniinin termisen stabiilisuuden vähentämiseksi sitä kemiallisesti modifioimalla, joka menetelmä on tunnettu siitä, että renniiniä käsitellään vesiväliaineessa pH-arvossa 2-9 epäorgaanisella peroksi-hapolla tai suora- tai haaraketjuisen alkyyliryhmän, jossa on enintään 6 hiiliatomia, sisältävän alifaattisen karboksyylihapon peroksijohdannaisella käyttäen 0,1-25 mmoolia peroksihappoa/g kokonaisproteiinia entsyymivalmisteessa.
Alifaattisen karboksyylihapon peroksihappojohdannaisen alkyyli-ryhmässä on edullisesti enintään 4 hiiliatomia.
Esimerkkeinä alemmista alifaattisista peroksihapoista voidaan mainita seuraavat: peroksimuurahaishappo, peroksietikkahappo, peroksipropionihappo ja peroksivoihappo.
Esimerkkeinä epäorgaanisten peroksihappojen suoloista voidaan mainita seuraavat: kaliumperoksisulfaatti ja natriumperoksi-fosfaatti.
Tämän keksinnön mukaan on otaksuttu, ettei reaktiomekanismissa ole mukana I^C^ta, kuten aikaisemmin mainitun brittiläisen patenttihakemuksen mukaan, jossa käsittely suoritetaan J^C^jlla, joko sitä lisäämällä tai käyttämällä systeemissä syntyvää I^C^ta. On myös otaksuttu, että tämä ero on syy siihen, että tämän keksinnön mukaan on mahdollista saavuttaa tyydyttävä terminen destabilisaatio käyttämällä peroksidiyhdistettä moo-lisuhteessa kokonaisproteiinimäärään, mikä on vain noin kymmenes osa siitä moolimäärästä, mitä edellä mainitun brittiläisen patenttihakemuksen mukaan käytettiin H202:ta.
Käytetyn reagenssimäärän huomattavalla vähentämisellä on ainakin kaksi etua. Ensinnäkin inaktivointiin muuten tarvittavan 4 66727 reagenssiylimäärän käyttö voidaan välttää. Toiseksi, ylimääräisten reagenssien aiheuttama kontaminaatio olisi pidettävä alhaisimmalla mahdollisella tasolla, koska mikrobirenniiniä käytetään ihmisravinnoksi tarkoitetuissa tuotteissa.
On todettu, että tämän keksinnön mukaan modifioitu mikrobirenniini on huomattavan epästabiili ja destabilointiaste on heran käytön kannalta riittävä kuitenkaan vaikuttamatta erittäin haitallisesti renniinivalmisteen varaö.tointikestMvyyteen. Yllättäen on todettu, että tämän keksinnön mukaan on mahdollista saavuttaa (kuten myöhemmin määritellään) ainakin 8°C, edullisesti 10-13°C destabilointiaste, jolloin, edullisella alueella, modifioidun entsyymin terminen stabiliteetti vastaa vasikan renniinin termistä stabiliteettia, ja näin vasikan renniinin edulliset ominaisuudet on yhdistetty mikrobirenniinin edullisten ominaisuuksien kanssa.
Renniiniaktiivisuus mitataan brittiläisen standardin 3624: 1963 (Method for the determination of milk coagulating power of rennet) mukaan.
Koska tämä keksintö koskee mikrobirenniinin kontrolloitua termistä destabilisaatiota, alla on selitetty yksityiskohtaisesti termisen stabiilisuuden mittaustekniikkaa ja termisen stabii-lisuuden vähentymisen eli destabiilisuuden määrittämistekniik-kaa. Destabiilisuus ilmaistaan °C:ssa.
Ihanteellisissa olosuhteissa entsyymi voi denaturoitua sopivalla (korkealla) lämpötila-alueella siten, että entsyymin jäännösaktiivisuus laskee ekspontentiaalisesti ajan funktiona, puoliintumisajan ollessa lämpötilan (°C) funktio. Puoliintumisaika Tjy2 voidaan laskea kaavasta: (t2-tt) ln2 1/2 1ηΑχ - lnA2 jossa A2 on entsyymiaktiivisuus, kun entsyymiä on lämmitetty tietyssä lämpötilassa aika t·^, ja A2 on entsyymiaktiivisuus, kun entsyymiä on lämmitetty samassa lämpötilassa aika t2· 66727
Puoliintumisaika on sitä lyhyempi mitä korkeampi on lämpötila muiden olosuhteiden ollessa samoja. Monien entsyymien puo-liintumisaikaan vaikuttavat olennaisesti entsyymiliuoksen pH:n ja ioniväkevyyden muutokset sekä tiettyjen suolojen läsnäolo. Edelleen, entsyymin kemiallinen muuntaminen voi muuttaa puoliin-tumisaikaa huomattavasti. Jos tietyn entsyymin kemiallinen muuntaminen aiheuttaa entsyymin termistä destabilaatiota, de-stabilointiasteen sanotaan olevan N°C, jos alkuperäisellä (ei muunnetulla) entsyymillä lämpötilassa N°C on sama puoliintumisaika kuin entsyymijohdannaisella lämpötilassa (N-n)°C.
On kuitenkin huomattava, että destabilointiarvot ovat tietyssä määrin likimääräisiä johtuen puoliintumisaikakäsitteen li-kimääräisyydestä. Tämän esityksen kaikki destabilointiarvot on mitattu pH 6:ssa, koska destabiloinnin mittaustulokset ovat pH:sta riippuvaisia.
Tämän keksinnön mukaiseen käsittelyyn liittyy tavallisesti aktiivisuuden menetystä. On todettu, että taloudellisista syistä destabilointireaktiota ei tulisi jatkaa yli sellaisen pisteen, että siihen liittyvä aktiivisuuden menetys on noin 50 %, edullisesti noin 30 %, mieluiten alle 10 %.
Tyypillinen tapaus, jossa destabilisaatio on noin 10 tai 11°C, ja siihen liittyvä aktiivisuuden menetys on rajoittunut alle 10 %:in, tuntuu olevan sopiva kompromissi kahden edellä mainitun ristiriitaisen tekijän kesken.
Peroksihappoa on syytä lisätä sellaisessa pitoisuudessa, että haluttu destabilointiaste saavutetaan kohtuullisessa ajassa, mikä voi olla muutamasta minuutista 48 tuntiin, tai jopa viikon. Peroksihapon ja entsyymin kokonaisproteiinin välinen suhde on tärkeä tulosten kannalta. Jos peroksihapon pitoisuus on liian pieni, destabilointiaste on liian pieni. Jos taas peroksihapon pitoisuus on liian suuri, aktiivisuuden menetys on liian suuri. Optimaaliset pitoisuudet tavallisesti vastaavat peroksihapon ja entsyymivalmisteen kokonaisproteiinimäärän välistä moolisuhdetta noin 0,1-25 mmoolia peroksihappoa grammaa proteiinia kohti.
6 66727
Reaktiolämpötila ei ole kriittinen, kunhan se pidetään sellaisella alueella, esimerkiksi alle 30°C, että entsyymin stabiilisuus on tyydyttävä. Entsyymin stabiilisuutta olisi kuitenkin lisättävä tunnetuilla proteiineja stabiloivilla aineilla, esimerkiksi lisäämällä NaCl:a, 5-20 % entsyymivalmisteen määrästä, tai sorbitolia tavallinen entsyymiä stabiloiva määrä. Edullinen reaktiolämpötila on välillä 0-30°C.
Tämän keksinnön käytännön rajoina voidaan pitää vähintään 8°C, edullisesti 10-13°C destabilointiastetta ja korkeintaan 30 %, edullisesti vähemmän kuin 10 % myötäseuraavan aktiivisuuden laskua.
Tämän keksinnön mukaisen menetelmän eräs edullinen suoritusmuoto on mikrobirenniinin käsittely peroksietikkahapolla, peroksipropionihapolla tai monoperrikkihapolla.
Erikoisen edulliseksi on osoittautunut käsitellä mikrobiologista renniiniä, joka on peräisin Mucor miehei-renniinistä. Peroksihapon ja entsyymivalmisteen kokonaisproteiinimäärän välinen moolisuhde on edullisesti 0,5-5 mmoolia peroksihappoa/ grammaa proteiinia. pH-arvo on välillä 2-9 ja reaktiolämpötila on välillä 0-30°C.
Keksinnön mukaisesti valmistettua renniiniä voidaan tietenkin käyttää maidon koagulointiin juustonvalmistuksessa.
Käytännössä on havaittu, että termisesti destabiloidun ren-niinin käyttö on edullista pitkän kypsymisajan vaativien juustojen valmistuksessa.
Destabilointiprosessi voidaan suorittaa, ja edullisesti suoritetaan, viimeiseksi mikrobirenniinin valmistuksen yhteydessä. Tämän keksinnön käytännön sovellutuksissa voidaan itse asiassa käyttää (kaupallisesti) puhdasta mikrobirenniiniä tai renniinikonsentraattia. Tällöin, esimerkiksi sellaisen stabiloidun mikrobirenniiniliuoksen, joka muuten on valmis ennen jakelua tehtävään tavalliseen loppukäsittelyyn, pH säädetään 7 66727 edellä määrättyyn käsittelyarvoon (esim. pH 5) ja sitten liuos sekoitetaan peroksihappoliuoksen kanssa sopivassa lämpötilassa peroksihapon määrän ollessa edellämainitussa moolisuhteessa mikrobirenniiniliuoksen kokonaisproteiinimäärään. Seoksen annetaan tämän jälkeen reagoida kunnes haluttu destabilointi-taso on saavutettu, esimerkiksi 4 tuntia. Termisesti destabi-loituun entsyymituotteeseen voidaan kohdistaa tavalliset lop-pukäsittelyoperaatiot, esimerkiksi suodatus, pH:n säätö ja yksikköentsyymiaktiivisuuden säätö standardoidulle tasolle jne.
Keksintöä selostetaan yksityiskohtaisemmin seuraavien esimerkkien avulla.
Seuraavissa esimerkeissä käytetään läntöaineena renniinikon-sentraattia, joka muuten valmistettiin brittiläisen patentin n:o 1 108 287, "2. Pilot plant experiment" mukaan, paitsi että kasvatusliuos konsentroitiin sellaiseen aktiivisuuden arvoon, että se vastaa noin 1 %:sta puhtaan entsyymin liuosta (Comptes Rendus des Travaux du Laboratoire Carlsberg, (1970) voi. 37, n:o 14, 301-325). Tätä konsentraattia kutsutaan seuraavassa lyhyesti "RENNILASE 46”:ksi. Konsentraatin aktiivisuus on noin 50 000 Rennet-yksikköä/ml (tai 50 000 S yksikköä/ml).
8 66727
Esimerkki 1 5 ml "Rennilase 46":a laimennettiin 15 ml:ksi NaCl:a lisättäessä, kunnes NaCl:n pitoisuus on 12 % seoksessa. Sitten lisättiin 50 ^ul 37 %:sta peroksietikkahappoa (sisältää 3,8 % H202) ja samalla säädettiin pH 2,5:ksi 4-n suolahapolla.
Seoksen annettiin reagoida 25°C:ssa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen se neutraloitiin pH 7:ään 4-n NaOH:lla. Saavutettu aktiivisuus oli noin 20 % ja puoliintumisaika 55°C:ssa aikaisemmin mainituissa olosuhteissa alle 5 minuuttia, joka vastaa vähintään 13°C destabilisaatiota.
Esimerkki 2 150 ml "Rennilase 46":a laimennettiin 150 ml:11a vettä ja jaettiin kolmeen 100 ml:n osaan, joiden pH-arvot säädettiin 3:ksi, 5:ksi ja 7:ksi. Sopivassa lämpötilassa voimakkaasti sekoittaen lisättiin 300 ^,ul kaupallista 25 %:sta peroksietikkahappoa (1 mmooli) jokaiseen kolmeen näytteeseen, joiden pH:t samanaikaisesti tarkastettiin lisäämällä 4-n NaOH:a. Näytteitä säilytettiin 4°C:ssa yli yön ennen analysointia. Koe toistettiin, mutta tällä kertaa peroksietikkahapon määrää vähennettiin 0,5 mmooliin lisäämällä 750 ^ul 5 %*sta peroksietikkahappo-liuosta.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
pH Peroksietik- Aktiivisuus- Puoliintumis- Destabi-kahapon määrä, saanto, aika 55°C:ssa, lisaatio,
mmoolia % pH 6,0, min °C
3 0,5 105 4,9 13 5 0,5 106 5,6 13 7 0,5 84 7,4 12 3 1 86 3,0 14 5 1 103 3,0 14 71 84 3,7 14
Esimerkki 3 150 ml "Rennilase 46":a laimennettiin 150 ml:11a vettä ja jaettiin kolmeen 100 ml:n osaan, joiden pH-arvot säädettiin 3:ksi, 5:ksi ja 7:ksi. Sopivassa lämpötilassa lisättiin sekoittaen 1 ml 1 M kaliummonopersulfaattia jokaiseen kolmeen näytteeseen, joiden pH:t tarkastettiin. Näytteitä säilytettiin 66727 9 4°C:ssa yli yön ennen analysointia.
Koe toistettiin, mutta tällä kertaa lisättiin 2 ml 1 M kalium-monopersulfaattia joka näytteeseen.
Tulokset on esitetty tauraavassa taulukossa.
pH KHSOcsn Aktiivi- Puoliintumis- Destabili- määra, suussaanto, aika 55°C:ssa, saatio, _ mmoolia %_ pH 6,0, min _ 3 1 105 53 8 5 1 112 58 8 7 1 103 41 8 3 2 102 32 9 5 2 106 30 9 7 2 97 16 10
Esimerkki 4
Kuusi 50 ml:n "Rennilase 46" näytettä laimennettiin 50 ml:11a vettä ja niiden pH-arvo säädettiin 5:ksi. Näihin kuuteen näytteeseen lisättiin voimakkaasti sekoittaen 75, 150, 300, 450, 600 ja 750 ^ul 5 %:sta peretikkahappoa (sisältää 0,6 % ja samalla pH-arvo tarkastettiin 5:ksi 4-n NaOH:lla. Seosten annettiin reagoida huoneenlämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen otettiin 1 ml:n näytteet analysoitaviksi.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
Peretikkaha- Saanto Puoliintumis- Destabili- pon määrä, % aika 55°C:ssa, saatio mmoolia_ _ pH 6,0, min °C_ 0,05 104 1045 1 0,1 106 313 4 0,2 105 45 8 0,3 106 14 11 0,4 102 8 12 0,5 102 6 13
Esimerkki 5
Kolme 50 ml:n "Rennilase 46" näytettä laimennettiin 50 ml:lla vettä ja niiden pH-arvo säädettiin 5:ksi. Yhteen näytteeseen lisättiin 0,55 ml, toiseen 1,10 ml noin 0,46 M permuurahais- 10 66727 happoa (0,1 M H202) voimakkaasti sekoittaen ja samalla säädettiin pH 5:ksi 4-n NaOHrlla. Kolmanteen näytteeseen lisättiin 2,2 ml noin 0,45 M permuurahaishappoa, joka on neutraloitu kylmällä 4-n NaOH:lla.
Seosten annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 2 1/2 tunnin ajan, jonka jälkeen otettiin 1 ml:n näytteet analysoitaviksi.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
Permuurahais- Saanto, Puoliintumis- Destabili- hapon määrä, % aika 55°C:ssa, saatio, mmoolia_ _ pH 6,0, min °C_ 0,25 (hapan) 86 8,8 12 0,5 (hapan) 70 3,4 14 1,0 (neutraali) 97 6 13
Esimerkki 6
Kaksi 50 ml:n "Rennilase 46" näytettä laimennettiin 50 ml:11a vettä ja niiden pH-arvo säädettiin 5:ksi. Yhteen näytteeseen lisättiin 5 ml noin 0,2 M perpropionihappoa (0,1 M H2C>2) ja samalla säädettiin pH 4-n NaOHrlla. Toiseen näytteeseen lisättiin 5 ml noin 0,2 M perpropionihappoa, joka on etukäteen neutraloitu.
Koe toistettiin, jolloin käytettiin reagenssina 5 ml noin 0,2 M pervoihappoa (0,1 M H202).
Seosten annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 2 tunnin ajan, jonka jälkeen otettiin 1 ml:n näytteet analysoitaviksi.
Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
Reagenssi Määrä Saanto, T./2 55°C:ssa, Destabili- mmoolia % pH 6,0, min gaatio, _ noin _ __ _
Perpropionihappo 1 88 <3 >14
Perpropionihappo, neutraali 1 106 <3 >14
Pervoihappo 1 82 <3 >14
Pervoihappo, neutraali 1 102 <3 >14
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK145779 | 1979-04-09 | ||
| DK145779A DK145779A (da) | 1979-04-09 | 1979-04-09 | Fremgangsmaade til termisk destabilisering af mikrobiel osteloebe |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI801029A FI801029A (fi) | 1980-10-10 |
| FI66727B true FI66727B (fi) | 1984-08-31 |
| FI66727C FI66727C (fi) | 1984-12-10 |
Family
ID=8105039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI801029A FI66727C (fi) | 1979-04-09 | 1980-04-01 | Foerfarande foer destabilisering av mikrobrennin |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4591565A (fi) |
| AR (1) | AR219449A1 (fi) |
| AU (1) | AU525581B2 (fi) |
| BE (1) | BE882690A (fi) |
| CA (1) | CA1135639A (fi) |
| CH (1) | CH648347A5 (fi) |
| DE (1) | DE3013207C2 (fi) |
| DK (1) | DK145779A (fi) |
| ES (1) | ES8103932A1 (fi) |
| FI (1) | FI66727C (fi) |
| FR (1) | FR2453896A1 (fi) |
| GB (1) | GB2045773B (fi) |
| IT (1) | IT1148253B (fi) |
| NL (1) | NL191024C (fi) |
| NZ (1) | NZ193350A (fi) |
| SE (1) | SE446540B (fi) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0027834A1 (en) * | 1979-10-24 | 1981-05-06 | Rapidase B.V. | Thermally sensitive microbial rennet, a process for its preparation and its application for cheese preparation |
| US4722900A (en) * | 1986-01-17 | 1988-02-02 | Miles Laboratories, Inc. | Method for increasing the milk clotting activity of thermolabile rhizomucor pusillus rennet |
| US5145776A (en) * | 1987-01-14 | 1992-09-08 | President & Fellows Of Harvard College | Method of using T7 DNA polymerase to mutagenize and fill-in DNA |
| US5266466A (en) * | 1987-01-14 | 1993-11-30 | President And Fellows Of Harvard College | Method of using T7 DNA polymerase to label the 3' end of a DNA molecule |
| US4946786A (en) * | 1987-01-14 | 1990-08-07 | President And Fellows Of Harvard College | T7 DNA polymerase |
| US4795699A (en) * | 1987-01-14 | 1989-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | T7 DNA polymerase |
| US4942130A (en) * | 1987-01-14 | 1990-07-17 | President & Fellows Of Harvard College | T7 DNA polymerase |
| US4994372A (en) * | 1987-01-14 | 1991-02-19 | President And Fellows Of Harvard College | DNA sequencing |
| US4853329A (en) * | 1988-06-27 | 1989-08-01 | Miles Inc. | Stabilization of microbial rennet |
| US6010729A (en) | 1998-08-20 | 2000-01-04 | Ecolab Inc. | Treatment of animal carcasses |
| US20040043112A1 (en) * | 2002-04-18 | 2004-03-04 | Novozymes North America, Inc. | Meat tenderization |
| US6149950A (en) * | 1999-07-22 | 2000-11-21 | Novo Norolisk A/S | Meat tenderization |
| US7150884B1 (en) | 2000-07-12 | 2006-12-19 | Ecolab Inc. | Composition for inhibition of microbial growth |
| US7316824B2 (en) * | 2000-12-15 | 2008-01-08 | Ecolab Inc. | Method and composition for washing poultry during processing |
| US6514556B2 (en) * | 2000-12-15 | 2003-02-04 | Ecolab Inc. | Method and composition for washing poultry during processing |
| US6635286B2 (en) * | 2001-06-29 | 2003-10-21 | Ecolab Inc. | Peroxy acid treatment to control pathogenic organisms on growing plants |
| EP1448768B1 (en) | 2001-12-19 | 2006-03-08 | DSM IP Assets B.V. | Method for the inactivation of amylase in the presence of protease |
| US20050048166A1 (en) * | 2003-07-01 | 2005-03-03 | Novozymes A/S | Compositions and methods for tenderizing meat |
| US20050161636A1 (en) * | 2004-01-09 | 2005-07-28 | Ecolab Inc. | Methods for washing and processing fruits, vegetables, and other produce with medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| US7771737B2 (en) | 2004-01-09 | 2010-08-10 | Ecolab Inc. | Medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| US7507429B2 (en) * | 2004-01-09 | 2009-03-24 | Ecolab Inc. | Methods for washing carcasses, meat, or meat products with medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| US7504123B2 (en) * | 2004-01-09 | 2009-03-17 | Ecolab Inc. | Methods for washing poultry during processing with medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| US7887641B2 (en) * | 2004-01-09 | 2011-02-15 | Ecolab Usa Inc. | Neutral or alkaline medium chain peroxycarboxylic acid compositions and methods employing them |
| US8999175B2 (en) * | 2004-01-09 | 2015-04-07 | Ecolab Usa Inc. | Methods for washing and processing fruits, vegetables, and other produce with medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| CA2548629C (en) * | 2004-01-09 | 2015-04-28 | Ecolab Inc. | Medium chain peroxycarboxylic acid compositions |
| US7754670B2 (en) | 2005-07-06 | 2010-07-13 | Ecolab Inc. | Surfactant peroxycarboxylic acid compositions |
| US8075857B2 (en) | 2006-10-18 | 2011-12-13 | Ecolab Usa Inc. | Apparatus and method for making a peroxycarboxylic acid |
| US7547421B2 (en) * | 2006-10-18 | 2009-06-16 | Ecolab Inc. | Apparatus and method for making a peroxycarboxylic acid |
| US20140308162A1 (en) | 2013-04-15 | 2014-10-16 | Ecolab Usa Inc. | Peroxycarboxylic acid based sanitizing rinse additives for use in ware washing |
| US9752105B2 (en) | 2012-09-13 | 2017-09-05 | Ecolab Usa Inc. | Two step method of cleaning, sanitizing, and rinsing a surface |
| JP7334174B2 (ja) | 2018-02-14 | 2023-08-28 | エコラボ ユーエスエー インコーポレイティド | 膜からバイオフィルムおよび胞子を低減するための組成物および方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK51286C (da) * | 1934-10-26 | 1936-02-17 | Dansk Gaerings Industri As | Fremgangsmaade til Nedsættelse eller Udelukkelse af Virkningen af proteolytiske Enzymer. |
| AR216570A1 (es) * | 1978-05-22 | 1979-12-28 | Miles Lab | Procedimiento para disminuir la estabilidad termica de cuajo microbiano mucor |
| US4348482A (en) * | 1978-05-22 | 1982-09-07 | Miles Laboratories, Inc. | Process for decreasing the thermal stability of microbial rennet |
| DK145679A (da) * | 1979-04-09 | 1980-10-10 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til termisk destabilisering af mikrobiel osteloebe |
| JPS56500520A (fi) * | 1979-04-25 | 1981-04-23 |
-
1979
- 1979-04-09 DK DK145779A patent/DK145779A/da not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-04-01 FI FI801029A patent/FI66727C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 DE DE3013207A patent/DE3013207C2/de not_active Expired
- 1980-04-03 NZ NZ193350A patent/NZ193350A/xx unknown
- 1980-04-08 BE BE6/47131A patent/BE882690A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-04-08 AR AR280597A patent/AR219449A1/es active
- 1980-04-08 AU AU57210/80A patent/AU525581B2/en not_active Expired
- 1980-04-08 ES ES490362A patent/ES8103932A1/es not_active Expired
- 1980-04-08 IT IT48359/80A patent/IT1148253B/it active
- 1980-04-08 SE SE8002643A patent/SE446540B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-04-08 CA CA000349497A patent/CA1135639A/en not_active Expired
- 1980-04-08 GB GB8011485A patent/GB2045773B/en not_active Expired
- 1980-04-09 NL NL8002082A patent/NL191024C/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-04-09 CH CH2725/80A patent/CH648347A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-09 FR FR8008006A patent/FR2453896A1/fr active Granted
-
1982
- 1982-05-03 US US06/374,493 patent/US4591565A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2453896B1 (fi) | 1983-10-14 |
| ES490362A0 (es) | 1981-03-16 |
| IT1148253B (it) | 1986-11-26 |
| ES8103932A1 (es) | 1981-03-16 |
| FI801029A (fi) | 1980-10-10 |
| FR2453896A1 (fr) | 1980-11-07 |
| CH648347A5 (de) | 1985-03-15 |
| DK145779A (da) | 1980-10-10 |
| CA1135639A (en) | 1982-11-16 |
| US4591565A (en) | 1986-05-27 |
| NZ193350A (en) | 1982-05-31 |
| SE8002643L (sv) | 1980-10-10 |
| BE882690A (fr) | 1980-10-08 |
| GB2045773B (en) | 1983-02-23 |
| DE3013207A1 (de) | 1980-10-23 |
| NL8002082A (nl) | 1980-10-13 |
| IT8048359A0 (it) | 1980-04-08 |
| SE446540B (sv) | 1986-09-22 |
| NL191024C (nl) | 1994-12-16 |
| GB2045773A (en) | 1980-11-05 |
| NL191024B (nl) | 1994-07-18 |
| DE3013207C2 (de) | 1982-11-04 |
| FI66727C (fi) | 1984-12-10 |
| AR219449A1 (es) | 1980-08-15 |
| AU5721080A (en) | 1980-10-16 |
| AU525581B2 (en) | 1982-11-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI66727B (fi) | Foerfarande foer destabilisering av mikrobrennin | |
| FI95578C (fi) | Menetelmä geeniteknisesti valmistettujen, heterologisten, disulfidisiltoja käsittävien eukarioottisten proteiinien aktivoimiseksi prokariooteissa ilmentämisen jälkeen | |
| Fiermonte et al. | Abundant bacterial expression and reconstitution of an intrinsic membrane-transport protein from bovine mitochondria | |
| Wang et al. | Cyclopropane fatty acid synthase of Escherichia coli: deduced amino acid sequence, purification, and studies of the enzyme active site | |
| EP0438750B1 (en) | Lactoferrin hydrolyzate for use as an antibacterial agent | |
| Taura et al. | Determinants of the quantity of the stable SecY complex in the Escherichia coli cell | |
| Michaud et al. | Carboxy-terminal truncation of oryzacysatin II by oryzacytatin-insensitive insect digestive proteinases | |
| US4255454A (en) | Thermal destabilization of microbial rennet | |
| US4357357A (en) | Thermal destabilization of microbial rennet | |
| Sekine | Neutral Proteinases I and II of Aspergillus sojae: Isolation in Homogeneous Form Some Enzymatic Properties | |
| Doublet et al. | The glutamate racemase activity from Escherichia coli is regulated by peptidoglycan precursor UDP-N-acetylmuramoyl-L-alanine | |
| US4348482A (en) | Process for decreasing the thermal stability of microbial rennet | |
| Zolfaghari et al. | A high-molecular-mass neutral endopeptidase-24.5 from human lung | |
| Triantafillou et al. | Purification and properties of a membrane-bound L-asparaginase of Tetrahymena pyriformis | |
| Aguirre et al. | Oxidation of Neurospora crassa NADP-specific glutamate dehydrogenase by activated oxygen species | |
| GB2024828A (en) | Process for decreasing the thermal stability of microbial rennet | |
| US4530906A (en) | Microbial rennet having increased milk coagulating activity and method and method for production thereof | |
| ATE139796T1 (de) | Oxydation von glykolsäure zur herstellung von glyoxylsäure unter verwendung von transformierten mikrobiellen zellen als katalysator. | |
| EP1448768B1 (en) | Method for the inactivation of amylase in the presence of protease | |
| DK153230B (da) | Fremgangsmaade til termisk destabilisering af mikrobiel osteloebe | |
| Haque et al. | Milk peptides; effect on the enzymatic hydrolysis of sodium caseinate | |
| Ramilo et al. | Overexpression, Purification, and Characterization of Tyrosine-Sensitive 3-Deoxy-d-arabino-heptulosonic Acid 7-Phosphate Synthase fromEscherichia coli | |
| Shipe et al. | Enzymatic modification of milk flavor | |
| Madkor et al. | Plasmin activity in buffalo milk | |
| KR100337009B1 (ko) | 항산화 활성이 증진된 사람혈장알부민 및 그의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: GIST-BROCADES B.V. |
|
| MA | Patent expired |
Owner name: GIST-BROCADES B.V. |