FI65781C - Analogifoerfarande foer framstaellning av terapeutiskt verkande n1-glukofuranosid-6-yl-n3-nitroso-urinaemnen - Google Patents

Description

ΓβΙ ««kuulutusjulkaisu rc no Λ jmj£ [B] (11)UXLÄCGNINessitlll|IT 65 781 ιβΛλΑ C Patentti ajonneity 10 C7 1904 ' * Patent ceddelat (51) Kv.lluV.CI.3 C 07 h 5/06 SUOMI-FINLAND (21) PxanttllwkwiMM — Patmamaeknlng 781779 (22) Htkumiipllvl —AmBknlngadtg 05.06.78 (23) Alkuptlvt—Glltlghättdag 05.06.78 (41) Tulkit julkhekil — Riivit offantllg 16.12.78 (‘Mäntti· ja rekitt eri hallitut .... m n ί ai,

* , . (44) Nlhtiviktlpanon }t kuuLlutkkiaun pvm. — 30.03.oH

PMent· och reglsterstyreleen ArwOkan uthgd odi utUknftun pubUeurad (32)(33)(31) Pyydutty ttuolkuui—Bugtrd prtorltt 15.06.77

Sveitsi-Schweiz(CH) 7359/77 (71) Ciba-Geigy AG, CH-4002 Basel, Sveitsi-Schweiz(CH) (72) Jaroslav Stanek, Birsfelden, Sveitsi-Schweiz(CH) (7*0 Oy Jalo Ant-Wuorinen Ab (5*0 Anal ogiamenetelmä terapeuttisesti vaikuttavien -glukofuranosid—6 — -yyli-N--nitrosovirtsa-aineiden valmistamiseksi - Analogiförfarande för framställning av terapeutiskt verkande N -glukofuranosid-6-yl--N^-ni troso-urinMmnen Tämän keksinnön kohteena ovat analogiamenetelmät terpeuttisesti vaikuttavien -glukofuranosid-ö-yyli-N^-nitrosovirtsa-aineiden valmistamiseksi , joiden kaava on

NO

CH2 - nh - CO - n - Rg r5 - O - CH ^ O .

'SvO — R·. I

K?-R* f 6 - r2 jossa R1 tarkoittaa vetyä tai alempialkyyliä, R2 vetyä, alempialkyy-liä tai alempialkanoyyliä tai R1 ja R2 yhdessä tarkoittavat alempi-alkylideeniä, R^ ja R5 tarkoittavat kulloinkin alempialkyyliä ja Rg mahdollisesti halogeenilla substituoitua alempialkyyliä.

Seuraavassa sisältävät "alemmat" muunnetut tähteet, mikäli ei ole erikoisesti mainittu, mieluimmin enintään 7, ensisijassa enintään 4 hiiliatomia.

2 65781

Alempialkyyli on esim. isopropyyli, suoraketjuinen tai haarautunut, mielivaltaisessa asemassa sitoutunut butyyli, pentyyli, heksyy-li tai heptyyli ja ennenkaikkea metyyli, etyyli tai n-propyyli.

Halogeenilla substituoitu alempialkyyli voi sisältää yhden, kaksi tai useampia halogeeniatomeita.

Alempialkylideeni on esim. 2-butylideeni-, 3-pentylideeni- ja ensisijassa isopropylideenitähde.

Alempialkanoyyli on 2-18 hiiliatomia sisältävä, kuten asetyyli tai propionyyli.

Halogeeni on esim. fluori, kloori tai bromi.

Uudet yhdisteet voivat esiintyä anomeeriseosten tai puhtaiden a- tai β-anomeerien muodossa.

Uusilla yhdisteillä on arvokkaita farmakologisia ominaisuuksia, erityisesti niillä on erittäin hyvä teho eräisiin, laadultaan erilaisiin siirrekasvaimiin ja leukemiaan, kuten osittain myös virus-indusoituun leukemiaan. Niinpä ne estävät vahvasti 25-500 mg/kg:n i.p. annoksilla kasvainten kasvua hiirillä, joilla on esim. Ehrlich-Ascites-karsinooma tai kiinteä Harding-Passey-melanooma, ja rotilla, joilla on esim. Yoshida-Ascites-sarkooma. Analogiset annokset pidentävät kontrolleihin nähden elinaikaa hiirillä, joilla on esim. leukemia L 1210 tai Rauscher-leukemia.

Niinpä esim. 50-250 mg/kg:n i.p. annoksilla etyyli-6-desoksi- 3,5-di-0-metyyli-6-(3-metyyli-3-nitroso-ureido)-β-D-glukofuranosidia päästään mainittujen kasvainten 80-100 %:seen kasvun estoon ja leukemian L 1210 kohdalla elinajan pitenemiseen noin 60 %:lla sekä pero-raalisella annostuksella Rauscher-leukemiaa sairastavilla hiirillä elinajan pitenemiseen noin 150 %. Sietokyky on hyvä. Sivuvaikutuksia ei ole todettu pitkilläkään käsittelyjaksoilla. Myöskään normaaleilla eläimillä ei ole todettavissa 3-viikkoisen peroraalisen hoidon jälkeen makroskooppisia elinmuutoksia.

Julkaisussa C.A. 86, 16911 j kuvataan kasvaimia vastustavan vaikutuksen omaavia 5-(nitrosoureido)-5-deoksi-D-ribofuranoosi-johdannaisia. Tämän tyyppiset yhdisteet eroavat rakenteeltaan tämän hakemuksen yhdisteistä, koska niissä on ribofuranoosirunko kun taas keksinnön mukaisissa yhdisteissä on nähden paikalla glukofuranoosirengas. Kuitenkin on viitatun kirjallisuudenkohdan mukaisesti saatavaa metyyli-5-deoksi-2,3-0-isopropylideeni-5-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-S-D-ribo-furanosidia käytetty tunnettuna vertailuaineena II oheisessa koese-lostuksessa.

3 65781

Julkaisussa J.Med.Chem. 1_7, 392-396 (1 974) kuvataan leukemian hoidossa käytettäviä streptosotosiinianalogeja. Tarkemmin sanottuna se käsittelee aminosokereiden 3-metyyli-3-nitrosoureidojohdannaisia, jotka on sivulla 393 määritelty tarkemmin. Sivulla 395, oikealla palstalla kuvataan 3-deoksi-1,2-0-isopropylideeni-3-(3-metyyli-3-nitroso-ureido)-α-D-ribofuranoosi, joka on rakenteellisesti hyvin lähellä yllä esitettyä koeselostuksessa yhdisteeksi II merkittyä metyyli-5-deok-si-2,3-0-isopropylideeni-5-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-β-D-ribofura-nosidia, niin että tuntuu oikeutetulta olettaa, että viitatuissa kir-jallisuudenkohdissa mainituilla yhdisteillä on pääasiassa samanlaisia ominaisuuksia kuin koeselostuksen vastaavalla yhdisteellä II. Mainitussa kirjallisuusviitteessä kuvatun yhdisteen mukaanottaminen koese-lostukseen ei täten näytä välttämättömältä, kuitenkin on viitattu kir-jallisuudenkohta tekniikan tasona riittävästi huomioitu, varsinkin ottaen huomioon sen, että siinä kuvatut aminosokerit eroavat liiaksi rakenteeltaan keksinnön mukaisiin yhdisteisiin perustuvasta glukofura-noosimuodosta, eikä sen vertaileva tutkimus näissä puitteissa siten voi tulla kysymykseen.

Saksalaisessa patenttijulkaisussa 25 30 416 kuvataan potentiaalista antituumoriaktiviteettia omaava alkyyli-desoksi-(3-(2-kloorietyy-li)-3-nitroso-ureido)-D-glukopyranosidi siinä määriteltyine yleisine kaavoineen. Koska se käsittelee D-glukopyranoosirunkoon perustuvia yhdisteitä, eroavat sellaiset yhdisteet rakenteeltaan keksinnön mukaisista, D-glukofuranoosityyppisistä yhdisteistä, niin että välitöntä vertailua näiden kahden yhdisteluokan välillä ei ole tehty. Tässä viitataan kuitenkin KLOROSOTOSIINI-nimellä tunnetuksi tulleeseen ja viitteessä J.Med.Chem. J_8, 104-106 (1975) kasvaimia vastustavana yhdisteenä kuvattuun 2-(3-(2-kloorietyyli)-3-nitrosoureido)-2-deoksi-D-glu-kopyranoosiin, joka eroaa saksalaisessa patenttijulkaisussa 25 30 416 kuvatusta yhdisteestä ainoastaan siten, että siinä olevassa kaavassa la R on vety. Oheisessa koeselostuksessa on KLOROSOTOSIINI vertailu-yhdisteenä. Huomioonottaen KLOROSOTOSIININ ja saksalaisessa patenttijulkaisussa 24 30 416 kuvatun yhdisteen välisen rakenteellisen yhtäläisyyden, voidaan hyvällä syyllä otaksua, että näiden kahden yhdiste-luokan välillä ei ole merkitsevää vaikutuseroa, niin että viitatussa saksalaisessa patenttijulkaisussa kuvattujen yhdisteiden mukaanottaminen koeselostukseen ei näytä välttämättömältä.

4 65 781

Koeselostus

Seuraavat yhdisteet on tutkittu niiden kasvaimia vastustavan vaikutuksen suhteen hiirillä: I. etyyli-6-deoks i-3,5,-di-0-metyyli-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-ct-D-glukof uranosidi; II. metyyli-5-deoksi-2,3-0-isopropylideeni-5-(3-metyyli-3-nitroso-ureido)-$-D-ribofuranosidi; (tunnettu Chemical Abstracts, ()6, 16911 j, 1977); III. 2-(3-(2-kloorietyyli)-3-nitrosoureido)-2-deoksi-D-glykopyranoo-si; (tunnettu J.Med.Chem. JJ3, 104-106 (1975) ja nimellä KLOROSOTO-SIINI).

A. Koemenetelmät 1) Naarashiirien ryhmiin, kanta C57/BLf/BOM(SPF)C, paino 18-22 g, siirrostettiin 0,2 ml B16-melanooma-kasvaimen suspensiota. 24 tunnin kuluttua suoritetusta kasvainsiirrosta annettiin jokaiselle eläimelle joko yhden kerran LD^iä vastaava määrä koeyhdistettä tai 1/4 LD^jä vastaavasta määrästä kymmenen päivän aikana kerran päivässä, joko p.o. tai i.p. Koeyhdisteeit I ja III annettiin 0,5 %:sena vesipitoisena suspensiona karboksimetyyliselluloosassa, koeyhdiste II seesamiöljyliuoksessa. 22 päivän kuluttua suoritetusta kasvain-siirrosta koe lopetettiin.

Taulukossa I on esitetty yhden antokerran tulokset, taulukossa II kymmenen päivän aikana annettujen kymmenen antokerran tulokset.

Tulosten tilastollinen tulkinta saatujen kasvainpainojen perusteella suoritettiin Bartlett'in ja Dunnett'in selittämillä menetelmillä.

2) Suurin siedetty annos

Kolmen NMRI-naarashiiren ryhmille, hiiren paino 18-20 g, annettiin kulloinkin annos 2500, 1250, 500, 250, 50, 25 ja 12,5 mg/kg p.o. ja i.p.

Suurimmaksi siedetyksi annokseksi merkittiin se annos, jolla kaikki kunkin ryhmän kolmesta hiirestä jäivät eloon.

Tulokset esitetään taulukossa III.

5 τ— r— ΐ— I o o o 4-1 UI - » » h >1 oo o £ c; 7 o 1

AS >ί <#> VVI VI I w ' O I

g > Φ <D CU Λ Λ

S Ui (N (N (N

I ••H :(¾ I M C AS :0 .H Q) 4 0#

C «14 M

•H C »O 44 ' ε o e c c

d) +J O) O -H

c-prHAS-HovtNm cm o o (UnJQJ E LT) TT r» t- C G -μ G ·Η I I | | | <4 G 44 -h :m

•H G) *H *H rH

nj cm > tn E <u

G •H

0 0) O O

EP ooo oo oo EH oo vo - «sr- - ίΰ — » t— κ i— G O in 00 x— TT (Tl T—

O' G III II I

•H OOO O O O

0(0 <N O 1— 00 (N O

G C4 SS» SS s h i— o in o ro n «f a. i

•H

G 4! O o m o oo o 0) ui > io m m o m m E 0) G sss SS s •H &C 1¾ CM H· 00 »— Γ" 00 (¾ 44 > (0

Ui I >

<0 G I -H

* (¾ Ai M

Ό ·Η <β o i COE inr-t^POOr- o (0 G it n co oo to ,γ ro en

-P *H φ SSS S S S

C/i T3 A! r— CM r— -P r— r— (N

G)

I E

•H ·Η Λ! O m· h h w in ·<τ oo

Ui > (N VO ^ rH CM CM O

Φ G l X ·> s *><!) » s s &iflj ro^r» CM H' 00

H

A

iii λ;

1 G 4J G -H

-H ·Η φ *r4 (¾ H X 4 W :«J «

H H >iH G

O 3 « Φ :¾ 4 4 X :(¾

w G E

nj G G Φ oo «a· *— to σι t— r-H0)(0T-lG t- T- T- •H φ (¾ >i φ

Eh Ui 44 44 44 —s · oo r' oo o o m vo m tn *- · cm r- cm 0 Q a r-

C GI

G II

«f ·— - -P

1 :cö 4J

(ö en g φ

4J A · :0 E

G\a o m r» 44-H

Φ O' · o T- cm -p :(¾

A E -H vo ro :(¾ rH

M E ω

„ Φ -H

O G rH rH

A 44 dl 1)H

AS 44 44 44 o

P -H UI , 44 G

iH A -H -H 44

P -PT3 M M M M M M Ui G

Ό P43 HHHHtiOO

Eh Eh >» MM AS AS

6 I o o o -M CO * - - •p >1 o o o

M >1 äf> V V I I V I

CL) 5) Pj Dj Dj ϋ 5 7 8 1

S tn c\i 04 (N

I -H

:tÖ I i—l

G M -O M

<1) +1 O#

G <Ö -P M

-H a ;<Ö -P >

£ 3 £ C C

CU -P CU O -H

C+Ji-tAi-HOOOT-mm 0

OJiOd) £ co <f N r Lp C U 4J C Ή I I I I I

0) 5-{ -P ·Η Mil Ή CJ *P Ή r—l ιΰ Pj > tn e a; c.

OH) o tp o oo r-t O O O rr O „ ttfiö oo r' r- ^ T- *_

5-1 O ' - - O

Ö\ C 1- h dl r (O I

-p tilli i o <Ti O O O O O o

c ft OCNCNCTSCN

_j k >« i, «. S _ — P _ _ _ 00 O t— o O t—

Qj l cXio o CU tn > Γ" CO r- LO 1 fNj e ai l, * * - · κ H « S ortr-r-ro «

«S

> tn i g ttf U I 2 x rt * « £ oo o σ> ro <* o | ,n

Sai® “1 't “I ” ° 5 -

W-tf* ° - N ^ % (N

. CU en

•h e M

Z o r OI <f lO jf -ri ^

'TSi' en ro <r> r- :ιΰ ~ CP

S W 1X ..... ° e X « O ^ to to r0 Q) ^ m H 0 I I I β

i c p g * S

H -H ai -h d ® * £ ό Oj O Dj Dj 2 32^.¾ ^ Λ·Η ·Η

Sg g S ^ ^ §§ S3 £ 3 S £'£§ ^ *" *" -s ^ ^ .

B tn -P p -P C

G

I -H

i tn — j-i •H :rc O · 3 , :<U - > j—0 lp i- tn 3

Djta-HQ.T-cPkn cd G MC tJ' Qj ro t- o m fttr r- λ; m -3

h C :<U P

tn ro (0 CP*- £ <U

o p e X · ;o £

GGPOCtj O oo P -P

G »O qj :t0 T- . m f-' P mö h m < > X tn ~ -P T- MC rP h H S CU I—l

Cl) -rl

O 3 i—I cp O

-Mi -p <U CU r-t Q) ..Vi +j p 4-> o λ; +j 3 t-ι en i p m G tn

•“t ·* -P -H P H -H H H H

3 PT5 MMMMMMtnG G T3 MH

to 3 .C MMMMMTJOtUX; H

H E"1 >J H M X £j >1 7 65781 B. Johtopäätökset 1) Kerta-annos päivässä, LD^, p.o.:

Hyvin siedettynä esti ainoastaan yhdiste I merkittävästi kasvaimen kasvua. Yhdiste III osoittautui tehottomaksi ja yhdiste II aiheutti käsittelyn toisen ja neljännen päivän välillä korkean kuolleisuuden. Eloonjääneissä eläimissä ei tapahtunut minkäänlaista kasvaimen kasvun estoa.

2) LD.j ^-suuruisella kerta-annoksella intraperitonaalisesti annettuna oli yhdisteiden I ja III vaikutus suurinpiirtein yhtä voimakas, kun taas yhdiste II oli myös tässä tehoton.

3) Kun annettiin oraalisesti kymmenen päivän aikana kymmenen 1/4 LD^Q-suuruista annosta, oli yhdiste I selvästi tehokkaampi kuin yhdiste III, kun taas yhdisteellä II oli ainoastaan rajoitettu, ei-merkitsevä vaikutus.

4) Kun annettiin intraperitonaalisesti kymmenen päivän aikana kymmenen 1/4 LD1^-suuruista annosta, oli pääasiassa yhdisteellä I hyvin siedettynä merkitsevä vaikutus, kun taas yhdiste II oli tehoton ja yhdisteellä III suoritettuna koetta ei voitu analysoida aineen suuren toksisuuden vuoksi.

5) Kun lisäksi otetaan huomioon, että suurin siedetty annos oraalisesti annettuna on yhdisteellä I kaksi kertaa niin suuri kuin yhdisteellä II, intraperitonaalisesti annettuna yhdisteellä I tämä annos on suunnilleen yhtä suuri kuin yhdisteellä II, mutta n. 20 kertaa suurempi kuin yhdisteellä III, on yhdisteen I ylivoimaisuus yhdisteisiin II ja III nähden vieläkin selvempi.

Ensisijassa on mainittava yhdisteet, joissa ja tarkoittavat metyyliä, Rg tarkoittaa metyyliä tai kloorietyyliä ja R1 vetyä, metyyliä, etyyliä tai propyyliä ja R2 vetyä tai R^ ja R2 yhdessä iso-propylideenitähdettä.

Uusia yhdisteitä saadaan, jos kaavan II mukaista yhdistettä, CH2 - NH - CO - NH - Rg R5 - O - CH O '

I - R II

o - r2 8 65781 nitrosoidaan sinänsä tunnetulla tavalla.

Tällöin saatetaan reagoimaan mieluimmin kaavan II mukainen yhdiste typpihapokkeen, sen suolojen tai johdannaisten kanssa. Tähän käytetään mieluimmin typpihapokkeen suolaa, kuten alkali- tai maa-alkali- erikoisesti natriumsuolaa ja tämän jälkeen poistetaan typpi-hapoke siitä hapolla, kuten mineraalihapolla, esim. suolahapolla, rikkihapolla tai typpihapolla, jollain orgaanisella hapolla, kuten hiilihapolla, etikkahapolla tai jollain sulfonihapolla, esim. alem-pialkaanisulfonihapolla, kuten metaani- tai etaanisulfonihapolla tai sulfonihapporyhmiä sisältävällä ioninvaihtajalla, kuten Amberlite IR 120. Myös typpihapokkeen anhydridiä voidaan käyttää, erityisesti seka-anhydridiä, esim. typpihapon tai halogeenivetyhapon kanssa.

Jos välttämätöntä, työskennellään liuottimen läsnäollessa, jolloin sellaisena voidaan käyttää myös käytettävissä olevaa orgaanista happoa. Reaktio suoritetaan mieluimmin alennetussa lämpötilassa, esim. -10 - 30°C:ssa.

Tässä menetelmässä käytetyt lähtöaineet ovat uusia. Ne ovat valmistettavissa sinänsä tunnetulla tavalla vastaavasta, 6-asemassa subs-tituoimattomasta glukofuranoosista, esim. saattamalla reagoimaan reak-tiokykyiseksi esteriksi, esim. alkaanisulfonihapon, aryylisulfoniha-pon tai halogeenivetyhapon kanssa, tämän jälkeen atsidiksi ja pelkistämällä näin saatu atsidi 6-desoksi-6-amino-glukofuranoosiksi, joka kondensoidaan sitten sopivan N-Rg-karbamiinihappojohdannaisen kanssa, kuten vastaavan isosyanaatin kanssa 6-desoksi-6-(3-Rg-ureido)-gluko-furanoosiksi. Kuten edellä on mainittu, suoritetaan nämä reaktiot sinänsä tunnetulla tavalla.

Toinen menetelmä uusien nitroso-virtsa-aineiden valmistamiseksi perustuu siihen, että saatetaan reagoimaan kaavan III mukainen yhdiste ch2 - NH2 R5 - O - CH ^0 ^

- R3 III

o - R2 9 65781 N-nitroso-N-Rg-karbamiinihapon reaktiokykyisen johdannaisen kanssa.

Reaktiokykyinen johdannainen voi esimerkiksi olla happoanhyd-ridi, mieluimmin sekahappoanhydridi, kuten happoatsidi tai aktivoitu esteri. Aktivoituina estereinä on mainittava erityisesti syaanime-tyyliesteri, karboksimetyyliesteri, paranitrofenyylitioesteri, para-nitrofenyyliesteri, 2,4,5-trikloorifenyyliesteri, pentakloorifenyy-liesteri, N-hydroksi-sukkiini-imidiesteri, N-hydroksiftaali-imidies-teri, 8-hydroksikinoliiniesteri tai N-hydroksipiperidiiniesteri.

Tämä reaktio suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla, mieluimmin liuottimessa, kuten vedessä, halogenoidussa hiilivedyssä, esim. dikloori- tai trikloorietaanissa, eetterissä, kuten dietyylieette-rissä, tetrahydrofuraanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfok-sidissa, tai mahdollisesti alkyloidussa pyridiinissä, kuten pyridii-nissä, pikoliinissa, lutidiinissa tai kinoliinissa.

Käytetyt lähtöaineet ovat tunnettuja tai ovat valmistettavissa sinänsä tunnetulla tavalla. Niinpä voidaan kaavan III mukaista amiinia saada vastaavasta, 6-asemassa substituoimattomasta glukofuranoo-sista, esim. saattamalla reagoimaan reaktiokykyiseksi esteriksi, esim. aikaani- tai aryylisulfonihapon kanssa tai halogeenivetyhapon kanssa, ja tämän jälkeen atsidiksi ja pelkistämällä näin saatu atsidi 6-desok-si-6-amino-glukofuranoosiksi.

Edelläkuvatut menetelmät voidaan suorittaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä, mieluimmin laimennus- tai liuotinaineiden läsnäollessa tai ilman niitä, jos välttämätöntä jäähdyttämällä tai lämmittämällä korotetussa paineessa ja/tai inertissä atmosfäärissä, esim. typpi-atmosfäärissä.

Uudet yhdisteet voivat olla puhtaina a- tai 8-anomeereinä tai anomeeriseoksina. Viimemainitut voidaan jakaa osiin fysikaalis-ke-miallisen eron perusteella sinänsä tunnetulla tavalla puhtaiksi ano-meereiksi, esim. kromatograafisella erotuksella, kuten ohutkerros-kromatografiällä tai millä tahansa muulla, sopivalla erotusmenetelmällä. Mieluimmin eristetään tehokkaampi anomeereistä.

Keksintö koskee myös niitä menetelmän suoritusmuotoja, joissa jokin lähtöaine muodostetaan reaktio-olosuhteissa tai sitä käytetään reaktiokykyisen johdannaisen tai suolan muodossa. Tällöin lähdetään mieluimmin sellaisista lähtöaineista, jotka johtavat menetelmänmukai-sesti edellä erikoisen arvokkaiksi kuvattuihin yhdisteisiin.

65781 10

Seuraavat esimerkit kuvaavat edelläkuvattua keksintöä; ne eivät kuitenkaan rajoita sitä piiriinsä millään tavoin. Lämpötilat on annettu Celsius-asteina.

Esimerkki 1: 0°:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 60,7 etyyli-3,4-di-0-metyyli-6-deoksi-6-(3-metyyliureido)-a-D-glukofuranosidia 500 ml: ssa vettä ja 15 ml:ssa jääetikkaa, lisätään tiputtamalla 15 minuutin kuluessa liuos, jossa on 15,8 g natriumnitriittiä 80 ml:ssa vettä, sekoitetaan tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan ja annetaan seistä 16 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Kiteytyvä tuote imusuodate-taan, pestään pienellä määrällä jäävettä ja kuivataan. Emälipeä uutetaan kloroformilla, orgaaninen faasi kuivataan magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislataan. Jäännös puhdistetaan pylväskromatograa-fisesti piihappogeelillä ja metyleenikloridi/etikkaesterillä (85:15), kiteinen tuote yhdistetään ensimmäiseen kiteytystuotteeseen ja kiteytetään uudelleen eetteri/petrolieetteristä. Etyyli-3,5-di-O-metyyli- 6-deoksi-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-α-D-glukofuranosidi sulaa 90°: ssa; R^-arvo on 0,45 piihappogeeliohutkerroslevyillä metyleeniklori-di/metanoli-systeemissä (15:1); (a)p° = +43° - 1° (kloroformi, c = 1,465) .

Lähtöaine voidaan valmistaa seuraavasti:

Liuokseen, jossa on 207 g 3,5-di-0-metyyli-l,2-O-isopropyli-deeni-a-D-glukofuranoosia 600 ml:ssa absoluuttista pyridiiniä, lisätään sekoittaen ja ulkoisesti jäähdyttäen tipoittain 45 minuutin kuluessa 67 ml metaanisulfonihappokloridia ja annetaan seistä 4 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Lisätään 50 ml vettä ja haihdutetaan pääosa pyridiinistä vielä 15 minuutin kuluttua. Jäännös liuotetaan eetteriin, eetteriliuos pestään vedellä, jääkylmällä 2-n suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja liuotinaine tislataan pois. Öljymäinen jäännös on 3,5-di-0-metyyli-l,2-0-isopropylideeni-6-0-mesyyli-a-D-glukofuranoosia, jonka R^-arvo on 0,35 piihappogeeliohut-kerroslevyillä metyleenikloridi/etikkaesterisysteemissä (85:15) .

240 g tätä tuotetta liuotetaan 1700 ml:aan N,N-dimetyyliform-amidia, siihen lisätään 142 g natriumatsidia ja 170 ml vettä ja sekoitetaan 3 tuntia 110°:ssa. Reaktioseos jäähdytetään, suodatetaan ja suodos haihdutetaan. Jäännös liuotetaan eetteriin, pestään vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislataan pois. Näin 11 65781 saadaan 6-atsido-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-l,2-0-isopropylideeni-a-D-glukofuranoosia kellertävänä öljynä, jonka Rf-arvo on 0,61 piihappo-geeliohutkerroslevyllä metyleenikloridi/etikkaesteri-systeemissä (85:15) ja optinen kierto (a)^ = -57° + 1° (kloroformi, c = 1,915).

193 g tätä yhdistettä 3500 mitään 1-n alkoholipitoista suolahappoa sisältävää liuosta seisotetaan 18 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen haihdutetaan pääosa liuottimesta vesisuihku-tyhjössä, jäännös liuotetaan eetteriin ja tämä liuos pestään vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Saatu anomeeriseos erotetaan pylväskromatograafisesti piihappogeelillä ja metyleeniklo-ridi/etikkaesterillä (85:15). Etyyli-6-atsido-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-a-D-glukofuranosidin R^-arvo on 0,32 piihappogeeliohutkerros-levyillä metyleenikloridi/etikkaesterisysteemissä (85:15) ja optinen kierto (a)^ = +56° +1° (kloroformi, c = 0,89). Vastaavan β-gluko-furanosidin R^-arvo on 0,11 samassa systeemissä.

21.9 g etyyli-6-atsido-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-a-D-glukofura-nosidia 200 ml:ssa etanolia pelkistetään vedyllä samalla kun läsnä on 2 g 5 %:ista palladium/hiiltä. Katalysaattorin suodattamisen ja alkoholin tislaamisen jälkeen saadaan etyyli-6-amino-6-dioksi-3,5-di-O-metyyli-a-D-glukofuranosidia kellertävänä öljynä.

74.9 g tätä öljyä 550 ml:ssa etanolia sisältävään liuokseen lisätään tipoittain liuos, jossa on 18,5 ml metyyli-isosyanaattia 60 mlrssa metyleenikloridia tunnin kuluessa ja reaktioseos haihdutetaan kuiviin. Saatu etyyli-6-deoksi-3,5-di-0-metyyli-6-(3-metyyli-ureido)-α-D-glukofuranosidi kiteytetään etikkaesteri/eetteristä; sul.p. 144°, (a)^ = +57° ^1° (kloroformi, c = 1,134) ja R^-arvo on 0,22 piihappogeelillä metyleenikloridi/metanolisysteemissä (15:1). Esimerkki 2: 0-5°:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 33,4 g 3,5-di-O-metyyli-6-deoksi-l,2-0-isopropylideeni-6-(3-metyyliureido)-a-D-gluko-furanoosia 280 mltssa vettä ja 8,0 mlrssa jääetikkaa, lisätään 30 minuutin kuluessa tipoittain liuos, jossa on 8,5 g natriumnitriittiä 40 ml:ssa vettä. Sekoitetaan tunnin ajan 0-5°:ssa ja 18 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen liuos uutetaan kloroformilla, orgaaninen faasi pestään vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös kromatografoidaan 1200 g:11a piihappo- 12 65781 geeliä metyleenikloridi/etikkaesterillä (85:15). Fraktiot, joiden Rf-arvo on 0,41 sisältävät 6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-l,2-0-isopropy-lideeni-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-α-D-glukofuranoosia ja ne haihdutetaan kuiviin; (°0β^ = "49° -1° (kloroformi, c = 1,127).

Käytetty lähtöaine voidaan valmistaa seuraavasti: 60,0 g 6-atsido-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-l,2-O-isopropylidee-ni-a-D-glukofuranoosia liuotetaan 600 ml:aan etanolia ja pelkistetään vedyllä samalla kun läsnä on 5 %:ista palladium/hiiltä. Katalysaattorin erottamisen ja liuottimen tislaamisen jälkeen saadaan 6-amino- 6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-1,2-O-isopropylideeni-a-D-glukofuranoosia värittömänä öljynä. 33,2 g tätä tuotetta liuotetaan 250 ml:aan etanolia ja siihen lisätään samalla sekoittaen, tipoittain 30 minuutin kuluessa liuos, jossa on 8,4 ml metyyli-isosyanaattia 25 ml:ssa mety-leenikloridia. Vielä 60 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos haihdutetaan kuiviin ja jäännös kiteytetään asetonista. Näin saatu 6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-1,2-0-isopropylideeni-6-(3-metyyliureido)-α-D-glukofuranoosi, jonka R^-arvo on 0,45 piihappogeelillä asetoni-systeemissä ja (a)p^ = -57° -1° (kloroformi, c = 1-987), sulaa 66- 69°:ssa.

Esimerkki 3: 0-5°:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 52,4 g etyyli-6-deoksi-3,5-di-0-metyyli-6-(3-metyyli-ureido)-3-D-glukofuranosidia 420 ml:ssa vettä ja 24,5 ml:ssa jääetikkaa, lisätään samalla sekoittaen tipoittain 45 minuutin kuluessa liuos, jossa on 25,4 g natrium-nitriittiä 130 ml:ssa vettä ja sekoitetaan samassa sisälämpötilassa 18 tunnin ajan. Tämän jälkeen uutetaan seos kloroformilla, pestään orgaaninen faasi vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös kromatografoidaan piihappogeelillä ja metylee-nikloridi/etikkaesterillä (85:15). Fraktiot, jotka sisältävät etyyli- 6-deoksi-3, 5-di-0-metyyli-6- (3-metyyli-3-nitrosoureido) -β-D-gluko-

2 Q

furanosidia, R^-arvo 0,15, puhdistetaan ja haihdutetaan kuiviin ! WD = -57° -1° (kloroformi, c = 1,858).

Käytetty lähtöaine voidaan valmistaa seuraavasti: 24 g etyyli-6-atsido-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-6-D-glukofurano-sidia liuotetaan 240 ml:aan metanolia ja pelkistetään vedyllä Selmalla, kun läsnä on 5 %:inen palladium/hiiltä. Katalysaattori suodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin. Saatu 6-amino-johdannainen saatetaan suoraan reagoimaan edelleen.

13 65781 39,2 g 330 ml:ssa etanolia sitä sisältävään liuokseen lisätään samalla sekoittaen tipoittain 40 minuutin kuluessa liuos, jossa on 10 ml metyyli-isosyanaattia 30 mlrssa metyleenikloridia ja seisotetaan huoneen lämpötilassa 16 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos haihdutetaan kuiviin ja jäännös liuotetaan etikkaesteriin. Tämä liuos suodatetaan aktiivihiilellä ja haihdutetaan kuiviin. Saatu öljy on etyyli-6-deoksi-3,5-di-0-metyyli-6~(3-metyyli-ureido)-β-D-glukofuranosidia, jonka R^-arvo on 0,10 piihappogeelillä metyleeni-kloridi/metanolisysteemissä (15:1).

Esimerkki 4:

Analogisella tavalla, lähtien vastaavista lähtöaineista, saadaan seuraavia yhdisteitä: a) etyyli-2-0-asetyyli-6-deoksi-3,5-di-0-metyyli-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido) -D-glukofuranosidia, öljy, (α)ρ0=+96°±1° (kloroformi, C =0,710) b) etyyli-6-(3-etyyli-3-nitrosoureido)-6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-D-glukofuranosidia, öljy, (a)p° = +41°+1° (kloroformi, c = 1,174).

c) etyyli-6-(3-(2-kloorietyyli)-3-nitrosoureido)-6-deoksi-3,5-di- O-metyyli-D-glukofuranosidia, öljy, (a)^°= +37°±1° (kloroformi, c=0,935) d) etyyli-6-(3-n-butyyli-3-nitrosoureido)-6-deoksi-3,5-di-O-metyy-li-D-glukofuranosidia, öljy, (a)^ = +25°±1° (kloroformi, c = 1,579).

f) etyyli-6-deoksi-5-0-metyyli-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-3-0-propyyli-D-glukofuranosidia, sp. 41°, (ot)2°= +37°±1° (kloroformi, c=1,362).

g) etyyli-5-0-etyyli-6-deoksi-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-3-0-propyyli-D-glukofuranosidia , sp. 60°, (ot)2°= +28°±1° (kloroformi, c=1,362) ja h) etyyli-3-0-bentsyyli-6-deoksi-5-0-metyyli-6-(3-metyyli-3-nitro-soureido)-D-glukofuranosidia/ sp. 92-93°, (a)^°= +32°±1° (kloroformi, c=1,438). Esimerkki 5: 0O;seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 5,0 g etyyli-6-amino- 6-deoksi-3,5-di-O-metyyli-a-D-glukofuranosidia 40 ml:ssa kloroformia, lisätään samalla sekoittaen liuos, jossa on 2,5 g N-nitroso-metyyli-karbamyyliatsidia 40 ml:ssa eetteriä tipoittain 10 minuutin kuluessa ja sekoitetaan edelleen 1 tunnin ajan jäähauteessa ja 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuos väkevöidään nyt puoleen tilavuuteen, pestään jääkylmällä 2-n suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natrium-vetykarbonaatin liuoksella ja vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Kiteinen jäännös etyyli-3,5-di-0-metyyli-6-deoksi-6-(3-metyyli-3-nitrosoureido)-a-D-glukofurano-sidi kiteytetään uudelleen eetteri/petrolieetteristä, sp. 90°, (a)^° = +43° ^1° (kloroformi, c = 1,102).

Claims (5)

14 65781

1. Analogiamenetelmä terapeuttisesti vaikuttavien N^-glukofura-nosid-ö-yyli-N^-nitroso-virtsa-aineiden valmistamiseksi, joiden kaava on Γ CH2 - nh - co - n - Rg Rs'0' - r (X),

0- R2 jossa tarkoittaa vetyä tai alempialkyyliä, R2 vetyä, alempialkyy-liä tai alempialkanoyyliä, tai R^ ja R2 yhdessä alempialkylideeniä, r3 ja R5 kulloinkin alempialkyyliä ja R6 mahdollisesti halogeenilla substituoitua alempialkyyliä, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava on CH2 - NH - CO - NH - Rg R_ - O - CH WlV"0 ’ "l UI>' J- R2 jossa R1, R2> R3» R5 ja Rg tarkoittavat samaa kuin yllä, nitrosoi-daan, tai b) amiini, jonka kaava on CH2 - NH2 "5 - 0 - H \^R3 >-° - R1 UII>/ °- R2 65781 jossa R^, r2, r^ ja Rg tarkoittavat samaa kuin yllä, kondensoidaan N-nitroso-N-Rg-karbamiinihapon (IV) reaktiokykyisen johdannaisen kanssa, jossa R, tarkoittaa samaa kuin yllä. O

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan etyyli-3,5-di-0-metyyli-6-deoksi-6-(3-me-tyyli-3-nitroso-ureido)-α-D-glukofuranosidi.

1. Analogiförfarande för framställning av terapeutiskt verkande N1-glukofuranosid-ö-yl-Ng-nitroso-urinämnen med formeln Γ CH2 - NH - CO - N - Rg R5 - O - 0H - r (i), o- R2 i vilken R^ betecknar väte, lägalkyl, R2 väte, lägalkyl eller läg-alkanoyl, eller R^ och R2 tillsammans lägalkyliden, R^ och Rg var-dera lägalkyl och Rg eventuellt med halogen substituerad lagalkyl, kännetecknat därav, att a) en förening med formeln CH2 - NH - CO - NH - Rg Rc - O - CH 5 ^^-0 - Rx (II), *-*2 i vilken R^, R2, Rg, Rg och Rg betecknar detsamma som ovan, nitrose-ras, eller b) en amin med formeln