FI61517C - Foerfarande foer framstaellning av 6-(d-(-)-alfa-amino-alfa-(p-hydroxifenylacetamido))penicillansyra - Google Patents

Description

ISBr^l ΓΒ1 m,KUULUTUSJULKAISU ,ιςΐη

Wa l“J vv utlAggninosskript 0 I ο Ί / (45) Patent nicdd-'lat ^ ^ (51) KY.ik.3/int.a.3 C 12 P 37/00 SUOMI—FINLAND ¢1) Pwenttlhekemui — PttMtaMeknlnx 801593 <Ώ) 16.05.80 V / (23) AlkupUv·—Glklgh«od«c 30.05.75 (41) Tullut Julkltulcal — Bllvlt offumHg l6.05 · 80 P»tantti. j. r*kl,frih.llltu. Ni«***—i,. ku^ulk^ ^- 30.0U.82

Patant- och ragictantyralMi) ' ' AmMcm uttafd och utl.tkrtftun pubNcarad

(32)(33)(31) W*r ttuotkuu*—B^inl prtorhut 05.06. ?U

i9.ll.7U, 19.03.75 Englanti-England(GB) 2U8U8/7U, 50016/7U, Complete Spec.

(71) Bristol-Myers Company, 3U5 Park Avenue, New York, N.Y. 10022, USA(US) (72) Daniel Bouzard, Franconville, Abraham Weber, Paris, Ranska-Frankrike(FR) (7U) Oy Kolster Ab (5U) Menetelmä 6-/D-(-)-0£-amino-OC-(p-hydroksifenyyliasetamido7peni-sillaanihapon valmistamiseksi - Forfarande för framställning av 6-/D- (-) - C*-amino- 0(,- (p-hydroxifenylacetamido)7penicillansyra (62) Jakamalla erotettu hakemuksesta 751596 (patentti 59U13) -Avdelad fr&n ansökan 751596 (patent 59U13) Tämän keksinnön kohteena on uusi menetelmä 6-D-(-)-c<-amino-<Λ-(p-hydroksifenyyliasetamido)penisillaanihapon, sen hydraatin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että 6-D- (-) - c*.-amino- cX- (p-asetoksifenyyliasetamido)penisillaanihapon vesiliuosta käsitellään esteraasilla, nimittäin sitrusesteraasilla, vehnäleseillä tai vehnänalkioilla, pH-arvossa noin 5,0-7,5, mahdollisesti puskurin läsnäollessa, jolloin esteraasi- vast, leseväkevyys on noin 5-10 mg/ml liuoksen kokonaismäärästä, ja tuote eristetään sinänsä tunnetuilla menetelmillä, jonka jälkeen mikäli halutaan, vapaan hapon tai hydraatin muodossa olevat tuotteet muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloiksi.

2 61517

Erityistä kaupallista mielenkiintoa on 6-D-(-)-Of-amino- 01-(p-hydroksifenyyliasetamido)penisillaanihapon, hydraatin tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistusmenetelmällä, jossa 6-D-(-)-OC-amino-CV -<p-asetoksifenyyliasetamido)penisillaanihapon vesiliuosta käsitellään kauppatavarana saatavalla esteraa-silla, nimittäin karkeilla vehnänleseillä, joko pH-arvossa 5,5 - 6,0 tai puskurin läsnäollessa pH arvossa 7,0, vehnäleseiden pitoisuuden ollessa 10 mg/ml liuoksen kokonaistilavuudesta, ja tuote erotetaan sinänsä tunnetuilla menetelmillä, sekä mikäli halutaan, vapaan hapon tai hydraatin muodossa oleva tuote muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen.

Lähtöaineen valmistus on kuvattu kantahakemuksessa 751596.

6-D-(-)-Of-amino- Of-(p-hydroksifenyyliasetamido)penisillaa-nihappo (amoksilliini), joka on valmistettu kyseisellä menetelmällä, on tunnetusti tehokas antibakteerinen aine ja käyttökelpoinen hoidettaessa gram-negatiivisten tai -positiivisten bakteerien aiheuttamia tartuntatauteja eläimissä, siipikarjassa ja myös ihmisissä.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksinnön mukaista menetelmää.

Esimerkki 1

Valmistettiin seuraavat liuokset: 0,5 mg/ml 6-D- (-)-Of -amino-O- (p-asetoksifenyyliasetamido) -penisillaanihappoa (p-asetoksiampisilliiniä) normaalisuolaliuok-sessa.

0,5 mg/ml p-asetoksiampisilliiniä sitrusesteraasiliuoksessa (esteraasiväkevyys sama kuin vehnälese-esteraasiliuoksen väkevyys, 10 mg/ml), joka oli laimennettu kymmenkertaisesti 0,1-m kaliumfos- faattipuskurilla pH:n säätämiseksi arvoon 7,0, sekä 0,5 mg/ml p-asetoksiampisilliiniä liuoksessa, joka sisälsi 10 mg/ml raakaa vehnälesettä (Shiloh Farms, Inc., Sulphur Springs, Arkansas, USA) 0,1-m kaliumfosfaattipuskurissa.

Kaikkia näitä liuoksia sekoitettiin 37°C:ssa, ja otettiin näytteitä kromatografiaa varten 0, 2, 4, 8 ja 24 tunnin välein.

5 μΐ :n näytteet pipetoitiin Whatman n:o 1 paperiliuskoille, joiden leveys oli 12,7 mm, nämä kuivattiin ja kehitettiin liuotinseok- 3 61517 sessa, joka sisälsi 80 osaa butyyliasetaattia, 15 osaa n-buta-nolia, 40 osaa etikkahappoa ja 24 osaa vettä. Näytteet bioauto-grafoitiin tämän jälkeen levyillä, joihin oli siirrostettu Bacillus subtilista pH-arvossa 6,0.

Nämä biokromatogrammit osoittivat, että p-asetoksiampisil-liini on pysyvä normaalisuolaliuoksessa, mutta hydrolysoituu nopeasti p-hydroksimuotoon sekä sitrusesteraasin että lese-este-raasin vaikutuksesta.

Esimerkki 2

Valmistettiin seuraavat reaktioseokset; sekoitettiin niitä 28°C:ssa ja otettiin näytteitä 0, 1,5, 1, 2, 3, 4, ja 6 tunnin välein, kuten esimerkissä 1 on esitetty.

1. 25 mg rasvatonta lesettä (vehnälesettä, joka oli saatu Shiloh'ista, käsitelty asetonilla ja kuivattu), 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 6,0 sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi 5 mg/ml 6-D-(-)-Q£-amino-Qi-j(p-asetoksifenyyliasetamido)peni-sillaanihappoa (p-asetoksiampisilliini) samassa puskurissa.

2. 25 mg rasvatonta lesettä, 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,0, sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi 5 mg/ml p-asetoksiampisilliiniä samassa puskurissa.

3. 25 mg rasvatonta lesettä, 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,5, sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi 5 mg/ml p-asetoksiampisilliinia samassa puskurissa.

4. 50 mg rasvatonta lesettä, 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 6,0 sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi p-asetoksi-ampisilliiniä samassa puskurissa.

5. 50 mg rasvatonta lesettä, 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,0 sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi 5 mg/ml asetok-siampisilliiniä samassa puskurissa.

6. 50 mg rasvatonta, lesettä, 4,5 ml 0,1-m kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,5 sekä 0,5 ml liuosta, joka sisälsi 5 mg/ml p-asetoksiampisilliiniä samassa puskurissa.

Biokromatogrammien tulokset on annettu taulukossa IV.

4 6151 7

Taulukko IV

%-konversio p-hydroksiampisilliiniksi

Reaktioaika (tuntia)

Reaktio n; o 0_1/2 1 2 3/ 4_6 1 12 23 32 64 100 91 95 % 2 11 34 45 68 120 75 77 % 3 11 32 39 45 68 75 98 % 4 9 32 55 59 80 80 77 % 5 14 34 64 109 131 104 104 % 6 16 66 66 91 98 116 86 %

Optimaaliset tulokset saadaan täten käyttämällä reaktio-seosta n:o 5; tällöin kokonaiskonversio p-hydroksiampisilliiniksi on täydellinen 2 tunnissa lesepitoisuuden ollessa 10 mg/ml ja pH-arvon ollessa 7,0.

Esimerkki 3

Valmistettiin seuraava reaktioseos, joka sisälsi 50 mg rasvatonta lesettä (Shiloh), 2,5 mg 6-D-(-)-(/.-amino-cA-(p-asetoksi-fenyyliasetamido)penisillaanihappoa (p-asetoksiampisilliiniä) sekä 5,0 ml vettä. Seosta sekoitettiin noin 28°C:ssa ja tutkittiin kromatografisesta 1, 2 ja 3 tunnin välein.

Biokromatogrammien tulokset osoittivat, että 100 % konversio p-asetoksiampisilliinistä p-hydroksiampisilliiniksi tapahtui 3 tunnissa. Reaktioseoksen pH-arvo pysyi vakiona (noin 5,7) huolimatta puskurin puuttumisesta.

Esimerkki 4

Yhdistettiin seuraavat ainekset: 20 g rasvatonta lesettä (Shiloh), 1,0 g 6-D- (-) - o(-amino- Ä-(p-asetoksifenyyliasetamido) -penisillaanihappoa (p-asetoksiampisilliini) sekä 2 1 0,01-m kalium-fosfaattipuskuriliuosta, pH 7,0, Muodostunutta seosta sekoitettiin 28°C:ssa, ja siitä otettiin näytteitä tunnin välein kuten esimerkissä A.

Biokromatogrammeista havaittiin, että 100-% konversio saavutettiin 3 tunnissa. Seos sentrifugoitiin tämän jälkeen. Sakan päällä oleva neste otettiin talteen, pH säädettiin arvoon 4,0 suolahapolla, ja lyofiloitiin, Lyofilaatti tutkittiin edelleen kuten yllä on selitetty, jolloin sen havaittiin sisältävän likimain 900 mg p-hyd-roksiampisilliiniä, 6151 7 5

Lyofilaatti, 6,0 g, sekoitettiin 20 ml jaan vettä. Muodostuneeseen seokseen lisättiin 6-n suolahappoa pH:n laskemiseksi asteittain arvoon 2,0. Sekoitusta jatkettiin vielä 15 minuuttia, mitä seurasi kiintoaineen suodatus, Suodosta käsiteltiin 1,0 g:11a väriäpoistavaa hiiltä, hiili suodatettiin erilleen, sekä kirkas suodos säädettiin pH-arvoon 4,5, Kiteytyminen käynnistettiin raaputtamalla, ja sen annettiin jatkua 4 tuntia. Kiteet kerättiin suoti-melle, pestiin vedellä sekä asetonilla, ja kuivattiin, jolloin saatiin 180 mg 6-D-(-)- öt-amino-C*-(p-hydroksifenyyliasetamido)penisil-laanihapon trihydraattia, hajoamislämpötila 201°C,

Alkuaineanalyysi C^gH^N^O^S: lie % teoreettinen % löydetty C 45,82 45,87 H 6,01 5,71 N 10,02 10,48 K.F,H20 12,89 13,68

Biologiset tiedot Aktiivisuus in vivo

Keskimääräiset vaikuttavat annokset (CDcn) hiirillä erilaisiin 50 patogeenisiin mikro-organismeihin määritettiin 6-[D-(-)-<=f-amino-«i-(4-hydroksifenyyli)asetamidoJpenisillaanihapolle. CD50-tiedot on annettu seuraavassa arvoina mg/kg.

Organismi Annostustapa CD50 (m9/kg) 1 1 1 '« ' —— Il m ' 1 ' «y·· n~.i Tl » " > ......... — ' —

Staphylococcus aureus Smith lihakseen 0,2 suun kautta 0,9

Salmonella enteritidis lihakseen 5,4 suun kautta 3,5-4,0

Klebsiella pneumoniae lihakseen 7 suun kautta 7

Imeytyminen suun kautta Määritykset tehtiin antamalla hiirille suun kautta 6-/5-(-)-ίΛ-amino- Λ-(4-hydroksifenyyli)asetamido/penisillaanihappoa. Kokeessa annettiin neljälle hiirelle suun kautta 30 mg/kg yhdistettä. Keskimääräiset pitoisuudet veressä olivat seuraavat:

Aika (tuntia) Pitoisuus (^ig/ml) 0,5 8,1 1.0 4,0 2.0 1,40 3,5 1,1

Claims (2)

6 6151 7

1. Menetelmä 6-D- (-) - <X-amino- (X- (p-hydroksif enyyliaset-amido)penisillaanihapon, sen hydraatin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 6-D- (-) - <X-amino- (Λ- (p-asetoksifenyyliasetamido) penisillaanihapon vesiliuosta käsitellään esteraasilla, nimittäin sitrusesteraasilla, vehnäleseillä tai vehnänalkioilla, pH-arvossa noin 5,0-7,5, mahdollisesti puskurin läsnäollessa, jolloin esteraasi- vastaavasti lese-väkevyys on noin 5-10 mg/ml liuoksen kokonaismäärästä, ja tuote eristetään sinänsä tunnetuilla menetelmillä, jonka jälkeen mikäli halutaan, vapaan hapon tai hydraatin muodossa oleva tuote muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 6-D-(-)-ίλ-amino-cX-(p-asetoksifenyyliasetamido)penisillaanihapon vesiliuosta käsitellään kauppatavarana saatavalla esteraasilla, nimittäin raakavehnäleseillä, pH-arvossa 5,5-6,0 taikka vaihtoehtoisesti puskurin läsnäollessa pH-arvossa 7,0, jolloin leseväkevyys on 10 mg/ml liuoksen kokonaismäärästä, ja tuote erotetaan sinänsä tunnetuilla menetelmillä, jonka jälkeen mikäli halutaan, vapaan hapon tai hydraatin muodossa oleva tuote muutetaan vastaavaksi farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.