FI110263B

FI110263B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 6-[amino]oktahydro-5-okso-tiatsolo- tai oksatsolo[3,2-a]-atsepiini-, [1,4]tiatsepiini- tai [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI110263B
Application number: FI952014A
Authority: FI
Inventors: Gary Alan Flynn
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1992-10-30
Filing date: 1995-04-27
Publication date: 2002-12-31
Also published as: DE69329701T2; PT669936E; NO951646L; IL107413A; DE69329701D1; FI952014A0; EP0669936B1; EP0669936A1; JPH08502746A; HU9501239D0; NZ256589A; KR950704349A; KR100311166B1; GR3035416T3; ZA937912B; CA2146238C; HUT71243A; US5635502A; FI952014A; CA2146238A1

Description

110263

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 6-[amino]oktahydro-5-okso-tiatsolo- tai oksatsolo[3,2-a]-atsepiini-, [1,4]tiatsepiini- tai [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi 5

Keksintö koskee uusien kaavan (I) mukaisten 6-[amino]oktahydro-5-okso-tiatsolo- tai oksatsolo[3,2-a]-atsepiini-, [1,4]tiatsepiini- tai [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti 10 hyväksyttävien suolojen valmistusta,

O v. / \ ' B

sy~u I (i)

is 0 V__J

CH-S-R! <02H R2 jossa kaavassa 20 Ri on vety, asetyyli tai morfolinoasetyyli ....: R2 on Ar-Y-, jossa Ar on fenyyli ja Y on CH2, ··· A on -CH2-, -O- tai -S-, B on -S- tai -O-, / / sillä edellytyksellä, että kun B on -S-, niin A ei 25 ole —CH2—.

·.* · Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia enkefalinaasin ja ACE:n inhibiittoreina.

Enkefalinaasi, tai spesifisemmin ilmaisten endo-peptidaasi 24.11, on nisäkäsperäinen ektoentsyymi, joka on ;\j 30 osallisena tiettyjen veressä kiertävien säätelypeptidien .··· metabolisessa hajoamisessa. Tämä entsyymi, joka on Zn+2- • · metallopeptidaasi, saa aikaan vaikutuksensa katkaisemalla solunulkoiset peptidit hydrofobisten tähteiden amino-ryhmästä ja näin se inaktivoi peptidit säätelevinä 35 viestinviejinä.

2 110263

Enkefalinaasi on osallisena monien veressä kiertävien säätelypeptidien metabolisessa hajoamisessa, mukaan lukien endorfiinit, kuten β-endorfiinit ja enkefaliinit, eteispeptidi (ANP) ja muut kiertävät säätelypeptidit.

5 Endorfiinit ovat luonnossa ilmeneviä polypeptidejä, jotka sitoutuvat opiaattireseptoreihin monissa eri aivojen alueissa ja näin ne tarjoavat kipua lieventävän vaikutuksen nostamalla aivojen kipukynnystä. Endorfiinit ilmenevät monissa eri muodoissa, mukaan lukien α-endorfiini, 10 β-endorfiini, γ-endorfiini samoin kuin enkefaliinit.

Enkefaliinit, se on: Met-enkefaliini ja Leu-enkefaliini, ovat pentapeptidejä jotka ilmenevät aivokudoksen hermopäätteissä, selkäytimessä ja mahassa ja suolistossa. Kuten muutkin endorfiinit, enkefaliinit tarjoavat 15 analgeettisen vaikutuksen sitoutumalla opiaattiresep toreihin aivoissa. Kun enkefalinaasi inhiboidaan, luonnossa ilmenevien endorfiinien ja enkefaliinien metabolinen hajoaminen estyy, mikä tarjoaa täten tehokkaan endorfiini-tai enkefaliinivälitteisen kipua lieventävän vaikutuksen.

20 Enkefalinaasin inhibitointi olisi myös hyödyllistä sikäli , että se tarjoaisi masennusta estävän vaikutuksen ja • tarjoaisi vähenemisen niiden vieroitusoireiden vakavuuteen, jotka liittyvät opiaatin tai morfiinin antamisen / " lopettamiseen. Enkefalinaasin inhibointi voisi olla myös :·· : 25 hyödyllistä ärtynyt paksusuoli -oireyhtymän hoidossa.

*.* ' ANP viittaa luonnossa ilmenevien peptidien perheeseen, jotka ovat osallisena verenpaineen homeo-staattisessa säätelyssä, samoin kuin natriumin ja veden tasojen homeostaattisessa säätelyssä. ANP-molekyylien 30 pituuden on havaittu vaihtelevan pituudeltaan noin 21:stä .··· noin 126:een aminohappoon, ja niillä on yhteinen • · rakenteellinen piirre, sikäli että ne koostuvat yhdestä tai ·.· useammasta 17 aminohapon disulfidisilmukallisesta sekvenssistä, joissa kysteiiniosaan on kiinnittynyt monia 35 erilaisia amino- ja karboksiterminaalisia sekvenssejä.

,···. ANP:n on havaittu sitoutuvan spesifisiin sitoutumiskohtiin i 3 110263 eri kudoksissa, mukaan lukien munuainen, lisämunuainen, aortta, ja vaskulaarinen sileä lihas, jolloin affiniteetit ovat olleet välillä noin 50-pikomolaarinen (pM) - noin 500-nanomolaarinen (nM) (Needleman, Hypertension X, 469 5 (1985)] . Lisäksi uskotaan, että ANP sitoutuu spesifisiin reseptoreihin aivoissa ja toimii mahdollisesti neuromodulaattorina samoin kuin tavanomaisena perife-raalisena hormonina.

ANP:n biologisiin ominaisuuksiin kuuluvat tehokkaat 10 virtsan eritystä lisäävät ja natriumionien virtsaan erittymistä lisäävät vaikutukset, ja verisuonia laajen-tavat/verenpainetta alentavat vaikutukset, samoin kun inhibitorinen vaikutus reniinin ja aldosteronin erittymiseen (deBold, Science 230, 767 (1985)]. Kun 15 enkefalinaasi inhiboidaan, luonnossa ilmenevän ANP: n metabolinen hajoaminen estyy, mikä täten tarjoaa tehokkaat ANP-välitteiset virtsan eritystä lisäävät ja natriumionien virtsaan erittymistä lisäävät vaikutukset, verenpainetta alentavat, aldosteronin määrää veressä alentavat 20 vaikutukset. Enkefalinaasin inhibitio olisi näin ollen hyödyllinen potilaassa, joka kärsii tautitiloista, joiden _··, piirteinä olisivat epänormaaliudet nesteessä, elektro- lyytissä, verenpaineessa, silmänsisäisessä paineessa, reniinin tai aldosteronin homeostaasissa, kuten, näihin ’·· · 25 rajoittumatta, korkeasta verenpaineesta, munuaissai- rauksista, aldosteronin korkeasta määrästä veressä, sydänlihaksen liikakasvusta, glaukoomasta ja konges-tiivisesta sydämen vajaatoiminnasta.

Lisäksi nyt kuvatut kaavan (I) mukaiset yhdisteet 30 ovat angiotensiiniä konvertoivan entsyymin (ACE) inhi-.··· biittoreita. ACE on peptidyylidipeptidaasi, joka katalysoi • · angiotensiini I:n konversiota angiotensiini II:ksi.

Angiotensiini II on verisuonia supistava aine, joka ’·*’· stimuloi myös aldosteronin erittymistä lisämunuaiskuoresta.

35 ACE:n inhibitio olisi näin ollen hyödyllinen potilaalla, ,···. joka kärsii sellaisista tautitiloista kuten korkea 4 110263 verenpaine ja kongestiivinen sydämen vajaatoiminta [katso William W. Douglas, "Polypeptides - Angiotensin, Plasma Kinins, and Others", kappale 27, teoksessa GOODMAN AND GILLMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 7.

5 laitos, 1985, s. 652-3, MacMillan Publishing Co., New York,

New York]. Lisäksi on havaittu, että ACE:n inhibiittorit ovat hyödyllisiä kognitiivisten häiriöiden hoidossa [G-hakemus nro 3901-291-A, julkaistu 3. elokuuta 1989].

Bradykiniini viittaa luonnossa ilmenevään pepti-10 diin, joka on hyvin voimakas verisuonten laajentaja ja aiheuttaa lisääntynyttä hiussuonten läpäisevyyttä. Kun enkefalinaasia ja ACE:a inhiboidaan, bradykiniinin meta-bolinen hajoaminen inhiboituu, mikä täten tarjoaa lisääntyneet bradykiniinin tasot verenkierrossa.

15 Lisäksi kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä sileiden solujen lisääntymisen inhibiittoreina. Sileälihassolujen lisääntyminen lihasvaltimoiden intimassa on pääsyy verisuonten stenoosiin arterioskleroosissa, verisuonikirurgian jälkeen ja angioplasian jälkeen. Useat ·;· 20 koe-eläimillä tehdyt tutkimukset ovat viitanneet siihen, että reniini-angiotensiini-jär jestelmällä on tärkeä rooli tässä vaskulaarisessa vasteessa vauriolle. Jatkuva hoito .·. ; angiotensiiniä konvertoivan entsyymin (ACE) inhibiit- . toreilla vähensi lihaksen verisuonikalvon paksuuntumista "V 25 sen jälkeen kun oli tehty vaurio pallokatetrilla rotan yhteisessä päänvaltimossa tai aortassa. Powell, J.S., Muller, R.K.M. ja Baumgartner, H.R.; Suppression of the vascular response to injury: The role of angiotensin-converting enzyme inhibitors. J. Am. Coll. Cardiol. 17:137B-42B, 1991.

; ·.· 30 Lähemmässä menneisyydessä on havaittu, että ANP vähentää myointiman lisääntymistä. ANP metaboloituu nopeasti ,!/ reseptorivälitteisellä puhdistumalla ja neutraalin ··· endopeptidaasin (NEP) toimesta. NEP:n inhibitio vähentää ‘ merkitsevästi lisääntymistä pallokatetrilla vaurioitetussa · 35 kanin verisuonistossa. Davis, H.R., McGregor, D.C., Hoos, L., Mullins, D.E. ja Sybertz, E.J.: Atrial naturiuretic 5 110263 factor and the neutral endopeptidase inhibitor SCH42495 prevent myointimal profileration after vascular injury. Circ. 86:1-220, 1992. Nämä tutkimukset viittaavat siihen, että sekä ACE:a ja NEP:iä inhiboivan aineen pitäisi olla 5 terapeuttisesti hyödyllinen sellaisten olosuhteiden \ hoidossa, jotka vaativat pehmeän solun lisääntymisen inhibitiota. Davis ja Sybertz, European Patent Application 533084-A1, 24. maaliskuuta, 1993.

EP-patenttihakemus 0 481 522 AI (22. huhtikuuta 10 1992) kuvaa uusia merkaptoasetyyliamidin johdannaisia, jotka ovat hyödyllisiä enkefalinaasin ja ACE: n inhibiittoreina; Biochemical and Biophysical Research Communications, Voi. 117(1), 1983, s. 108-113 kuvaa ACE:n inhibiittoreita, jotka ovat peräisin bentsofuusioituneista 15 l-karboksialkyyli-3-(l-karboksi-3-fenyyli-propyyliamino)-laktaameista, ja EP-patenttihakemus 0 240 366 (7. lokakuuta 1987) kuvaa perhydrotiatsepiini- ja perhydroatsepiini-johdannaisia, jotka ovat hyödyllisiä ACE:n inhibiittoreina.

Patenttijulkaisusta EP 481 522 tunnetaan merkap- ; 20 toasetyyliamidijohdannaisia, joiden kaavat ovat .;;;· * * 25 a\ y%*1 ν' v n j a a~N, z o \ 5CH:)„ J y~~y CH~S-RS *ί\ <*"*-*, COOR,.

/ Aj /

Rj 30 jossa n voi olla 1 jossa Z voi olla -S- tai -O- » » '· Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia enkefalinaasin ja ACE: n inhibiittoreina.

I » 6 110263

Edellä kuvatussa kaavassa (I) merkintä "JS" viittaa j kiraaliseen atomiin tulevaan sidokseen, jolle stereokemiaa S ei ole määritetty.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat muodostaa ; 5 farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja minkä tahansa myrkyttömän, orgaanisen tai epäorgaanisen hapon kanssa. Havainnollisiin epäorgaanisiin happoihin, jotka muodostavat sopivia suoloja, kuuluvat suolahappo, bromivetyhappo, rikkihappo ja fosforihappo, ja happojen metallisuolat kuten 10 natriummonovetyortofosfaatti ja kaliumvetysulfaatti. Havainnollisiin orgaanisiin happoihin, jotka muodostavat sopivia suoloja, kuuluvat mono-, di- ja trikarb-oksyylihapot. Havainnollisia sellaisia happoja ovat esimerkiksi etikkahappo, trifluorietikkahappo, glyko-15 lihappo, maitohappo, palorypälehappo, malonihappo, meri-pihkahappo, glutaarihappo, fumaarihappo, omenahappo, viinihappo, sitruunahappo, askorbiinihappo, maleiinihappo, hydroksimaleiinihappo, bentsoehappo, hydroksibentsoehappo, fenyylietikkahappo, kanelihappo, salisyylihappo, 2-fenoksi-20 bentsoehappo ja sellaiset sulfonihapot kuten .... metaanisulfonihappo, trif luorimetaanisulfonihappo, 2-hydr- oksietaanisulfonihappo ja p-tolueenisulfonihappo.

!“ Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa / _ sinänsä tunnetulla tavalla, siten, että 25 (a) kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi,

• I

jossa

Ri on asetyyli, yhdiste, jolla on kaava

‘30 H\ H

ϊ .J-CK

O (II) CHvvBr ' ^ 35 f C02h ::: R2 7 110263

jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava RiSH

(III), jossa Ri tarkoittaa samaa kuin edellä, sopivan emäksen läsnä ollessa; tai 5 (b) kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa

Ri on vety, yhdiste, jolla on kaava 10 H h

V

V ' ~b (iv)

7 ν'" I

1 : H

15 CH^vS-Ri *

' C02H

R2 i jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, ja

Ri on asetyyli, saatetaan reagoimaan litiumhydroksidin 11 20 kanssa sopivassa liuottimessa; tai * · . · .... (c) kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, .··’ jossa !*' Ri on morfolinoasetyyli, 4 · , yhdiste, jolla on kaava ·: 25 \ 7#\ - (II) I 'T'u 30 CHvvS-Br *

' CO2H

R2 * jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, t · 35 saatetaan reagoimaan 4-morfoliinitioliasetaatin kanssa sopivan kytkentäaineen läsnä ollessa sopivassa aproot- « I > 8 110263

Yleinen synteesikaavio kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi esitetään kaaviossa A, jossa kaikki substituentit, ellei toisin ilmaista, ovat aikaisemman määritelmän mukaisia.

5 Kaavio A

H

*^C02H Λ V

H rA. V λ-Β V y ir (2a) Y / ίο H2N tw // N i vaihe a (

° V._I Br C02H

(1) COzH (Ba) H H y-Av 15 \^{ Y-

RiSH (4) V N *1

-- 0 yJ

Valh* b B-».' < / co2h R2 20 (5a) .'!!!: Rl' = COCH3 ;··’ Vaiheessa a rakenteen (1) mukainen sopiva bi- '·'· syklinen laktaamiyhdiste saatetaan reagoimaan rakenteen : 25 (2a) mukaisen sopivan (S)-bromihapon kanssa, jolloin ·' saadaan rakenteen (3a) mukainen vastaava (S)-bromiami-

diyhdiste. Rakenteen (1) mukainen sopiva bisyklinen laktaamiyhdiste voidaan esimerkiksi saattaa reagoimaan rakenteen (2a) mukaisen sopivan (S)-bromihapon kanssa .·. : 30 sellaisen silloitusreagenssin läsnä ollessa kuten EEDQ

·.· (l-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l, 2-dihydrokinoliini) , DCC

(1,3-disykloheksyylikarbodi-imidi) tai dietyylisyaani-·...’ fosfonaatti, sopivassa aproottisessa liuottimessa, kuten metyleenikloridi, jolloin saadaan rakenteen (3a) mukainen 35 sopiva (S)-bromiamidiyhdiste.

i 9 110263

Rakenteen (1) mukainen sopiva bisyklinen lak-taamiyhdiste saatetaan vaihtoehtoisesti reagoimaan soveliaan (R)-bromihapon kanssa, jolloin saadaan vastaava (R)-bromiamidi, tai rakenteen (1) mukainen sopiva 5 bisyklinen laktaamiyhdiste saatetaan reagoimaan bromihapon sopivan enantiomeerisen seoksen kanssa, jolloin saadaan kuvatulla tavalla vastaava bromiamidin enantiomeerinen seos.

Vaiheessa b rakenteen (3a) mukaisen sopivan 10 (S)-bromiamidiyhdisteen (S)-bromifunktio muutetaan raken teen (5a) mukaiseksi vastaavaksi (R)-tioasetaatiksi.

Rakenteen (3a) mukainen sopiva (S)-bromiami-diyhdiste saatetaan esimerkiksi reagoimaan rakenteen (4) mukaisen tiolietikkahapon kanssa emäksen, kuten kesium-15 karbonaatin, läsnä ollessa. Reaktantit saatetaan tyypillisesti kontaktiin sopivassa orgaanisessa liuotti-messa, kuten dimetyyliformamidin ja tetrahydrofuraanin seoksessa. Reaktantit sekoitetaan tyypillisesti yhteen huoneenlämmössä ajanjakson ajan, joka on välillä 1-8 20 tuntia. Tuloksena oleva rakenteen (5a) mukainen . (R)-tioasetaatti otetaan talteen reaktiovyöhykkeeltä alalla tunnetuilla uuttomenetelmillä. Se on mahdollista puhdistaa ;··_ kromatograf iällä.

'· Soveliaan (R)-bromiamidin (R)-bromifunktio muute- : 25 taan vaihtoehtoisesti vastaavaksi (S)-tioasetaatiksi, tai ' sopivassa bromiamidin enantiomeeriseoksessa bromifunktio muutetaan vastaavaksi tioasetaattiyhdisteiden enantiomeeri-seokseksi.

Kuten taulukossa 1 yhteenvetona esitetään, : 30 rakenteiden (5) mukaisten yhdisteiden Ri-ryhmiä voidaan muunnella sinänsä tunnetulla tavalla, jolloin saadaan vastaavat yhdisteet, joilla on rakenteet (6) - (12).

·... Rakenteen (5) mukaisen sopivan yhdisteen (R)-tioasetaatti voidaan poistaa litiumhydroksidilla sopi-35 vassa liuotinseoksessa kuten tetrahydrof uraanissa ja etano- 10 110263 lissa, jolloin saadaan rakenteen (6) mukainen sopiva (R)-tioyhdiste.

Rakenteen (11) mukainen 4-morfolinoasetyyliyhdiste voidaan valmistaa käsittelemällä rakenteen (3) mukainen 5 (R) - tai (S)-bromiamidiyhdiste trifenyylimetyyli-4-morfo- liinitioliasetaatilla emäksen, kuten natriumhydridin, ollessa läsnä sopivassa aproottisessa liuottimessa kuten di-metyyliformamidissa.

10 Taulukko 1

Ri:n modifiointi

Yhdiste 15 5 C<?CH3

6 H

Ϊ1 ö

—C— CH2—n O

»

Kaaviossa A hahmoteltuja yleisiä synteesimenet-’;·· telyjä varten käytettävät lähtömateriaalit ovat helposti '· ammattimiehen saatavissa. Esimerkiksi [3R-(3α,6a,9αβ)-6- . 25 amino-oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a]atsepiini-3-karboks- : yylihappo voidaan valmistaa US-patentissa 4 415 496 (15. marraskuuta 1983) kuvatulla tavalla.

Rakenteen (1) mukaiset bisykliset laktaami-lähtömateriaalit voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa ,·. : 30 kaaviossa B esitetyllä tavalla. Kaaviossa B kaikki

I I

... substituentit ovat aikaisemman kuvauksen mukaisia, ellei '! . toisin ilmaista.

11 110263

Kaavio B

XBH

«>* <»>

5 C02H

--- vaihe a 03) 10 B--1 C02R’ h r~k\ \j[k ^ p-h^Vb

P-HN^“C02H 'h vaihe b o' _J

15 (15) (16) C02R' H ,-Α«ν η2ν-^Λ

-► V ' B

.;. 20 vaihe c nv~N /

H

co2h > · » (1) 25 P = Boc, CBZ tai Phth R' = Me tai Et

Vaiheessa a rakenteen (13) mukainen aldehydiyhdiste kondensoidaan L-seriinin tai L-kysteiinin esterin (14) ,·. . 30 kanssa, jolloin saadaan rakenteen (15) mukaisten t > _·· oksatsolidiinien tai tiatsolidiinien diastereomeerinen '! . seos.

Vaiheessa b rakenteen (15) mukaisten oksatsolidii-nien tai tiatsolidiinien diastereomeerinen seos syklisoi-35 daan N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydrokinoliinin >! kanssa, jolloin muodostuu suojattuja bisyklisiä (S,R,R)- ja 12 110263 (S,S,R)-laktaameja. Suojatut bisykliset laktaamit erotetaan sitten, jolloin saadaan rakenteen (16) mukainen suojattu bisyklinen laktaami.

Vaiheessa c rakenteen (16) mukaisesta suojatusta 5 bisyklisestä laktaamista poistetaan suojaryhmä, jolloin saadaan rakenteen (1) mukainen bisyklinen laktaami.

Kaaviossa B käytettävät lähtömateriaalit ovat helposti ammattimiehen saatavilla. Esimerkiksi 5-formyyli-2 (S)-ftaali-imidopentaanihappo kuvataan US-patentissa ! 10 4 415 496 (15. marraskuuta 1983).

Seuraavat esimerkit esittävät kaavion A kuvauksen mukaisia tyypillisiä synteesejä. Tässä käytettynä ! seuraavilla termeillä on osoitetut merkitykset: "g" viittaa grammoihin, "mmol" viittaa millimooleihin; "ml" viittaa 15 millilitroihin, "kp" viittaa kiehumispisteeseen, "°C" viittaa Celsius-asteisiin, "mm Hg" viittaa elohopea-millimetreihin, "μΐ" viittaa mikrolitroihin, "pg" viittaa mikrogrammoihin, ja "μΜ" viittaa mikromolaarisuuteen.

Esimerkki 1 20 [3R-[3a, 6<x, (S*) , 9aa] ]-6-[ [l-okso-2 (S)-asetyylitio- 3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a]-[1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo . 25 h /^Ssv

°n/N ^“S

I 0 j-J

. 30 /-V CH—*SCOCH3 f (O)-7 ψ · 13 110263

Kaavio B, vaihe a: Etyyli-2-[[2'-karboksi-2'-[bent-syylioksikarbonyyliamino]etyylitio]etyyli]-4(R)-tiatsoli-diinikarboksylaatti

Pese natriumhydridi (7,75 g, 191 mmol 59-prosent-5 tisena dispersiona parafiinissa) kahdesti kuivassa heksaanissa (2X) typpi-ilmakehän alla. Lisää vedetön dimetyyliformamidi (90 ml) ja jäähdytä jää/metanolihau-teella. A, annoksittain lisäten, L-kysteiinietyy-liesterihydrokloridi (96,7 mmol), sekoita 5 minuuttia ja 10 lisää kaliumjodidi (5,2 g, 32 mmol). Lisää tipoittain lisäten bromiasetaldehydidietyyliasetaali (14,5 ml, 96,7 mmol), poista jäähaude ja sekoita 8 tuntia huoneenlämpötilassa. Haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on S-(2,2-dietoksietyyli)-L-kysteiinin etyyli-15 esteri, jota käytetään seuraavassa vaiheessa puhdista- mattomana.

Sekoita S-(2-dietoksietyyli)-L-kysteiinin etyyli-esteri (6,6 mmol) ja pyridiini (60 ml). Lisää tipoittain lisäten bentsyylikloroformaatti (7,3 mmol) ja sekoita yli 20 yön. Poista ylimääräinen pyridiini in vacuo ja liuota jäännös etyyliasetaatin ja veden kaksifaasiseen seokseen. Erota orgaaninen faasi ja uuta vesifaasi vielä ';·* etyyliasetaatilla (2x) . Pese yhdistetyt orgaaniset faasit '· ‘ vedellä, sitten suolavedellä ja kuivata (MgS04) . Haihduta 25 liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on N-(bentsyy- ·,! lioksikarbonyyli)-S-(2-dietoksietyyli)-L-kysteiinin etyyli- esteri .

Liuota N-(bentsyylioksikarbonyyli)-S-(2-dietoksietyyli) -L-kysteiinin etyyliesteri (21,7 mmol) etanoliin ,·. 30 (150 ml). Lisää 1 N litiumhydroksidi (50 ml) ja sekoita yli yön huoneenlämpötilassa. Säädä pH huolella 4:ään 1 N ’! . suolahapolla ja sekoita 1 tunnin ajan. Uuta etyyliasetaattiin, kuivata (MgS04) ja haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on N-(bentsyylioksikarbonyyli)-S-’ 35 (formyylimetyyli)-L-kysteiini.

110263 I 14

Liuota L-kysteiinin etyyliesteri (12,7 mmol) tetrahydrofuraaniin (120 ml) ja lisää N-(bentsyylioksi-karbonyyli)-S-(formyylimetyyli)-L-kysteiini (12,7 mmol).

• Sijoita typpi-ilmakehän alle ja sekoita 3 tuntia. Haihduta 5 liuotin in vacuo, liuota jäännös kloroformiin ja pese vedellä (2 x 30 ml). Yhdistä vesiuutokset ja uuta kloroformilla (2 x 30 ml) . Yhdistä kaikki orgaaniset uutokset, kuivata (Na2SC>4) ja haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste. 10 Kaavio B, vaihe b: Etyyli[3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6- bentsyylioksikarbonyyliamino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2- a][1,4]tiatsepiini-3-karboksylaatti ja etyyli[3R-[3a,6a,-(S*),9ββ]]-6-[bentsyylioksikarbonyyliamino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksylaatti 15 Liuota etyyli-2-[[2'-karboksi-2[bentsyylioksi karbonyyliamino] etyylitio]etyyli]4-(R)-tiatsolidiinikarb-oksylaatti (12,7 mmol) tetrahydrofuraaniin (30 ml) ja lisää N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydrokinoliini (EEDQ) (4 69 mg) . Sekoita yli yön huoneenlämpötilassa typpi-20 ilmakehän alla. Haihduta liuotin in vacuo, partitioi ' etyyliasetaatin ja laimean suolahapon välillä. Erota ’ * orgaaninen faasi, pese 5 % natriumbikarbonaattiliuoksella, vedellä ja suolavedellä. Kuivata (NaaSCM , haihduta liuotin ·.’* in vacuo ja puhdista ja erota isomeerit piidi- ·,· 25 oksidigeelikromatografialla, jolloin tuloksena on erilliset : isomeeriset otsikon mukaiset yhdisteet.

Kaavio B, vaihe c: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-amino-oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]tiatsepiini-3-karbok-syylihappo 30 Liuota etyyli-[3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[bentsyyliok- i · I,, sikarbonyyliamino] oktahydro-5-oksotiatsolo [3,2-a] [l,4]-ti- , atsepiini-3-karboksylaatti (21,7 mmol) etanoliin (150 ml).

: Lisää 1 N litiumhydroksidi (50 ml) ja sekoita yli yön >;· huoneenlämpötilassa. Konsentroi in vacuo. Partitioi etyyli- 35 asetaatin ja 6 N suolahapon välillä. Erota orgaaninen faasi h ja pese suolahapolla. Kuivata (MgSO-a) ja haihduta liuotin 110263 j i 15 in vacuo, jolloin tuloksena on [3R-[3a,6a,- (S*) , 9aa]]-6- [bentsyylioksikarbonyyliamino]-oktahydro-5-oksotiatsolo-\ [3,2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo.

Sekoita [3R-[3α,6α,(S*),9aa]]-6-[bentsyylioksi- ; 5 karbonyyliamino]-oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]tiat- sepiini-3-karboksyylihappo (27,7 mmol), trifluorietikka- happo (75 ml) ja anisoli (5 ml) . Sekoita huoneen lämpötilassa yli yön. Kaada veteen ja neutraloi huolella kiinteällä natriumvetykarbonaatilla. Uuta etyyliasetaattiin 10 (2x), pese suolahapolla ja kuivata (MgSCU) . Haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografiällä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Kaavio A, vaihe a: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[1- okso-2(R)-bromi-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-15 tiatsolo[3-2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo.

Sekoita D-fenyylialaniini (186,4 g, 1,128 mol) ja 49-prosenttinen bromivetyhappo (372,8 g), jäähdytä -5 °C:n lämpötilaan ja lisää tipoittain lisäämällä natriumnitriitin (77,9 g) vesiliuos (565 ml) 1 tunnin ajan (voimakasta 20 kaasun kehittymistä). Sekoita -5 °C:n - 0 °C:n lämpötilassa 4 tuntia, uuta etyylieetteriin (3x11), kuivata (MgSCu) ja haihduta liuotin in vacuo. Puhdista kromatografiällä (5 % etikkahappo/95 % metyleenikloridi) ja tislaa, jolloin ' '· tuloksena on 3-fenyyli-2(R)-bromipropionihappo (112 g, :·: : 25 43 %) , kp. 128 - 135 °C 0,25 torrin (33, 325 Pa) paineessa.

! ' Sekoita 3-fenyyli-2 (R)-bromipropionihappo (1,0 mmol) ja [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-amino-oktahydro-5-okso-tiatsolo [3,2-a] [1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo (1,0 mmol) metyleenikloridiin (6 ml). Lisää EEDQ (247 mg, 1,0 30 mmol) . Sekoita 15 tuntia huoneenlämpötilassa argon-ilmakehän alla. Laimenna etyyliasetaatilla (25 ml) ja pese ; · 5 % rikkihapolla (15 ml), sitten kyllästetyllä natrium vetykarbonaatilla (15 ml). Kuivata (Na2SC>4) , konsentroi in vacuo ja puhdista piidioksidigeelikromatografiässä, jolloin 35 tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

16 110263

Kaavio A, vaihe b: [3R- [3α, 6α, (S*) , 9act] ]-6- [ [1- okso-2(S)-asetyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo

Liuota tiolietikkahappo (0,10 ml, 1,4 mmol) 5 metanoliin 5 ml ja käsittele kesiumkarbonaatilla (228 mg, 0,70 mmol). Sekoita keltaista liuosta 30 minuuttia, haihduta sitten liuotin in vacuo. Laimenna jäljelle jäänyt kesiumsuola dimetyyliformamidilla (10 ml) ja käsittele liuoksella, jossa on [3R-[3α,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(R)-10 bromi-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3—2— a] [1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo (1,0 mmol) tetra-hydrofuraanissa (6 ml) . Sekoita huoneenlämpötilassa 2 tuntia, haihduta liuotin in vacuo ja partitioi etyyliasetaatin (75 ml) ja suolaveden (50 ml) välillä. 15 Kuivata orgaaninen faasi (Na2SO-}) , haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografiassa, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Esimerkki 2 [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fenyy-20 lipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][l,4]tiat-sepiini-3-karboksyylihappo N H /~S\

25 '""'S

^ /r* N / I · y-i / \ CH——SH “ ,, » ^ “*

Liuota [3R-[3α, 6a, (S*) , 9aa] ]-6-[ [l-okso-2 (S)-ase-’. tyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo- [3-2-a] [1,4] tiatsepiini-3-karboksyylihappo (0,145 mmol) 35 metanoliin, josta kaasu on poistettu (3 ml) ja ,·*. tetrahydrofuraaniin (2 ml), jäähdytä jäähauteessa ja lisää 17 110263 litiumhydroksidi (0,6 ml 1 M liuosta, 0,6 mmol). Sekoita reaktioseosta 3 tuntia ja lisää 1 N suolahappo. Partitioi metyleenikloridin (75 ml) ja veden (25 ml) välillä. Kuivata (Na2S04), haihduta liuotin in vacuo ja puhdista 5 kromatografiässä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Esimerkki 3 [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-(4-morfoli-no)asetyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso- 10 tiatsolo[3-2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo \ H /~S\

0 N

15 ^ «T“ / o 20 \ Suspensoi natriumhydridi (175 mg 60-prosenttista suspensiota, 4,0 mmol) vedettömään dimetyyliformamidiin (4 ml) ja sijoita typpi-ilmakehän alle. Kuplita '’* rikkivetykaasua suspensioon kunnes liukeneminen tapahtuu.

25 Lisää trifenyylimetyyli-4-morfoliinitioliasetaatti (1,61 g, 4,0 mmol) ja kuumenna hellävaraisesti 1,5 tuntia samalla kun kuplitat typpeä liuoksen läpi ylimääräisen rikki-vetykaasun poistamisen edistämiseksi. Lisää [3R-[3a,6a,-(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(R)-bromo-3-fenyylipropyyli]-amino]-, ; 30 oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a] [1,4]tiatsepiini-3-karboks- .. yylihappo (2,0 mmol) ja sekoita 2 tunnin ajan. Kaada ’! . veteen, uuta etyyliasetaattiin, pese suolavedellä ja kuivata (MgS04) . Haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatograf iässä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen 35 yhdiste.

f 18 110263

Esimerkki 4 [3R- [3α,6α,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-asetyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a]-[1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo 5 H\ H r°\

Y>yJ

/-\ CH— SCOCH3 ( 15 Kaavio B, vaihe a: Etyyli-2-[[2'-karboksi-2'-[bent- syylioksikarbonyyliamino]etoksi]etyyli]-4(R)-tiatsolidiini-karboksylaatti

Sekoita L-seriinimetyyliesteri (6,6 mmol) ja pyri- diini (60 ml) . Lisää tipottain lisäämällä bentsyyli- ,j. 20 kloroformaatti (7,3 mmol) ja sekoita yli yön. Poista * ylimääräinen pyridiini in vacuo ja liuota jäännös kaksifaasiseen seokseen etyyliasetaatti/vesi. Erota orgaaninen faasi ja uuta vesifaasi vielä etyyliasetaatilla - ** (2X). Pese yhdistetyt orgaaniset faasit vedellä, sitten ' '· ' 25 suolavedellä ja kuivata (MgSCu) . Haihduta liuotin in vacuo, V jolloin tuloksena on N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-seriinin metyyliesteri.

Liuota N-(bentsyylioksikarbonyyli)-L-seriinin metyyliesteri (63 mmol) metyleenikloridi/sykloheksaaniin 30 (1:1, 600 ml). Lisää allyylitriklooriasetimidaatti (26 g, ,’· 128 mmol) ja trifluorimetaanisulfonihappo (5 ml, 56,6 mmol) . Sekoita huoneenlämpötilassa typpi-ilmakehän alla 5 tunnin ajan ja laimenna metyleenikloridilla. Pese ‘f- kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, 35 vedellä, kuivata (MgS04) ja haihduta liuotin in vacuo. Puhdista piidioksidigeelikromatografiassa, jolloin tulok- j 19 110263 sena on N-(bentsyylioksikarbonyyli)-O-2-propenyyli-L-seriinin metyyliesteri .

Liuota N- (bentsyylioksikarbonyyli)-O-2-propenyyli-L-seriinin metyyliesteri (21,7 mmol) etanoliin (150 ml).

5 Lisää 1 N litiumhydroksidi (50 ml) ja sekoita yli yön huoneenlämpötilassa. Palautusjäähdytä 1 tunnin ajan, jäähdytä -10 °C:n lämpötilaan, säädä pH huolellisesti arvoon 4 1 N suolahapolla ja sekoita 1 tunnin ajan. Uuta etyyliasetaattiin, kuivata (MgSCH) ja haihduta liuotin in I 10 vacuo, jolloin tuloksena on N-(bentsyylioksikarbonyyli)-O- 2-propenyyli-L-seriini.

Liuota N-(bentsyylioksikarbonyyli)-O-2-propenyyli-L-seriini (29,8 mmol) metyleenikloridi/metanoliin (10:1, 220 ml) . Jäähdytä -78 °C:n lämpötilaan ja kuplita otsonin ; 15 ja hapen seoksella noin 10 minuutin ajan kunnes sininen väri jää pysyväksi. Kuplita typellä 10 minuuttia -78 °C:n lämpötilassa ylimääräisen otsonin poistamiseksi. Käsittele metyylisulfidilla (12 ml, 0,164 mol) ja anna lämmetä huoneenlämpötilaan. Sekoita huoneenlämpötilassa 24 tuntia, ;. 20 haihduta liuotin in vacuo ja liuota jäännös , etyyliasetaattiin (200 ml). Pese vedellä, kyllästetyllä natriumkloridilla, kuivata (MgSO<j) ja haihduta liuotin in , ' vacuo, jolloin tuloksena on N-(bentsyylioksikarbonyyli)-ΟΥ [ 2-oksoetyyli-L-seriinin metyyliesteri.

J 25 Liuota L-kysteiinin etyyliesteri (12,7 mmol) V tetrahydrofuraaniin (120 ml) ja lisää N-(bentsyylioksikarbonyyli) -O-2-oksoetyyli-L-seriinin metyyliesteri (12,7 mmol). Sijoita typpi-ilmakehän alle ja sekoita 3 tunnin ajan. Haihduta liuotin in vacuo, liuota jäännös 30 kloroformiin ja pese vedellä (2 x 30 ml). Yhdistä ,··* vesiuutokset ja uuta kloroformilla (2 x 30 ml). Yhdistä '· » kaikki orgaaniset uutokset, kuivata (Na2S04) ja haihduta » » » liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

ί 20 110263

Kaavio Β, vaihe b: Etyyli-[3R-[3α,6α,(S*),9aa]]-6-[bentsyylioksikarbonyyliamino]oktahydro-5-oksotiatsolo-[3,2-a][1,4]oksatsepiini-3-karboksylaatti ja etyyli-[3R-[3α,6a,(S*),93β]]-6-[bentsyylioksikarbonyyliamino]okta-5 hydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]-oksatsepiini-3-karboksy-laatti

Liuota etyyli-2-[[2'-karboksi-2'-[bentsyylioksikarbonyyliamino] etoksi]etyyli]-4(R)-tiatsolidiinikarbok-sylaatti (12,7 mmol) tetrahydrofuraaniin (30 ml) ja lisää 10 N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-l,2-dihydrokinoliini (EEDQ) (469 mg) . Sekoita yli yön huoneenlämpötilassa typpi-ilmakehän alla. Haihduta liuotin in vacuo, partitioi etyyliasetaatin ja laimean suolahapon välillä. Erota orgaaninen faasi, pese 5 % natriumbikarbonaattiliuoksella, 15 vedellä ja suolavedellä. Kuivata (Na2SC>4), haihduta liuotin in vacuo ja puhdista ja erota isomeerit piidiok-sidigeelikromatografiällä, jolloin tuloksena ovat erilliset isomeeriset otsikon mukaiset yhdisteet.

Kaavio B, vaihe c: [3R-(3α,6a,(S*),9aa]]-6-amino--j 20 oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]oksatsepiini-3-karb-,. oksyylihappo

Liuota etyyli-[3R[3a,6a,(S*),9aa]-6-[bentsyyliok-sikarbonyyliamino]oktahydro-5-oksotiatsolo-[3-2-a][1,4]— oksepiini-3-karboksylaatti (21,7 mmol) etanoliin (150 ml).

;·: 25 Lisää 1 N litiumhydroksidi (50 ml) ja sekoita yli yön » » v huoneenlämpötilassa. Konsentroi in vacuo. Partitioi etyyliasetaatin ja 6 N suolahapon välillä. Erota orgaaninen faasi ja pese suolavedellä. Kuivata (MgSCh) ja haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on [3R-30 (3α, 6a, (S*), 9aa] ]-6-[bentsyylioksikarbonyyliamino] okta- » .'· hydro-5-oksotiatsolo [3,2-a] [1, 4] oksatsepiini-3-karboksyy- > » I' lihappo.

Sekoita [3R- (3a, 6a, (S*) , 9aa] ]-6- [bentsyylioksikar-bonyyliamino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3,2-a][1,4]oksatse-35 piini-3-karboksyylihappo (27,7 mmol), trifluorietikkahappo (75 ml) ja anisoli (5 ml) . Sekoita huoneenlämpötilassa yli ! 21 110263 yön. Kaada veteen ja neutraloi huolellisesti kiinteällä natriumvetykarbonaatilla. Uuta etyyliasetaattiin (2x), pese i suolavedellä ja kuivata (MgS04) . Haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografialla, jolloin tuloksena on otsikon 5 mukainen yhdiste.

Kaavio A, vaihe a: [3R-(3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[1- okso-2(R)-bromi-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-tiatsolo[3-2-a][1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo

Sekoita 3-fenyyli-2(R)-bromipropionihappo (1,0 10 mmol) ja [3R-(3α,6a,(S*),9aa]]-6-amino-oktahydro-5-okso-tiatsolo [3,2-a] [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo (1,0 mmol) metyleenikloridiin (6 ml). Lisää EEDQ (247 mg, 1,0 mmol) . Sekoita 15 tuntia huoneenlämpötilassa argon-ilmakehän alla. Laimenna etyyliasetaatilla (25 ml) ja pese i 15 5 % rikkihapolla (15 ml) , sitten kyllästetyllä natrium vetykarbonaatilla (15 ml). Kuivata (Na2S04) , konsentroi in vacuo ja puhdista piidioksidigee-likromatografiässä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Kaavio A, vaihe b: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[1-ok-20 so-2(S)-asetyylitio-3-fenyylipropyyli] amino]-oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo

Liuota tiolietikkahappo (0,10 ml, 1,4 mmol) meta-’···' noliin (5 ml) ja käsittele kesiumkarbonaatilla (228 mg, ·: 0,70 mmol). Sekoita keltaista liuosta 30 minuutin ajan, :.· · 25 haihduta sitten liuotin in vacuo. Laimenna tuloksena oleva •‘f.' : kesiumsuola dimetyyliformamidilla (10 ml) ja käsittele [3R- [3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(R)-bromi-3-fenyylipropyyli]-amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihapon (1,0 mmol) tetrahydrofuraaniliuoksella . 30 (6 ml). Sekoita huoneenlämpötilassa 2 tuntia, haihduta liuotin in vacuo ja partitioi etyyliasetaatin (75 ml) ja suolaveden (50 ml) välillä. Kuivata orgaaninen faasi (Na2S04), haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografiassa, jolloin tuloksena on otsikon mukainen 35 yhdiste.

110163 I 22

Esimerkki 5 [3R-[3α,6α,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fenyy-lipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][1,4]ok-satsepiini-3-karboksyylihappo 5 H\ H r°\ v Jr- n /

0 \ J

10 —1 /-V CH—SH ( 15 Liuota [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-ase- tyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo-[3-2-a][1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo (0,145 mmol) metanoliin (3 ml) josta kaasu on poistettu ja tetra-hydrofuraaniin (2 ml), jäähdytä jäähauteessa ja lisää 20 litiumhydroksidi (0,6 ml 1 M liuoksessa, 0,6 mmol). Sekoita reaktioseosta 3 tuntia ja lisää 1 N suolahappo. Partitioi metyleenikloridin (75 ml) ja veden (25 ml) välillä. Kuivata (Na2S04) , haihduta liuotin in vacuo ja puhdista • kromatografiassa, jolloin tuloksena on otsikon mukainen : 25 yhdiste.

Esimerkki 6 [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-asetyylitio- 3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]-atsepiini-3-karboksyylihappo

30 H

V: bx O yj 35 i /-V, CH—SCOCHa f <g>^ 23

Kaavio B, vaihe a: Etyyli-2-(4'-karboksi-4-ftaali-imidobutyyli)-4(R)-oksatsolidiinikarboksylaatti

Liuota L-seriinin etyyliesteri (12,7 mmol) I tetrahydrofuraaniin (120 ml) ja lisää 5-formyyli-2(S)- 5 ftaali-imidopentaanihappo (12,7 mmol). Sijoita typpi-ilmakehän alle ja sekoita 3 tunnin ajan. Haihduta liuotin in vacuo, liuota jäännös kloroformiin ja pese vedellä (2 x 30 ml). Yhdistä vesiuutokset ja uuta kloroformilla (2 x 30 ml) . Yhdistä kaikki orgaaniset uutokset, kuivata 10 (Na2SC>4) ja haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Kaavio B, vaihe b: Etyyli-[3R-[3α,6a,(S*),9aa]]-6-ftaali-imido-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a][atsepiini-3-karboksylaatti ja etyyli[3R-[3α,6a,(S*),9af]]-6-ftaali-15 imido-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]atsepiini-3-karbok-sylaatti

Liuota etyyli-2-(4'-karboksi-4-ftaali-imidobutyy- li)-4-(R)-oksatsolidiinikarboksylaatti (12,7 mmol) tetrahydrofuraaniin (30 ml) ja lisää N-etoksikarbonyyli-2-| 20 etoksi-1,2-dihydrokinoliini (EEDQ) (469 mg). Sekoita yli yön huoneenlämpötilassa typpi-ilmakehän alla. Haihduta liuotin in vacuo, partition etyyliasetaatin ja laimean suolahapon välillä. Erota orgaaninen faasi, pese 5 % natriumbikarbonaattiliuoksella, vedellä ja suolavedellä.

; : 25 Kuivata (Na2SC>4) , haihduta liuotin in vacuo ja puhdista ja erota isomeerit piidioksidigeelikromatografiällä, jolloin saat erilliset isomeeriset otsikon mukaiset yhdisteet.

Kaavio B, vaihe c: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-amino-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]-atsepiini-3-karboksyyli-’. : 30 happo

Liuota etyyli[3R-[3α,6a, (S*) , 9aa]]-6-ftaali-imido- ( . oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a][1,4]oksepiini-3-karboks- ... ylaatti (0,517 mmol) metanoliin (5 ml) ja käsittele “·" hydratsiinimonohydraatilla (1,1 ml 1 M metanoliliuosta, 1,1 > » 35 mmol). Sekoita 44 tuntia huoneenlämpötilassa, haihduta liuotin in vacuo ja tee jäännöksestä liete mety- ; 24 110263 leenikloridilla (10 ml) . Suodata ja haihduta liuotin in j vacuo, jolloin tuloksena on etyyli-[3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6- ! amino-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3,2-a] [1,4]oksepiini-3- karboksylaatti.

5 Liuota [3R-[3α,6a,(S*),9aa]]-6-ftaali-imido-okta- hydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]-atsepiini-3-karboksylaatti (21,7 mmol) etanoliin (150 ml). Lisää 1 N litiumhydroksidi (50 ml) ja sekoita yli yön huoneenlämpötilassa. Palautusjäähdytä 1 tunnin ajan ja konsentroi in vacuo.

10 Partitioi etyyliasetaatin ja 6 N suolahapon välillä. Erota orgaaninen faasi ja pese suolahapolla. Kuivata (MgSCh) ja haihduta liuotin in vacuo, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Kaavio A, vaihe a: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[1- 15 okso-2(R)-bramo-3-fenyylipropyyli] amino]oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]atsepiini-3-karboksyylihappo

Sekoita 3-fenyyli-2(R)-bromopropionihappo (1,0 mmol) ja [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-amino-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3,2-a]atsepiini-3-karboksyylihappo (1,0 mmol) 20 metyleenikloridissa (6 ml). Lisää EEDQ (247 mg, 1,0 mmol). Sekoita 15 tuntia huoneenlämpötilassa argon-ilmakehän alla. Laimenna etyyliasetaatilla (25 ml) ja pese 5 % rikkihapolla (15 ml) , sitten kyllästetyllä natriumvetykarbonaatilla (15 ml). Kuivata (Na2SC>4) , konsentroi in vacuo ja puhdista :: 25 piidioksidigeelikromatografiällä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Kaavio A, vaihe b: [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[1- okso-2(S)-asetyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]-atsepiini-3-karboksyylihappo 30 Liuota tiolietikkahappo (0,10 ml, 1,4 mmol) > metanoliin (5 ml) ja käsittele kesiumkarbonaatilla (228 mg, ; , 0,70 mmol). Sekoita keltaista liuosta 30 minuuttia, haihduta liuotin sitten in vacuo. Laimenna tuloksena oleva .·*." kesiumsuola dimetyyliformamidilla (10 ml) ja käsittele 35 liuoksella, jossa on [3R-[3α,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(R)-; bromo-3-fenyylipropyyli]amino-oktahydro-5-okso-oksatsolo- 25 110263 [3-2-a]atsepiini-3-karboksyylihappo (1,0 iranol) tetrahydro-furaanissa (6 ml). Sekoita huoneenlämpötilassa 2 tunnin ajan, haihduta liuotin in vacuo ja partitioi etyyliasetaatin (75 ml) ja suolaveden (25 ml) välillä.

5 Kuivata orgaaninen faasi (Na2S04), haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografiässä, jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

Esimerkki 7 [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fenyy-10 lipropyyli]amino-oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]-atse-piini-3-karboksyylihappo

B\ y'V

15 °5j/" }u.

T V

J-v Cff—SH f

/qW

20 '-'

Liuota [3R-[3α,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-ase-tyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-oksatso-lo [3-2-a]-atsepiini-3-karboksyylihappo (0,145 mmol) metano-25 liin (3 ml) josta kaasu on poistettu ja tetrahydrofuraaniin (2 ml), jäähdytä jäähauteessa ja lisää litiumhydroksidi (0,6 ml 1 M liuosta, 0,6 mmol). Sekoita reaktioseosta 3 tuntia ja lisää 1 N suolahappo. Partitioi metyleenikloridin (75 ml) ja veden (25 ml) välillä. Kuivata (Na2S04) , 30 haihduta liuotin in vacuo ja puhdista kromatografiässä, I | jolloin tuloksena on otsikon mukainen yhdiste.

'! . Seuraavat tutkimukset havainnollistavat kaavan (I) *,,, mukaisten yhdisteiden käyttöä enkefalinaasin inhibiit- 1 toreina ja ACE:n inhibiittoreina.

35 Enkefalinaasi puhdistetaan osittain rotan munuai sesta. Entsyymi uutetaan mikrovillusfraktiosta käyttämällä 110263 I 26 !

Triton X-100:aa Malfroyn ja Schwartzin menetelmän mukaisesti [J. Biol. Chem. 259, 14365-14370 (1984)] tai käyttämällä proteolyyttistä käsittelyä Almenoffin ja Orlowskin menetelmän mukaisesti [Biochem. 22, 590-599 5 (1983)]. Entsyymi puhdistetaan vielä anioninvaih- tokromatografiällä (Mono Q™-pylväs, Pharmacia) käyttämällä Pharmacian FPLC-järjestelmää. Entsyymiaktiivisuus voidaan mitata Florentinin ym. fluorometrisilla menetelmillä [Anal. Biochem. 141, 62-69 (1984)] tai Almenoffin ja Orlowskin 10 menetelmillä [ J. Neurochemistry 42^, 151-157 (1984) ] .

Entsyymi määritetään 50 mM HEPES-puskurissa (pH 7,4) 3,0 ml:n reaktiotilavuudessa, joka oli 12 μΜ dansyyli-D-AlaGly(p-nitro)PheGly-substraatin suhteen (Km = 40 μΜ) 25 °C:n lämpötilassa. Substraatti (ja inhibiittori) 15 lisätään konsentroidusta DMSO-kantaliuoksesta (lopputila- vuus jopa 0,1 ml DMSOita). Pienessä tilavuudessa oleva entsyymi (noin 0,1 pg FPLC-puhdistettua proteiinia) lisätään reaktion aloittamiseksi ja fluoresenssin lisääntymisen nopeutta mitataan jatkuvasti fluorometria 20 käyttämällä (eksitointi 339 nm:ssa, emissio 562 nm:ssa).

> ' ' ACE:n entsymaattinen aktiivisuus mitataan käyt- , tämällä Holmquistin ym. kuvaamaa spektrofotometrista * substraattia [Anal. Biochem. 9_5, 540-548 (1979)] ja Ryanin kuvaamaa puskurijärjestelmää [Methods of Enzymatic 25 Analysis, 3. laitos, toim. H.U. Bergmeyer, voi. V, Verlag v Chemie, Weinheim, 1983, s. 20-34].

« r

Claims

110263

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten 6-[amino]oktahydro-5-okso-tiat-5 solo- tai oksatsolo[3,2-a]atsepiini-, [1,4]tiatsepiini- tai [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, H H 0 \ 'B , , /y N i (I) 1 0 ^ CHwS-Ri JT

15. C02H R2 jossa kaavassa R-l on vety, asetyyli tai morfolinoasetyyli R2 on Ar-Y-, jossa Ar on fenyyli ja Y on CH2, 20. on -CH2 - , -O- tai -S-, . : B on -S- tai -O-, sillä edellytyksellä, että kun B on -S-, niin A ei • ole - CH2 -, tunnettu siitä, että ; (a) kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, 25 jossa Rj on asetyyli, yhdiste, jolla on kaava H H i:1 ν"Ί^·' //'N I (II) o 1 “ H ·...: CHvvBr * ' C02H

35 R2 ! 28 110263 t jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, ; saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava RiSH i (III), jossa Ri tarkoittaa samaa kuin edellä, sopivan emäksen läsnä ollessa; tai 5 (b) kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa Ri on vety, yhdiste, jolla on kaava H H γ //" n . (iv) I 0 CHvvS-r\ ' 15 n ' C°2H «2 jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, ja Ri on asetyyli, saatetaan reagoimaan litiumhydroksidin kanssa sopivassa liuottimessa; tai 20 (c) kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa , Ri on morfolinoasetyyli, yhdiste, jolla on kaava :·: 25 \ ’Λ . v" b», (ii> yj CHvvS-Br 1 \ : 30 ' CO2H R2 jossa R2, A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, ... saatetaan reagoimaan 4-morfoliinitioliasetaatin kanssa sopivan kytkentäaineen läsnä ollessa sopivassa aprootti-35 sessa liuottimessa; ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. 110263

2. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer ! [3R-[3(x, 6a, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) -acetyltio-3- I fenylpropyl]amino]oktahydro-5-oxotiazolo[3-2-a][l, 4]tiaze- j 5 pin-3-karboxylsyra.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, i tunnettu siitä, että valmistetaan 1 [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-asetyylitio- 3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a]-5 [1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo.

3. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a, 6a, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) - (4-morfolino) -acetyltio-3-fenylpropyl]amino]oktahydro-5-oxotiazolo-10 [3-2-a][l, 4]tiazepin-3-karboxylsyra.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-(4-morfoli-no)-asetyylitio-3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-10 tiatsolo[3-2-a][1,4]tiatsepiini-3-karboksyylihappo.

4. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a, 6a, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) -acetyltio-3-fenylpropyl]amino]oktahydro-5-oxo-oxazolo[3-2-a]azepin-3-15 karboxylsyra.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-asetyylitio- 3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-oksatsolo-15 [3-2-a]atsepiini-3-karboksyylihappo.

5. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a, 6«, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) -tio-3-fenyl-propyl]amino]oktahydro-5-oxotiazolo[3-2-a][l, 4]tiazepin-3-, 20 karboxylsyra.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fenyy-lipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiätsolo[3-2-a][1,4]— 20 tiatsepiini-3-karboksyylihappo.

6. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a,6a,(S1),9aa]]-6-[[l-oxo-2(S)-acetyltio-3-fenylpropyl]amino]oktahydro-5-oxotiazolo[3-2-a][l, 4]-25 oxazepin-3-karboxylsyra.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan •' [3R-[3α,6a, (S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-asetyylitio- 3-fenyylipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo-[3-2-a]-; ! 25 [1,4]oksatsepiini-3-karboksyylihappo. ·,*' 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [3R-[3a,6a,(S*),9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fenyy-lipropyyli]amino]oktahydro-5-oksotiatsolo[3-2-a][1,4]ok-,·. : 30 satsepiini-3-karboksyylihappo. ..." 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 1 tunnettu siitä, että valmistetaan [3R-[3α,6a, (S*) , 9aa]]-6-[[l-okso-2(S)-tio-3-fen-'" yylipropyyli]amino]oktahydro-5-okso-oksatsolo[3-2-a]atse- 35 piini-3-karboksyylihappo. 1 30 110263 j 1. Förfarande för framställning av nya terapeu- tiskt användbara 6-[amino]oktahydro-5-oxo-tiazolo- eller 5 oxazolo[3,2-a]azepin-, [1,4]tiazepin- eller [1,4]oxazepin-3-karboxylsyraderivat med formeln (I) och farmaceutiskt godtagbara salter därav, \ V"A>\ H /) N / (I) 1. y-J CHvxS-Ri ' ' co2H H 2 ; is i vilken formel Ri är väte, acetyl eller morfolinoacetyl, R2 är Ar-Y-, där Ar är fenyl och Y är CH2, A är -CH2-, -O- eller -S-,

20 B är -S- eller -O-, förutsatt att, da B är -S-, sä är A ej -CH2-, kännetecknat därav, att • (a) för framställning av en förening med formeln ·: (I), där

25 Ri är acetyl, ; : omsätts en förening med formeln \ "

30. V (II) :.··· 0^ \ A-b 1 yJ CH^Br ’ ' C02H ' · R 2 35 I 110263 ί } där R2, A och B betecknar samma som ovan, med en förening med formeln RiSH (III), där Ri betecknar samma som ovan, i närvaro av en lämplig bas; eller (b) för framställning av en förening med formeln 5 (I), där Ri är väte, omsätts en förening med formeln \ \rAy Y //" N / (IV) I 0 CHwS-r’i * ' C02H R2 15 där R2, A och B betecknar samma som ovan, och Ri är acetyl, med litiumhydroxid i ett lämpligt lösningsmedel; eller (c) för framställning av en förening med formeln 20 (I) , där Ri är morfolinoacetyl, | , omsätts en förening med formeln H\ “/"N H ·' 25 0 //"N / (II) I 0 CHvvS-Br * ' CO2H *2 30 där R2, A och B betecknar samma som ovan, med 4-; . morfolintiolacetat i närvaro av ett lämpligt kopplings- medel i ett lämpligt aprotiskt lösningsmedel; och, om sä önskas, omvandlas den erhällna föreningen tili ett 35 farmaceutiskt godtagbart sait. 110263

7. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a, 6a, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) -tio-3-fenyl-propyl]amino]oktahydro-5-oxotiazolo[3-2-a][l, 4]oxazepin-3-30 karboxylsyra.

8. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer [3R-[3a, 6a, (S1) , 9aa]]-6-[[l-oxo-2 (S) -tio-3-fenyl-propyl]amino]oktahydro-5-oxo-oxazolo[3-2-a]azepin-3-karb-• 35 oxylsyra.