FI104951B - Menetelmä parenteraalisesti annettavan liposomikoostumuksen valmistamiseksi - Google Patents

Description

104:951 .

Menetelmä parenteraalisesti annettavan liposomikoostumuk-sen valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi parenteraalisesti käytettävien liposomi-dispersioiden tai niitä varten käytettävien kuivavalmis- ’ teiden muodossa, jotka sisältävät sinkki-ftalosyaniini- kompleksia ja synteettisiä, olennaisesti puhtaita fosfo-lipidejä. Intravenoosisesti annettavien liposomidisper-sioiden valmistamiseksi käytetyt kuivavalmisteet valmistetaan sinkki-ftalosyaniinikompleksista ja synteettisistä, olennaisesti puhtaista fosfolipideistä. Näitä farmaseuttisia koostumuksia käytetään ihmisen tai eläimen terapeuttiseen hoitoon.

Sekä itse sinkkiftalosyaniinikompleksi että sen terapeuttinen käyttö ovat tunnettuja fotodynaamisessa kemotera-piassa hoidettaessa tuumoreita [ks. J. D. Spikes, pho-tochem. Photobiol. 4_3, 691 (1986)]. Sinkki-ftalosyanii-nikompleksi annetaan intraperitoneaalisesti vesisuspensiona in vivo hiirille tai rotille ja koe-eläimissä tuotettua karsinoomaa säteilytetään energiarikkaalla valolla, etenkin näkyvällä valokimpulla (LASER).

Humaaniterapeuttiseen käyttöön intraperitoneaaliset anto-muodot ovat yleensä ongelmallisia esiintyvien kipujen ' johdosta pistettäessä vatsaonteloon ja lääkärin taidoille asetettujen korkeiden vaatimusten johdosta. Tästä syystä on toivottavaa saada aikaan vaihtoehtoinen, paremmin potilaiden hyväksymä parenteraalinen antomuoto, joka myös voi taata annettavan sinkki-ftalosyaniinikompleksin systeemisen jakautumisen.

-I « i

Intravenoosinen antomuoto mahdollistaa vaikuttavan aineen systeemisen jakautumisen. Se edellyttää kuitenkin tämän homogeenista jakautumista vesipitoisessa injektionesteessä .

104951

Sopivien intravenoosisten antomuotojen valmistamiseksi on tästä syystä ehdotettu, että käytetään vaikeasti liukenevan sinkki-ftalosyaniinikompleksin sijasta sen vesiliukoisia johdannaisia ja annetaan näitä intravenoosisesti [ks. J. Rousseau et ai., Int. J. Appi. Radiat. Isot. 36, 709 (1985)].

HydrofUlisten ryhmien, kuten sulfonyyliryhmien liittäminen sinkki-ftalosyaniinikompleksin porfyriinirunkoon parantaa tosin tämän kompleksin vesiliukoisuutta, mutta saadaan farmaseuttiseen käyttöön käyttökelvottomia johdannaisia, joilta puuttuu standardi, koska nämä koostuvat mono-...tetra-substituoitujen johdannaisten epäyhtenäisistä seoksista, joissa on useita paikkaisomeerejä (ks.

F. H. Moser et ai., The Phthalocyanines, CRC Press, 1983, Voi. Il, s. 20). Useiden isomeeristen johdannaisten erotus vaatisi epärealistista panosta.

Vaihtoehtoisesti on ehdotettu, että kemiallisesti puhdas, veteen liukenematon sinkki-ftalosyaniinikompleksi tehtäisiin liukenevaksi vesifaasiin lisäämällä apuainetta. Siten kompleksi voidaan sopivilla liukeneviksi tekevillä aineilla kapseloida fosfolipidien, esim. dipalmitoyyli-fosfatidyylikoliinin muodossa unilamellaarisiin liposo-:. ' meihin, jotka ovat pitkälti homogeenisesti dispergoita- vissa vesifaasiin (ks. E. Reddi et ai., Br. J. Cancer (1987) , !56, s. 597 - 600) .

Tämä homogeeninen liposomidispersio on kuitenkin tästä huolimatta vielä sopimaton annettavaksi ihmiselle intra-,· venoosisesti, koska dispersio valmistetaan niin kutsutun injektiomenetelmän mukaisesti käyttämällä suurehkoja määriä toksista pyridiiniä [ks. G. Valduga et ai., J. Inorg. Biochem. 29, 59 - 65 (1987)]. Pyridiini kuuluu niihin harvoihin liuottimiin, johon sinkki-ftalosyaniinikompleksi yleensä liukenee. Tämä liuos laimennetaan etanolilla 3 104951 ja pyridiini-pitoinen etanolinen liuos injektoidaan korotetussa lämpötilassa veteen tai puskuriliuokseen. Tämän menetelmän mukaisesti atseotrooppi-muodostuksen johdosta vesifaasiin jää aina prosentuaalinen osuus toksista pyri-diini-liuotinta.

Samoin liposomidispersioiden valmistus muiden menetelmien mukaisesti ilman orgaanisten liuottimien käyttöä on ongelmallista. Jopa silloin, kun käytetään liuotinvapaita kuivavalmisteita, kuten lyofilisaatteja tai haihdutus-jäännöksiä vesipitoisten liposomidispersioiden muodostamiseksi, näiden kuivavalmisteiden valmistus voi puolestaan tapahtua ainoastaan valituissa orgaanisissa liuotti-missa tai liuotinseoksissa olevista liuoksista lipidikom-ponenttien lipofilian ja vesiliukenemattomuuden johdosta. Sekä sinkki-ftalosyaniinikompleksin että käytettyjen fos-folipidien on oltava täysin liukenevia näihin liuottimiin. Liuottimen haihdutuksen yhteydessä muodostuttava homogeeninen ja valuva jauhe. Komponenttien erottumista ei saa tapahtua. Tämä aiheuttaisi sen, että kuivavalmiste liimautuu eikä muodostu liposomeja, vaan ainoastaan huonosti dispergoituvia agglomeraatteja, esim. suuria misel-lejä, jotka voivat saada aikaan embolioita (tulppautu-mia).

* · Tämän keksinnön tehtävänä on valmistaa parenteraalisesti, etenkin intravenoosisesti annettava liposomidispersio käyttämällä tällaisia liuottimia, jotka liuottavat täysin sinkki-ftalosyaniinikompleksin ja fosfolipidikomponentit ja joiden jäämämäärä liuotintähteistä, joita ei voida - enää poistaa, on alle 1 % mikä määrä olisi toksikologi- sesti vaaraton intravenoosisissa valmisteissa.

Keksintö koskee menetelmää farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi parenteraalisesti käytettävien liposomidispersioiden muodossa, jotka sisältävät 4 104951 a) sinkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan 1CH2—O — R,

2I

H2—o—CH o 31 II ®/a (,) 3CHj_o-p—o — (C0H2fl)-N-Rb i® \ mukaista synteettistä, olennaisesti puhdasta fosfolipi-diä, jossa kaavassa merkitsee C10-C2Q-alkanoyyliä, jossa on parillinen määrä C-atomeja, R2 merkitsee C10-C20-alkenoyyliä, jossa on parillinen määrä C-atomeja, Ra, Rb ja Rc merkitsevät vetyä tai C1-C4-alkyyliä ja n merkitsee kokonaislukua 2-4, mahdollisesti yhdessä c) kaavan 'ch2—O — R3 2l

r4 —o — ch o O

I II (S) Il (II)

3CH2_0—p—o—(CnH2n) — CH—C —OH

ιΩ I ©

οθ NH2 Y

mukaisen synteettisen, olennaisesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa kaavassa R3 ja R4 merkitsevät toisistaan riippumatta C1o_c20-a^^enoyyliS' dossa on parillinen määrä C-atomeja, n merkitsee kokonaislukua 1 - 3 ja Y® merkitsee farmaseuttisesti hyväksyttävän emäksen kationia,

Da d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä ja mah- ,· dollisesti parenteraalisiin käyttömuotoihin sopivia vesi- t liukoisia apuaineita.

Edellä ja seuraavassa mainituilla käsitteillä ja määritelmillä on keksinnön selityksen puitteissa etenkin seu-raavat merkitykset: 5 104951 Käsite farmaseuttinen koostumus tarkoittaa aineseosta, jota voidaan antaa parenteraalisesti, tässä tapauksessa ' etenkin intravenoosisesti ihmiselle ja eläimelle, etenkin ihmiselle ja jota voidaan käyttää erilaisten sairauksien, tässä tapauksessa tuumoreiden hoitamiseksi.

Parenteraalisesti käytettävä liposomidispersio sisältää liposomeja unilalnellaaristen, multilamellaaristen, suurien ja pienien liposomien muodossa, jotka koostuvat fos-folipidien (I) ja mahdollisesti (II) kaksoiskerrosjärjestelmästä, jossa on sisätila ja pallomainen muoto (unila-mellaarinen), tai jotka koostuvat fosfolipidien (I) ja mahdollisesti (II) useasta samankeskisestä kaksoiskerros-järjestelmästä, jossa on sisätila ja pallomainen muoto (kaksoiskerrosten tai kalvojen "sipulinkuorimainen" rakenne - multilamellaarinen). Liposomien koko voi olla valmistustavasta riippuen n. 1,0 x 10-8 - n. 1,0 x 10-5 m.

Liposomien terapeuttinen käyttö erilaisten vaikuttavien aineiden kantoaineina on tunnettua. Siten liposomeja on ehdotettu proteiinien, esim. vasta-aineiden tai entsyymien, hormonien, vitamiinien tai geenien kantoaineiksi tai analyyttisiin tarkoituksiin leimattujen yhdisteiden kantoaineiksi.

Liposomeihin perustuvia farmaseuttisia antomuotoja on esitetty yleisteoksessa Gregoriadis G. (julkaisija), Liposome Technology, Voi. II, Incorporation of Drugs, Proteins and Genetic Material, CRC 1984. Liposomeihin perus-- ] tuvan antomuodon edut on esitetty tiivistetysti yleis teoksessa Knight, C. G. (julkaisija), Liposomes: From Physical Structure to Therapeutic Applications, Elsevier 1981, luku 16, s. 166.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettu liposomidispersio on vapaa kiintoainehiukkasista ja suurehkoista lipidiag- 6 104951 gregaateista, varastointistabiili myös huoneen lämpötilassa useiden päivien - viikkojen ajan, reprotusoitavissa komponenttien määräosuuden suhteen, käytettyjen lipidi-komponenttien ja orgaanisten liuottimien jäämämäärien suhteen toksikologisesti vaaraton ja sopii in vitro- ja in vivo-tulosten perusteella parenteraaliseen, etenkin intravenoosiseen käyttöön ihmiselle.

Orgaanisten tähteiden, esim. alempialkyylin, alempialky-leenin, alempialkoksin, alempialkanoyylin jne. yhteydessä käytetty käsite "alempi" tarkoittaa, että tällaiset orgaaniset tähteet sisältävät korkeintaan 7, etenkin korkeintaan 4 hiiliatomia, mikäli toisin ei ole määritelty.

Kaavojen I ja II mukaisten fosfolipidien nimistö ja C-atomien numerointi tapahtuu julkaisussa Eur. J. of Bio-chem. 79, 11 - 21 (1977) "Nomenclature of Lipids" [IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature (CBN)] esitettyjen suositusten mukaisesti (sn-nimistö, stereospecific numbering).

Sinkki-ftalosyaniinikompleksi a) vastaa julkaisussa G.

Valduga et ai., Photochem. and Photobiology, Voi. 48, No.

1 (1988), s. 1 - 5, sivulla 1 esitettyä yhdistettä, joka on jo pitkään ollut tunnettu.

Kaavojen I ja II mukaisten synteettisten fosfolipidien puhtaus on yli 90, etenkin kuitenkin yli 95 paino-%.

Tämä puhtausaste voidaan osoittaa tunnettujen analyyttis-1 ten menetelmien avulla, esim. kromatografisesti, kuten t esim. HPLC:llä, kaasukromatografisesti tai paperikroma-tografisesti. .

Kaavan I mukaisessa fosfolipidissä tähteen merkitessä "C1Q-C2g-alkanoyyliä, jossa on parillinen määrä C-atome- 7 104951 ja" se on etenkin n-dodekanoyyli, n-tetradekanoyyli, n-heksadekanoyyli, n-oktadekanoyyli tai n-ikosanoyyli.

Kaavan I mukaisessa fosfolipidissä tähteen R2 merkitessä "cio-c20"alken°yyliä' j°ssa on parillinen määrä C-atome-ja" se on etenkin 9-cis-dodekenoyyli, 9-cis-tetradeke-noyyli, 9-cis-heksadekenoyyli, 6-cis-oktadekenoyyli, 6-trans-oktadekenoyyli, 9-cis-oktadekenoyyli, 9-trans-okta-dekenoyyli, ll-cis-oktadekenoyyli tai 9-cis-ikosenoyyli.

Kaavan I mukaisessa fosfolipidissä Ra, R^ ja Rc merkitsevät edullisesti C1-C4-alkyyliä, etenkin metyyliä.

Kaavan I mukaisessa fosfolipidissä n on kokonaisluku 2 -4, etenkin 2. Kaavan -(CnH2n)- mukainen ryhmä merkitsee haarautumatonta tai haarautunutta alkyleeniä, esim. 1,1-etyleeniä, 1,1-, 1,2- tai 1,3-propyleeniä tai 1,2-, 1,3-tai 1,4-butyleeniä. Etenkin se on 1,2-etyleeni (n = 2).

Kaavan I mukaisessa eräässä erittäin edullisessa fosfolipidissä R^ merkitsee n-dodekanoyyliä, n-tetradekanoyyliä, n-heksadekanoyyliä tai n-oktadekanoyyliä ja R2 merkitsee 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradekenoyyliä, 9-cis-heksa-dekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä tai 9-cis-ikosenoyy-liä, Ra, R|j ja Rc merkitsevät metyyliä ja n on kaksi.

Eräs erittäin edullinen kaavan I mukainen fosfolipidi on synteettinen l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli ) -3-sn-fosfatidyylikoliini , jonka puhtaus on yli 90 %, etenkin kuitenkin yli 95 %.

Kaavan II mukaisessa fosfolipidissä tähteillä R3 ja R4 on kaavan I yhteydessä tähteille R^ ja R2 esitetyt merkitykset.

Kaavan II mukaisessa fosfolipidissä tähteiden R3 ja R4 : merkitessä "C10-C2Q-alkenoyyliä, jossa on parillinen mää- β 104951 rä C-atomeja" ne merkitsevät edullisesti 9-cis-dodeke-noyyliä, 9-cis-tetradekenoyyliä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 6-cis-oktadekenoyyliä, 6-trans-oktadekenoyyliä, 9-cis-ok-tadekenoyyliä, 9-trans-oktadekenoyyliä, 11-cis-oktadeke-noyyliä tai 9-cis-ikosenoyyliä.

Farmaseuttisesti hyväksyttävän emäksen kationi Y© on esimerkiksi alkalimetalli-, esim. litium-, natrium- tai ka-liumioni, ammoniumioni, mono-, di- tai tri-C^-C^-alkyyli-ammoniumioni, esim. trimetyyli-, etyyli-, dietyyli- tai trietyyliammoniumioni, tetrametyyliammoniumioni, 2-hyd-roksietyyli-tri-C1-C4-alkyyliammoniumioni, esim. koliini-kationi, tai 2-hydroksietyyliammoniumioni, sekä emäksisen aminohapon, esim. lysiinin tai arginiinin kationi.

^ on edullisesti natriumioni.

Eräässä erittäin edullisessa kaavan II mukaisessa fosfo-lipidissä R3 ja R4 ovat identtisiä ja ne merkitsevät esim. 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradekenoyyliä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä tai 9-cis-ikosenoyyliä, n on yksi ja Y® merkitsee natriumionia.

Eräs erittäin edullinen kaavan II mukainen fosfolipidi on . synteettinen natrium-l,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn- fosfatidyyli-S-seriini, jonka puhtaus on yli 90 %, etenkin kuitenkin yli 95 %.

Kaavojen I ja II mukaisissa fosfolipideissä esiintyvistä asyylitähteistä käytetään myös suluissa esitettyjä nimi-tyksiä: 9-cis-dodekenoyyli (lauroleoyyli), 9-cis-tetradekenoyyli (myristoleoyyli), 9-cis-heksadekenoyyli (palmitoleoyyli), 6-cis-oktadekenoyyli (petroseloyyli), 6-trans-oktadeke-noyyli (petroselaidoyyli), 9-cis-oktadekenoyyli (oleoyy-li), 9-trans-oktadekenoyyli (elaidoyyli), 11-cis-oktade- • 9 104951 kenoyyli (vakkenoyyli), 9-cis-ikosenoyyli (gadoleoyyli), n-dodekanoyyli (lauroyyli), n-tetradekanoyyli (myristoyy-li), n-heksadekanoyyli (palmitoyyli), n-oktadekanoyyli (stearoyyli), n-ikosanoyyli (arakidoyyli).

Farmaseuttisesti hyväksyttävään kantonesteeseen d) sisältyvät komponentit a) ja b) tai a), b) ja c) liposomeina, etenkin multilamellaarisina liposomeina siten, että useiden päivien - viikkojen aikana mitään kiintoaineita tai kiinteitä aggregaatteja, kuten misellejä ei muodostu takaisin ja kirkas tai mahdollisesti hieman opalisoiva neste voidaan käyttää parenteraalisesti, etenkin intravenoo-sisesti mainittujen komponenttien kanssa, mahdollisesti suodattamisen jälkeen.

Kantonesteeseen d) voi sisältyä esim. farmaseuttisesti hyväksyttäviä, ei-toksisia vesiliukoisia apuaineita, joita tarvitaan isotonisten olosuhteiden aikaansaamiseksi, esim. ionisia lisäaineita, kuten keittosuolaa, tai ei-io-nisia lisäaineita (rungonmuodostusaineita), kuten sor-biittia, manniittia, glukoosia tai laktoosia. Etenkin näitä lisäaineita, esim. keittosuolaa tai manniittia sisältyy kuivavalmisteeseen ennalta määrättyinä määrinä, jotka ovat tarpeen parenteraalisesti käytettävien liuosten isotonisten olosuhteiden aikaansaamiseksi.

Liuokseen tai kuivavalmisteeseen sopivia vesiliukoisia apuaineita ovat tämän lisäksi nestemäisiin farmaseuttisiin valmisteisiin käyttökelpoiset kostutusaineet tai tensidit varsinaisessa merkityksessä, etenkin ei-ioniset, ' i rasvahappo-polyhydroksialkoholiesteri-tyyppiset tensidit, kuten sorbitaanimonolauraatti, -oleaatti, -stearaatti tai -palmitaatti, sorbitaanitristearaatti tai -trioleaatti, rasvahappo-polyhydroksialkoholiestereiden polyoksietylee-ni-additiotuotteet, kuten polyoksietyleeni-sorbitaanimo-nolauraatti, -oleaatti, -stearaatti, -palmitaatti, -tri- • t 10 104951 stearaatti tai -trioleaatti, polyetyleeniglykoli-rasva-happoesterit, kuten polyoksietyylistearaatti, polyetylee-niglykoli-400-stearaatti, polyetyleeniglykoli-2000-stea-raatti, etenkin Pluronic®- (Wyandotte Chem. Corp.) tai Synperonic®- (ICI) tyyppiset etyleenioksidi-propyleeniok-sidi-segmenttipolymeerit.

Liposomidispersio voidaan valmistaa keksinnön mukaisesti valmistetusta kuivavalmisteesta.

Keksintö koskee myös menetelmää farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseksi kuivavalmisteen muodossa, jotka sisältävät a) sinkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, olennaisesti puhdasta fosfolipidiä, jossa symboleilla , R2, Ra, R^ ja Rc sekä n on mainitut merkitykset, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, olennaisesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla R3, R4 ja Y+ on mainitut merkitykset, ja mahdollisesti d) intravenoosiseen käyttömuotoon sopivia, vesiliukoisia apuaineita.

Kuivavalmiste on mielivaltaisen termisen kuivatusmenetel-män, kuten huoneen lämpötilassa tai korotetussa lämpötilassa suoritetun haihduttamisen tai etenkin jäädytyskui-vatuksen mukaisesti saatava jäännös, joka sisältää alle l % (paino-%), etenkin alle 0,5 % orgaanisia liuotintähtei-tä, kuten piperidiiniä, tert-butanolia tai dimetyylisul-foksidia.

Kuivavalmisteeseen sisältyy sinkki-ftalosyaniinikompleksia n. 0,1 - 5,0 paino-%:n, etenkin 0,1 - 1,0 paino-%:n määräsuhteessa kaavan I ja mahdollisesti II mukaisten fosfolipidien - komponenttien b) ja mahdollisesti c) -koko määrän suhteen. Kuivavalmisteessa kaavan I mukaisten « U 104951 fosfolipidien - lesitiinikomponentin - sekoitussuhde kaavan II mukaisiin fosfolipideihin - seriinikomponenttiin -nähden on n. 50:50 paino-%, etenkin 70:30 paino-%.

Keksinnön mukaisesti saadulle kuivavalmisteelle on tunnusomaista annosyksikkömuotojen hyvä täytettävyys, niiden punnittujen erien tarkka jäljennettävyys ja varastointi-stabiilius .

Keksinnön kohteena on samoin menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi parenteraalisesti käytettävän liposomidispersion muodossa, mikä menetelmä on tunnettu siitä, että kuivavalmiste, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, olennaisesti puhdasta fosfolipidiä, jossa symboleilla R·^ R2, Ra, R^ ja Rc sekä n on mainitut merkitykset, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, olennaisesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla R3, R4 ja Y® on mainitut merkitykset, ja mahdollisesti d) parenteraaliseen käyttömuotoon sopivia, vesiliukoisia apuaineita, dispergoidaan vesifaasiin ja saatava vesidis-persio puskuroidaan mahdollisesti pH-arvoon 7,0 - 7,8 ja/tai eristetään liposomien fraktio, jolla on haluttu läpimitta-alue.

Menetelmän yksittäiset vaiheet suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla siten, että keksinnön mukaisesti saatava kuivavalmiste rekonstituoidaan ennen käyttöä liposomidis-persioksi ennalta määrättyyn nestemäärään, etenkin injek-- I tiota varten tarkoitettuun itiövapaaseen veteen (pyrogee- nivapaa).

Dispergointi suoritetaan esimerkiksi ravistelemalla (esim. Vortex-sekoitin) tai sekoittamalla vesifaasia, johon on edellä lisätty kuivavalmiste. Liposomien muodostu- • * 12 104951 minen, jotka voivat olla suuria, pieniä, unilamellaarisia tai multilamellaarisia, tapahtuu spontaanisti, s.o. ilman ylimääräistä energian syöttöä ulkoapäin ja suurella nopeudella. vesifaasiin voidaan dispergoida n. 0,1 - 50 paino-% (suhteessa vesidispersion koko määrään), etenkin 2-20 paino-% kuivavalmistetta.

Happamasti tai emäksisesti reagoivat vesidispersiot puskuroidaan edullisesti pH-arvoon 7,0 - 7,8, etenkin pH-ar-voon 7,2 - 7,4. Mahdollisesti dispergointi suoritetaan jo tähän pH-arvoon puskuroituun, vesipitoiseen puskuriliuokseen.

Dispergointi suoritetaan alle n. 36"C:n lämpötiloissa, etenkin huoneen lämpötilassa. Mahdollisesti menetelmä suoritetaan jäähdyttäen ja/tai inertin kaasun, esim. typen tai argonin atmosfäärissä. Saatavat liposomit ovat hyvin pitkään (useita viikkoja tai kuukausia) stabiileja vesifaasissa.

Muodostuneiden liposomien koko riippuu mm. vaikuttavan aineen ja lipidikomponenttien määrästä, niiden sekoitussuhteesta ja komponenttien konsentraatiosta vesidisper-siossa ja valmistusmenetelmästä. Siten esimerkiksi korot-. tamalla tai alentamalla lipidikomponenttien konsentraa- tiota voidaan valmistaa vesifaaseja, joissa on suuri osuus pieniä tai suuria liposomeja.

Liposomidispersion jälkikäsittelyllä, esim. käsittelemällä ultraäänellä tai suulakepuristamalla suorahuokoisten *: suodattimien (esim. Nucleopore®) läpi voidaan saada erit täin yhtenäinen liposomien kokojakautuma.

Suurien liposomien fraktion erottaminen ja eristäminen pienien liposomien fraktiosta, mikäli tämä on yleensä tarpeen, tapahtuu tavanomaisilla erotusmenetelmillä, 13 104951 esim. geelisuodatuksella, esim. käyttämällä kantoaineena Sepharose® 4B:tä tai Sephacryl®:iä (Pharmacia SE), tai sedimentoimalla liposomit ultrasentrifugissa, esim.

160.000 x g:n painovoimakentällä. Esimerkiksi usean tunnin kestävän, esim. n. 3 tuntia kestävän sentrifugoinnin jälkeen tässä painovoimakentässä suuremmat liposomit laskeutuvat, kun taas pienemmät liposomit pysyvät dispergoi-tuneina ja ne voidaan dekantoida. Sentrifugoimalla useaan kertaan saadaan aikaan suurien liposomien täydellinen erotus pienistä liposomeista.

Etenkin geelisuodatuksella voidaan erottaa kaikki vesi-faasissa esiintyvät liposomit, joiden läpimitta on suurempi kuin n. 6,0 x 10-® m, sekä kapseloimattomat komponentit ja ylimääräiset, dispergoituneet lipidit, jotka esiintyvät suurimolekyylisinä aggregaatteina, ja valmistaa siten vesidispersio, jossa on suhteellisen yhtenäisen koon omaavien liposomien fraktio.

Liposomien muodostuminen ja niiden pitoisuus vesifaasissa voidaan osoittaa sinänsä tunnetulla tavalla erilaisten fysikaalisten mittausmenetelmien mukaisesti, esim. jäädy-tysrikotuilla (freeze fracture) näytteillä ja ohutleik-keillä elektronimikroskoopissa tai röntgendiffraktiolla, . dynaamisella valonhajonnalla, suodoksen massamäärityksel- lä analyyttisessä ultrasentrifugissa ja ennen kaikkea spektroskooppisesti, esim. ydinresonanssispektrissä (*H, 13C ja 31P).

Tämän keksinnön kohteena on samoin uusi, keksinnöllinen - : menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi kuivavalmisteen muodossa, mikä menetelmä on tunnettu siitä, ’että a) sinkki-ftalosyaniinikompleksi ja b) kaavan I mukainen synteettinen, olennaisesti puhdas fosfolipidi, jossa symboleilla Rj, R2, Ra, Rj-, ja Rc sekä i I4 104951 n on mainitut merkitykset, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, olennaisesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla R3, R4 ja Y® on mainitut merkitykset, liuotetaan farmaseuttisesti hyväksyttävään orgaaniseen liuottimeen, jonka jäämämäärä kui-vavalmisteessa on toksikologisesti vaaraton, ja mahdollisesti d) lisätään kantonestettä ja parenteraalisiin käyttömuotoihin sopivia, vesiliukoisia apuaineita ja poistetaan liuotin tai liuotinseos.

Farmaseuttisesti hyväksyttävä orgaaninen liuotin, jonka jäämämäärä kuivavalmisteessa on toksikologisesti vaaraton, soveltuu sinkki-ftalosyaniinikompleksin ja mahdollisesti fosfolipidi-komponenttien (I) ja (II) kirkkaan liuoksen valmistamiseksi. Jos fosfolipidit eivät liukene orgaaniseen liuottimeen, johon sinkki-ftalosyaniinikomp-leksi liukenee, nämä liuotetaan toiseen liuottimeen, esim. tert-butanoliin ja tämä liuos yhdistetään sinkki-ftalosyaniinikompleksin liuoksen kanssa.

Edullisia orgaanisia liuottimia, jotka täyttävät kuiva-valmisteessa esiintyville jäämämäärille asetut toksikologiset vaatimukset ja joihin sinkki-ftalosyaniini-komplek-si liukenee, ovat dimetyylisulfoksidi, N-metyyli-2-pyrro- « lidoni ja piperidiini sekä niiden seokset.

Dimetyylisulfoksidiin ja N-metyyli-2-pyrrolidiiniin (NMP) liukenee ainoastaan sinkki-ftalosyaniini-kompleksi, mutta eivät fosfolipidit (I) ja (II). Piperidiiniin liukenevat *. sekä sinkki-ftalosyaniini-kompleksi että myös fosfolipi dit (I) ja (II). Kaikki liuottimet ovat toksikologisesti vaarattomia kuivavalmisteessa esiintyvien alle 1 %:n, etenkin alle 0,5 %:n jäämämäärissä.

Käytettäessä dimetyylisulfoksidia tai NMP:tä sinkki-ftalosyaniini-kompleksi liuotetaan näiden liuottimien tarvit 15 104951 tavaan vähimmäismäärään ja tämä liuos yhdistetään fosfo-lipidien toisen liuoksen kanssa, joka on sekoitettavissa sinkki-ftalosyaniini-kompleksin ensimmäisen liuoksen kanssa. Tälle toiselle liuottimelle sen lisäksi, että se sekoittuu dimetyylisulfoksidi-liuoksen kanssa, on asetettava samat kuivavalmisteessa esiintyville jäämämäärille asetetut toksikologiset vaatimukset. Eräs tällainen sopiva liuotin, johon fosfolipidit (I) ja (II) liukenevat täydellisesti, on esim. tert-butanoli.

Kuivavalmisteen, etenkin lyofilisaatin valmistus voidaan suorittaa tunnetun menetelmän muunnelmalla siten, että ensin liuotetaan ennalta määrätty määrä fosfolipidiä, esim. l-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia, mahdollisesti hieman lämmittäen, liuotustapahtumaan tarvittavaan tert-butanolln määrään ja tämä kirkas liuos yhdistetään toisen liuoksen kanssa, joka sisältää määrätyn määrän sinkki-ftalosyaniini-komplek-sia liuotustapahtumaan tarvittavassa määrässä dimetyyli-sulfoksidia tai NMPrtä. Vaihtoehtoisesti fosfolipidit (I) ja (II) n. 0°C:ssa - huoneen lämpötilassa, etenkin 0° C:ssa, ja sinkki-ftalosyaniini-kompleksi huoneen lämpötilassa - n. 40eC:ssa, etenkin huoneen lämpötilassa, voidaan liuottaa piperidiinin tarvittavaan vähimmäismäärään . tai piperidiiniin, joka sisältää n. 10 %, etenkin n. 2 - 3 % vettä, ja tästä kirkkaasta liuoksesta voidaan poistaa liuotin kuivavalmisteen valmistamiseksi. Mainituissa orgaanisissa liuottimissa olevaan kirkkaaseen liuokseen voidaan lisätä tämän jälkeen kantoneste d), joka sisältää vesiliukoisia apuaineita, etenkin ei-ionisia lisäaineita, '·' kuten laktoosia. Kuivavalmiste voidaan valmistaa poista malla liuotinseos alhaisessa lämpötilassa alle n. 0°C:ssa (lyofilisointi) tai normaalissa tai korotetussa lämpötilassa (kalvonmuodostus). Kuivavalmisteen valmistamiseksi käytetty liuotinseos voidaan myös dialysoida puhdistusta varten ja dialysoitu vesiliuos, joka ei sisällä orgaanis- ie 104951 ta liuotinta, voidaan konsentroida ultrasuodattamalla.

Tämän jälkeen valmistetaan kuivavalmiste poistamalla vesi, edullisesti lyofilisoimalla. Lyofilisoitavan liuoksen määrätyt määrät voidaan täyttää annosyksikköä varten sopiviin säiliöihin, kuten ampulleihin, esim. lasisiin pis-toampulleihin (pienpulloihin). Täytetyt säiliöt voidaan sitten jäädyttää tämän jälkeen n. -40° - -50eC:ssa, etenkin -45eC:ssa ja sitten lyofilisoida n. 0,2 - 0,6 mbaarin paineessa lämmittämällä hitaasti n. 25° - 35eC:n loppu-lämpötilaan.

Liuotin tai liuotinseos komponenttien a), b) ja c) kanssa voidaan muuntaa myös suoraan kuivavalmisteeksi jäähdyttämättä termisesti suuremmassa astiassa (kalvonmuodostusme-netelmä). Tosin jäädytyskuivatusta annosyksikön sisältävistä pienemmistä astioista pidetään parempana, koska tämä menetelmä välttää itse kuivavalmisteen täyttötapah-tuman ja mahdollistaa siten annosyksikköjen tarkan jaon nesteistä.

Yllättävästi mainituilla menetelmillä onnistutaan valmistamaan jäljennettävästi kuivavalmisteita, etenkin lyofi-lisaatteja ja niistä rekonstituoitavia liposomidisper-sioita, jotka ovat stabiileja ja joita voidaan käyttää . injektioon.

« 9

Mainittujen menetelmien mukaisesti saatavia kuivavalmisteita käytetään intravenoosisesti annettavien liposomi-dispersioiden valmistamiseksi.

• Tämän keksinnön mukaisesti sinkki-ftalosyaniinikompleksia " ja kaavan I ja mahdollisesti kaavan II mukaista fosfoli- pidikomponenttia käytetään kuivavalmisteiden, etenkin lyö- filisaattien valmistamiseksi edellä esitetyn metodiikan mukaisesti. Näitä farmaseuttisia koostumuksia käytetään ihmisen tai eläimen terapeuttisessa hoitomenetelmässä, ” 104951 etenkin kemoterapiassa tuumoreiden hoitamiseksi. Liposo-midispersio annetaan parenteraalisesti, etenkin intrave-noosisesti ja karsinoomaa säteilytetään energiarikkaalla valolla, etenkin näkyvällä valokimpulla (LASER).

Keksintö koskee etenkin menetelmää farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi intravenoosisesti annettavien liposomidispersioiden muodossa, jotka sisältävät a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, olennaisesti puhdasta fosfolipidiä, jossa Rj merkitsee n-dodekanoyyliä, n-tet-radekanoyyliä, n-heksadekanoyyliä tai n-oktadekanoyyliä ja R2 merkitsee 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradekenoyy-liä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä tai 9-cis-ikosenoyyliä, Ra, R^ ja Rc merkitsevät metyyliä ja n on 2, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, olennaisesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa R3 ja R4 ovat samanlaisia ja ne merkitsevät 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradekenoyy-liä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä tai 9-cis-ikosenoyyliä, n on 1 ja Y® merkitsee natriumionia, ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä ja mahdollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesi- . liukoisia apuaineita.

Eräs edullinen keksinnön suoritusmuoto koskee samoin menetelmää farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi kuivavalmisteiden muodossa, jotka sisältävät mainittuja edullisia komponentteja a), b), mahdollisesti yhdessä . komponenttien c) kanssa, sekä d) intravenoosisiin käyttö muotoihin sopivia vesiliuokoisia apuaineita.

Keksinnön kohteena on etenkin menetelmä farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi intavenoosisesti annettavien liposomidispersioiden muodossa, jotka sisältävät • ·' 18 104951 a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) synteettistä, olennaisesti puhdasta 1-n-heksadekanoyy-li-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), mahdollisesti yhdessä c) synteettisen, olennaisesti puhtaan natrium-1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriinin (II) kanssa, ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä ja mahdollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita.

Keksinnön erään edullisen suoritusmuodon mukaan farmaseuttiset koostumukset valmistetaan lyofilisaattien muodossa, jotka sisältävät a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) synteettistä, olennaisesti puhdasta 1-n-heksadekanoyy- li-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), mahdollisesti yhdessä c) synteettisen, olennaisesti puhtaan natrium-1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriinin (II) kanssa, ja d) intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita.

: Ensisijaisesti farmaseuttiset koostumukset valmistetaan keksinnön mukaisella menetelmällä intravenoosisesti annettavien liposomidispersioiden muodossa, jotka sisältävät a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) n. 70 paino-% (suhteessa komponenttiin c)) synteettistä, olennaisesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis- oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), yhdessä c) n. 30 paino-%:n kanssa (suhteessa komponenttiin b)) synteettistä, olennaisesti puhdasta natrium-1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä (II), ja 1 d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä sekä mah-

* · · I

104951 19 dollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita.

Keksinnön mukaisella valmistusmenetelmällä saadaan farmaseuttiset koostumukset lyofilisaattien muodossa, jotka sisältävät a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) n. 70 paino-% (suhteessa komponenttiin c)) synteettistä, olennaisesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), yhdessä c) n. 30 paino-%:n kanssa (suhteessa komponenttiin b)) synteettistä, olennaisesti puhdasta natrium-l,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä (II), sekä d) intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä.

Esimerkki 1: Pyörökolvissa liuotetaan 2 ml piperidiiniä, 1 mg sinkki-ftalosyaniinia, 70 mg vähintään 95%risesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli) -3-sn-fosfatidyylikoliinia ja 30 mg vähintään 95%:isesti puhdasta 1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-: seriiniä. Tämä liuos steriilisuodatetaan ACRODlSC-kalvo- suodattimen (2,2 x 10-7 m) läpi ja kirkas liuos täytetään pienpulloihin.

Sen jälkeen, kun liuos on jäädytetty -40°C:ssa, pienpul-loa kuivatetaan tyhjössä, kunnes on saavutettu 25°C:n • . lämpötila, ja suljetaan argonin atmosfäärissä.

Ennen käyttöä tähän kuivavalmisteeseen (lyofilisaattiin) lisätään huoneen lämpötilassa steriilillä ruiskulla 1,5 ml steriiliä, kalsium- ja magnesiumvapaata, fosfaattipus-kuroitua (pH 7,2 - 7,4) keittosuolaliuosta (Dulbecco) ja

XI

20 104951 pienpulloa ravistellaan minuutin ajan standardisoidulla laboratoriotäristimellä (Vortex, vaihe 7). Muodostunut liposomidispersio on 4°C:ssa varastointistabiili ja sitä voidaan käyttää intravenoosisesti.

Esimerkki 2; Pyörökolvissa 2 ml:aan piperidiiniä liuotetaan erästä riippua 0,1 - 1 mg sinkki-ftalosyaniinia ja 15 - 400 mg seosta, joka sisältää 7:3-painosuhteessa 95 -100%:sesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktade-kenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia ja 95 - 100%risesti puhdasta l,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-seriiniä. Tämä liuos steriilisuodatetaan ACRODISC-kalvo-suodattimen (2,2 x 10-7) läpi ja kirkas liuos täytetään pienpulloihin.

Pienpulloa pyöritetään 150 rpmrssä ja liuotin puhalletaan pois puhdistetun, 1 baarissa suodatetun typen virrassa.

Tämän jälkeen pienpullo evakuoidaan tyhjössä 6,0 x 10~2 baarissa. Pienpullo suljetaan argonin suoja-atmosfäärissä. Ennen käyttöä tähän valmistettuun kalvoon lisätään huoneen lämpötilassa ruiskulla 1,5 ml steriiliä, kalsium- ^ ja magnesiumvapaata, fosfaattipuskuroitua (pH 7,2 - 7,4) i ! keittosuolaliuosta (Dulbecco) ja pienpulloa ravistellaan '1 ; 10 minuutin ajan standardisoidulla laboratoriotäristimel lä (vaihe 7). Muodostunut liposomidispersio on 4°C:ssa varastointistabiili ja sitä voidaan käyttää intravenoosisesti.

Esimerkki 3: Esimerkin 1 mukaisesti esimerkissä 2 esitetyt liuokset voidaan kuivattaa jäädyttämisen jälkeen tyhjössä ja valmistaa lyofilisaatteja.

Esimerkki 4: Esimerkkien 2 ja 3 mukaisesti voidaan valmistaa myös liuoksia, nimittäin seoksia, jotka sisältävät 13 painosuhteissa 5:5 - 9:1 l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-ok- 104951 21 tadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia ja 1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-fosfatidyyliseriiniä.

Esimerkki 5: Pyörökolvissa 0,5 ml:aan tert-butanolla liuotetaan 125 ml 95%:ista puhdasta 1-n-heksadekanoyyli- 2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (Avanti , Polar Lipids). Toisessa pyörökolvissa liuotetaan erikseen 0,05 mg sinkki-ftalosyaniinia 0,5 ml:aan steriiliä dimetyylisulfoksidia.

Molemmat liuokset yhdistetään ja suodatetaan steriiliksi ACRODISC-kalvosuodattimen (2,2 x 10-7 m) läpi. Kirkas liuos täytetään pienpulloon ja tämä jäädytetään -80°C:s-sa. Pienpulloa kuivatetaan tyhjössä, kunnes on saavutettu 25eC:n lämpötila ja sitten se suljetaan argonin atmosfäärissä .

Muut menetelmän vaiheet suoritetaan esimerkin 1 mukaisesti .

Esimerkki 6: Pyörökolvissa 0,5 ml:aan tert-butanolia liuotetaan 12,5 - 25 mg 95%:ista puhdasta 1-n-heksadeka-noyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (Avanti, Polar Lipids). Toisessa pyörökolvissa liuo-. tetaan erikseen 0,05 mg sinkki-ftalosyaniinia 0,5 ml:aan steriiliä dimetyylisulfoksidia.

Esimerkin 5 mukaisesti molemmat liuokset yhdistetään, suodatetaan steriiliksi ACRODISC-kalvosuodattimen läpi ja täytetään pienpulloon. Pienpulloa pyöritetään 150 rpm:ssä . ja liuotin puhalletaan pois puhdistetun, 1 baarissa suo datetun typen virrassa. Tämän jälkeen pienpullo evakuoidaan tyhjössä 6,0 x 1Ό-2 mbaarissa. Pienpullo suljetaan argonin suoja-atmosfäärissä.

Muut menetelmän vaiheet suoritetaan esimerkin 2 mukaisesti.

22 104951

Esimerkki 7: Pyörökolvissa liuotetaan 1 ml steriiliä piperidiiniä, 0,5 mg sinkki-ftalosyaniinia Ja 250 mg 95%:i-sesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyy-li)-3-sn-fosfatidyylikoliinia. Tämä liuos suodatetaan steriiliksi ACRODISC-kalvosuodattimen (2,2 x 10“7 m) läpi ja kirkas liuos täytetään pienpulloihin.

Esimerkin 5 mukaisesti voidaan valmistaa lyofilisaatti tai valinnaisesti esimerkin 6 mukaisesti kalvojäännös, joka muunnetaan tämän jälkeen esimerkin l tai 2 mukaisesti intavenoosisesti käytettäväksi liposomidispersioksi.

Esimerkki 8; Esimerkin 7 mukaisesti voidaan valmistaa lyofilisaatti tai kalvojäännös liuottamalla 3 mg sinkki-ftalosyaniinia 1 ml:aan steriiliä piperidiiniä. Näistä kuivavalmisteista valmistetaan tämän jälkeen esimerkin 1 tai 2 mukaisesti intravenoosisesti käytettävä liposomi-dispersio.

Esimerkki 9: Massakolvissa 400 ml:aan erittäin puhdasta (puriss.) piperidiiniä liuotetaan huoneen lämpötilassa erästä riippuen 200 - 400 mg sinkki-ftalosyaniinia ja täydennetään 500 ml:aan. Toisessa kolvissa liuotetaan huoneen lämpötilassa erästä riippuen 120 - 240 mg seosta, ; joka sisältää 7:3-painosuhteessa 95 - 100%risesti puhdas ta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fos-fatidyylikoliinia ja 95 - 100%:isesti puhdasta 1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä, 6 ml:aan erittäin puhdasta (puriss.) piperidiiniä ja siihen lisätään 6 - 12 ml yllä esitettyä sinkki-ftalosyaniini- .. liuosta. Tämä liuos suodatetaan steriiliksi ACRODISC- kalvosuodattimen (2,2 x 10-7 m) läpi ja kirkas liuos täytetään pienpulloihin.

Muut menetelmän vaiheet suoritetaan esimerkin 1 mukaisesti.

• · 104951 23

Esimerkki 10: Massakolvissa 400 ml:aan erittäin puhdasta (puriss.) piperidiiniä liuotetaan huoneen lämpötilassa erästä riippuen 200 - 400 mg sinkki-ftalosyaniinia ja täydennetään 500 ml:aan. Toisessa kolvissa liuotetaan huoneen lämpötilassa erästä riippuen 120 - 240 mg seosta, joka sisältää 7:3-painosuhteessa 95 - 100%:isesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fos-fatidyylikoliinia ja 95 - 100%:isesti puhdasta l,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä, 6 ml:aan piperidiini/vesi-seosta (2 - 10 %) 0 - 4eC:ssa ja siihen lisätään tipoittain tässä lämpötilassa 6 - 12 ml yllä esitettyä sinkki-ftalosyaniini-liuosta. Tämä liuos suodatetaan steriiliksi ACRODISC-kalvosuodattimen (2,2 x 10-7 m) läpi ja kirkas liuos täytetään pienpulloihin.

Muut menetelmän vaiheet suoritetaan esimerkin 2 mukaisesti.

Esimerkki li: Esimerkin 9 tai esimerkin 10 mukaisesti valmistettua sinkki-ftalosyaniinin ja lipidiseoksen liuosta ei täytetä steriilisuodatuksen jälkeen pienpulloihin, vaan se lyofilisoidaan erämenetelmän mukaisesti. Tämän lyofilisaatin määräerät muunnetaan esimerkin 1 mukaisesti liposomidispersioksi.

Esimerkki 12: Pyörökolvissa 205 ml:aan juuri tislattua piperidiiniä liuotetaan 100 mg sinkki-ftalosyaniinia, 7000 mg 95%risesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekanoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-koliinia (POPC) ja 3000 mg 95%:isesti puhdasta natrium-1,2-di-(9-cis-oktadeka- .. noyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä (OOPS).

Tähän liuokseen lisätään sekoittaen 2000 ml 9,75%:ista (w/v) vesipitoista laktoosiliuosta. pH-arvo säädetään arvoon 7,0 lisäämällä laimennettua HCl:ää ja sitten muodostunut dispersio konsentroidaan tangentiaalisen Millipore • · - 24 104951

Minitan®-dialyysilaitteen avulla konsentraatioon, joka sisältää 0,5 mg Zn-ftalosyaniinia/ml, ja dialysoidaan 9,75%lista laktoosia (2000 ml) vastaan.

Muodostunut laktoosipitoinen dispersio suodatetaan sitten steriiliksi ACRODISC-kalvosuodattimen (2,2 x 10-7 m) läpi ja täytetään pienpulloihin (2 ml/pienpullo, sisältää 1 mg Zn-ftalosyaniinia). Sen jälkeen, kun dispersio on jäädytetty -40eC:ssa, pienpulloja kuivatetaan tyhjössä, kunnes on saavutettu 25*C:n lämpötila, ja ne suljetaan argonin atmosfäärissä.

Muodostuneet kuivavalmisteet ovat varastointistabiileja useita vuosia 4°C:ssa.

Ennen käyttöä pienpullossa olevaan kuivavalmisteeseen ruiskutetaan huoneen lämpötilassa steriilillä ruiskulla 2,0 ml vettä. Minuutin kestävän maksimaalisen liuotusajan jälkeen muodostuu liposomidispersio, jota voidaan käyttää intravenoosisesti.

Esimerkki 13: Esimerkin 12 mukaisesti menetelmä voidaan suorittaa myös käyttämällä 10000 mg POPC:tä.

• ; Esimerkki 14: Esimerkin 13 mukaisesti menetelmä voidaan • — suorittaa myös käyttämällä 300 mg POPCrtä tai 210 mg POPC:tä ja 90 mg OOPS:ää.

Esimerkki 15: Kolvissa liuotetaan 35 g POPC:tä ja 15 g OOPS:ää 500 ml:aan tert-butanolia sekoittaen 40®C:ssa.

. Toisessa kolvissa liuotetaan 0,5 g Zn-ftalosyaniinia 125 ml:aan NMP:tä (ultaäänihaude).

Molemmat liuokset sekoitetaan keskenään, jolloin väriai-neliuos kaadetaan tert-butanoli-liuokseen. Seos lämmitetään 40eC:seen kirkkaan liuoksen aikaansaamiseksi. Tämä • · 25 1 0 4 9 51 liuos sekoitetaan dynaamisen sekoittimen avulla laktoosi-väliaineen (10 1) kanssa, joka on jäähdytetty 4eC:seen ja joka sisältää litraa kohden 94,9 g laktoosia injektiota varten ja 24 g NaClrää.

Orgaaninen faasi pumpataan nopeudella 107 ml/min., lak-toosiliuos nopeudella 1714 ml/min. dynaamiseen sekoitti-meen, jota käytetään 3 baarin paineella.

Muodostunut sininen, hieman opalisoiva dispersio (10625 ml) konsentroidaan tangentiaalisen Millipore-dialyysi-laitteen avulla 1 l:aan ja sitten se dialysoidaan laktoosi-väliainetta (10 1) vastaan.

Muut menetelmän vaiheet suoritetaan esimerkin 12 mukaisesti .

Esimerkki 16: Esimerkin 15 mukaisesti 3,5 g P0PC:tä ja 1,5 g OOPS:ää liuotetaan 100 ml:aan t-butanolia ja sekoitetaan NMP:n (25 ml) ja sinkki-ftalosyaniinin (100 mg) kanssa. Orgaaninen faasi sekoitetaan sitten laktoosi-väliaineen (2 1) kanssa, joka sisältää 25 g laktoosia ja 0,064 g NaCl:ää/l. Dialyysiväliaineella on sama koostumus .

•

Esimerkki 17: Esimerkin 16 mukaisesti orgaaninen faasi sekoitetaan laktoosiväliaineen (2 1) kanssa, joka sisältää 50 g laktoosia ja 0,127 g NaCl:ää/l.

Esimerkki 18: Esimerkin 15 mukaisesti 10,5 g P0PC:tä ja . 4,5 g 00PS:ää liuotetaan 200 ml:aan t-butanolia ja sekoi- tetaan NMP:n (50 ml) ja sinkki-ftalosyaniinin (200 mg) kanssa. Orgaaninen faasi sekoitetaan laktoosi-väliaineen (4 1) kanssa, joka sisältää 37,5 g laktoosia ja 0,095 g NaCl:ää/l. Dialyysiväliaineella on sama koostumus.

• · 26 104951

Esimerkki 19: Esimerkin 18 mukaisesti orgaaninen faasi sekoitetaan laktoosi-liuoksen (4 1) kanssa, joka sisältää 75 g laktoosia ja 0,1905 g NaCl:ää/l. Dialyysiväliaineel-la on sama koostumus.

Esimerkki 20: Esimerkin 15 mukaisesti 3,5 g POPCrtä ja 1,5 g OOPS:ää liuotetaan 200 ml:aan t-butanolia ja sekoitetaan sitten NMP:n (50 ml) ja sinkki-ftalosyaniinin (200 mg) kanssa. Orgaaninen faasi sekoitetaan laktoosiväliai-neen (4 1) kanssa, joka sisältää 25 g laktoosia ja 0,064 g NaCl:ää/l. Dialyysiväliaineella on sama koostumus.

• ·

Claims (8)

1. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi parenteraalisesti käytettävän liposomidispersion muodossa, joka sisältää a) slnkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan 1CH2—O — R, 2i R=—O —CH o Ra m I ©/ (I)· 3ch2_o— p—o — (C„h2„) —N—r„ o© Nr' mukaista synteettistä, yli 90%:isesti puhdasta fosfolipi-diä, jossa kaavassa Rx merkitsee C10-C20-alkanoyyliä, jossa on parillinen määrä C-atomeja, R2 merkitsee C^q-C20-alkenoyyliä, jossa on parillinen määrä C-atomeja, Ra, Rb ja Rc merkitsevät vetyä tai C1-C4-alkyyliä ja n merkitsee kokonaislukua 2-4, mahdollisesti yhdessä c) kaavan 'ch2—O—R3 2i R4 —O — CH o o ly (si il <"> 3CH2_0—P-O-ICÄ) —CH—C-OH I I 0 O© nh2 y mukaisen synteettisen, yli 90%:isesti puhtaan fosfolipi-din kanssa, jossa kaavassa R3 ja R4 merkitsevät toisis-, ' taan riippumatta C10-C2Q-alkenoyyliä, j°ssa on parillinen ! määrä C-atomeja, n merkitsee kokonaislukua 1 - 3 ja Y+ merkitsee farmaseuttisesti hyväksyttävän emäksen kationia, ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä j a mahdollisesti parenteraalisiin käyttömuotoihin sopivia vesi- • * 28 1 0 4 9 51 liukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että kuiva-valmiste, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, yli 90%risesti puhdasta fosfolipidiä, jossa symboleilla R1( R2, Ra, Rjj ja Rc sekä n on mainitut merkitykset, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, yli 90%risesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla R3, R4, Y® ja n on mainitut merkitykset, ja mahdollisesti d) parenteraalisiin käyttömuotoihin sopivia, vesiliukoisia apuaineita, dispergoidaan vesifaasiin ja saatava ve-sidispersio puskuroidaan mahdollisesti pH-arvoon 7,0 - 7,8 ja/tai eristetään liposomien fraktio, jolla on haluttu läpimitta-alue.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi intravenoosisesti käytettävän liposomidispersion muodossa, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniinikompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, yli 95%risesti puhdasta fosfolipidiä, jossa Rj^ merkitsee n-dodekanoyyliä, n-tetradekanoyyliä, n-heksadekanoyyliä tai n-oktadekanoyy-liä ja R2 merkitsee 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradeke-noyyliä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä ; tai 9-cis-ikosenoyyliä, Ra, R^ ja Rc merkitsevät metyyliä ja n on 2, mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, yli 95%risesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa R3 ja R4 ovat samanlaisia ja ne merkitsevät 9-cis-dodekenoyyliä, 9-cis-tetradeke-noyyliä, 9-cis-heksadekenoyyliä, 9-cis-oktadekenoyyliä tai 9-cis-ikosenoyyliä, n on 1 ja Y® merkitsee natriumio- ’ nia, ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä ja mahdollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että suoritetaan patenttivaatimuksessa 1 esitetyt toimenpiteet. • · 29 104951

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi intravenoosisesti käytettävän liposomidispersion muodossa, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) synteettistä, yli 95%:isesti puhdasta 1-n-heksade-kanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), mahdollisesti yhdessä c) synteettisen, yli 95%:isesti puhtaan natrium-1,2-di- (9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriinin (II) kanssa, ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä ja mahdollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että suoritetaan patenttivaatimuksessa 1 esitetyt toimenpiteet.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi intravenoosisesti käytettävän liposomidispersion muodossa, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) 70 paino-% (suhteessa komponenttiin c)) synteettistä, yli 95%risesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli )-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), yhdessä c) 30 paino-%:n kanssa (suhteessa komponenttiin b)) synteettistä, yli 95%risesti puhdasta natrium-1,2-di-(9-cis- - ; oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä (II), ja d) farmaseuttisesti hyväksyttävää kantonestettä sekä mahdollisesti intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia vesiliukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että suoritetaan patenttivaatimuksessa 1 esitetyt toimenpiteet.

. 5. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi kuivavalmisteen muodossa, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) kaavan I mukaista synteettistä, yli 90%risesti puhdasta fosfolipidiä, jossa symboleilla R1# R2, Ra, R^ ja Rc sekä n on patenttivaatimuksessa l mainitut merkitykset, • t 30 104951 mahdollisesti yhdessä c) kaavan II mukaisen synteettisen, yli 90%risesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla R3, R4, X® ja n on patenttivaatimuksessa 1 mainitut merkitykset, ja mahdollisesti d) intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia, vesiliukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että suoritetaan patenttivaatimuksessa 1 esitetyt toimenpiteet ja poistetaan liuotin tai liuotinseos kuivaamalla.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi lyofilisaatin muodossa, joka sisältää a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksia, b) 70 paino-% (suhteessa komponenttiin c)) synteettistä, yli 90%:isesti puhdasta l-n-heksadekanoyyli-2-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyylikoliinia (I), yhdessä c) 30 paino-%:n kanssa (suhteessa komponenttiin b)) synteettistä, yli 90%risesti puhdasta natrium-1,2-di-(9-cis-oktadekenoyyli)-3-sn-fosfatidyyli-S-seriiniä (II) sekä d) intravenoosisiin käyttömuotoihin sopivia, vesiliukoisia apuaineita, tunnettu siitä, että suoritetaan patenttivaatimuksessa 1 esitetyt toimenpiteet ja poistetaan liuotin tai liuotinseos lyofilisoimalla. «

7. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi kuivavalmisteen muodossa, tunnettu siitä, että a) sinkki-ftalosyaniinikompleksi ja b) patenttivaatimuksen 1 kaavan I mukainen synteettinen, yli 90%risesti puhdas fosfolipidi, jossa symboleilla R1, ' R2, Ra, Rj-, ja Rc sekä n on mainitut merkitykset, mahdol- ? lisesti yhdessä c) patenttivaatimuksen l kaavan II mukaisen synteettisen, yli 90%:isesti puhtaan fosfolipidin kanssa, jossa symboleilla r3, r4, y® ja n on mainitut merkitykset, liuotetaan farmaseuttisesti hyväksyttävään orgaaniseen liuotti- j · 31 104951 meen, jonka jäämämäärä kuivavalmisteessa on toksikologi-sesti vaaraton, ja mahdollisesti d) lisätään kantonestettä ja parenteraalisiin käyttömuotoihin sopivia, vesiliukoisia apuaineita ja poistetaan liuotin tai liuotinseos.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että a) sinkki-ftalosyaniini-kompleksi, b) kaavan I mukainen fosfolipidi ja mahdollisesti c) kaavan Il mukainen fosfolipidi liuotetaan piperidiiniin. 1 • · · ^ ·· 104951