FI104218B - Diagnostiskt förfarande - Google Patents

Claims (13)

1. Förfarande för detektering av närvaron av Chlamydia trachoma-f/s-bakterien i Papanicolaou-färgade cytologiska cellprov, känneteck-5 n a t av att det omfattar steg i vilka a) ett Papanicolaou-färgat prov som befinner sig pä ett objektglas och frän vilket täckglaset har avlägsnats, avfärgas genom inkubering i en av-färgningslösning som är en buffertlösning som innehäller ett reduceringsme-del och vars pH är pä suit omräde, i 5 - 30 minuter, och avfärgningslösningen 10 tvättas bort frän provet; b) provet inkuberas i en äterföringsreagenslösning som innehäller en jordalkalimetallsaltkomponent (-komponenter), en sockerkomponent och en aminosyrakomponent i en buffertlösning vars pH är pä surt omräde, i 30 min -12 timmar, och äterföringsreagenslösningen tvättas bort frän provet; 15 c) provet behandlas med en lösning som innehäller en identi- fieringsreagens som är specifik för Chlamydia trachomatis-bakterien, i 20 min -12 timmar; och d) närvaron av en eventuell Chlamydia trachomatis-bakterie de-tekteras pä ett lämpligt sätt. 20

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att äterföringsreagensen innehäller som jordalkalimetallsaltkomponent kalcium-och magnesiumklorid och/eller eventuellt andra divalenta joner i en koncent-ration av 10 - 40 mmol/l, fördelaktigt 20 mmol/l kalcium- och magnesiumklorid, som sockerkomponent glukos eller sackaros i en koncentration av 5 - 40 : 25 mmol/l, fördelaktigt i en koncentration av 10 - 20 mmol/l, och som aminosyra komponent lysin i en koncentration av 10 - 40 mg/ml, fördelaktigt 25 -35 mg/ml, i en 0,01 - 0,1 mol/l fosfat-, citrat- eller Tris-HCI-buffert vars pH är 3,5-5,5.

3. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att 30 äterföringsreagensen innehäller som jordalkalimetallsaltkomponent 20 mmol/l kalciumklorid och 20 mmol/l magnesiumklorid, som sockerkomponent 15 mmol/l glukos och som aminosyrakomponent 30 mg/ml lysin i en 0,1 mol/l fosfatbuffert vars pH är 5,0.

4. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att av- 35 färgningsreagensen är en 0,3 - 1,8-%:ig perhalogensyralösning i en lämplig 104218 buffert vars pH är under 6,0, fördelaktigt i en 0,01 - 0,1 mol/l fosfatbuffert, citratbuffert eller Tris-HCl-buffert vars pH är 3,5 - 5,5.

5. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat avatt avfärgningsreagensen är en perjodsyra eller ett salt därav som en 0,5 - 1-%:ig 5 lösning i en 0,05 - 0,1 mol/l fosfatbuffert vars pH är 4,0 - 5,5.

6. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat avatt avfärgningsreagensen är 1-%:ig perjodsyra i en 0,1 mol/l fosfatbuffert vars pH är 5,0.

7. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat avatt 10 identifieringsreagensen en stämplad poly- eller monoklonal antikropp eller genteknisk sond som är specifik för Chlamydia trachomatis-bakterien och identifierar alia dess kända serovarer och inte korsreagerar med Chlamydia ps/tfac/'-bakterien, Chlamydia pneumoniae-bakterien eller andra organismer som är kända att lätt korsreagera med atminstone antiklamydiaantikroppar. 15

8. Förfarande enligt patentkrav 7, kännetecknat av att identifieringsreagensen har stämplats med vilken som heist detekterbar stäm-pel, säsom en fluorecent, fosforent, kemiluminecent eller färgstämpel eller med en annan detekterbar stämplingsmetod, säsom biotin-avidinförfarandet, en radioaktiv eller enzymatisk stämpel, säsom alkalisk fosfatas eller peroxi-20 das.

9. Förfarande enligt patentkrav 7, kännetecknat av att identifieringsreagensen är en antikropp som har stämplats med ett fluorecent medel, säsom fluorescein.

10. Aterföringsreagens, kännetecknad av att den inne- : 25 häller en jordalkalimetallsaltkomponent (-komponenter), en sockerkomponent och en aminosyrakomponent i en buffertlösning vars pH är pä surt omräde, varvid jordalkalimetallsaltkomponenten är kalcium- och magnesiumklorid och/eller en annan divalent jon i en koncentration av 10-40 mmol/l, socker-komponenten är glukos eller sackaros i en koncentration av 5 - 40 mmol/l, 30 fördelaktigt glukos i en koncentration av 10-20 mmol/l, och aminosyrakom-ponenten är en basisk eller hydrofil aminosyra, fördelaktigt lysin, i en koncentration av 10 - 40 mg/ml, fördelaktigt 25 - 35 mg/ml, och bufferten är en 0,01 -0,2 mol/l fosfat-, citrat- eller Tris-HCl-buffert eller en motsvarande buffert vars pH är 3,5 - 5,5. 104218

11. Aterföringsreagens enligt patentkrav 10, kännetecknad av att den innehäller 20 mmol/l kalciumklorid, 20 mmol/l magnesiumklorid, 15 mmol/l glukos och 30 mg/ml lysin i en 0,1 mol/l fosfatbuffert vars pH är 5,0.

12. Aterföringsreagens enligt patentkrav 10, känneteck-5 n a d av att den ytterligare innehäller ett medel eller medel som stabiliserar reagensen och främjar dess hallbarhet.

13. Förfarande för atervinning av antigenen hos Chlamydia tra-c/jomaf/s-bakterien i ett Papanicolaou-färgat cytologiskt prov, kanne-tecknat av att provet behandlas med en aterföringsreagens enligt nägot 10 av patentkraven 10-12.