ES2963582T3

ES2963582T3 - Compuestos de 7,8-dihidro-4h-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona

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Publication number: ES2963582T3
Application number: ES20757193T
Authority: ES
Inventors: Amador Wenceslao Lumeras; Barbara Jean Brandhuber; Chandrasekar Venkataraman Iyer; Jimeno Maria Jose Lallena; Safi Shahda
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2019-08-05
Filing date: 2020-08-03
Publication date: 2024-04-01
Anticipated expiration: 2040-08-03
Also published as: EP4010343A1; AU2020324949A1; IL289141A; TW202120095A; AR119557A1; EP4010343B1; CA3145651A1; WO2021026059A1; AU2020324949B2; JP2022543277A; US20220251096A1; MX2022001412A; JP7293493B2; KR20220029735A; BR112022000036A2; CN114269750A

Abstract

En el presente documento se describen compuestos de Fórmula I: en la que R1 es CH3 o CH2CH3; y sus sales farmacéuticamente aceptables, que son útiles para tratar el cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de 7,8-dihidro-4h-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona

La presente invención se refiere a ciertos compuestos novedosos que son inhibidores duales de bromodominio CREBBP y EP300, a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, a procedimientos de uso de los compuestos para tratar ciertos cánceres, y a procedimientos útiles en la síntesis de los compuestos.

La presente invención se encuentra en el campo del tratamiento contra el cáncer. CREBBP y EP300 son histonas acetiltransferasas (HAT) y funcionan como coactivadores de un número de factores de transcripción. Se ha descrito que los inhibidores duales de CREBBP y bromodominio EP300 median respuestas antiproliferativas en líneas celulares de cáncer hematológico, tal como la leucemia mieloide aguda (LMA) (Véase, por ejemplo, T.D. Crawford,et al., J. Med.Chem.,vol. 59, páginas 10549 a 10563 (2016)), y líneas celulares de mieloma múltiple (Véase, por ejemplo, A.R. Conery, eLIFE 2016;5:e10483). Sigue habiendo una necesidad insatisfecha en el tratamiento del cáncer y se desean nuevas opciones terapéuticas.

El Documento WO 2017/205538 A1 desvela ciertos derivados de pirazolpiridina que son inhibidores de CBP y/o EP300, y son útiles en el tratamiento de diversos trastornos mediados por CBP y/o EP300, tales como cáncer, trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes. El Documento US 2017/0333406 A1 desvela ciertos derivados de pirazolpiridina que son inhibidores de CBP y/o EP300 que son útiles en el tratamiento de trastornos mediados por CBP y/o EP300.

Se desean otros compuestos inhibidores duales de CREBBP y bromodominio EP300. La presente invención proporciona ciertos compuestos que inhiben al menos uno de los bromodominios CREBBP y EP300 y, preferentemente, son inhibidores duales de los bromodominios CREBBP y EP300. Además, la presente invención proporciona compuestos que son inhibidores duales selectivos del bromodominio CREBBP y EP300 sobre la proteína 4 que contiene bromodominio (“BRD4”).

La presente invención además proporciona compuestos que son útiles para el tratamiento de cánceres, tales como cánceres de células escamosas, el cáncer urotelial de vejiga, el cáncer de mama, el cáncer de colon, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), el linfoma folicular, el linfoma de la zona marginal, el cáncer urotelial del tracto superior, el carcinoma de endometrio, el carcinoma endometrioide uterino, el CPCP, el cáncer de próstata y el linfoma.

Además, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para tratar tumores con mutaciones de CREBBP y/o EP300 tales como el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el CPCP, el linfoma, el cáncer de vejiga, la histología escamosa, los cánceres de células escamosas, que incluyen el cáncer anal, cervical, de cabeza y cuello, pulmón y orofaringe, endometrioide uterino y los cánceres provocados por el VPH. Los compuestos desvelados en la presente memoria también pueden ser útiles para tratar las afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO, las afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos, las afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc, la leucemia mieloide aguda (que incluyen fusiones AML-ETO), la leucemia linfoblástica aguda, los mielomas múltiples y el cáncer de próstata. Los cánceres de células escamosas incluyen el cáncer anal, el cáncer de vejiga, el cáncer de cuello de útero, el cáncer de cabeza y cuello, el cáncer de pulmón y el cáncer de orofaringe. Las referencias a los procedimientos de tratamiento en los párrafos subsiguientes de esta descripción se deben interpretar como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano (o animal) por medio de terapia (o para el diagnóstico).

Por consiguiente, la presente invención proporciona un compuesto de la Fórmula I:

en la que R<1>es -CH<3>o -CH<2>CH<3>;

o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

La presente invención también proporciona un procedimiento para el tratamiento del cáncer en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Los cánceres que se pueden tratar son, pero no se limitan a, el cáncer de células escamosas, el cáncer urotelial de vejiga, el cáncer de mama, el cáncer de colon, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), el linfoma folicular, el linfoma de la zona marginal, el cáncer urotelial del tracto superior, el carcinoma de endometrio, el carcinoma endometrioide uterino, el CPCP, el cáncer de próstata, el linfoma, el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, la histología escamosa, el endometrioide uterino, los cánceres provocados por el VPH, las afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO, las afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos, las afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc, la leucemia mieloide aguda, la leucemia linfoblástica aguda, los mielomas múltiples, el cáncer provocado por el virus del papiloma humano y el cáncer de próstata.

La presente invención proporciona un procedimiento para el tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP) en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. La presente invención también proporciona un procedimiento para el tratamiento del linfoma en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. La presente invención también proporciona un procedimiento para el tratamiento de cánceres de células escamosas en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Los paisajes mutacionales del carcinoma de lengua revelan mutaciones recurrentes en genes de relevancia terapéutica y pronóstica.Genome Med.7 (1) 98 (2015) (toma nota de alteraciones del gen CREBBP en el carcinoma oral de células escamosas de lengua); Véase también Martin D., Abba MC., Molinolo AA.,et al. The head and neck cáncer cell oncogenome: a platform for the development of precisión molecular therapies. Oncotarget.5(19):8906 a 8923. (2014) (toma nota de alteraciones de los genes CR<e>B<b>P y EP300 en el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello)). La presente invención también proporciona un procedimiento para el tratamiento de cánceres provocados por el virus del papiloma humano en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

También se desvela un procedimiento para el tratamiento de tumores con mutaciones de CREBBP y/o EP300 en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer urotelial de vejiga en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Gui, Y., Guo, G., Huang, Yet al. Frequent mutations of chromatin remodeling genes in transitional cell carcinoma of the bladder. Nature Genetics43 (9), 875 a 878 (2011) (toma nota de aberraciones genéticas CREBBP yEP300 en pacientes con cáncer de vejiga)). Además, se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer de mama en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer de colon en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Bryan, EJ., Jokubaitis, VJ., Chamberlain, NL.et al. Mutation analysis of EP300 in colon, breast and ovarian carcinomas. Int J Cancer.102(2): 137 a 141 (2002) (toma nota de mutaciones genéticas EP300 en cánceres humanos de colon, mama y ovario)). Además, se desvela un procedimiento de tratamiento del linfoma difuso de células B grandes (LDCBG) en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Morin, RD., Méndez-Lago, M., Mungall, AJ.et al. Frequent mutation of histone-modifying genes in non-Hodgkin lymphoma. Nature.476 (7360) 298 a 303 (toma nota de las mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en el linfoma no Hodgkin). Se desvela un procedimiento para el tratamiento del linfoma folicular en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Okosun J, Bodor C, Wang J,.et al. Integrated genomic analysis identifies recurrent mutations and evolution patterns driving the initiation and progression of follicularlymphoma. Nature Genetics46 (2) 176 a 181 (2014) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP en linfoma folicular)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento del linfoma de la zona marginal en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Jung, H., Yoo, HY, Lee, SH.et al. The mutational landscape of ocular marginal zone lymphoma identifies frequent alterations in TNFAIP3 followed by mutations in TBL1XR1 and CREBBP. Oncotarget8 (10) 17038 a 17049 (2017) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP en el linfoma de la zona marginal ocular)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer urotelial del tracto superior en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Grivas, P., Mortazavi, A., Picus, J.et al. Mocetinostat for patients with previously treated, locally advanced/metastatic urothelial carcinoma and inactivating alterations of acetyltransferase genes. Cancer.125(4):533 a 540. (2019) (toma nota de las mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en el carcinoma urotelial avanzado/metastásico)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento del carcinoma de endometrio en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento del carcinoma endometrioide uterino en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento de CPCP en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer de próstata en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Liu, J., He, D., Cheng, L.et al. p300/CBP inhibition enhances the efficacy of programmed death-ligand 1 blockade treatment in prostate cancer. Oncogene39, 3939 a 3951 (2020) (toma nota del efecto de los inhibidores de CREBBP y EP300 en el tratamiento del cáncer de próstata)).

También se desvela un procedimiento para el tratamiento de tumores con mutaciones de CREBBP y/o EP300 tales como el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el CPCP, el linfoma, el cáncer de vejiga e histología escamosa en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento de cánceres de células escamosas en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. (Véase Morris, V., Rao, X., Pickering, C.et al. Comprehensive Genomic Profiling of Metastatic Squamous Cell Carcinoma of the Anal Canal. Molecular Cancer Research15 (11), 1542 a 1550 (2017) (toma nota de mutaciones genéticas de EP300 en el carcinoma de células escamosas del canal anal); Vettore, AL., Ramnarayanan, K., Poore, G.et al.Los paisajes mutacionales del carcinoma de lengua revelan mutaciones recurrentes en genes de relevancia terapéutica y pronóstica.Genome Med.7 (1) 98 (2015) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en el carcinoma de la lengua oral); y Martin D, Abba MC, Molinolo AA,et al. The head and neck cancer cell oncogenome: a platform for the development of precision molecular therapies. Oncotarget.5(19):8906 a 8923. (2014) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello)). Además, se desvela un procedimiento para el tratamiento del endometrioide uterino en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento para el tratamiento de cánceres provocados por el HPV en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo. Se desvela un procedimiento de tratamiento de afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Zhang, J., Kalkum, M., Yamamura, S.et al. E protein silencing by the leukemogenic AML1-ETO fusion protein. Science.305 (5688) 1286 a1289 (2004) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en casos de leucemia mieloide aguda)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento de afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase García-Carpizo, V., Ruiz-Llorente, S., Sarmentero, J.et al. CREBBP/EP300 Bromodomain Inhibition Affects the Proliferation of AR-Positive Breast Cancer Cell Lines. Molecular Cancer Research17 (3), 720 a 730 (2019) (toma nota del efecto de los inhibidores de CREBBP y EP300 en líneas celulares de cáncer de mama con receptores de andrógenos positivos); Véase también Aarnisalo, P., Palvimo, JJ. & Janne, OA.et al. CREB-binding protein in androgen receptor-mediated signaling.PNAS 95 (5), 2122 a 2127 (1998) (toma nota de la presencia de CREBBP en las vías de señalización dependientes de andrógenos)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento de afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Se desvela un procedimiento para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda, incluidas las fusiones AML-ETO en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Brookset al., CCS1477: A Novel Small Molecule Inhibitor of p300/CBP Bromodomain for the Treatment of Acute Myeloid Leukaemia and Multiple Myeloma. Blood(2019) 134 (Suplemento 1): 2560) (toma nota del efecto de los inhibidores de CREBBP y EP300 en el tratamiento de la LMA)). Se desvela un procedimiento para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Qian, M., Zhang, H., Kham, SK.et al. Whole-transcriptome sequencing identifies a distinct subtype of acute lymphoblastic leukemia with predominant genomic abnormalities of EP300 and CREBBP. Genome Research(2017) 27 185 a 195) (toma nota de mutaciones genéticas CREBBP y EP300 en casos de leucemia linfoblástica aguda). También se desvela un procedimiento para el tratamiento de múltiples mielomas en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Brookset al. CCS1477: A Novel Small Molecule Inhibitor of p300/CBP Bromodomain for the Treatment of Acute Myeloid Leukaemia and Multiple Myeloma. Blood(2019) 134 (Suplemento 1): 2560), Se desvela un procedimiento para el tratamiento del cáncer de próstata en un paciente, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo (Véase Liu, J., He, D., Cheng, L.et al. p300/CBP inhibition enhances the efficacy of programmed death-ligand 1 blockade treatment in prostate cáncer. Oncogene39, 3939 a 3951 (2020) (toma nota del efecto de los inhibidores de CREBBP y EP300 en el tratamiento del cáncer de próstata)).

Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en terapia. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer. Entre los cánceres que se pueden tratar figuran el cáncer de células escamosas, el cáncer urotelial de vejiga, el cáncer de mama, el cáncer de colon, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), el linfoma folicular, el linfoma de la zona marginal, el cáncer urotelial del tracto superior, el carcinoma de endometrio, el carcinoma endometrioide uterino, el CPCP, el cáncer de próstata, el linfoma, el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, la histología escamosa, el endometrioide uterino, los cánceres provocados por el VPH, las afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO, las afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos, las afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc, la leucemia mieloide aguda, la leucemia linfoblástica aguda, los mielomas múltiples, el cáncer provocado por el virus del papiloma humano y el cáncer de próstata.

Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas. Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma. Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cáncer de células escamosas. Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cánceres provocados por el virus del papiloma humano.

Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cánceres de células escamosas. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer urotelial de vejiga. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de mama. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de colon. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma difuso de células B grandes (DLBCL). Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma folicular. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma de la zona marginal. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer urotelial del tracto superior. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del carcinoma de endometrio. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del carcinoma de endometrioide uterino. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del CPCP. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de próstata. Y esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma.

Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de tumores con mutaciones de CREBBP y/o EP300. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de esófago. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de pulmón. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del CPCP Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del linfoma. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de vejiga. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de la histología escamosa. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cánceres de células escamosas. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cánceres uterinos provocados por endometrioides. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de cánceres provocados por el VPH. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (incluidas las fusiones AML-ETO). Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de mielomas múltiples. Esta invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer de próstata.

La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. Entre los cánceres que se pueden tratar figuran el cáncer de células escamosas, el cáncer urotelial de vejiga, el cáncer de mama, el cáncer de colon, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), el linfoma folicular, el linfoma de la zona marginal, el cáncer urotelial del tracto superior, el carcinoma de endometrio, el carcinoma endometrioide uterino, el CPCP, el cáncer de próstata, el linfoma, el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, la histología escamosa, el endometrioide uterino, los cánceres provocados por el VPH, las afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO, las afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos, las afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc, la leucemia mieloide aguda, la leucemia linfoblástica aguda, los mielomas múltiples, el cáncer provocado por el virus del papiloma humano y el cáncer de próstata.

Además, esta invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP). Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de células escamosas. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres provocados por el virus del papiloma humano.

La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres de células escamosas. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer urotelial de vejiga. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de mama. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de colon. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma difuso de células B grandes (DLBCL). Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma folicular. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma de la zona marginal. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer urotelial del tracto superior. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del carcinoma de endometrio. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del carcinoma endometrioide uterino. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del CPCP. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de próstata. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores con mutaciones de CREBBP y/o EP300. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de esófago. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de pulmón. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del CPCP Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del linfoma. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de vejiga. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la histología escamosa. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres de células escamosas, que incluyen cánceres de ano, cuello uterino, cabeza y cuello, pulmón y orofaringe. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres uterinos provocados por endometrioides. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cánceres provocados por el VPH. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (incluidas las fusiones a ML-ETO). Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de leucemia linfoblástica aguda. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de mielomas múltiples. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de próstata.

La invención además proporciona una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico. La invención además proporciona un proceso para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico. Esta invención también abarca nuevos intermedios y procesos para la síntesis de los compuestos de la Fórmula I.

Como se usa en la presente memoria, los términos “tratamiento” o “tratar” incluyen frenar, retrasar, detener o revertir la progresión o la gravedad de un síntoma o trastorno existente.

Como se usa en la presente memoria, el término “paciente” se refiere a un mamífero, en particular un ser humano. Como se usa en la presente memoria, la expresión “cantidad efectiva” se refiere a la cantidad o la dosis del compuesto de la invención, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo que, tras la administración de una sola dosis o de dosis múltiples al paciente, proporciona el efecto deseado en el paciente que está siendo diagnosticado o tratado.

Los expertos en la técnica pueden determinar con facilidad una cantidad efectiva mediante el uso de técnicas conocidas y por medio de la observación de los resultados obtenidos en circunstancias análogas. A la hora de determinar la cantidad efectiva para un paciente, el diagnosticador que lo atiende tiene en cuenta un número de factores, entre los que se incluyen: la especie del paciente; su tamaño, edad y estado de salud general; la enfermedad o el trastorno específico de que se trate; el grado de afectación o la gravedad de la enfermedad o el trastorno; la respuesta del paciente individual; el compuesto concreto administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad del preparado administrado; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes.

Los compuestos de la presente invención se formulan preferentemente como composiciones farmacéuticas administradas por cualquier vía que haga que el compuesto esté biodisponible. Lo más preferente es que dichas composiciones sean para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y los procesos para prepararlas son muy conocidos en la técnica (véase, por ejemplo,Remington: The Science and Practice of Pharmacy,L.V. Allen, editor, 22da edición, Pharmaceutical Press, 2012).

Ciertos productos intermedios descritos en las siguientes preparaciones pueden contener uno o más grupos protectores de nitrógeno. Como se usa en la presente memoria, “PG” se refiere a un grupo protector adecuado. Se comprende que los grupos protectores pueden variar, como apreciarán los expertos en la técnica, dependiendo de las condiciones de reacción particulares y las transformaciones particulares a llevar a cabo. Las condiciones de protección y desprotección son muy conocidas por los expertos en la técnica y se describen en la bibliografía (véase, por ejemplo,"Greene's Protective Groups in Organic Synthesis",cuarta edición, por Peter G.M. Wuts y Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).

En un aspecto, los compuestos y/o sales descritos en la presente memoria son cristalinos. En una realización, los compuestos descritos en la presente memoria son aminas libres. En otro caso, la amina libre es cristalina. Alternativamente, la amina libre se puede convertir en una sal aceptable para uso farmacéutico, como se describe a continuación.

En un aspecto, los compuestos y/o sales descritos en la presente memoria se administran en combinación con uno o más medicamentos. Los compuestos y/o sales descritos en la presente memoria y el otro u otros medicamentos se pueden administrar al mismo tiempo o con una hora de diferencia entre ellos. Los ejemplos no limitantes de otros medicamentos para combinar con los compuestos y/o sales descritos en la presente memoria incluyen otros fármacos anticancerígenos, esteroides y antiinflamatorios. Los ejemplos no limitantes de otros fármacos anticancerígenos incluyen darolutamida, enzalutamida, abemaciclib, alpelisib e inhibidores de BRD4. Los ejemplos no limitantes de inhibidores de BRD4 incluyen CPI-0610, PLX51107, GSK2820151(I-BET151), OTX015(MK-8628), ABBV-075, FT-1101, GSK525762(I-BET762), ZEN003694, y ABBV-744. En una realización, los compuestos y/o sales descritos en la presente memoria y el otro u otros medicamentos se formulan como una única forma de dosificación. En otra realización, se formulan por separado.

Una sal aceptable para uso farmacéutico de un compuesto de la invención se puede formar, por ejemplo, por medio de la reacción de una base libre adecuada de un compuesto de la invención y un ácido aceptable para uso farmacéutico adecuado en un disolvente adecuado tal como éter dietílico bajo condiciones convencionales muy conocidas en la técnica. De forma adicional, la formación de tales sales puede ocurrir simultáneamente tras la desprotección de un grupo protector de nitrógeno. Véase, por ejemplo, Gould, P.L.,“Salt selection for basic drugs", International Journal of Pharmaceutics,33: 201 a 217 (1986); Bastin, R.J.,et al., “Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities”, Organic Process Research and Development,4: 427 a 435 (2000); y Berge, S.M.,et al., “Pharmaceutical Salts’’, Journal of Pharmaceutical Sciences,66: 1 a 19 (1977).

Ciertas abreviaturas se definen de la siguiente manera: “ACN" se refiere a acetonitrilo; “AR" se refiere a receptor de andrógenos; “ac." se refiere a acuoso; “bis(pinacolato)diborón" se refiere a bis(pinacolato)diborano o 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,3,2-dioxaborolano; “AMPc" se refiere al monofosfato de adenosina cíclico; “cataCXium<®>A Pd G3" se refiere al mesilato[(di(1-adamantil)-n-butilfosfina)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]de paladio(II) o [(di(1-adamantil)-butilfosfina)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]metanosulfonato de paladio(II); “CBP", “proteína de unión a CREB" y “CREBBP" se pueden usar indistintamente y se refieren a la proteína de unión a la proteína de unión al elemento de respuesta a cAMP; “CDI" se refiere a 1,1'-carbonildiimidazol; “CPME" se refiere a ciclopentilo metil éter; “DCC" se refiere a 1,3-diclohexilcarbodiimida; “DCM" se refiere a diclorometano o cloruro de metileno; “DIC" se refiere a 1,3-diisopropilcarbodiimida; “DIPEA" se refiere a N,N-diisopropiletilamina o N-etil-N-isopropil-propan-2-amina; “DMAP" se refiere a 4-dimetilaminopiridina; “DMF" se refiere a N,N-dimetilformamida; “DMEM" se refiere a Medio de Eagle modificado por Dulbecco; “DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; “DNA" se refiere a ácido desoxirribonucleico; “EDCI" se refiere a 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida hidrocloruro; “EtOAc" se refiere a acetato de etilo; “EtOH" se refiere a alcohol etílico o etanol; “FBS" se refiere a Suero Fetal Bovino; “HATU" se refiere a 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]piridinio 3-óxido hexafluorofosfato; “HBTU" se refiere a 3-[bis(dimetilamino)metileno]-3H-benzotriazol-1-óxido hexafluorofosfato; “HEK" se refiere a riñón embrionario humano; “HOAt" se refiere a 1-hidroxi-7-azobenzotriazol; “HOBt" es hidrato de 1-hidroxilbenzotriazol; “HPLC" es cromatografía líquida de alta resolución; “iPrOH" es isopropanol o alcohol isopropílico; “KOAc" es acetato de potasio; “MEM" se refiere a Medio Esencial Mínimo; “MeOH" se refiere a metanol o alcohol metílico; “MTBE" se refiere a metil t-butil éter; “ONf" se refiere a nonaflato o CF<3>(CF<2>)<3>SO<3>-; “PBS" se refiere a una Solución Salina Tamponada con Fosfato; “Pd<2>(dba)<3>" se refiere a tris(dibencilideneacetona)dipaladio(0); “Pd(dppf)Cl<2>" se refiere a [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II); “Pd(dppf)Cl<2>-DCM" se refiere a [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio complejo diclorometano; “catalizador de Pearlman" se refiere a hidróxido de paladio sobre carbono o Pd(OH)<2>/C; “psi" se refiere a libras por pulgada cuadrada; “PyBOP" se refiere a (hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -il-oxitripirrolidinofosfonio); “PyBrOP" se refiere a hexafluorofosfato de bromo(tripirrolidinil)fosfonio; “rpm" se refiere a revoluciones por minuto; “TA" se refiere a temperatura ambiente; “SCX" se refiere a cromatografía de intercambio catiónico fuerte; “T3P" se refiere a 2,4,6-tri-n-propil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosforinano-2,4,6-trióxido o anhídrido n-propilfosfónico; “TFA" se refiere a ácido trifluoroacético; “THF" se refiere a tetrahidrofurano; “Xantphos" se refiere a 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno; “XantPhos-Pd-G2" se refiere a cloro[(4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladio(II); “XPhos" se refiere a 2-diclohexilfosfino-2',4',6'-trisopropilbifenilo; y “XPhos Pd G2" se refiere a cloro(2-diclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenilo)[2-(2'-amino-1,1'-bifenilo)]paladio(II);

Los compuestos de la presente invención, o las sales aceptables para uso farmacéutico de los mismos, se pueden preparar por medio de una diversidad de procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en los esquemas, las preparaciones y los ejemplos siguientes. Los productos de cada etapa de los esquemas que se presentan a continuación se pueden recuperar por medio de procedimientos convencionales muy conocidos en la técnica, que incluyen la extracción, la evaporación, la precipitación, la cromatografía, la filtración, la trituración y la cristalización. En los esquemas que se presentan a continuación, todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, son los definidos anteriormente. Los reactivos y los materiales de partida están fácilmente disponibles para los expertos en la técnica. Sin limitar el alcance de la invención, los siguientes esquemas, preparaciones y ejemplos se proporcionan para ilustrar mejor la invención.

Esquema 1

El Esquema 1 ilustra la formación de una pirazol-[4,3,-c]azepin-6-ona, compuesto (6). En el Esquema 1, Etapa A1, un pirazol 5-cloro 4-carbaldehído sustituido (1) se acopla con un grupo í-butoxipropil potasio-trifluoro boro en condiciones de acoplamiento Suzuki paladio mediante el uso de una base tal como carbonato de cesio, en un disolvente tal como 1,4-dioxano y agua, y un catalizador tal como XPhos Pd G2 y se calienta a aproximadamente 110 °C para dar el compuesto (2a). Las reacciones de acoplamiento cruzado con paladio son muy conocidas en la técnica y los expertos reconocerán que existe una variedad de condiciones útiles para facilitar dichas reacciones de acoplamiento cruzado. Los reactivos de paladio adecuados incluyen XantPhos Pd G2, cataCXium® A Pd G3, cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(M), Pd(dppf)Ch, Pd2dba3, tetrakistrifenilfosfina de paladio y acetato de paladio(II). Los ligandos adecuados, en caso necesario, podrían incluir la triciclohexilfosfina y la trifenilfosfina. Las bases adecuadas incluyen el fluoruro de potasio, el carbonato de cesio, el carbonato de sodio, el carbonato de potasio, el f-butóxido de litio o el fosfato tribásico monohidratado.

En el Esquema 1, etapa B1, el compuesto (2a) puede sufrir una aminación reductora para proporcionar el compuesto metilamino (3). La aminación reductora se puede llevar a cabo mediante el uso de condiciones muy conocidas en la técnica, tales como la adición de metilamina a una solución del compuesto (2a) en DCM o una solución de MeOH con una cantidad catalítica de un ácido tal como el ácido acético y agitando durante un tiempo adecuado tal como aproximadamente 1 hora. A continuación, se añade un agente reductor adecuado, tal como el triacetoxiborohidruro de sodio. Se pueden usar otros agentes reductores conocidos en la técnica, tales como NaBH4 o LiBH4, para obtener el compuesto metilamino (3).

En el Esquema 1, etapa C, el compuesto metilamino (3) se puede desproteger en condiciones ácidas muy conocidas en la técnica, tales como mediante el uso de TFA o ácido clorhídrico a TA para proporcionar el ácido carboxílico (4). “PG” es un grupo protector desarrollado para los ácidos carboxílicos. Tales grupos protectores son muy conocidos y apreciados en la técnica. A continuación, el ácido carboxílico (4) se puede ciclar con un reactivo de acoplamiento amida para dar el compuesto (5). La ciclización de la amida interna se puede llevar a cabo en un disolvente aprótico polar tal como DMF a Ta con una base tal como DIPEA y un reactivo de acoplamiento tal como T3P. Los expertos en la técnica reconocerán que hay un número de procedimientos y reactivos para la formación de amidas que resultan de la reacción de ácidos carboxílicos y aminas. Por ejemplo, la reacción de la amina con un ácido carboxílico apropiado en presencia de un reactivo de acoplamiento con o sin una base orgánica, tal como DIPEA o trietilamina puede proporcionar el compuesto (5). Otros reactivos de acoplamiento incluyen carbodiimidas, tales como DCC, DIC, EDCI o un carbonildiimidazol, tal como CDI. También se pueden usar aditivos de acoplamiento amida, tales como HOBt y HOAt, para potenciar la reacción. Además, se podrían usar sales de uronio o fosfonio de aniones no nucleófilos, tales como HBTU, HATU, PyBOP y PyBrOP, en lugar de los reactivos de acoplamiento más tradicionales. Se puede usar un aditivo tal como DMAP para potenciar la reacción. Alternativamente, una solución cruda del compuesto 3 en EtOH se puede tratar con 2,2,2-trifluoroetanol en un sistema de reacción continua para desproteger y ciclizarin situy tras la concentración da el compuesto (5).

El compuesto (5) entonces se puede yodar sobre el pirazol mediante el uso de yodo y sulfato de plata en un disolvente tal como EtOH para proporcionar el compuesto (6). Los expertos en la técnica reconocerán que otros halógenos tales como el bromo y el cloro se pueden sustituir en lugar del yodo para proporcionar un compuesto halogenado correspondiente adecuado (6), es decir, el yodo también puede ser bromo o cloro, proporcionando un intermedio adecuado para su uso en el Esquema 2 siguiente.

Siguiendo etapas de reacción alternativas del Esquema 1, en la etapa A2, el compuesto (1) se puede tratar con acrilato de tere-butilo en condiciones de reacción Heck para formar el alqueno sustituido del compuesto (2b) mediante el uso de una base tal como W,W-diclohexilmetilamina en un disolvente tal como 1,4-dioxano y un catalizador de paladio adecuado, tal como cloro[(tri-tere-butilfosfina)-2-(2-aminobifenil)] paladio(II)]. Los catalizadores típicos usados en las reacciones de Heck son el tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0), el cloruro de paladio y el acetato de paladio(II). Los ligandos típicos son la trifenilfosfina, la tri-tere-butilfosfina, el Xantphos, el XPhos y el bis(di-tere-butilfosfino)ferroceno.

En el Esquema 1, etapa B2, el compuesto (2b) entonces se puede convertir en el compuesto (3) en una reacción global de 2 etapas. Se puede añadir metilamina al compuesto (2b) en un disolvente tal como EtOH y agitar durante aproximadamente 90 minutos para efectuar la formación de la imina. A continuación, el alqueno y la imina se pueden reducir en condiciones de hidrogenación mediante el uso de un catalizador adecuado, tal como el catalizador de Pearlman, e hidrogenarse para proporcionar el compuesto (3).

Esquema 2

En el Esquema 2, etapa A, el compuesto (9) se puede preparar a partir del acoplamiento éster borónico del compuesto (8) con 3-bromo-8-cloro-isoquinolina, compuesto (7) (X=Br, ONf), en condiciones de acoplamiento cruzado Suzuki análogas a las descritas para el compuesto 2a en el Esquema 1, etapa A1. Por ejemplo, el compuesto (7) se combina con el compuesto (8) y se trata con una base tal como carbonato de sodio o carbonato de potasio en disolventes tales como 1,4-dioxano y agua en condiciones de nitrógeno mediante el uso de un catalizador tal como Pd(dppf)Cl<2>-DCM y se calienta a aproximadamente 80 a 95 °C para proporcionar el compuesto (9). Alternativamente, el compuesto 8 se puede generarin situa partir de 5-bromo-N-metilpiridin-2-carboxamida, bis(pinacolato)diboro y KOAc en CPME mediante el uso de Pd(dppf)Ch a 60 a 95 °C. Tras un tiempo de reacción adecuado de unas 4 a 8 horas, se enfría la mezcla y se prepara el compuesto (9) como se ha descrito anteriormente manteniendo el disolvente como CPME y mediante el uso de Pd(dppf)Ch como un catalizador. En el Esquema 2, etapa B, el cloruro del compuesto (9) se puede sustituir mediante el uso de bis(pinacolato)diboro (para R = CH<3>) o tetrahidroxidiboro (para R = H) en condiciones de biorilación de Miyaura para dar el compuesto (10). Por ejemplo, se puede usar KOAc como la base, XPhos como un ligando y XPhos Pd G2 como el catalizador en un disolvente tal como 1,4-dioxano para (R = CH3) y etilenglicol y MeOH (para R = H). A continuación, la mezcla de reacción se calienta a aproximadamente 40 °C (para R = H) y a aproximadamente 90 °C para (R = CH3) para proporcionar el compuesto (10). Otros catalizadores que se podrían usar son acetato de paladio(II) o Pd2(dba)3y otros disolventes pueden ser tolueno o 2-metil-2-butanol.

En el Esquema 2, etapa C, el compuesto (10) entonces se puede acoplar con el compuesto (6) bajo condiciones estándar de acoplamiento cruzado de paladio como se describe en el Esquema1, Etapa A1.

Por ejemplo, mediante el uso de un disolvente adecuado, tal como 1,4-dioxano o EtOH, una base adecuada, tal como fosfato de potasio y un catalizador adecuado, tal como Pd(dppf)Cl2-DCM o Pd2dba3 con triciclohexilfosfina como un ligando si es necesario y calentando a aproximadamente 50 a 95 °C se obtienen los compuestos de la Fórmula I.

Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustran aún más la invención.

Preparación 1

3-(4-formil-2-metil-pirazol-3-il)propanoato de tere-butilo

Esquema 1, etapa A1: Una suspensión de 5-cloro-1-metil-1H-pirazol-4-carbaldehído(17,8 g, 119 mmol) y potasio; (3-terc-butoxi-3-oxo-propil)-trifluoro-boranuuro (38,0 g, 161 mmol) en 1,4-dioxano (298 ml) se trata con una solución de carbonato de cesio (117 g, 358 mmol) en agua (60 ml) y se purga con nitrógeno durante 5 minutos. Se añade XPhos Pd G2 (9,4 g, 11,9 mmol) y la mezcla de reacción se purga de nuevo durante 10 minutos y se calienta a 110 °C bajo nitrógeno durante 20 horas. La mezcla de reacción enfriada se filtra a través de una almohadilla de tierra de diatomeas, se lava con EtOAc (900 ml), DCM (200 ml) y se concentrain vacuo.El aceite resultante se disuelve en EtOAc (1,2 L), se lava con NaOH 1 M ac. (3x200 ml) y salmuera (200 ml). La fase orgánica se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora hasta sequedad. El material bruto se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0 a 50% de hexanos a EtOAc para dar el compuesto del título (15,7 g, 53%) como un aceite de color amarillo claro. ES/MS (m/z): 239 (M+H), Rm N de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 59,80 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,13 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 2,58 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 1,36 (s, 9H).

Preparación 2

(E)-3-(4-formil-2-metil-pirazol-3-il)prop-2-enoato de terc-butilo

Esquema 1, etapa A2: Se disuelven 5-cloro-1-metil-1H-pirazol-4-carbaldehído (50,0 g, 329 mmol), acrilato detercbutilo(70 ml, 468 mmol) y N,N-diclohexilmetilamina (140 ml, 650 mmol) en 1,4-dioxano (400 ml). La mezcla se purga con nitrógeno durante 15 minutos, después se añade cloro[(tri-terc-butilfosfina)-2-(2-aminobifenil)] paladio(II)] (3,46 g, 6,62 mmol), se purga de nuevo con nitrógeno y la mezcla de reacción se agita a 85 °C (temperatura interna) durante 16 horas y después a 99 °C (temperatura interna) durante otras 3 horas. Se interrumpe el calentamiento y, cuando la temperatura interna ha descendido por debajo de 60 °C, se diluye la mezcla con agua (300 ml) y EtOAc (500 ml). Se separan las fases y la fase ac. se diluye de nuevo con agua (500 ml), tras lo cual se forma otra fase orgánica. Se separan las fases y se extrae el ac. con EtOAc (250 ml). Las fases orgánicas combinadas se agitan con ácido cítrico al 10% acuoso (500 ml), se filtran con tierra de diatomeas y se lavan con agua (0,1 L) y EtOAc (250 ml). La capa orgánica se seca sobre MgSO4, se filtra y se concentra a presión reducida a 50 °C para dar un aceite espeso de color rojo anaranjado (92 g). Se añade heptano (500 ml) a la mezcla mientras está a 50 °C, después se agita toda la noche a TA durante la cual el aceite inicial se convierte en sólido. El sólido resultante se recolecta por filtración y se lava con EtOAc al 10 %/heptano (50 ml) seguido por heptano (100 ml). El sólido se seca en horno de vacío (40 °C, 10 mbar) durante 22 horas para dar el compuesto del título (57,1 g, 73%) como un sólido de color crema. ES/MS (m/z): 237 (M+H), RMN de 1H (400,21 MHz, CDCl3) 59,96 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,64 (d, J= 16,1 Hz, 1H), 7,02 (d, J= 16,1 Hz, 1H), 4,02 (s, 3H), 1,57 (s, 9H).

Preparación 3

3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoato de tere-butilo

Esquema 1, etapa B1: Se añade metanamina 2 M en THF (10,2 ml, 20,4 mmol) a una disolución de 3-(4-formil-2-metil-pirazol-3-il)propanoato de tere-butilo (0,81 g, 3,4 mmol) y ácido acético (0,2 ml, 3,4 mmol) en DCM (17 ml). La mezcla se agita a TA durante 1 hora. Se añade triacetoxiborohidruro de sodio (2,88 g, 13,6 mmol) y la mezcla de reacción se agita a TA durante 17 horas. La mezcla de reacción se diluye con NaHCO3 ac. saturado (30 ml) y DCM (30 ml). La fase ac. se extrae con DCM (4x100 ml). Los extractos orgánicos combinados se secan sobre sulfato de sodio, se filtran y se evaporan a sequedad para dar un aceite de color marrón. El material bruto se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0 a 70% de DCM/7 N de NH3 en MeOH (9;1) para dar el compuesto del título (0,64 g, 73%) como un aceite. ES/MS (m/z): 254 (M+H), RMN de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 57,22 (s, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,42 (s, 2H), 2,85 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 2,47 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,38 (s, 9H).

Preparación alternativa 3

3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoato de tere-butilo

Esquema 1, etapa B2: Se añade metilamina (33% en EtOH, 85 ml, 683 mmol) a una solución de (E)-3-(4-formil-2-metil-pirazol-3-il)prop-2-enoato de tere-butilo (57,1 g, 239 mmol) en EtOH (180 ml) y se agita a T<a>durante 90 minutos. Se carga una suspensión de catalizador Pearlman húmedo (20% en peso de base seca, 2,5 g, 18 mmol) en EtOH (60 ml) en un recipiente autoclave de acero inoxidable 316 con purga de nitrógeno. Se añade la solución de imina preparada inicialmente y se enjuaga con EtOH (60 ml). Se monta el autoclave y se cierra el recipiente, se purga y se llena hasta 110 psi (7,1 bar) con hidrógeno, después se agita a TA durante 20 horas (no se consume más hidrógeno después de aproximadamente 14 horas). La mezcla se filtra a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se enjuaga con EtOH. El filtrado se concentra a presión reducida hasta un volumen aproximado de 200 ml. ES/MS y RMN de 1H de la solución son consistentes con el compuesto esperado. La solución de EtOH se usa sin aislamiento ni purificación adicional del compuesto del título, suponiendo un rendimiento cuantitativo (65,9 g, 239 mmol)

Preparación 4

Ácido 3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoico

Esquema 1, etapa C: A una solución de 3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoato de tere-butilo (9,6 g, 37,5 mmol) en DCM (150 ml) se añade TFA (43 ml, 562 mmol) y la mezcla se agita a tA durante 2 horas. La solución se concentra a presión reducida y las trazas de TFA se coevaporan con ACN para dar un aceite incoloro que se usa en la etapa siguiente sin purificación adicional, suponiendo un rendimiento cuantitativo (7,54 g, 37,5 mmol). ES/MS (m/z): 198 (M+H).

Preparación 5

1,5-DimetiN-7,8-dihidro-4H-pirazol/4,3-e]azepm-6-ona

Esquema 1, etapa D: El ácido 3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoico (7,54 g, 37,5 mmol) se disuelve en DMF (375 ml) y se trata con DIPEA (24,2 g, 187 mmol) y T3P (50% en DMF) (43,8 ml, 75,0 mmol) gota a gota y se agita a TA durante 5 horas. La mezcla de reacción se diluye con agua (800 ml) y el pH se ajusta a pH 8 con NaHCOaac. sat. La solución se extrae con DCM/iPrOH (8:2) (8x250 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron a sequedad. El residuo se purifica con cromatografía SCX mediante el uso de las siguientes condiciones: La columna se equilibra con 2 volúmenes de MeOH, el compuesto se disuelve en MeOH (5+5 ml), se añade a la columna, se lava con MeOH (6 volúmenes) y se eluye con 7 N NH3 en MeOH (250 ml). La fracción básica se evapora para dar el compuesto del título (5,56 g, 83%) como un sólido de color blanquecino. ES/MS (m/z): 180 (M+H). RMN de 1H (400,21 MHz, da-DMSO) 87,23 (s, 1H), 4,34 (s, 2H), 3,65 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 2,85 a 2,77 (m, 4H).

Preparación alternativa 5

1,5-DimetiN-7,8-dihidro-4H-pirazol/4,3-c]azepm-6-ona

Esquema 1, etapa D: Se filtra una disolución de 3-[2-metil-4-(metilaminometil)pirazol-3-il]propanoato de ferc-butilo en EtOH de la Preparación Alternativa 3 (aprox. 239 mmol) a través de una membrana de polipropileno de 0,45 pm. El volumen se ajusta a 0,3 L con EtOH y se añade 2,2,2-trifluoroetanol (750 ml) para obtener la Solución de Alimentación. Se lava un reactor tubular 316-SS de 60 ml (1/8” OD) con un regulador de contrapresión de 4000 kPa con una mezcla 3:1 de 2,2,2-trifluoroetanol y EtOH (disolvente de lavado). El reactor se calienta a 220 °C y la Solución de Alimentación se bombea a través del reactor a una velocidad de 3 ml/min (tiempo de residencia 20 minutos) mediante el uso de una bomba de HPLC químicamente resistente. Después de bombear toda la solución al reactor, éste se lava con una mezcla 3:1 de 2,2,2-trifluoetanol y EtOH (aproximadamente 100 ml) al mismo caudal. La solución de salida y el chorro se concentran a presión reducida a 50 °C para dar el compuesto del título en bruto (48,38 g, 89% de pureza LCMS, aproximadamente 20% en peso de disolvente por RMN de 1H, 186,3 mmol). ES/MS (m/z): 180 (M+H).

Preparación 6

3-Iodo-1,5-dimetiN-7,8-dihidro-4H-pirazol/4,3-c]azepm-6-ona

Esquema 1, etapa E: A una disolución de 1,5-dimetil-7,8-dihidro-4H-pirazol/4,3-c]azepin-6-ona (5 g, 26,6 mmol) en EtOH (60 ml) se añade yodo (pulverizado, 10 g, 39,4 mmol) seguido por sulfato de plata (15,2 g, 48,7 mmol). La mezcla de reacción se agita a TA durante 48 horas. Se añade DCM (500 ml) y la suspensión se agita durante 2 horas, se decanta el líquido y el sólido se tritura con ¡PrOH al 20% en DCM (600 ml) y se agita durante 4 horas. La mezcla se filtra, el sólido se desecha y el filtrado se concentrain vacuo.Se añade NH<3>ac. (32%, 150 ml) y se extrae la solución con DCM (2x350 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavan con Na<2>S<2>O<3>sat., se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentróin vacuopara dar un sólido. El sólido se tritura en una mezcla 1:1 de hexanos:MTBE (90 ml) durante 2 horas. Los sólidos se filtran y se secan en un horno al vacío durante 16 horas a 45 °C para dar el compuesto del título (7,36 g, 89%) como un sólido de color blanco. ES/MS (m/z): 306 (M+H), RMN de<1>H (400,21 MHz, d<6>-DMSO) 84,20 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,87 (s, 3H), 2,86 a 2,80 (m, 4H).

Preparación alternativa 6

3-Iodo-1,5-dimetiN-7,8-dihidro-4H-pirazol/4,3-c]azepm-6-ona

Esquema 1, etapa E: Se añade una disolución de 1,5-dimetil-7,8-dihidropirazol/4,3-c]azepin-6-ona (31,6 g, 94% de pureza LCMS, 166 mmol) en EtOH (250 ml) a sulfato de plata (62,3 g, 200 mmol). La solución se agita bajo nitrógeno. Se añade una solución de monocloruro de yodo en DCM (1,0 M, 220 ml, 220 mmol) en cuatro porciones aproximadamente iguales a intervalos de 15 minutos. Se usa un baño de agua externo para reducir la exotermia. Tras agitar durante 23 horas, se añade otra porción de monocloruro de yodo en DCM (1,0 M, 33 ml, 33 mmol). Tras agitar otras 73,5 horas, la mezcla se filtra con tierra de diatomeas y la torta de filtración se lava con DCM (300 ml). El filtrado y el lavado se agitan con una mezcla 1:1 de NaHSO<3>20% acuoso y NaCl sat. acuoso (400 ml) durante 1,5 horas, después se filtra con tierra de diatomeas y la torta de filtración se lava con DCM (200 ml). Se separan las fases del filtrado y se extrae el ac. con DCM (200 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavan con NaCl sat. ac., se secan sobre MgSO<4>y se concentran a presión reducida a 50 °C para dar un residuo de color amarillo suave (57 g). El residuo se disuelve en DCM (250 ml), se vierte sobre una almohadilla de sílice lavada con DCM (9 cm de diámetro x 5 cm de profundidad) y se eluye bajo succión mediante el uso de porciones de 1:4 EtOH:DCM (500 ml). Las fracciones que contienen el blanco se concentran a presión reducida a 50 °C, y el residuo resultante se tritura en MTBE (250 ml) a temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas. El sólido se recolecta por filtración, se lava con MTBE (0,1 L) y se seca a 50 °C y 10 mbar durante 8,5 horas para dar el compuesto del título como polvo de color blanco finamente dividido (41,0 g, 80%). ES/MS (m/z): 306 (M+H).

Preparación 7

(8-doro-3-isoquinolil) 1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluorobutano-1 -sulfonato

Se añaden carbonato de potasio (75 g, 542,7 mmol) y fluoruro de 1,1,2,2,3,3,4,4-nonafluorobutano-1-sulfonilo (70 ml, 398,8 mmol) a 8-cloro-2H-isoquinolin-3-ona (63 g, 350,7 mmol) en ACN (500 ml) y la mezcla resultante se agita a 60 °C durante 15 horas. La mezcla se filtra y el sólido se lava con ACN adicional. El filtrado se concentra a presión reducida. El residuo se suspende en agua (300 ml) y se ajusta el pH a aproximadamente >7 con NaHCO3 ac. sat. (20 ml). La suspensión se agita durante 2 horas y posteriormente se filtra. La torta de filtración se lava con agua y heptano, y después se seca a presión reducida a 35 °C. El sólido seco se recolecta en DCM, se añade gel de sílice (100 ml) y la mezcla se concentra a presión reducida. El sólido resultante se carga en una almohadilla de sílice (400 ml de sílice, previamente lavada con 1:4 EtOAc:n-hexanos) y se eluye bajo succión mediante el uso de 1:4 EtOAc:nhexanos (1,5 L). El eluido se concentra a presión reducida hasta aproximadamente 1/20 del volumen original y se añaden n-hexanos (50 ml) para precipitar un sólido. El sólido se recolecta por filtración, y se obtienen otros cultivos de sólido por medio de un tratamiento similar del filtrado (4 cultivos en total). Los cultivos de sólido se combinan y se secan al vacío bajo presión reducida a 50 °C durante toda la noche para dar el compuesto del título como un sólido de color blanco (50,82 g, 55,9%). ES/MS (m/z) (35Cl/37Cl): 462/464 (M+H); RMN de 1H (400,21 MHz, CDCls) 59,53 (s, 1H), 7,89 a 7,82 (m, 1H), 7,77 a 7,69 (m, 2 H), 7,62 (s, 1H); RMN de 19F{1H} (376,5 MHz, CDCls) 5 -80,6 (m, -108,7 (m, 1H), -120,8 (m, -125,7 (m).

Preparación 8

5-(8-doro-3-isoqumolil)-N-metil-piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa A: Se suspenden 3-bromo-8-cloro-isoquinolina (500 mg, 2,06 mmol), N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-carboxamida (584 mg, 2,23 mmol) y carbonato de sodio (655 mg, 6,19 mmol) en 1,4-dioxano (8,2 ml) y agua (1,6 ml). La mezcla se purga con nitrógeno (5 minutos). Se añade Pd(dppf)ChDCM (135 mg, 0,165 mmol) y se agita la reacción a 95 °C durante 23 horas. La mezcla se enfría a TA, se filtra sobre tierra de diatomeas y se lava con EtOAc (200 ml) y DCM (100 ml). El filtrado se concentra al vacío y el residuo se purifica por medio de cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de MeOH de 0% a 40% de DCM a DCM/MeOH (9:1) para dar el compuesto del título (610 mg, 98% de pureza) como un sólido de color marrón claro. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) : 298/300 (M+H), RMN de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 59,69 (s, 1H), 9,46 (dd, J= 0,7, 2,2 Hz, 1H), 8,87 a 8,85 (m, 1H), 8,78 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,77 a 8,76 (m, 1H), 8,20 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 8,09 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 7,93 a 7,83 (m, 2H), 2,87 (d, J= 4,8 Hz, 3H).

Preparación alternativa 8

5-(8-doro-3-isoqumolil)-N-metil-piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa A: Se añaden 5-bromo-N-metilpiridin-2-carboxamida (10,0 g, 46,0 mmol), bis(pinacolato)diboro (15,5 g, 59,8 mmol) y KOAc (11,5 g, 115 mmol) en CPME (120 ml) y se purga la mezcla con nitrógeno durante aproximadamente 10 minutos. Se añade Pd(dppf)Cl<2>(1,0 g, 1,3 mmol) y se calienta la mezcla a 60 °C. Se agita bajo nitrógeno durante aproximadamente 4 horas a 81 °C (temperatura interna). Se aumenta la temperatura hasta 94 °C (temperatura interna)y,transcurridos 45 minutos, se añade bis(pinacolato)diboro adicional (2,5 g, 9,6 mmol). Se continúa calentando durante 4 horas y, a continuación, se enfría la mezcla a temperatura ambiente. Se añade carbonato de potasio 2 M ac. purgado con nitrógeno (70 ml, 140 mmol), seguido al cabo de 10 minutos por (8-cloro-3-isoquinolil) 1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluorobutano-1-sulfonato (22,28 g, 47,8 mmol). La mezcla se purga con nitrógeno durante aproximadamente 10 minutos y después se calienta hasta una temperatura interna de 84 °C. Después de 5 horas, se añade Pd(dppf)Cl<2>(0,5 g, 0,7 mmol), y se continúa calentando durante 3 horas. Se interrumpe el calentamiento y la mezcla se deja enfriar hasta 50 °C, diluyéndose a continuación con carbonato de potasio 2 M ac. (75 ml, 150 mmol) y EtOAc (120 ml). La mezcla se enfría a temperatura ambiente y se filtra. La torta de filtración se prensa y se lava con agua (200 ml) y EtOAc (100 ml). Se separan las fases del filtrado y la fase orgánica se lava con porciones de 50 ml de fosfato de potasio 2 M acuoso y NaCl sat. acuoso, se seca sobre MgSO<4>, se filtra y se concentra a presión reducida. El residuo se combina en DCM (300 ml) con el sólido recolectado por filtración, y se agita enérgicamente durante aproximadamente 2 horas. La mezcla se filtra y la torta se lava con DCM (100 ml) y se desecha. Se separa una pequeña fase ac. del filtrado y se desecha, y la fase orgánica se lava con salmuera y posteriormente se vierte sobre una almohadilla de sílice (9 cm de diámetro x 2,5 cm de profundidad) y se eluye bajo succión con DCM (3x500 ml) y acetona:DCM 1:9 (4x500 ml). Las fracciones que contienen el blanco se combinan y se concentran a presión reducida, y el residuo resultante se tritura en MTBE (250 ml) a 50 °C durante 1 hora, y después se enfría en un baño de agua helada durante 1 hora. El sólido se recolecta por filtración, se lava con MTBE frío (2x50 ml) y se seca a presión reducida (45 °C, 10 mbar) durante 18 horas para dar el compuesto del título como un sólido de color blanquecino (7,51 g, 54,8%). ES/MS m/z (35Cl/37Cl) : 298/300 (M+H),

Preparación 9

5-(8-cloro-3-isoquinolil)-N-etil-piridin-2-carboxamida

Esquema 2, etapa A: (8-cloro-3-isoquinolil) 1,1,2,2,3,3,4,4,4-nonafluorobutano-1-sulfonato (500 mg, 1,08 mmol), N-etil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-carboxamida (390 mg, 1,13 mmol) se suspenden en 1,4-dioxano (11 ml) y se añade carbonato de potasio 2 M ac. (1,62 ml, 3,24 mmol). La solución se purga con nitrógeno durante 5 minutos. Se añade Pd(dppf)Cl2-DCM (44 mg, 0,054 mmol), se purga de nuevo la solución con nitrógeno y se agita la reacción a 90 °C durante 15 horas. La mezcla se enfría a TA, se extingue con agua y se extrae con EtOAc (3x100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera, se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se evaporan hasta sequedad para dar un aceite de color marrón. El residuo se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0% a 70% de n-hexano a EtOAc para dar el compuesto del título (275 mg, 81%) como un sólido de color marrón claro. ES/MS m/z (35Cl/37Cl) : 312/314 (M+H), RMN de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 59,70 (t, J= 0,8 Hz, 1H), 9,47 (dd, J= 0,8, 2,2 Hz, 1H), 8,91 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,79 a 8,76 (m, 2H), 8,20 (dd, J= 0,8, 8,2 Hz, 1H), 8,11 a 8,09 (m, 1H), 7,90 a 7,83 (m, 2H), 3,34 a 3,41 (m, 2H), 1,17 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Preparación 10

W-Metil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoqumolil]piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa B: Se purga con nitrógeno una mezcla de 5-(8-cloro-3-isoquinolil)-N-metil-piridin-2-carboxamida (750 mg, 2,27 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,73 g, 6,80 mmol), KOAc (556 mg, 5,67 mmol) y XPhos (111 mg, 0,227 mmol) en 1,4-dioxano (32 ml). Se añade XPhos Pd G2 (182 mg, 0,227 mmol) y se purga la mezcla con nitrógeno. La mezcla se agita a 90 °C durante 17 horas. La mezcla de reacción se enfría a TA, se filtra con tierra de diatomeas y se lava con EtOAc (3x50 ml). La mezcla se concentra, el residuo se diluye con EtOAc (500 ml) y se lava con agua (2x80 ml). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora para dar un aceite de color marrón que se purifica por medio de cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0 a 70% de hexanos a EtOAc para dar el compuesto del título (482 mg, 54%) como un sólido de color blanco. ES/MS (m/z): 390 (M+H), RMN de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 5 10,08 (s, 1H), 9,47 (dd, J= 0,7, 2,2 Hz, 1H), 8,87 (q, J= 4,7 Hz, 1H), 8,77 (dd, J= 2,2, 8,2 Hz, 1H), 8,68 (d, J= 0,6 Hz, 1H), 8,21 a 8,17 (m, 2H), 8,13 (dd, J= 1,2, 6,9 Hz, 1H), 7,86 (dd, J= 6,9, 8,2 Hz, 1H), 2,87 (d, J= 4,8 Hz, 3H), 1,43 (s, 12H).

Preparación 11

5-[8-(1,3,2-Dioxaborolan-2-il)-3-isoqumolil]-M-metil-piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa B: Se purga con nitrógeno durante 15 minutos una mezcla de 5-(8-doro-3-isoquinolil)-N metilpiridin-2-carboxamida (5,8 g, 19,3 mmol), tetrahidroxidiborón (2,9 g, 31 mmol), KOAc (5,0 g, 49,9 mmol) y XPhos Pd G2 (0,39 g, 0,49 mmol) en etilenglicol anhidro (15 ml) y MeOH (60 ml). La mezcla se agita posteriormente a 40 °C durante 14 horas. Se añade agua (150 ml) y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. El sólido se recolecta por filtración, se lava con 1:3 MeOH:agua (50 ml), agua (50 ml) y MTBE (50 ml). La torta de filtración se seca en un horno de vacío (40 °C, 10 mbar) durante 24 horas para dar el compuesto del título como un sólido beige, consistente con el éster de glicol como la especie principal (6,96 g, 91% de pureza LCMS, 99%). ES/MS (m/z): 308 (M+H para ácido borónico); RMN de 1H (400,21 MHz, d4-MeOH) 59,42 (s, 1H), 9,38 (d, J= 1,6 Hz, 1H), 8,66 (dd, J= 2,0, 8,4 Hz), 8,43 (s, 1H), 8,22 (dd, 1H, J= 0,8, 8,4 Hz, 1H), 8,09 a 8,03 (m, 1H), 7,87 a 7,78 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,03 (s, 3H).

Preparación 12

W-Etil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoqumolil]piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa B: Se purga con nitrógeno una mezcla de 5-(8-cloro-3-isoquinolil)-N-etil-piridina-2-carboxamida (275 mg, 0,88 mmol), bis(pinacolato)diboro (672 mg, 2,65 mmol), KOAc (216 mg, 2,20 mmol) y XPhos (43 mg, 0,088 mmol) en 1,4-dioxano (11 ml). Se añade XPhos Pd G2 (69 mg, 0,088 mmol), se purga la mezcla con nitrógeno y se agita a 90 °C durante 21 horas. La mezcla se enfría a tA, se filtra con tierra de diatomeas y se lava con EtOAc (200 ml). La mezcla se concentra, el residuo se diluye con EtOAc (300 ml) y se lava con agua (2x80 ml). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora para dar un aceite de color marrón que se purifica por medio de cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de 0 a 50% de hexanos a EtOAc para dar el compuesto del título (202 mg, 57%) como un sólido de color blanquecino. ES/MS (m/z): 404 (M+H), Rm N de 1H (400,21 MHz, d6-DMSO) 510,08 (s, 1H), 9,48 (dd, J= 0,7, 2,2 Hz, 1H), 8,90 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 8,77 (dd, J= 2,2, 8,2 Hz, 1H), 8,67 (d, J= 0,5 Hz, 1H), 8,22 a 8,17 (m, 2H), 8,13 (dd, J= 1,2, 6,9 Hz, 1H), 7,86 (dd, J= 6,9, 8,2 Hz, 1H), 3,41 a 3,34 (m, 2H), 1,43 (s, 12H), 1,15 a 1,18 (m, 3H).

Ejemplo 1

5-[8-(1,5-DimetiM-6-oxo-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepm-3-il)-3-isoqumolil]-W-metil-piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa C: Una disolución de 3-yodo-1,5-dimetil-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona (100 mg, 0,33 mmol) y N-metil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoquinolil]piridin-2-carboxamida (153 mg, 0,39 mmol) en 1,4-dioxano (2,2 ml) y N,N-dimetilacetamida (0,22 ml) se trata con fosfato de potasio 1 M ac. (0,98 ml 0,98 mmol) y se purga con nitrógeno durante 5 minutos. Se añade Pd(dppf)Cl2 DCM (27 mg, 0,033 mmol) y se agita la reacción a 95 °C durante 5,5 horas. El material bruto se filtra a través de tierra de diatomeas, se lava con DCM y EtOAc y se evapora hasta sequedad. El residuo se purifica con cromatografía SCX mediante el uso de las siguientes condiciones: La columna se equilibra con 2 volúmenes de columna de MeOH, el compuesto se disuelve en MeOH (4 ml) y se añade a la columna, se lava con MeOH (3 volúmenes) y se eluye con 2 M NH3 en MeOH (20 ml). Los disolventes se evaporan para dar un aceite de color marrón. El aceite se purifica por medio de cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de 0 a 70% de DCM a DCM/MeOH (9:1). El sólido se seca en un horno de vacío a 40 °C durante 16 horas para dar el compuesto del título (130 mg, 90%) como un sólido de color marrón claro. ES/MS (m/z): 441 (M+H), RMN de 1H (400,13 MHz, d6-DMSO) 59,56 (s, 1H), 9,46 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 8,85 (q, J= 4,9 Hz, 1H), 8,76 (dd, J= 2,0, 8,3 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,19 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 8,13 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,93 (dd, J= 7,1,8,3 Hz, 1H), 7,58 (dd, J= 1,2, 7,1 Hz, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,03 a 2,91 (m, 4H), 2,87 (d, J= 4,9 Hz, 3H), 2,77 (s, 3H).

Preparación Alternativa del Ejemplo 1

Esquema 2, etapa C: Una mezcla de 3-yodo-1,5-dimetil-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona (9,3 g, 30,17 mmol) en 2-metil-2-butanol (100 ml), N-metil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoquinolil]piridin-2-carboxamida (aproximadamente 5,2 g, 68% de pureza LCMS, 10,5 mmol) y fosfato de potasio 2 M ac. (30 ml, 60 mmol) se purga con nitrógeno durante 30 minutos antes de añadir Pd(dppf)Cl2 (0,71 g, 0,95 mmol). La mezcla se calienta en un bloque calefactor con una temperatura de consigna de 90 °C. El tubo de purga se retira cuando la temperatura del bloque alcanza los 60 °C. Se añaden nuevas porciones de N-metil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoquinolil]piridin-2-carboxamida a las 2 horas y a las 3,5 horas (cantidad total añadida: 15,45 g, 68% de pureza LCMS, 31,53 mmol). Tras un total de 20 horas de calentamiento, la mezcla se enfría a temperatura ambiente y se diluye con agua (100 ml) y MTBE (250 ml). La mezcla se filtra y el sólido filtrado se lava con agua (100 ml) y MTBE (100 ml). Se separan las fases del filtrado y se añade heptano (400 ml) a la fase orgánica. El precipitado sólido adicional se recolecta por filtración al cabo de 1 hora y se combina con el sólido recolectado anteriormente. Los sólidos combinados se toman en una mezcla de DCM (500 ml), acetona (200 ml) y MeOH (100 ml) y se concentran sobre tierra de diatomeas a presión reducida a 50 °C. El sólido se carga en un cartucho adecuado y se purifica por medio de cromatografía en columna de gel de sílice (750 g de gel de sílice), eluyendo con un gradiente de 0 a 15% EtOH/DCM. Las fracciones que contienen el blanco se combinan y se concentran a presión reducida hasta obtener aproximadamente 60 ml de una solución de color marrón clara. La solución se agita a 60 °C y se siembra con una muestra previamente preparada del blanco. La suspensión resultante se agita durante 1 hora más a 60 °C bajo una presión positiva de nitrógeno y, a continuación, se enfría a temperatura ambiente. Tras 16 horas, se recolecta el sólido por filtración y se lava con EtOH helado (35 ml). El material adicional se aísla por concentración y posterior cromatografía del filtrado. Las dos cosechas de sólido se combinan y se toman en THF (200 ml) y se agitan con resina captadora de metales funcionalizada con dimercaptotriazina (SiliCycle Inc, SiliaMetS® DMT, 2 g, 1,2 mmol como dimercaptotriazina) a 40 °C durante 67 horas. El secuestrante se elimina por filtración a través de un filtro de membrana de polipropileno de 0,45 ^m, y el sólido se enjuaga con THF (100 ml). El filtrado y el lavado se concentran a presión reducida a 50 °C, y se pasa el disolvente a EtOH (volumen final aprox. 50 ml), durante lo cual se forma una pasta blanca. El lodo se envejece durante 1 hora a 60 °C bajo una presión positiva de nitrógeno y, a continuación, se enfría a temperatura ambiente. Tras 6 horas, se recolecta el sólido por filtración y se lava con EtOH helado (25 ml). El sólido se seca bajo presión reducida durante 30 horas (5 horas a 60 °C, 25 horas a 50 °C) para dar el compuesto del título como un polvo de color blanco (8,95 g, 66%). ES/MS (m/z): 441 (M+H).

Ejemplo 2

5-[8-(1,5-DimetiN-6-oxo-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepm-3-N)-3-isoqumolN]-M-etil-piridm-2-carboxamida

Esquema 2, etapa C: Una disolución de 3-yodo-1,5-dimetil-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona (130 mg, 0,43 mmol), N-etil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoquinolil]piridin-2-carboxamida (353 mg, 0,49 mmol) en 1,4-dioxano (2,85 ml) y N,N-dimetilacetamida (0,28 ml) se trata con fosfato de potasio 1 M ac. (1,27 ml, 1,27 mmol) y se purga con nitrógeno durante 5 minutos. Se añade Pd(dppf)Cl2 DCM (35 mg, 0,042859 mmol) y se agita la reacción a 90 °C durante 17 horas. El material se enfría a TA, se filtra con tierra de diatomeas, se lava con DCM y EtOAc y se evapora hasta sequedad. El residuo se purifica con cromatografía SCX mediante el uso de las siguientes condiciones: La columna se equilibra con 2 volúmenes de columna de MeOH, el compuesto se disuelve en MeOH (4 ml) y se añade a la columna, se lava con MeOH (3 volúmenes) y se eluye con NH32 M en MeOH (20 ml). Los disolventes se evaporan para dar un aceite de color marrón. El material se purifica aún más por cromatografía de fase inversa mediante el uso de un tampón de bicarbonato de amonio 10 mM, pH=9 y eluyendo con un gradiente de 20% a 60% de ACN en tampón para dar el compuesto del título (83 mg, 42%) como un sólido de color marrón claro. ES/MS (m/z): 455 (M+H), RMN de<1>H (400,13 MHz, d<a>-DMSO) 89,57 (s, 1H), 9,46 (dd, J= 0,7, 2,2 Hz, 1H), 8,89 (t, J= 6,1 Hz, 1H), 8,76 (dd, J= 2,2, 8,3 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,20 a 8,18 (m, 1H), 8,13 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,93 (dd, J= 7,1, 8,3 Hz, 1H), 7,58 (dd, J= 1,1, 7,1 Hz, 1H), 4,33 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,41 a 3,34 (m, 2H), 3,04 a 2,91 (m, 4H), 2,77 (s, 3H), 1,17 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Preparación Alternativa del Ejemplo 2

5-[8-(1,5-DimetMl-6-oxo-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c|azepin-3-M)-3-isoqmnolM]-W-etil-pi<N>din-2-carboxamidaEsquema 2, etapa C: Se purga con nitrógeno durante 15 minutos una mezcla de 3-yodo-1,5-dimetil-7,8-dihidro-4H-pirazol[4,3-c]azepin-6-ona (3,50 g, 11,36 mmol) y W-etil-5-[8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3-isoquinolil]piridin-2-carboxamida (4,71 g, 11,56 mmol) en EtOH (35 ml) y fosfato de potasio 2 M ac. Se añaden triciclohexilfosfina (0,19 g, 0,68 mmol) y Pd<2>dba<3>(0,21 g, 0,22 mmol), y se continúa la purga de nitrógeno durante 10 minutos más. Se inicia el calentamiento y se retira el tubo de purga una vez que el bloque calefactor ha alcanzado los 50 °C. Se deja refluir la mezcla durante 4 horas y se enfría a TA. Se añade resina captadora de metales funcionalizada con dimercaptotriazina (SiliCycle, Inc, SiliaMetS<®>DMT, carga 0,60 mmol/g, 2,0 g, 1,2 mmol), y la mezcla se agita a 50 °C durante 3,5 horas, enfriándose a continuación a TA. Se añade agua (120 ml) y se agita la mezcla a TA durante 30 minutos. La mezcla se filtra a través de tierra de diatomeas y la almohadilla se enjuaga con 1:3 EtOH/agua (40 ml). El filtrado se diluye con agua (400 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 1,5 horas. El sólido blanco resultante se recolecta por filtración, se lava con 1:6 EtOH/agua (70 ml), agua (100 ml) y se seca a presión reducida durante 16 horas a 50 °C para dar el compuesto del título en bruto. El sólido bruto se toma en EtOH (40 ml) y DCM (10 ml) y se filtra a través de tierra de diatomeas. El filtrado se concentra a presión reducida a 50 °C hasta que queden aproximadamente 20 ml de disolución. La disolución se agita en un bloque calefactor a 70 °C y se añade heptano (20 ml) durante aproximadamente 2 minutos. La mezcla se agita en el bloque calefactor durante 1 hora, tiempo durante el cual se forma un sólido de color blanco. Se interrumpe el calentamiento y se deja enfriar la mezcla con agitación. Tras 6 horas, el sólido se recolecta por filtración y se lava con 1: 1 EtOH/heptano (10 ml) y heptano (10 ml) y después se secó a presión reducida a 50 °C durante 13 horas para dar el compuesto del título (4,2 g, 81%) como un sólido de color blanco. ES/MS (m/z): 455 (M+H).

Ensayos biológicos

Ensayo NanoBRET

Las células HEK293 se siembran a 10 * 10<6>células/16 ml en DMEM 10% de FBS en un matraz T-75 y se dejan fijar durante 4 a 6 horas. Los reactivos de transfección se diluyen en medio Opti-MEM (sin rojo de fenol, sin FBS) y en Fugene HD al 8% que contiene plásmidos de expresión a una concentración final de 1: 1. ADN HaloTag de histona H3.3 (Promega, 0,02 |jg) NanoLuc-CREBBP-BD (Promega, 0,0002 |jg); 2. 2. ADN HaloTag de histona H3.3 (Promega, 0,02 jg ) NanoLuc-EP300-BD (Promega, 0,0002 jg); 3.<a>D<n>histona H4 HaloTag (0,02 jg ) NanLuc-BRD4 de Longitud Completa (Promega, 0,0002 jg). Las mezclas ADN/Fugeno se dejan a TA durante 10 minutos. Se añade la mezcla de transfección (800 jl) por matraz y se agita inmediatamente para cubrir las células. Las placas se devuelven a la incubadora para la transfección durante la noche. Al día siguiente, se descongela a TA el ligando HaloTag NanoBRET 618 (20 jl/vial de 0,1 mM). Se retira el Medio de Cultivo de los frascos de células transfectadas y se lavan con PBS (5 ml) y se tratan con tripsina (3 ml) a TA para desprender las células. Las células tripsinizadas se resuspenden en DMEM 10% de FBS (7 ml) y se recolectan en un tubo cónico (50 ml). Las células se centrifugan a 1500 rpm durante 5 minutos y posteriormente se resuspenden en Opti-MEM (sin rojo fenol) 4% de FBS. El ligando HaloTag NanoBRET 618 (1 j l de 0,1 mM) se añade a las células a una concentración final de 100 nm. Las células se añaden a placas de 96 pocillos de fondo de color blanco opaco (Costar 3917) y se incuban durante la noche a 37 °C/5% de CO<2>.

El compuesto se diluye en serie y se añade a placas de 96 pocillos (2 jl, 10 mM, diluciones triples, 100% de DMSO). Se añade medio (98 jL)/4% de FBS a la placa de compuestos para una concentración final de 200 jM, 2% de DMSO. Las Placas de Compuestos de Control (MIN) se preparan a 200 jM, 2% de DMSO (20 jM final, 0,2% final) por medio de la adición del inhibidor de referencia (10 jL ) al medio (490 jL)/4% de FBS. Se añade inhibidor de referencia MIN (50 jL ) en la columna 1A a 1H de la placa de control. Las Placas MAX se preparan al 2% de DMSO (concentración final del 0,2%) por medio de la adición de DMSO (10 jl) al medio (10 jl)/4% de FBS. Se añade Maximun (50 jL ) en la columna 12A a 12H de la placa de control. Las células se tratan con 10 jl/pocillo del Ejemplo 1 diluido en serie. Las placas celulares se incuban a 37 °C/5% de CO<2>. Las placas CREBBP/EP300 se leen después de 4 horas de incubación y las placas BRD4 se leen después de una incubación nocturna. Para revelar las placas para la lectura, dejar que todos los reactivos alcancen TA antes de su uso. 5 mM Stock del Sustrato NanoBRET Nano-Glo se diluye a 50 jM en Opti-MEM (sin rojo fenol, sin suero). Se añade el sustrato Nano-Glo (25 jL/pocillo de 50 jM). La placa se agita durante 1 minuto para mezclar y en 10 minutos se lee en el lector de placas Envision con la siguiente configuración: Espejo: Luminiscencia; Filtro de emisión: E600LP; 2do filtro de emisiones: D460/50; Altura de medición (mm): 6,5; Tiempo de medición (s): 0,2 segundos.

Tabla 1

Como se muestra en la Tabla 1, los datos demuestran que los compuestos del Ejemplo 1 y Ejemplo 2 inhiben potentemente CREBBP y EP300in vitro.Además, la Tabla 1 muestra que los compuestos del Ejemplo 1 y del Ejemplo 2 exhiben selectividad para CREBBP/EP300 sobre el bromodominio BRD4.

Ensayo de Proliferación Celular en 22Rv1

El propósito del siguiente ensayo de proliferación celular es detectar si el compuesto del Ejemplo 2 y combinaciones de los mismos tienen un efecto sobre la proliferación celular.

Se siembran células 22Rv1 (compradas a ATCC CRL-2505) a una densidad de 1.000 células por pocillo en medio RMPI 10% de FBS (volumen de 2o jl) (desprovisto de carbón) en una placa de cultivo celular de fondo transparente de 384 pocillos. Las placas se incuban a 37 °C y 5% de CO<2>. Las células se dosifican al día siguiente con el compuesto del Ejemplo 2 y el compuesto del Ejemplo 2 en combinación con los terapéuticos anticancerígenos conocidos que se encuentran en la tabla siguiente. Se usa un dosificador acústico Echo 555 para preparar diluciones seriadas (1:3) del compuesto del Ejemplo 2, y combinaciones de los mismos, en concentraciones comprendidas entre 60 jM y 0,003 jM. Las células posteriormente se dosifican por medio de la adición de 5 jL de la placa de dilución en serie a la placa de células, lo cual produce una concentración final de DMSO del 0,2% con un intervalo de dosis de concentración final entre 20 y 0,001 jM para el compuesto del Ejemplo 2 y combinaciones de los mismos.

El medio que contiene 0,2% de DMSO se usa para el punto máximo y 2 jM de estaurosporina en el medio de crecimiento que contiene 0,2% de DMSO se usa para el punto mínimo. Tras la dosificación con el compuesto del Ejemplo 2 y combinaciones de los mismos, las placas celulares se incuban a 37 °C y 5% de CO<2>. Siete días después de la adición del compuesto de prueba, las placas se retiran de la incubadora y se añade EtOH (96%, 65 jl) a cada pocillo. Después de 30 minutos, el medio se retira y se añaden ARNasa (20 jl, 50 jg/ml) (Sigma) y una dilución 1:1000 de yoduro de propidio en PBS a cada pocillo. Las placas se sellan y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente en el banco y se preservan de la luz. Posteriormente, se escanean las placas con ACUMEN EXPLORER<™>[Citómetro de microplacas de fluorescencia de barrido láser fabricado por TTP LABTECH LTD]. El número de células 22Rv1 se evalúa a través de un número estimado de células, calculado a través del parámetro de área (relación del área total de la población de células totales), un intervalo designado de intensidad de pico de FL-3 (PI) y el área media de la población de células individuales definida por el perímetro. A continuación, los datos se procesan por medio de una herramienta de cribado NGR. Los datos se analizan mediante el uso de una ecuación logística no lineal de 4 parámetros (curva logística de concentración-respuesta de cuatro parámetros): Y = bot [(top-bot)/1+(x/ IC<50>)pendiente] donde Y = % de inhibición, X = concentración que produce y% de inhibición, “bot” = valor mínimo de y alcanzado por la curva, “top” = valor máximo de y alcanzado por la curva y “pendiente” = inclinación de la curva en IC<50>. % de Inh = [(mediana Máx.- x/ mediana Máx. - mediana Mín.)] ■ 100.

El % de inhibición del compuesto del Ejemplo 2 y combinaciones de los mismos, en células de cáncer de próstata 22Rv1 a diversas concentraciones se ilustran en las Tablas 2 y 3 a continuación.

Tabla 2

Tabla 3

Los resultados de este ensayo demuestran la actividad antiproliferativa del compuesto del Ejemplo 2 y del compuesto del Ejemplo 2 en combinación con las terapias anticancerosas darolutamida, enzalutamida, abemaciclib y alpelisib, en células de cáncer de próstata 22Rv1 (ARFL/ARV7; PIK3CAmut). Como se observa en la Tabla 2, el compuesto del Ejemplo 2 inhibe la proliferación celular. Además, la proliferación celular es inhibida por el compuesto del Ejemplo 2 en combinación con las terapias anticancerígenas descritas en la Tabla 2. Del mismo modo, como se observa en la Tabla 3, el compuesto del Ejemplo 2 inhibe la proliferación celular. Además, la proliferación celular es inhibida por el compuesto del Ejemplo 2 en combinación con las terapias anticancerígenas descritas en la Tabla 3.

Ensayo de Inhibición del Crecimiento Celular

Las líneas celulares tumorales se colocan en placas de 96 pocillos de pared negra de poli-D-lisina (Corning # 354640) y se incuban a 37 °C, 5% de CO2 durante 18 a 24 horas. El compuesto se añadió en diluciones 1:3 en DMSO y las células se incubaron a 37 °C, 5% de CO2 durante 7 días. En el caso de las líneas celulares adherentes, las células se fijaron y tiñeron con yoduro de propidio y se escanearon en Acumen (configuración del canal 3). Para las líneas celulares en suspensión, el crecimiento celular se monitorizó mediante el uso del reactivo Cell Titer-Glo.

Tabla 4

La Tabla 4 ilustra la inhibición del crecimiento de en líneas celulares cancerosas por los compuestos del Ejemplo 1 y el Ejemplo 2.

Ensayo de la Plataforma BromoKdELECT®

El propósito de este ensayo es evaluar el compromiso y la selectividad de la dianain vitro(https://www.discoverx.com/services/drug-discovery-development-services/epigenetic-profiling/bromoscanepigenetic-profiling/bromokdelect). La medición del ensayo se basa en la cantidad de bromodominio capturado en las muestras de ensayo y de control mediante el uso de la tecnología PCR cuantitativa que detecta la etiqueta de ADN asociada al bromodominio. Los compuestos que se unen al sitio activo del bromodominio impiden su unión al ligando inmovilizado y reducirán la cantidad de bromodominio capturado en el soporte sólido. Sin embargo, las moléculas que no se unen al bromodominio no tienen ningún efecto sobre la cantidad de proteína capturada en el soporte sólido. De este modo, la actividad del compuesto se controla por medio de la medición de la cantidad de bromodominio capturado en las muestras de ensayo frente a las de control por medio de qPCR. La afinidad de unión de las interacciones compuesto de ensayo-bromodominio se calcula por medio de la medición de la cantidad de bromodominio capturado en el soporte sólido en función de la concentración del compuesto de ensayo.

La afinidad de unión (Kd) de los compuestos de los Ejemplos 1 y 2 hacia CREBBP, EP300 y BRD4 (Bromodominio 1 (BD1) y Bromodominio 2 (BD2)) se determina en un estudio dosis-respuesta de 11 puntos (Véase la Tabla 5). Los datos se representan como la media de un experimento por duplicado.

Tabla 5

Como se muestra en la Tabla 5, el compuesto del Ejemplo 1 exhibe una afinidad de unión de 0,16 nM para EP300 y una afinidad de unión de 1,1 nM para CREBBP. Además, como se muestra en la Tabla 5, la afinidad de unión del compuesto del Ejemplo 1 es selectiva para CREBBP/EP300 sobre el bromodominio BRD4. También se muestra en la Tabla 5, el compuesto del Ejemplo 2 exhibe una afinidad de unión de 0,095 nM para EP300 y una afinidad de unión de 0,325 nM para CREBBP Además, como se muestra en la Tabla 5, la afinidad de unión del compuesto del Ejemplo 2 es selectiva para CREBBP/EP300 sobre el bromodominio BRD4.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la fórmula:

en la que R<1>es -CH<3>o -CH<2>CH<3>; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R<1>es -CH<3>, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R<1>es -CH<2>-CH<3>, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, que es:
5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, que es:
6. Un compuesto o una sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el compuesto y/o la sal son cristalinos.
7. Un compuesto, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en el tratamiento del cáncer.
8. Un compuesto, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el cáncer se selecciona entre cánceres de células escamosas, el cáncer urotelial de vejiga, el cáncer de mama, el cáncer de colon, el linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), el linfoma folicular, el linfoma de la zona marginal, el cáncer urotelial del tracto superior, el carcinoma de endometrio, el carcinoma endometrioide uterino, el CPCP, el cáncer de próstata, el linfoma, el cáncer de esófago, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, la histología escamosa, el endometrioide uterino, los cánceres provocados por el VPH, las afecciones relacionadas con translocaciones AML-ETO, las afecciones relacionadas con receptores de andrógenos positivos, las afecciones relacionadas con la sobreexpresión de myc, la leucemia mieloide aguda, la leucemia linfoblástica aguda, los mielomas múltiples, el cáncer provocado por el virus del papiloma humano y el cáncer de próstata.
9. Un compuesto, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que los cánceres de células escamosas se seleccionan entre el cáncer anal, el cáncer de vejiga, el cáncer cervical, el cáncer de cabeza y cuello, el cáncer de pulmón y el cáncer de orofaringe.
10. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico.