CN114269750A

CN114269750A - 7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮化合物

Info

Publication number: CN114269750A
Application number: CN202080058609.8A
Authority: CN
Inventors: W·卢默拉斯阿马多; B·J·布兰杜伯
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2019-08-05
Filing date: 2020-08-03
Publication date: 2022-04-01
Also published as: IL289141A; AR119557A1; EP4010343B1; AU2020324949A1; JP7293493B2; KR20220029735A; AU2020324949B2; ES2963582T3; MX2022001412A; CA3145651A1; WO2021026059A1; US20220251096A1; EP4010343A1; BR112022000036A2; JP2022543277A; TW202120095A

Abstract

本文公开了式I的化合物及其药学上可接受的盐：

其中R¹为‑CH₃或‑CH₂CH₃；其可用于治疗癌症。

Description

7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮化合物

本发明涉及为CREBBP和EP300溴结构域双重抑制剂的某些新化合物、包含所述化合物的药物组合物、使用所述化合物治疗某些癌症的方法和用于合成所述化合物的方法。

本发明属于治疗癌症的领域。CREBBP和EP300为组蛋白乙酰转移酶(HAT)并且充当许多转录因子的共活化剂。已经报道CREBBP和EP300溴结构域双重抑制剂介导血液肿瘤细胞系例如急性髓性白血病(AML)(参见例如T.D.Crawford等人,J.Med.Chem.,第59卷,10549-10563页(2016))和多发性骨髓瘤细胞系(参见例如A.R.Conery,eLIFE 2016；5:e10483)中的抗增殖应答。对于治疗癌症存在持续的未得到满足的需求，并且期望新的治疗选择。

WO 2017/205538 A1公开了某些吡唑并吡啶衍生物，其为CBP和/或EP300抑制剂，并且用于治疗不同的CBP和/或EP300介导的疾病，例如癌症、炎性疾病和自身免疫疾病。US2017/0333406 A1公开了某些吡唑并吡啶衍生物，其为CBP和/或EP300抑制剂，用于治疗CBP和/或EP300介导的疾病。

期望额外的CREBBP和EP300溴结构域双重抑制剂化合物。本发明提供了抑制CREBBP和EP300溴结构域的至少一种的某些化合物，并且优选为CREBBP和EP300溴结构域的双重抑制剂。此外，本发明提供的化合物为CREBBP和EP300溴结构域的选择性双重抑制剂，超过包含溴结构域的蛋白质4(“BRD4”)。

本发明还提供了用于治疗癌症的化合物，例如鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌(bladder urothelial cancer)、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区(marginal zone)淋巴瘤、上泌尿道上皮癌(upper tract urothelialcancer)、子宫内膜癌(endometrial carcinoma)、子宫内膜样癌(uterine endometrioidcarcinoma)、SCLC、前列腺癌和淋巴瘤。

此外，本发明的化合物可以用于治疗具有CREBBP和/或EP300突变的肿瘤，例如食管癌、肺癌、SCLC、淋巴瘤、膀胱癌、鳞状组织学(squamous histology)、鳞状细胞癌包括肛门、宫颈、头颈、肺和口咽癌，子宫内膜样(uterine endometrioid)、和HPV驱动的癌症。本文公开的化合物还可以用于治疗AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病(包括AML-ETO融合体)、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤和前列腺癌。鳞状细胞癌包括肛门癌、膀胱癌、宫颈癌、头颈癌、肺癌和口咽癌。

因此，本发明提供了式I的化合物：

其中R¹为-CH₃或–CH₂CH₃；

或其药学上可接受的盐。

本发明还提供了治疗患者的癌症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。可以治疗的癌症包括但不限于鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食管癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

本发明提供了治疗患者的小细胞肺癌(SCLC)的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了治疗患者的淋巴瘤的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了治疗患者的鳞状细胞癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Vettore,AL.,Ramnarayanan,K.,Poore,G.等人，Mutational landscapes of tongue carcinoma reveal recurrent mutations ingenes of therapeutic and prognostic relevance.Genome Med.7(1)98(2015)(注意口腔舌鳞状细胞癌中的CREBBP基因改变)；另外参见Martin D,Abba MC,Molinolo AA等人，The head and neck cancer cell oncogenome:a platform for the development ofprecision molecular therapies.Oncotarget.5(19):8906-8923.(2014)(注意头颈鳞状细胞癌中的CREBBP和EP300基因改变))。本发明还提供了治疗患者的人乳头瘤病毒驱动的癌症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

还公开了治疗患者的具有CREBBP和/或EP300突变的肿瘤的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的膀胱泌尿道上皮癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Gui,Y.,Guo,G.,Huang,Y.等人，Frequent mutations of chromatinremodeling genes in transitional cell carcinoma of the bladder.NatureGenetics 43(9),875-8(2011)(注意膀胱癌患者中的CREBBP和EP300遗传改变))。此外，公开了治疗患者的乳腺癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的结肠癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Bryan,EJ.,Jokubaitis,VJ.,Chamberlain,NL.,等人，Mutation analysis of EP300 in colon,breast and ovariancarcinomas.Int J Cancer.102(2):137-141(2002)(注意人结肠、乳腺和卵巢癌中的EP300遗传改变))。此外，公开了治疗患者的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Morin,RD.,Mendez-Lago,M.,Mungall,AJ.等人，Frequent mutation of histone-modifying genesin non-Hodgkin lymphoma.Nature.476(7360)298-303(注意非霍奇金淋巴瘤中的CREBBP和EP300遗传突变)。公开了治疗患者的滤泡型淋巴瘤的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Okosun J,

C,Wang J等人，Integrated genomic analysis identifies recurrent mutations and evolutionpatterns driving the initiation and progression of follicular lymphoma,NatureGenetics 46(2)176-181(2014)(注意滤泡型淋巴瘤中的CREBBP遗传突变))。公开了治疗患者的边缘区淋巴瘤的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Jung,H.,Yoo,HY.,Lee,SH,等人，The mutational landscape ofocular marginal zone lymphoma identifies frequent alterations in TNFAIP3followed by mutations in TBL1XR1and CREBBP.Oncotarget 8(10)17038-17049(2017)(注意眼边缘区淋巴瘤中的CREBBP遗传突变))。公开了治疗患者的上泌尿道上皮癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Grivas,P.,Mortazavi,A.,Picus,J.等人，Mocetinostat for patients with previouslytreated,locally advanced/metastatic urothelial carcinoma and inactivatingalterations of acetyltransferase genes.Cancer.125(4)533-540.(2019)(注意晚期/转移性泌尿道上皮癌中的CREBBP和EP300遗传突变))。公开了治疗患者的子宫内膜癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的子宫内膜样癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的SCLC的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的前列腺癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Liu,J.,He,D.,Cheng,L.等人，p300/CBP inhibition enhances the efficacy ofprogrammed death-ligand 1blockade treatment in prostate cancer.Oncogene 39,3939–3951(2020)(注意治疗前列腺癌中CREBBP和EP300抑制剂的作用))。

还公开了治疗患者的具有CREBBP和/或EP300突变的肿瘤例如食管癌、肺癌、SCLC、淋巴瘤、膀胱癌和鳞状组织学的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的鳞状细胞癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Morris,V.,Rao,X.,Pickering,C.等人，Comprehensive Genomic Profiling of Metastatic Squamous CellCarcinoma of the Anal Canal.Molecular Cancer Research 15(11),1542-1550(2017)(注意肛管的鳞状细胞癌中的EP300遗传突变)；Vettore,AL.,Ramnarayanan,K.,Poore,G.等人，Mutational landscapes of tongue carcinoma reveal recurrent mutations ingenes of therapeutic and prognostic relevance.Genome Med.7(1)98(2015)(注意口舌的癌症中的CREBBP和EP300突变)；和Martin D,Abba MC,Molinolo AA,等人，The headand neck cancer cell oncogenome:a platform for the development of precisionmolecular therapies.Oncotarget.5(19):8906-8923.(2014)(注意头颈鳞状细胞癌中的CREBBP和EP300遗传突变))。还公开了治疗患者的子宫内膜样的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。公开了治疗患者的HPV驱动的癌症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

公开了治疗患者的AML-ETO易位相关病症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Zhang,J.,Kalkum,M.,Yamamura,S.等人，E protein silencing by the leukemogenic AML1-ETO fusionprotein.Science.305(5688)1286-1289(2004)(注意急性髓性白血病病例中的CREBBP和EP300遗传突变))。公开了治疗患者的雄激素受体阳性相关病症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Garcia-Carpizo,V.,Ruiz-Llorente,S.,Sarmentero,J.等人，CREBBP/EP300溴结构域Inhibition Affects theProliferation of AR-Positive Breast Cancer Cell Lines.Molecular CancerResearch 17(3),720-730(2019)(注意CREBBP和EP300抑制剂在雄激素受体阳性乳腺癌细胞系中的作用)；另外参见Aarnisalo,P.,Palvimo,JJ.&

OA.等人，CREB-bindingprotein in androgen receptor-mediated signaling.PNAS 95(5),2122-2127(1998)(注意在雄激素依赖性信号传导途径中存在CREBBP))。公开了治疗患者的myc过表达相关病症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。

公开了治疗患者的急性髓性白血病、包括AML-ETO融合体的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Brooks等人，CCS1477:A Novel Small Molecule Inhibitor of p300/CBP Bromodomain for theTreatment of Acute Myeloid Leukaemia and Multiple Myeloma.Blood(2019)134(增刊_1):2560)(注意CREBBP和EP300抑制剂在AML治疗中的作用))。公开了治疗患者的急性淋巴细胞白血病的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Qian,M.,Zhang,H.,Kham,SK.等人，Whole-transcriptome sequencingidentifies a distinct subtype of acute lymphoblastic leukemia withpredominant genomic abnormalities of EP300 and CREBBP.Genome Research(2017)27185-195)(注意急性淋巴细胞白血病病例中的CREBBP和EP300基因突变)。还公开了治疗患者的多发性骨髓瘤的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Brooks等人，CCS1477:ANovel Small Molecule Inhibitor ofp300/CBP Bromodomain for the Treatment of Acute Myeloid Leukaemia andMultiple Myeloma.Blood(2019)134(增刊_1):2560)。公开了治疗患者的前列腺癌的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐(参见Liu,J.,He,D.,Cheng,L.等人，p300/CBP inhibition enhances the efficacy ofprogrammed death-ligand 1blockade treatment in prostate cancer.Oncogene 39,3939–3951(2020)(注意CREBBP和EP300抑制剂在前列腺癌治疗中的作用))。

此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。可以治疗的癌症包括鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食管癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗小细胞肺癌。此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗淋巴瘤。此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗鳞状细胞癌。此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗人乳头瘤病毒驱动的癌症。

本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗鳞状细胞癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗膀胱泌尿道上皮癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗乳腺癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗结肠癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗滤泡型淋巴瘤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗边缘区淋巴瘤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗上泌尿道上皮癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗子宫内膜癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗子宫内膜样癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗SCLC。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗前列腺癌。并且本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗淋巴瘤。

此外，本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗具有CREBBP和/或EP300突变的肿瘤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗食管癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗肺癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗SCLC。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗淋巴瘤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗膀胱癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗鳞状组织学。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗鳞状细胞癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗子宫内膜样驱动的癌症。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗HPV驱动的癌症。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗AML-ETO易位相关病症。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗雄激素受体阳性相关病症。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗myc过表达相关病症。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性髓性白血病(包括AML-ETO融合体)。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗急性淋巴细胞白血病。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗多发性骨髓瘤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗前列腺癌。

本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。可以治疗的癌症包括鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食管癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

此外，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗小细胞肺癌(SCLC)的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗淋巴瘤的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗鳞状细胞癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人乳头瘤病毒驱动的癌症的药物中的用途。

本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗鳞状细胞癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗膀胱泌尿道上皮癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗乳腺癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗结肠癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗泡型淋巴瘤的药物中的用途滤。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗边缘区淋巴瘤的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗上泌尿道上皮癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗子宫内膜癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗子宫内膜样癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗的SCLC药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗前列腺癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗淋巴瘤的药物中的用途。

本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗具有CREBBP和/或EP300突变的肿瘤的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗食管癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肺癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗SCLC的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗淋巴瘤的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗膀胱癌的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗鳞状组织学的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗鳞状细胞癌的药物中的用途，包括肛门、宫颈、头颈、肺和口咽癌。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗子宫内膜样驱动的癌症的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗HPV驱动的癌症的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗AML-ETO易位相关病症的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗雄激素受体阳性相关病症的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗myc过表达相关病症的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性髓性白血病(包括AML-ETO融合体)的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗多发性骨髓瘤的药物中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗前列腺癌的药物中的用途。

本发明还提供了药物组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还提供了制备药物组合物的方法，包含混合式I的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还包括用于合成式I的化合物的新的中间体和方法。

如本文所用，术语“治疗”包括抑制、减缓、停止或逆转现存症状或障碍的进展或严重性。

如本文所用，术语“患者”是指哺乳动物，特别是人。

如本文所用，术语“有效量”是指本发明的化合物或其药学上可接受的盐的量或剂量，其在向患者单次或多次施用时，在诊断或治疗的患者中提供期望的效果。

有效量可以由本领域技术人员通过使用已知技术并通过观察在类似情况下获得的结果来确定。在确定患者的有效量时，主治诊断医师会考虑许多因素，包括但不限于：患者的种属；它的大小、年龄和一般健康状况；所涉及的特定疾病或障碍；疾病或障碍的程度或牵涉程度或严重程度；个体患者的反应；施用的特定化合物；施用方式；所施用制剂的生物利用度特征；选择的剂量方案；伴随药物的使用；及其他相关情况。

将本发明的化合物配制成通过使得化合物可得到生物利用的任意途径施用的药物组合物。最优选地，这类组合物用于口服施用。这类药物组合物及其制备方法为本领域众所周知(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,L.V.Allen,Editor,第22版,Pharmaceutical Press,2012)。

以下制备例中所述的某些中间体可以包含一个或多个氮保护基团。如本文所用，“PG”是指一种适合的保护基团。应当理解，保护基团可以如本领域技术人员所理解的那样根据特定反应条件和待进行的特定转化而变化。保护和脱保护条件是技术人员众所周知的并且描述于文献中(参见例如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”,第4版,Peter G.M.Wuts和Theodora W.Greene,John Wiley和Sons,Inc.2007)。

在一个方面，本文所述的化合物和/或盐为晶体。在一个实施方案中，本文公开的化合物为游离胺。在另一个方面，所述游离胺为晶体。或者，所述游离胺可以被转化成如下文所公开的药学上可接受的盐。

在一个方面，本文所述的化合物和/或盐与一种或多种另外的药物一起施用。本文所述的化合物和/或盐与一种或多种另外的药物可以同时施用或彼此在1小时内施用。与本文所述的化合物和/或盐组合的另外的药物的非限制性实例包括其他抗癌药、类固醇和抗炎药。其他抗癌药的非限制性实例包括达洛鲁胺(darolutamide)、安扎鲁胺(enzalutamide)、阿贝西利(abemaciclib)、阿培利司(alpelisib)和BRD4抑制剂。BRD4抑制剂的非限制性实例包括CPI-0610、PLX51107、GSK2820151(I-BET151)、OTX015(MK-8628)、ABBV-075、FT-1101、GSK525762(I-BET762)、ZEN003694和ABBV-744。在一个实施方案中，将本文所述的化合物和/或盐与一种或多种另外的药物配制成单一剂型。在另一个实施方案中，将它们单独配制。

例如，可以通过使本发明化合物的适合的游离碱、适合的药学上可接受的酸在适合的溶剂例如乙醚中、在本领域众所周知的标准条件下反应形成本发明化合物的药学上可接受的盐。另外，形成这类药学上可接受的盐可以同时在使氮保护基脱保护时进行。参见例如Gould,P.L.,“Salt selection for basic drugs,”International Journal ofPharmaceutics,33:201-217(1986)；Bastin,R.J.等人，“Salt Selection andOptimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities,”OrganicProcess Research and Development,4:427-435(2000)；和Berge,S.M.等人,“Pharmaceutical Salts,”Journal of Pharmaceutical Sciences,66:1-19,(1977)。

将某些缩写定义如下：“ACN”是指乙腈；“AR”是指雄激素受体；“aq”是指水；“bis(pinacolato)diboron”是指双(频哪醇基)二硼或4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧硼杂环戊烷；“cAMP”是指环腺苷一磷酸；“

A Pd G3”是指甲磺酸[(二(1-金刚烷基)-正-丁膦)-2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)或[(二(1-金刚烷基)-丁基膦)-2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐；“CBP”、“CREB-结合蛋白”和“CREBBP”可以互换使用且是指cAMP响应元件结合蛋白-结合蛋白；“CDI”是指1,1’-羰基二咪唑；“CPME”是指环戊基甲基醚；“DCC”是指1,3-二环己基碳二亚胺；“DCM”是指二氯甲烷(dichloromethane)或氯化亚甲基(methylene chloride)；“DIC”是指1,3-二异丙基碳二亚胺；“DIPEA”是指N,N-二异丙基乙胺或N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺；“DMAP”是指4-二甲基氨基吡啶；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMEM”是指Dulbecco改进的Eagle培养基；“DMSO”是指二甲亚砜；“DNA”是指脱氧核糖核酸；“EDCI”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇(ethylalcohol)或乙醇(ethanol)；“FBS”是指胎牛血清；“HATU”是指1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐；“HBTU”是指3-[双(二甲基氨基)甲基阳离子(methyliumyl)]-3H-苯并三唑-1-氧化物六氟磷酸盐；“HEK”是指人胚肾；“HOAt”是指1-羟基-7-氮杂苯并三唑；“HOBt”是指1-羟基苯并三唑水合物；“HPLC”是指高效液相色谱法；“iPrOH”是指异丙醇或异丙基醇；“KOAc”是指乙酸钾；“MEM”是指最低基础培养基；“MeOH”是指甲醇或甲基醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“ONf”是指全氟丁基磺酸(nonaflate)或CF₃(CF₂)₃SO₃-；“PBS”是指磷酸缓冲盐水；“Pd₂(dba)₃”是指三(亚苄基丙酮)二钯(0)；“Pd(dppf)Cl₂”是指[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)；“Pd(dppf)Cl₂·DCM”是指[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯二氯甲烷复合物；“Pearlman催化剂”是指披氢氧化钯碳或Pd(OH)₂/C；“psi”是指磅/平方英寸；“PyBOP”是指(苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸盐)；“PyBrOP”是指溴(三吡咯烷基)磷鎓六氟磷酸盐；“rpm”是指每分钟转数；“RT”是指室温；“SCX”是指强阳离子交换色谱法；“T3P”是指2,4,6-三-正-丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物或正丙基膦酸酐；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“Xantphos”是指4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨；“XantPhos-Pd-G2”是指氯[(4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨)-2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)；“XPhos”是指2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯；且“XPhos Pd G2”是指氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以通过本领域技术人员公知的不同方法制备，其中一些示例在下文的方案、制备例和实施例中。可以通过本领域众所周知的常规方法回收下列方案中每个步骤的产物，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶。在下列方案中，除非另有指示，否则全部取代基如上述所定义。试剂和原料对于本领域技术人员而言易于得到。不受本发明范围的限制，提供下列方案、制备例和实施例以便进一步示例本发明。

方案1

方案1示例吡唑并[4,3,-c]吖庚因-6-酮化合物(6)的形成。在方案1步骤A1中，使取代的5-氯4-甲醛吡唑(1)与三氟硼丙基叔丁氧基钾在Suzuki钯偶联条件下、使用碱例如碳酸铯、在溶剂例如1,4-二噁烷和水中、并且使用催化剂例如XPhos Pd G2偶联，加热至约110℃，得到化合物(2a)。钯交叉偶联反应为本领域众所周知的，且本领域技术人员认识到存在用于促进这类交叉偶联反应的多种条件。适合的钯催化剂包括XantPhos Pd G2、

A Pd G3、氯化双(三苯膦)钯(II)、Pd(dppf)Cl₂、Pd₂dba₃、四苯膦钯和乙酸钯(II)。如果需要，适合的配体可以包括三环己膦和三苯膦。适合的碱包括氟化钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾、叔丁醇钾和磷酸钾一水合物。

在方案1步骤B1中，化合物(2a)可以进行还原氨基化，得到甲基氨基化合物(3)。还原氨基化可以使用本领域众所周知的条件进行，例如向化合物(2a)在DCM中的溶液或含有催化量的酸例如乙酸的MeOH溶液中添加甲胺，并且搅拌适合的时间，例如约1小时。然后添加适合的还原剂，例如三乙酰氧基硼氢化钠。可以使用本领域已知的其他还原剂，例如NaBH₄或LiBH₄，得到甲基氨基化合物(3)。

在方案1步骤C中，在本领域众所周知的酸性条件下，例如使用TFA或盐酸在RT使甲基氨基化合物(3)脱保护，得到羧酸(4)。“PG”是为羧酸开发的保护基。这类保护基为本领域众所周知和理解的。然后用酰胺偶联试剂使羧酸(4)环化，得到化合物(5)。在极性无质子溶剂例如DMF中，在RT下，使用碱例如DIPEA和偶联试剂例如T3P进行内部酰胺环化。本领域技术人员认识到，存在多种用于因羧酸和胺的反应形成酰胺的方法和试剂。例如，胺与适合的羧酸在偶联试剂与或不与有机碱例如DIPEA或三乙胺存在下反应，可以得到化合物(5)。偶联试剂包括碳二亚胺，例如DCC、DIC、EDCI或羰基二咪唑如CDI。酰胺偶联挺添加剂，例如HOBt和HOAt也可以用于增强反应。另外，非亲核阴离子的脲鎓或磷鎓盐，例如HBTU、HATU、PyBOP和PyBrOP可以用于替代更传统的偶联试剂。添加剂例如DMAP可以用于增强反应。或者，可以用2,2,2-三氟乙醇在连续反应系统中处理化合物3在EtOH中的粗溶液，以便原位脱保护和环化并在浓缩后，得到化合物(5)。

随后可以使用碘和硫酸银在溶剂例如EtOH中使化合物(5)在吡唑上碘化，得到化合物(6)。本领域技术人员认识到，可以用其他卤素例如溴和氯替代碘，得到适合的相应卤代化合物(6)，即碘还可以为溴或氯，得到如下方案2中使用的适合的中间体。

按照方案1步骤A2中的可替代反应步骤，可以使用碱例如N,N-二环己基甲胺在溶剂如1,4-二噁烷中、和适合的钯催化剂如氯[(三-叔丁膦)-2-(2-氨基联苯基)]钯(II)]、用丙烯酸叔丁酯在Heck反应条件下处理化合物(1)，形成取代的烯烃化合物(2b)。Heck反应中使用的典型催化剂为四(三苯膦)钯(0)、氯化钯和乙酸钯(II)。典型的配体为三苯膦、三-叔丁膦、Xantphos、Xphos和双(二-叔丁膦)二茂铁。

在方案1步骤B2中，随后可以在总计2步反应中将化合物(2b)转化成化合物(3)。可以将甲胺添加至在溶剂例如EtOH中的化合物(2b)中，搅拌约90分钟，形成亚胺。然后可以在氢化条件下，使用适合的催化剂，例如Pearlman催化剂还原烯烃和亚胺，氢化，得到化合物(3)。

方案2

在方案2步骤A中，化合物(9)可以在与方案1步骤A1中对化合物2a所述类似的Suzuki交叉偶联条件下由化合物(8)与3-溴-8-氯-异喹啉化合物(7)(X＝Br,ONf)的硼酸酯偶联制备。例如，将化合物(7)与化合物(8)合并，用碱例如碳酸钠或碳酸钾在溶剂如1,4-二噁烷和水中、在氮气条件下使用催化剂如Pd(dppf)Cl₂·DCM处理，加热至约80-95℃，得到化合物(9)。或者，可以使化合物8由5-溴-N-甲基吡啶-2-甲酰胺、双(频哪醇基)二硼和KOAc在CPME中使用Pd(dppf)Cl₂在60-95℃下原位生成。在约4-8小时的适合的反应时间后，冷却该混合物，如上所述制备化合物(9)，维持溶剂为CPME并且使用Pd(dppf)Cl₂作为催化剂，在方案2步骤B中，可以用双(频那醇)二硼(对于R＝CH₃)或四羟基二硼(对于R＝H)在Miyaura硼基化条件下替代化合物(9)的氯化物，得到化合物(10)。例如，KOAc可以用作碱，Xphos可以用作配体，且XPhos Pd G2可以用作在溶剂如1,4-二噁烷(R＝CH₃)和乙二醇和MeOH(R＝H)中的催化剂。然后将该反应混合物加热至约40℃(R＝H)和加热至约90℃(R＝CH₃)，得到化合物(10)。可以使用的其他催化剂为乙酸钯(II)或Pd₂(dba)₃，且其他溶剂可以为甲苯或2-甲基-2-丁醇。

在方案2步骤C中，随后可以使化合物(10)与化合物(6)在如方案1步骤A1中所述的标准钯交叉偶联条件下偶联。例如，使用适合的溶剂如1,4-二噁烷或EtOH，适合的碱如磷酸钾和适合的催化剂如Pd(dppf)Cl₂·DCM或Pd₂dba₃与三环己膦作为配体(如果需要)并且加热至约50-95℃，得到式I的化合物。

下列制备例和实施例进一步示例本发明。

制备例1

3-(4-甲酰基-2-甲基-吡唑-3-基)丙酸叔丁酯

方案1步骤A1：将5-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(17.8g,119mmol)和钾(3-叔丁氧基-3-氧代-丙基)-三氟化硼(boranuide)(38.0g,161mmol)在1,4-二噁烷(298mL)中的混悬液用碳酸铯(117g,358mmol)在水(60mL)中的溶液处理，用氮气吹扫5分钟。加入XPhos PdG2(9.4g,11.9mmol)，将该反应混合物吹扫10分钟，在110℃在氮气气氛中加热20小时。将冷却的反应混合物通过硅藻土垫过滤，用EtOAc(900mL)、DCM(200mL)洗涤，真空浓缩。将得到的油状物溶于EtOAc(1.2L)，用1M NaOH水溶液(3x200mL)和盐水(200mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤，蒸发至干。通过硅胶柱色谱法纯化粗物质，用0-50％己烷-EtOAc梯度洗脱，得到标题化合物(15.7g,53％)，为淡黄色油状物。ES/MS(m/z):239(M+H),¹HNMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ9.80(s,1H),7.91(s,1H),3.84(s,3H),3.13(t,J＝7.5Hz,2H),2.58(t,J＝7.5Hz,2H),1.36(s,9H)。

制备例2

(E)-3-(4-甲酰基-2-甲基-吡唑-3-基)丙-2-烯酸叔丁酯

方案1步骤A2：将5-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(50.0g,329mmol)、丙烯酸叔丁酯(70mL,468mmol)和N,N-二环己基甲胺(140mL,650mmol)溶于1,4-二噁烷(400mL)。用氮气将该混合物吹扫15分钟，然后加入氯[(三-叔丁膦)-2-(2-氨基联苯基)]钯(II)](3.46g,6.62mmol)，用氮气再次吹扫，将该反应混合物在85℃(内部温度)搅拌16小时，然后在99℃(内部温度)再搅拌3小时。停止加热，当内部温度降至低60℃时，用水(300mL)和EtOAc(500mL)稀释该混合物。分离各相，再用水(500mL)稀释水相，此后，另一个有机相形成。分离各相，用EtOAc(250mL)萃取水相。将合并的有机相与10％柠檬酸水溶液(500mL)一起振摇，通过硅藻土过滤，用水(0.1L)和EtOAc(250mL)洗涤。用MgSO₄干燥有机层，过滤，在50℃减压浓缩，得到浓稠红-橙色油状物(92g)。在50℃向该混合物中加入庚烷(500mL)，然后在RT搅拌过夜，在此过程中，初始的油状物转化成固体。通过过滤采集得到的固体，用10％EtOAc/庚烷(50mL)、然后用庚烷(100mL)洗涤。在真空烘箱(40℃,10mbar)中干燥固体22小时，得到标题化合物(57.1g,73％)，为乳膏样固体。ES/MS(m/z):237(M+H),¹H NMR(400.21MHz,CDCl₃)δ9.96(s,1H),7.99(s,1H),7.64(d,J＝16.1Hz,1H),7.02(d,J＝16.1Hz,1H),4.02(s,3H),1.57(s,9H)。

制备例3

3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸叔丁酯

方案1步骤B1：将甲胺的2M THF溶液(10.2mL,20.4mmol)加入到3-(4-甲酰基-2-甲基-吡唑-3-基)丙酸叔丁酯(0.81g,3.4mmol)和乙酸(0.2mL,3.4mmol)在DCM(17mL)中的溶液中。将该混合物在RT搅拌1小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.88g,13.6mmol)，将该反应混合物在RT搅拌17小时。用饱和NaHCO₃水溶液(30mL)和DCM(30mL)稀释该反应混合物。用DCM(4x100mL)萃取水相。用硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤，蒸发至干，得到棕色油状物。通过硅胶柱色谱法纯化粗物质，用0-70％DCM-DCM/7N NH₃的MeOH溶液(9:1)梯度洗脱，得到标题化合物(0.64g,73％)，为油状物。ES/MS(m/z):254(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ7.22(s,1H),3.72(s,3H),3.42(s,2H),2.85(t,J＝7.7Hz,2H),2.47(t,J＝7.7Hz,2H),2.24(s,3H),1.38(s,9H)。

可选制备例3

3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸叔丁酯

方案1步骤B2：将甲胺(33％的EtOH溶液,85mL,683mmol)加入到(E)-3-(4-甲酰基-2-甲基-吡唑-3-基)丙-2-烯酸叔丁酯(57.1g,239mmol)在EtOH(180mL)中的溶液中，在RT搅拌90分钟。将湿Pearlman催化剂(20wt％基于干重,2.5g,18mmol)在EtOH(60mL)中的浆液在氮气吹扫气氛中加入到316SS高压反应器中。加入初始制备的亚胺溶液，用EtOH(60mL)冲洗。固定高压反应器，封闭容器，用氢气吹扫并且填充至110psi(7.1巴)，然后在RT搅拌20小时(约14小时后不再消耗氢气)。通过硅藻土垫过滤该混合物，用EtOH冲洗。减压浓缩滤液至约200mL体积。溶液的ES/MS和¹H NMR与预期的化合物一致。不经分离和进一步纯化标题化合物，使用EtOH溶液，推定定量收率(65.9g,239mmol)。

制备例4

3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸

方案1步骤C：向3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸叔丁酯(9.6g,37.5mmol)在DCM(150mL)中的溶液中加入TFA(43mL,562mmol)，将该混合物在RT搅拌2小时。减压浓缩溶液，将痕量的TFA与ACN一起共蒸发，得到无色油状物，不经进一步纯化用于下一步，推定定量收率(7.54g,37.5mmol).ES/MS(m/z):198(M+H)。

制备例5

1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮

方案1步骤D：将3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸(7.54g,37.5mmol)溶于DMF(375mL)，通过滴加DIPEA(24.2g,187mmol)和T3P(50％的DMF溶液)(43.8mL,75.0mmol)处理，在RT搅拌5小时。用水(800mL)稀释该反应混合物，用饱和NaHCO₃水溶液将pH调节至pH 8。用DCM/iPrOH(8:2)(8x250mL)萃取该溶液。用硫酸钠干燥合并的有机萃取物，过滤，蒸发至干。用SCX色谱法、使用如下条件纯化残余物：用2个体积的MeOH平衡柱，将化合物溶于MeOH(5+5mL)，加入到柱上，用MeOH(6个体积)洗涤，用7N NH₃的MeOH溶液(250mL)洗脱。蒸发碱性级分，得到标题化合物(5.56g,83％)，为灰白色固体。ES/MS(m/z):180(M+H).¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ7.23(s,1H),4.34(s,2H),3.65(s,3H),2.86(s,3H),2.85-2.77(m,4H)。

可选制备例5

1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮

方案1步骤D：通过0.45μm聚丙烯膜过滤来自可选制备例3的3-[2-甲基-4-(甲基氨基甲基)吡唑-3-基]丙酸叔丁酯在EtOH中的溶液(约239mmol)。用EtOH将体积调整至0.3L，加入2,2,2-三氟乙醇(750mL)，得到进料溶液。用2,2,2-三氟乙醇和EtOH的3:1混合物(吹扫溶剂)吹扫带有4000kPa背压调节器的60mL 316-SS管状反应器(1/8”OD)。将反应器加热至220℃，通过反应器，使用耐化学的HPLC泵以3mL/min的速率(停留时间20分钟)泵送进料溶液。将全部溶液泵送入反应器后，用2,2,2-三氟乙醇和EtOH的3:1混合物(约100mL)以相同流速吹扫反应器。在50℃减压浓缩输出溶液和吹扫液，得到粗的标题化合物(48.38g,89％LCMS纯度,根据¹H NMR约20wt％溶液，186.3mmol).ES/MS(m/z):180(M+H)。

制备例6

3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮

方案1步骤E：向1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(5g,26.6mmol)在EtOH(60mL)中的溶液中加入碘(粉碎的,10g,39.4mmol)，然后加入硫酸银(15.2g,48.7mmol)。将该反应混合物在RT搅拌48小时。加入DCM(500mL)，将该混悬液搅拌2小时，滗析液体，将固体与20％iPrOH的DCM溶液(600mL)一起研磨，搅拌4小时。过滤该混合物，弃去固体，真空浓缩滤液。加入NH₃水(32％,150mL)，用DCM(2x350mL)萃取该溶液。用饱和Na₂S₂O₃洗涤合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到固体。将该固体在1:1己烷:MTBE的混合物(90mL)中研磨2小时。过滤固体，在真空烘箱中在45℃真空干燥16小时，得到标题化合物(7.36g,89％)，为白色固体。ES/MS(m/z):306(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ4.20(s,2H),3.68(s,3H),2.87(s,3H),2.86-2.80(m,4H)。

可选制备例6

3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮

方案1步骤E：将1,5-二甲基-7,8-二氢吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(31.6g,94％LCMS纯度,166mmol)在EtOH(250mL)中的溶液加入到硫酸银(62.3g,200mmol)中。将该溶液在氮气气氛中搅拌。在15min间隔以4个近似相等的部分加入一氯化碘在DCM中的溶液(1.0M,220mL,220mmol)。外部水浴用于减少放热。搅拌23小时后，再加入另一部分一氯化碘在DCM中的溶液(1.0M,33mL,33mmol)。再搅拌73.5小时后，通过硅藻土过滤该混合物，用DCM(300mL)洗涤滤饼。将滤液和洗涤液与1:1的20％NaHSO₃水溶液和NaCl水溶液的混合物(400mL)一起搅拌1.5小时，然后通过硅藻土过滤，用DCM(200mL)洗涤滤饼。分离滤液的各相，用DCM(200mL)萃取水相。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机萃取物，用MgSO₄干燥，在50℃减压浓缩，得到软的黄色残余物(57g)。将残余物溶于DCM(250mL)，倾倒在DCM-洗涤的硅胶垫上(9cm直径x 5cm深度)，在抽吸环境中用1:4EtOH:DCM(500mL)的部分洗脱。在50℃减压浓缩包含目标的级分，将得到的残余物在MTBE(250mL)中、在环境温度研磨约16小时。通过过滤采集固体，用MTBE(0.1L)洗涤，在50℃和10mbar干燥8.5小时，得到标题化合物，为白色粉末细粉(41.0g,80％).ES/MS(m/z):306(M+H)。

制备例7

1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁-1-磺酸(8-氯-3-异喹啉基)酯

将碳酸钾(75g,542.7mmol)和1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁-1-磺酰氟(70mL,398.8mmol)加入到在ACN(500mL)中的8-氯-2H-异喹啉-3-酮(63g,350.7mmol)中，将得到的混合物在60℃搅拌15小时。过滤该混合物，再用ACN洗涤固体。减压浓缩滤液。将残余物混悬于水(300mL)，用饱和NaHCO₃水溶液(20mL)将pH调节至>7。将该混悬液搅拌2小时，然后过滤。用水和庚烷洗涤滤饼，然后在35℃减压干燥。将干燥的固体溶于DCM，加入硅胶(100mL)，减压浓缩该混合物。将得到的固体上硅胶垫(400mL硅胶，预先用1:4EtOAc:正庚烷洗涤)，在抽吸环境中用1:4EtOAc:正己烷(1.5L)洗脱。减压浓缩洗脱液至约原始体积的1/20，加入正己烷(50mL)以沉淀固体。通过过滤采集固体，通过对滤液进行类似处理又得到各批固体(总计4批)。合并各批次固体，在50℃减压干燥过夜，得到标题化合物，为白色固体(50.82g,55.9％).ES/MS(m/z)(³⁵Cl/³⁷Cl):462/464(M+H)；¹H NMR(400.21MHz,CDCl₃)δ9.53(s,1H),7.89-7.82(m,1H),7.77-7.69(m,2H),7.62(s,1H)；¹⁹F{¹H}NMR(376.5MHz,CDCl₃)δ-80.6(m),-108.7(m),-120.8(m),-125.7(m)。

制备例8

5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤A：将3-溴-8-氯-异喹啉(500mg,2.06mmol)、N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(584mg,2.23mmol)和碳酸钠(655mg,6.19mmol)混悬于1,4-二噁烷(8.2mL)和水(1.6mL)。用氮气吹扫该混合物(5分钟)。加入Pd(dppf)Cl₂·DCM(135mg,0.165mmol)，将该反应体系在95℃搅拌23小时。将该混合物冷却至RT，用硅藻土过滤，用EtOAc(200mL)和DCM(100mL)冲洗。真空浓缩滤液，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用0-40％DCM-DCM/MeOH(9:1)梯度洗脱，得到标题化合物(610mg,98％)，为浅棕色固体。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl):298/300(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ9.69(s,1H),9.46(dd,J＝0.7,2.2Hz,1H),8.87-8.85(m,1H),8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.77-8.76(m,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.09(d,J＝7.7Hz,1H),7.93-7.83(m,2H),2.87(d,J＝4.8Hz,3H)。

可选制备例8

5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤A：将CPME(120mL)中的5-溴-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(10.0g,46.0mmol)、双(频哪醇基)二硼(15.5g,59.8mmol)和KOAc(11.5g,115mmol)一起加入，用氮气将该混合物吹扫约10分钟。加入Pd(dppf)Cl₂(1.0g,1.3mmol)，将该混合物加热至60℃。将该混合物在81℃(内部温度)在氮气气氛中搅拌约4小时。使温度增加至94℃(内部温度)，45分钟后，再加入双(频哪醇基)二硼(2.5g,9.6mmol)。持续加热4小时，然后将该混合物冷却至环境温度。加入经氮气吹扫的2M碳酸钾水溶液(70mL,140mmol)，随后在10分钟后加入1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁-1-磺酸(8-氯-3-异喹啉基)酯(22.28g,47.8mmol)。将该混合物用氮气吹扫约10分钟，然后加热至内部温度84℃。5小时后，加入Pd(dppf)Cl₂(0.5g,0.7mmol)，持续加热3小时。停止加热，保持该混合物冷却至50℃，然后用2M碳酸钾水溶液(75mL,150mmol)和EtOAc(120mL)稀释。将该混合物冷却至环境温度，过滤。压制滤饼，用水(200mL)和EtOAc(100mL)洗涤。分离滤液各相，用50mL的2M磷酸钾水溶液和饱和NaCl水溶液的各批次洗涤有机相，用MgSO₄干燥，过滤，减压浓缩。将残余物合并在DCM(300mL)中，通过过滤采集固体，剧烈搅拌约2小时。过滤该混合物，用DCM(100mL)洗涤饼状物，然后弃去。从滤液中分离少量水相，弃去，用盐水洗涤有机相，然后倾倒在硅胶垫上(9cm直径x2.5cm深度)，在抽吸环境中用DCM(3x500mL)和1:9丙酮:DCM(4x500mL)洗脱。合并包含目标的级分，减压浓缩，将得到的残余物在MTBE(250mL)中在50℃研磨1小时，然后在冰冷水浴中冷却1小时。通过过滤采集固体，用冷MTBE(2x50mL)洗涤，减压干燥(45℃,10mbar)18小时，得到标题化合物，为灰白色固体(7.51g,54.8％).ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl):298/300(M+H)。

制备例9

5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-乙基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤A:将1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁-1-磺酸(8-氯-3-异喹啉基)酯(500mg,1.08mmol)、N-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(390mg,1.13mmol)混悬于1,4-二噁烷(11mL)，加入2M碳酸钾水溶液(1.62mL,3.24mmol)。用氮气将该溶液吹扫5分钟。加入Pd(dppf)Cl₂·DCM(44mg,0.054mmol)，再用氮气吹扫该溶液，将该反应体系在90℃搅拌15小时。将该混合物冷却至RT，用水淬灭，用EtOAc(3x100mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，用无水硫酸钠干燥，过滤，蒸发至干，得到棕色油状物。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，用0％-70％正己烷-EtOAc梯度洗脱，得到标题化合物(275mg,81％)，为浅棕色固体。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl):312/314(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ9.70(t,J＝0.8Hz,1H),9.47(dd,J＝0.8,2.2Hz,1H),8.91(t,J＝5.9Hz,1H),8.79-8.76(m,2H),8.20(dd,J＝0.8,8.2Hz,1H),8.11-8.09(m,1H),7.90-7.83(m,2H),3.34-3.41(m,2H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H)。

制备例10

N-甲基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤B:用氮气吹扫5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(750mg,2.27mmol)、双(频哪醇基)二硼(1.73g,6.80mmol)、KOAc(556mg,5.67mmol)和XPhos(111mg,0.227mmol)在1,4-二噁烷(32mL)中的混合物。加入XPhos Pd G2(182mg,0.227mmol)，用氮气吹扫该混合物。将该混合物在90℃搅拌17小时。将该反应混合物冷却至RT，通过硅藻土过滤，用EtOAc(3x50ml)洗涤。浓缩该混合物，用EtOAc(500mL)稀释残余物，用水(2x80mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，蒸发，得到棕色油状物，通过硅胶柱色谱法纯化，用0-70％己烷-EtOAc梯度洗脱，得到标题化合物(482mg,54％)，为白色固体。ES/MS(m/z):390(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ10.08(s,1H),9.47(dd,J＝0.7,2.2Hz,1H),8.87(q,J＝4.7Hz,1H),8.77(dd,J＝2.2,8.2Hz,1H),8.68(d,J＝0.6Hz,1H),8.21-8.17(m,2H),8.13(dd,J＝1.2,6.9Hz,1H),7.86(dd,J＝6.9,8.2Hz,1H),2.87(d,J＝4.8Hz,3H),1.43(s,12H)。

制备例11

5-[8-(1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤B:用氮气将5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(5.8g,19.3mmol)、四羟基二硼(2.9g,31mmol)、KOAc(5.0g,49.9mmol)和XPhos Pd G2(0.39g,0.49mmol)在无水乙二醇(15mL)和MeOH(60mL)中的混合物吹扫15分钟。然后将该混合物在40℃搅拌14小时。加入水(150mL)，将该混合物在环境温度搅拌3小时。通过过滤采集固体，用1:3MeOH:水(50mL)、水(50mL)和MTBE(50mL)洗涤。在真快烘箱(40℃,10mbar)中干燥滤饼24小时，得到标题化合物，为浅褐色固体，与作为主要种类的二醇酯一致(6.96g,91％LCMS纯度,99％)。ES/MS(m/z):308(M+H，硼酸)；¹H NMR(400.21MHz,d₄-MeOH)δ9.42(s,1H),9.38(d,J＝1.6Hz,1H),8.66(dd,J＝2.0,8.4Hz),8.43(s,1H),8.22(dd,1H,J＝0.8,8.4Hz,1H),8.09-8.03(m,1H),7.87-7.78(m,1H),3.62(s,3H),3.03(s,3H)。

制备例12

N-乙基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤B:用氮气吹扫5-(8-氯-3-异喹啉基)-N-乙基-吡啶-2-甲酰胺(275mg,0.88mmol)、双(频那醇)二硼(672mg,2.65mmol)、KOAc(216mg,2.20mmol)和XPhos(43mg,0.088mmol)在1,4-二噁烷(11mL)中的混合物。加入XPhos Pd G2(69mg,0.088mmol)，用氮气吹扫该混合物，在90℃搅拌21小时。将该混合物冷却至RT，通过硅藻土过滤，用EtOAc(200mL)洗涤。浓缩该混合物，用EtOAc(300mL)稀释残余物，用水(2x80mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，蒸发，得到棕色油状物，通过硅胶柱色谱法纯化，用0-50％己烷-EtOAc梯度洗脱，得到标题化合物(202mg,57％)，为灰白色固体。ES/MS(m/z):404(M+H),¹H NMR(400.21MHz,d₆-DMSO)δ10.08(s,1H),9.48(dd,J＝0.7,2.2Hz,1H),8.90(t,J＝6.0Hz,1H),8.77(dd,J＝2.2,8.2Hz,1H),8.67(d,J＝0.5Hz,1H),8.22-8.17(m,2H),8.13(dd,J＝1.2,6.9Hz,1H),7.86(dd,J＝6.9,8.2Hz,1H),3.41-3.34(m,2H),1.43(s,12H),1.15-1.18(m,3H)。

实施例1

5-[8-(1,5-二甲基-6-氧代-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-3-基)-3-异喹啉基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤C:用1M磷酸钾水溶液(0.98mL,0.98mmol)处理3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(100mg,0.33mmol)和N-甲基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(153mg,0.39mmol)在1,4-二噁烷(2.2mL)和N,N-二甲基乙酰胺(0.22mL)中的溶液，用氮气吹扫5分钟。加入Pd(dppf)Cl₂·DCM(27mg,0.033mmol)，将该反应体系在95℃搅拌5.5小时。通过硅藻土过滤粗物质，用DCM和EtOAc洗涤，蒸发至干。用色谱法，使用如下条件纯化残余物：用2个柱体积的MeOH平衡柱，将化合物溶于MeOH(4mL)，加入到柱上，用MeOH(3个体积)洗涤，用2M NH₃的MeOH溶液(20mL)洗脱。蒸发溶剂，得到棕色油状物。再通过硅胶柱色谱法纯化该油状物，用0-70％DCM-DCM/MeOH(9:1)梯度洗脱。在40℃在真空烘箱中干燥该固体，得到标题化合物(130mg,90％)，为浅棕色固体。ES/MS(m/z):441(M+H),¹H NMR(400.13MHz,d₆-DMSO)δ9.56(s,1H),9.46(d,J＝2.0Hz,1H),8.85(q,J＝4.9Hz,1H),8.76(dd,J＝2.0,8.3Hz,1H),8.73(s,1H),8.19(d,J＝8.3Hz,1H),8.13(d,J＝8.3Hz,1H),7.93(dd,J＝7.1,8.3Hz,1H),7.58(dd,J＝1.2,7.1Hz,1H),4.33(s,2H),3.85(s,3H),3.03-2.91(m,4H),2.87(d,J＝4.9Hz,3H),2.77(s,3H)。

可选制备实施例1

方案2步骤C:用氮气将含3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(9.3g,30.17mmol)的2-甲基-2-丁醇(100mL)、N-甲基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(约.52g,68％LCMS纯度,10.5mmol)和2M磷酸钾水溶液(30mL,60mmol)的混合物吹扫30分钟，然后添加Pd(dppf)Cl₂(0.71g,0.95mmol)。将该混合物在具有90℃设定值的加热块中加热。当加热块温度达到60℃时，取出吹扫试管。在2小时和3.5小时时再加入另外批次的N-甲基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(总添加量：15.45g,68％LCMS纯度,31.53mmol)。总计20小时加热后，将该混合物冷却至环境温度，用水(100mL)和MTBE(250mL)稀释。过滤该混合物，用水(100mL)和MTBE(100mL)洗涤过滤的固体。分离滤液的各相，向有机相中加入庚烷(400mL)。1小时后，再通过过滤采集另外的固体沉淀，与预先采集的固体合并。将合并的固体溶于DCM(500mL)、丙酮(200mL)和MeOH(100mL)的混合物，用硅藻土在50℃减压浓缩。使固体上适合的柱，使用硅胶柱色谱法纯化(750g硅胶)，用0-15％EtOH/DCM梯度洗脱。合并包含目标的级分，减压浓缩至约60mL澄清棕色溶液。将该溶液在60℃搅拌，用预先制备的目标样品接种。将得到的浆液在60℃、正压氮气气氛中再搅拌1小时，然后冷却至环境温度。16小时后，通过过滤采集固体，用冰冷的EtOH(35mL)洗涤。再通过浓缩和滤液的进一步色谱，分离另外的物质。合并两批固体，溶于THF(200mL)，在40℃与二巯基三嗪-官能化的金属清除剂树脂(SiliCycle Inc,

DMT,2g,1.2mmol，作为二巯基三嗪)一起搅拌67小时。通过0.45μM聚丙烯膜滤器过滤除去清除剂，用THF(100mL)冲洗固体。在50℃减压浓缩滤液和洗涤液，与EtOH进行溶剂交换(最终体积约为50mL)，在此过程中，白色浆液形成。将该浆液在60℃、在正压氮气气氛中放置1小时，然后冷却至环境温度。6小时后，通过过滤采集固体，用冰冷的EtOH(25mL)洗涤。减压干燥固体30小时(在60℃5小时，在50℃25小时)，得到标题化合物，为白色粉末(8.95g,66％)。ES/MS(m/z):441(M+H)。

实施例2

5-[8-(1,5-二甲基-6-氧代-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-3-基)-3-异喹啉基]-N-乙基-吡啶-2-甲酰胺

方案2步骤C:用1M磷酸钾水溶液(1.27mL,1.27mmol)处理3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(130mg,0.43mmol)、N-乙基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(353mg,0.49mmol)在1,4-二噁烷(2.85mL)和N,N-二甲基乙酰胺(0.28mL)中的溶液，用氮气吹扫5分钟。加入Pd(dppf)Cl₂·DCM(35mg,0.042859mmol)，将该反应体系在90℃搅拌17小时。将该物质冷却至RT，通过硅藻土过滤，用DCM和EtOAc洗涤，蒸发至干。用SCX色谱法，使用如下条件纯化残余物：用2个柱体积的MeOH平衡柱，将化合物溶于MeOH(4mL)，加入到柱上，用MeOH(3个体积)洗涤，用2M NH₃的MeOH溶液(20mL)洗脱。蒸发溶剂，得到棕色油状物。再通过反相色谱法，使用10mM碳酸氢铵缓冲液pH＝9纯化该物质，用20％-60％ACN的缓冲液溶液梯度洗脱，得到标题化合物(83mg,42％)，为浅棕色固体。ES/MS(m/z):455(M+H),¹H NMR(400.13MHz,d₆-DMSO)δ9.57(s,1H),9.46(dd,J＝0.7,2.2Hz,1H),8.89(t,J＝6.1Hz,1H),8.76(dd,J＝2.2,8.3Hz,1H),8.73(s,1H),8.20-8.18(m,1H),8.13(d,J＝8.6Hz,1H),7.93(dd,J＝7.1,8.3Hz,1H),7.58(dd,J＝1.1,7.1Hz,1H),4.33(s,2H),3.85(s,3H),3.41-3.34(m,2H),3.04-2.91(m,4H),2.77(s,3H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H)。

可选制备实施例2

方案2步骤C:用氮气将3-碘-1,5-二甲基-7,8-二氢-4H-吡唑并[4,3-c]吖庚因-6-酮(3.50g,11.36mmol)和N-乙基-5-[8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3-异喹啉基]吡啶-2-甲酰胺(4.71g,11.56mmol)在EtOH(35mL)和2M磷酸钾水溶液(11mL,22mmol)中的混合物吹扫15分钟。加入三环己膦(0.19g,0.68mmol)和Pd₂dba₃(0.21g,0.22mmol)，使氮气吹扫再持续10分钟。启动加热，一旦加热块达到50℃，取出吹扫试管。将该混合物回流4小时，然后冷却至RT。加入二巯基三嗪-官能化的金属清除剂树脂(SiliCycle,Inc,

DMT,载量0.60mmol/g,2.0g,1.2mmol)，将该混合物在50℃搅拌3.5小时，然后冷却至RT。加入水(120mL)，将该混合物在RT搅拌30分钟。通过硅藻土过滤该混合物，用1:3EtOH/水(40mL)冲洗垫。用水(400mL)稀释滤液，在环境温度搅拌1.5小时。通过过滤采集得到的白色固体，用1:6EtOH/水(70mL)、水(100mL)洗涤，在50℃减压干燥16小时，得到粗的标题化合物。将粗固体溶于EtOH(40mL)和DCM(10mL)，通过硅藻土过滤。在50℃减压浓缩滤液，直至约20mL溶液保留。将该溶液在70℃加热块中搅拌，加入庚烷(20mL)，历时约2分钟。将该混合物在加热块中搅拌1小时，在此过程中，白色固体形成。停止加热，在搅拌下使该混合物冷却。6小时后，通过过滤采集固体，用1:1EtOH/庚烷(10mL)和庚烷(10mL)洗涤，然后在50℃减压干燥13小时，得到标题化合物(4.2g,81％)，为白色固体。ES/MS(m/z):455(M+H)。

生物学测定

NanoBRET测定

将HEK293细胞以10x 10⁶细胞/16mL接种在T-75烧瓶中的DMEM+10％FBS中，保持贴壁4-6小时。将转染试剂用Opti-MEM培养基(无酚红，无FBS)稀释，8％Fugene HD包含如下终浓度的表达质粒：1:组蛋白H3.3 HaloTag DNA(Promega,0.02μg)+NanoLuc-CREBBP-BD(Promega,0.0002μg)；2:组蛋白H3.3 HaloTag DNA(Promega,0.02μg)+NanoLuc-EP300-BD(Promega,0.0002μg)；3:组蛋白H4 HaloTag DNA(0.02μg)+NanLuc-BRD4 Full Length(Promega,0.0002μg)。将DNA/Fugene混合物保持在RT 10分钟。每个烧瓶中添加转染混合物(800μL)，即刻涡旋以覆盖细胞。将板返回至温育箱中过夜转染。第二天，在RT融化HaloTagNanoBRET 618配体(20μL/小瓶，0.1mM)。从转染细胞烧瓶中除去培养基，用PBS(5mL)洗涤，用胰蛋白酶(3mL)在RT处理以分离细胞。将胰蛋白酶化的细胞重新混悬于DMEM+10％FBS(7mL)，收集在锥形试管(50mL)中。将细胞以1500rpm旋转5分钟，然后重新混悬于Opti-MEM(无酚红)+4％FBS。以100nm的终浓度向细胞中加入HaloTag NanoBRET 618配体(1μL,0.1mM)。将细胞加入到白色不透明底96-孔板(Costar 3917)中，在37℃/5％CO₂温育过夜。

系列稀释化合物，加入到96-孔板中(2μL,10mM,3-倍稀释,100％DMSO)。向化合物板中加入培养基(98μL)/4％FBS，终浓度为200μM,2％DMSO。通过向培养基(490μL)/4％FBS中添加参比抑制剂(10μL)，制备200μM,2％DMSO(最终20μM,最终0.2％)的对照化合物板(MIN)。将MIN参比抑制剂(50μL)加入对照板栏1A-1H。通过向培养基(10μL)/4％FBS中添加DMSO(10μL)制备2％DMSO(0.2％终浓度)的MAX板。将最大(50μL)加至对照板栏12A-12H中。用10μL/孔的系列稀释的实施例1处理细胞。将细胞板在37℃/5％CO₂温育。4小时温育后读取CREBBP/EP300板，过夜温育后读取BRD4板。为了展板用于读取，使用前使全部试剂达到RT。用Opti-MEM(无酚红，无血清)将NanoBRET Nano-Glo底物的5mM储备溶液稀释至50μM。加入Nano-Glo底物(25μL/孔，50μM)。将板振摇1分钟用于混合，在10分钟内，用Envision平板读出器按照下列设置读取：反射镜：发光；发射滤光片：E600LP；二次发射过滤器：D460/50；测量高度(mm)：6.5；测量时间(s)：0.2秒。

表1

数据表示为平均值±标准偏差

如表1中所示，所述数据证实，实施例1和实施例2的化合物在体外有效地抑制CREBBP和EP300。此外，表1显示，实施例1和实施例2的化合物表现出对CREBBP/EP300的选择性超过对BRD4溴结构域的选择性。

22Rv1中的细胞增殖测定

下列细胞增殖测定的目的在于检测实施例2化合物及其组合是否对细胞增殖具有影响。

将22Rv1(购自ATCC CRL-2505)细胞以1,000个细胞/孔的密度接种在澄清底384-孔细胞培养板中的RMPI 10％FBS(20μL体积)中。将板在37℃和5％CO₂中温育。第二天给予细胞实施例2化合物和实施例2化合物与下表所见已知抗癌治疗剂的组合。Echo555acoustic调配器用于制备实施例2的合物及其组合的60μM-0.003μM浓度范围的系列稀释液(1:3)。然后通过向细胞板中添加来自系列稀释板的5μL对细胞给药，产生最终DMSO浓度0.2％，其中实施例2化合物及其组合的终浓度剂量范围在20μM-0.001μM。

包含0.2％DMSO的培养基用于最大点，且包含0.2％DMSO的生长培养基中的2μM星形孢菌素用于最小点。在给予实施例2化合物及其组合后，将细胞板在37℃和5％CO₂下温育。添加测试化合物后7天，从温育箱中取出板，并且向每个孔中添加冷EtOH(96％,65μL)。30分钟后，去除培养基，并且向每个孔中添加RNase(20μL,50μg/mL)(Sigma)和1:1000碘化丙啶在PBS中的稀释液。将板密封，并且在室温温育1小时，避光。然后用ACUMEN EXPLORER^TM[TTP LABTECH LTD制造的激光-扫描荧光微量滴定板细胞计数器]对板进行扫描。通过估计的细胞数量、根据面积参数计算(总细胞群的总面积比)、FL-3(PI)峰强度的指定范围和周长定义的单细胞群的平均面积评估22Rv1细胞的数量。然后通过NGR筛选工具处理数据。使用4-参数非线性逻辑方程分析数据(4-参数逻辑浓度-响应曲线)：Y＝bot+[(top-bot)/1+(x/IC₅₀)斜率]，其中Y＝％抑制，X＝得到y％抑制的浓度，“bot”＝通过曲线获得的y的最小值，“top”＝通过曲线获得的y的最大值，且“斜率”＝IC₅₀时的曲线陡度，％Inh＝[(中位Max-x/中位Max–中位Min)]·100。

实施例2化合物及其组合在不同浓度下在22Rv1前列腺癌细胞中的％抑制示例在如下表2和3中。

表2

表3

本测定结果证实了实施例2化合物和实施例2化合物与抗癌治疗剂达洛鲁胺、安扎鲁胺、阿贝西利和阿培利司的组合在22Rv1(ARFL/ARV7；PIK3CAmut)前列腺癌细胞中的抗增殖活性。正如在表2中观察到的，细胞增殖被实施例2化合物抑制。另外，细胞增殖被实施例2化合物与表2中所述的抗癌治疗剂的组合抑制。类似地，正如在表3中观察到的，细胞增殖被实施例2化合物抑制。另外，细胞增殖被实施例2化合物与表3中所述的抗癌治疗剂的组合抑制。

细胞生长抑制测定

将肿瘤细胞系在96-孔黑色壁聚-D-赖氨酸平板(Corning#354640)上铺板，并且在37℃、5％CO₂温育18-24小时。将化合物以在DMSO中按1:3稀释加入，并且将细胞在37℃、5％CO₂温育7天。对于贴壁细胞系，固定细胞并且用碘化丙啶染色，且用Acumen(通道3设置)扫描。对于混悬细胞系，使用Cell Titer-Glo试剂监测细胞生长。

表4

表4示例了实施例1和实施例2的化合物对癌细胞系的生长抑制。

平台试验

本试验的目的在于评估体外靶结合和选择性(https://www.discoverx.com/services/drug-discovery-development-services/epigenetic-profiling/bromoscan-epigenetic-profiling/bromokdelect)。试验测量是通过使用检测与溴结构域结合的DNA的定量PCR技术、基于测试和对照样品中捕获的溴结构域。结合溴结构域活性位点的化合物阻止其与固定化配体结合，并将减少在固体支持物上捕获的溴结构域的量。然而，不结合溴结构域的分子对固体支持物上捕获的蛋白质量没有影响。因此，通过使用qPCR测量在试验样品v对照样品中捕获的溴结构域的量来监测化合物的活性。测量作为测试化合物浓度的函数的固体支持物上捕获的溴结构域的量，计算测试化合物-溴结构域相互作用的结合亲和力。

在11点剂量响应研究中确定实施例1和2的化合物对CREBBP、EP300和BRD4(溴结构域1(BD1)和溴结构域2(BD2))的结合亲和力(参见表5)。将数据表示为重复实验的平均值。

表5

如表5所示，实施例1的化合物对EP300展示出0.16nM的结合亲和力，并且对CREBBP展示出1.1nM的结合亲和力。此外，如表5所示，实施例1的化合物的结合亲和力对于CREBBP/EP300的选择性超过对BRD4溴结构域。还如表5所示，实施例2的化合物对EP300展示出0.095nM的结合亲和力，并且对CREBBP展示出0.325nM的结合亲和力。此外，如表5所示，实施例2的化合物的结合亲和力对CREBBP/EP300的选择性超过对BRD4溴结构域。

Claims

1.下式的化合物：

其中R¹为–CH₃或–CH₂CH₃；

或其药学上可接受的盐。

2.权利要求1的化合物，其中R¹为–CH₃；或其药学上可接受的盐。

3.权利要求1的化合物，其中R¹为–CH₂CH₃；或其药学上可接受的盐。

4.权利要求2的化合物，其为：

5.权利要求3的化合物，其为：

6.权利要求1-5任一项的化合物或盐，其中该化合物和/或盐为晶体。

7.治疗患者的癌症的方法，包括对有这类治疗需求的患者施用有效量的权利要求1-6任一项的化合物或其药学上可接受的盐。

8.权利要求7的方法，其中所述癌症为鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食道癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

9.权利要求8的方法，其中鳞状细胞癌选自肛门癌、膀胱癌、宫颈癌、头颈癌、肺癌和口咽癌。

10.权利要求1-6任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗癌症。

11.权利要求10的用途，其中所述癌症选自鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食管癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

12.权利要求11的用途，其中鳞状细胞癌选自肛门癌、膀胱癌、宫颈癌、头颈癌、肺癌和口咽盐。

13.权利要求1-6任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

14.权利要求13的用途，其中所述癌症选自鳞状细胞癌、膀胱泌尿道上皮癌、乳腺癌、结肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡型淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、上泌尿道上皮癌、子宫内膜癌、子宫内膜样癌、SCLC、前列腺癌、淋巴瘤、食管癌、肺癌、膀胱癌、鳞状组织学、子宫内膜样、HPV驱动的癌症、AML-ETO易位相关病症、雄激素受体阳性相关病症、myc过表达相关病症、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、人乳头瘤病毒驱动的癌症和前列腺癌。

15.权利要求14的用途，其中鳞状细胞癌选自肛门癌、膀胱癌、宫颈癌、头颈癌、肺癌和口咽盐。

16.药物组合物，包含权利要求1-6任一项的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。