ES2963428T3 - Compuestos y métodos para reducir la expresión de Tau - Google Patents

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Abstract

Se proporcionan compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas para reducir la cantidad o actividad de ARNm de Tau en una célula o animal y, en ciertos casos, reducir la cantidad de proteína Tau en una célula o animal. Dichos compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas son útiles para mejorar al menos un síntoma de una enfermedad neurodegenerativa. Dichos síntomas incluyen pérdida de memoria, pérdida de la función motora y aumento en el número y/o volumen de las inclusiones neurofibrilares. Dichas enfermedades neurodegenerativas incluyen tauopatías, enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal (DFT), FTDP-17, parálisis supranuclear progresiva (PSP), encefalopatía traumática crónica (CTE), degeneración ganglionar corticobasal (CBD), epilepsia y síndrome de Dravet. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos y métodos para reducir la expresión de Tau
Campo
Se proporcionan compuestos, incluyendo para usar en métodos, y composiciones farmacéuticas para reducir la cantidad o actividad de ARNm de Tau en una célula o animal, y en determinados casos reducir la cantidad de proteína Tau en una célula o animal. Tales compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas son útiles para mejorar al menos un síntoma de una enfermedad neurodegenerativa. Tales síntomas incluyen pérdida de memoria, pérdida de la función motora y aumento en el número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares. Tales enfermedades neurodegenerativas incluyen tauopatías, enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal (FTD), FTDP-17, parálisis supranuclear progresiva (PSP), encefalopatía traumática crónica (CTE), degeneración ganglionar corticobasal (CBD), epilepsia y síndrome de Dravet.
Antecedentes
La función principal de Tau es unirse a microtúbulos y estabilizarlos, los cuales son componentes estructurales importantes del citoesqueleto implicado en la mitosis, citoquinesis y transporte vesicular. Tau se encuentra en múltiples tejidos, pero es particularmente abundante en axones de neuronas. En los seres humanos, hay seis isoformas de Tau que se generan por corte y empalme alternativo de los exones 2, 3 y 10. El corte y empalme de los exones 2 y 3 en el extremo N de la proteína conduce a la inclusión de cero, uno o dos dominios ácidos de 29 aminoácidos y se denomina Tau 0N, 1N o 2N respectivamente. La influencia de estos dominios en la función de Tau no está completamente clara, aunque puede desempeñar un papel en las interacciones con la membrana plasmática. La inclusión del exón 10 en el extremo C conduce a la inclusión del dominio de unión a microtúbulos codificado por el exón 10. Dado que hay 3 dominios de unión a microtúbulos en otra parte de Tau, esta isoforma de Tau (con el exón 10 incluido) se denomina Tau 4R, donde "R" se refiere al número de repeticiones de dominios de unión a microtúbulos. Tau sin el exón 10 se denomina Tau 3R. Dado que más dominios de unión a microtúbulos (4R en comparación con 3R) aumentan la unión a los microtúbulos, Tau 4R es de suponer que aumenta significativamente la unión y el ensamblaje de los microtúbulos. La relación de Tau 3R/4R está regulada por el desarrollo, expresando los tejidos fetales exclusivamente Tau 3R y expresando los tejidos humanos adultos niveles aproximadamente iguales de Tau 3R/4R. Las desviaciones de la relación normal de Tau 3R/4R son características de las tauopatías FTD neurodegenerativas. No se conoce cómo afectará a las patogénesis de Tau el cambio de la relación de Tau 3R/4R en una etapa posterior en el animal adulto.
La fosforilación dirigida de serina-treonina regula la capacidad de unión a microtúbulos de Tau. La hiperfosforilación promueve el desprendimiento de Tau de los microtúbulos. Se han descrito otras modificaciones postraduccionales de Tau; sin embargo, la importancia de estas no está clara. La fosforilación de Tau también está regulada por el desarrollo con una fosforilación más alta en los tejidos fetales y una fosforilación mucho más baja en el adulto. Una característica de los trastornos neurodegenerativos es una fosforilación de Tau aumentada de manera anómala. La red de microtúbulos está implicada en muchos procesos importantes dentro de la célula que incluyen la integridad estructural necesaria para mantener la morfología de las células y operar la maquinaria de transporte. Dado que la unión de Tau a microtúbulos estabiliza los microtúbulos, es probable que Tau sea un mediador clave de algunos de estos procesos y la alteración de Tau normal en enfermedades neurodegenerativas puede alterar algunos de estos procesos celulares clave. Uno de los indicadores tempranos de que Tau puede ser importante en síndromes neurodegenerativos fue el reconocimiento de que Tau es un componente clave de las inclusiones neurofibrilares en la enfermedad de Alzheimer. De hecho, las inclusiones neurofibrilares son agregados de proteína Tau hiperfosforilada. Junto con las placas que contienen beta amiloide, las inclusiones neurofibrilares son un sello distintivo de la enfermedad de Alzheimer y se correlacionan significativamente con el deterioro cognitivo. El 95% de las acumulaciones de Tau en la AD se encuentran en procesos neuronales y se denomina distrofia neurítica. No se entiende(n) bien el(los) proceso(s) mediante el(los) cual(es) esta proteína asociada con microtúbulos se desprende de los microtúbulos y forma acumulaciones de proteínas, y cómo se relaciona esto con la toxicidad neuronal.
Las inclusiones neuronales de Tau son una característica patológica no sólo de la enfermedad de Alzheimer, sino también de un subconjunto de demencia frontotemporal (FTD), PSP y CBD. El vínculo entre Tau y la neurodegeneración se solidificó con el descubrimiento de que las mutaciones en el gen Tau causan un subconjunto de FTD. Estos datos genéticos también han destacado la importancia de la relación de Tau 3R:4R. Muchas de las mutaciones de Tau que causan FTD conducen a un cambio en el corte y empalme de Tau que conduce a la inclusión preferencial del exón 10 y, por lo tanto, a un aumento de Tau 4R. Los niveles generales de Tau son normales. Se desconoce si el cambio de isoforma de Tau o el cambio de aminoácidos o ambos causan la neurodegeneración. Los datos recientes sugieren que la PSP también puede estar asociada a un aumento de la relación de Tau 4R:3R.
Para ayudar a entender la influencia de las relaciones de Tau en la neurodegeneración, se ha generado un modelo de ratón basado en una de las mutaciones de corte y empalme de Tau (N279K), usando un minigén que incluye el promotor de Tau y las secuencias intrónicas flanqueadoras del exón 10. Como en los seres humanos, estos ratones demuestran mayores niveles de Tau 4R en comparación con los transgénicos que expresan Tau WT y desarrollan anomalías motoras y del comportamiento, así como acumulaciones de Tau agregada en el cerebro y médula espinal.
La proteína Tau se ha asociado con múltiples enfermedades del cerebro, incluida la enfermedad de Alzheimer, FTD, PSP, CBD, demencia pugilística, parkinsonismo ligado al cromosoma, enfermedad de Lytico-Bodig, demencia con predominio de ovillos, ganglioglioma, gangliocitoma, meningioangiomatosis, panencefalitis esclerosante subaguda, encefalopatía por plomo, esclerosis tuberosa, enfermedad de Hallervorden-Spatz, enfermedad de Pick, enfermedad de granos argirófilos, degeneración corticobasal o degeneración del lóbulo frontotemporal y otras. Los trastornos asociados con Tau, tales como la AD, son la causa más común de demencia en los ancianos. La AD afecta a aproximadamente 15 millones de personas en todo el mundo y al 40% de la población mayor de 85 años. La A<d>se caracteriza por dos características distintivas patológicas: inclusiones neurofibrilares de Tau (NFT) y placas p-amiloides (Ap).
Actualmente hay una falta de opciones aceptables para el tratamiento de dichas enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, un objeto del presente documento es proporcionar oligonucleótidos modificados, sales, compuestos y composiciones farmacéuticas para usar en el tratamiento de dichas enfermedades.
Compendio de la invención
La presente invención proporciona un oligonucleótido modificado de acuerdo con la siguiente fórmula:
o una de sus sales.
La invención también proporciona un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado es un gapmer que consiste en un segmento de ala 5', un segmento de espacio central, y un segmento de ala 3', en donde:
el segmento de ala 5' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos,
el segmento de espacio central consiste en ocho 2'-desoxinucleósidos, y
el segmento de ala 3' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos;
en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobases 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3' (SEQ ID NO: 8), en donde cada citosina es una 5-metilcitosina; y en donde los enlaces internucleosídicos del oligonucleótido modificado son, de 5' a 3', sossssssssssssoss, en donde cada s es un enlace fosforotioato y cada o es un enlace fosfodiéster.
La invención también proporciona un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado es un gapmer que consiste en un segmento de ala 5', un segmento de espacio central, y un segmento de ala 3', en donde:
el segmento de ala 5' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos,
el segmento de espacio central consiste en ocho 2'-desoxinucleósidos, y
el segmento de ala 3' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos;
en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobases 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3' (SEQ ID NO: 8), en donde cada citosina es una 5-metilcitosina; y en donde los enlaces internucleosídicos del oligonucleótido modificado son, de 5' a 3', sossssssssssssoss, en donde cada s es un enlace fosforotioato y cada o es un enlace fosfodiéster.
La invención también proporciona un oligonucleótido modificado o sal del mismo, un compuesto, o una composición farmacéutica, como se define en las reivindicaciones adjuntas, para uso en terapia, incluyendo para uso en el tratamiento de una enfermedad asociada con tau, por ejemplo, una enfermedad neurodegenerativa, que incluye una tauopatía, enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal (FTD), FTDP-17, parálisis supranuclear progresiva (PSP), encefalopatía traumática crónica (CTE), degeneración ganglionar corticobasal (CBD), epilepsia o síndrome de Dravet.
Se definen realizaciones adicionales de la invención en las reivindicaciones adjuntas. Por lo tanto, en el presente documento se proporcionan compuestos y uso en métodos para reducir la cantidad o actividad de ARNm de Tau, y en determinadas realizaciones reducir la cantidad de proteína Tau en una célula o animal. En determinadas realizaciones, el animal tiene una enfermedad neurodegenerativa. En determinadas realizaciones, el animal tiene una tauopatía, enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal (FTD), FTDP-17, parálisis supranuclear progresiva (PSP), encefalopatía traumática crónica (CTE), degeneración ganglionar corticobasal (CBD), epilepsia o síndrome de Dravet. En determinadas realizaciones, los compuestos útiles para reducir la expresión de ARNm de Tau son compuestos oligoméricos. En determinadas realizaciones, el compuesto N.° 814907 es útil para reducir la expresión del ARNm de Tau y/o proteína Tau.
También se describen en el presente documento métodos útiles para prevenir o mejorar al menos un síntoma de una enfermedad neurodegenerativa. En determinados casos, dichos síntomas son pérdida de memoria, pérdida de función motora y aumento en el número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares. En determinados casos, la prevención o mejora da como resultado el mantenimiento o mejora de la memoria, mantenimiento o mejora de la función motora, y/o mantenimiento o reducción del número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares. En determinados casos, dicha prevención o mejora de síntomas es la disminución en la velocidad de progresión o el retraso en el inicio de tales síntomas.
Descripción detallada de la invención
Debe entenderse que tanto la descripción general que antecede como la siguiente descripción detallada son solo ilustrativas y explicativas y no son restrictivas. En el presente documento, el uso del singular incluye el plural, a menos que se indique específicamente lo contrario. Como se utiliza en el presente documento, el uso de "o" significa "y/o", salvo que se indique lo contrario. Además, el uso del término "que incluye", así como otras formas como "incluye" e "incluido" no es limitante. Asimismo, términos tales como "elemento" o "componente" comprenden tanto elementos como componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, a menos que se indique específicamente lo contrario.
Los encabezados de sección usados en el presente documento sirven solo para propósitos organizativos y no se deben interpretar como limitantes del objeto descrito.
Definiciones
A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con la química analítica, química orgánica sintética y química médica y farmacéutica descritas en el presente documento, así como sus procedimientos y técnicas, es la que se conoce y utiliza comúnmente en la técnica.
A menos que se indique lo contrario, las siguientes expresiones tienen los siguientes significados:
Definiciones
Como se usa en el presente documento, “2'-desoxinucleósido” significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar 2'-H(H)-furanosilo, como se encuentra en los ácidos desoxirribonucleósidos de origen natural (ADN). En determinadas realizaciones, un 2'-desoxinucleósido puede comprender una nucleobase modificada o puede comprender una nucleobase de ARN (uracilo).
Como se usa en el presente documento, "nucleósido 2'-sustituido" significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar 2'-sustituido. Como se usa en el presente documento, “2'-sustituido” en referencia a un resto de azúcar significa un resto de azúcar que comprende al menos un grupo sustituyente en 2' distinto de H u OH.
Como se usa en el presente documento, “administrar” significa proporcionar un agente farmacéutico a un animal.
Como se usa en el presente documento, "animal" significa un animal humano o no humano.
Como se usa en el presente documento, “actividad antisentido” significa cualquier cambio detectable y/o medible que se pueda atribuir a la hibridación de un compuesto antisentido con su ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la actividad antisentido es una disminución en la cantidad o expresión de un ácido nucleico diana o proteína codificada por dicho ácido nucleico diana en comparación con los niveles de ácido nucleico diana o niveles de proteína diana en ausencia del compuesto antisentido.
Como se usa en el presente documento, "compuesto antisentido" significa un compuesto oligomérico o dúplex oligomérico capaz de lograr al menos una actividad antisentido.
Como se usa en el presente documento, “mejorar” en referencia a un tratamiento significa mejorar en al menos un síntoma con respecto al mismo síntoma en ausencia del tratamiento. En determinadas realizaciones, la mejora es la reducción de la gravedad o frecuencia de un síntoma o el inicio retardado o la ralentización de la progresión en la gravedad o frecuencia de un síntoma. En determinadas realizaciones, el síntoma es pérdida de memoria, pérdida de función motora o aumento en el número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares. En determinadas realizaciones, la mejora de estos síntomas da como resultado el mantenimiento o mejora de la memoria, mantenimiento o mejora de la función motora, y/o mantenimiento o reducción del número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares.
Como se usa en el presente documento, “al menos un síntoma de una enfermedad neurodegenerativa” incluye pérdida de memoria, pérdida de función motora o aumento en el número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares.
Como se usa en el presente documento, "nucleósido bicíclico" o "BNA" significa un nucleósido que comprende un resto de azúcar bicíclico. Como se usa en el presente documento, “azúcar bicíclico” o “resto de azúcar bicíclico” significa un resto de azúcar modificado que comprende dos anillos, en donde el segundo anillo se forma a través de un puente que conecta dos de los átomos en el primer anillo formando así una estructura bicíclica. En determinadas realizaciones, el primer anillo del resto de azúcar bicíclico es un resto furanosilo. En determinadas realizaciones, el resto de azúcar bicíclico no comprende un resto furanosilo.
Como se usa en el presente documento, “población quiralmente enriquecida” significa una pluralidad de moléculas de fórmula molecular idéntica, en donde el número o porcentaje de moléculas dentro de la población que contienen una configuración estereoquímica particular en un centro quiral particular es mayor que el número o porcentaje de moléculas que se espera que contengan la misma configuración estereoquímica particular en el mismo centro quiral particular dentro de la población si el centro quiral particular fuera centro estereoaleatorio. Las poblaciones de moléculas quiralmente enriquecidas que tienen múltiples centros quirales dentro de cada molécula pueden contener uno o más centros quirales estereoaleatorios. En determinadas realizaciones, las moléculas son oligonucleótidos modificados. En determinadas realizaciones, las moléculas son compuestos que comprenden oligonucleótidos modificados.
Como se usa en el presente documento, "resto escindible" significa un enlace o grupo de átomos que se escinde en condiciones fisiológicas, por ejemplo, dentro de una célula, un animal o un ser humano.
Como se usa en el presente documento, "complementario" en referencia a un oligonucleótido significa que al menos 70% de las nucleobases del oligonucleótido o una o más regiones del mismo y las nucleobases de otro ácido nucleico o una o más regiones del mismo son capaces de formar enlaces de hidrógeno entre sí cuando la secuencia de nucleobases del oligonucleótido y el otro ácido nucleico están alineadas en direcciones opuestas. Nucleobases complementarias significa nucleobases que son capaces de formar enlaces de hidrógeno entre sí. Los pares de nucleobases complementarios incluyen adenina (A) y timina (T), adenina (A) y uracilo (U), citosina (C) y guanina (G), 5-metilcitosina (mC) y guanina (G). Los oligonucleótidos y/o ácidos nucleicos complementarios no necesitan tener complementariedad de nucleobases en cada nucleósido. En cambio, se acepta algunos apareamientos erróneos. Como se usa en el presente documento, "totalmente complementario" o "100% complementario" en referencia a oligonucleótidos significa que los oligonucleótidos son complementarios de otro oligonucleótido o ácido nucleico en cada nucleósido del oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, "grupo conjugado" significa un grupo de átomos que se une directa o indirectamente a un oligonucleótido. Los grupos conjugados incluyen un resto del conjugado y un enlazador de conjugado que une el resto de conjugado al oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, “enlazador de conjugado” significa un grupo de átomos que comprende al menos un enlace que conecta un resto de conjugado con un oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, "resto de conjugado" significa un grupo de átomos que se une a un oligonucleótido a través de un enlazador de conjugado.
Como se usa en el presente documento, "contiguo" en el contexto de un oligonucleótido se refiere a nucleósidos, nucleobases, restos de azúcar o enlaces internucleosídicos que están inmediatamente adyacentes entre sí. Por ejemplo, "nucleobases contiguas" significa nucleobases que están inmediatamente adyacentes entre sí en una secuencia.
Como se usa en el presente documento, "gapmer" significa un oligonucleótido modificado que comprende una región interna que tiene una pluralidad de nucleósidos que soportan la escisión por RNasa H situados entre regiones externas que tienen uno o más nucleósidos, en donde los nucleósidos que comprenden la región interna son químicamente distintos del nucleósido o nucleósidos que comprenden las regiones externas. La región interna puede denominarse “espacio” y las regiones externas pueden denominarse “alas”. A menos que se indique lo contrario, "gapmer" se refiere a un motivo de azúcares. A menos que se indique lo contrario, los motivos de azúcares de los nucleósidos del espacio de un gapmer son 2'-desoxifuranosilo no modificado. Por lo tanto, la expresión "gapmer MOE" indica un gapmer que tiene un motivo de azúcares de 2'-MOE-nucleósidos en ambas alas y un espacio de 2'-desoxinucleósidos. A menos que se indique lo contrario, un gapmer MOE puede comprender uno o más enlaces internucleosídicos modificados y/o nucleobases modificadas y tales modificaciones no siguen necesariamente el patrón del gapmer de las modificaciones de azúcares.
Como se usa en el presente documento, "hibridación" significa el apareamiento o reasociación de oligonucleótidos y/o ácidos nucleicos complementarios. Sin limitarse a ningún mecanismo en particular, el mecanismo más común de hibridación implica enlaces de hidrógeno, que pueden ser enlaces de hidrógeno de Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen inverso, entre nucleobases complementarias.
Como se usa en el presente documento, "enlace internucleosídico" es el enlace covalente entre nucleósidos adyacentes en un oligonucleótido. Como se usa en el presente documento, "enlace internucleosídico modificado" significa cualquier enlace internucleosídico distinto de un enlace internucleosídico fosfodiéster. "Enlace fosforotioato" es un enlace internucleosídico modificado en el que uno de los átomos de oxígeno que no son puente de un enlace internucleosídico fosfodiéster se sustituye por un átomo de azufre.
Como se usa en el presente documento, “nucleósido enlazador” significa un nucleósido que une, ya sea directa o indirectamente, un oligonucleótido a un resto de conjugado. Los nucleósidos enlazadores se encuentran dentro del enlazador del conjugado de un compuesto oligomérico. Los nucleósidos enlazadores no se consideran parte de la porción de oligonucleótido de un compuesto oligomérico incluso si son contiguos con el oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, “resto de azúcar modificado no bicíclico” significa un resto de azúcar modificado que comprende una modificación, tal como un sustituyente, que no forma un puente entre dos átomos del azúcar para formar un segundo anillo.
Como se usa en el presente documento, “apareamiento erróneo” o “no complementaria” significa una nucleobase de un primer oligonucleótido que no es complementaria con la nucleobase correspondiente de un segundo oligonucleótido o ácido nucleico diana cuando el primer y segundo compuestos oligoméricos están alineados.
Como se usa en el presente documento, "MOE" significa metoxietilo. "2'-MOE" significa un grupo -OCH2CH2OCH3 en la posición 2' de un anillo de furanosilo.
Como se usa en el presente documento, "motivo" significa el patrón de restos de azúcar, nucleobases y/o uniones internucleosídico no modificados y/o modificados, en un oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, “ARNm” significa un transcrito de ARN que codifica una proteína e incluye pre-ARNm y ARNm maduro a menos que se especifique lo contrario.
Como se usa en el presente documento, "nucleobase" significa una nucleobase no modificada o una nucleobase modificada. Como se usa en el presente documento, "nucleobase no modificada" es adenina (A), timina (T), citosina (C), uracilo (U) y guanina (G). Como se usa en el presente documento, una "nucleobase modificada" es un grupo de átomos distintos de A, T, C, U o G no modificados capaces de aparearse con al menos una nucleobase no modificada. Una "5-metilcitosina" es una nucleobase modificada. Una base universal es una nucleobase modificada que puede aparearse con una cualquiera de las cinco nucleobases no modificadas. Como se usa en el presente documento, "secuencia de nucleobases" significa el orden de nucleobases contiguas en un ácido nucleico u oligonucleótido independiente de cualquier modificación de azúcar o enlace internucleosídico.
Como se usa en el presente documento, “nucleósido” significa un compuesto que comprende una nucleobase y un resto de azúcar. La nucleobase y el resto de azúcar están cada uno, independientemente, no modificado o modificado. Como se usa en el presente documento, "nucleósido modificado" significa un nucleósido que comprende una nucleobase modificada y/o un resto de azúcar modificado. Los nucleósidos modificados incluyen nucleósidos abásicos, que carecen de una nucleobase. Los “nucleósidos unidos” son nucleósidos que están conectados en una secuencia continua (es decir, no se presentan nucleósidos adicionales entre los que están unidos).
Como se usa en el presente documento, "compuesto oligomérico" significa un oligonucleótido y opcionalmente una o más características adicionales, tales como un grupo conjugado o grupo terminal. Un compuesto oligomérico se puede aparear con un segundo compuesto oligomérico que es complementario del primer compuesto oligomérico o puede no estar apareado. Un "compuesto oligomérico monocatenario" es un compuesto oligomérico no apareado. La expresión "dúplex oligomérico" significa un dúplex formado por dos compuestos oligoméricos que tienen secuencias de nucleobases complementarias. Cada compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico puede denominarse un "compuesto oligomérico de dúplex".
Como se usa en el presente documento, "oligonucleótido" significa una cadena de nucleósidos unidos conectados mediante enlaces internucleosídicos, en donde cada nucleósido y enlace internucleosídico puede estar modificado o no modificado. A menos que se indique lo contrario, los oligonucleótidos consisten en 8-50 nucleósidos unidos. Como se usa en el presente documento, "oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido, en donde al menos un nucleósido o enlace internucleosídico está modificado. Como se usa en el presente documento, “oligonucleótido no modificado” significa un oligonucleótido que no comprende ninguna modificación de nucleósidos o modificaciones internucleosídicas.
Como se usa en el presente documento, “vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable” significa cualquier sustancia adecuada para uso en la administración a un animal. Algunos de dichos vehículos permiten que las composiciones farmacéuticas se formulen como, por ejemplo, comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, pastas, suspensiones y pastillas para la ingestión oral por un sujeto. En determinadas realizaciones, un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable es agua estéril; solución salina estéril; o solución tampón estéril.
Como se usa en el presente documento, “sales farmacéuticamente aceptables” significa sales de compuestos fisiológica y farmacéuticamente aceptables, tales como compuestos oligoméricos, es decir, sales que retienen la actividad biológica deseada del compuesto original y no imparten efectos toxicológicos no deseados al mismo.
Como se usa en el presente documento, "composición farmacéutica" significa una mezcla de sustancias adecuadas para administrar a un sujeto. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender un compuesto antisentido y una solución acuosa estéril. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica muestra actividad en el ensayo de captación libre en determinadas líneas celulares.
Como se usa en el presente documento, "resto de fósforo" significa un grupo de átomos que comprende un átomo de fósforo. En determinadas realizaciones, un resto de fósforo comprende un mono, di, o trifosfato, o fosforotioato.
Como se usa en el presente documento, “profármaco” significa un agente terapéutico en una forma fuera del cuerpo que se convierte en una forma diferente dentro de un animal o células del mismo. Típicamente, la conversión de un profármaco dentro del animal es facilitada por la acción de una enzima (p. ej., enzima endógena o viral) o productos químicos presentes en células o tejidos y/o por condiciones fisiológicas.
Como se usa en el presente documento, "reducir o inhibir la cantidad o actividad" se refiere a una reducción o bloqueo de la expresión o actividad transcripcional con respecto a la expresión o actividad transcripcional en una muestra no tratada o de control y no indica necesariamente una eliminación total de la expresión o actividad transcripcional.
Como se usa en el presente documento, "compuesto de ARNi" significa un compuesto antisentido que actúa, al menos en parte, a través de RISC o Ago2 para modular un ácido nucleico diana y/o proteína codificada por un ácido nucleico diana. Los compuestos de ARNi incluyen, pero no se limitan a, ARNip bicatenario, ARN monocatenario (ARNmc) y microARN, incluyendo miméticos de microARN. En determinadas realizaciones, un compuesto de ARNi modula la cantidad, actividad y/o corte y empalme de un ácido nucleico diana. La expresión compuesto de ARNi excluye compuestos antisentido que actúan a través de RNasa H.
Como se usa en el presente documento, "autocomplementario" en referencia a un oligonucleótido significa un oligonucleótido que se hibrida al menos parcialmente consigo mismo.
Como se usa en el presente documento, "ensayo de células estándar" significa el ensayo descrito en el Ejemplo 1 y variaciones razonables del mismo.
Como se usa en el presente documento, "centro quiral estereoaleatorio" en el contexto de una población de moléculas de fórmula molecular idéntica significa un centro quiral que tiene una configuración estereoquímica aleatoria. Por ejemplo, en una población de moléculas que comprenden un centro quiral estereoaleatorio, el número de moléculas que tienen la configuración (S) del centro quiral estereoaleatorio puede ser, pero no es necesariamente el mismo que el número de moléculas que tienen la configuración(R)del centro quiral estereoaleatorio. La configuración estereoquímica de un centro quiral se considera aleatoria cuando es el resultado de un método sintético que no está diseñado para controlar la configuración estereoquímica. En determinadas realizaciones, un centro quiral estereoaleatorio es un enlace internucleosídico fosforotioato estereoaleatorio.
Como se usa en el presente documento, “resto de azúcar” significa un resto de azúcar no modificado o un resto de azúcar modificado. Como se usa en el presente documento, “resto de azúcar no modificado” significa un resto 2'-OH(H)-furanosilo, como se encuentra en el ARN (un "resto de azúcar del ARN no modificado"), o un resto 2'-H(H), como se encuentra en el ADN (un “resto de azúcar del ADN no modificado”). Los restos de azúcar no modificados tienen un hidrógeno en cada una de las posiciones 1', 3' y 4', un oxígeno en la posición 3', y dos hidrógenos en la posición 5'. Como se usa en el presente documento, “resto de azúcar modificado” o "azúcar modificado" significa un resto de azúcar furanosilo modificado o un sustituto de azúcar. Como se usa en el presente documento, resto de azúcar furanosilo modificado significa un azúcar furanosilo que comprende un sustituyente no hidrógeno en lugar de al menos un hidrógeno de un resto de azúcar no modificado. En determinadas realizaciones, un resto de azúcar furanosilo modificado es un resto de azúcar 2'-sustituido. Dichos restos de azúcar furanosilo modificados incluyen azúcares bicíclicos y azúcares no bicíclicos.
Como se usa en el presente documento, "sustituto de azúcar" significa un resto de azúcar modificado que tiene otro resto distinto de furanosilo que puede unir una nucleobase a otro grupo, tal como un enlace internucleosídico, grupo conjugado o grupo terminal en un oligonucleótido. Los nucleósidos modificados que comprenden sustitutos de azúcar se pueden incorporar en una o más posiciones dentro de un oligonucleótido y dichos oligonucleótidos son capaces de hibridarse con compuestos oligoméricos o ácidos nucleicos complementarios.
Como se usa en el presente documento, “ácido nucleico diana” y “ARN diana” significan un ácido nucleico para el que un compuesto antisentido está diseñado para tener un efecto.
Como se usa en el presente documento, “región diana” significa una porción de un ácido nucleico diana para la que un compuesto oligomérico está diseñado para hibridarse.
Como se usa en el presente documento, "grupo terminal" significa un grupo químico o grupo de átomos que está unido covalentemente a un extremo de un oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, “cantidad terapéuticamente eficaz” significa una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un animal. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz mejora un síntoma de una enfermedad.
I. Determinados oligonucleótidos
En determinadas realizaciones, se proporcionan en el presente documento oligonucleótidos, que consisten en nucleósidos unidos. Los oligonucleótidos pueden ser oligonucleótidos no modificados (ARN o ADN) o pueden ser oligonucleótidos modificados. Los oligonucleótidos modificados comprenden al menos una modificación con respecto al ARN o ADN no modificados. Es decir, los oligonucleótidos modificados comprenden al menos un nucleósido modificado (que comprende un resto de azúcar modificado y/o una nucleobase modificada) y/o al menos un enlace internucleosídico modificado.
A. Determinados nucleósidos modificados
Los nucleósidos modificados comprenden un resto de azúcar modificado o una nucleobase modificada o tanto un resto de azúcar modificado como una nucleobase modificada.
1. Determinados restos de azúcar
En determinadas realizaciones, los restos de azúcar modificados son restos de azúcar modificados no bicíclicos. En determinados casos, los restos de azúcar modificados son restos de azúcar bicíclicos o tricíclicos. En determinados casos, los restos de azúcar modificados son sustitutos de azúcar. Dichos sustitutos de azúcar pueden comprender una o más sustituciones que corresponden a aquellas de otros tipos de restos de azúcar modificados.
En determinadas realizaciones, los restos de azúcar modificados son restos de azúcar modificados no bicíclicos que comprenden un anillo de furanosilo con uno o más grupos sustituyentes, ninguno de los cuales forma puente con dos átomos del anillo de furanosilo para formar una estructura bicíclica. Dichos sustituyentes que no forman puente pueden estar en cualquier posición del furanosilo, incluyendo, pero no limitado a, sustituyentes en las posiciones 2', 4' y/o 5'. En determinados casos, uno o más sustituyentes que no forman puente de restos de azúcar modificados no bicíclicos están ramificados. Los ejemplos de grupos 2'-sustituyentes adecuados para restos de azúcar modificados no bicíclicos incluyen, pero no se limitan a: 2'-F, 2 '-OCH ("OMe" u "O-metilo"), y 2'-O(CH<2>)<2>OCH<3>("MOE"). En determinados casos, los grupos 2'-sustituyentes se seleccionan entre: halógeno, alilo, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-alcoxi C1-C10, O-alcoxi C1-C10 sustituido, O-alquilo C1-C10, O-alquilo C1-C10 sustituido, S-alquilo, N(Rm)-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, N(Rm)-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, N(Rm)-alquinilo, O-alquilenil-O-alquilo, alquinilo, alcarilo, aralquilo, O-alcariío, O-aralquilo, O(CH<2>)<2>SCH<3>, O(CH2)2ON(Rm)(Rn) o OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn), donde cada Rm y Rn es, independientemente, H, un grupo protector de amino, o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido, y los grupos 2'-sustituyentes descritos en Cook et al., U.S. 6,531,584; Cook et al., U.S. 5,859,221; y Cook et al., U.S.
6,005,087. Determinados casos de estos 2'-sustituyentes pueden estar además sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro (NO2), tiol, tioalcoxi, tioalquilo, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo. Los ejemplos de grupos 4'-sustituyentes adecuados para restos de azúcar modificados no bicíclicos incluyen, pero no se limitan a, alcoxi (p. ej., metoxi), alquilo, y los descritos en Manoharan et al., documento WO 2015/106128. Los ejemplos de grupos 5'-sustituyentes adecuados para restos de azúcar modificados no bicíclicos incluyen, pero no se limitan a: 5'-metilo (R o S), 5'-vinilo y 5'-metoxi. En determinados casos, los restos de azúcar modificados no bicíclicos comprenden más de un sustituyente de azúcar que no forma puente, por ejemplo, restos de azúcar 2'-F-5'-metilo y los restos de azúcar modificados y nucleósidos modificados descritos en Migawa et al., WO 2008/101157 y Rajeev et al., US2013/0203836).
En determinados casos, un nucleósido modificado no bicíclico 2'-sustituido comprende un resto de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente que no forma puente seleccionado de: F, NH2, N3, OCF3, OCH3, O(CH<2>)<3>NH<2>, CH<2>CH=CH<2>, OCH<2>CH=CH<2>, OCH2CH2OCH3, O(CH<2>)<2>SCH<3>, O(CH<2>)<2>ON(Rm)(Rn), o (c H<2>^O(CH<2>)<2>N(CH<3>)<2>y acetamida N-sustituida (OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn)), donde cada Rm y Rn es, independientemente, H, un grupo protector de amino, o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido.
En determinados casos, un nucleósido 2'-sustituido nucleósido modificado no bicíclico comprende un resto de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente que no forma puente seleccionado de: F, OCF<3>, OCH<3>, OCH2CH2OCH3, O(CH<2>)<2>SCH<3>, O(CH<2>)<2>ON(CH<3>)<2>, O(CH<2>)<2>O(CH<2>)<2>N(CH<3>)<2>y OCH<2>C(=O)-N(H)CH<3>(“NMA”).
En determinados casos, un nucleósido modificado no bicíclico 2'-sustituido comprende un resto de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente que no forma puente seleccionado de: F, OCH3 y OCH2CH2OCH3.
Determinados restos de azúcar modificados comprenden un sustituyente que forma puente con dos átomos del anillo de furanosilo para formar un segundo anillo, dando como resultado una resto de azúcar bicíclico. En determinados casos de estos, el resto de azúcar bicíclico comprende un puente entre los átomos del anillo de furanosa 4' y 2'. Los ejemplos de dichos sustituyentes en el azúcar que forman puente 4' a 2' incluyen, pero no se limitan a: 4-CH<2>-2', 4'-(CH<2>)<2>-2', 4'-(CH<2>)a-2', 4'-CH<2>-O-2' (“LNA”), 4'-CH<2>-S-2', 4'-(CH<2>)<2>-O-2' (“ENA”), 4'-CH(CHa)-O-2' (denominado "etilo restringido" o “cEt”), 4'-CH<2>-O-CH<2>-2', 4'-CH<2>-N(R)-2', 4'-CH(CH<2>OCHa)-O-2' (“MOE restringido” o “cMOE”) y sus análogos (véase, p. ej., Seth et al., U.S. 7,399,845, Bhat et al., U.S.
7,569,686, Swayze et al., U.S. 7,741,457, y Swayze et al., U.S. 8,022,193), 4'-C(CHa)(CHa)-O-2' y sus análogos (véase, p. ej., Seth et al., U.S. 8,278,283), 4'-CH<2>-N(OCHa)-2' y sus análogos (véase, p. ej., Prakash et al., U.S.
8,278,425), 4'-CH<2>-O-N(CHa)-2' (véase, p. ej., Allerson et al., U.S. 7,696,345 y Allerson et al., U.S. 8,124,745), 4'-CH<2>-C(H)(CHa)-2' (véase, p. ej., Zhou, et al.,J. Org. Chem.,2009, 74,118-134), 4'-CH<2>-C(=CH<2>)-2' y sus análogos (véase, p. ej., Seth et al., U.S. 8,278,426), 4'-C(RaRb)-N(R)-O-2', 4'-C(RaRb)-O-N(R)-2', 4'-CH<2>-O-N(R)-2', y 4'-CH<2>-N(R)-O-2', en donde cada R, Ra, y Rb es, independientemente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12 (véase, p. ej. Imanishi et al., U.S. 7,427,672).
En determinados casos, dichos puentes 4' a 2' comprenden independientemente de 1 a 4 grupos unidos seleccionados independientemente de: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-y -N(Ra)-;
en donde:
x es 0, 1 o 2;
n es 1, 2, 3 o 4;
cada Ra y Rb es, independientemente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, radical de heterociclo, radical de heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical C5-C7 alicíclico, radical C5-C7 alicíclico sustituido, halógeno, OJ1 , NJ1J2, SJ1, Na, COOJ1 , acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=O)2-J1) o sulfoxilo (S(=O)-J1); y
cada J1 y J2 es, independientemente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical de heterociclo, un radical de heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.
En la técnica se conocen restos de azúcar bicíclicos adicionales, véase, por ejemplo: Freier et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4429-4443, Albaek et al.,J. Org. Chem.,2006,71,7731-7740, Singh et al.,Chem. Commun.,1998,4,455-456; Koshkin et al.,Tetrahedron,1998,54,3607-3630; Kumar et al.,Bioorg. Med. Chem. Lett.,1998,8, 2219-2222; Singh et al., J.Org. Chem.,1998,63, 10035-10039; Srivastava et al.,J. Am. Chem. Soc.,20017,129, 8362-8379; Wengel et a., U.S. 7,053,207; Imanishi et al., U.S. 6,268,490; Imanishi et al. U.S. 6,770,748; Imanishi et al., U.S. RE44,779; Wengel et al., U.S. 6,794,499; Wengel et al., U.S. 6,670,461; Wengel et al., U.S. 7,034,133; Wengel et al., U.S. 8,080,644; Wengel et al., U.S. 8,034,909; Wengel et al., U.S.
8,153,365; Wengel et al., U.S. 7,572,582; y Ramasamy et al., U.S. 6,525,191;; Torsten et al., WO 2004/106356; Wengel et al., WO 1999/014226; Seth et al., WO 2007/134181; Seth et al., U.S. 7,547,684; Seth et al., U.S.
7,666,854; Seth et al., U.S. 8,088,746; Seth et al., U.S. 7,750,131; Seth et al., U.S. 8,030,467; Seth et al., U.S.
8,268,980; Seth et al., U.S. 8,546,556; Seth et al., U.S. 8,530,640; Migawa et al., U.S. 9,012,421; Seth et al., U.S. 8,501,805; y publicaciones de patentes de EE. UU. N.° Allerson et al., US2008/0039618 y Migawa et al., US2015/0191727.
En determinados casos, los restos de azúcar bicíclicos y nucleósidos que incorporan dichos restos de azúcar bicíclicos se definen además por la configuración isomérica. Por ejemplo, un nucleósido de LNA (descrito en el presente documento) puede tener la configuración a-L o la configuración p-D.
LNA (configuración p-D) a-L-LNA (configuración a-L)
puente = 4'-CH<2>-O-2' puente = 4'-CH<2>-O-2'
Los nucleósidos bicíclicos a-L-metilenoxi (4'-CH<2>-O-2') o a-L-LNA se han incorporado en oligonucleótidos que mostraban actividad antisentido (Frieden et al.,Nucleic Acids Research,2003, 21, 6365-6372). En el presente documento, las descripciones generales de nucleósidos bicíclicos incluyen ambas configuraciones isoméricas.
Cuando las posiciones de nucleósidos bicíclicos específicos (p. ej., LNA o cEt) se identifican en casos ejemplificados en el presente documento, están en la configuración p-D, a menos que se especifique lo contrario.
En determinados casos, los restos de azúcar modificados comprenden uno o más sustituyentes de azúcar que no forman puente y uno o más sustituyentes de azúcar que forman puente (p. ej., azúcares 5'-sustituidos y con puente 4'-2').
En determinados casos, los restos de azúcar modificados son sustitutos de azúcar. En determinados casos de estos, el átomo de oxígeno del resto de azúcar se sustituye, p. ej., por un átomo de azufre, carbono o nitrógeno. En determinados casos de estos, dichos restos de azúcar modificadas también comprenden sustituyentes que forman puente y/o que no forman puente como se describe en el presente documento. Por ejemplo, determinados sustitutos de azúcar comprenden un átomo de azufre en 4' y una sustitución en la posición 2' (véase, p. ej., Bhat et al., U.S. 7,875,733 y Bhat et al., U.S. 7,939,677) y/o en la posición 5'.
En determinados casos, los sustitutos de azúcar comprenden anillos que tienen un número distinto de 5 átomos. Por ejemplo, en determinados casos, un sustituto de azúcar comprende un tetrahidropirano ("THP") de seis miembros. Dichos tetrahidropiranos pueden estar además modificados o sustituidos. Los nucleósidos que comprenden dichos tetrahidropiranos modificados incluyen, pero no se limitan a, ácido nucleico de hexitol (“HNA”), ácido nucleico de anitol (“ANA”), ácido nucleico de manitol (“MNA”) (véase, p. ej., Leumann, CJ.Bioorg. & Med. Chem. 2002,10,841-854), fluoro-HNA:
(“F-HNA”, véase p. ej. Swayze et al., U.S. 8,088,904; Swayze et al., U.S. 8,440,803; Swayze et al., U.S.
8,796,437; y Swayze et al., U.S. 9,005,906; el F-HNA también se puede denominar F-THP o 3'-fluorotetrahidropirano), y los nucleósidos que comprenden compuestos de THP modificados adicionales que tienen la fórmula:
en donde, independientemente, para cada uno de dichos nucleósidos de THP modificados:
Bx es un resto de nucleobase;
T 3 y T<4>son cada uno, independientemente, un grupo de enlace internucleosídico que une el nucleósido de THP modificado al resto de un oligonucleótido o uno de T3 y T4 es un grupo de enlace internucleosídico que une el nucleósido de THP modificado al resto de un oligonucleótido y el otro de T3 y T4 es H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado unido o un grupo terminal 5' o 3';
qi , q2, q<3>, q<4>, q<5>, q<6>y q<7>son cada uno, independientemente, H, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 sustituido; y
cada uno de Ri y R2 se selecciona independientemente entre: hidrógeno, halógeno, alcoxi sustituido o no sustituido, NJ1J2, SJi , N3, OC(=X)Ji , OC(=X)NJi J2, NJ<3>C(=X)NJi J<2>y CN, en donde X es O, S o NJi , y cada uno de J i , J2, y J3 es, independientemente, H o alquilo C1-C6.
En determinados casos, se proporcionan nucleósidos de THP modificados en donde qi , q2, q<3>, q<4>, q<5>, q<6>y q<7>son cada uno H. En determinados casos, al menos uno de qi , q2, q<3>, q<4>, q<5>, q<6>y q<7>es distinto a H. En determinados casos, al menos uno de qi , q2, q<3>, q<4>, q<5>, q<6>y q<7>es metilo. En determinados casos, se proporcionan nucleósidos de THP modificados en donde uno de R1 y R2 es F. En determinados casos, R1 es F y R2 es H, en determinados casos, R1 es metoxi y R2 es H, y en determinados casos, R1 es metoxietoxi y R2 es H.
En determinados casos, los sustitutos de azúcar comprenden anillos que tienen más de 5 átomos y más de un heteroátomo. Por ejemplo, se han descrito nucleósidos que comprenden restos de azúcar morfolino y uso en oligonucleótidos (véase, p. ej., Braasch et al.,Biochemistry,2002, 41, 4503-4510 y Summerton et al., U.S.
5,698,685; Summerton et al., U.S. 5,166,315; Summerton et al., U.S. 5,185,444; y Summerton et al., U.S.
5,034,506). Como se usa en el presente documento, el término "morfolino" significa un sustituto de azúcar que tiene la siguiente estructura:
En determinados casos, los morfolinos pueden estar modificados, por ejemplo, mediante la adición o alteración de diversos grupos sustituyentes de la estructura de morfolino anterior. Dichos sustitutos de azúcar se denominan en el presente documento "morfolinos modificados".
En determinados casos, los sustitutos de azúcar comprenden restos acíclicos. Ejemplos de nucleósidos y oligonucleótidos que comprenden dichos sustitutos de azúcar acíclicos incluyen, pero no se limitan a: ácido nucleico peptídico ("PNA"), ácido butilnucleico acíclico (véase, p. ej., Kumar et al.,Org. Biomol. Chem.,2013, 11, 5853-5865), y nucleósidos y oligonucleótidos descritos en Manoharan et al., WO2011/133876.
En la técnica se conocen muchos otros sistemas de anillos de azúcar y sustituto de azúcar bicíclicos y tricíclicos que pueden utilizarse en nucleósidos modificados).
2. Determinadas nucleobases modificadas
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más nucleósidos que comprenden una nucleobase no modificada. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más nucleósidos que comprenden una nucleobase modificada. En determinados casos, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más nucleósidos que no comprenden una nucleobase, referidos como un nucleósido abásico.
En determinados casos, las nucleobases modificadas se seleccionan de: pirimidinas 5-sustituidas, 6-azapirimidinas, pirimidinas sustituidas con alquilo o alquinilo, purinas sustituidas con alquilo y purinas sustituidas en N-2, N-6 y O-6. En determinados casos, las nucleobases modificadas se seleccionan de: 2-aminopropiladenina, 5-hidroximetilcitosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-N-metilguanina, 6-N-metiladenina, 2-propiladenina, 2-tiouracilo, 2-tiotimina y 2-tiocitosina, 5-propinil (-CEC-CH3) uracilo, 5-propinilcitosina, 6-azouracilo, 6-azocitosina, 6-azotimina, 5-ribosiluracilo (pseudouracilo), 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquil, 8-hidroxil, 8-aza purina y otras 8-sustituidas, 5-halo, particularmente 5-bromo, 5-trifluorometil, 5-halouracil y 5-halocitosina, 7-metilguanina, 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-aminoadenina, 7-desazaguanina, 7-desazaadenina, 3-desazaguanina, 3-desazadenina, 6-N-benzoiladenina, 2-N-isobutirilguanina, 4-N-benzoilcitosina, 4-N-benzoiluracilo, 5-metil-4-N-benzoilcitosina, 5-metil-4-N-benzoiluracilo, bases universales, bases hidrofóbicas, bases promiscuas, bases expandidas en tamaño y bases fluoradas. Otras nucleobases modificadas incluyen pirimidinas tricíclicas, tales como 1,3-diazafenoxazina-2-ona, 1,3-diazafenotiazina-2-ona y 9-(2-aminoetoxi)-1,3-diazafenoxazina-2-ona (pinza G). Las nucleobases modificadas también pueden incluir aquellas en las cuales la base de purina o pirimidina es reemplazada por otros heterociclos, por ejemplo 7-desaza-adenina, 7-desazaguanosina, 2-aminopiridina y 2-piridona. Otras nucleobases incluyen las descritas en Merigan et al., U.S. 3,687,808, las descritas enThe Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; Englisch et al.,Angewandte Chemie,International Edition, 1991, 30, 613; Sanghvi, Y.S., Capítulo 15,Antisense Research and Applications,Crooke, S.T. y Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288; y las descritas en los capítulos 6 y 15,Antisense Drug Technology,Crooke S.T., Ed., CRC Press, 2008, 163-166 y 442-443.
Las publicaciones que enseñan la preparación de algunas de las nucleobases modificadas mencionadas anteriormente así como otras nucleobases modificadas incluyen, sin limitación, Manohara et al., US2003/0158403; Manoharan et al., US2003/0175906; Dinh et al., U.S. 4,845,205; Spielvogel et al., U.S.
5,130,302; Rogers et al., U.S. 5,134,066; Bischofberger et al., U.S. 5,175,273; Urdea et al., U.S. 5,367,066; Benner et al., U.S. 5,432,272; Matteucci et al., U.S. 5,434,257; Gmeiner et al., U.S. 5,457,187; Cook et al., U.S.
5,459,255; Froehler et al., U.S. 5,484,908; Matteucci et al., U.S. 5,502,177; Hawkins et al., U.S. 5,525,711; Haralambidis et al., U.S. 5,552,540; Cook et al., U.S. 5,587,469; Froehler et al., U.S. 5,594,121; Switzer et al., U.S. 5,596,091; Cook et al., U.S. 5,614,617; Froehler et al., U.S. 5,645,985; Cook et al., U.S. 5,681,941; Cook et al., U.S. 5,811,534; Cook et al., U.S. 5,750,692; Cook et al., U.S. 5,948,903; Cook et al., U.S. 5,587,470; Cook et al., U.S. 5,457,191; Matteucci et al., U.S. 5,763,588; Froehler et al., U.S. 5,830,653; Cook et al., U.S.
5,808,027; Cook et al., 6,166,199; y Matteucci et al., U.S. 6,005,096.
3. Determinados enlaces internucleosídicos modificados
Los nucleósidos de oligonucleótidos modificados pueden unirse entre sí usando cualquier enlace internucleosídico. Las dos clases principales de grupos de enlace internucleosídico se definen por la presencia o ausencia de un átomo de fósforo. Los enlaces internucleosídicos que contienen fósforo representativos incluyen, pero no se limitan a fosfatos, que contienen un enlace de fosfodiéster ("P=O") (también denominados enlaces no modificados o naturales), fosfotriésteres, metilfosfonatos, fosforamidatos y fosforotioatos ("P=S") y fosforoditioatos ("HS-P=S"). Los grupos de enlace internucleosídico que no contienen fósforo representativos incluyen, pero no se limitan a, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiéster, tionocarbamato (-O-C(=O)(NH)-S-); siloxano (-O-SiH2-O-); y N,N'-dimetilhidrazina (-CH2-N(CHa)-N(CHa)-). Los enlaces internucleosídicos modificados, en comparación con los enlaces fosfato naturales, se pueden usar para alterar, típicamente aumentar, la resistencia a nucleasa del oligonucleótido. Son bien conocidos para el experto en la técnica los métodos de preparación de enlaces internucleosídicos que contienen fósforo y que no contienen fósforo.
Los enlaces internucleosídicos representativos que tienen un centro quiral incluyen, pero no se limitan a, alquilfosfonatos y fosforotioatos. Los oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces internucleosídicos que tienen un centro quiral se pueden preparar como poblaciones de oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces internucleosídicos estereoaleatorios, o como poblaciones de oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces fosforotioato en configuraciones estereoquímicas particulares. En determinadas realizaciones, las poblaciones de oligonucleótidos modificados comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato en donde todos los enlaces internucleosídicos fosforotioato son estereoaleatorios. Tales oligonucleótidos modificados se pueden generar usando métodos sintéticos que dan como resultado la selección aleatoria de la configuración estereoquímica de cada enlace fosforotioato. Sin embargo, como bien entienden los expertos en la técnica, cada fosforotioato individual de cada molécula de oligonucleótido individual tiene una configuración estereoquímica definida. En determinadas realizaciones, las poblaciones de oligonucleótidos modificados se enriquecen en oligonucleótidos modificados que comprenden uno o más enlaces internucleosídicos fosforotioato particulares en una configuración estereoquímica particular seleccionada independientemente. En determinadas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos 65% de las moléculas en la población. En determinadas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos 70% de las moléculas en la población. En determinadas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos 80% de las moléculas en la población. En determinadas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos 90% de las moléculas en la población. En determinadas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos 99% de las moléculas en la población. Tales poblaciones enriquecidas quiralmente de oligonucleótidos modificados se pueden generar usando métodos sintéticos conocidos en la técnica, p. ej., métodos descritos en Oka et al.,JACS125, 8307 (2003), Wan et al.Nuc. Acid. Res.42, 13456 (2014) y WO 2017/015555. En determinadas realizaciones, una población de oligonucleótidos modificados se enriquece en oligonucleótidos modificados que tienen al menos un fosforotioato indicado en la configuración (Sp). En determinadas realizaciones, una población de oligonucleótidos modificados se enriquece en oligonucleótidos modificados que tienen al menos un fosforotioato en la configuración (Rp). En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados que comprenden fosforotioatos (Rp) y/o (Sp) comprenden una o más de las siguientes fórmulas, respectivamente, en donde “B” indica una nucleobase:
A menos que se indique lo contrario, los enlaces intemudeosídicos quirales de oligonucleótidos modificados descritos en el presente documento pueden ser estereoaleatorios o tener una configuración estereoquímica particular.
Los enlaces internucleosídicos neutros incluyen, sin limitación, fosfotriésteres, metilfosfonatos, MMI (3'-CH2-N(CHa)-O-5'), amida-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), amida-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), formacetal (3'-O-CH2-O-5'), metoxipropilo y tioformacetal (3'-S-CH2-O-5'). Otros enlaces internucleosídicos neutros incluyen enlaces no iónicos que comprenden siloxano (dialquilsiloxano), éster de carboxilato, carboxamida, sulfuro, éster sulfonato y amidas (véase, por ejemplo:Carbohydrate Modifications in Antisense Research;Y. S. Sanghvi y P D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Capítulos 3 y 4, 40-65). Enlaces internucleosídicos neutros adicionales incluyen enlaces no iónicos que comprenden partes componentes de N, O, S y CH2 mezcladas.
B. Determinados motivos
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más nucleósidos modificados que comprenden un resto de azúcar modificado. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más nucleósidos modificados que comprenden una nucleobase modificada. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden uno o más enlaces internucleosídicos modificados. En tales realizaciones, los restos de azúcar, nucleobases y/o enlaces internucleosídicos modificados, no modificados y modificados de manera diferente de un oligonucleótido modificado definen un patrón o motivo. En determinadas realizaciones, los patrones de restos de azúcar, nucleobases y enlaces internucleosídicos son independientes unos de otros. Por lo tanto, un oligonucleótido modificado puede describirse por su motivo de azúcares, motivo de nucleobases y/o motivo de enlaces internucleosídicos (como se usa en el presente documento, motivo de nucleobases describe las modificaciones de las nucleobases independientemente de la secuencia de nucleobases).
1. Determinados motivos de azúcares
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos comprenden uno o más tipos de resto de azúcar modificado y/o azúcar no modificado dispuestos a lo largo del oligonucleótido o región del mismo en un patrón o motivo de azúcares definido. En determinados casos, tales motivos de azúcares incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de las modificaciones de azúcar comentadas en el presente documento.
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden o consiste en una región que tiene un motivo gapmer, que se define por dos regiones externas o "alas" y una región central o interna o "espacio". Las tres regiones de un motivo gapmer (el ala 5', el espacio y el ala 3') forman una secuencia contigua de nucleósidos en donde al menos algunos de los restos de azúcar de los nucleósidos de cada una de las alas difieren de al menos algunos de los restos de azúcar de los nucleósidos del espacio. De manera específica, al menos los restos de azúcar de los nucleósidos de cada ala que están más cerca del espacio (el nucleósido más cercano a 3' del ala 5' y el nucleósido más cercano a 5' del ala 3') difieren del resto de azúcar de los nucleósidos contiguos del espacio, lo que define la frontera entre las alas y el espacio (es decir, la unión ala/espacio). En determinadas realizaciones, los restos de azúcar dentro del espacio son los mismos entre sí. En determinados casos, el espacio incluye uno o más nucleósidos que tienen un resto de azúcar que difiere del resto de azúcar de uno o más de otros nucleósidos del espacio. En determinadas realizaciones, los motivos de azúcares de las dos alas son idénticos entre sí (gapmer simétrico). En ciertos casos, el motivo de azúcar del ala 5' difiere del motivo de azúcar del ala 3' (gapmer asimétrico).
En determinadas realizaciones, cada nucleósido de cada ala de un gapmer es un nucleósido modificado.
En determinadas realizaciones, cada nucleósido del espacio de un gapmer es un 2'-desoxinucleósido no modificado.
En determinadas realizaciones, el gapmer es un gapmer desoxi. En realizaciones, los nucleósidos en el lado del espacio de cada unión ala/espacio son 2'-desoxinucleósidos no modificados y los nucleósidos en los lados de las alas de cada unión ala/espacio son nucleósidos modificados. En determinadas realizaciones, cada nucleósido del espacio es un 2'-desoxinucleósido no modificado. En determinadas realizaciones, cada nucleósido de cada ala de un gapmer es un nucleósido modificado.
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden o consisten en una región que tiene un motivo de azúcares modificados completamente. En tales realizaciones, cada nucleósido de la región completamente modificada del oligonucleótido modificado comprende un resto de azúcar modificado. En determinados casos, cada nucleósido del oligonucleótido modificado entero comprende un resto de azúcar modificado. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden o consisten en una región que tiene un motivo de azúcares completamente modificado, en donde cada nucleósido dentro de la región completamente modificada comprende el mismo resto de azúcar modificado, denominado en el presente documento un motivo de azúcares uniformemente modificado. En determinados casos, un oligonucleótido completamente modificado es un oligonucleótido modificado uniformemente. En determinados casos, cada nucleósido del modificado uniformemente comprende la misma modificación 2'.
En el presente documento, las longitudes (número de nucleósidos) de las tres regiones de un gapmer pueden proporcionarse usando la notación [n.° de nucleósidos en el ala 5'] -[n.° de nucleósidos en el espacio] -[n.° de nucleósidos en el ala 3']. Por lo tanto, un gapmer 5-8-5 consiste en 5 nucleósidos unidos en cada ala y 8 nucleósidos unidos en el espacio. Cuando dicha nomenclatura va seguida de una modificación específica, esa modificación es la modificación en las alas y los nucleósidos del espacio comprenden azúcares de desoxinucleósidos no modificados. Por lo tanto, un gapmer 5-8-5 MOE consiste en 5 nucleósidos unidos modificados con MOE en el ala 5', 8 desoxinucleósidos unidos en el espacio, y 5 MOE-nucleósidos unidos en el ala 3'. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados son gapmer 5-8-5 MOE.
2. Determinados motivos de nucleobases
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos comprenden nucleobases modificadas y/o no modificadas dispuestas a lo largo del oligonucleótido o región de este en un patrón o motivo definido. En determinados casos, cada nucleobase está modificada. En determinados casos, ninguna de las nucleobases está modificada. En determinados casos, cada purina o cada pirimidina está modificada. En determinados casos, cada adenina está modificada. En determinados casos, cada guanina está modificada. En determinados casos, cada timina está modificada. En determinados casos, cada uracilo está modificado. En determinadas realizaciones, cada citosina está modificada. En determinadas realizaciones, algunas o todas las nucleobases de citosina en un oligonucleótido modificado son 5-metilcitosinas. En determinadas realizaciones, todas las nucleobases de citosina son 5-metilcitosinas y todas las demás nucleobases del oligonucleótido modificado son nucleobases no modificadas.
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados comprenden un bloque de nucleobases modificadas. En determinadas realizaciones de estas, el bloque está en el extremo 3' del oligonucleótido. En determinadas realizaciones, el bloque está en el espacio de 3 nucleósidos del extremo 3' del oligonucleótido. En determinadas realizaciones, el bloque está en el extremo 5' del oligonucleótido. En determinadas realizaciones, el bloque está en el especio de 3 nucleósidos del extremo 5' del oligonucleótido.
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos que tienen un motivo gapmer comprenden un nucleósido que comprende una nucleobase modificada. En determinadas realizaciones de estas, un nucleósido que comprende una nucleobase modificada está en el espacio central de un oligonucleótido que tiene un motivo gapmer. En determinadas realizaciones de estas, el resto de azúcar de dicho nucleósido es un resto 2'-desoxirribosilo. En determinados casos, la nucleobase modificada se selecciona de: una 2-tiopirimidina y una 5-propinopirimidina.
3. Determinados motivos de enlaces internucleosídicos
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos comprenden enlaces internucleosídicos modificados y/o no modificados dispuestos a lo largo del oligonucleótido o región de este en un patrón o motivo definido. En determinados casos, cada grupo de enlace internucleosídico es un enlace internucleosídico fosfodiéster (P=O). En determinados casos, cada grupo de enlace internucleosídico de un oligonucleótido modificado es un enlace internucleosídico fosforotioato (P=S). En determinadas realizaciones, cada enlace internucleosídico de un oligonucleótido modificado se selecciona independientemente de un enlace internucleosídico fosforotioato y un enlace internucleosídico fosfodiéster. En determinadas realizaciones, cada enlace internucleosídico fosforotioato se selecciona independientemente de un fosforotioato estereoaleatorio, un fosforotioato (Sp) y un fosforotioato (Rp). En determinadas realizaciones, el motivo de azúcares de un oligonucleótido modificado es un gapmer y los enlaces intemucleosídicos dentro del espacio están todos modificados. En determinadas realizaciones de estas, algunos de los enlaces intemucleosídicos en las alas son enlaces fosfato no modificados. En determinadas realizaciones, los enlaces internucleosídicos terminales están modificados. En determinadas realizaciones, el motivo de azúcares de un oligonucleótido modificado es un gapmer, y el motivo de enlaces intemucleosídicos comprende al menos un enlace internucleosídico fosfodiéster en al menos un ala, en donde el al menos un enlace fosfodiéster no es un enlace internucleosídico terminal, y los enlaces intemucleosídicos restantes son enlaces intemucleosídicos fosforotioato. En determinadas realizaciones de este tipo, todos los enlaces fosforotioato son estereoaleatorios. En determinadas realizaciones, todos los enlaces de fosforotioato en las alas son fosforotioatos (Sp), y el espacio comprende al menos un motivo Sp, Sp,Rp.En determinadas realizaciones, las poblaciones de oligonucleótidos modificados se enriquecen en oligonucleótidos modificados que comprenden tales motivos de enlaces internucleosídicos.
C. Determinadas longitudes
Es posible aumentar o disminuir la longitud de un oligonucleótido sin eliminar la actividad. Por ejemplo, en Woolf et al.(Proc. Natl. Acad. Sci. USA.89:7305-7309, 1992), se ensayó en una serie de oligonucleótidos de 13-25 nucleobases de longitud su capacidad para inducir la escisión de un ARN diana en un modelo de inyección de ovocitos. Los oligonucleótidos de 25 nucleobases de longitud con 8 u 11 bases con apareamiento erróneo cerca de los extremos de los oligonucleótidos eran capaces de dirigir la escisión específica del ARNm diana, aunque en menor grado que los oligonucleótidos que no contenían apareamientos erróneos. De manera similar, la escisión específica de diana se consiguió utilizando oligonucleótidos de 13 nucleobases, incluyendo los que tenían 1 o 3 apareamientos erróneos.
Los oligonucleótidos modificados de la invención tienen una longitud de 18 nucleósidos unidos.
D. Determinados oligonucleótidos modificados
En determinadas realizaciones, las modificaciones anteriores (azúcar, nucleobase, enlace internucleosídico) se incorporan en un oligonucleótido modificado. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados se caracterizan por sus motivos de modificaciones y longitudes totales. En determinadas realizaciones, dichos parámetros son cada uno independiente del otro. Por lo tanto, a menos que se indique lo contrario, cada enlace internucleosídico de un oligonucleótido que tiene un motivo de azúcares gapmer puede estar modificado o no modificado y puede seguir o no el patrón de modificaciones del gapmer de las modificaciones de azúcares. Por ejemplo, los enlaces intemucleosídicos dentro de las regiones de alas de un gapmer de azúcares pueden ser iguales o diferentes entre sí y pueden ser iguales o diferentes de los enlaces intemucleosídicos de la región de espacio del motivo de azúcares. Del mismo modo, tales oligonucleótidos del gapmer de azúcares pueden comprender una o más nucleobases modificadas independientemente del patrón del gapmer de las modificaciones de azúcares. A menos que se indique lo contrario, todas las modificaciones son independientes de la secuencia de nucleobases.
E. Determinadas poblaciones de oligonucleótidos modificados
Las poblaciones de oligonucleótidos modificados en las que todos los oligonucleótidos modificados de la población tienen la misma fórmula molecular pueden ser poblaciones estereoaleatorias o poblaciones quiralmente enriquecidas. Todos los centros quirales de todos los oligonucleótidos modificados son estereoaleatorios en una población estereoaleatoria. En una población quiralmente enriquecida, al menos un centro quiral particular no es estereoaleatorio en los oligonucleótidos modificados de la población. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados de una población quiralmente enriquecida se enriquecen en restos del azúcar p-D ribosilo, y todos los enlaces intemucleosídicos fosforotioato son estereoaleatorios. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos modificados de una población quiralmente enriquecida se enriquecen tanto en restos de azúcar p-D ribosilo como en al menos un enlace internucleosídico fosforotioato particular en una configuración estereoquímica particular.
F. Secuencia de nucleobases
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos (oligonucleótidos no modificados o modificados) se describen adicionalmente por su secuencia de nucleobases. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos tienen una secuencia de nucleobases que es complementaria de un segundo oligonucleótido o a un ácido nucleico de referencia identificado, tal como un ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones de estas, una región de un oligonucleótido tiene una secuencia de nucleobases que es complementaria de un segundo oligonucleótido o a un ácido nucleico de referencia identificado, tal como un ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la secuencia de nucleobases de una región o longitud entera de un oligonucleótido es al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% o 100% complementaria del segundo oligonucleótido o ácido nucleico, tal como un ácido nucleico diana.
II. Determinados compuestos oligoméricos
En determinadas realizaciones, la invención proporciona compuestos oligoméricos, que consisten en un oligonucleótido (modificado o no modificado) y opcionalmente uno o más grupos conjugados y/o grupos terminales. Los grupos conjugados consisten en uno o más restos de conjugado y un enlazador de conjugado que une el resto de conjugado al oligonucleótido. Los grupos conjugados pueden se pueden unir a cualquiera de o a ambos extremos de un oligonucleótido y/o a cualquier posición interna. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados se unen a la posición 2' de un nucleósido de un oligonucleótido modificado. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados que están unidos a uno o ambos extremos de un oligonucleótido son grupos terminales. En determinadas realizaciones de estas, los grupos conjugados o grupos terminales están unidos al extremo 3' y/o 5' de los oligonucleótidos. En determinadas realizaciones de estas, los grupos conjugados (o grupos terminales) están unidos al extremo 3' de los oligonucleótidos. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados están unidos cerca del extremo 3' de un oligonucleótido. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados (o grupos terminales) están unidos al extremo 5' de los oligonucleótidos. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados están unidos cerca del extremo 5' de un oligonucleótido.
Los ejemplos de grupos terminales incluyen, pero no se limitan a, grupos conjugados, grupos caperuza, restos fosfato, grupos protectores, nucleósidos modificados o no modificados, y dos o más nucleósidos que están independientemente modificados o no modificados.
A. Determinados grupos conjugados
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos están unidos covalentemente a uno o más grupos conjugados. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del oligonucleótido unido, incluyendo, pero no limitado a, farmacodinámica, farmacocinética, estabilidad, unión, absorción, distribución tisular, distribución celular, absorción celular, carga y depuración. En determinadas realizaciones, los grupos conjugados imparten una nueva propiedad al oligonucleótido unido, p. ej., fluoróforos o grupos indicadores que permiten la detección del oligonucleótido. Se han descrito previamente determinados grupos conjugados y restos de conjugados, por ejemplo: resto colesterol (Letsinger et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1989, 86, 6553-6556), ácido cólico (Manoharan et al.,Bioorg. Med. Chem. Lett.,1994, 4, 1053-1060), un tioéter, p. ej., hexil-S-tritiltiol (Manoharan et al.Ann. N.Y. Acad. Sci.,1992, 660, 306-309; Manoharan et al.,Bioorg. Med. Chem. Lett.,1993,3,2765-2770), un tiocolesterol (Oberhauser et al.,Nucl. Acids Res.,1992, 20, 533-538), una cadena alifática, p. ej., restos do-decan-diol o undecilo (Saison-Behmoaras et al.,EMBO J.,1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al.,FEBS Lett.,1990,259,327-330; Svinarchuk et al.,Biochimie,1993 , 75, 49-54), un fosfolípido, p. ej., di-hexadecil-rac-glicerol o 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietilamonio (Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36,3651-3654; Shea et al.,Nucl. Acids Res.,1990, 18, 3777-3783), una poliamina o una cadena de polietilenglicol (Manoharan et al.,Nucleosides & Nucleotides,1995, 14, 969-973), o un resto palmitilo ácido adamantano-acético (Mishra et al.,Biochim. Biophys. Acta, 1995,1264,229-237), un resto octadecilamina o hexilamino-carbonil-oxicolesterol (Crooke et al.,J. Pharmacol. Exp. Ther.,1996, 277, 923-937), un grupo tocoferol (Nishina et al.,Molecular Therapy Nucleic Acids,2015, 4, e220; y Nishina et al.,Molecular Therapy,2008,16, 734-740), o un grupo GalNAc (p. ej., WO2014/179620).
1. Restos de conjugados
Los restos de conjugados incluyen, pero no se limitan a, intercaladores, moléculas indicadoras, poliaminas, poliamidas, péptidos, carbohidratos, restos de vitaminas, polietilenglicoles, tioéteres, poliéteres, colesteroles, tiocolesteroles, restos de ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y tintes.
En determinadas realizaciones, un resto de conjugado comprende un principio activo, por ejemplo, aspirina, warfarina, fenilbutazona, ibuprofeno, suprofeno, fenbufeno, ketoprofeno, (S)-(+)-pranoprofeno, caprofeno, dansilsarcosina, ácido 2,3,5-triyodobenzoico, fingolimod, ácido flufenámico, ácido folínico, una benzotiadiazida, clorotiazida, una diazepina, indometicina, un barbiturato, una cefalosporina, un fármaco sulfa, un antidiabético, un antibacteriano o un antibiótico.
2. Enlazadores de conjugados
Los restos de conjugados se unen a oligonucleótidos a través de enlazadores de conjugados. En determinados compuestos oligoméricos, el enlazador de conjugado es un solo enlace químico (es decir, el resto del conjugado está unido directamente a un oligonucleótido a través de un enlace simple). En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado comprende una estructura de cadena, tal como una cadena de hidrocarbilo, o un oligómero de unidades que se repiten, tal como unidades de etilenglicol, nucleósidos o aminoácidos.
En determinadas realizaciones, un enlazador de conjugado comprende uno o más grupos seleccionados de alquilo, amino, oxo, amida, disulfuro, polietilenglicol, éter, tioéter e hidroxilamino. En determinadas realizaciones de estas, el enlazador de conjugado comprende grupos seleccionados de grupos alquilo, amino, oxo, amida y éter. En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado comprende grupos seleccionados de grupos alquilo y amida. En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado comprende grupos seleccionados de grupos alquilo y éter. En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado comprende al menos un resto fósforo. En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado comprende al menos un grupo fosfato. En determinadas realizaciones, el enlazador de conjugado incluye al menos un grupo enlazador neutro.
En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados, incluyendo los enlazadores de conjugados descritos anteriormente, son restos de unión bifuncionales, p. ej., los conocidos en la técnica que son útiles para unir grupos conjugados a compuestos originales, tales como los oligonucleótidos proporcionados en el presente documento. En general, un resto de unión bifuncional comprende al menos dos grupos funcionales. Uno de los grupos funcionales se selecciona para unirse a un sitio particular en un compuesto original y el otro se selecciona para unirse a un grupo conjugado. Los ejemplos de grupos funcionales usados en un resto de unión bifuncional incluyen, pero no se limitan a, electrófilos para reaccionar con grupos nucleófilos y nucleófilos para reacción con grupos electrófilos. En determinadas realizaciones, los restos de unión bifuncionales comprenden uno o más grupos seleccionados de amino, hidroxilo, ácido carboxílico, tiol, alquilo, alquenilo y alquinilo.
Ejemplos de enlazadores de conjugados incluyen, pero no se limitan a pirrolidina, ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (ADO), 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC) y ácido 6-aminohexanoico (AHEX o AHA). Otros enlazadores de conjugados incluyen, pero no se limitan a, alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C10 sustituido o no sustituido o alquinilo C2-C10 sustituido o no sustituido, en donde una lista no limitante de grupos sustituyentes preferidos incluye hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro, tiol, tioalcoxi, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo.
En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden 1-10 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden 2-5 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden exactamente 3 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden el motivo TCA. En determinadas realizaciones, tales nucleósidos enlazadores son nucleósidos modificados. En determinadas realizaciones, tales nucleósidos enlazadores comprenden un resto de azúcar modificado. En determinadas realizaciones, los nucleósidos enlazadores no están modificados. En determinadas realizaciones, los nucleósidos enlazadores comprenden una base heterocíclica opcionalmente protegida seleccionada de una purina, purina sustituida, pirimidina o pirimidina sustituida. En determinadas realizaciones, un resto escindible es un nucleósido seleccionado de uracilo, timina, citosina, 4-N-benzoilcitosina, 5-metilcitosina, 4-N-benzoil-5-metilcitosina, adenina, 6-N-benzoiladenina, guanina y 2-N-isobutirilguanina. Típicamente es deseable que los nucleósidos enlazadores se escindan del compuesto oligomérico después de que alcance un tejido diana. Por consiguiente, los nucleósidos enlazadores están típicamente unidos entre sí y al resto del compuesto oligomérico a través de enlaces escindibles. En determinadas realizaciones, tales enlaces escindibles son enlaces fosfodiéster.
En el presente documento, los nucleósidos enlazadores no se considera que sean parte del oligonucleótido. Por consiguiente, en realizaciones en las que un compuesto oligomérico comprende un oligonucleótido que consiste en un número o intervalo especificado de nucleósidos unidos y/o un porcentaje especificado de complementariedad con un ácido nucleico de referencia y el compuesto oligomérico también comprende un grupo conjugado que comprende un enlazador de conjugado que comprende nucleósidos enlazadores, esos nucleósidos enlazadores no se cuentan hacia la longitud del oligonucleótido y no se utilizan para determinar el porcentaje de complementariedad del oligonucleótido con el ácido nucleico de referencia. Por ejemplo, un compuesto oligomérico puede comprender (1) un oligonucleótido modificado que consiste en 8-30 nucleósidos y (2) un grupo conjugado que comprende 1-10 nucleósidos enlazadores que son contiguos con los nucleósidos del oligonucleótido modificado. El número total de nucleósidos unidos contiguos en dicho compuesto oligomérico es más de 30. Alternativamente, un compuesto oligomérico puede comprender un oligonucleótido modificado que consiste en 8-30 nucleósidos y ningún grupo conjugado. El número total de nucleósidos unidos contiguos en dicho compuesto oligomérico no es más de 30. A menos que se indique lo contrario, los enlazadores de conjugados comprenden no más de 10 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden no más de 5 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden no más de 3 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden no más de 2 nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones, los enlazadores de conjugados comprenden no más de 1 nucleósido enlazador.
En determinadas realizaciones, es deseable que un grupo conjugado sea escindido del oligonucleótido. Por ejemplo, en determinadas circunstancias, los compuestos oligoméricos que comprenden un resto de conjugado particular son absorbidos mejor por un tipo de célula particular, pero una vez que el compuesto oligomérico se ha absorbido, es deseable que el grupo conjugado se escinda para liberar el oligonucleótido no conjugado u original. Por lo tanto, determinados enlazadores de conjugados pueden comprender uno o más restos escindibles. En determinadas realizaciones, un resto escindible es un enlace escindible. En determinadas realizaciones, un resto escindible es un grupo de átomos que comprende al menos un enlace escindible. En determinadas realizaciones, un resto escindible comprende un grupo de átomos que tiene uno, dos, tres, cuatro o más de cuatro enlaces escindibles. En determinadas realizaciones, un resto escindible se escinde selectivamente dentro de una célula o compartimento subcelular, tal como un lisosoma. En determinadas realizaciones, un resto escindible es escindido selectivamente por enzimas endógenas, tales como nucleasas.
En determinadas realizaciones, un enlace escindible se selecciona entre: una amida, un éster, un éter, uno o ambos ésteres de un fosfodiéster, un éster fosfato, un carbamato o un disulfuro. En determinadas realizaciones, un enlace escindible es uno o ambos de los ésteres de un fosfodiéster. En determinadas realizaciones, un resto escindible comprende un fosfato o fosfodiéster. En determinadas realizaciones, el resto escindible es un enlace fosfato entre un oligonucleótido y un resto de conjugado o grupo conjugado.
En determinadas realizaciones, un resto escindible comprende o consiste en uno o más nucleósidos enlazadores. En determinadas realizaciones de estas, el uno o más nucleósidos enlazadores están unidos entre sí y/o al resto del compuesto oligomérico por medio de enlaces escindibles. En determinadas realizaciones, tales enlaces escindibles son enlaces fosfodiéster no modificados. En determinadas realizaciones, un resto escindible es el 2'-desoxinucleósido que está unido al nucleósido 3' o 5'-terminal de un oligonucleótido mediante un enlace internucleosídico fosfato y unido covalentemente al enlazador de conjugado restante o resto de conjugado mediante un enlace fosfato o fosforotioato. En determinadas realizaciones de estas, el resto escindible es 2'-desoxiadenosina.
B. Determinados grupos terminales
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más grupos terminales. En determinadas realizaciones de estas, los compuestos oligoméricos comprenden un 5'-fosfato estabilizado. Los 5'-fosfatos estabilizados incluyen, pero no se limitan a, 5'-fosfanatos, incluyendo, pero limitados a, 5'-vinilfosfonatos. En determinadas realizaciones, los grupos terminales comprenden uno o más nucleósidos abásicos y/o nucleósidos invertidos. En determinadas realizaciones, los grupos terminales comprenden uno o más nucleósidos unidos por 2'. En determinadas realizaciones de estas, el nucleósido unido por 2' es un nucleósido abásico.
III. Dúplex oligoméricos
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos descritos en el presente documento comprenden un oligonucleótido, que tiene una secuencia de nucleobases complementaria de la de un ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, un compuesto oligomérico se aparea con un segundo compuesto oligomérico para formar un dúplex oligomérico. Tales dúplex oligoméricos comprenden un primer compuesto oligomérico que tiene una región complementaria de un ácido nucleico diana y un segundo compuesto oligomérico que tiene una región complementaria del primer compuesto oligomérico. En determinadas realizaciones, el primer compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico comprende o consiste en (1) un oligonucleótido modificado o no modificado y opcionalmente un grupo conjugado y (2) un segundo oligonucleótido modificado o no modificado y opcionalmente un grupo conjugado. Cualquiera o ambos compuestos oligoméricos de un dúplex oligomérico pueden comprender un grupo conjugado. Los oligonucleótidos de cada compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico pueden incluir nucleósidos salientes no complementarios.
IV. Actividad antisentido
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos y los dúplex oligoméricos son capaces de hibridarse con un ácido nucleico diana, dando como resultado al menos una actividad antisentido; tales compuestos oligoméricos y los dúplex oligoméricos son compuestos antisentido. En determinadas realizaciones, los compuestos antisentido tienen actividad antisentido cuando reducen o inhiben la cantidad o actividad de un ácido nucleico diana en un 25% o más en el ensayo celular estándar. En determinadas realizaciones, los compuestos antisentido afectan selectivamente a uno o más ácidos nucleicos diana. Tales compuestos antisentido comprenden una secuencia de nucleobases que hibrida con uno o más ácidos nucleicos diana, dando como resultado una o más actividades antisentido deseadas y no hibrida con uno o más ácidos nucleicos no diana o no hibrida con uno o más ácidos nucleicos no diana de tal manera que dé como resultado una actividad antisentido no deseada significativa.
En determinadas actividades antisentido, la hibridación de un compuesto antisentido con un ácido nucleico diana da como resultado el reclutamiento de una proteína que escinde el ácido nucleico diana. Por ejemplo, determinados compuestos antisentido dan como resultado la escisión mediada por RNasa H del ácido nucleico diana. La RNasa H es una endonucleasa celular que escinde la cadena de ARN de un dúplex de ARN:ADN. El ADN en dicho dúplex de ARN:ADN no es necesario que sea ADN no modificado. En determinadas realizaciones, en el presente documento se describen compuestos antisentido que son suficientemente "similares a ADN" para provocar la actividad de RNasa H. En determinadas realizaciones, se tolera uno o más nucleósidos no similares a ADN en el espacio de un gapmer.
En determinadas actividades antisentido, un compuesto antisentido o una parte de un compuesto antisentido se carga en un complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), que finalmente produce la escisión del ácido nucleico diana. Por ejemplo, determinados compuestos antisentido dan como resultado la escisión del ácido nucleico diana por Argonaute. Los compuestos antisentido que se cargan en RISC son compuestos de ARNi. Los compuestos de ARNi pueden ser bicatenarios (ARNip) o monocatenarios (ARNmc).
En determinadas realizaciones, la hibridación de un compuesto antisentido con un ácido nucleico diana no produce el reclutamiento de una proteína que escinda ese ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la hibridación del compuesto antisentido con el ácido nucleico diana da como resultado la alteración del corte y empalme del ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la hibridación de un compuesto antisentido con un ácido nucleico diana da como resultado la inhibición de una interacción de unión entre el ácido nucleico diana y una proteína u otro ácido nucleico. En determinadas realizaciones, la hibridación de un compuesto antisentido con un ácido nucleico diana da como resultado la alteración de la traducción del ácido nucleico diana.
Las actividades antisentido pueden observarse directa o indirectamente. En determinadas realizaciones, la observación o detección de una actividad antisentido implica la observación o detección de un cambio en una cantidad de un ácido nucleico diana o proteína codificada por dicho ácido nucleico diana, un cambio en la relación de variantes de corte y empalme de un ácido nucleico o proteína, y/o un cambio fenotípico en una célula o animal.
V. Determinados ácidos nucleicos diana
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden o consisten en un oligonucleótido que comprende una región que es complementaria de un ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, el ácido nucleico diana es una molécula de ARN endógeno. En determinadas realizaciones, el ácido nucleico diana codifica una proteína. En determinadas realizaciones de estas, el ácido nucleico diana se selecciona de: un ARNm maduro y un pre-ARNm, que incluye regiones intrónicas, exónicas y no traducidas. En determinadas realizaciones, el ARN diana es un ARNm maduro. En determinadas realizaciones, el ácido nucleico diana es un pre-ARNm. En determinadas realizaciones de estas, la región diana está completamente dentro de un intrón. En determinadas realizaciones, la región diana abarca una unión intrón/exón. En determinadas realizaciones, la región diana está al menos 50% dentro de un intrón.
A. Complementariedad/Apareamientos erróneos con el ácido nucleico diana
Es posible introducir bases de apareamiento erróneo sin eliminar la actividad. Por ejemplo, Gautschi et al.(J. Natl. CáncerInst.93:463-471, marzo de 2001) demostraron la capacidad de un oligonucleótido que tiene 100% de complementariedad con el ARNm de bcl-2 y que tiene 3 apareamientos erróneos con el ARNm de bcl-xL de reducir la expresión tanto de bcl-2 como de bcl-xL in vitro e in vivo. Además, este oligonucleótido demostró una potente actividad antitumoral in vivo. Maher y Dolnick(Nuc. Acid. Res.16:3341-3358,1988) ensayaron en una serie de oligonucleótidos de 14 nucleobases en tándem, y oligonucleótidos de 28 y 42 nucleobases compuestos por la secuencia de dos o tres de los oligonucleótidos en tándem, respectivamente, su capacidad de detener la traducción de DHFR humana en un ensayo de reticulocitos de conejo. Cada uno de los tres oligonucleótidos de 14 nucleobases solo era capaz de inhibir la traducción, aunque a un nivel más moderado que los oligonucleótidos de 28 o 42 nucleobases.
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden oligonucleótidos que son complementarios del ácido nucleico diana en toda la longitud del oligonucleótido. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos son 99%, 95%, 90%, 85% u 80% complementarios del ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos son al menos 80% complementarios del ácido nucleico diana en toda la longitud del oligonucleótido y comprenden una región que es 100% o totalmente complementaria de un ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la región de complementariedad total tiene una longitud de 6 a 20, 10 a 18 o 18 a 20 nucleobases.
En determinadas realizaciones, los oligonucleótidos comprenden una o más nucleobases de apareamiento erróneo en relación con el ácido nucleico diana. En determinadas realizaciones, la actividad antisentido contra la diana se reduce por dicho apareamiento erróneo, pero la actividad contra una no diana se reduce en una cantidad mayor. Por lo tanto, en determinadas realizaciones se mejora la selectividad del compuesto oligomérico que comprende un oligonucleótido. En determinadas realizaciones, el apareamiento erróneo se encuentra específicamente dentro de un oligonucleótido que tiene un motivo gapmer. En determinadas realizaciones, el apareamiento erróneo está en la posición 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 desde el extremo 5' de la región de espacio. En determinadas realizaciones, el apareamiento erróneo está en la posición 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 desde el extremo 3' de la región de espacio. En determinadas realizaciones, el apareamiento erróneo está en la posición 1,2, 3 o 4 desde el extremo 5' de la región de ala. En determinadas realizaciones, el apareamiento erróneo está en la posición 4, 3, 2 o 1 desde el extremo 3' de la región de ala.
B. Tau
Los compuestos oligoméricos de la invención comprenden o consisten en un oligonucleótido que comprende una región que es complementaria de un ácido nucleico diana, en donde el ácido nucleico diana es Tau. En determinadas realizaciones, el ácido nucleico Tau tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 1 (N.° de acceso en GENBANK NT 010783.14 truncada desde los nucleótidos 2624000 a 2761000).
En determinadas realizaciones, poner en contacto una célula con un compuesto oligomérico complementario de la SEQ ID NO: 1 reduce la cantidad del ARNm de Tau, y en determinadas realizaciones reduce la cantidad de la proteína Tau. En determinadas realizaciones, poner en contacto una célula en un animal con un compuesto oligomérico complementario de la SEQ ID NO: 1 mejora uno o más síntomas de una enfermedad neurodegenerativa. En determinadas realizaciones, el síntoma es pérdida de memoria, pérdida de función motora o aumento en el número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares. En determinadas realizaciones, poner en contacto una célula en un animal con un oligonucleótido complementario de la SEQ ID NO: 1 da como resultado el mantenimiento o mejora de la memoria, mantenimiento o mejora de la función motora, y/o mantenimiento o reducción del número y/o volumen de inclusiones neurofibrilares.
C. Determinados ácidos nucleicos diana en determinados tejidos
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden o consisten en un oligonucleótido que comprende una región que es complementaria de un ácido nucleico diana, en donde el ácido nucleico diana se expresa en el sistema nervioso central (SNC).
VI. Determinadas composiciones farmacéuticas
En determinadas realizaciones, se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos oligoméricos o una sal de los mismos. En determinadas realizaciones, la composición farmacéutica comprende un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica comprende una solución salina estéril y uno o más compuestos oligoméricos. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica consiste en una solución salina estéril y uno o más compuestos oligoméricos. En determinadas realizaciones, la solución salina estéril es solución salina de calidad farmacéutica. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica comprende uno o más compuestos oligoméricos y agua estéril. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica consiste en uno o más compuestos oligoméricos y agua estéril. En determinadas realizaciones, el agua estéril es agua de calidad farmacéutica. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica comprende uno o más compuestos oligoméricos y solución salina tamponada con fosfato (PBS). En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica consiste en uno o más compuestos oligoméricos y PBS estéril. En determinadas realizaciones, la PBS estéril es PBS de calidad farmacéutica.
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden uno o más compuestos oligoméricos y uno o más excipientes. En determinadas realizaciones, los excipientes se seleccionan de agua, soluciones salinas, alcohol, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilasa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa y polivinilpirrolidona.
En determinadas realizaciones, los compuestos oligoméricos pueden mezclarse con sustancias activas y/o inertes farmacéuticamente aceptable para la preparación de composiciones o formulaciones farmacéuticas. Las composiciones y los métodos para la formulación de composiciones farmacéuticas dependen de una serie de criterios, que incluyen, pero no se limitan a, la vía de administración, grado de la enfermedad o dosis que se va a administrar.
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto oligomérico abarcan cualquier sal farmacéuticamente aceptable del compuesto oligomérico, ésteres del compuesto oligomérico o sales de dichos ésteres. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos oligoméricos que comprenden uno o más oligonucleótidos, tras la administración a un animal, incluyendo un ser humano, pueden proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito biológicamente activo o un residuo de este. Por consiguiente, por ejemplo, la descripción también se dirige a sales farmacéuticamente aceptables de compuestos oligoméricos, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables de dichos profármacos y otros bioequivalentes. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, pero no se limitan a, sales de sodio y potasio. En determinadas realizaciones, los profármacos comprenden uno o más grupos conjugados unidos a un oligonucleótido, en donde el grupo conjugado es escindido por nucleasas endógenas dentro del cuerpo.
Los restos lipídicos se han utilizado en terapias de ácidos nucleicos en una variedad de métodos. En determinados métodos de estos, el ácido nucleico, tal como un compuesto oligomérico, se introduce en liposomas o lipoplejos preformados elaborados a partir de mezclas de lípidos catiónicos y lípidos neutros. En determinados métodos, los complejos de ADN con lípidos mono-o policatiónicos se forman sin la presencia de un lípido neutro. En determinadas realizaciones, se selecciona un resto lipídi
de un agente farmacéutico en una célula o tejido particular. En determinadas realizaciones, se selecciona un resto lipídi
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden un sistema de administración. Los ejemplos de sistemas de administración incluyen, pero no se limitan a, liposomas y emulsiones. Determinados sistemas de administración son útiles para preparar determinadas composiciones farmacéuticas incluyendo aquellas que comprenden compuestos hidrófobos. En determinadas realizaciones, se usan determinados disolventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido.
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden una o más moléculas de administración específicas de tejido diseñadas para administrar el uno o más agentes farmacéuticos de la presente invención a tipos de células o tejidos específicos. Por ejemplo, en determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas incluyen liposomas recubiertos con un anticuerpo específico de tejido.
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden un sistema de codisolvente. Determinados sistemas de codisolventes de estos comprenden, por ejemplo, alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua, y una fase acuosa. En determinadas realizaciones, tales sistemas de codisolventes se usan para compuestos hidrófobos. Un ejemplo no limitante de tal sistema de codisolvente es el sistema de codisolvente VPD, que es una solución de etanol absoluto que comprende 3% en p/v de alcohol bencílico, 8% en p/v del tensioactivo no polar Polisorbato 80™ y 65% en p/v de polietilenglicol 300. Las proporciones de dichos sistemas de cosdiolventes se pueden variar de manera considerable sin alterar significativamente sus características de toxicidad y solubilidad. Además, la identidad de los componentes codisolventes puede ser variada: por ejemplo, pueden utilizarse otros tensioactivos en vez de Polisorbato 80™; el tamaño de la fracción de polietilenglicol puede variar; otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar al polietilenglicol, p. ej., polivinilpirrolidina; y otros azúcares o polisacáridos pueden sustituir a la dextrosa.
En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se preparan para administración oral. En determinadas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se preparan para administración bucal. En determinadas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración por inyección (p. ej., intravenosa, subcutánea, intramuscular, intratecal, intracerebroventricular, etc.). En determinadas realizaciones de estas, una composición farmacéutica comprende un vehículo y se formula en solución acuosa, tal como agua o tampones fisiológicamente compatibles, tales como solución de Hank, solución de Ringer o tampón de solución salina fisiológica. En determinadas realizaciones, se incluyen otros ingredientes (p. ej., ingredientes que ayudan a la solubilidad o sirven como conservantes). En determinadas realizaciones, las suspensiones inyectables se preparan utilizando vehículos líquidos, agentes de suspensión y similares apropiados. Determinadas composiciones farmacéuticas para inyección se presentan en forma farmacéutica unitaria, p. ej., en ampollas o en envases multidosis. Determinadas composiciones farmacéuticas para inyección son suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Determinados disolventes adecuados para uso en composiciones farmacéuticas para inyección incluyen, pero no se limitan a, disolventes lipófilos y aceites grasos, tales como aceite de sésamo, ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, y liposomas. Pueden contener suspensiones acuosas para inyección.
VII. Determinados compuestos
En determinadas realizaciones, el compuesto n.° 814907 se caracteriza como un gapmer 5-8-5 MOE, que tiene una secuencia de (de 5' a 3') CCGTTTTCTTACCACCCT (SEQ ID NO: 8), en donde cada uno de los nucleósidos 1-5 y 14-18 son 2'-MOE-nucleósidos y cada uno de los nucleósidos 6-13 son 2'-desoxinucleósidos, en donde los enlaces de internucleosídicos entre el nucleósido 2 y el nucleósido 3 y el nucleósido 15 al nucleósido 16 son enlaces internucleosídicos fosfodiéster y el los enlaces internucleosídicos restantes son enlaces internucleosídicos fosforotioato, y en donde cada citosina es una 5-metilcitosina.
En determinadas realizaciones, el compuesto n.° 814907 se caracteriza por la siguiente notación química: mCes mCeo Ges Tes Tes Tds Tds mCds Tds Tds Ads mCds mCds Aes mCeo mCes mCes Te; en donde,
A = una adenina,
mC = una 5-metilcitosina,
G = una guanina,
T = una timina,
e = un 2'-MOE-nucleósido,
d = un 2'-desoxinucleósido,
s = un enlace internucleosídico fosforotioato y
o = un enlace internucleosídico fosfodiéster.
En determinadas realizaciones, el compuesto n.° 814907 se caracteriza por la siguiente estructura química:
VIII. Determinados compuestos de referencia
En determinadas realizaciones, el compuesto n.° 623782 (caracterizado a continuación en el ejemplo 1), descrito por primera vez en el documento WO 2015/010135, es un compuesto de referencia. El compuesto n.° 623782 tenía un rendimiento superior entre los compuestos descritos en el documento WO 2015/010135 en términos de potencia, eficacia y tolerabilidad. El compuesto n.° 623782 se proporciona como un compuesto de referencia para demostrar la eficacia y tolerabilidad superiores del compuesto n.° 814907 (caracterizada a continuación en el ejemplo 1) en comparación con el compuesto n.° 623782 en estudios comparativos descritos a continuación en el ejemplo 1 y el ejemplo 2.
Como se demuestra en el ejemplo 1, el compuesto n.° 814907 alcanzó una ED50 de 25 | jg en ratones transgénicos para Tau tratados con 30 |jg, 100 |jg, 500 |jg, mientras que el Compuesto n.° 623782 alcanzó una ED50 de 94 jg en ratones transgénicos para Tau tratados con 10 jg , 30 jg , 100 jg , 300 jg , 700 jg . Por lo tanto, el compuesto n.° 814907 es más eficaz que el compuesto n.° 623782.
Como se demuestra en el ejemplo 2, la administración del compuesto n.° 814907 a ratones no manipulados genéticamente no dio como resultado pérdida de células de Purkinje, mientras que la administración del compuesto n.° 623782 dio como resultado pérdida de células de Purkinje en secciones de cerebelo teñidas con calbindina en 3 de 11 animales. Por lo tanto, el compuesto n.° 814907 es más tolerable que el compuesto n.° 623782.
Descripción
Mientras que determinados compuestos, composiciones y métodos descritos en el presente documento se han descrito con especificidad de acuerdo con determinadas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven solo para ilustrar los compuestos descritos en el presente documento y no pretenden limitarlos.
Si bien el listado de secuencias que acompaña esta presentación identifica cada secuencia como "ARN" o "ADN" según sea necesario, en realidad, esas secuencias pueden estar modificadas con cualquier combinación de modificaciones químicas. Un experto en la técnica apreciará fácilmente que tal designación como "ARN" o "ADN" para describir oligonucleótidos modificados es, en determinados casos, arbitraria. Por ejemplo, un oligonucleótido que comprende un nucleósido que comprende un resto de azúcar 2'-OH y una base de timina podría describirse como un ADN que tiene un azúcar modificado (2'-OH en lugar de un 2'-H del ADN) o como un ARN que tiene una base modificada (timina (uracilo metilado) en lugar de un uracilo de ARN). En consecuencia, las secuencias de ácidos nucleicos descritas en el presente documento, que incluyen, pero no se limitan a, las del listado de secuencias, pretenden abarcar los ácidos nucleicos que contienen cualquier combinación de ARN y/o ADN natural o modificado, que incluyen, pero no se limitan a, dichos ácidos nucleicos que tienen nucleobases modificadas. A modo de ejemplo adicional y sin limitación, un compuesto oligomérico que tiene la secuencia de nucleobases “ATCGATCG” abarca cualquier compuesto oligomérico que tiene dicha secuencia de nucleobases, ya sea modificada o no modificada, que incluye, pero no se limita a, dichos compuestos que comprenden bases de ARN, tales como los que tienen la secuencia “AUCGAUCG” y los que tienen algunas bases de ADN y algunas bases de ARN, tales como “AUCGATCG” y compuestos oligoméricos que tienen otras nucleobases modificadas, tales como “ATmCGAUCG,” en donde mC indica una base de citosina que comprende un grupo metilo en la posición 5.
Determinados compuestos descritos en el presente documento (p. ej., oligonucleótidos modificados) tienen uno o más centros asimétricos y, por lo tanto, dan lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras configuraciones estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como(R)o (S), como a o p, tal como para anómeros de azúcar, o como (D) o (L), tal como para aminoácidos, etc. Los compuestos descritos en el presente documento que se dibujan o describen como que tienen determinadas configuraciones estereoisoméricas incluyen solo los compuestos indicados. Los compuestos descritos en el presente documento que se dibujan o describen con estereoquímica indefinida incluyen todos estos isómeros posibles, incluyendo sus formas estereoaleatorias y ópticamente puras, a menos que se especifique lo contrario. Del mismo modo, las formas tautoméricas de los compuestos del presente documento también están incluidas a menos que se indique lo contrario. A menos que se indique lo contrario, los compuestos oligoméricos y oligonucleótidos modificados descritos en el presente documento se pretende que incluyan las formas de sal correspondientes.
Los compuestos descritos en el presente documento incluyen variaciones en las que uno o más átomos se reemplazan por un isótopo no radiactivo o isótopo radiactivo del elemento indicado. Por ejemplo, los compuestos del presente documento que comprenden átomos de hidrógeno abarcan todas las posibles sustituciones con deuterio para cada uno de los átomos de hidrógeno<1>H. Las sustituciones isotópicas abarcadas por los compuestos del presente documento incluyen, pero no se limitan a:<2>H o<3>H en lugar de<1>H,<13>C o<14>C en lugar de<12>C,<15>N en lugar de<14>N,<17>O o<18>O en lugar de<16>O y<33>S,<34>S,<35>S o<36>S en lugar de<32>S. En determinadas realizaciones, las sustituciones isotópicas no radiactivas pueden impartir nuevas propiedades al compuesto oligomérico que son beneficiosas para uso como una herramienta terapéutica o de investigación. En determinadas realizaciones, las sustituciones isotópicas radiactivas pueden hacer que el compuesto sea adecuado para fines de investigación o diagnóstico tales como formación de imágenes.
EJEMPLOS
Los siguientes ejemplos ilustran determinadas realizaciones de la presente descripción y no son limitantes. Además, cuando se proporcionan realizaciones específicas, los autores de la invención han contemplado la aplicación genérica de esas realizaciones específicas. Por ejemplo, la descripción de un oligonucleótido que tiene un motivo particular proporciona un apoyo razonable para oligonucleótidos adicionales que tienen el mismo motivo o uno similar. Y, por ejemplo, cuando una modificación particular de alta afinidad aparece en una posición particular, se consideran adecuadas otras modificaciones de alta afinidad en la misma posición, a menos que se indique lo contrario.
Ejemplo 1: Efectos de oligonucleótidos modificados en ARNm de Tau humana en ratones transgénicos
Los oligonucleótidos modificados mostrados en la siguiente tabla son 100% complementarios del pre-ARNm de Tau humana (N.° de acceso a GENBANK NT 010783.14, truncado desde los nucleótidos 2624000 a 2761000, designado en el presente documento como SEQ ID NO: 1). Las eficacias de los oligonucleótidos modificados se ensayaron en ratones transgénicos para Tau humana (Duff et al.,Neurobiology of Disease7:87-98, 2000). Cada ratón recibió una dosis de un oligonucleótido modificado enumerado en la tabla siguiente, o vehículo de PBS solo, mediante inyección en bolo ICV. Cada grupo de tratamiento consistía en 2 a 4 ratones. Varios días después de la administración de oligonucleótidos, se sacrificaron los ratones y se recogieron los tejidos. El ARN se extrajo de la corteza y se analizó mediante RT-qPCR con el fin de determinar los niveles de ARNm de Tau humana. Se usó el conjunto de sondas de cebador RTS3104, con las siguientes secuencias: cebador directo 5'-AAGATTGGGTCCCTGGACAAT-3', designado en el presente documento como SEQ ID NO: 5; cebador inverso 5'-AGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATT-3', designado en el presente documento como SEQ ID NO: 6; sonda 5'-CACCCACGTCCCTGGCGGA-3', designado en el presente documento como SEQ ID NO: 7. Los resultados se presentan en la siguiente tabla como el porcentaje medio de inhibición de la expresión de ARNm de Tau humana para cada grupo de tratamiento en comparación con el grupo tratado con vehículo. La dosis máxima efectiva (ED50) para cada oligonucleótido modificado se calculó usando análisis de regresión no lineal.
Tabla 1
Porcentaje de inhibición de los niveles de ARNm de Tau humana en ratones hTau
Subíndices: “e” representa un 2'-MOE-nucleósido; “d” representa un 2'-desoxinucleósido; “o” representa un enlace internucleosídico fosfodiéster; y “s” representa un enlace internucleosídico fosforotioato. El superíndice “m” que precede a “C” indica que la citosina es una 5-metilcitosina.
Ejemplo 2: Tolerabilidad de oligonucleótidos modificados dirigidos a Tau humana
La tolerabilidad de los oligonucleótidos modificados descritos en el ejemplo 1 se ensayó en ratones no modificados genéticamente. Cada ratón recibió una inyección de 700 |jg del compuesto n.° 623782 o el compuesto n.° 814907 en dosis de 700 jg , o vehículo de PBS solo. Ocho semanas después de la administración de oligonucleótidos modificados, los ratones se sacrificaron y se recogieron los tejidos. Se realizó la histopatología en secciones de cerebelo usando tinciones de HyE,<i>BA1 , GFAP y calbindina, y no se observó ninguna anomalía respecto a los ratones tratados con vehículo para los ratones tratados con el compuesto n.° 814907. En un experimento comparable, se observó pérdida de células de Purkinje en secciones de cerebelo teñidas con calbindina en 3 de 11 animales tratados con el compuesto n.° 623782.
Ejemplo 3: Efecto del compuesto n.° 814907 en macacos cangrejeros después de inyección intratecal de dosis repetidas durante 13 semanas
Los macacos cangrejeros se trataron con el compuesto n.° 814907 para determinar la tolerabilidad local y sistémica y la farmacocinética a tres niveles de dosis, después de inyecciones en bolo lumbares intratecales repetidas durante 13 semanas. El compuesto n.° 814907 comparte homología de secuencia completa con el ARNm de Tau de macaco y ha demostrado actividad farmacológica en esta especie.
Tratamiento
Macacos cangrejeros con edades en el intervalo de 2-4 años se trataron con el control de vehículo (n=12) o con el compuesto n.° 814907 por vía intratecal (entre L3-L4). Los animales recibieron dosis los días 1, 14, 28, 56 y 84. Los grupos de tratamiento recibieron 4 mg (n=6), 12 mg (n=6) o 35 mg (n=14) del Compuesto n.° 814907. Los animales se sacrificaron el día 98 o 155 (4 animales del grupo de control de vehículo y 4 animales del grupo de tratamiento de 35 mg).
Tolerabilidad
La evaluación de la tolerabilidad se basó en observaciones clínicas, pesos corporales, consumo de alimento, exámenes físicos y neurológicos, observaciones neuroconductuales (prueba de Irwin modificada (Irwin, 1968)), electrocardiograma (ECG) y evaluación de la presión arterial, oftalmología, coagulación, hematología, química clínica (sangre y líquido cefalorraquídeo [CSF]), recuento celular (CSF solamente), evaluación de gases en sangre, análisis de orina y evaluaciones de patología anatómica. Se realizaron necropsias completas con un registro de cualquier anomalía macroscópica. Se tomaron los pesos de los órganos y se realizaron exámenes microscópicos. Se recogió sangre para el análisis del complemento. Además, se recogieron sangre, CSF y tejidos (en la necropsia) para las evaluaciones toxicocinéticas.
La administración intratecal de 4 mg, 12 mg o 35 mg del compuesto n.° 814907 durante 13 semanas (quincenal durante el primer mes, y posteriormente una vez al mes) mostró una buena tolerabilidad local y sistémica en macacos cangrejeros macho y hembra en todos los regímenes de dosificación ensayados.
Actividad
Se analizó en el tejido cerebral y médula espinal la inhibición del ARNm de Tau de macaco cangrejero. Se recogieron cortes de cerebro y muestras de médula espinal y se sometieron a congelación ultrarrápida en nitrógeno líquido y se almacenaron congelados (-60°C a -90°C). En el memento de la toma de muestra, se usaron punzones de biopsia de 2 mm para recoger muestras para análisis de ARN de los cortes de cerebro congelados. Se tomaron muestras con los punzones de múltiples regiones de la médula espinal y el cerebro.
El ARN total de muestras de cerebro y médula espinal de macacos cangrejeros tratados con el control o el compuesto n.° 814907 se purificaron usando un kit de purificación de mini-ARN de Life Technologies y se sometieron a análisis de PCR en tiempo real. Se usó el conjunto de sondas de cebadores de macaco rhMATPT LTS01278 (secuencia directa AGGACAGAGTGCAGTCGAAGATC, designada en el presente documento SEQ ID NO: 9; secuencia inversa AGGTCAGCTTGTGGGTTTCAA, designada en el presente documento SEQ ID NO: 10; secuencia de sonda CACCCATGTCCCTGGCGGAGG, designada en el presente documento SEQ ID NO: 11) para medir los niveles de ARN. El ARN de Tau se normalizó entonces respecto al gen de mantenimiento de ciclofilina A. Todas las reacciones de qPCR se realizaron por triplicado. Se presentan datos relativos a los niveles de ARNm en animales tratados con CSF artificial.
Como se muestra en la Tabla siguiente, hubo una disminución significativa y sensible a la dosis en los niveles de ARN de Tau en la médula espinal y múltiples regiones del SNC después del tratamiento con el compuesto n.° 814907, en comparación con los macacos tratados con control.
Tabla 2
Porcentaje de inhibición de los niveles de ARNm de Tau cinomolgo en macacos cangrejeros
Ejemplo 4: Ensayo clínico en seres humanos de fase I-IIa con el compuesto n.° 814907
Se evalúan dosis ascendentes múltiples del compuesto n.° 814907 en un estudio aleatorizado, de doble ocultación, controlado con placebo para evaluar la seguridad, tolerabilidad, farmacocinética y farmacodinámica en pacientes con enfermedad de Alzheimer (AD) leve de 50-74 años de edad. Los pacientes elegibles tendrán evidencia de biomarcadores de AD en CSF de patología amiloide y tau además de cumplir los criterios clínicos para AD. Se reclutarán secuencialmente cuatro cohortes de nivel de dosis ascendente de pacientes con AD leve y se aleatorizarán 3:1 para recibir el compuesto n.° 814907 o placebo. Cada paciente recibirá 4 dosis del compuesto n.° 814907 o placebo con un intervalo de 28 días entre dosis. Los pacientes recibirán 4 dosis en bolo intratecal (IT) del compuesto n.° 814907 a intervalos de 4 semanas durante el periodo de tratamiento de 3 meses (los días 1, 29, 57, 85). Cada dosis del compuesto n.° 814907 o placebo se administrará como una única inyección de 20 ml en bolo IT. La administración será mediante punción lumbar utilizando una aguja de calibre pequeño insertada en el espacio L3/L4.
Evaluaciones de seguridad y tolerabilidad
La seguridad de los pacientes se vigilará estrechamente durante el estudio. Las evaluaciones de seguridad y tolerabilidad incluyen: examen físico y evaluación neurológica estándar (incluyendo fondo), signos vitales (HR, BP, cambios ortostáticos, peso), ECG, AE y medicamentos concomitantes, Escala de Evaluación de la Gravedad del Suicidio de Columbia (C-SSRS), pruebas de laboratorio de seguridad de CFS (recuentos celulares, proteína, glucosa), pruebas de laboratorio de plasma (química clínica, hematología), análisis de orina y las evaluaciones de neuroimágenes se llevarán a cabo utilizando un escáner de MRI de 3T. Se usarán medidas clínicas y volumétricas de neuroimágenes para vigilar el deterioro inesperado.
Evaluaciones farmacocinéticas
Se recogerá una muestra de CSF antes de la dosis en cada día de administración (días 1,29, 57, 85) y durante el período de post-tratamiento para los análisis PK.
Evaluaciones exploratorias
Se evaluarán parámetros bioquímicos, de neuroimágenes, funcionales/capacidad para realizar actividades de la vida diaria, cognitivos y neuropsiquiátricos.
Los parámetros bioquímicos incluyen potenciales biomarcadores de CSF y sangre/plasma, incluyendo el acoplamiento objetivo, marcadores de lesión neuronal y sináptica, marcadores de activación inmunitaria innata, componentes del complemento y biomarcadores relacionados con lípidos.
Los parámetros de neuroimágenes incluyen MRI estructural (volúmenes de hipocampo, cerebro entero y ventricular), marcado arterial de espín (ASL), formación de imágenes con tensor de difusión (DTI) y FDG-PET (cohortes C y D solamente).
Los parámetros de funcionamiento/capacidad para realizar actividades de la vida diaria incluye la evaluación mediante el cuestionario de actividades funcionales (preguntas frecuentes).
Los parámetros cognitivos incluyen la evaluación por batería repetible para la evaluación del estado neuropsicológico (RBANS) y miniexamen del estado mental (MMSE)
Los parámetros neuropsiquiátricos incluyen la evaluación mediante el Inventario Neuropsiquiátrico -Cuestionario (NPI-Q)

Claims (20)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un oligonucleótido modificado según la siguiente fórmula:
    o una de sus sales.
  2. 2. La sal del oligonucleótido modificado de la reivindicación 1, en donde la sal incluye una sal de sodio y/o una sal de potasio.
  3. 3. Un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado es un gapmer que consiste en un segmento de ala 5', un segmento de especio central, y un segmento de ala 3', en donde: el segmento de ala 5' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos, el segmento de espacio central consiste en ocho 2'-desoxinucleósidos, y el segmento de ala 3' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos; en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobases 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3' (SEQ ID NO: 8), en donde cada citosina es una 5-metilcitosina; y en donde los enlaces internucleosídicos del oligonucleótido modificado son, de 5' a 3', sossssssssssssoss, en donde cada s es un enlace fosforotioato y cada o es un enlace fosfodiéster.
  4. 4. Un oligonucleótido modificado, en donde el oligonucleótido modificado es un gapmer que consiste en un segmento de ala 5', un segmento de especio central, y un segmento de ala 3', en donde: el segmento de ala 5' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos, el segmento de espacio central consiste en ocho 2'-desoxinucleósidos, y el segmento de ala 3' consiste en cinco 2'-MOE-nucleósidos; en donde el oligonucleótido modificado tiene la secuencia de nucleobases 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3' (SEQ ID NO: 8), en donde cada citosina es una 5-metilcitosina; y en donde los enlaces internucleosídicos del oligonucleótido modificado son, de 5' a 3', sossssssssssssoss, en donde cada s es un enlace fosforotioato y cada o es un enlace fosfodiéster.
  5. 5. Una población de oligonucleótidos modificados o sales de los mismos según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 4, en donde todos los enlaces internucleosídicos fosforotioato del oligonucleótido modificado son estereoaleatorios.
  6. 6. El compuesto de la reivindicación 3 o el oligonucleótido modificado de la reivindicación 4, en donde el oligonucleótido modificado está unido a un grupo conjugado.
  7. 7. Un dúplex oligomérico que comprende el oligonucleótido modificado o sal del mismo de la reivindicación 1 o 2, el compuesto de la reivindicación 3 o el oligonucleótido modificado de la reivindicación 4.
  8. 8. Una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido modificado o sal del mismo de la reivindicación 1 o 2, el compuesto de la reivindicación 3, o el oligonucleótido modificado de la reivindicación 4, y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
  9. 9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, que comprende un diluyente farmacéuticamente aceptable, en donde el diluyente farmacéuticamente aceptable es solución salina tamponada con fosfato (PBS) o CSF artificial (aCSF).
  10. 10. La composición farmacéutica de la reivindicación 9, en donde el diluyente farmacéuticamente aceptable es CSF artificial (aCSF).
  11. 11. El oligonucleótido modificado o su sal según la reivindicación 1 o 2, el compuesto de la reivindicación 3, el oligonucleótido modificado de la reivindicación 4, o la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 8-10, para uso en terapia.
  12. 12. El oligonucleótido modificado o su sal según la reivindicación 1 o 2, el compuesto de la reivindicación 3, el oligonucleótido modificado de la reivindicación 4, o la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 8-10, para uso en el tratamiento de una enfermedad asociada con Tau.
  13. 13. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 12, en donde la enfermedad asociada con tau es una enfermedad neurodegenerativa.
  14. 14. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 13, en donde la enfermedad neurodegenerativa es una tauopatía.
  15. 15. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 13, en donde la enfermedad neurodegenerativa es la enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal (FTD), FTDP-17, parálisis supranuclear progresiva (PSP), encefalopatía traumática crónica (CTE), degeneración ganglionar corticobasal (CBD), epilepsia o síndrome de Dravet.
  16. 16. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 15, en donde la enfermedad neurodegenerativa es la enfermedad de Alzheimer.
  17. 17. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 16, en donde la enfermedad de Alzheimer es enfermedad de Alzheimer leve.
  18. 18. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 15, en donde la enfermedad neurodegenerativa es la demencia frontotemporal (FTD).
  19. 19. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según la reivindicación 15, en donde la enfermedad neurodegenerativa es la parálisis supranuclear progresiva (PSP).
  20. 20. El oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 19, en donde el oligonucleótido modificado, sal, compuesto o composición farmacéutica se administra por administración intratecal.
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