ES2952183T3 - Dispositivo inmunocromatográfico para la extracción y medición de antígenos de carbohidratos - Google Patents

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Abstract

Se proporcionan un método y un dispositivo inmunocromatográfico, mediante el cual se puede realizar una medición suficientemente sensible realizando la extracción de nitrito durante un período suficiente, en un método inmunocromatográfico que extrae y mide antígenos de carbohidratos usando extracción de nitrito en una pieza de prueba de inmunocromatografía. Este dispositivo inmunocromatográfico tiene un puerto de adición de muestra en una almohadilla de muestra de pieza de prueba y comprende una pieza de prueba de inmunocromatografía y un recipiente que aloja la pieza de prueba. La pieza de prueba de inmunocromatografía sirve para extraer y medir antígenos de carbohidratos en la muestra e incluye la almohadilla de muestra a la que se agrega una muestra que tiene un nitrito o una solución ácida mezclada en ella, una región marcadora que incluye un anticuerpo marcado que es un anticuerpo marcado para antígenos de carbohidratos y una región de detección que tiene el anticuerpo para antígenos de carbohidratos inmovilizado en ella; forma un complejo anticuerpo-antígeno de carbohidrato-anticuerpo marcado en la región de detección; mide los antígenos de carbohidratos; tiene una región impregnada con un reactivo neutralizante, aguas arriba de la región marcadora; tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido cuando se usa una muestra mezclada con nitrito, más arriba de dicha región impregnada con el reactivo neutralizante; y tiene una región impregnada de nitrito cuando se utiliza una muestra mezclada con una solución ácida. El dispositivo inmunocromatográfico: (i) tiene un amplio puerto de adición de muestra para promover la extracción de antígenos de carbohidratos mediante el nitrito y el reactivo ácido sólido, manteniendo una solución de muestra de muestra agregada y suministrando la solución de muestra de muestra durante un período corto a la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito; y (ii) no tiene un espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra, para garantizar que la muestra se escape o se derrame desde el puerto de adición. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Dispositivo inmunocromatográfico para la extracción y medición de antígenos de carbohidratos
Campo técnico
La presente invención se refiere a un dispositivo inmunocromatográfico que comprende una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar, que es capaz de extraer el antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso en una pieza de prueba inmunocromatográfica. La invención también se refiere a un método correspondiente.
Antecedentes de la técnica
La mayoría de los ensayos de diagnóstico rápido que implican un método de inmunocromatografía como principio se han utilizado ampliamente como un medio para medir de forma rápida y sencilla la infección viral o bacteriana y determinar un plan de tratamiento para la misma.
En el caso de un ensayo de diagnóstico rápido de este tipo que implique como principio un método inmunocromatográfico común, se suspende un espécimen en una suspensión de muestra y luego se suministra la suspensión a una pieza de ensayo inmunocromatográfica, de modo que la medición se pueda realizar de forma rápida y sencilla.
Para la detección de microorganismos pertenecientes al género Estreptococo, tal como el estreptococo p-hemolítico del grupo A y el estreptococo intraoral, es necesario extraer un antígeno de la cadena de azúcar y medir el antígeno de la cadena de azúcar.
Por ejemplo, se ha informado de un método en el que se añaden previamente nitrito de sodio y un reactivo de neutralización a una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se pueda realizar una extracción de ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica solo mediante la operación de suspender un espécimen en una solución ácida tal como ácido acético y para suministrar la suspensión a la pieza de prueba inmunocromatográfica (consulte el documento de la técnica anterior WO 2005/121794 A l).
Además, existe un método, en el que se añade previamente un reactivo ácido y un reactivo de neutralización a una pieza de prueba inmunocromatográfica, y se suspende un espécimen en nitrito y se suministra a la pieza de prueba inmunocromatográfica.
Para un método de inmunocromatografía, puede ser necesario controlar la velocidad de desarrollo cromatográfico en una pieza de prueba inmunocromatográfica, y un método de inmunocromatografía para controlar la velocidad de desarrollo sobre la base de la forma del dispositivo, la posición de adhesión, el material a utilizar (un material tal como una tela no tejida), un reactivo o similar (consulte los documentos de la técnica anterior JP 2005-331471 A y 2005­ 331463 A).
E l documento del estado de la técnica US 2015/0010918 A1 divulga un método para determinar la presencia o ausencia de un analito en una muestra con una preparación mínima de la muestra. Proporciona además dispositivos inmunocromatográficos para determinar la presencia o ausencia de un analito en una muestra de la que se debe extraer el analito, comprendiendo dicho dispositivo una zona de extracción del analito en la que se impregnan una o más soluciones móviles de extracción, y en el que al menos una de dichas soluciones de extracción comprende un componente de plasma o suero animal.
Además, el documento de la técnica anterior EP 3032260 A1 proporciona un método de inmunoensayo para detectar el antígeno objetivo de detección en un analito a través de la extracción con un agente de extracción. La detección se realiza en presencia de un oligosacárido cíclico. Un kit de inmunocromatografía se usa para detectar bacterias grampositivas en un analito y proporciona una solución de dilución de analito, una parte de goteo de muestra, una parte de extracción de antígeno, una parte de retención de sustancia marcadora, un medio de inmunocromatografía que tiene una parte de detección y una parte de absorción. En el kit de inmunocromatografía se retiene un ácido orgánico en la parte de extracción del antígeno. El kit de inmunocromatografía contiene un oligosacárido cíclico y un compuesto de nitrito al contener al menos uno de un oligosacárido cíclico, un compuesto de nitrito y una mezcla de los mismos en la solución de dilución del analito y/o la parte de goteo de la muestra.
Aún más, el documento anterior EP 3324 185 describe un método de inmunoensayo que permite un inmunoensayo con alta sensibilidad a una alta tasa de desarrollo sin causar la agregación de portadores insolubles o una reacción no específica mientras mejora la eficiencia de la prueba y reduce el trabajo. El método de inmunoensayo utiliza un dispositivo de prueba e incluye: extraer un antígeno de un objetivo de detección en un analito con un agente de extracción; y detectar el objetivo de detección con un reactivo de detección capaz de unirse al antígeno. El agente de extracción es un ácido nitroso generado en el dispositivo de prueba por una reacción de contacto entre una sal de nitrito y un compuesto heterocíclico que tiene al menos un esqueleto seleccionado del grupo que consiste en un éster cíclico, una amida cíclica y una imida cíclica.
Sumario de la invención
Problema técnico
Para detectar microorganismos pertenecientes al género Estreptococo, tal como el estreptococo p-hemolítico del grupo A y el estreptococo intraoral, se extrae un antígeno de la cadena de azúcar y se mide el antígeno de la cadena de azúcar.
Para extraer un antígeno de la cadena de azúcar se necesita ácido nitroso. Dado que el ácido nitroso en solitario es inestable, la extracción de un antígeno con ácido nitroso se realiza mezclando una solución de nitrito y una solución ácida (ácido acético, ácido cítrico, ácido tartárico o similares) en uso para generar el ácido nitroso.
En el caso de detección por un método de inmunocromatografía, se puede aplicar, secar e incorporar cualquiera de una solución de ácido nitroso y una solución ácida en una pieza de prueba inmunocromatográfica. Tal reactivo, en comparación con un reactivo líquido, elimina la necesidad de la operación de mezclar reactivos y simplifica las operaciones, mientras que un problema del reactivo es la sensibilidad insuficiente porque un tratamiento de extracción con ácido nitroso no se realiza suficientemente cuando una muestra se desarrolla en un corto periodo de tiempo, como en un método de inmunocromatografía general, después de la mezcla de reactivos.
En un reactivo, en el que la extracción de ácido nitroso se realiza mediante la adición de un reactivo líquido, por lo general, una muestra se somete a extracción durante 1 a 2 minutos. En consecuencia, para producir una sensibilidad equivalente a la de una forma líquida, es necesario retener una muestra durante 1 a 2 minutos antes de la neutralización.
Es un objeto de la presente invención proporcionar un método y un dispositivo inmunocromatográfico que sean capaces de medir con suficiente sensibilidad realizando un tratamiento de extracción con ácido nitroso durante un período de tiempo suficiente en un método inmunocromatográfico de extracción y medición de un antígeno de cadena de azúcar por extracción con ácido nitroso en una pieza de prueba inmunocromatográfica.
Solución técnica
El objeto de la invención se realiza con un dispositivo inmunocromático según la reivindicación 1. Usando el dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención, el estreptococo p-hemolítico de grupo A puede detectarse con alta sensibilidad.
Los inventores de la presente invención han realizado estudios intensivos con respecto a una técnica para realizar un tratamiento de extracción con ácido nitroso durante un período de tiempo suficiente en un método de inmunocromatografía para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar, que es capaz de extraer el antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso en una pieza de prueba inmunocromatográfica.
Se encontró que el objetivo se puede lograr ensanchando un puerto de adición de un dispositivo inmunocromatográfico de tal manera que se pueda agregar una gran cantidad de muestra e incorporando al mismo el mecanismo para evitar que un espécimen fluya fuera del puerto de adición y para ajustar un desarrollo velocidad, completando así la presente invención. Específicamente, el dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la invención comprende una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra, y un recipiente que almacena la pieza de prueba, teniendo el dispositivo inmunocromatográfico un puerto de adición de espécimen en una almohadilla de muestra de la pieza de prueba, comprendiendo la pieza de prueba inmunocromatográfica: una almohadilla de muestra a la que se añade una muestra mezclada con nitrito o una solución ácida; una región de etiqueta que comprende un anticuerpo marcado obtenido marcando un anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar; y una región de detección en la que se inmoviliza el anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar, en la que se forma un complejo anticuerpo-antígeno de la cadena de azúcar-anticuerpo marcado en la región de detección para medir el antígeno de la cadena de azúcar, y la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región impregnada con un reactivo de neutralización corriente arriba de la región de etiqueta, y que además tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido cuando se utilice la muestra mezclada con el nitrito, o una región impregnada con nitrito cuando se utilice el espécimen mezclado con la solución ácida, corriente arriba de la región impregnada con el reactivo de neutralización, en el que el dispositivo inmunocromatográfico
(i) tiene un puerto de adición de especímenes con un tamaño de 24 a 75 mm(i) 2 para promover la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido reteniendo una solución de muestra de espécimen añadida y suministrando la solución de muestra de espécimen en poco tiempo a la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, y
(ii) no tiene espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra para evitar que la muestra se escape del puerto de adición.
Tal dispositivo inmunocromatográfico tiene la ventaja de que se puede ajustar el tiempo de desarrollo de una solución de muestra de espécimen en una pieza de prueba inmunocromatográfica después de la adición de la muestra. Como resultado, un espécimen puede tratarse suficientemente en la pieza de prueba mediante el uso de un reactivo de tratamiento de muestra agregado a la pieza de prueba inmunocromatográfica.
Realizaciones ventajosas de la invención se definen mediante las reivindicaciones dependientes.
La invención se refiere además a un método para medir un antígeno de cadena de azúcar en un espécimen de acuerdo con un método de inmunocromatografía utilizando el dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 14.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 es una vista que muestra esquemáticamente una estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica (pieza de prueba de una almohadilla) que tiene una región de reactivo ácido sólido y una región de reactivo de neutralización.
La figura 2 es una vista que muestra esquemáticamente una estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica (pieza de prueba de dos almohadillas) que tiene una región de reactivo ácido sólido y una región de reactivo de neutralización.
La figura 3 es una vista en perspectiva que muestra el aspecto exterior de un dispositivo inmunocromatográfico. La figura 3A muestra el dispositivo de la presente invención que tiene un puerto adicional ancho. La figura 3B muestra un dispositivo convencional que tiene un puerto de adición estrecho.
La figura 4 es una vista en planta que muestra el aspecto exterior de un dispositivo inmunocromatográfico. La figura 4A muestra el dispositivo de la presente invención que tiene el puerto de adición ancho. La figura 4B muestra un dispositivo convencional que tiene el puerto de adición estrecho.
Descripción de realizaciones
El dispositivo inmunocromatográfico simplifica un tratamiento de extracción de un antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso en una pieza de prueba inmunocromatográfica, de manera que el antígeno de cadena de azúcar utilizado como sustancia a detectar puede medirse con rapidez y precisión. El dispositivo inmunocromatográfico comprende una pieza de prueba inmunocromatográfica y un recipiente que almacena la pieza de prueba, y se puede producir incorporando la pieza de prueba inmunocromatográfica en el dispositivo inmunocromatográfico. Tal contenedor de almacenamiento puede evitar la degradación de la pieza de prueba, que es causada, por ejemplo, por los rayos ultravioleta o la humedad contenida en el aire. Además, en el caso de tratar un espécimen o una muestra que tenga contaminación o infectividad, tal recipiente de almacenamiento puede evitar que un probador que realiza un ensayo se contamine o se infecte con el espécimen o la muestra. Por ejemplo, se puede usar una carcasa hecha con resina que tenga un tamaño adecuado como recipiente de almacenamiento, y el dispositivo inmunocromatográfico se puede acomodar en la carcasa. De lo contrario, la superficie de una pieza de prueba, en la que se ha inmovilizado un antígeno o un anticuerpo, se puede recubrir con una película hecha de resina o similar (laminado superior).
La pieza de prueba inmunocromatográfica comprende un soporte que tiene una región de detección, sobre la que se inmoviliza un anticuerpo (Anticuerpo 1) que captura una sustancia a detectar (antígeno, etc.), una región de etiqueta que tiene un anticuerpo móvil marcado (Anticuerpo 2), un almohadilla de muestra a la que se agrega un espécimen, una banda de absorción que absorbe una solución de espécimen desarrollada, una hoja de respaldo para adherir estos elementos entre sí, y similares.
Cabe señalar que el número de regiones de detección y el tipo de anticuerpo marcado contenido en la región de etiqueta no se limitan a uno, y que, utilizando anticuerpos correspondientes a una pluralidad de sustancias a detectar, se pueden medir dos o más antígenos en una sola pieza de prueba.
El soporte es un material que tiene la propiedad de inmovilizar un anticuerpo utilizado para capturar una sustancia a detectar (un antígeno), y, además, no impide el movimiento de un líquido en sentido horizontal. Preferiblemente, el soporte es una membrana delgada porosa (una membrana) que tiene acción capilar, y es un material capaz de transportar un líquido y componentes dispersos en el líquido según la absorción. El material usado para el soporte no está particularmente limitado, y ejemplos del material incluyen celulosa, nitrocelulosa, acetato de celulosa, difluoruro de polivinilideno (PVDF), fibra de vidrio, nailon y policetona. Entre estos materiales, es más preferible una membrana fina o una membrana de nitrocelulosa. Una membrana, en la que se inmoviliza un anticuerpo, se denomina "membrana inmovilizada con anticuerpo".
La región de etiqueta consiste en un sustrato poroso que comprende un anticuerpo marcado, y una fibra de vidrio, tela no tejida y similares de uso común pueden usarse aquí como material para el sustrato. El sustrato es preferiblemente una almohadilla que tiene un espesor de aproximadamente 0,3 mm a 0,6 mm, para que el sustrato se impregne con una gran cantidad de anticuerpo marcado. Un sustrato poroso que se impregna con un anticuerpo marcado y luego se seca también se denomina almohadilla seca.
Para el mareaje de un anticuerpo marcado, se utilizan en muchos casos enzimas tales como fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano picante, coloides metálicos tales como coloides de oro, partículas de sílice, partículas de celulosa, partículas de poliestireno coloreadas, partículas de látex coloreadas, etc. Cuando se utilizan partículas coloidales de metal o partículas coloreadas tales como partículas coloreadas de poliestireno o partículas coloreadas de látex, el color se desarrolla por aglomeración de estos reactivos de marcaje. Así, se mide el color desarrollado de esta manera. Las partículas en las que se inmovilizan los anticuerpos se denominan partículas inmovilizadas con anticuerpos.
La región de detección indica una región del soporte en la que se inmoviliza un anticuerpo utilizado para capturar una sustancia a detectar (un antígeno). En la región de detección, se establece al menos una región en la que se inmoviliza un anticuerpo utilizado para capturar un antígeno. La región de detección puede estar comprendida en el soporte y un anticuerpo puede estar inmovilizado en el soporte.
La almohadilla de muestra es un sitio al que se agrega un espécimen y es un material poroso. La almohadilla de muestra es un sitio ubicado más corriente arriba de la pieza de prueba inmunocromatográfica. Como material para la almohadilla de muestra, se puede usar un filtro de uso común, fibra de vidrio, tela no tejida, etc. Para utilizar una gran cantidad de espécimen en inmunoensayo, la almohadilla de muestra es preferiblemente una almohadilla que tiene un espesor de aproximadamente 0,3 mm a 1 mm. El espécimen también incluye una muestra preparada utilizando el espécimen, como una muestra obtenida suspendiendo el espécimen en otra solución.
La banda de absorción es un elemento para absorber componentes, que se suministran al soporte y no están asociados con la reacción en la región de detección. Como material para la banda de absorción, se puede utilizar un filtro, una esponja o similar que retiene el agua con gran facilidad, que consiste en un compuesto común natural de alto peso molecular, un compuesto sintético de alto peso molecular, etc. Con el fin de promover el desarrollo de un espécimen, se utiliza preferentemente un material altamente absorbente de agua como banda de absorción.
La hoja de respaldo es un elemento utilizado para la adhesión y/o inmovilización de todos los materiales antes mencionados, a saber, el soporte, la almohadilla de muestra, la región de etiqueta, la banda de absorción y similares, en la que estos materiales se superponen parcialmente entre sí. La hoja de respaldo no se requiere necesariamente, si estos materiales se disponen e inmovilizan con intervalos óptimos. Sin embargo, en general, la hoja de respaldo se usa preferiblemente por conveniencia o facilidad de producción o uso.
En la pieza de prueba inmunocromatográfica puede estar presente además una región de visualización de control (un elemento). La región de visualización de control es un sitio que muestra que una prueba se lleva a cabo con precisión. Por ejemplo, la región de visualización de control está ubicada corriente abajo de la región de detección y emite señales tales como coloración, cuando una muestra de espécimen pasa a través de la región de detección y llega a la región de visualización de control. En la región de visualización de control, una sustancia que se une a un anticuerpo unido a un portador marcado puede estar en fase sólida, o un reactivo como un indicador de pH, cuyo color cambia cuando llega un espécimen, también puede estar en fase sólida. Cuando dicho anticuerpo unido a un portador marcado es un anticuerpo monoclonal de ratón, se puede usar un anticuerpo IgG anti-ratón.
El tamaño de una pieza de prueba inmunocromatográfica no está limitado. Por ejemplo, su altura es de varios cm a más de diez y menos de 20 cm, y su ancho es de aproximadamente varios mm a varios cm.
En la pieza de prueba que tiene la forma descrita anteriormente, el espécimen se pasa a través de un canal de flujo poroso formado conectando una serie de elementos, como la almohadilla de muestra, la región de etiqueta, el soporte, la región de detección, la banda de absorción y similares, entre sí. En consecuencia, en la presente realización, todos estos componentes constituyen una región de movimiento del espécimen. También puede haber una realización en la que el espécimen no penetre en varios materiales constitucionales, sino que pase a través de la interfaz, dependiendo de los materiales o formas de los materiales constitucionales. Sin embargo, dado que la región de movimiento del espécimen definida en la presente descripción es irrelevante para si la muestra pasa al material o a través de la interfaz, la pieza de prueba que tiene la realización antes mencionada también está incluida en el alcance de la presente descripción.
En el caso de medir un antígeno de cadena de azúcar en un espécimen utilizando la pieza de prueba inmunocromatográfica, es necesario extraer primero el antígeno de cadena de azúcar en el espécimen. La extracción del antígeno de la cadena de azúcar se realiza tratando el espécimen que contiene el antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso. El ácido nitroso puede generarse mezclando nitrito, tal como nitrito de sodio con un ácido, y el espécimen que contiene el antígeno de la cadena de azúcar puede tratarse con el ácido nitroso así generado. El antígeno extraído se une a través de una reacción antígeno-anticuerpo al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica. A este respecto, el sistema de reacción se vuelve fuertemente ácido si queda ácido nitroso en el sistema de reacción, de modo que se inhibe la reacción antígeno-anticuerpo. Por lo tanto, es necesario neutralizar el ácido nitroso en el sistema de reacción.
En el método de medir un antígeno de cadena de azúcar mezclando nitrito con un ácido para generar ácido nitroso, extrayendo el antígeno de cadena de azúcar de un espécimen con el ácido nitroso, neutralizando el ácido nitroso y luego permitiendo que el antígeno de cadena de azúcar se una al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica, los ejemplos del método de extracción y medición del antígeno de la cadena de azúcar incluyen los siguientes métodos. En cualquiera de los métodos, la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso y la neutralización se realizan en la pieza de prueba inmunocromatográfica. Para realizar la extracción del antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso sobre la pieza de prueba inmunocromatográfica, la pieza de prueba inmunocromatográfica se puede impregnar con un reactivo ácido o nitrito. Para realizar la neutralización de la pieza de prueba inmunocromatográfica, la pieza de prueba inmunocromatográfica se puede impregnar con un reactivo de neutralización.
(A) Un espécimen se mezcla previamente con una solución ácida y la mezcla se agrega a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrito y un reactivo de neutralización. Cuando la solución mixta llega a la región impregnada con el nitrito, el nitrito reacciona con el ácido para generar ácido nitroso, de modo que se extrae un antígeno de cadena de azúcar en el espécimen. El extracto del antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en la región impregnada con el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica, y el antígeno de la cadena de azúcar se une al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica y así puede detectarse. En este método, ejemplos de la solución ácida utilizada incluyen ácido acético, ácido clorhídrico, ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.
(B) Un espécimen se mezcla previamente con una solución de nitrito y la mezcla se agrega a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con un reactivo ácido y un reactivo de neutralización. Cuando la solución mixta llega a la región impregnada con el reactivo ácido, el nitrito reacciona con el ácido para generar ácido nitroso, de modo que se extrae un antígeno de cadena de azúcar en el espécimen. El extracto del antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en la región impregnada con el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica neutralizante, y el antígeno de la cadena de azúcar se une al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica y así puede detectarse.
En la pieza de prueba inmunocromatográfica para realizar el método (A) o (B) descrito anteriormente, el reactivo ácido o el nitrato y el reactivo de neutralización se impregnan corriente arriba de la región de etiqueta (en el lado corriente arriba a lo largo del flujo del espécimen, donde la almohadilla de muestra está presente), es decir, dentro de la almohadilla de muestra o entre la almohadilla de muestra y la región de etiqueta. La pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que el nitrito y el reactivo de neutralización están impregnados dentro de la almohadilla de muestra o entre la almohadilla de muestra y la región de etiqueta, puede usarse en el método (A) descrito anteriormente. Además, la pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que el reactivo ácido y el reactivo de neutralización están impregnados dentro de la almohadilla de muestra o entre la almohadilla de muestra y la región de etiqueta, puede usarse en el método (B) descrito anteriormente. Cabe señalar que como reactivo ácido que se va a impregnar en la pieza de prueba inmunocromatográfica, se usa un reactivo ácido sólido. De acuerdo con estos métodos, una sustancia a detectar en una muestra de prueba se puede medir de forma precisa y específica, independientemente de la cantidad de la muestra de prueba sometida a una prueba.
El reactivo ácido sólido o el nitrito pueden impregnarse en la almohadilla de muestra, o pueden impregnarse en una almohadilla hecha de un material poroso que sea diferente de la almohadilla de muestra, como una tela no tejida, y el reactivo ácido sólido obtenido: se puede disponer material poroso impregnado o material poroso impregnado con nitrito entre la almohadilla de muestra y la región de etiqueta, es decir, en el lado corriente arriba de la región de etiqueta. Aquí, la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito puede ponerse en contacto o no con la almohadilla de muestra o la región de etiqueta.
La región impregnada con un reactivo también se denomina almohadilla impregnada con un reactivo.
El reactivo de neutralización se dispone corriente abajo de la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito. El reactivo de neutralización se puede impregnar en la almohadilla de muestra, o se puede impregnar en el soporte, o se puede impregnar en una almohadilla hecha de un material poroso diferente del soporte, tal como una tela no tejida, y el neutralizante obtenido el material poroso impregnado de reactivo se puede disponer entre la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región de etiqueta. Es decir, la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región impregnada con un reactivo de neutralización corriente arriba de la región de etiqueta, y además tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido o nitrito corriente arriba de la región impregnada con el reactivo de neutralización. Aquí, la región impregnada con el reactivo de neutralización puede ponerse en contacto o no con la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito o la región de etiqueta.
La región impregnada con el reactivo ácido sólido se denomina región de reactivo ácido sólido, la región impregnada con el nitrito se denomina región de nitrito y la región impregnada con el reactivo de neutralización se denomina región de reactivo de neutralización o región reactiva básica.
La pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región de reactivo ácido sólido o una región de nitrito y una región de reactivo de neutralización tiene, en el soporte, una almohadilla de muestra, una región de reactivo ácido sólido o una región de nitrito, una región de reactivo de neutralización, una región de etiqueta, una detección y una banda de absorción corriente arriba de la misma, y la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito pueden ubicarse en la almohadilla de muestra. Además, la almohadilla de muestra, la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito, la región de reactivo de neutralización, la región de marcaje, la región de detección y la banda de absorción pueden ponerse en contacto o no con una región adyacente a la misma. Además, la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito, la región del reactivo de neutralización y la región del marcador no están necesariamente impregnadas en cada material poroso diferente, y una pluralidad o todas las regiones pueden impregnarse en un único material poroso.
El reactivo ácido sólido utilizado para la pieza de prueba inmunocromatográfica está en estado sólido a temperatura normal y no se volatiliza a temperatura alta.
Ejemplos del reactivo ácido sólido que se usa preferiblemente pueden incluir ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.
Si se usa un ácido con una valencia más alta, por ejemplo, ácido cítrico, como reactivo ácido sólido preferido, la extracción se puede realizar con una cantidad menor de ácido. Por otro lado, si la valencia de un ácido es la misma, por ejemplo, el ácido maleico o el ácido tartárico que tienen una constante de disociación ácida más pequeña son más eficientes.
Además, el reactivo ácido sólido es preferiblemente un reactivo que no está coloreado en la pieza de prueba inmunocromatográfica, y más específicamente, un reactivo que tiene color blanco en estado seco o apenas está coloreado por calor seco u oxidación.
Ejemplos del nitrito incluyen nitrito de sodio y nitrito de potasio.
La cantidad del reactivo ácido sólido o el nitrito, es decir, la cantidad del reactivo ácido sólido o el nitrito impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica no está particularmente limitada. En general, la cantidad del reactivo ácido sólido o el nitrito es de aproximadamente 0,01 |jg a 1 mg, y es preferiblemente de aproximadamente 0,1 |jg a 0,1 mg, con respecto a una única pieza de prueba inmunocromatográfica. Sin embargo, es preferible seleccionar una cantidad óptima, en la que se puedan obtener efectos según el tipo de reactivo ácido sólido o el nitrito a utilizar, la composición de la suspensión del espécimen, la cantidad añadida, etc.
Para impregnar una almohadilla de muestra o un material poroso con el reactivo ácido sólido o el nitrito, el reactivo ácido sólido o el nitrito se disuelven una vez en una solución, y la solución obtenida se aplica luego a la almohadilla de muestra o al material poroso y luego se seca.
El reactivo de neutralización se encuentra en estado sólido a temperatura normal y no se volatiliza a temperatura alta.
Ejemplos del reactivo de neutralización que se usa preferiblemente incluyen base T ris (tris(hidroximetil)aminometano), hidróxido de sodio, hidrógeno fosfato dipotásico, citrato trisódico y un tampón de Good que tiene una capacidad de tamponamiento en el rango alcalino.
La cantidad del reactivo de neutralización, es decir, la cantidad del reactivo de neutralización impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica no está particularmente limitada. En general, el reactivo de neutralización se usa en una cantidad de aproximadamente 0,01 jg a 1 mg, y preferiblemente de aproximadamente 0,1 jg a 0,1 mg, para una sola pieza de prueba inmunocromatográfica. Sin embargo, es preferible seleccionar una cantidad óptima, en la que se puedan obtener efectos según el tipo de reactivo de neutralización utilizado, la composición de la suspensión del espécimen, la cantidad añadida, etc.
Para impregnar una almohadilla de muestra o un material poroso con el reactivo de neutralización, el reactivo de neutralización puede disolverse una vez en una solución, la solución obtenida puede aplicarse luego a la almohadilla de muestra o al material poroso y, posteriormente, puede secarse.
La figura 1 y la figura 2 son vistas que muestran, cada una, una realización preferida de una pieza de prueba inmunocromatográfica típica. La pieza de prueba inmunocromatográfica que se muestra en la figura 1 o la figura 2 es una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con un reactivo ácido sólido y un reactivo de neutralización. Sin embargo, se puede impregnar nitrato en lugar del reactivo ácido sólido, y el resultado es una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrato y un reactivo de neutralización. Los expertos en la materia pueden diseñar y producir adecuadamente una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrato y un reactivo de neutralización. Cabe señalar que la pieza de prueba inmunocromatográfica no se limita a las que se muestran en la figura 1 y la figura 2. En la figura 1 y la figura 2, el número de referencia 1 indica un soporte, el número de referencia 2 indica una región de etiqueta, el número de referencia 3 indica una región de detección, el número de referencia 4 indica una almohadilla de muestra, el número de referencia 7 indica una banda de absorción y el número de referencia 8 denota una hoja de respaldo. Además, un laminado superior puede adherirse a toda la pieza de prueba.
La figura 1A y la figura 2A son vistas desde arriba, y la figura 1B y la figura 2B son vistas en sección transversal. En el ejemplo que se muestra en la figura 1, un soporte 1 sobre el que se forma una región de detección 3, una banda de absorción 7, una región de etiqueta 2, una almohadilla de muestra 4 y similares, se laminan sobre una hoja de respaldo 8 hecha de resina o similares. Como se muestra en la figura 1, un extremo de la banda de absorción 7 está laminado en un extremo del soporte 1, el otro extremo del soporte 1 está laminado en un extremo de la región de etiqueta 2 y el otro extremo de la región de etiqueta 2 está laminado en un extremo de la almohadilla de muestra 4. Una porción corriente arriba de la almohadilla de muestra 4 está impregnada con un reactivo ácido sólido, y una porción corriente abajo de la almohadilla de muestra está impregnada con un reactivo de neutralización, que está algo apartado de la porción corriente arriba. La región impregnada con el reactivo ácido sólido se denomina región de reactivo ácido sólido 5, y la región impregnada con el reactivo de neutralización se denomina región de reactivo de neutralización 6. En esta pieza de prueba, la almohadilla de muestra también sirve como una región de reactivo ácido sólido 5 y una región de reactivo de neutralización 6. Es decir, la región del reactivo ácido sólido y la región del reactivo de neutralización están presentes en la almohadilla de muestra. Esta pieza de prueba, en la que la región del reactivo ácido sólido y la región del reactivo de neutralización se establecen como un material poroso (almohadilla), también se denomina pieza de prueba de una sola almohadilla. En el ejemplo que se muestra en la figura 2, la región de reactivo ácido sólido 5 y/o la región de reactivo de neutralización 6 están corriente arriba de la región de etiqueta 2, y se superponen entre sí, de modo que se forma un canal de flujo de un flujo lateral continuo. En la pieza de prueba que se muestra en la figura 2, la región de reactivo ácido sólido 5 también sirve como almohadilla de muestra. Es decir, la región del reactivo ácido sólido está presente en la almohadilla de muestra. En esta pieza de prueba, en la que la región del reactivo ácido sólido y la región del reactivo de neutralización se establecen como dos materiales porosos diferentes (almohadillas), también se denomina pieza de prueba de dos almohadillas. Una almohadilla de muestra puede estar presente además corriente arriba de la región de reactivo ácido sólido. En la pieza de prueba que se muestra en la figura 2, la región de reactivo ácido sólido 5 y la región de reactivo de neutralización 6 están impregnadas en diferentes materiales porosos. Sin embargo, en un solo material poroso (almohadilla), la región de reactivo ácido sólido 5 se establece en una porción de corriente arriba, y la región de reactivo de neutralización 6 se establece en una porción corriente abajo, como en la almohadilla de muestra de la pieza de prueba que se muestra en la figura 1.
La pieza de prueba cromatográfica descrita anteriormente se acomoda en un contenedor de almacenamiento que se muestra en las figuras 3 y 4, y se usa como un dispositivo inmunocromatográfico (figuras 3 y 4). El contenedor de almacenamiento que se muestra en las figuras 3 y 4 comprende una porción de contenedor como porción inferior y una porción de tapa como porción superior. El contenedor de almacenamiento tiene, como se muestra en las figuras 3 y 4, un puerto de adición de especímenes (también denominado orificio de adición) 9 y una porción de evaluación 10. Cuando la pieza de prueba cromatográfica descrita anteriormente se acomoda en el recipiente de almacenamiento, un puerto de adición de especímenes que puede suministrar una solución de muestra de espécimen a la almohadilla de muestra se coloca encima de la almohadilla de muestra. Cuando se agrega un espécimen al puerto de adición de especímenes del contenedor, el espécimen se infiltra en la almohadilla de muestras. Cuando la pieza de prueba cromatográfica se aloja en el contenedor de almacenamiento, la porción de evaluación se coloca por encima de la región de detección, de manera que la región de detección se puede observar a través del orificio de la porción de evaluación del contenedor.
El dispositivo inmunocromatográfico puede realizar un tratamiento de extracción con ácido nitroso durante un período de tiempo suficiente en un método inmunocromatográfico para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar, que es capaz de extraer el antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica. Por lo tanto, el dispositivo inmunocromatográfico tiene las siguientes características estructurales. Las siguientes características estructurales son características estructurales relacionadas con el mecanismo para ajustar la tasa de desarrollo de una muestra de espécimen.
(1) En el dispositivo inmunocromatográfico se establece un amplio puerto de adición.
Por ejemplo, el puerto de adición de un dispositivo inmunocromatográfico convencional (QuickNavi(TM)-Strep A, Denka Seiken Co., Ltd.), en el que se almacena una pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una longitud de 5 a 9 cm, preferiblemente 7 cm, y un ancho de 0,3 a 0,7 cm, preferiblemente 0,5 cm, se establece como un puerto de adición sustancialmente rectangular que tiene un tamaño de aproximadamente 3,5 mm * aproximadamente 5,5 mm (19,25 mm2). El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico, en el que se almacena la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene el mismo tamaño que el anterior, se establece como un puerto de adición sustancialmente rectangular que tiene un tamaño de aproximadamente 3,5 mm * aproximadamente 11 mm (38,5 mm2). Dado que el dispositivo inmunocromatográfico y la pieza de prueba inmunocromatográfica almacenada en él generalmente tienen tamaños similares, un dispositivo inmunocromatográfico de 3 cm de ancho y 9 cm de largo que tenga un puerto de adición sustancialmente rectangular de 3 a 5 mm * 8 a 15 mm (24 a 75 mm2) es un dispositivo inmunocromatográfico que tiene un amplio puerto de adición y es capaz de ejercer los efectos del dispositivo inmunocromatográfico. Los lados más largos del puerto de adición son lados paralelos a los lados más largos de la pieza de prueba cromatográfica, es decir, lados a lo largo de la dirección del flujo de una solución de muestra de espécimen. La longitud del lado más largo del puerto adicional también se denomina longitud del puerto adicional, y la longitud del lado más corto del mismo también se denomina ancho del puerto adicional. En el ejemplo descrito anteriormente, se usa un puerto de adición sustancialmente rectangular. Sin embargo, la forma del puerto de adición puede ser triangular o redonda. Cuando el tamaño del puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico se indica por área, el área es de 24 a 75 mm2, preferiblemente de 35 a 75 mm2.
Cuando una muestra se trata con un reactivo de tratamiento de especímenes establecido en una pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con un método de inmunocromatografía convencional, la capacidad de tratamiento de especímenes es débil debido a una pequeña área en la que la solución de muestra entra en contacto con una región impregnada con el reactivo de tratamiento de especímenes. Además, el tratamiento del espécimen se realiza mientras se desarrolla gradualmente la pieza de prueba inmunocromatográfica. Por lo tanto, una solución de muestra desarrollada primero y una solución de muestra desarrollada más tarde difieren en la concentración del reactivo de tratamiento del espécimen. En consecuencia, el tratamiento del espécimen no se puede realizar de forma fiable.
El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico se establece como un puerto de adición ancho y, por lo tanto, puede suministrar una gran cantidad de solución de muestra de espécimen en poco tiempo a una región impregnada con un reactivo de tratamiento de espécimen, es decir, una región impregnada con un reactivo ácido sólido o una región impregnada con un ácido nitroso, por inmunocromatografía. Como resultado, se puede promover la extracción del antígeno de la cadena de azúcar en la pieza de prueba inmunocromatográfica. La cantidad de solución de muestra de espécimen que se puede suministrar a la vez es de 10 μL a 200 μL.
Como resultado, no se produce la diferencia en la concentración del reactivo de tratamiento del espécimen provocada por la diferencia temporal. Por lo tanto, el tratamiento del espécimen con inmunocromatografía se puede promover y realizar de manera fiable y eficiente.
(2) El dispositivo inmunocromatográfico está configurado para no tener espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra colocada debajo para evitar que la muestra se escape del puerto de adición.
El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico se establece como un puerto de adición ancho y suministra una gran cantidad de solución de muestra de espécimen en poco tiempo a la vez. La porción de borde, que es un contorno, de un puerto de adición tiene una altura determinada (de 1 a 5 mm), y una solución de muestra de espécimen suministrada se mantiene temporalmente dentro del puerto de adición.
Como resultado, la solución de muestra de espécimen tarda mucho en absorberse por completo en una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que la solución de muestra puede escapar al exterior de la pieza de prueba inmunocromatográfica sin ser absorbida por la pieza de prueba inmunocromatográfica.
En el dispositivo inmunocromatográfico, la almohadilla de muestra está sostenida por una hoja de respaldo que tiene un tamaño de contorno equivalente o mayor que el del puerto de adición, como una hoja de respaldo que sostiene la almohadilla de muestra, para evitar que la muestra se escape del puerto de adición. Por lo tanto, la hoja de respaldo puede funcionar para presionar la almohadilla de muestra contra el puerto de adición para despejar el espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra. El dispositivo inmunocromatográfico así configurado puede evitar que se escape una solución de muestra.
Si la almohadilla de muestra tiene un espesor desigual, una porción delgada de la almohadilla de muestra forma fácilmente un espacio desde el puerto de adición y fácilmente hace que se escape una solución de muestra.
Para el dispositivo inmunocromatográfico, se puede diseñar un pedestal para el contenedor del dispositivo como un pedestal alto para la porción delgada de la almohadilla de muestra y como un pedestal bajo para la porción gruesa para eliminar el espacio entre el puerto de adición y la almohadilla incluso que tiene un espesor desigual. El dispositivo inmunocromatográfico así configurado puede evitar que se escape una solución de muestra.
Como resultado, la extracción del antígeno de la cadena de azúcar en la pieza de prueba inmunocromatográfica se puede llevar a cabo de manera eficiente.
(3) Preferiblemente, se selecciona un material altamente hidrofóbico como material (tela no tejida) para usar en la producción de una almohadilla impregnada con un reactivo de tratamiento de especímenes, tal como un reactivo ácido sólido, nitrito o un reactivo de neutralización, para la pieza de prueba inmunocromatográfica y, por lo tanto, puede ajustar y disminuir la velocidad del flujo de líquido, es decir, el tiempo durante el cual se desarrolla una solución de muestra de espécimen en la pieza de prueba inmunocromatográfica.
En este caso, los ejemplos del material altamente hidrófobo incluyen polietileno, poliéster, poliestireno, polipropileno, rayón y nailon.
Ejemplos del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización incluyen un material poroso que es un tejido que tiene un peso base de 10 a 400 g/m2 y un espesor de 0,1 a 2,0 mm, absorbe agua en una cantidad de 10 a 100 μl/cm2 por cm/m2, tiene una velocidad de absorción de agua de 1,0 a 5,0 μl/s, retiene agua en una cantidad de 10 a 100 μl/cm2 tras un fragmento de 1 cm/m2 se permite que en estado húmedo entre en contacto con una membrana y se deja reposar durante 5 minutos, y preferiblemente tiene un área de dispersión de líquido de 20 mm2 o menor después de un fragmento de 1 cm/m2 se permite que entre en contacto con una membrana en estado húmedo y se deja reposar durante 5 minutos, a saber, tiene tres propiedades de ser altamente absorbible en agua, ser altamente retenible en agua (retenible en líquido) y ser poco liberable en líquido o continuamente liberable en líquido. Ejemplos específicos de los mismos incluyen un filtro hecho de fibra de algodón de celulosa y un filtro de vidrio hecho de fibra de vidrio. Ejemplos de dicho filtro incluyen el n.° 26-3 de Toyo Roshi Kaisha, Ltd. Además, el filtro que se utilizará tiene una gran capacidad y puede retener suficientemente una solución ácida que llega al filtro más tarde que un espécimen desde la parte corriente arriba. Usando tal material poroso, el reactivo de neutralización puede impregnarse en el mismo en una cantidad que puede neutralizar suficientemente un espécimen desde el que se ha extraído un antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso generado a través de una reacción de nitrito con el reactivo ácido. Además, la almohadilla puede absorber y retener una gran cantidad de líquido y mantiene la propiedad de liberación. Por lo tanto, si se desarrolla un líquido que contiene ácido nitroso corriente arriba de la pieza de prueba inmunocromatográfica en el momento del juicio o después, la almohadilla puede tener una capacidad de neutralización suficiente y puede evitar que la solución ácida llegue a la región de detección en la que se inmoviliza el anticuerpo. Como resultado, se suprime una reacción no específica y el antígeno de la cadena de azúcar puede detectarse sin causar la reacción no específica. Por otro lado, ejemplos específicos del filtro de vidrio altamente absorbente de agua, altamente retenible de agua y de baja capacidad de liberación incluyen GS-25 de Toyo Roshi Kaisha, Ltd., que se puede impregnar con una mayor cantidad de reactivo de neutralización debido a la alta propiedad de absorción de agua, y evita que la solución ácida llegue a la región de detección inmovilizada debido a la propiedad de alta retención de agua y la propiedad de baja liberación de agua. Como resultado, se puede suprimir una reacción no específica en un caso negativo y se puede prevenir el desarrollo de color de una línea en el momento del juicio o después en un caso positivo.
El "peso base" del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización es de 10 a 400 g/m2. Aquí, el "peso base" indica un peso por unidad de área (1 m2) de un tejido o similar. El peso base se puede cambiar apropiadamente ajustando la cantidad o la composición del reactivo de neutralización impregnado en la almohadilla. Si el gramaje es de 30 g/m2 o menos, el material poroso tiene una alta porosidad y se rasga fácilmente cuando se impregna con el reactivo de neutralización y, por lo tanto, es difícil de manejar durante la producción inmunocromatográfica. Por lo tanto, el peso base es preferentemente de 50 g/m2 o más. Si el gramaje es de 300 g/m2 o más, el material poroso tiene una porosidad baja y no permite la penetración uniforme de un espécimen en el material, aunque depende de la composición del reactivo de neutralización, de modo que el espécimen no se puede mezclar con el reactivo de neutralización. Por lo tanto, el peso base es preferentemente de 300 g/m2 o menos. El peso base es lo más preferiblemente de 250 a 270 g/m2.
El "espesor" del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización es preferentemente de 0,1 a 2,0 mm. El espesor se puede cambiar adecuadamente ajustando la cantidad o composición del reactivo de neutralización impregnado en la almohadilla. Si el espesor es de 0,4 mm o menos, el material poroso se rasga fácilmente cuando se impregna con el reactivo de neutralización y, por lo tanto, es difícil de manejar durante la producción inmunocromatográfica. Por tanto, el espesor es preferentemente de 0,4 a 0,8 mm y más preferentemente de aproximadamente 0,6 mm considerando la facilidad con la que se ajusta la cantidad de reactivo de neutralización impregnado y la facilidad de manipulación durante la producción inmunocromatográfica.
La propiedad de "absorción de agua" es preferentemente de 10 a 100 μl/cm2 en términos de cantidad de agua absorbida por cm/m2, y de 1,0 a 5,0 μl/s en términos de velocidad de absorción de agua. La cantidad de agua absorbida y la velocidad de absorción de agua se determinan preparando 200 μl de una solución coloreada (Tween 20 al 1 % Red n.° 102) en una celda de una placa EIA de 96 pocillos, colocando en ella una pieza de ensayo, en la que se el material que tiene un tamaño de 5 * 60 mm se adhiere a una hoja de soporte, midiendo el tiempo que tarda la solución en llegar al extremo superior de la pieza de prueba (un extremo de la pieza de prueba sumergido en la solución se define como un extremo inferior), además, sacar la pieza de prueba de la solución inmediatamente después de que la solución alcance el extremo superior y medir la cantidad de líquido que queda en la celda. La cantidad de agua absorbida es la cantidad de líquido que se calcula restando la cantidad de líquido que queda en la celda de 200 μl y dividiendo el valor obtenido por 1 cm2 del área del material. La velocidad de absorción de agua se determina según la cantidad de agua absorbida/el tiempo necesario para alcanzar el extremo superior. El material poroso para utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización es preferiblemente un material que tenga una mayor cantidad de agua absorbida y una velocidad de absorción de agua más lenta. Si la cantidad de agua absorbida es de 30 μl/cm2 o menos, aunque dependiendo de la concentración y contenido de agua del reactivo ácido sólido, se considera que la cantidad de reactivo de neutralización impregnado puede ser inferior a la cantidad necesaria para la pieza de prueba inmunocromatográfica. En concreto, la cantidad de agua absorbida es preferentemente de 30 μl/cm2 o más. La velocidad de absorción de agua del material poroso que se utilizará en la región impregnada con el reactivo de neutralización influye en el tiempo requerido para extraer un antígeno de la cadena de azúcar de un espécimen y el tiempo requerido para neutralizar una solución de prueba después de la extracción. El tiempo requerido para extraer un antígeno de la cadena de azúcar se puede ajustar hasta cierto punto, pero no completamente, ajustando el material o la composición del reactivo ácido sólido. Por lo tanto, la velocidad de absorción de agua del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización es un factor importante para la extracción suficiente del antígeno de la cadena de azúcar y la neutralización. Específicamente, la velocidad de absorción de agua es preferentemente de 1,0 a 5,0 μl/s. La velocidad de absorción de agua es más preferiblemente de 2,0 μl/s o menos.
La propiedad de "retención de agua" se determina colocando sobre una membrana un fragmento de 1 cm/m2 obtenido del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización, adicionándole 70 |jl de una solución (Tween 20 al 1 % Red n.° 102), y midiendo el peso de la membrana antes y después de dejar reposar la membrana durante 5 minutos. La cantidad de líquido para la propiedad de retención de agua varía según la composición (un tensioactivo o una proteína) de la solución que se va a añadir. En el caso de una prueba con una solución de Tween 20 al 1 %, la cantidad de agua retenida es preferentemente de 10 a 100 jl/cm 2. La cantidad de agua retenida es más preferentemente de 15 pl/cm2 o más.
La propiedad "desprendible" se mide colocando sobre una membrana un fragmento de 1 cm/m2 obtenido a partir del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo de neutralización, añadiéndole 70 j l de una solución (Tween 20 al 1 % Red n.° 102), y determinando el área de un líquido esparcido sobre la membrana después de que la membrana es se deja reposar durante 5 minutos. El área varía según la composición (un tensioactivo o una proteína) de la solución a añadir.
En el caso de una prueba con una solución de Tween 20 al 1 %, el área es de 30 mm2 o menos. La propiedad liberable es más preferiblemente de 20 mm2 o menos como esta área.
El reactivo que se agregará como reactivo de tratamiento de especímenes, tal como un reactivo ácido sólido, nitrito o un reactivo de neutralización, a una almohadilla altamente hidrofóbica se complementa con un surfactante que incluye: polioxietileno octil fenil éter como Triton X-100 y Triton X-114; éster de ácido graso de polioxietilensorbitán tal como Tween 20 y Tween 80; polioxietilen alquil éter tal como Brij-35 y Brij-58; un tensioactivo a base de ácido cólico que tiene un esqueleto de esteroide, tal como colato de sodio y ácido desoxicólico; y un tensioactivo aniónico tal como laurilsulfato de sodio y dodecilbencenosulfonato de sodio, de modo que se controle el grado de hidrofobicidad del reactivo. Por lo tanto, el tiempo de tratamiento del espécimen en el puerto de adición se puede configurar en cualquier momento. Preferiblemente, mediante la adición del tensioactivo, se puede tratar un espécimen durante un período de tiempo suficiente y se puede desarrollar adecuadamente una solución de muestra de espécimen. Es decir, el espécimen puede tratarse lo suficiente con el reactivo ácido sólido o el nitrito para extraer un antígeno de cadena de azúcar del espécimen. Además, el resultante se puede desarrollar en la parte de corriente abajo que tiene la almohadilla impregnada con el reactivo de neutralización.
Se selecciona un material que tiene un alto grado de hidrofilia como material para usar en la producción de una almohadilla impregnada con un reactivo de tratamiento de especímenes, tal como un reactivo ácido sólido, nitrito o un reactivo de neutralización, para la pieza de prueba inmunocromatográfica, y puede, por lo tanto, ajustar y reducir la velocidad del flujo de líquido, es decir, el tiempo durante el cual se desarrolla una solución de muestra de espécimen en la pieza de prueba inmunocromatográfica, en lugar de controlar la velocidad del flujo de líquido mediante el uso de la almohadilla altamente hidrofóbica y el tensioactivo. Ejemplos del material que tiene un alto grado de hidrofilia incluyen un filtro grueso, y el espesor del mismo es de 210 a 580 jm .
En lugar del tensioactivo, se puede usar otro compuesto de alto peso molecular que tenga acción inmovilizadora (por ejemplo, PVA (alcohol polivinílico) y PLL (poli-L-lisina) de manera que la solución de muestra se retenga fácilmente en la almohadilla. También en este método, se puede promover la extracción del antígeno de la cadena de azúcar en la pieza de prueba inmunocromatográfica.
Para el dispositivo inmunocromatográfico, se prolonga el tiempo durante el cual se desarrolla una solución de muestra de espécimen añadida en la pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se puede retrasar el desarrollo hasta la almohadilla corriente abajo impregnada con el reactivo de neutralización (la región del reactivo de neutralización).
El dispositivo inmunocromatográfico se puede utilizar no solo como dispositivo para extraer un antígeno de cadena de azúcar con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica, sino también como dispositivo inmunocromatográfico para tratar un espécimen en la pieza de prueba inmunocromatográfica con un reactivo impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica.
El dispositivo inmunocromatográfico se puede utilizar cuando un analito a detectar se incuba en un dispositivo de prueba de un reactivo inmunocromatográfico, según el pH o un compuesto, además de la extracción con ácido nitroso.
Se describirá un método de uso del dispositivo inmunocromatográfico sobre la base de un dispositivo inmunocromatográfico, en el que la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene la forma que se muestra en la figura 1 se almacena en el recipiente de almacenamiento que se muestra en la figura 4. El siguiente método de uso es un método de mezclar un espécimen con una solución de ácido nitroso y llevar a cabo la medición mediante el uso de un método de inmunocromatografía, en el que se impregnan un reactivo ácido sólido y un reactivo de neutralización. Un método para mezclar un espécimen con una solución ácida y llevar a cabo la medición mediante el uso de un método de prueba de inmunocromatografía, en el que se impregnan nitrito y un reactivo de neutralización, también se puede realizar con referencia a la descripción del siguiente método de uso.
Un espécimen o una muestra preparada usando el espécimen se pone en contacto y se mezcla con una solución de nitrito, y el espécimen se suspende en la solución de nitrito, y luego la suspensión se agrega al puerto de adición de espécimen del dispositivo, para que se inicie la medición. Esta vez, se pueden mezclar de 5 a 100 μL de un espécimen con 0,01 a 2 mL de nitrito de 0,1 M a 8 M, y luego se pueden agregar de 5 a 200 μL de la mezcla al puerto de adición. Ejemplos del nitrito incluyen nitrito de sodio y nitrito de potasio.
Un espécimen que contiene un antígeno de cadena de azúcar como sustancia a detectar, que se somete al puerto de adición 9, se mueve a una almohadilla de muestra y se desarrolla en una región de reactivo ácido sólido 5 y en una región de reactivo de neutralización 6 en la almohadilla de muestra 4 según a la acción capilar, y, además, se desarrolla sucesivamente en una región de etiqueta 2, un soporte 1 y una banda de absorción 7 en la dirección horizontal. En la región de reactivo ácido sólido 5, el nitrito mezclado con la muestra reacciona con un reactivo ácido sólido en la región de reactivo ácido sólido 5 para generar ácido nitroso libre, de modo que se extrae un antígeno de cadena de azúcar del espécimen por la acción del ácido nitroso. El antígeno de la cadena de azúcar extraído se revela y se mueve, junto con una solución de desarrollo ácida, a la región 6 del reactivo de neutralización, y el pH de la solución de desarrollo ácida que contiene el antígeno de la cadena del azúcar se neutraliza en la región 6 del reactivo de neutralización, de modo que sea ajustado al intervalo neutro. Como resultado, el antígeno de la cadena de azúcar se desarrolla aún más y se traslada a la región corriente abajo en condiciones neutras. En la región de etiqueta 2, con el desarrollo de una muestra de espécimen, un anticuerpo marcado se libera en el líquido y luego se desarrolla en el soporte 1. Cuando un antígeno de cadena de azúcar está presente en una muestra de espécimen, el antígeno de cadena de azúcar es capturado específicamente por un anticuerpo de captura en una región de detección 3 en el soporte 1, y el antígeno de cadena de azúcar también tiene una reacción específica con un anticuerpo marcado para formar un complejo. De este modo, en la región de detección 3, se logra el emparedado del anticuerpo a través del antígeno de cadena de azúcar, de modo que se puede medir un complejo de antígeno de cadena de azúcar-anticuerpo marcado en la región de detección 3. La región de detección se puede observar a través de una porción de evaluación del dispositivo inmunocromatográfico.
Según el método de uso de la pieza de prueba inmunocromatográfica, dado que la extracción de un antígeno de cadena de azúcar de un espécimen se realiza sobre la pieza de prueba de inmunocromatografía, no es necesario extraer previamente el antígeno de cadena de azúcar del espécimen antes de la medición mediante la pieza de prueba inmunocromatográfica, pero el antígeno de la cadena de azúcar en la muestra se puede medir en una sola etapa.
En la pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que se incorpora una almohadilla seca que contiene un reactivo ácido sólido o nitrito, se puede realizar una extracción eficiente de un reactivo.
El puerto de adición de especímenes puede tener un área casi equivalente a la de una almohadilla que contiene un reactivo ácido sólido (una región de reactivo ácido sólido). De ese modo, se puede poner en contacto instantáneamente una mayor cantidad de muestra con el reactivo ácido sólido. Además, al adoptar una tela no tejida altamente hidrofóbica como elemento para aplicación o impregnación, una muestra no puede desarrollarse en una almohadilla corriente abajo impregnada con un reactivo de neutralización (una región de reactivo de neutralización) inmediatamente después de la adición de la muestra. De ese modo, la muestra se retiene en una porción de adición de especímenes durante 1 a 2 minutos, de modo que se pueda extraer suficientemente un antígeno.
Para el dispositivo inmunocromatográfico, cuando la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región del reactivo de neutralización se superponen y se ponen en contacto entre sí, se establece una hoja impermeable a un líquido de manera que la hoja se intercala entre la región del reactivo ácido sólido o el región de nitrito y la región del reactivo de neutralización. El establecimiento de la hoja puede producir los siguientes tres efectos.
(A) El movimiento de un reactivo entre dos regiones adyacentes se puede suprimir durante la conservación de la pieza de prueba. Como resultado, se puede evitar la reacción de un reactivo ácido sólido o nitrito con un reactivo de neutralización por contacto. Como resultado, se puede mejorar la estabilidad del reactivo. (B) Cuando se agrega un espécimen mezclado con nitrito o un reactivo ácido, se puede evitar la extracción insuficiente de un antígeno de la cadena de azúcar atribuible a la muestra que alcanza la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito e inmediatamente después se mueve a la región del reactivo de neutralización. Es decir, se reduce la velocidad a la que un líquido que contiene el espécimen se mueve desde la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito a la región de reactivo de neutralización, y el tiempo durante el cual el líquido que contiene el espécimen permanece en la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito se alarga. Como resultado, se extrae lo suficiente un antígeno de la cadena de azúcar y se mejora la sensibilidad de la medición.
(C) Cuando se agrega un espécimen mezclado con nitrito o un reactivo ácido, se puede evitar que un líquido que contiene el espécimen que haya alcanzado la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito e inmediatamente después se haya movido a la región del reactivo de neutralización fluya de regreso a la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito, reduciendo la actividad del reactivo ácido sólido o el nitrito, y reduciendo la eficiencia de extracción. Es decir, se evita que un líquido que contiene el espécimen que ha alcanzado una vez la región del reactivo de neutralización fluya hacia atrás a la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y se evita que reduzca la actividad del reactivo ácido sólido o el nitrito. Por lo tanto, se permite que la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso se lleve a cabo de manera eficiente y se mejora la sensibilidad de la medición.
El material para que la hoja se establezca entre la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y la región del reactivo de neutralización no está limitado siempre que el material sea impermeable a un líquido. Por ejemplo, se puede utilizar una hoja hecha de resina tal como una hoja de PET (tereftalato de polietileno) o una hoja de polietileno. La hoja hecha con resina también se denomina película hecha con resina.
La hoja se puede establecer de manera que la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y la región del reactivo de neutralización estén parcialmente en contacto y superpuestas entre sí. En este caso, la longitud de la parte superpuesta entre la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y la región del reactivo de neutralización se minimiza preferiblemente y es, por ejemplo, de 5 mm o menos, preferiblemente de 3 mm o menos, más preferiblemente de 2 mm o menos. menos.
La hoja se puede establecer de manera que no permita que la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y la región del reactivo de neutralización entren en contacto, y la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito puede tener una forma que sobresale de una hoja de PET. En este caso, la región de neutralización se puede recubrir completamente con la hoja, y la región de reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso se pueden establecer en la hoja. En este caso, un líquido dentro de la región del reactivo ácido sólido o la región del ácido nitroso fluye sobre la hoja sin moverse directamente a la región de neutralización y luego llega a la región del reactivo de neutralización.
La hoja puede establecerse, por ejemplo, solo entre la región del reactivo ácido sólido o la región del nitrito y la región del reactivo de neutralización. Por otro lado, cuando la hoja hecha con resina se adhiere, como hoja laminada superior, y cubre el lado superior de la pieza de prueba inmunocromatográfica, la hoja laminada superior se adhiere y cubre la región del reactivo de neutralización, la región del marcador, el soporte , la región de detección y la banda de absorción excluyendo la región de reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso y excluyendo además la almohadilla de muestra cuando la región de reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso también sirven como almohadilla de muestra. La región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito pueden adherirse a la parte superior de la hoja laminada superior adhiriéndose a la parte superior de la porción de reactivo de neutralización.
Estudios sobre el tamaño del puerto de adición
A continuación, el % representa el % p/v a menos que se especifique lo contrario.
1. Inmovilización del anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes (estreptococo p-hemolítico del grupo A) sobre membrana de nitrocelulosa (soporte)
Se prepararon una solución obtenida diluyendo un anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes con agua purificada a una concentración de 1,0 mg/mL y un anticuerpo IgG anti-conejo. El anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes se aplicó linealmente al lado de la almohadilla de muestra de una membrana de nitrocelulosa respaldada con una película de PET (tereftalato de polietileno), y el anticuerpo IgG de anti-conejo se aplicó linealmente al lado de la banda de absorción del mismo. Posteriormente, la membrana de nitrocelulosa se secó a 45 °C durante 30 minutos para obtener una membrana inmovilizada de anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes. Esta membrana se denomina "membrana inmovilizada de anticuerpo" en el presente ejemplo.
2. Onmovilización del anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes sobre partículas de poliestireno coloreadas
Un anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes se diluyó con agua purificada a una concentración de 1,0 mg/mL, y luego se añadieron partículas de poliestireno coloreadas a la solución obtenida a una concentración de 0,1 %, seguido de agitación. A continuación, se añadió carbodiimida a la solución mixta hasta una concentración del 1 % y la mezcla obtenida se agitó más. Se eliminó un sobrenadante de la mezcla de reacción mediante una operación de centrifugación y luego se resuspendió en Tris 50 mM (pH 9,0) y BSA al 3 % para obtener una suspensión al 0,04 % de partículas de poliestireno coloreadas unidas a anticuerpos de anti-Streptococcuspyogenes. Estas partículas se denominan "partículas inmovilizadas con anticuerpos" en el presente ejemplo.
3. Aplicación y secado de partículas de poliestireno coloreadas unidas a anticuerpos de anti-Streptococcus pyogenes
La suspensión de partículas inmovilizadas con anticuerpos producida en los 2 anteriores se aplicó en una cantidad predeterminada a una tela no tejida y luego se secó a 45 °C durante 30 minutos. La tela no tejida obtenida se denomina "almohadilla seca" en el presente ejemplo.
4. Producción de almohadilla de reactivo de neutralización (reactivo básico)
Se aplicaron 3 M Trizma (nombre de marca) Base (Tris base) como reactivo de neutralización (reactivo básico) y Triton X-100 al 1,5 % en una concentración de 30 μL/cm a un filtro (Toyo Roshi Kaisha, Ltd.; n.° 26-3).5
5. Producción de almohadilla reactiva de ácido sólido
Se aplicaron ácido tartárico 1,0 M como reactivo ácido sólido y Triton X-100 al 0,5 % en una concentración de 13 μl/cm a una tela no tejida (Unitika, Ltd.; Elves). Inmediatamente después de la aplicación, la tela no tejida se secó a 45 °C durante 1 hora para obtener una tela no tejida impregnada con reactivo ácido sólido.
6. Producción de pieza de pruebas inmunocromatográficas para detección de Streptococcus pyogenes
La membrana inmovilizada con anticuerpos, la almohadilla seca y la almohadilla del reactivo de neutralización (reactivo básico) se adhirieron cada uno a otros elementos (una hoja de respaldo y una banda de absorción), y luego se cortó el resultante en una pieza con un ancho de 5 mm, produciendo así una pieza de prueba de Streptococcus pyogenes. En el presente ejemplo, una pieza de prueba, en la que los filtros impregnados con reactivo ácido sólido y reactivo de neutralización (reactivo básico) se utilizan como almohadilla de muestra, se denomina "la presente pieza de prueba inmunocromatográfica". Cabe señalar que la pieza de prueba inmunocromatográfica comprende, desde un sitio corriente arriba de la misma, una tela no tejida impregnada con reactivo ácido sólido, una tela no tejida impregnada con reactivo de neutralización (reactivo básico), una almohadilla seca (región de etiqueta), una membrana inmovilizada con anticuerpos (región de detección) y una banda de absorción a lo largo del flujo de un espécimen.
7. Dispositivo inmunocromatográfico
La presente pieza de prueba inmunocromatográfica se incorporó a un dispositivo inmunocromatográfico convencional que tiene una longitud de puerto de adición de 5 mm y un dispositivo inmunocromatográfico que tiene una longitud de puerto de adición de 10 mm, es decir, un puerto de adición ensanchado con un tamaño de 24 a 75 mm2, y se realizó la siguiente prueba.
8. Espécimen
Se cultivó Streptococcus pyogenes, y la solución de cultivo luego se ajustó a recuentos de células de 1,0 * 107 UFC/mL, usando una solución salina normal.
Como un espécimen negativo se utilizó solución salina fisiológica.
9. Medición
Se suspendieron 20 μL de un espécimen en 180 μL de una solución de nitrito de sodio (2,0 M NaNO3, Tween 20 al 1 %), y luego se agregaron 75 μL de la suspensión al puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico. Por otro lado, como método convencional, se suspendió un espécimen en una solución de extracto de ácido nitroso en la que se mezclaba nitrito de sodio con ácido clorhídrico, y luego se añadieron 50 μL de una suspensión de muestra que había sido neutralizada con una solución de Tris al puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico del método convencional (en el que no se inmovilizó ni el reactivo ácido ni el neutralizante). Cinco minutos después, la presencia o ausencia de acumulación de partículas de poliestireno coloreadas en una posición predeterminada en la que un anticuerpo de anti-Streptococcus pyogenes se había inmovilizado y el grado de acumulación se juzgó mediante observación visual. La acumulación lineal se juzgó como ++, +, y , en el orden de la fuerza de acumulación. Cuando era difícil juzgar el grado de acumulación, se juzgaba como ±, y cuando no se observaba acumulación, se juzgaba como -.
10. Resultados
[Tabla 1]
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Como se muestra en la Tabla 1, el dispositivo inmunocromatográfico que tenía una longitud de puerto de adición mayor de 10 mm tenía una sensibilidad de medición más alta que el dispositivo inmunocromatográfico que tenía una longitud de puerto de adición de 5 mm. Esto se considera porque se mejoró la eficiencia de extracción de antígeno mediante un tratamiento con ácido nitroso.
Lista de signos de referencia
1 Soporte (que comprende una región de detección)
2 Región de etiqueta
3 Región de detección
4 Almohadilla de muestra
5 Región de reactivo ácido sólido
6 Región de reactivo de neutralización
7 Banda de absorción
8 Hoja de respaldo
9 Puerto adicional de un dispositivo
10 Porción de evaluación de un dispositivo

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un dispositivo inmunocromatográfico que comprende una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra, y un recipiente que almacena la pieza de prueba, teniendo el dispositivo inmunocromatográfico un puerto de adición de espécimen en una almohadilla de muestra de la pieza de prueba, comprendiendo la pieza de prueba inmunocromatográfica: una almohadilla de muestra a la que se añade una muestra mezclada con nitrito o una solución ácida; una región de etiqueta que comprende un anticuerpo marcado obtenido marcando un anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar; y una región de detección en la que se inmoviliza el anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar, en la que se forma un complejo anticuerpo-antígeno de la cadena de azúcar-anticuerpo marcado en la región de detección para medir el antígeno de la cadena de azúcar, y la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región impregnada con un reactivo de neutralización corriente arriba de la región de etiqueta, y que además tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido cuando se utilice la muestra mezclada con el nitrito, o una región impregnada con nitrito cuando se utilice el espécimen mezclado con la solución ácida, corriente arriba de la región impregnada con el reactivo de neutralización, en el que el dispositivo inmunocromatográfico
(i) tiene un puerto de adición de especímenes con un tamaño de 24 a 75 mm2 para promover la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido reteniendo una solución de muestra de espécimen añadida y suministrando la solución de muestra de espécimen en poco tiempo a la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, y
(ii) no tiene espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra para evitar que la muestra se escape del puerto de adición.
2. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, o el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica está hecha de un material altamente hidrofóbico, y la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido se promueve al ralentizar el tiempo de desarrollo de la solución de muestra del espécimen.
3. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el material altamente hidrofóbico se selecciona del grupo que consiste en polietileno, poliéster, poliestireno, polipropileno, rayón y nailon.
4. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, o el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica está hecha de un material que tiene un alto grado de hidrofilia, y la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido se promueve al ralentizar el tiempo de desarrollo de la solución de muestra de espécimen.
5. El dispositivo inmunocromatográfico según la reivindicación 4, en el que el material que tiene un alto grado de hidrofilia es un filtro grueso.
6. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la extracción del antígeno de cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido se promueve agregando un surfactante a la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, o el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica y ajustando el tiempo de desarrollo de la solución de muestra de espécimen.
7. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en polioxietilen octil fenil éter, polioxietilen sorbitán éster de ácido graso, polioxietilen alquil éter, colato de sodio, ácido desoxicólico, lauril sulfato de sodio y dodecilbencenosulfonato de sodio.
8. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la extracción del antígeno de cadena de azúcar con el nitrito y el reactivo ácido sólido se promueve mediante la adición de un compuesto de alto peso molecular con acción inmovilizadora a la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito, o el reactivo de neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica, y ajustando el tiempo de desarrollo de la solución de muestra del espécimen.
9. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el compuesto de alto peso molecular que tiene acción inmovilizadora es PVA o PLL.
10. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente en la almohadilla de muestra o en la almohadilla con la región de etiqueta aplicada a la misma.
11. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el reactivo ácido sólido se selecciona del grupo que consiste en ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.
12. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el reactivo de neutralización es tris(hidroximetil)aminometano o hidróxido de sodio.
13. El dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el antígeno de cadena de azúcar es el antígeno de cadena de azúcar de protozoos, hongos, bacterias, micoplasma, rickettsia, clamidia o virus.
14. Un método para medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra de acuerdo con un método de inmunocromatografía utilizando el dispositivo inmunocromatográfico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13,
midiendo el método el antígeno de cadena de azúcar en la muestra mediante la promoción de la extracción del antígeno de la cadena de azúcar de acuerdo con el método de inmunocromatografía, y comprendiendo el método mezclar la muestra con una solución de ácido nitroso cuando el dispositivo inmunocromatográfico tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido, o mezclar la muestra con una solución ácida cuando el dispositivo inmunocromatográfico tiene una región impregnada con nitrito, y agregar la mezcla a una almohadilla de muestra del dispositivo inmunocromatográfico, en el que, en el método inmunocromatográfico,
el antígeno de la cadena de azúcar se extrae de la muestra por la acción del ácido nitroso generado a través de una reacción del nitrito con el reactivo ácido sólido en la región impregnada con el reactivo ácido sólido o la región impregnada con el nitrito, comprendiendo la solución ácida el antígeno de cadena de azúcar se neutraliza en una región impregnada con un reactivo de neutralización, y
se forma un complejo de anticuerpo-antígeno de cadena de azúcar-anticuerpo marcado en una región de detección.
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