ES2943126T3 - Métodos para el tratamiento de la fibrosis quística - Google Patents

Abstract

Esta solicitud describe métodos para tratar la fibrosis quística o una enfermedad mediada por CFTR que comprende administrar el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. (I) La solicitud también describe composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y que opcionalmente comprenden uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para el tratamiento de la fibrosis quística

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de los Estados Unidos 62/767,202, presentada el 14 de noviembre de 2018.

En la presente se divulga un modulador del regulador de conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), composiciones farmacéuticas que contienen el modulador, métodos de tratamiento de la fibrosis quística y un proceso para elaborar el modulador.

La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad genética recesiva que afecta aproximadamente a 70.000 niños y adultos en todo el mundo. A pesar de los avances en el tratamiento de la CF, no existe una cura.

En pacientes con CF, las mutaciones en CFTR expresadas endógenamente en el epitelio respiratorio llevan a una secreción apical de aniones reducida que provoca un desequilibrio en el transporte de iones y fluidos. La disminución resultante en el transporte de aniones contribuye a una acumulación de mucosa aumentada en el pulmón y a las infecciones microbianas que la acompañan y que, en última instancia, provocan la muerte en los pacientes con CF. Además de la enfermedad respiratoria, los pacientes con CF típicamente padecen problemas gastrointestinales e insuficiencia pancreática que, si no se tratan, provocan la muerte. Además, la mayoría de los hombres con fibrosis quística son infértiles y la fertilidad se reduce entre las mujeres con fibrosis quística.

El análisis de la secuencia del gen de CFTR ha revelado una variedad de mutaciones que provocan enfermedades (Cutting, G. R. et al. (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. et al. (1990) Cell 61:863:870; y Kerem, B-S. et al. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451). Hasta la fecha, se han identificado más de 2000 mutaciones en el gen de la CF. Las mutaciones de la CF se enumeran en "Cystic Fibrosis Mutation Database," localizada en http://www.genet.sickkids.on.ca/app. La mutación causante de enfermedad más prevalente es una deleción de fenilalanina en la posición 508 de la secuencia de aminoácidos de CFTR, y se conoce comúnmente como la mutación F5ü8del. Esta mutación se produce en aproximadamente el 70% de los casos de fibrosis quística y se asocia con enfermedad grave.

La deleción del residuo 508 en la CFTR evita que la proteína naciente se pliegue correctamente. Esto da como resultado la incapacidad de la proteína mutante para salir del retículo endoplasmático (ER) y el tráfico a la membrana plasmática. Como resultado, el número de canales de CFTR para el transporte de aniones presentes en la membrana es mucho menor que el observado en células que expresan CFTR de tipo salvaje, es decir, CFTR que no tiene mutaciones. Además del tráfico deteriorado, la mutación da como resultado una activación de canales defectuosa. Juntos, el número reducido de canales en la membrana y la activación defectuosa llevan a un transporte reducido de aniones y fluidos a través del epitelio. (Quinton, P. M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727). Los canales que son defectuosos debido a la mutación F508del siguen siendo funcionales, aunque menos funcionales que los canales de CFTR de tipo salvaje. (Dalemans et al. (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Pasyk and Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). Además de F508del, podrían regularse por incremento o por disminución otras mutaciones que provocan enfermedades en CFTR que dan como resultado tráfico, síntesis y/o activación de canales defectuosos para alterar la secreción de aniones y modificar la progresión y/o la gravedad de la enfermedad.

El CFTR es un canal de aniones mediado por cAMP/ATP que se expresa en una variedad de tipos de células, incluyendo las células epiteliales secretoras y absorbentes, donde regula el flujo de aniones a través de la membrana, así como la actividad de otros canales de iones y proteínas. En las células epiteliales, el funcionamiento normal de CFTR es fundamental para el mantenimiento del transporte de electrolitos por todo el cuerpo, incluyendo el tejido respiratorio y digestivo. El CFTR está compuesto de aproximadamente 1480 aminoácidos que codifican una proteína que se compone de una repetición en tándem de dominios transmembrana, cada uno de los cuales contiene seis hélices transmembrana y un dominio de unión a nucleótidos. Los dos dominios transmembrana están enlazados por un dominio regulador (R) polar grande con múltiples sitios de fosforilación que regulan la actividad del canal y el tráfico celular.

El transporte de cloruro tiene lugar por la actividad coordinada de ENaC y CFTR presentes en la membrana apical y la bomba de Na+-K+-ATPasa y los canales de Cl- expresados en la superficie basolateral de la célula. El transporte activo secundario de cloruro desde el lado luminal lleva a la acumulación de cloruro intracelular, que luego puede salir pasivamente de la célula a través de los canales de Cl-, lo que da como resultado un transporte vectorial. La disposición de los canales del cotransportador de Na+/2Cl-/K+, la bomba de Na+-K+-ATPasa y la membrana basolateral de K+ en la superficie basolateral y CFTR en el lado luminal coordinan la secreción de cloruro a través de CFTR en el lado luminal. Como es probable que el agua nunca se transporte activamente por sí misma, su flujo a través del epitelio depende de pequeños gradientes osmóticos transepiteliales generados por el flujo masivo de sodio y cloruro.

Recientemente se han identificado varios compuestos moduladores de CFTR. Sin embargo, todavía se necesitan compuestos que puedan tratar o reducir la gravedad de la fibrosis quística y otras enfermedades mediadas por CFTR, y particularmente las formas más graves de estas enfermedades.

Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

Por tanto, un aspecto de la divulgación proporciona un compuesto modulador de CFTR, (14S)-8-[3-(2-{Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1 H-pirazol-1 -il]-12,12-dimetil-2A6-tia-3,9,11, 18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona (Compuesto I) y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. El compuesto I puede representarse con la siguiente estructura:

Otros aspectos de la divulgación proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto I y/o por lo menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, cuyas composiciones pueden incluir además por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional y/o por lo menos un portador. Otros aspectos más de la divulgación son métodos para tratar la fibrosis quística de la enfermedad mediada por CFTR que comprende administrar el Compuesto I y/o por lo menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente como parte de una composición farmacéutica que comprende por lo menos un componente adicional, a un sujeto con necesidad de ello. Un aspecto adicional de la divulgación proporciona procesos para elaborar el Compuesto I y/o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Una realización proporciona un método para tratar la fibrosis quística de la enfermedad mediada por CFTR que comprende administrar (14S)-8-[3-(2-{Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1 H-pirazol-1 -il]-12,12-dimetil-2A6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1 (22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona (Compuesto I), solo o en combinación con (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (Compuesto II), y/o N-[2,4-bis(1,1-dimetiletil)-5-hidroxifenil]-1,4-dihidro-4-oxoquinolina-3-carboxamida (Compuesto III) o N-(2-(terc-butil)-5-hidroxi-4-(2-(metil-d3)propan-2-il-1,1,1,3,3,3-d6)fenil)-4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (Compuesto III-d). En ciertas realizaciones, el método para tratar la fibrosis quística de la enfermedad mediada por CFTR comprende administrar el Compuesto I en combinación con el Compuesto III o III-d y ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico (Compuesto IV). En algunas realizaciones, el Compuesto I se administra en la misma composición con el Compuesto II y el Compuesto III. En algunas realizaciones, el Compuesto I se administra en la misma composición con el Compuesto II y el Compuesto III-d. En algunas realizaciones, el Compuesto I se administra en la misma composición con el Compuesto III y el Compuesto IV. En algunas realizaciones, el Compuesto I se administra en la misma composición con el Compuesto III-d y el Compuesto IV. En algunas realizaciones, una composición que comprende el Compuesto I se coadministra con una composición separada que comprende el Compuesto II y/o el Compuesto III. En algunas realizaciones, una composición que comprende el Compuesto I se coadministra con una composición separada que comprende el Compuesto II y/o el Compuesto III-d. En algunas realizaciones, una composición que comprende el Compuesto I se coadministra con una composición separada que comprende el Compuesto III y el Compuesto IV. En algunas realizaciones, una composición que comprende el Compuesto I se coadministra con una composición separada que comprende el Compuesto III-d y el Compuesto IV.

Definiciones

"Compuesto I", como se usa en esta divulgación, se refiere a (14s)-8-[3-(2-{Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1 H-pirazol-1 -il]-12,12-dimetil-2A6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona, que puede representarse con la siguiente estructura:

El compuesto I puede estar en forma de una mezcla isomérica o isómeros enantioenriquecidos (por ejemplo, >90% ee, >95% ee, >98% ee). El compuesto I puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

"Compuesto II", como se usa en la presente, se refiere a (R)-1 -(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1 -(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1 -hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1 H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida, que puede representarse con la siguiente estructura:

El Compuesto II puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

"Compuesto III", como se usa en esta divulgación, se refiere a N-(5-hidroxi-2,4-di-terc-butil-fenil)-4-oxo-1H-quinolina-3-carboxamida que se representa por la estructura:

El Compuesto III también puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, en las composiciones y métodos divulgados en la presente se emplea un derivado deuterado del Compuesto III (Compuesto III-d). Un nombre químico para el Compuesto III-d es N-(2-(terc-butil)-5-hidroxi-4-(2-(metild3)propan-2-il-1,1,1,3,3,3-d6)fenil)-4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxamida, como se representa por la estructura:

El compuesto III-d puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

"Compuesto IV", como se usa en la presente, se refiere a ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico, que se representa por la estructura química:

El compuesto IV puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

Como se usa en la presente, "CFTR" significa regulador de conductancia transmembrana de la fibrosis quística.

Como se usa en la presente, "mutaciones" puede referirse a mutaciones en el gen de CFTR o la proteína de CFTR. Una “mutación del gen de CFTR” se refiere a una mutación en el gen de CFTR, y una “mutación de la proteína de CFTR” se refiere a una mutación en la proteína de CFTR. Un defecto genético o una mutación, o un cambio en los nucleótidos de un gen, en general da como resultado una mutación en la proteína de CFTR traducida a partir de ese gen, o un cambio o cambios de marco.

El término "F508del" se refiere a una proteína de CFTR mutante que carece del aminoácido fenilalanina en la posición 508.

Como se usa en la presente, un paciente que es "homocigótico" para una mutación genética particular tiene la misma mutación en cada alelo.

Como se usa en la presente, un paciente que es "heterocigoto" para una mutación genética particular tiene la mutación particular en un alelo y una mutación diferente en el otro alelo.

Como se usa en la presente, el término "modulador" se refiere a un compuesto que aumenta la actividad de un compuesto biológico como una proteína. Por ejemplo, un modulador de CFTR es un compuesto que aumenta la actividad de CFTR. El aumento en la actividad resultante de un modulador de CFTR incluye, pero no se limita a, compuestos que corrigen, potencian, estabilizan y/o amplifican CFTR.

Como se usa en la presente, el término "corrector de CFTR" se refiere a un compuesto que facilita el procesamiento y tráfico de CFTR para aumentar la cantidad de CFTR en la superficie celular. Los Compuestos I y II divulgados en la presente son correctores de CFTR.

Como se usa en la presente, el término "potenciador de CFTR" se refiere a un compuesto que aumenta la actividad del canal de la proteína de CFTR localizado en la superficie celular, lo que da como resultado un transporte de iones mejorado. Los compuestos III y III-d divulgados en la presente son potenciadores de CFTR. Se apreciará que cuando se proporciona en la presente una descripción de una combinación de Compuesto I y otros agentes moduladores de CFTR especificados, la referencia a "Compuesto III o III-d" en relación con la combinación significa que o el Compuesto III o el Compuesto III-d, pero no ambos, está incluido en la combinación.

Como se usa en la presente, el término "ingrediente farmacéutico activo" o "agente terapéutico" ("API") se refiere a un compuesto biológicamente activo.

Como se usa en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una forma de sal de un compuesto de esta divulgación en donde la sal no es tóxica. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta divulgación incluyen las derivadas de ácidos y bases orgánicos e inorgánicos adecuados. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S.M. Berge, et al. describe sales farmacéuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19.

Como se usa en la presente, el término "amorfo" se refiere a un material sólido que no tiene un orden de largo alcance en la posición de sus moléculas. Los sólidos amorfos son generalmente líquidos superenfriados en los que las moléculas están dispuestas de forma aleatoria de tal manera que no hay una disposición bien definida, por ejemplo, empaquetamiento molecular, ni un orden de largo alcance. Los sólidos amorfos son generalmente isotrópicos, es decir, muestran propiedades similares en todas las direcciones y no tienen puntos de fusión definidos. Por ejemplo, un material amorfo es un material sólido que no tiene picos cristalinos característicos definidos en su patrón de difracción de rayos X en polvo (XRPD) (es decir, no es cristalino según se determina por XRPD). En su lugar, aparecen uno o varios picos amplios (por ejemplo, halos) en su patrón de XRPD. Los picos amplios son característicos de un sólido amorfo. Ver, la US 2004/0006237 para una comparación de XRPD de un material amorfo y un material cristalino. En algunas realizaciones, un material sólido puede comprender un compuesto amorfo, y el material puede, por ejemplo, caracterizarse por la falta de picos cristalinos característicos definidos en su espectro de XRPD (es decir, el material no es cristalino, pero es amorfo, según se determina por XRPD). En su lugar, pueden aparecer uno o varios picos amplios (por ejemplo, halos) en el patrón de XRPD del material. Ver la US 2004/0006237 para una comparación de los XRPD de un material amorfo y un material cristalino. Un material sólido, que comprende un compuesto amorfo, puede caracterizarse, por ejemplo, por un intervalo de temperatura más amplio para la fusión del material sólido, en comparación con el intervalo para la fusión de un sólido cristalino puro. Para caracterizar formas cristalinas o amorfas pueden usarse otras técnicas, como por ejemplo espectroscopia Raman, espectroscopia infrarroja, y NMR en estado sólido.

En algunas realizaciones, un material sólido puede comprender una mezcla de sólidos cristalinos y sólidos amorfos. Un material sólido preparado para que comprenda un compuesto amorfo también puede contener, por ejemplo, hasta un 30% de un sólido cristalino. En algunas realizaciones, un material sólido preparado para que comprenda un compuesto amorfo también puede contener, por ejemplo, hasta un 25%, 20%, 15%, 10%, 5% o 2% de un sólido cristalino. En realizaciones en las que el material sólido contiene una mezcla de sólidos cristalinos y sólidos amorfos, los datos de caracterización, como XRPD, pueden contener indicadores tanto de sólidos cristalinos como amorfos.

Como se usa en la presente, el término "sustancialmente amorfo" se refiere a un material sólido que tiene poco o ningún orden de largo alcance en la posición de sus moléculas. Por ejemplo, los materiales sustancialmente amorfos tienen menos del 15% de cristalinidad (por ejemplo, menos del 10% de cristalinidad, menos del 5% de cristalinidad o menos del 2% de cristalinidad). También se observa que el término 'sustancialmente amorfo' incluye el descriptor 'amorfo', que se refiere a materiales que no tienen cristalinidad (0%).

Como se usa en la presente, el término "dispersión" se refiere a un sistema disperso en el que una sustancia, la fase dispersa, se distribuye, en unidades discretas, a través de una segunda sustancia (la fase continua o vehículo). El tamaño de la fase dispersa puede variar considerablemente (por ejemplo, partículas coloidales de tamaño nanométrico, hasta varias micras de tamaño). En general, las fases dispersas pueden ser sólidos, líquidos o gases. En el caso de una dispersión sólida, las fases dispersa y continua son ambas sólidas. En aplicaciones farmacéuticas, una dispersión sólida puede incluir un fármaco cristalino (fase dispersa) en un polímero amorfo (fase continua); o alternativamente, un fármaco amorfo (fase dispersa) en un polímero amorfo (fase continua). En algunas realizaciones, una dispersión sólida incluye el polímero que constituye la fase dispersa, y el fármaco que constituye la fase continua. O bien, una dispersión sólida incluye el fármaco que constituye la fase dispersa y el polímero que constituye la fase continua.

Los términos "paciente" y "sujeto" se usan indistintamente y se refieren a un animal, incluyendo humanos.

Como se usa en la presente, los términos "tratamiento", "tratar" y similares generalmente significan la mejora de la CF o sus síntomas o la disminución de la gravedad de la CF o sus síntomas en un sujeto. "Tratamiento", como se usa en la presente, incluye pero no se limita a, lo siguiente: crecimiento aumentado del sujeto, ganancia de peso aumentada, reducción de la mucosidad en los pulmones, mejora de la función pancreática y/o hepática, reducción de las infecciones torácicas y /o reducciones en la tos o dificultad para respirar. Las mejoras o la disminución de la gravedad de cualquiera de estos síntomas pueden evaluarse fácilmente de acuerdo con métodos y técnicas estándar conocidos en la técnica.

Como se usa en la presente, el término "en combinación con", cuando se refiere a dos o más compuestos, agentes o ingredientes farmacéuticos activos adicionales, significa la administración de dos o más compuestos, agentes o ingredientes farmacéuticos activos al paciente antes de, concurrentemente con, o posterior uno a otro.

Los términos “alrededor de” y “aproximadamente”, cuando se usan en relación con dosis, cantidades o porcentaje en peso de los ingredientes de una composición o forma de dosificación, incluyen el valor de una dosis, cantidad o porcentaje en peso especificado o un intervalo de la dosis, cantidad o porcentaje en peso que un experto en la técnica reconoce que proporciona un efecto farmacológico equivalente de la dosis, cantidad o porcentaje en peso especificados. Los términos "alrededor de" y "aproximadamente" pueden referirse a un error aceptable para un valor particular determinado por un experto en la técnica, que depende en parte de cómo se miden o determinan los valores. En algunas realizaciones, los términos "alrededor de" y "aproximadamente" significan dentro del 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0,5% de un valor o intervalo dado.

Un experto en la técnica reconocería que, cuando se divulga una cantidad de "un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo", la cantidad de la forma de sal farmacéuticamente aceptable del compuesto es la cantidad equivalente a la concentración de la base libre del compuesto Se observa que las cantidades divulgadas de los compuestos o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la presente se basan en su forma de base libre. Por ejemplo, "100 mg de por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo" incluye 100 mg del Compuesto I y una concentración de una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto I equivalente a 100 mg del Compuesto I.

Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas son, por ejemplo, las divulgadas en S.M. Berge, et al. J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. Por ejemplo, la Tabla 1 de ese artículo proporciona las siguientes sales farmacéuticamente aceptables:

Tabla 1:

Los ejemplos no limitativos de sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen: sales formadas con ácidos inorgánicos, como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico o ácido perclórico; sales formadas con ácidos orgánicos, como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico; y sales formadas usando otros métodos usados en la técnica, como intercambio iónico. Los ejemplos no limitativos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato y valerato. Las sales farmacéuticamente aceptables derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N+(alquilo C1-4)4. Esta divulgación también prevé la cuaternización de cualquier grupo básico que contenga nitrógeno de los compuestos divulgados en la presente. Los ejemplos no limitativos adecuados de sales de metales alcalinos y alcalinotérreos incluyen sodio, litio, potasio, calcio y magnesio. Ejemplos no limitativos adicionales de sales farmacéuticamente aceptables incluyen cationes de amonio, amonio cuaternario y amina formados usando contraiones como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior y sulfonato de arilo. Otros ejemplos no limitativos adecuados de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de besilato y glucosamina.

Terapias de combinación

Un aspecto divulgado en la presente proporciona métodos para tratar la fibrosis quística y otras enfermedades mediadas por CFTR con el Compuesto I en combinación con otros agentes farmacéuticamente activos, incluyendo agentes moduladores de CFTR. En algunas realizaciones, el Compuesto I (y/o por lo menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) puede administrarse en combinación con por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional como, por ejemplo, un agente de modulación de CFTR. En algunas realizaciones, el por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional se elige entre (a) el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y (b) Compuesto III o Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del Compuesto III 0 Compuesto III-d. Por tanto, en algunas realizaciones, los métodos de tratamiento proporcionados en la presente comprenden administrar a un paciente con necesidad de ello por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto 1 y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II, (Compuesto III o III-d), y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, los métodos de tratamiento proporcionados en la presente comprenden administrar a un paciente con necesidad de ello por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y por lo menos un compuesto elegido entre (Compuesto III o III-d), Compuesto IV y/o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con el Compuesto II o ales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Cada uno de los Compuestos I, II y III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden administrarse independientemente una vez al día, dos veces al día o tres veces al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra una vez al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra dos veces al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran una vez al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran dos veces al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran una vez al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran dos veces al día.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran una vez al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto IV y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administran una vez al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran dos veces al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto IV y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administran dos veces al día.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran una vez al día y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administran dos veces al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto IV y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran una vez al día y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptable del mismo, se administran dos veces al día.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una cantidad de 5 mg a 20 mg. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una cantidad de 5 mg, 10 mg, 15 mg o 20 mg al día. En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una cantidad de 5 mg, 10 mg o 20 mg una vez al día. En algunas realizaciones, se administran dos veces al día 5 mg o 10 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de sus sales farmacéuticamente aceptables

Los Compuestos I, II, (III o III-d) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden administrarse en una única composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas separadas. Tales composiciones farmacéuticas pueden administrarse una vez al día o varias veces al día, como dos veces al día. Como se usa en la presente, la frase que una cantidad dada de API (por ejemplo, Compuesto I, II, (III, III-d) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) se administra una o dos veces al día o por día significa que dicha cantidad dada se administra por dosificación una o dos veces al día. Por ejemplo, la frase que se administran 50 mg del Compuesto II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo dos veces al día o por día significa que se administran 50 mg del Compuesto

II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo por dosificación dos veces al día

(por ejemplo, 50 mg de Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administran por la mañana y 50 mg del Compuesto II una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administran por la tarde).

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una primera composición farmacéutica; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una segunda composición farmacéutica; y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una tercera composición farmacéutica.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una primera composición farmacéutica; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una segunda composición farmacéutica; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una tercera composición farmacéutica.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una primera composición farmacéutica; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una segunda composición farmacéutica; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto IV y sal farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una tercera composición farmacéutica.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una primera composición farmacéutica; y por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran en una segunda composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la segunda composición farmacéutica comprende la mitad de una dosis diaria de dicho por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III, III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y la otra mitad de dicho por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto III., III-d, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en una tercera composición farmacéutica.

En algunas realizaciones, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo y por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III, III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administran en una primera composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la primera composición farmacéutica se administra al paciente dos veces al día. En algunas realizaciones, la primera composición farmacéutica se administra una vez al día. En algunas realizaciones, la primera composición farmacéutica se administra una vez al día y una segunda composición que comprende solo el Compuesto

III se administra una vez al día.

Puede usarse cualquier composición farmacéutica adecuada conocida en la técnica para el Compuesto I, el Compuesto II, el Compuesto III, el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Algunas composiciones farmacéuticas ejemplares para el Compuesto I y sus sales farmacéuticamente aceptables se describen en los Ejemplos. Algunas composiciones farmacéuticas ejemplares para el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo pueden encontrarse en la WO 2011/119984 y la WO 2014/014841. Algunas composiciones farmacéuticas ejemplares para el Compuesto III y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden encontrarse en la

WO 2007/134279, la WO 2010/019239, la WO 2011/019413, la WO 2012/027731 y la WO 2013/130669, y algunas composiciones farmacéuticas ejemplares para el Compuesto IlI-d y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden encontrarse en la US 8.865.902, US 9.181.192, US 9.512.079, WO 2017/053455 y WO 2018/080591. Algunas composiciones farmacéuticas ejemplares para el Compuesto IV y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden encontrarse en la WO 2010/037066, la WO 2011/127241 y la WO 2014/071122.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra con una composición farmacéutica que comprende el Compuesto II y el Compuesto III o III-d. Las composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto II y el Compuesto III se divulgan en la Publicación de PCT N° WO 2015/160787. En la Tabla 2 se muestra una realización ejemplar.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende el Compuesto I se administra con una composición farmacéutica que comprende el Compuesto III o III-d. Las composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto III se divulgan en la Publicación PCT N° WO 2010/019239. En la Tabla 3 siguiente se muestra una realización ejemplar.

En la Publicación de PCT N° WO 2013/130669 se divulgan composiciones farmacéuticas adicionales que comprenden el Compuesto III. Se formularon minicomprimidos ejemplares (~2 mm de diámetro, ~2 mm de espesor, cada minicomprimido con un peso de aproximadamente 6,9 mg) para que tuviesen aproximadamente 50 mg de Compuesto III por 26 minicomprimido y aproximadamente 75 mg de Compuesto III por 39 minicomprimidos usando las cantidades de ingredientes enumeradas en la Tabla 4.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende el Compuesto I se administra con una composición farmacéutica que comprende el Compuesto III y el Compuesto IV. Las composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto III y el Compuesto IV se divulgan en la Publicación de PCT N° WO 2014/071122. En la Tabla 5 a continuación se muestra una realización ejemplar.

T l In r i n r l m rimi m l r ^ m III m I

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas empleadas en las terapias de combinación de la divulgación son comprimidos. En algunas realizaciones, los comprimidos son adecuados para administración oral. Estas composiciones y combinaciones son útiles para tratar la fibrosis quística.

Métodos de tratamiento

Una mutación de CFTR puede afectar a la cantidad de CFTR, es decir, el número de canales de CFTR en la superficie celular, o puede afectar a la función de CFTR, es decir, la capacidad funcional de cada canal para abrir y transportar iones. Las mutaciones que afectan a la cantidad de CFTR incluyen mutaciones que provocan síntesis defectuosa (defecto de Clase I), mutaciones que provocan procesamiento y tráfico defectuosos (defecto de Clase II), mutaciones que provocan síntesis reducida de CFTR (defecto de Clase V) y mutaciones que reducen la estabilidad superficial de CFTR (defecto de Clase VI). Las mutaciones que afectan a la función de CFTR incluyen mutaciones que provocan activación defectuosa (defecto de Clase III) y mutaciones que provocan conductancia defectuosa (defecto de Clase IV). Algunas mutaciones de CFTR muestran características de múltiples clases.

En algunas realizaciones, los métodos divulgados en la presente para tratar, disminuir la gravedad o tratar sintomáticamente la fibrosis quística en un paciente comprenden administrar una cantidad eficaz de un compuesto, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un análogo deuterado de cualquiera de los anteriores; o una composición farmacéutica, de esta divulgación a un paciente, como un humano, en donde dicho paciente tiene fibrosis quística. En algunas realizaciones, el paciente tiene un genotipo F508del/función mínima (MF), genotipo F508del/F508del (homocigoto para la mutación F508del), genotipo F508del/activación o genotipo F508del/función residual (RF). En algunas realizaciones, el paciente es heterocigoto y tiene una mutación F508del.

Como se usa en la presente, "mutaciones de función mínima (MF)" se refiere a mutaciones génicas de CFTR asociadas con una función mínima de CFTR (proteína de CFTR que funciona poco o nada) e incluyen, por ejemplo, mutaciones asociadas con defectos graves en la capacidad del canal de CFTR para abrirse y cerrarse, conocido como activación defectuosa del canal o "mutaciones de activación"; mutaciones asociadas con defectos graves en el procesamiento celular de CFTR y su suministro a la superficie celular; mutaciones asociadas con ninguna (o mínima) síntesis de CFTR; y mutaciones asociadas con defectos graves en la conductancia del canal.

En algunas realizaciones, el paciente es heterocigoto y tiene una mutación F508del en un alelo y una mutación en el otro alelo seleccionada de la Tabla 6:

__________________________________Tabla 6: Mutaciones de CFTR

Mutación

Q2X L218X Q525X R792X E1104X

S4X Q220X G542X E822X W1145X

W19X Y275X G550X W882X R1158X

G27X C276X Q552X W846X R1162X

Q39X Q290X R553X Y849X S1196X

W57X G330X E585X R851X W1204X

E60X W401X G673X Q890X L1254X

R75X Q414X Q685X S912X S1255X

L88X S434X R709X Y913X W1282X

E92X S466X K710X Q1042X Q1313X

Q98X S489X Q715X W1089X Q1330X

Y122X Q493X L732X Y1092X E1371X

E193X W496X R764X W1098X Q1382X W216X C524X R785X R1102X Q1411X

185 1G ^T 711 5 G ^A 1717 - 8 G ^A 2622 1G ^A 3121 - 1G ^A 296 1G ^A 712 - 1 G ^T 1717 - 1G ^A 2790 - 1G ^C 3500 - 2A ^G 296 1G ^T 1248 1 G ^ A 1811 1G ^C 3040G ^C 3600 2insT 405 1G ^A 1249-1 G^-A 1811 1.6kbA^G (G970R) 3850 - 1G ^A 405 3 A ^C 1341 1G ^A 1811 1643G^T 3120G ^A 4005 1G ^A 406 - 1G ^A 1525 - 2A ^G 1812 - 1G ^A 3120 1G ^A 4374 1G ^T 621 1G ^T 1525 - 1G ^A 1898 1G ^A 3121-2A^G

711 1G ^T 1898 1G ^C

182delT 1078delT 1677delTA 2711 delT 3737delA 306insA 1119delA 1782delA 2732insA 3791delC 306delTAGA 1138insG 1824delA 2869insG 3821delT

365-366insT 1154insTC 1833delT 2896insAG 3876delA 394delTT 1161 delC 2043delG 2942insT 3878delG 442delA 1213delT 2143delT 2957delT 3905insT 444delA 1259insA 2183AA^G 3007delG 4016insT 457TAT^G 1288insTA 2184delA 3028delA 4021dupT 541delC 1343delG 2184insA 3171delC 4022insT 574delA 1471delA 2307insA 3171insC 4040delA 663delT 1497delGG 2347delG 3271delGG 4279insA 849delG 1548delG 2585delT 3349insT 4326delTC 935delA 1609del CA 2594delGT 3659delC

CFTRdele1 CFTRdele16-17b 1461 ins4

CFTRdele2 CFTRdele17a,17b 1924del7

(continuación)

Mutación

CFTRdele2,3 CFTRdele17a-18 2055del9^A

CFTRdele2-4 CFTRdele19 2105-2117del13insAGAAA

CFTRdele3-10,14b-16 CFTRdele19-21 2372del8

CFTRdele4-7 CFTRdele21 2721 del11

CFTRdele4-11 CFTRdele22-24 2991del32

CFTR50kbdel CFTRdele22,23 3667ins4

CFTRdup6b-10 124del23bp 4010del4

CFTRdele11 602del14 4209TGTT^AA

CFTRdele13,14a 852del22

CFTRdele14b-17b 991del5

A46D V520F Y569D N1303K

G85E A559T L1065P

R347P R560T R1066C

L467P R560S L1077P

I507del A561E M1101K

En algunas realizaciones, la divulgación también está dirigida a métodos de tratamiento que usan compuestos marcados con isótopos de los compuestos mencionados anteriormente que, en algunas realizaciones, se denominan Compuesto I', Compuesto II', Compuesto III', Compuesto III-d. En algunas realizaciones, el Compuesto I', el Compuesto II', el Compuesto III', el Compuesto III-d o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde la fórmula y las variables de tales compuestos y sales son cada una e independientemente como se ha descrito anteriormente o cualquier otra realización descrita anteriormente, siempre que uno o más átomos en el mismo hayan sido reemplazados por un átomo o átomos que tengan una masa atómica o un número de masa que difiera de la masa atómica o el número de masa del átomo que se produce habitualmente de manera natural (marcado con isótopo). Los ejemplos de isótopos que están comercialmente disponibles y son adecuados para la divulgación incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, por ejemplo 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente.

Los compuestos y sales marcados con isótopos pueden usarse de varias formas beneficiosas. Pueden ser adecuados para medicamentos y/o varios tipos de ensayos, como ensayos de distribución de tejido en sustratos. Por ejemplo, los compuestos marcados con tritio (3H) y/o carbono 14 (14C) son particularmente útiles para varios tipos de ensayos, como los ensayos de distribución de tejido en sustratos, debido a la preparación relativamente sencilla y la excelente detectabilidad. Por ejemplo, los compuestos marcados con deuterio (2H) son terapéuticamente útiles con ventajas terapéuticas potenciales sobre los compuestos no marcados con 2H. En general, los compuestos y sales marcados con deuterio (2H) pueden tener una mayor estabilidad metabólica en comparación con aquellos que no están marcados con isótopos debido al efecto isotópico cinético que se describe a continuación. Una estabilidad metabólica más alta se traduce directamente en una vida media in vivo aumentada o dosificaciones más bajas, lo que podría ser deseable. Los compuestos y sales marcados con isótopos habitualmente pueden prepararse llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas de síntesis y la descripción relacionada, en la parte de ejemplos y en la parte de preparación en el presente texto, reemplazando un reactivo no marcado con isótopo por un reactivo marcado con isótopos fácilmente disponible.

En algunas realizaciones, los compuestos y sales marcados con isótopos son los marcados con deuterio (2H). En algunas realizaciones específicas, los compuestos y sales marcados con isótopos están marcados con deuterio (2H), en donde uno o más átomos de hidrógeno han sido reemplazados por deuterio. En las estructuras químicas, el deuterio se representa como "D".

Los compuestos y sales marcados con deuterio (2H) pueden manipular el metabolismo oxidativo del compuesto por medio del efecto isotópico cinético primario. El efecto isotópico cinético primario es un cambio en la velocidad de una reacción química que resulta del intercambio de núcleos isotópicos, que a su vez está provocado por el cambio en las energías del estado fundamental necesarias para la formación de enlaces covalentes después de este intercambio isotópico. El intercambio de un isótopo más pesado generalmente da como resultado una disminución de la energía del estado fundamental para un enlace químico y, por tanto, provoca una reducción en la ruptura del enlace limitante de la velocidad. Si la ruptura del enlace se produce en o cerca de una región de punto de silla a lo largo de la coordenada de una reacción de múltiples productos, las proporciones de distribución de productos pueden alterarse sustancialmente. Por explicación: si el deuterio está unido a un átomo de carbono en una posición no intercambiable, las diferencias de kM/kD = 2-7 son típicas. Para un análisis adicional, consultar S. L. Harbeson y R. D. Tung, Deuterium In Drug Discovery and Development, Ann. Rep. Med. Chem. 2011,46, 403-417.

La concentración de los isótopos (por ejemplo, deuterio) incorporados en los compuestos y la sal de la divulgación marcados con isótopos puede definirse mediante el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de enriquecimiento isotópico", como se usa en la presente, significa la relación entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo específico. En algunas realizaciones, si un sustituyente en un compuesto de la divulgación se denota deuterio, dicho compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de por lo menos 3500 (52,5% de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), por lo menos 4000 (60% de incorporación de deuterio), por lo menos 4500 (67,5% incorporación de deuterio), por lo menos 5000 (75% incorporación de deuterio), por lo menos 5500 (82,5% incorporación de deuterio), por lo menos 6000 (90% incorporación de deuterio), por lo menos 6333,3 (95% incorporación de deuterio), por lo menos 4500 (67,5% incorporación de deuterio), por lo menos 5000 (75% incorporación de deuterio), por lo menos 6466,7 (97% incorporación de deuterio), por lo menos 6600 (99% incorporación de deuterio), o por lo menos 6633,3 (99,5% incorporación de deuterio).

Al descubrir y desarrollar agentes terapéuticos, el experto en la técnica intenta optimizar los parámetros farmacocinéticos conservando las propiedades in vitro deseables. Puede ser razonable suponer que muchos compuestos con perfiles farmacocinéticos deficientes son susceptibles al metabolismo oxidativo.

Composiciones farmacéuticas

Otro aspecto de la divulgación proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional. En algunas realizaciones, el por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional es un modulador de CFTR. En algunas realizaciones, el por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional es un corrector de CFTR. En algunas realizaciones, el por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional es un potenciador de CFTR. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende el Compuesto I y por lo menos dos ingredientes farmacéuticos activos adicionales, uno de los cuales es un corrector de CFTR y uno de los cuales es un potenciador de CFTR.

En algunas realizaciones, por lo menos un ingrediente farmacéutico activo adicional se selecciona de agentes mucolíticos, broncodilatadores, antibióticos, agentes antiinfecciosos y agentes antiinflamatorios.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre los Compuestos III, III-d y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III o III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto IV y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. En algunas realizaciones, la composición comprende aproximadamente 5 mg, aproximadamente 10 mg o aproximadamente 20 mg de por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. En algunas realizaciones, la composición comprende de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, de 50 mg a 100 mg del Compuesto II y de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d. En algunas realizaciones, la composición comprende de aproximadamente 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, 100 mg del Compuesto II y 150 mg del Compuesto III o 150 mg del Compuesto III-d.

En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende 5 mg de por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. En algunas realizaciones, la composición comprende aproximadamente 10 mg de por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. En algunas realizaciones, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales. En algunas realizaciones, la composición comprende 5 mg, 10 mg o 20 mg de por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, 50 mg o 100 mg del Compuesto II, y 150 mg o 300 mg del Compuesto III o 50 mg, 75 mg, 100 mg, 125 mg o 150 mg del Compuesto III-d.

Una composición farmacéutica puede comprender además por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, el por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable se elige entre vehículos farmacéuticamente aceptables y adyuvantes farmacéuticamente aceptables. En algunas realizaciones, el por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable se elige entre cargas, disgregantes, surfactantes, aglutinantes y lubricantes farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente son útiles para tratar la fibrosis quística y otras enfermedades mediadas por CFTR.

Como se ha descrito anteriormente, las composiciones farmacéuticas divulgadas en la presente pueden comprender opcionalmente además por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable. El por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable puede elegirse entre adyuvantes y vehículos. El por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable, como se usa en la presente, incluye cualquiera y todos los solventes, diluyentes, otros vehículos líquidos, auxiliares de dispersión, auxiliares de suspensión, agentes tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes, agentes emulsionantes, conservantes, aglutinantes sólidos y lubricantes, según sea adecuado para la forma de dosificación particular deseada. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nueva York, divulga varios portadores usados en la formulación de composiciones farmacéuticas y técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Excepto en la medida en que cualquier portador convencional sea incompatible con los compuestos de esta divulgación, por ejemplo, produciendo cualquier efecto biológico indeseable o interactuando de otro modo de manera perjudicial con cualquier otro componente de la composición farmacéutica, se contempla que su uso esté dentro del alcance de esta divulgación. Los ejemplos no limitativos de portadores farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas (como albúmina sérica humana), sustancias tampón (como fosfatos, glicina, ácido sórbico y sorbato de potasio), mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales y electrolitos (como sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, fosfato de hidrógeno de potasio, cloruro de sodio y sales de zinc), sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, grasa de lana, azúcares (como lactosa, glucosa y sacarosa), almidones (como almidón de maíz y fécula de patata), celulosa y sus derivados (como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa), tragacanto en polvo, malta, gelatina, talco, excipientes (como manteca de cacao y ceras para supositorios), aceites (como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), glicoles (como propilenglicol y polietilenglicol), ésteres (como oleato de etilo y laurato de etilo), agar, agentes tamponantes (como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio), ácido algínico, agua libre de pirógenos, solución salina isotónica, solución de Ringer, alcohol etílico, soluciones de tampón de fosfato, lubricantes compatibles no tóxicos (como laurilsulfato de sodio y estearato de magnesio), agentes colorantes, agentes liberadores, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes perfumantes, conservantes y antioxidantes.

Métodos de preparación de compuestos

Procedimientos experimentales generales

Los reactivos y materiales de partida se obtuvieron de fuentes comerciales a menos que se indique lo contrario y se usaron sin purificación. Los espectros de NMR de protón y carbono se adquirieron en un espectrómetro FTNMR de 400 MHz Bruker Biospin DRX funcionando a una frecuencia resonante de 1H y 13C de 400 y 100 MHz respectivamente, o en un espectrómetro de NMR de 300 MHz. Los espectros unidimensionales de protones y carbono se adquirieron usando una sonda de observación de banda ancha (BBFO) con una rotación de muestra de 20 Hz a una resolución digital de 0,1834 y 0,9083 Hz/Pt, respectivamente. Todos los espectros de protones y de carbono se adquirieron con control de temperatura a 30° C usando secuencias de pulso estándar publicadas anteriormente y parámetros de procesamiento rutinarios. La pureza final de los compuestos se determinó mediante UPLC de fase inversa usando una columna Acquity UPLC BEH Cis (50 x 2,1 mm, partículas de 1,7 pm) fabricada por Waters (pn: 186002350) y un funcionamiento de gradiente dual al 1-99% de fase móvil B durante 3,0 minutos. Fase móvil A=H2O (0,05% de CF3CO2H). Fase móvil B=CH3CN (0,035% de CF3CO2H). Caudal = 1,2 ml/min, volumen de inyección = 1,5 pl y temperatura de la columna = 60° C. La pureza final se calculó promediando el área bajo la curva (AUC) de dos trazas UV (220 nm, 254 nm). Los espectros de masas de baja resolución se obtuvieron usando un espectrómetro de masas de un solo cuadrupolo con una precisión de masa de 0,1 Da y una resolución mínima de 1000 amu en todo el intervalo de detección usando ionización por electropulverización (ESI) usando el ion de hidrógeno (H+). La pureza óptica del (2S)-2,4-dimetil-4-nitro-pentanoato de metilo se determinó usando análisis de cromatografía de gases (GC) quiral en un instrumento Agilent 7890A/MSD 5975C, usando una columna Restek Rt-pDEXcst (30 m x 0,25 mm x 0,25 um_df), con un caudal de 2,0 ml/min (gas portador H2), a una temperatura de inyección de 220° C y una temperatura de horno de 120° C, 15 minutos. La pureza del Compuesto I se determinó mediante HPLC de fase inversa usando una columna Poroshell 120 EC-C8 (4,6 x 150 mm, partículas de 2,7 pm y un gradiente dual del 30-95% de la fase móvil B durante 40 minutos. Fase móvil A=5 Acetato de amonio mM pH 4,50 y Fase móvil B = Acetonitrilo, Caudal = 1,0 ml/min, volumen de inyección = 5 pl, 254 nm y temperatura de la columna = 30° C.

Los compuestos II, III, IlI-d y IV pueden prepararse mediante cualquier método adecuado en la técnica, por ejemplo, las publicaciones PCT N° W^o 2011/133751, WO 2011/133951, WO 2015/160787 y la Patente de Estados Unidos N° 8.865.902.

Ejemplo 1: Síntesis de (14s)-8-[3-(2-{d¡sp¡ro[2.0.2.1]heptan-7-¡l}etox¡)-1h-p¡razol-1-¡l]-12,12-d¡met¡l-2A6-t¡a-3,9,11,18,23-pentaazatetrac¡clo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1 (22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-tr¡ona (Compuesto I)

Métodos analít¡cos generales de UPLC/HPLC:

A menos que se indique lo contrario, los rendimientos de enantiómeros separados por SFC quiral se dan como un porcentaje del rendimiento teórico para un único enantiómero del racemato.

Método A de LC: UPLC analítica de fase inversa usando una columna Acquity UPLC BEH Cis (30 x 2,1 mm, partículas de 1,7 pm) fabricada por Waters (pn: 186002349) y una ejecución de gradiente dual del 1-99% de la fase móvil B durante 1,2 minutos. Fase móvil A = agua (0,05% de ácido trifluoroacético). Fase móvil B = acetonitrilo (0,035% de ácido trifluoroacético). Caudal = 1,5 ml/min, volumen de inyección = 1,5 pl y temperatura de la columna = 60° C.

Método B de LC: UPLC analítica de fase inversa con una columna Acquity UPLC BEH Cis (50 x 2,1 mm, partículas de 1,7 pm) fabricada por Waters (pn: 186002350) y una ejecución de gradiente dual del 1-99% de la fase móvil B durante 3,0 minutos. Fase móvil A = agua (0,05% de ácido trifluoroacético). Fase móvil B = acetonitrilo (0,035% de ácido trifluoroacético). Caudal = 1,2 ml/min, volumen de inyección = 1,5 pl y temperatura de la columna = 60° C.

Método D de LC: UPLC analítica de fase inversa con una columna Acquity UPLC BEH Cis (50 x 2,1 mm, partículas de 1,7 pm) fabricada por Waters (pn: 186002350) y una ejecución de gradiente dual del 1-99% de la fase móvil B durante 5,0 minutos. Fase móvil A = agua (0,05% de ácido trifluoroacético). Fase móvil B = acetonitrilo (0,035% de ácido trifluoroacético). Caudal = 1,2 ml/min, volumen de inyección = 1,5 pl y temperatura de la columna = 60° C.

Método F de LC: UPLC analítica de fase inversa con una columna Acquity UPLC BEH Cis (50 x 2,1 mm, partículas de 1,7 pm) fabricada por Waters (pn: 186002350) y una ejecución de gradiente dual del 1-99% de la fase móvil B durante 15,0 minutos. Fase móvil A = agua (0,05% de ácido trifluoroacético). Fase móvil B = acetonitrilo (0,035% de ácido trifluoroacético). Caudal = 1,2 ml/min, volumen de inyección = 1,5 pl y temperatura de la columna = 60° C.

Método Q de LC: Columna Merckmillipore Chromolith SpeedROD Cis (50 x 4,6 mm) y ejecución de gradiente dual del 5-100% de la fase móvil B durante 12 minutos. Fase móvil A = agua (0,1% de ácido trifluoroacético). Fase móvil B = acetonitrilo (0,1% de ácido trifluoroacético).

Parte A: Síntes¡s del ác¡do 2-cloro-6-[3-(2-d¡sp¡ro[2.0.2.1]heptan-7-¡letox¡)p¡razol-1-¡l]p¡r¡d¡n-3-carboxíl¡co

Paso 1: 7-(Bromometil)dispiro[2.0.2.1]heptano

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1000 ml con un agitador mecánico, un baño de enfriamiento, un embudo de adición, una sonda de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en una atmósfera de nitrógeno con trifenilfosfina (102,7 ml, 443,2 mmol) y diclorometano (1 l), lo que proporcionó una solución transparente incolora. Se comenzó la agitación y el baño de enfriamiento se cargó con acetona. Se añadió hielo seco en porciones al baño de enfriamiento hasta que se obtuvo una temperatura del recipiente de -15° C. El embudo de adición se cargó con una solución de bromo (22,82 ml, 443,0 mmol) en diclorometano (220 ml, 10 ml/g) que posteriormente se añadió gota a gota durante 1 h. Al baño de enfriamiento se le añadió hielo seco en porciones durante la adición para mantener la temperatura del recipiente a -15° C. Después de que se hubo completado la adición de bromo, la suspensión de color amarillo pálido se continuó agitando a -15° C durante 15 min, momento en el cual la suspensión se enfrió a -30° C. El embudo de adición se cargó con una solución de dispiro[2.0.2.1 ]heptan-7-il metanol (50 g, 402,6 mmol), piridina (35,82 ml, 442,9 mmol) y diclorometano (250 ml, 5 ml/g). Luego, se añadió gota a gota la solución transparente de color amarillo pálido durante 1,5 h manteniendo la temperatura del recipiente a -30° C. La mezcla de la reacción transparente de color amarillo claro resultante se dejó calentar gradualmente hasta una temperatura del recipiente de -5° C y luego se continuó agitando a -5° C durante 1 h. Luego la mezcla de la reacción se vertió en hexano (2000 ml), lo que dio como resultado la formación de un precipitado. La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y luego se filtró a través de un embudo Buchner de frita de vidrio con una capa de celite de 20 mm. El filtrado transparente se concentró a presión reducida (temperatura del baño de agua a 20° C) para proporcionar un aceite amarillo con algo de precipitado presente. El aceite se diluyó con algo de hexano, se dejó reposar a temperatura ambiente durante 15 min y luego se filtró a través de un embudo Buchner de frita de vidrio con una capa de celite de 20 mm. El filtrado claro se concentró a presión reducida (temperatura del baño de agua a 20° C) para proporcionar 7-(bromometil)dispiro[2.0.2.1]heptano (70 g, 93%) como un aceite amarillo trasparente. 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 5 3.49 (d, J=7.5 Hz, 2H), 1.90 (t, J=7.5 Hz, 1H), 1.06-0.84 (m, 4H), 0.71 (ddd, J=9.1,5.1 ,4.0 Hz, 2H), 0.54 (dddd, J=8.6, 4.8, 3.8, 1.0 Hz, 2H).

Paso 2: 2-Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacetonitrilo

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1000 ml con un agitador mecánico, un baño de enfriamiento usado como contención secundaria, una sonda de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en atmósfera de nitrógeno con 7-(bromometil)dispiro[2.0.2.1]heptano (35 g, 187,1 mmol) y sulfóxido de dimetilo (245 ml) que proporcionó una solución ámbar transparente. Se comenzó la agitación y se registró la temperatura del recipiente a 19° C. Luego el recipiente se cargó con cianuro de sodio (11,46 g, 233,8 mmol) añadido como un sólido en una porción que dio como resultado una solución oscura y una exotermia gradual a 49° C durante 15 min. Después de unos pocos minutos, la temperatura del recipiente comenzó a disminuir y la mezcla se continuó agitando a temperatura ambiente durante la noche (aproximadamente 15 h). La mezcla de la reacción oscura se inactivó con solución saturada de carbonato de sodio enfriada con hielo (500 ml) y luego se transfirió a un embudo de decantación y se repartió con éter dietílico (500 ml). Se eliminó la parte orgánica y se extrajo la parte acuosa residual con éter dietílico (2 x 250 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (500 ml), se secaron sobre sulfato de sodio (200 g) y luego se filtraron a través de un embudo Buchner de frita de vidrio. El filtrado de color ámbar trasparente se concentró a presión reducida (temperatura del baño de agua de 20° C) para proporcionar 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacetonitrilo (21 g, 84%) como un aceite de color ámbar oscuro claro. 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 52.42 (d, J=6.6 Hz, 2H), 1.69 (t, J=6.6 Hz, 1H), 1.02-0.88 (m, 4H), 0.79-0.70 (m, 2H), 0.66-0.55 (m, 2H).

Paso 3: Ácido 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacético

A una solución de 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacetonitrilo (2,1 g, 14,19 mmol) en EtOH (32 ml) se le añadió hidróxido de sodio (5,12 g, 128,0 mmol) seguido de agua (13 ml) y el la solución resultante se agitó y se calentó a 70° C durante la noche. Luego la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con éter dietílico. La fase acuosa se ajustó a pH=1 mediante la adición de ácido clorhídrico 6 N (dando como resultado un precipitado turbio) y se extrajo con éter dietílico (3x). Las fases orgánicas se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron y se concentraron dando ácido 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacético (2,19 g, 99% de rendimiento, 98% de pureza) como un sólido naranja que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 52.44 (d, J=6.9 Hz, 2H), 1.67 (t, J=6.9 Hz, 1H), 0.91 (ddd, J=9.0, 5.2, 3.9 Hz, 2H), 0.81 (dddd, J=8.9, 5.2, 3.9, 0.5 Hz, 2H), 0.69 (ddd, J=8.9, 5.2, 3.9 Hz, 2H), 0.56-0.44 (m, 2H).

Paso 4: 2-Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletanol

A hidruro de litio y aluminio (827,4 mg, 902,3 pl, 21,80 mmol) disuelto en tetrahidrofurano (33,71 ml) enfriado en un baño de hielo/agua se le añadió ácido 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-ilacético (2,552 g, 16,77 mmol) en tetrahidrofurano (7,470 ml) gota a gota durante 15 min manteniendo la temperatura de reacción a <20° C. La mezcla se dejó en agitación un total de 18 h, calentándola gradualmente a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió con un baño de hielo/agua y se inactivó secuencialmente con la adición lenta de agua (838,4 mg, 838,4 pl, 46,54 mmol), seguido de hidróxido de sodio (1,006 ml de 5 M, 5,031 mmol), luego agua (2,493 g, 2,493 ml, 138,4 mmol) proporcionando una suspensión granular blanca que se filtró sobre celite. El sólido filtrado se lavó con éter dietílico. El filtrado se concentró al vacío a ~300 mbar y un baño de agua a 30° C. El residuo se diluyó con éter dietílico, se secó (sulfato de magnesio), se filtró y se concentró al vacío a 300 mbar y 30° C en un baño de agua seguido de ~30 segundos al vacío para dar 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletanol (2,318 g, 100%) que se usó directamente en el paso siguiente sin purificación adicional. 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 53.64 (s, 2H), 1.68 (d, J=6.7 Hz, 2H), 1.39 (s, 1H), 1.31 (s, 1H), 0.82 (d, J=14.0 Hz, 4H), 0.65 (s, 2H), 0.50 (d, J=3.6 Hz, 2H).

Paso 5: 3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una solución de 5-oxo-1H-pirazol-2-carboxilato de terc-butilo (2,942 g, 15,97 mmol) y 2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletanol (2,318 g, 16,77 mmol) en tetrahidrofurano (36,78 mmol) ml) se le añadió trifenilfosfina (4,399 g, 16,77 mmol). A la mezcla se le añadió lentamente azodicarboxilato de diisopropilo (3,391 g, 3,302 ml, 16,77 mmol) gota a gota durante 10 min (se observó exotermia leve). La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y luego a 50° C durante 30 min. El tetrahidrofurano se eliminó al vacío. Al residuo bruto se le añadió tolueno (23,54 ml) y la mezcla se agitó durante la noche mientras cristalizaba gradualmente un precipitado. Se suspendió con Celite, luego se filtró el precipitado y se lavó con tolueno (8,705 ml) y de nuevo con tolueno (8,705 ml). El filtrado se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente superficial del 100% de hexanos al 100% de acetato de etilo, dando 3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (3,449 g, 71%). ESI-MS m/z calc. 304.17868, encontrado 305.1 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 0.82 min (LC Método A).

Paso 6: 3-(2-Dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)-1H-pirazol

Se disolvió 3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-carboxilato de terc-butilo (5,304 g, 17,43 mmol) en diclorometano (53,04 ml) con ácido trifluoroacético (29,81 g, 20,14 ml, 261,4 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 120 min. La reacción se evaporó y el aceite resultante se repartió entre acetato de etilo y una solución saturada de bicarbonato de sodio y las capas se separaron. La porción acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo, luego los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para dar un aceite, 3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)-1H-pirazol (3,56 g, 100%). ESI-MS m/z calc. 204.12627, encontrado 205.1 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 0.59 min (LC Método A).

Paso 7: 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilato de terc-butilo

Se combinaron 2,6-dicloropiridin-3-carboxilato de terc-butilo (4,322 g, 17,42 mmol), 3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)-1H-pirazol (3,559 g, 17,42 mmol) y carbonato de potasio (2,891 g, 20,92 mmol) en sulfóxido de dimetilo anhidro (71,18 ml). Se añadió 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (391,1 mg, 3,487 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 16 h. La mezcla de la reacción se diluyó con agua (136,9 ml) y se agitó durante 15 min. El sólido blanco resultante se filtró y se lavó con agua. El sólido se disolvió en diclorometano y se secó sobre sulfato de magnesio. La mezcla se filtró y se evaporó para dar 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilato de terc-butilo (5,69 g, 79%) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 58.35 (d, J=2.9 Hz, 1H), 8.18 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.94 (d, J=2.9 Hz, 1H), 4.25 (s, 2H), 1.90 (d, J=6.8 Hz, 2H), 1.62 (s, 9H), 1.49 (t, J=6.6 Hz, 1H), 0.85 (d, J=1.5 Hz, 4H), 0.65 (d, J=1.5 Hz, 2H), 0.52 (d, J=1.1 Hz, 2H). ESI-MS m/z calc. 415.16626, encontrado 360.0 (M-tBu)+; Tiempo de retencióne: 2.09 min (LC Método B).

Paso 8: Ácido 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxílico

Se disolvió 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxilato de terc-butilo (5,85 g, 14,07 mmol) en diclorometano (58,5 ml) con ácido trifluoroacético (16,26 ml, 211,1 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se evaporó y al sólido resultante se le añadió éter y luego el éter se eliminó a presión reducida. Esta evaporación del éter se repitió dos veces más dando como resultado un sólido blanco, ácido 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxílico (5,06 g, 100%). 1H NMR (400 MHz, Cloroformo-d) 5 8.41 (d, J=8.5 Hz, 1H), 8.37 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.5 Hz, 1H), 5.97 (d, J=2.9 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 1.91 (d, J=6.7 Hz, 2H), 1.50 (s, 1H), 0.85 (d, J=1.5 Hz, 4H), 0.71-0.62 (m, 2H), 0.52 (d, J=1.1 Hz, 2H). ESI-MS m/z calc. 359.10367, encontrado 360.2 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 2.16 min (LC Método B).

Parte B: Síntesis de (4S)-2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1-carboxilato de tercbutilo

Paso 1: (E)-(2-oxotetrahidropiran-3-ilideno)metanolato (sal de sodio)

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas y 5 l con un agitador mecánico, una manta calefactora, un embudo de adición, una sonda/controlador de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en atmósfera de nitrógeno con hidruro de sodio (59,91 g del 60% p/p, 1,498 mol) seguido de heptano (1,5 l) que proporcionó una suspensión gris. Se comenzó la agitación y se registró la temperatura del recipiente a 19° C. Luego se cargó el recipiente con alcohol etílico (3,451 g, 74,91 mmol) añadido mediante una jeringuilla, lo que dio como resultado el desprendimiento de gas. El embudo de adición se cargó con una solución transparente amarillo pálido de tetrahidropiran-2-ona (150 g, 1,498 mol) y formiato de etilo (111 g, 1,50 mol). La solución se añadió gota a gota durante 1 h, lo que dio como resultado el desprendimiento de gas y una exotermia gradual a 45° C. La suspensión blanca espesa resultante se calentó luego a 65° C durante 2 h y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla se continuó agitando a temperatura ambiente durante la noche (aproximadamente 10 h). La mezcla de la reacción se filtró al vacío a través de un embudo Buchner de frita de vidrio (porosidad media) bajo una corriente de nitrógeno. La torta del filtro se lavó por desplazamiento con heptano (2 x 250 ml) y se apoyó durante unos minutos. La torta húmeda con poco heptano se transfirió a una bandeja de vidrio y se secó en un horno de vacío a 45° C durante 15 h para proporcionar un sólido blanco (205 g, 1,36 mol, 91% de rendimiento) como el producto deseado, (E)-(2-oxotetrahidropiran-3-ilideno)metanolato (sal de sodio).

Paso 2: 3-Metilenotetrahidropiran-2-ona

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas y 5 l con un agitador mecánico, una manta calefactora, un embudo de adición, una sonda/controlador de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en una atmósfera de nitrógeno con (E)-(2-oxotetrahidropiran-3-iliden)metanolato (sal de sodio) (205 g, 1,366 mol) (205 g, 1,366 mol) y tetrahidrofurano (1640 ml) lo que proporcionó una suspensión blanca. Se comenzó la agitación y se registró la temperatura del recipiente a 19° C. Luego el recipiente se cargó con paraformaldehído (136,6 g, 4,549 mol) añadido como un sólido en una porción. La suspensión resultante se calentó a 63 ° C y la condición se mantuvo durante 15 h. Tras calentar, la mezcla de la reacción se volvió ligeramente gelatinosa. La mezcla gelatinosa blanca se concentró a presión reducida para eliminar la mayor parte del tetrahidrofurano. El residuo restante se repartió con acetato de etilo (1000 ml), cloruro de sodio saturado (500 ml) e hidrogenocarbonato de sodio saturado (500 ml) en un embudo de decantación. El orgánico se eliminó y el acuoso residual se extrajo con acetato de etilo (5 x 300 ml). El orgánico combinado se secó sobre sulfato de sodio (500 g) y luego se filtró al vacío a través de un embudo Buchner de frita de vidrio con una capa de celite de 20 mm. La torta del filtro se lavó por desplazamiento con acetato de etilo (250 ml). El filtrado trasparente se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite amarillo pálido trasparente (135 g) como el producto bruto deseado. El material se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna de gel de sílice (carga líquida) eluyendo con un gradiente del 100% de hexano al 60% de acetato de etilo en hexano durante 1 h recogiendo fracciones de 450 ml. El producto se detectó por análisis TLC sobre gel de sílice eluyendo con hexanos/acetato de etilo 3:1 y se visualizó bajo UV. Las fracciones del producto se combinaron y concentraron a presión reducida para proporcionar un aceite transparente incoloro (132 g, 1,18 mol, 72% de rendimiento que contenía 16% en peso de acetato de etilo residual por RMN) como el producto deseado, 3-metilentetrahidropiran-2-ona. 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxido-d6) 5 6.18 (q, J=1.9 Hz, 1H), 5.60 (q, J=1.9 Hz, 1H), 4.40-4.26 (m, 2H), 2.61 (ddt, J=7.0, 6.3, 2.0 Hz, 2H), 1.90-1.75 (m, 2H).

Paso 3: 3-(2-Metil-2-nitro-propil)tetrahidropiran-2-ona

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 5000 ml con un agitador mecánico, un baño de enfriamiento usado como contención secundaria, una sonda de temperatura J-Kem, un embudo de adición y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en atmósfera de nitrógeno con 2-nitropropano (104,9 g, 1,177 mol). Se comenzó la agitación y se registró la temperatura del recipiente a 19° C. Luego el recipiente se cargó con 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (22,41 g, 147,2 mmol) añadido puro en una porción que dio como resultado una solución transparente amarillo claro. No se observó exotermia. El embudo de adición se cargó con una solución de 3-metilenetetrahidropiran-2-ona (110 g, 981,0 mmol) en acetonitrilo (1100 ml) que se añadió gota a gota durante 1 h, lo que dio como resultado una solución amarillo claro transparente y una exotermia gradual a 24° C. La mezcla de la reacción se continuó agitando a temperatura ambiente durante 3,5 horas y luego se concentró a presión reducida. El residuo restante se disolvió en diclorometano (1000 ml) y se repartió con 500 ml de una mezcla 3:2 de solución de ácido cítrico 1 molar/solución saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica resultante era una solución transparente de color azul pálido y la fase acuosa era una solución de color azul muy pálido ligeramente turbia. El orgánico se eliminó y el acuoso residual se extrajo con diclorometano (300 ml). El orgánico combinado se lavó con solución saturada de cloruro de sodio (300 ml), se secó sobre sulfato de sodio (250 g) y luego se filtró a través de un embudo Buchner de vidrio fritado. El filtrado se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 200 ml. La solución de diclorometano trasparente de color azul pálido se diluyó con metil terc-butil éter (1500 ml) y la solución turbia se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 200 ml que proporcionó una suspensión. La mezcla se diluyó de nuevo con metil terc-butil éter (1500 ml) y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 250 ml. La suspensión resultante se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche (aproximadamente 12 h). El sólido se recogió mediante filtración al vacío en un embudo Buchner de frita de vidrio y la torta del filtro se lavó por desplazamiento con metil terc-butil éter frío (2 x 150 ml) y luego se extrajo durante 30 min. El material se secó adicionalmente en un horno de vacío a 45° C durante 5 h para proporcionar (160 g, 0,795 mol, 81% de rendimiento) de un sólido blanco como el producto deseado, 3-(2-metil-2-nitro- propil)tetrahidropiran-2-ona. 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxido-d6) 54.34 (ddd, J=11.1,9.3, 4.3 Hz, 1H), 4.20 (dt, J=11.1,5.1 Hz, 1H), 2.75­ 2.62 (m, 1H), 2.56 (dd, J=14.9, 5.2 Hz, 1H), 2.01-1.89 (m, 2H), 1.89-1.67 (m, 2H), 1.55 (d, J=6.0 Hz, 6H), 1.44 (dddd, J=12.8, 11.5, 8.1,6.6 Hz, 1H).

Paso 4: 3-(3-Hidroxipropil)-5,5-dimetil-pirrolidin-2-ona

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1000 ml con una barra agitadora de teflón, una manta calefactora, una sonda/controlador de temperatura J-Kem y tabiques de caucho. El recipiente se cargó con 3-(2-metil-2-nitro-propil)tetrahidropiran-2-ona (25 g, 124,2 mmol) y alcohol etílico (375 ml) que proporcionó una suspensión blanca. Se comenzó la agitación y la suspensión se calentó a 40° C durante 10 min, lo que proporcionó una solución transparente e incolora. Luego se equipó el recipiente con un tubo de dispersión de gases y la solución se desgasificó con nitrógeno durante 15 min. Luego el recipiente se cargó con níquel Raney (8,019 g del 50% p/p, 68,31 mmol) y luego se colocaron los tabiques en el recipiente. El recipiente se evacuó y se colocó bajo una atmósfera de hidrógeno. El proceso se repitió durante tres ciclos. Luego, el recipiente se colocó bajo 1 atmósfera de hidrógeno y la mezcla de la reacción se calentó gradualmente hasta 60° C. La reacción se continuó agitando a 60° C durante 24 h. Después de enfriarlo a temperatura ambiente, el recipiente se equipó con un tubo de dispersión de gases y la mezcla de la reacción se desgasificó con nitrógeno durante 15 min. La mezcla se filtró al vacío a través de un embudo Buchner de frita de vidrio con una capa de celite de 20 mm. La torta del filtro se lavó por desplazamiento con etanol (2 x 100 ml) y se extrajo hasta que se humedeció ligeramente con alcohol etílico, luego se humedeció con agua y el catalizador de níquel Raney usado se descartó bajo agua. El filtrado transparente ámbar pálido se concentró a presión reducida hasta un aceite transparente viscoso ámbar claro. El aceite se diluyó con metil terc-butil éter (1500 ml) y la solución turbia se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 150 ml que proporcionó una suspensión. La mezcla se diluyó de nuevo con metil terc-butil éter (1500 ml) y se concentró a presión reducida hasta un volumen de aproximadamente 150 ml. La suspensión resultante se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche (aproximadamente 12 h). El sólido se recogió mediante filtración al vacío en un embudo Buchner de frita de vidrio y la torta del filtro se lavó por desplazamiento con metil terc-butil éter frío (2 x 50 ml) y luego se extrajo durante 30 min. El material se secó adicionalmente en un horno de vacío a 45° C durante 3 h para proporcionar un sólido blanco (19 g, 0,111 mol, 89% de rendimiento) como producto, 3-(3-hidroxipropil)-5,5-dimetil -pirrolidin-2-ona. 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxido-d6) 5 7.63 (s, 1H), 3.38 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.37 (tdd, J=9.8, 8.5, 4.4 Hz, 1H), 2.02 (dd, J=12.3, 8.6 Hz, 1H), 1.72 (tdd, J=9.6, 7.5, 4.4 Hz, 1H), 1.52-1.32 (m, 3H), 1.28-1.03 (m, 7H).

Paso 5: 3-(5,5-Dimetilpirrolidin-3-il)propan-1-ol

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas y 5 l con un agitador mecánico, una manta calefactora, un embudo de adición, una sonda/controlador de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en atmósfera de nitrógeno con gránulos de hidruro de litio y aluminio (19,39 g, 510,9 mmol). Luego el recipiente se cargó con tetrahidrofurano (500 ml, 20 ml/g). Se comenzó la agitación y se registró la temperatura del recipiente a 20° C. La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 0,5 h para permitir que se disolvieran los gránulos. La temperatura del recipiente de la suspensión gris resultante se registró a 24° C. El embudo de adición se cargó con una solución de 3-(3-hidroxipropil)-5,5-dimetil-pirrolidin-2-ona (25 g, 146,0 mmol) en tetrahidrofurano (500 ml) y la solución transparente amarillo pálido se añadió gota a gota durante 90 min. Se requirió un ligero calentamiento para lograr la homogeneidad. Una vez se hubo completado la adición, la temperatura del recipiente de la suspensión grisácea resultante se registró a 24° C. La mezcla se calentó luego a una temperatura del recipiente de 65° C y la condición se mantuvo durante 72 h. El análisis de la mezcla de la reacción en este punto indicó que todavía quedaba algo de material de partida residual y ningún cambio en la formación del producto. La reacción se detuvo posteriormente en este punto. Se retiró la manta calefactora y se equipó el recipiente con un baño refrigerante. La suspensión se enfrió a 0° C con un baño de enfriamiento de hielo picado/agua y luego se inactivó mediante la adición gota a gota muy lenta de agua (19,93 ml), seguido de una solución de hidróxido de sodio al 15% en peso (19,93 ml) y finalmente con agua (59,79 ml). La temperatura del recipiente de la suspensión blanca resultante se registró a 5° C. Se retiró el baño de enfriamiento y se equipó de nuevo el recipiente con una manta calefactora. La suspensión se calentó a 60° C y la condición se mantuvo durante 30 min. La suspensión caliente se filtró al vacío a través de un embudo Buchner de frita de vidrio con una capa de celite de 20 mm. Luego la torta del filtro se lavó por desplazamiento con tetrahidrofurano a 60° C (2 x 250 ml) y luego se extrajo durante 30 min. El filtrado transparente se concentró a presión reducida para proporcionar (23,5 g, 0,149 mol, 99% de rendimiento) de un aceite viscoso amarillo claro transparente como el producto deseado, 3-(5,5-dimetilpirrolidin-3-il)propan-1-ol. 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxidods) 53.37 (dt, J=8.3, 6.4 Hz, 3H), 2.95 (dd, J=10.6, 7.6 Hz, 1H), 2.40 (dd, J=10.7, 7.7 Hz, 1H), 2.04 (dt, J=16.1,8.1 Hz, 1H), 1.69 (dd, J=12.2, 8.2 Hz, 1H), 1.50-1.24 (m, 5H), 1.11 -0.94 (m, 7H).

Paso 6: 4-(3-hidroxipropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

Se equipó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 L con un agitador mecánico, un baño de enfriamiento, un embudo de adición, una sonda de temperatura J-Kem y una entrada/salida de nitrógeno. El recipiente se cargó en atmósfera de nitrógeno con 3-(5,5-dimetilpirrolidin-3-il)propan-1-ol (15 g, 95,39 mmol) y diclorometano (225 ml, 15 ml/g) que proporcionó una solución trasparente amarillo claro. Se comenzó la agitación y la temperatura del recipiente se registró a 19° C. El baño de enfriamiento se cargó con hielo triturado/agua y la temperatura del recipiente se redujo a 0° C. El embudo de adición se cargó con trietilamina (12,55 g, 124,0 mmol) que posteriormente se añadió puro gota a gota durante 5 min. No se observó exotermia. Después, el embudo de adición se cargó con dicarbonato de di-tercbutilo (22,89 g, 104,9 mmol) disuelto en diclorometano (225 ml). Luego se añadió gota a gota la solución transparente color amarillo pálido durante 30 min, lo que dio como resultado un suave desprendimiento de gas. No se observó exotermia. Se retiró el baño de enfriamiento y la solución de color amarillo claro transparente resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de la reacción se transfirió a un embudo de decantación y se repartió con agua (75 ml). El orgánico se eliminó y se lavó con solución saturada de cloruro de sodio (75 ml), se secó sobre sulfato de sodio (150 g) y luego se filtró a través de un embudo Buchner de frita de vidrio. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar (30 g) de un aceite trasparente amarillo claro como el producto bruto deseado. El material se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna de gel de sílice (carga líquida con diclorometano) eluyendo con un gradiente del 100% de diclorometano al 10% de alcohol metílico en diclorometano durante 60 min recogiendo fracciones de 50 ml. Las fracciones del producto deseado se combinaron y concentraron a presión reducida para proporcionar 4-(3-hidroxipropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (22 g, 0,0855 mol, 90% de rendimiento) como un aceite viscoso amarillo pálido transparente.

1H NMR (400 MHz, DMSO-da) 5 4.38 (td, J=5.2, 1.4 Hz, 1H), 3.54 (dt, J=10.3, 6.7 Hz, 1H), 3.38 (td, J=6.6, 3.5 Hz, 2H), 2.76 (q, J=10.3 Hz, 1H), 2.07 (td, J=11.6, 5.7 Hz, 1H), 1.87 (ddd, J=16.7, 12.1,6.0 Hz, 1H), 1.37 (dd, J=14.2, 10.4 Hz, 17H), 1.24 (s, 3H).

Paso 7: 2,2-dimetil-4-(3-metilsulfoniloxipropil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

Se disolvieron 4-(3-hidroxipropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (50,5 g, 196,22 mmol) y trietilamina (39,711 g, 54,698 ml, 392,44 mmol) en diclorometano (500 ml) y la solución resultante se enfrió en un baño de agua con hielo durante 30 min. Se añadió gota a gota cloruro de mesilo (24,725 g, 16,706 ml, 215,84 mmol) durante un período de 30 min, luego se retiró el baño de hielo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Luego, la reacción se inactivó con una solución saturada de bicarbonato de sodio (200 ml). Las fases se separaron y la fase orgánica se extrajo con bicarbonato de sodio saturado (200 ml) y agua (2 x 100 ml). Las fases acuosas se desecharon y la fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para obtener 2, 2-dimetil-4-(3-metilsulfoniloxipropil)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (64,2 g, 93%) como un aceite amarillo pálido. ESI-MS m/z calc. 335.1766, encontrado 336.4 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 5.54 min (LC Método Q).

Paso 8: 4-(3-aminopropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

Se disolvió 2,2-dimetil-4-(3-metilsulfoniloxipropil)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (64,2 g, 191,38 mmol) en dioxano (650 ml) y luego se añadió hidróxido de amonio (650 ml) y la mezcla resultante se calentó a 45° C durante 18 h. Después de 18 h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente. La solución se diluyó con hidróxido de sodio 1 M (200 ml) y luego se extrajo con éter dietílico (3 x 650 ml). La fase acuosa se descartó y las fases orgánicas combinadas se extrajeron con agua (2 x 200 ml). Las fases acuosas se descartaron y la fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío para producir 4-(3-aminopropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (48,9 g, 95%) como un aceite de color amarillo pálido. ESI-MS m/z calc. 256.2151, encontrado 257.3 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 3.70 min (LC Método Q).

Paso 9: 2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

A 4-(3-aminopropil)-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (8,91 g, 34,8 mmol) y 6-fluoropiridin-2-sulfonamida (6,13 g, 34,8 mmol) en sulfóxido de dimetilo (75 ml) se le añadió carbonato de potasio (4,91 g, 35,5 mmol) y la mezcla se agitó a 100° C durante 12 h y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agitó durante 4 h adicionales (16 h en total). La mezcla de la reacción se vertió lentamente en ácido clorhídrico (35 ml de 1 M, 35,00 mmol) en agua (200 ml) (se formó algo de espuma) y se diluyó con acetato de etilo (250 ml). La fase orgánica se separó y se lavó con 100 ml de salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró sobre celite y se concentró al vacío para proporcionar un aceite amarillo oscuro. El producto bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 0%-100% en hexanos. Se recogieron fracciones tanto puras (9,0 g) como impuras (3 g). Las fracciones impuras se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con acetato de etilo al 0%-100% en hexanos proporcionando, en total, 2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino] propil]pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (10,0 g, 69%). 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxido-d6) 5 7.52 (dd, J=8.5, 7.2 Hz, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.95 (dd, J=7.2, 0.7 Hz, 2H), 6.61 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.55 (q, J=9.1 Hz, 1H), 3.32-3.24 (m, 2H), 2.79 (q, J=10.0 Hz, 1H), 2.13 (d, J=16.1 Hz, 1H), 1.96-1.82 (m, 1H), 1.51 (dt, J=18.0, 9.3 Hz, 2H), 1.37 (dd, J=12.9, 10.6 Hz, 15H), 1.24 (s, 3H). ESI-MS m/z calc. 412.21442, encontrado 413.1 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 2.34 min (LC Método D).

Paso 10: (4S)-2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

Se sometió 2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1-carboxilato racémico (7 g, 16,97 mmol) a separación quiral mediante cromatografía SFC utilizando una ChiralPak IG (columna de 250 x 21,2 mm, tamaño de partícula de 5 gm) con una fase móvil del 40% de metanol/60% de dióxido de carbono a 70 ml/min durante 11,0 min (volumen de inyección = 500 gl de solución de 32 mg/ml en metanol) dando como resultado el primer pico en eluir, (4S)-2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (3,4481 g, 99%). ESI-MS m/z calc. 412.21442, encontrado 413.2 (M+1)±; Tiempo de retencióne: 0.63 min (LC Método A).

Parte C: Síntesis de (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2A6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1 (22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona (Compuesto I)

Paso 1: (4S)-4-[3-[[6-[[2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-ilo ]piridin-3-carbonil]sulfamoil]-2-piridil]amino]propil]-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo

A una solución de ácido 2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxílico (5,2 g, 14,45 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) se le añadió carbonil diimidazol (2,8 g, 16,51 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A esta mezcla se le añadió (4S)-2,2-dimetil-4-[3-[(6-sulfamoil-2-piridil)amino]propil]pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (6,0 g, 14,54 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) seguido de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (6,5 ml, 43,47 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se diluyó con agua (150 ml) y la mezcla se acidificó con ácido clorhídrico acuoso (15 ml de 6 M, 90,00 mmol). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (300 ml) y la fase orgánica se separó. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró sobre Celite y se concentró al vacío proporcionando un precipitado blanco. El precipitado se suspendió con acetonitrilo y el sólido se recogió por filtración usando una frita de vidrio mediana y se lavó con acetonitrilo. El filtrado se concentró al vacío proporcionando un aceite amarillo. El aceite bruto se diluyó con acetonitrilo y algo de N-metil-2-pirrolidona y se cromatografió en una columna Cis de fase inversa de 415 g eluyendo con un 50%-100% de acetonitrilo en agua dando (4S)-4-[3-[ [6-[[2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carbonil]sulfamoil]-2-piridil]amino]propil]-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (4,5 g, 41%). ESI-MS m/z calc. 753.30756, encontrado 754.4 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 3.79 min (LC Método D).

Paso 2: 2-cloro-N-[[6-[3-[(35)-5,5-dimetilpirrolidin-3-il]propilamino]-2-piridil]sulfonil]-6-[3-(2-dispiro [2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (sal de trifluoroacetato)

A una solución de (4S)-4-[3-[[6-[[2-cloro-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1 -il]piridin-3-carbonil]sulfamoil]-2-piridil]amino]propil]-2,2-dimetil-pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (5,9 g, 7,821 mmol) en diclorometano (30 ml) y tolueno (15 ml) se le añadió ácido trifluoroacético (6,0 ml, 77,88 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. El solvente se eliminó al vacío con la temperatura del baño fijada a 45° C, proporcionando un aceite amarillo espeso. El aceite se diluyó con tolueno (125 ml) y el solvente se eliminó al vacío con la temperatura del baño fijada a 45° C. El aceite se diluyó con tolueno y el solvente se eliminó al vacío, proporcionando un aceite amarillo espeso y viscoso, 2-cloro- N-[[6-[3-[(3S)-5,5-dimetilpirrolidin-3-il]propilamino]-2-piridil]sulfonil]-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.

1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (sal de trifluoroacetato) (6,0 g, 100%) que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. ESI-MS m/z calc. 653.2551, encontrado 654.3 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 2.6 min (LC Método B).

Paso 3: (14S)-8-[3-(2-{D¡spiro[2.0.2.1]heptan-7-¡l}etox¡)-1 H-pirazol-1 -il]-12,12-dimetil-2A6-t¡a-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona (compuesto I)

A una solución de 2-cloro-N-[[6-[3-[(3S)-5,5-dimetilpirrolidin-3-il]propilamino]-2-piridil]sulfonil]-6-[3-(2-dispiro[2.0.2.1]heptan-7-iletoxi)pirazol-1-il]piridin-3-carboxamida (sal de trifluoroacetato) (6,0 g, 7,810 mmol) en NMP (140 ml) se le añadió carbonato de potasio (5,3 g, 38,35 mmol). La mezcla se purgó con nitrógeno durante 5 min. Luego la mezcla se calentó a 150° C durante 22 h. La mezcla de la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió a agua (300 ml) proporcionando un precipitado sólido blanquecino. La mezcla se acidificó cuidadosamente con ácido clorhídrico acuoso (12 ml de 6 M, 72,00 mmol) proporcionando una lechada espumosa. El sólido se recogió por filtración usando una frita de vidrio mediana. La torta de filtración húmeda se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y se lavó con 200 ml de salmuera. La fase acuosa estaba ligeramente turbia por lo que se acidificó con una pequeña cantidad de ácido clorhídrico 6N y se devolvió a la fase orgánica. La fase acuosa se separó y la fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró al vacío proporcionando un aceite amarillo claro. Este producto bruto se diluyó con acetonitrilo y se cromatografió en una columna de fase inversa Cis de 415 g eluyendo con un 50%-100% de acetonitrilo en agua. El producto se aisló como una espuma de color crema. La espuma se secó al vacío a 45° C durante 48 h dando (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1 ]heptan-7-il}etoxi)-1 H-pirazol-1 -il]-12,12-dimetil-2A6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaeno-2,2,4-triona (Compuesto I) (3,32 g, 68%). 1H NMR (400 MHz, dimetilsulfóxido-ds) 5 12.48 (s, 1H), 8.20 (d, J=2.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=8.5, 7.2 Hz, 1H), 7.05 (d, J=7.1 Hz, 1H), 6.97 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.2 Hz, 1H), 6.71 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.08 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.21 (td, J=6.7, 1.3 Hz, 2H), 3.92 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.16 (s, 1H), 2.95 (d, J=13.3 Hz, 1H), 2.78-2.66 (m, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.92-1.72 (m, 4H), 1.60 (s, 6H), 1.51 (s, 3H), 1.47 (t, J=6.5 Hz, 1H), 1.31 (q, J=12.2 Hz, 1H), 0.89-0.77 (m, 4H), 0.69-0.61 (m, 2H), 0.53-0.45 (m, 2H). ESI-MS m/z calc. 617.27844, encontrado 618.4 (M+1)+; Tiempo de retencióne: 10.29 min (LC Método F).

Las sales de Ca2+, Na+, y K+ del Compuesto I se prepararon mezclando el Compuesto I con Ca(OCH3)2, Na(OCH3) y KOH, respectivamente: mezclando el Compuesto I (1 g) y Ca(OCH3)2 (83 mg) en metanol (65 ml) a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego a 65° C durante 30 minutos; mezclando el compuesto I (0,6 g (1 mMol)) en MeOH (40 ml) con 25% en peso de Na(OCH3)) en MeOH (250 ml (1 equiv. molar)) a 60° C durante 20 minutos; y mezclando el Compuesto I (0,6 g) en acetona (11 ml) con KOH 1 N (1 equivalente molar) a 50° C durante 1 hora. Después de la filtración de las soluciones calientes resultantes, los filtrados se evaporaron hasta la sequedad para proporcionar las sales amorfas deseadas, respectivamente (no se muestran los datos de PXRD).

Ejemplo 2: Síntesis de (R)-1-(2,2-d¡fluorobenzo[d][1,3]d¡oxol-5-¡l)-N-(1-(2,3-d¡h¡drox¡prop¡lo)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1 H-indol-5-il)ciclopropanecarboxamida (Compuesto II)

Paso 1: 2-(1-((2,2-d¡met¡l-1,3-d¡oxolan-4-¡l)metil)-6-fluoro-5-n¡tro-1H-¡ndol-2-¡l)-2-met¡lpropanoato de (R)-bencilo y 2-(1-(((R)-2,2-d¡met¡l-1,3-d¡oxolan- 4-¡l)met¡l)-6-fluoro-5-n¡tro-1H-¡ndol-2-¡l)-2-met¡lpropanoato de ((^s )-2,2-D¡met¡l-1,3-d¡oxolan-4-¡l)met¡lo

Se añadió carbonato de cesio (8,23 g, 25,3 mmol) a una mezcla de 2-(6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoato de bencilo (3,0 g, 8,4 mmol) y (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil 4-metilbencenosulfonato (7,23 g, 25,3 mmol) en DMF (17 ml). La reacción se agitó a 80° C durante 46 horas en atmósfera de nitrógeno. Luego la mezcla se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas de acetato de etilo combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSÜ4, se filtraron y se concentraron. El producto bruto, un aceite marrón viscoso que contiene los dos productos mostrados anteriormente, se llevó directamente al paso siguiente sin purificación adicional. 2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropanoato de (R)-Bencilo, ESI-MS m/z calc. 470.2, encontrado 471.5 (M+1)+. Tiempo de retencióne 2.20 minutos. 2-(1 -(((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo)-6-fluoro-5-nitro-1 H-indol-2-il)-2-metilpropanoato de ((S)-2,2-Dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo, ESI-MS m/z calc. 494.5, encontrado 495.7 (M+1)+. Tiempo de retencióne 2.01 minutos.

Paso 2: (R)-2-(1-((2,2-d¡met¡l-1,3-d¡oxolan-4-¡l)met¡l)-6-fluoro-5-n¡tro-1H-¡ndol-2-¡l)- 2-met¡lpropan-1-ol

La mezcla de la reacción bruta obtenida en el paso (A) se disolvió en THF (42 ml) y se enfrió en un baño de agua con hielo. Se añadió gota a gota LiAlH4 (16,8 ml de solución 1 M, 16,8 mmol). Una vez se hubo completado la adición, la mezcla se agitó durante 5 minutos adicionales. La reacción se inactivó añadiendo agua (1 ml), solución de NaOH al 15% (1 ml) y luego agua (3 ml). La mezcla se filtró sobre Celite y los sólidos se lavaron con THF y acetato de etilo. El filtrado se concentró y purificó por cromatografía en columna (30-60% de acetato de etilo-hexanos) para obtener (R)-2-(1-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol como un aceite marrón (2,68 g, 87% en 2 pasos). ESI-MS m/z calc. 366.4, encontrado 367.3 (M+1)+. Tiempo de retencióne 1.68 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 58.34 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J=13.4 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.94 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.64-4.60 (m, 1H), 4.52-4.42 (m, 2H), 4.16-4.14 (m, 1H), 3.76-3.74 (m, 1H), 3.63-3.53 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.38-1.36 (m, 6H) and 1.19 (s, 3H) ppm

Paso 3: (R)-2-(5-am¡no-1-((2,2-d¡met¡l-1,3-d¡oxolan-4-¡l)met¡l)-6-fluoro-1H-¡ndol-2-¡l)- 2-met¡lpropan-1-ol

Se disolvió (R)-2-(1 -((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-5-nitro-1 H-indol-2-il)-2-metilpropano-1 -ol (2,5 g, 6,82 mmol) en etanol (70 ml) y la reacción se lavó con N2. Luego se añadió Pd-C (250 mg, 5% en peso). La reacción se lavó de nuevo con nitrógeno y luego se agitó bajo H2 (atm). Después de 2,5 horas, solo se observó una conversión parcial al producto por LCMS. La reacción se filtró a través de Celite y se concentró. El residuo se volvió a someter a las condiciones anteriores. Después de 2 horas, la LCMS indicó una conversión completa al producto. La mezcla de la reacción se filtró a través de Celite. El filtrado se concentró para dar el producto como un sólido negro (1,82 g, 79%). ESI-MS m/z calc. 336.2, encontrado 337.5 (M+1)+. Tiempo de retencióne 0.86 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 57.17 (d, J=12.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.79-4.76 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.37­ 4.31 (m, 3H), 4.06 (dd, J=6.1,8.3 Hz, 1H), 3.70-3.67 (m, 1H), 3.55-3.52 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.32 (s, 6H) and 1.21 (s, 3H) ppm.

Paso 4: (R)-1-(2,2-d¡fluorobenzo[d][1,3]d¡oxol-5-¡l)-N-(1-((2,2-d¡met¡l-1,3-d¡oxolan-4-¡l)met¡l)-6-fluoro-2-(1-h¡drox¡-2-met¡lpropan-2-¡l)-1H-¡ndol-5-¡l)c¡clopropanocarboxam¡da

Se añadió DMF (3 gotas) a una mezcla en agitación de ácido 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxílico (1,87 g, 7,7 mmol) y cloruro de tionilo (1,30 ml, 17,9 milimoles). Después de 1 hora se había formado una solución trasparente. La solución se concentró al vacío y luego se añadió tolueno (3 ml) y la mezcla se concentró de nuevo. El paso de tolueno se repitió una vez más y el residuo se sometió a vacío alto durante 10 minutos. Luego el cloruro de ácido se disolvió en diclorometano (10 ml) y se añadió a una mezcla de (R)-2-(5-amino-1-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-1H-indol-2-il)-2-metilpropan-1-ol (1,8 g, 5,4 mmol) y trietilamina (2,24 ml, 16,1 mmol) en diclorometano (45 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción se lavó con una solución de HCl 1 N, solución de NaHCÜ3 saturada y salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró para dar el producto como un sólido espumoso negro (3 g, 100%). ESI-MS m/z calc. 560.6, encontrado 561.7 (M+1)+. Tiempo de retencióne 2.05 minutos. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 58.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42-7.40 (m, 2H), 7.34-7.30 (m, 3H), 6.24 (s, 1H), 4.51-4.48 (m, 1H), 4.39-4.34 (m, 2H), 4.08 (dd, J=6.0, 8.3 Hz, 1H), 3.69 (t, J=7.6 Hz, 1H), 3.58-3.51 (m, 2H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.34-1.33 (m, 6H), 1.18 (s, 3H) and 1.14-1.12 (m, 2H) ppm

Paso 5: (R)-1-(2,2-d¡fluorobenzo[d][1,3]d¡oxol-5-¡l)-N-(1-(2,3-dih¡drox¡prop¡l)-6-fluoro-2-(1-h¡drox¡-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida

Se disolvió (R)-1 -(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1 -(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (3,0 g, 5,4 mmol) en metanol (52 ml). Se añadió agua (5,2 ml) seguido de p-TsOH.H2O (204 mg, 1,1 mmol). La reacción se calentó a 80° C durante 45 minutos. La solución se concentró y luego se repartió entre acetato de etilo y solución saturada de NaHCO3. La capa de acetato de etilo se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (50-100% de acetato de etilo-hexanos) para dar el producto como un sólido espumoso de color crema. (1,3 g, 47%, ee >98% por SFC). ESI-MS m/z calc. 520.5, encontrado 521.7 (M+1)+. Tiempo de retencióne 1.69 minutos. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-ds) 58.31 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42-7.38 (m, 2H), 7.33-7.30 (m, 2H), 6.22 (s, 1H), 5.01 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.90 (t, J=5.5 Hz, 1H), 4.75 (t, J=5.8 Hz, 1H), 4.40 (dd, J=2.6, 15.1 Hz, 1H), 4.10 (dd, J=8.7, 15.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.65­ 3.54 (m, 2H), 3.48-3.33 (m, 2H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.32 (s, 3H) and 1.14-1.11 (m, 2H) ppm.

Ejemplo 3: Síntesis de N-(2,4-d¡-terc-butil-5-h¡drox¡fen¡lo)-4-oxo-1,4-d¡h¡droqu¡nol¡na-3-carboxam¡da (Compuesto III)

Parte A: Síntesis del ácido 4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxílico

Paso 1: éster dietílico del ácido 2-fenilaminometilen-malónico

Se calentó a 140-150° C durante 2 h una mezcla de anilina (25,6 g, 0,275 mol) y 2-(etoximetilen)malonato de dietilo (62,4 g, 0,288 mol). La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se secó a presión reducida para proporcionar éster dietílico del ácido 2-fenilaminometilen-malónico en forma de un sólido, que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. 1H NMR (DMSO-ds) 5 11.00 (d, 1H), 8.54 (d, J=13.6 Hz, 1H), 7.36-7.39 (m, 2H), 7.13-7.17 (m, 3H), 4.17-4.33 (m, 4H), 1.18-1.40 (m, 6H).

Paso 2: Éster etílico del ácido 4-hidroxiquinolina-3-carboxílico

Un matraz de tres bocas de 1 l equipado con un agitador mecánico se cargó con éster dietílico del ácido 2-fenilaminometilen-malónico (26,3 g, 0,100 mol), ácido polifosfórico (270 g) y cloruro de fosforilo (750 g). La mezcla se calentó a 70° C y se agitó durante 4 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El residuo se trató con solución acuosa de Na2CO3, se filtró, se lavó con agua y se secó. Se obtuvo éster etílico del ácido 4-hidroxiquinolin-3-carboxílico en forma de un sólido marrón pálido (15,2 g, 70%). El producto bruto se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.

Paso 3: Ácido 4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxílico

Se suspendió éster etílico del ácido 4-hidroxiquinolin-3-carboxílico (15 g, 69 mmol) en solución de hidróxido de sodio (2 N, 150 ml) y se agitó durante 2 h a reflujo. Después de enfriarla, la mezcla se filtró y el filtrado se acidificó a pH 4 con HCl 2N. El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó al vacío para dar ácido 4-oxo-1,4-dihidroquinolin-3-carboxílico como un sólido blanco pálido (10,5 g, 92%). 1H NMR (DMSO-d6) 5 15.34 (s, 1H), 13.42 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.28 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.81 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.60 (m, 1 H).

Parte B: Síntesis de N-(2,4-d¡-terc-butil-5-h¡drox¡fen¡l)-4-oxo-1,4-d¡h¡droqu¡nol¡na-3-carboxam¡da

Paso 1: Éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-fenílico del ácido carbónico

Se añadió gota a gota cloroformiato de metilo (58 ml, 750 mmol) a una solución de 2,4-di-terc-butil-fenol (103,2 g, 500 mmol), Et3N (139 ml, 1000 mmol) y DMAP (3,05 g, 25 mmol) en diclorometano (400 ml) enfriada en un baño de agua con hielo a 0° C. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente mientras se agitaba durante la noche, luego se filtró a través de gel de sílice (aproximadamente 1 l) usando un 10% de acetato de etilo-hexanos (~4 L) como eluyente. Los filtrados combinados se concentraron para proporcionar éster metílico del éster 2,4-di-terc-butilfenílico del ácido carbónico como un aceite amarillo (132 g, cuant.). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.35 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.30 (s, 9H), 1.29 (s, 9H).

Paso 2: Éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-5-nitro-fenílico del ácido carbónico y éster metílico del éster 2.4- di-terc-butil-6-nitro-fenílico del ácido carbónico

A una mezcla agitada de éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-fenílico del ácido carbónico (4,76 g, 180 mmol) en ácido sulfúrico concentrado (2 ml), enfriado en un baño de agua con hielo, se le añadió una mezcla enfriada de ácido sulfúrico (2 ml) y ácido nítrico (2 ml). La adición se hizo lentamente para que la temperatura de reacción no excediera los 50° C. La reacción se dejó en agitación durante 2 horas mientras se calentaba a temperatura ambiente. Luego la mezcla de la reacción se añadió a agua con hielo y se extrajo con éter dietílico. La capa de éter se secó (MgSO4), se concentró y se purificó por cromatografía en columna (0-10% de acetato de etilo-hexanos) para proporcionar una mezcla de éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-5-nitro-fenílico del ácido carbónico y éster metílico del ácido carbónico 2,4- éster metílico del éster di-terc-butil-6-nitro-fenílico como un sólido amarillo pálido (4,28 g), que se usó directamente en el paso siguiente.

Paso 3: 2,4-Di-terc-butil-5-nitrofenol y 2,4-Di-terc-butil-6-nitrofenol

La mezcla de éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-5-nitro-fenílico del ácido carbónico y éster metílico del éster 2,4-di-terc-butil-6-nitro-fenílico del ácido carbónico (4,2 g, 14,0 mmol) se disolvió en MeOH (65 ml) antes de añadir KOH (2,0 g, 36 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Luego, la mezcla de la reacción se volvió ácida (pH 2-3) añadiendo HCl concentrado y se repartió entre agua y éter dietílico. La capa de éter se secó (MgSO4), se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna (0-5% de acetato de etilo-hexanos) para proporcionar 2,4-di-terc-butil-5-nitro-fenol (1,31 g, 29% sobre 2 pasos) y 2,4-di-terc-butil-6-nitro-fenol. 2,4-Di-terc-butil-5-nitro-fenol: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 10.14 (s, 1H, OH), 7.34 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.30 (s, 9H).

2.4- Di-terc-butil-6-nitro-fenol: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 11.48 (s, 1H), 7.98 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J=2.4 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.34 (s, 9H).

Paso 4: 5-Amino-2,4-di-terc-butil-fenol

A una solución en reflujo de 2,4-di-terc-butil-5-nitro-fenol (1,86 g, 7,40 mmol) y formiato de amonio (1,86 g) en etanol (75 ml) se le añadió Pd-5% en peso sobre carbono activado (900 mg). La mezcla de la reacción se agitó a reflujo durante 2 h, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de Celite. El Celite se lavó con metanol y los filtrados combinados se concentraron para proporcionar 5-amino-2,4-di-terc-butil-fenol como un sólido gris (1,66 g, cuant.). 1H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 58.64 (s, 1H, OH), 6.84 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 4.39 (s, 2H, NH2), 1.27 (m, 18H); HPLC ret. time 2.72 min, 10-99% CH3CN, 5 min run; ESI-MS 222.4 m/z [M+H]+.

Paso 5: N-(5-h¡drox¡-2,4-d¡-terc-butil-fen¡l)-4-oxo-1 H-quinolina-3-carboxamida

A una suspensión de ácido 4-oxo-1,4-dihidroquinolin-3-carboxílico (35,5 g, 188 mmol) y HBTU (85,7 g, 226 mmol) en DMF (280 ml) se le añadió Et3N (63,0 ml, 451 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se hizo homogénea y se dejó en agitación durante 10 min antes de añadir en pequeñas porciones 5-amino-2,4-di-terc-butil-fenol (50,0 g, 226 mmol). La mezcla se dejó en agitación durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se volvió heterogénea en el transcurso de la reacción. Después de que se hubo consumido todo el ácido (análisis LC-MS, MH+ 190, 1,71 min), el solvente se eliminó al vacío. Se añadió EtOH al material sólido naranja para producir una lechada. La mezcla se agitó en un rotavapor (temperatura del baño 65° C) durante 15 min sin colocar el sistema al vacío. La mezcla se filtró y el sólido capturado se lavó con hexanos para proporcionar un sólido blanco que era el cristalato de EtOH. Se añadió Et2O al sólido obtenido anteriormente hasta que se formó una lechada. La mezcla se agitó en un rotovapor (temperatura del baño 25° C) durante 15 min sin poner el sistema al vacío. La mezcla se filtró y el sólido se capturó. Este procedimiento se realizó un total de cinco veces. El sólido obtenido después de la quinta precipitación se colocó al vacío durante la noche para proporcionar N-(5-hidroxi-2,4-di-terc-butil-fenil)-4-oxo-1H-quinolina-3-carboxamida como un sólido pulverulento blanco. (38g, 52%). HPLC ret. time 3.45 min, 10-99% CH3CN, 5 min run; 41 NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 12.88 (s, 1H), 11.83 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.33 (dd, J=8.2, 1.0 Hz, 1H), 7.83-7.79 (m, 1H), 7.76 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.54-7.50 (m, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.37 (s, 9H); ESI-MS m/z calc.

392.21; encontrado 393.3 [M+H]+.

Ejemplo 4: Síntesis de n-^-O erc-butilH -O erc-butil-d^-h idroxifenilM -oxo-l^-d ih idroquinolina^-carboxamida (Compuesto IlI-d)

Paso 1.2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-fenol

A una solución de 4-terc-butil fenol (3,43 g, 22,7 mmol) y terc-butil alcohol-d10 (3,00 ml, 31,8 mmol, 98% de átomos de D, Cambridge Isotope Laboratories, Inc.) en diclorometano (40,0 ml) se le añadió D2SO4 (1,50 ml, 99,5% de átomos de D, Sigma-Aldrich). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, luego se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCO3 saturado, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía en columna (SO2, 0-15% de acetato de etilo/heptanos) para proporcionar 2-(terc-butil-dg)-4-(terc-butil)-6-d-fenol (4,04 g, 83% de rendimiento) como un aceite transparente. 1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz) 5 9.04 (s, 1H), 7.12 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.98 (dd, J=3.8, 2.5 Hz, 1H), 6.67 (d, J=8.3 Hz, 0.3H), 1.22 (s, 10H).

Paso 2: Carbonato de 2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-fenilmetilo

A una solución de 2-(terc-butil-dg)-4-(terc-butil)-6-d-fenol (4,04 g, 18,8 mmol), trietilamina (5,24 ml, 37,6 mmol) y N,N-dimetilaminopiridina (115 mg, 0,940 mmol) en CH2Cl2 (40,0 ml) a 0° C se le añadió cloroformiato de metilo (2,17 ml, 28,2 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas y se añadieron trimetilamina (1,30 ml, 9,33 mmol) y cloroformiato de metilo (0,550 ml, 7,15 mmol) adicionales. Después de agitar durante 1 hora adicional, la reacción se diluyó con 10% de acetato de etilo/heptanos y se filtró a través de un tapón de sílice. Luego, el tapón de sílice se enjuagó con un 10% de acetato de etilo/heptanos adicional. El filtrado se combinó y se concentró al vacío para proporcionar carbonato de 2-(terc-butil-dg)-4-(terc-butil)-6-d-fenilmetilo (4,69 g, 91% de rendimiento) como un aceite amarillo claro que se llevó adelante sin purificación. 1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz) 5 7.33 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.30-7.20 (m, 1H), 7.06 (d, J=8.5 Hz, 0.3H), 3.84 (d, J=0.7 Hz, 3H), 1.28 (s, 9H).

Paso 3: 2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-5-nitro-fenol

A una solución de carbonato de 2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-fenilmetilo (4,69 g, 17,2 mmol) en ácido sulfúrico (2,00 ml) a 0° C se le añadió gota a gota una mezcla 1:1 de ácido sulfúrico y ácido nítrico (4,00 ml). Luego, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante dos horas y luego se añadió lentamente a agua con hielo con agitación vigorosa. La lechada resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron para dar un aceite de color ámbar que contenía una mezcla de regioisómeros. Luego, este aceite bruto se recogió en MeOH (100 ml) y se añadió KOH (3,50 g). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se acidificó a pH=2 con HCl concentrado. La solución resultante se extrajo con éter dietílico (3 x 100 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. A continuación, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 0-5% de acetato de etilo/heptanos) para proporcionar 2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-5-nitro-fenol (1,33 g, 30%) como un sólido amarillo claro. MS (ESI) 260,2 [(M-H)-].

Paso 4: 5-Amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-fenol

Se calentó a reflujo una solución de 2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-5-nitro-fenol (1,33 g, 5,11 mmol) y formiato de amonio (1,29 g, 20,4 mmol) en etanol (60,0 ml). En este momento, se añadió en pequeñas porciones Pd/C al 10% (650 mg, 50% húmedo) y la reacción se continuó agitando a reflujo durante dos horas. Luego, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con THF, se filtró a través de Celite® y se concentró al vacío para proporcionar 5-amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-d-fenol (1,19 g, 100%) como un sólido rosa. MS (ESI) 232,3 [(M+H)+].

Paso 5: 5-Amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-fenol

Se disolvió 5-amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-6-dfenol (298 mg, 1,29 mmol) en HCl 5 M en 2-propanol (20 ml) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. Luego, la reacción se concentró al vacío y se recogió en HCl 5 M en 2-propanol (20 ml). Después de agitar durante 15 horas adicionales a temperatura ambiente, la reacción se concentró al vacío y se diluyó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml). La solución acuosa resultante se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para proporcionar 5-amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-fenol (240 mg, 81%) como un sólido rosa. 1H NMR (ds-DMSO, 400 MHz) 58.62 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 1.27 (s, 9H).

Paso 6: N-(2-(terc-butil)-4-(terc-butil-d9)-5-hidroxifenil)-4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (Compuesto III-d)

A una solución de 5-amino-2-(terc-butil-d9)-4-(terc-butil)-fenol (240 mg, 1,04 mmol), ácido 4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxílico (adquirido de Matrix Scientific, 99 mg, 0,521 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (181 pl, 1,04 mmol) en DMF (6,00 ml) se le añadió HATU (198 mg, 0,521 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante tres horas, luego se diluyó con NaHCO3 saturado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 x 20 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (SiO2, 0-70% de acetato de etilo/heptanos) para proporcionar N-(2-(terc-butil)-4-(terc-butil-dg)-5-hidroxifenil)-4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxamida (Compuesto III-d) (80 mg, 38% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz) 5 12.88 (s, 1H), 11.81 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.32 (dd, J=8.1, 1.4 Hz, 1H), 7.86-7.77 (m, 1H), 7.75 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.09 (s, 1H) 1.37 (s, 9H); MS (ESI) 402.3 [(M+H)+].

Ejemplo 5: Síntesis del ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanecarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico (Compuesto IV)

Se adquirió Vitride® (hidruro de bis(2-metoxietoxi)aluminio de sodio [o NaAlH2(OCH2CH2OCH3)2 ], solución al 65% en peso en tolueno) de Aldrich Chemicals. El ácido 2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-carboxílico se adquirió de Saltigo (una filial de Lanxess Corporation).

Paso 1: (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-metanol

El ácido 2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-carboxílico comercialmente disponible (1,0 eq) se suspendió en tolueno (10 vol). Se añadió Vitride® (2 eq) a través de un embudo de adición a una velocidad para mantener la temperatura a 15-25° C. Al final de la adición, la temperatura se aumentó a 40° C durante 2 horas (h), luego se añadió cuidadosamente 10% (p/p) acuoso (ac) de NaOH (4,0 eq) a través de un embudo de adición, manteniendo la temperatura a 40-50° C. Después de agitar durante 30 minutos (min) adicionales, se permitió que las capas se separaran a 40° C. La fase orgánica se enfrió a 20° C, luego se lavó con agua (2 x 1,5 vol), se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró para proporcionar (2,2-difluoro-1, 3-benzodioxol-5-il)-metanol que se usó directamente en el paso siguiente.

Paso 2: 5-clorometil-2,2-difluoro-1,3-benzodioxol

1. SOC12 (1.5 equiv)

DMAP (0.01 equiv)

MTBE (5 vol)

Se disolvió (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-metanol (1,0 eq) en MTBE (5 vol). Se añadió una cantidad catalítica de 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (DMAP) (1% en moles) y se añadió SOCl2 (1,2 eq) mediante un embudo de adición. El SOCl2 se añadió a una velocidad para mantener la temperatura en el reactor a 15-25° C. La temperatura se aumentó a 30° C durante 1 hora y luego se enfrió a 20° C. Se añadió agua (4 vol) a través de un embudo de adición mientras se mantenía la temperatura a menos de 30° C. Después de agitar durante 30 min adicionales, se permitió que las capas se separaran. La capa orgánica se agitó y se añadió NaOH acuoso al 10% (p/v) (4,4 vol). Después de agitar durante de 15 a 20 min, se permitió que las capas se separaran. Luego, la fase orgánica se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró para proporcionar 5-clorometil-2,2-difluoro-1,3-benzodioxol bruto que se usó directamente en el paso siguiente.

Paso 3: (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo

1. NaCN (1.4 equiv)

DMSO (3 vol)

30-40 grados C

95-100% de rendimiento

Se añadió una solución de 5-clorometil-2,2-difluoro-1,3-benzodioxol (1 eq) en DMSO (1,25 vol) a una suspensión de NaCN (1,4 eq) en DMSO (3 vol), mientras se mantenía la temperatura a entre 30 y 40° C. La mezcla se agitó durante 1 h y luego se añadió agua (6 vol), seguido de metil terc-butil éter (MTBE) (4 vol). Después de agitar durante 30 min, se separaron las capas. La capa acuosa se extrajo con MTBE (1,8 vol). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1,8 vol), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron para proporcionar (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo bruto (95%) que se usó directamente en el paso siguiente. 1H NMR (500 MHz, DMSO) 57.44 (br s, 1H), 7.43 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.22 (dd, J=8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H).

Paso 3b: Síntesis alternativa de (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-1-acetato de etilo-acetonitrilo

Se purgó un reactor con nitrógeno y se cargó con tolueno (900 ml). El solvente se desgasificó mediante rociado de nitrógeno durante no menos de 16 horas. Luego se cargó al reactor Na3PO4 (155,7 g, 949,5 mmol), seguido de bis(dibencilidenacetona)paladio (0) (7,28 g, 12,66 mmol). Se cargó una solución al 10% p/p de terc-butilfosfina en hexanos (51,23 g, 25,32 mmol) durante 10 minutos a 23° C desde un embudo de adición purgado con nitrógeno. La mezcla se dejó en agitación durante 50 minutos, momento en el que se añadió 5-bromo-2,2-difluoro-1,3-benzodioxol (75 g, 316,5 mmol) durante 1 minuto. Después de agitar durante 50 minutos adicionales, la mezcla se cargó con cianoacetato de etilo (71,6 g, 633,0 mmol) durante 5 minutos, seguido de agua (4,5 ml) en una porción. La mezcla se calentó a 70° C durante 40 minutos y se analizó por HPLC cada 1 a 2 horas para determinar el porcentaje de conversión del reactivo en el producto. Una vez se hubo observado la conversión completa (típicamente 100% de conversión después de 5 a 8 horas), la mezcla se enfrió a 20 a 25° C y se filtró a través de una almohadilla de celite. La almohadilla de celite se enjuagó con tolueno (2 x 450 ml) y los extractos orgánicos combinados se concentraron a 300 ml al vacío de 60 a 65° C. El concentrado se cargó con DMSO (225 ml) y se concentró al vacío de 70 a 80° C hasta que cesó la destilación activa del solvente. La solución se enfrió a 20 a 25° C y se diluyó a 900 ml con DMSO en preparación para el Paso 3c. 1H NMR (500 MHz, CDCla) 57.16-7.10 (m, 2H), 7.03 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.19 (m, 2H), 1.23 (t, J=7.1 Hz, 3H).

Paso 3c: Síntesis alternativa de (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo

La solución de DMSO de (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-1-acetato de etilo-acetonitrilo anterior se cargó con HCl 3 N (617,3 ml, 1,85 mol) durante 20 minutos mientras se mantenía una temperatura interna menor de 40° C. Luego la mezcla se calentó a 75° C durante 1 hora y se analizó por HPLC cada 1 a 2 horas para determinar el porcentaje de conversión. Cuando se hubo observado una conversión mayor del 99% (típicamente después de 5 a 6 horas), la reacción se enfrió a 20 a 25° C y se extrajo con MTBE (2 x 525 ml), con tiempo suficiente para permitir la separación completa de fases durante las extracciones. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaCl al 5% (2 x 375 ml). Luego, la solución se transfirió a un equipo apropiado para una destilación al vacío de 1,5 a 2,5 Torr que estaba equipado con un matraz receptor enfriado. La solución se concentró al vacío a menos de 60° C para eliminar los solventes. Luego se destiló (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo del aceite resultante a una temperatura de 125 a 130° C (temperatura del horno) y de 1,5 a 2,0 Torr. Se aisló (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo como un aceite transparente con un rendimiento del 66% a partir de 5-bromo-2,2-difluoro-1,3-benzodioxol (2 pasos) y con una pureza por HPLC del 91,5% AUC (corresponde a un ensayo p/p del 95%). 1H NMR (500 MHz, DMSO) 57.44 (br s, 1H), 7.43 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.22 (dd, J=8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H).

Paso 4: (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo

Se calentó a 70° C durante 1 h una mezcla de (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrilo (1,0 eq), KOH acuoso al 50% en peso (5,0 eq), 1 -bromo-2-cloroetano (1,5 eq) y Oct4NBr (0,02 eq). La mezcla de la reacción se enfrió y luego se elaboró con MTBE y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera. El solvente se eliminó para proporcionar (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo. 1H N^m R (500 MHz, DMSO) 5 7.43 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.30 (dd, J=8.4, 1.9 Hz, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.53 (m, 2H).

Paso 5: Ácido 1-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarboxílico

1. 6 M NaOH (8 equiv)

EtOH (5 vol), 80 grados C

.

acido cítrico al 10% ac (8 vol)

69% de rendimiento

Se hidrolizó (2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarbonitrilo usando NaOH 6 M (8 equiv) en etanol (5 vol) a 80° C durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el etanol se evaporó al vacío. El residuo se recogió en agua y MTBE, se añadió HCl 1 M y las capas se separaron. Luego la capa de MTBE se trató con diciclohexilamina (DCHA) (0,97 equivalentes). La suspensión se enfrió a 0° C, se filtró y se lavó con heptano para dar la sal de DCHA correspondiente. La sal se tomó en MTBE y ácido cítrico al 10% y se agitó hasta que se hubieron disuelto todos los sólidos. Las capas se separaron y la capa de MTBE se lavó con agua y salmuera. Un cambio de solvente a heptano seguido de filtración dio ácido 1-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarboxílico después de secar en un horno de vacío a 50° C durante la noche. ESI-MS m/z calc. 242.04, encontrado 241.58 (M+1)+; 1H NMR (500 MHz, DMSO) 5 12.40 (s, 1H), 7.40 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 1.46 (m, 2H), 1.17 (m, 2H).

Paso 6: cloruro de 1-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarbonilo

Se suspende ácido 1-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropanocarboxílico (1,2 eq) en tolueno (2,5 vol) y la mezcla se calienta a 60° C. Se añadió SOCl2 (1,4 eq) a través de un embudo de adición. El tolueno y el SOCl2 se destilaron de la mezcla de la reacción después de 30 minutos. Se añadió tolueno adicional (2,5 vol) y la mezcla resultante se destiló de nuevo, dejando el producto cloruro de ácido como un aceite, que se usó sin purificación adicional.

Paso 7: 3-(3-metilpiridin-2-il)benzoato de terc-butilo

Se disolvió 2-bromo-3-metilpiridina (1,0 eq) en tolueno (12 vol). Se añadió K2CO3 (4,8 eq), seguido de agua (3,5 vol). La mezcla resultante se calentó a 65° C bajo una corriente de N2 durante 1 hora. Luego se añadieron ácido 3-(t-butoxicarbonil)fenilborónico (1,05 eq) y Pd(dppf)C^CH2Cl2 (0,015 eq) y la mezcla se calentó a 80° C. Después de 2 horas, se apagó el calor, se añadió agua (3,5 vol) y se dejó que las capas se separasen. Luego, la fase orgánica se lavó con agua (3,5 vol) y se extrajo con ácido metanosulfónico acuoso al 10% (2 eq MsOH, 7,7 vol). La fase acuosa se basificó con NaOH acuoso al 50% (2 eq) y se extrajo con EtOAc (8 vol). La capa orgánica se concentró para proporcionar 3-(3-metilpiridin-2-il)benzoato de terc-butilo bruto (82%) que se usó directamente en el paso siguiente.

Paso 8: 2-(3-(terc-butoxicarbonil)fenil)-3-metilpiridin-1-óxido

urea-peróxido de hidrógeno anhídrido itá lico

EtOAc, agua

Se disolvió 3-(3-metilpiridin-2-il)benzoato de terc-butilo (1,0 equiv.) en EtOAc (6 vol). Se añadió agua (0,3 vol), seguido de urea-peróxido de hidrógeno (3 eq). Luego se añadió anhídrido ftálico (3 eq) en porciones a la mezcla como un sólido a una velocidad para mantener la temperatura en el reactor por debajo de 45° C. Una vez se hubo completado la adición de anhídrido ftálico, la mezcla se calentó a 45° C. Después de agitar durante 4 horas adicionales, se apagó el calor. Se añadió Na2SO3 acuoso al 10% p/p (1,5 eq) a través de un embudo de adición. Una vez se hubo completado la adición de Na2SO3, la mezcla se agitó durante 30 min adicionales y las capas se separaron. La capa orgánica se agitó y se añadió Na2CO3 acuoso al 10% p/p (2 equiv.). Después de agitar durante 30 minutos, se permitió que las capas se separaran. La fase orgánica se lavó con NaCl acuoso al 13% p/v. Luego, la fase orgánica se filtró y se concentró para proporcionar 2-(3-(terc-butoxicarbonil)fenil)-3-metilpiridin-1-óxido bruto (95%) que se usó directamente en el paso siguiente.

Paso 9: 3-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)benzoato de terc-butilo

Se calentó a 70° C una solución de 2-(3-(terc-butoxicarbonM)fenil)-3-metMpiridin-1 -óxido (1 eq) y piridina (4 eq) en acetonitrilo (8 vol). Se añadió una solución de anhídrido metanosulfónico (1,5 eq) en MeCN (2 vol) durante 50 min a través de un embudo de adición mientras se mantenía la temperatura a menos de 75° C. La mezcla se agitó durante 0,5 horas adicionales después de que se hubiese completado la adición. Luego, la mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió etanolamina (10 eq) a través de un embudo de adición. Después de agitar durante 2 horas, se añadió agua (6 vol) y la mezcla se enfrió a 10° C. Después de agitar durante 3 horas, el sólido se recogió por filtración y se lavó con agua (3 vol), acetonitrilo/agua 2:1. (3 vol) y acetonitrilo (2 x 1,5 vol). El sólido se secó hasta peso constante (<1% de diferencia) en un horno de vacío a 50° C con una ligera purga de N2 para proporcionar 3-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)benzoato de terc-butilo como un sólido rojo-amarillo (53% de rendimiento).

Paso 10: 3-(6-(1-(2,2-D¡fluorobenzo[d][1,3]d¡oxol-5-¡l)-c¡clopropanocarboxam¡do)-3-met¡lp¡r¡d¡n-2-¡l)-tbutilbenzoato

El cloruro de ácido bruto descrito anteriormente se disolvió en tolueno (2,5 vol sobre la base del cloruro de ácido) y se añadió a través de un embudo de adición a una mezcla de terc-butil-3-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)benzoato (1 eq.), DMAP, (0,02 eq) y trietilamina (3,0 eq) en tolueno (4 vol sobre la base del terc-butil-3-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)benzoato). Después de 2 horas, se añadió agua (4 vol sobre la base del terc-butil-3-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)benzoato) a la mezcla de la reacción. Después de agitar durante 30 minutos, se separaron las capas. Luego, la fase orgánica se filtró y se concentró para proporcionar un aceite espeso de 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)-t-butilbenzoato (rendimiento bruto cuantitativo). Se añadió acetonitrilo (3 vol sobre la base del producto bruto) y se destiló hasta que se produjo la cristalización. Se añadió agua (2 vol sobre la base del producto bruto) y la mezcla se agitó durante 2 h. El sólido se recogió por filtración, se lavó con acetonitrilo/agua 1:1 (en volumen) (2 x 1 volúmenes sobre la base del producto bruto) y se secó parcialmente en el filtro al vacío. El sólido se secó hasta peso constante (<1% de diferencia) en un horno de vacío a 60° C con una ligera purga de N2 para proporcionar 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)-t-butilbenzoato como un sólido marrón.

Paso 11: Ác¡do 3-(6-(1-(2,2-d¡fluorobenzo[d][1,3]d¡oxol-5-¡l)c¡clopropanocarboxam¡do)-3-met¡lp¡r¡d¡n-2-¡l)benzo¡co • Sal de HCl

A una lechada de 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)-tbutilbenzoato (1,0 eq.) en MeCN (3,0 vol) se le añadió agua (0,83 vol) seguido de HCl acuoso concentrado (0,83 vol). La mezcla se calentó a 45 ± 5° C. Después de agitar durante 24 a 48 h, la reacción se completó y la mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió agua (1,33 vol) y la mezcla se agitó. El sólido se recogió por filtración, se lavó con agua (2 x 0,3 vol) y se secó parcialmente en el filtro al vacío. El sólido se secó hasta un peso constante (<1% de diferencia) en un horno de vacío a 60° C con una ligera purga de N2 para proporcionar ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico^HCl como un sólido blanquecino.

T l D fí i r l m I

Ejemplo 6. Preparación de un comprimido que contiene 5 mg de Compuesto I

Se pasa celulosa microcristalina a través de un tamiz de acero inoxidable (malla 30) y se cargan 210,1 g en un recipiente Bohle de 10 l. El compuesto I se pasa a través de un tamiz de acero inoxidable (malla 30) y se cargan 210,0 g en el recipiente Bohle de 10 l. El recipiente se sella y los componentes se mezclan durante 2 min a una velocidad de 32 RPM para proporcionar una mezcla de celulosa microcristalina/Compuesto I. La mezcla de celulosa microcristalina/Compuesto I se descarga en un recipiente de acero inoxidable. Los siguientes materiales se tamizan a través de un tamiz de malla 30 de acero inoxidable y se añaden al recipiente Bohle de 10 l en este orden: lactosa (aproximadamente la mitad de 1022,2 g), celulosa microcristalina (aproximadamente la mitad de 812 g), mezcla de celulosa microcristalina/Compuesto I, polivinilpirrolidona/acetato de vinilo (210,1 g), croscarmelosa sódica (133 g), celulosa microcristalina (la mitad restante de la cantidad de 812 g) y lactosa (la mitad restante de la cantidad de 1022,2 g). El recipiente se sella y los componentes se mezclan durante 18,5 min a una velocidad de 32 RPM. Se pasa estearilfumarato de sodio Pruv® a través de un tamiz de acero inoxidable de malla 60 y se cargan 53,1 g en el recipiente Bohle. El recipiente se sella y los componentes se mezclan durante 4 min a una velocidad de 32 RPM. Se prueba la homogeneidad del recipiente. La mezcla se añade a una prensa de comprimidos Piccola y se comprime en comprimidos que pesan 67,0 mg.

T l m i i n m rimi m I

Ejemplo 7. Ensayo de bioactividad

Soluciones

El medio base (ADF+++) consistía en DMEM avanzado/F12 de Ham, Glutamax 2 mM, HEPES 10 mM, penicilina/estreptomicina 1 g/ml.

El medio de mantenimiento de enteroide intestinal (IEMM) consistía en ADF+++, suplemento 1xB27, suplemento 1xN2, N-acetilcisteína 1,25 mM, nicotinamida 10 mM, hEGF 50 ng/ml, gastrina 10 nM, hR-espondina-1 1 gg/ml, 100 ng/ml de hNoggin, inhibidor A-83-01de TGF-b tipo 1, 100 gg/ml de Primocin, inhibidor SB202190 de P38 M APK10 gM.

El tampón del baño 1 consistía en MgCl21 mM, NaCl 160 mM, KCl 4,5 mM, HEPES 10 mM, glucosa 10 mM, CaCl22 mM).

El tampón libre de cloruro consistía en gluconato de magnesio 1 mM, gluconato de calcio 2 mM, gluconato de potasio 4,5 mM, gluconato de sodio 160 mM, HEPES 10 mM, glucosa 10 mM.

La solución de colorante del baño 1 consistía en tampón del baño 1, Pluronic F127 al 0,04%, metiloxonol 20 gM, CaCCinh-A01 30 gM, Chicago Sky Blue 30 gM.

La solución de colorante libre de cloruro consistía en tampón libre de cloruro, Pluronic F127 al 0,04%, metiloxonol 20 |^j M, CaCCinh-A01 30 |^jM, Chicago Sky Blue 30 gM.

La solución de estimulación de colorante libre de cloruro consistía en solución de colorante libre de cloruro, forskolina 10 ^j M, IBMX 100 gM y compuesto III 300 nM.

Cultivo celular

Se obtuvieron células enteroides epiteliales intestinales humanas del Hubrecht Institute for Developmental Biology and Stem Cell Research, Utrecht, Países Bajos, y se expandieron en matraces en T como se ha descrito anteriormente (Dekkers JF, Wiegerinck CL, de Jonge HR, Bronsveld I, Janssens HM, de Winter-de Groot KM, Brandsma AM, de Jong NWM, Bijvelds MJC, Scholte BJ, Nieuwenhuis EES, van den Brink S, Clevers H, van der Ent CK, Middendorp S y M Beekman JM. A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids. Nat Med. 2013 Jul;19(7):939-45.

Recogida y siembra de células enteroides

Las células se recuperaron en solución de recuperación celular, se recogieron por centrifugación a 650 rpm durante 5 min a 4° C, se volvieron a suspender en TryPLE y se incubaron durante 5 min a 37° C. Luego se recogieron las células por centrifugación a 650 rpm durante 5 min a 4° C y se volvieron a suspender en IEMM que contenía inhibidor de ROCK (RI) 10 gM. La suspensión de células se pasó a través de un filtro de células de 40 gm y se volvió a suspender a 1 x 106 células/ml en IEMM que contenía 10 gM de RI. Las células se sembraron a razón de 5000 células/pocillo en placas de múltiples pocillos y se incubaron durante la noche a 37° C, 95% de humedad y 5% de CO2 antes del ensayo.

Ensayo de colorante de potencial de membrana

Las células enteroides se incubaron con el compuesto de prueba en IEMM durante 18-24 horas a 37° C, 95% de humedad y 5% de CO2. Después de las incubaciones del compuesto, se empleó un ensayo de colorante de potencial de membrana usando un FLIPR Tetra para medir directamente la potencia y la eficacia del compuesto de prueba sobre el transporte de cloruro mediado por CFTR después de la adición aguda de forskolina 10 gM y Compuesto III 300 nM. Brevemente, las células se lavaron 5 veces en el tampón del baño 1. Se añadió la solución de colorante del baño 1 y las células se incubaron durante 25 min a temperatura ambiente. Después de la incubación con colorante, las células se lavaron 3 veces en solución de colorante libre de cloruro. El transporte de cloruro se inició mediante la adición de solución de estimulación de colorante libre de cloruro y la señal de fluorescencia se leyó durante 15 min. El transporte de cloruro mediado por CFTR para cada condición se determinó a partir de la AUC de la respuesta de fluorescencia a la estimulación aguda con forskolina y compuesto III 300 nM. Luego el transporte de cloruro se expresó como un porcentaje del transporte de cloruro después del tratamiento con Compuesto I 3 gM, Compuesto II 3 gM, y control de combinación triple de Compuesto III agudo 300 nM (% de actividad).

A continuación se representan los datos de la Tabla 9:

Actividad máxima: ++ es >60%; + es 30-60%; es <30%. EC50: ++ es <1 gM; + es 1-3 gM; es >3 gM; y ND es “no determinado”.

T l D n l m I

Ejemplo 8

El Compuesto I aumenta el transporte de cloruro solo y en combinación con el Compuesto II y/o el Compuesto III en F508del/F508del HBE y F508del/MF HBE

Se realizaron estudios de cámara de Ussing para medir el transporte de cloruro mediado por F508del CFTR en células HBE derivadas de 3 donantes homocigóticos para F508del y 5 donantes F508del/MF (G542X, 3 donantes; E585X, 1 donante; 3905InsT, 1 donante). Como control positivo, se incluyeron en cada experimento concentraciones máximamente eficaces de N-(bencenosulfonil)-6-[3-[2-[1 -(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1 -il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirrolidin-1 -il]piridin-3-carboxamida (ver WO 2018/064632) y N-[(6-amino-2-piridil)sulfonil]-6-(3-fluoro-5-isobutoxi-fenil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirrolidin-1-il]piridin-3-carboxamida (ver WO 2016/057572) en combinación con el Compuesto II/Compuesto III.

En estas líneas celulares de CF, el transporte de cloruro mediado por CFTR fue bajo en ausencia de moduladores de CFTR, lo que es consistente con poco o nada de CFTR en la superficie celular. El tratamiento con el Compuesto I solo durante de 16 a 24 horas provocó un modesto aumento en el transporte de cloruro tanto en las células F508del/F508del HBE como en F508del/MF HBE. La combinación del Compuesto I y el Compuesto II aumentó aún más el transporte de cloruro en comparación con el Compuesto I solo y fue similar al del Compuesto II/Compuesto III. La adición del Compuesto III potenció fuertemente el transporte de cloruro en presencia del Compuesto I o en combinación con el Compuesto I/Compuesto II. Los análisis de sinergia mostraron que el efecto del Compuesto I fue altamente sinérgico con una concentración fija de Compuesto III o Compuesto II/Compuesto III y fue modestamente sinérgico con una combinación fija de Compuesto II. En la mayoría de las concentraciones de Compuesto I, el Compuesto I/Compuesto II/Compuesto III aumentó el transporte de cloruro más que el Compuesto I/Compuesto II o el Compuesto I/Compuesto III. Sin embargo, la eficacia del Compuesto I/Compuesto III y Compuesto I/Compuesto II/Compuesto III fue similar en sus valores de EC90 respectivos. Los valores de EC90 respectivos en condiciones que activan al máximo CFTR para el Compuesto I/Compuesto III y el Compuesto I/Compuesto II/Compuesto III fueron 0,848 pM y 0,152 pM en F508del/F508del HBE y 1,15 pM y 0,122 pM en F508del/MF HBE.

Después de una única administración oral del Compuesto I en animales macho, los valores medios de tmax del Compuesto I fueron de 9 horas en ratas, 4 horas en perros y 3 horas en monos. La biodisponibilidad oral media (F) fue de baja a moderada en ratas (76,9%), perros (49,7%) y monos (12,9%).

Parámetros farmacocinéticos del Compuesto I después de una única administración oral del Compuesto I en ratas, perros y monos macho

Especie Dosis Nominal (mg/kg) AUC⁰- «(pg^h/ml) Cmax (pg/ml) tmax (h) t1/2 (h) F (%)

Rata 3 31.9 ± 11.1 1.10 ± 0.337 9.33 ± 2.31 22.6 ± 2.83 76.9 Perro 1 38.5 ± 4.70 2.44 ± 0.178 4.00 ± 0.00 11.1 ± 1.09 49.7 Mono 1 0.795 ± 0.233 0.102 ± 0.0132 3.33 ± 1.15 3.07 ± 1.16 12.9 Nota: Los datos se presentan como media ± SD (n = 3).

A medida que aumentaba la dosis, la exposición sistémica del Compuesto I aumentaba de una manera más que proporcional a la dosis en ratas y perros. La exposición normalizada por dosis fue mayor en ratas hembra que en ratas macho. En perros, las exposiciones sistémicas al Compuesto I fueron similares en ambos sexos. Después de la administración oral repetida del Compuesto I durante 28 días en ratas y perros, se observó acumulación de exposición al Compuesto I. La exposición sistémica al Compuesto I en el día 28 fue mayor que en el día 1 (la relación de AUC0-24 h Día 28/Día 1 varió de 1,63 a 2,70 en ratas macho, de 5,01 a 8,26 en ratas hembra, de 1,73 a 2,64 en perros macho y de 1,82 a 2,23 en perros hembra).

Ejemplo 9. Estudio de seguridad y eficacia del Compuesto I

Se realizó un análisis de seguridad de un estudio clínico en curso para 37 sujetos en las Cohortes A1 a A5, 33 sujetos en la Cohorte B y 17 sujetos en la Cohorte C, que estuvieron expuestos a por lo menos 1 dosis del fármaco del estudio (Compuesto I o placebo) como una monoterapia y como parte de una combinación triple con el Compuesto II o el Compuesto III. El Compuesto I fue generalmente seguro y bien tolerado hasta una dosis de 60 mg qd en monoterapia y 20 mg qd en combinación triple con el Compuesto II y el Compuesto III.

Estudios de eficacia planificados

Este es un estudio de prueba de concepto de Fase 2, de 3 partes, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo y TEZ/IVA del Compuesto I. Las partes del estudio pueden realizarse en paralelo o secuencialmente. La aleatorización se estratificará por ppFEVi.

Parte 1: Sujetos con genotipos F508del/MF

La Parte 1 evalúa el Compuesto I en combinación triple con el Compuesto II y el Compuesto III-d como se muestra en la Tabla a continuación.

El Período de reposo (18±3 días) se incluye para permitir una evaluación más completa de las relaciones exposición-respuesta del Compuesto I mediante la realización de evaluaciones de PK y PD durante el reposo del Compuesto I.

Dosis Planificadas

• Las dosis planificadas del Compuesto I de 5 mg, 10 mg y 20 mg qd pueden ajustarse en función de los datos emergentes.

• La dosificación del Compuesto II será de 100 mg qd (una vez al día) y del Compuesto III-d será de 150 mg qd.

Parte 2 (Opcional): Sujetos con genotipo F508del/F508del

Se requiere que todos los sujetos completen el Período de preparación del Compuesto II/Compuesto III para establecer una línea de referencia fiable durante el tratamiento (Cpd II/Cpd III). El período de reposo de 4 semanas se incluye para evaluar el efecto sobre la DP y los criterios de valoración de la eficacia a medida que los sujetos pasan de la combinación triple a Cpd II/Cpd III, después del reposo del Compuesto I.

Dosis planificadas

• La Parte 2 evaluará la misma dosis del Compuesto I (20 mg una vez al día) usada en la Parte 1. Esta dosis puede ajustarse a la baja en función de los datos emergentes de la Parte D del Estudio 001.

• La dosificación del Compuesto II será de 100 mg qd y del Compuesto III-d será de 150 mg una qd.

• La dosificación del Compuesto II/Compuesto III será Compuesto II 100 mg qd/Compuesto III 150 mg cada 12 horas (q12h)

Parte 3 (Opcional): Sujetos con genotipos F508del/MF

El Período de reposo (18±3 días) se incluye para permitir una evaluación más completa de las relaciones exposición-respuesta del Compuesto I mediante la realización de evaluaciones de PK y PD durante el reposo del Compuesto I.

Dosis planificadas

• La Parte 3 evaluará la misma dosis de Compuesto I (20 mg qd) usada en la Parte 1. Esta dosis puede ajustarse en función de los datos emergentes.

• La dosificación del Compuesto II/Compuesto III será Compuesto II 100 mg qd/Compuesto III 150 mg cada 12 horas (q12h)

Otras realizaciones

El análisis anterior divulga y describe realizaciones meramente ejemplares de esta divulgación. Un experto en la técnica reconocerá fácilmente a partir de dicho análisis y de los dibujos acompañantes y las reivindicaciones que pueden realizarse varios cambios, modificaciones y variaciones. El alcance de la invención se define en las siguientes reivindicaciones.

Claims (29)

REIVINDICACIONES

1. Por lo menos un compuesto elegido entre el Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar a un paciente con necesidad de ello:

(A) de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo diariamente; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de:

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. Por lo menos un compuesto elegido de (i) y (ii):

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar a un paciente con necesidad de ello:

(A) de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo diariamente; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de:

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o (b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

3. Por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo diariamente; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de:

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar a un paciente con necesidad de ello:

(A) de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo diariamente; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de:

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

4. El compuesto o compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende administrar a dicho paciente:

(A)

(a) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo;

(b) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y

(c) por lo menos un compuesto seleccionado de (i) el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, o (ii) el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

(B)

(a) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo;

(b) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y

(c) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

(C)

(a) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo;

(b) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y

(c) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

5. El compuesto o compuestos para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde:

(a) el por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administra en una sola composición con por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II, el Compuesto III, el Compuesto III-d, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; o

(b) el por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y el por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II, el Compuesto III, el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, se administran en una o más composiciones separadas; o

(c) una primera composición farmacéutica que comprende por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con una segunda composición farmacéutica que comprende por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II, el Compuesto III, Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

6. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde una primera composición farmacéutica que comprende por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo se administra en combinación con;

(i) una segunda composición farmacéutica que comprende (a) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y (b) por lo menos un compuesto seleccionado del Compuesto III, el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o

(ii) una segunda composición farmacéutica que comprende el Compuesto II y el Compuesto III-d.

7. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende administrar una sola composición que comprende el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el Compuesto II y el Compuesto III-d.

8. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde se administran diariamente 5 mg, 10 mg o 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra:

(a) como una dosis individual, una vez al día; o

(b) en dos dosis diarias.

10. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde se administran 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en de una a cuatro dosis diarias.

11. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde se administran diariamente de 50 mg a 150 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente en donde se administran 50 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo por dosificación una o dos veces al día.

12. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde se administran diariamente 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

13. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde

(a) se administran 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como una dosis individual, una vez al día; o

(b) los 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administran en dos dosis diarias.

14. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 -12, en donde

(a) se administran diariamente de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(b) se administran diariamente de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde:

(a) se administran diariamente de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(b) se administran diariamente de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

16. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde:

(i)

(a) se administran dos veces al día 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(b) se administran diariamente 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

(ii) la cantidad diaria de 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra en una, dos o tres dosis diarias; o

(iii) la cantidad diaria de 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra en una, dos, tres o cuatro dosis.

17. Por lo menos un compuesto seleccionado de:

(A) el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

(B) el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(C) el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o

(A), (B) y (C),

para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar diariamente a un paciente con necesidad de ello:

(a) de 5 mg a 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

(b) de 50 mg a 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(c)

(i) de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(ii) de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

18. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el método comprende administrar:

(A)

(a) 5 mg, 10 mg o 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

(b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) (i) 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (ii) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(B)

(a) 5 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(C)

(a) 10 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(D)

(a) 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o

(E)

(a) 5 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(F)

(a) 10 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o

(G)

(a) 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; (b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

19. Por lo menos un compuesto seleccionado de:

(A) el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

(B) el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(C) el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o el Compuesto III-d y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o

(A), (B) y (C),

para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar diariamente a un paciente con necesidad de ello:

(a) una primera composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b) una segunda composición farmacéutica diaria que comprende

(i) de 50 a 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(ii) cualquiera de (1) de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o (2) de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

20. El compuesto o compuestos para el uso de la reivindicación 19, en donde el método comprende:

(A)

(a) administrar diariamente a un paciente con necesidad de ello una primera composición farmacéutica que comprende 5 mg, 10 mg o 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b) administrar diariamente al paciente una segunda composición farmacéutica que comprende (i) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(c) administrar diariamente al paciente una tercera composición farmacéutica que comprende 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(B)

(a) una primera composición farmacéutica que comprende 5 mg, 10 mg o 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b) una segunda composición farmacéutica que comprende (i) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

21. Por lo menos un compuesto seleccionado de:

(i) el Compuesto I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

(ii) el Compuesto II y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(iii) el Compuesto III y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; o (i), (ii y (iii),

para su uso en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar diariamente a un paciente con necesidad de ello una primera composición farmacéutica que comprende

(a) de 5 mg a 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

(b) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (c) 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y posteriormente administrar al paciente diariamente una segunda composición farmacéutica que comprende 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

22. El compuesto o compuestos para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-21, en donde el paciente es:

(a) heterocigoto para la mutación F508del CFTR; o

(b) homocigoto para la mutación F508del CFTR.

23. El compuesto o compuestos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, en donde el método comprende administrar una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto I, opcionalmente en donde el método comprende administrar el Compuesto II.

24. El compuesto o compuestos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y 8-21, en donde el método comprende administrar el Compuesto III.

25. El compuesto o compuestos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y 8-20, en donde el método comprende administrar el Compuesto III-d.

26. Una composición farmacéutica que comprende de 5 mg a 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y que opcionalmente comprende uno o más agentes moduladores de CFTR adicionales.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 26 que comprende además:

(A)

(a) de 50 a 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y

(b)

(i) de 150 mg a 300 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o

(ii) de 50 mg a 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(B)

(a) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (b)

(i) 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o

(ii) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(C)

(a) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (b) 150 mg del Compuesto III o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

(D)

(a) 100 mg del Compuesto II o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (b) 150 mg del Compuesto III-d o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

28. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 26 o 27, en donde la composición comprende 5 mg, 10 mg o 20 mg del Compuesto I o una cantidad equivalente de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

29. Productos que contienen:

(A) por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de (i) y (ii):

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y

(ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo,

como una preparación combinada par el uso simultáneo, separado o secuencial en un método para tratar la fibrosis quística en donde el método comprende administrar a un paciente con necesidad de ello:

(A) de 5 mg a 20 mg de por lo menos un compuesto elegido del Compuesto I:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo diariamente; y

(B) por lo menos un compuesto elegido de:

(i) Compuesto II:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y (ii)

(a) Compuesto III:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo o

(b) Compuesto III-d:

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.