ES2938751T3

ES2938751T3 - Derivados de pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida útiles en el tratamiento de la psoriasis y el lupus eritematoso sistémico

Info

Publication number: ES2938751T3
Application number: ES19769352T
Authority: ES
Inventors: Zhaogen Chen; Jon Andre Erickson; Gaiying Zhao
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2018-09-10
Filing date: 2019-09-04
Publication date: 2023-04-14
Anticipated expiration: 2039-09-04
Also published as: US20210188861A1; US11891400B2; CN112638915B; EP3849981A1; WO2020055636A1; JP7179161B2; CN112638915A; EP3849981B1; JP2022500370A

Abstract

La presente invención proporciona un compuesto de fórmula I: en la que R es metilo o etilo; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable útil para tratar la psoriasis o el lupus eritematoso sistémico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida útiles en el tratamiento de la psoriasis y el lupus eritematoso sistémico

La presente invención se refiere a ciertos compuestos nuevos que se unen al dominio de pseudocinasa (JH2) de TYK2 e inhiben cierta señalización de citoquinas, en particular la señalización de IL-23 e IFNa, a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, a procedimientos de uso de los compuestos para tratar ciertas enfermedades autoinmunes, tales como la psoriasis, y a productos intermedios y procesos útiles en la síntesis de los compuestos.

La presente invención está en el campo del tratamiento de la psoriasis y/u otras enfermedades autoinmunes que se cree que están mediadas por la señalización TYK2 de ciertas citoquinas proinflamatorias (Véase, por ejemplo, J.S. Tokarski, et al., J. Biol. Chem. vol. 290(17), páginas 11061 a 11074 (2015)). La psoriasis es una enfermedad crónica de la piel, que se calcula que afecta aproximadamente al 2% de la población general. Las opciones de tratamiento para la psoriasis incluyen, por ejemplo, tratamientos tópicos, tales como los corticosteroides, fototerapia, tal como la luz ultravioleta B (UVB), y tratamientos sistémicos, tales como el metotrexato y el apremilast. Desgraciadamente, estos agentes no siempre proporcionan un tratamiento efectivo y se pueden asociar a diversos efectos secundarios adversos. Así pues, existe una necesidad no cubierta en el tratamiento de las enfermedades autoinmunes, tales como la psoriasis y el lupus eritematoso sistémico, y se desean nuevas opciones terapéuticas.

El documento WO 2017/087590 desvela ciertos compuestos de imidazopiridazina útiles para el tratamiento de afecciones autoinmunes, tales como la psoriasis o el lupus eritematoso sistémico, a través de la modulación de IL-12, IL-23 y/o IFNa actuando sobre TYK2 para provocar la inhibición de la transducción de señales. La Patente de los Estados Unidos Núm. 7.557.110 desvela ciertos derivados de pirazol[1,5-a]pirimidina como inhibidores de la cinasa útiles para tratar trastornos mediados por la cinasa, tales como enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunes. Ciertos ligandos de imidazo[1,2-b]piridazina TYK2 pseudocinasa son desvelados por R. Moslin, et al., Med. Chem. Commun., vol. 8, páginas 700 a 712 (2017) como inhibidores potentes y selectivos de la señalización de TYK2.

Se desean compuestos adicionales que actúen sobre el dominio TYK2 JH2 e inhiban la transducción de señales de IL-23 e IFNa. La presente invención proporciona ciertos compuestos novedosos que son inhibidores selectivos de CDK7. Además, la presente invención proporciona ciertos compuestos novedosos que inhiben la señalización de IL-23 e IFNa. De este modo, la presente invención proporciona ciertos compuestos novedosos que son útiles para tratar enfermedades autoinmunes, tales como la psoriasis y el lupus eritematoso sistémico.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un compuesto de la Fórmula I:

F ó r m u l a I

en la que R es metilo o etilo; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Además, la invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en terapia, en particular para el tratamiento de la psoriasis. Además, esta invención proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento del lupus eritematoso sistémico. La invención también proporciona un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, artritis psoriásica, artritis reumatoide, alopecia areata, dermatitis atópica, espondiloartritis axial y esclerosis múltiple.

La invención además proporciona una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico. La invención proporciona además un proceso para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar un compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico. Esta invención también desvela nuevos intermedios y procesos para la síntesis de los compuestos de la Fórmula I.

Como se usa en la presente memoria, los términos “tratamiento” o “tratar” incluyen frenar, retrasar, detener o revertir la progresión o la gravedad de un síntoma o trastorno existente.

Como se usa en la presente memoria, el término “paciente” se refiere a un mamífero, en particular un ser humano.

Como se usa en la presente memoria, la expresión “cantidad efectiva” se refiere a la cantidad o la dosis del compuesto de la invención, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo que, tras la administración de una sola dosis o de dosis múltiples al paciente, proporciona el efecto deseado en el paciente que está siendo diagnosticado o tratado.

Los expertos en la técnica pueden determinar una cantidad efectiva mediante el uso de técnicas conocidas y por medio de la observación de los resultados obtenidos en circunstancias análogas. A la hora de determinar la cantidad efectiva para un paciente, el diagnosticador que lo atiende tiene en cuenta un número de factores, entre los que se incluyen: la especie del paciente; su tamaño, edad y estado de salud general; la enfermedad o el trastorno específico de que se trate; el grado de afectación o la gravedad de la enfermedad o el trastorno; la respuesta del paciente individual; el compuesto concreto administrado; el modo de administración; las características de biodisponibilidad del preparado administrado; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes. Los compuestos de la presente invención se preparan como formas de dosificación unitaria para proporcionar una dosis diaria que cae dentro del intervalo de aproximadamente 0,005 mg/kg a aproximadamente 8 mg/kg de peso corporal.

Los compuestos de la presente invención se formulan como composiciones farmacéuticas administradas por cualquier vía que haga que el compuesto esté biodisponible. Lo más preferente es que dichas composiciones sean para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y los procesos para prepararlas son muy conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice o f Pharmacy, L.V. Allen, editor, 22da edición, Pharmaceutical Press, 2012).

El compuesto de la Fórmula I, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo es particularmente útil en los procedimientos de tratamiento de la invención, con todas las configuraciones, enantiómeros y mezclas del mismo, que incluyen los racematos, si bien son preferentes ciertas configuraciones. En los párrafos siguientes se describen tales configuraciones. Se entenderá que estas preferencias son aplicables tanto a los procedimientos de tratamiento como a los compuestos de la invención.

Los compuestos de la presente invención incluyen:

Fórmula Ia(i), Fórmula Ia(ii)

Fórmula Ib(i) y Fórmula Ib(ii)

y las sales aceptables para uso farmacéutico de los mismos.

Se prefieren los compuestos de la Fórmula Ia(ii) y la Fórmula Ib(ii), siendo particularmente preferidos el compuesto de la Fórmula Ia(ii) y las sales aceptables para uso farmacéutico del mismo.

ciertos productos intermedios descritos en las siguientes preparaciones pueden contener uno o más grupos protectores de nitrógeno. Se entiende que los grupos protectores pueden variar como lo apreciarán los expertos en la técnica dependiendo de las condiciones particulares de reacción y de las transformaciones particulares a llevar a cabo. Las condiciones de protección y desprotección son muy conocidas por los expertos en la técnica y se describen en la bibliografía (véase, por ejemplo, “Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", cuarta edición, por Peter G.M. Wuts y Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).

Los isómeros y enantiómeros individuales pueden ser separados o resueltos por los expertos en la técnica en cualquier punto conveniente de la síntesis de los compuestos de la invención, por medio de procedimientos tales como las técnicas de cristalización selectiva o la cromatografía quiral (véase, por ejemplo, J. Jacques, et al., “Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 y E.L. Eliel y S.H. Wilen, “Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994).

Una sal aceptable para uso farmacéutico de un compuesto de la invención se puede formar, por ejemplo, por medio de la reacción de una base libre adecuada de un compuesto de la invención y un ácido aceptable para uso farmacéutico adecuado en un disolvente adecuado tal como éter dietílico bajo condiciones convencionales muy conocidas en la técnica. Además, la formación de dichas sales se puede producir simultáneamente tras la desprotección de un grupo protector de nitrógeno. Véase, por ejemplo, Gould, P.L., “Salt selection for basic drugs", International Journal of Pharmaceutics, 33: 201 a 217 (1986); Bastin, R.J., et al., “Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities", Organic Process Research and Development, 4: 427 a 435 (2000); y Berge, S.M., et al., “Pharmaceutical Salts’’, Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1 a 19 (1977).

Ciertas abreviaturas se definen de la siguiente manera: “BOP" se refiere a hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio; “BrettPhos" se refiere a diciclohexil[3,6-dimetoxi-2',4',6'-tris(1 -metiletil)[1,1’-bifenil]-2-il]fosfina; “t-BuOH" se refiere a t-butanoly alcohol t-butílico; “BSA" se refiere a albúmina sérica bovina; “CDI" se refiere a 1,1'-carbonildiimidazol; “DCC" se refiere a 1,3-diclohexilcarbodiimida; “DCM" se refiere a diclorometano; “DEM" se refiere a dietilmalonato; “DIC" se refiere a 1,3-diisopropilcarbodiimida; “DIEA" se refiere a N,N-diisopropiletilamina; “DMAP" se refiere a dimetilaminopiridina; “DMEM" se refiere a Medio de Eagle modificado por Dulbecco"; “DMF" se refiere a N,N-dimetilformamida; “DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; “DPPA" se refiere a difenilfosforilazida; “EDCI" se refiere a : clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; “EtOAc" se refiere a acetato de etilo; “EtOH" se refiere a etanol y alcohol etílico; “FBS” se refiere a suero fetal bovino; “HATU” se refiere a 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazol[4,5-b]piridinio 3-óxido hexafluorofosfato; “HBTU” se refiere a (1H-benzotriazol-1-iloxiXdimetilamino)-N,N-dimetilmetaniminio hexafluorofosfato; “HEPES” se refiere al ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico; “HOAt” se refiere al 1-hidroxi-7-azobenzotriazol; “HOBt” se refiere a hidrato de 1-hidroxilbenzotriazol; “ IFNa” se refiere a interferón alfa; “ IL-12” se refiere a interleucina 12; “ IL-23” se refiere a interleucina 23; “IPA” se refiere a isopropanol y alcohol isopropílico; “JAK” se refiere a Janus quinasa; “LiHMDS” se refiere a hexametildisilazida de litio; “Mel” se refiere a yoduro de metilo; “MeNH²” se refiere a metilamina; “MeOH” se refiere a metanol y alcohol metílico; “MTBE” se refiere a metil ferc-butil éter; “NaOEt” se refiere a etóxido de sodio; “Ni NTA” se refiere a ácido níquel-nitrilotriacético; “PBS” se refiere a solución salina tamponada con fosfato; “Pd(OAc)²” se refiere a acetato de paladio (II); “PyBOP” se refiere a hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinfosfonio); “PyBrOP” se refiere a hexafluorofosfato de bromo(tripirrolidinil)fosfonio; “RPM” se refiere a revoluciones por minuto; “RPMI” se refiere a Roswell Park Memorial Institute; “SPA” se refiere a ensayo por proximidad de centelleo; “T3P” se refiere a 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosforinano-2,4,6-trióxido; “TEA” se refiere a trietilamina; “TFA” se refiere a ácido trifluoroacético; “THF” se refiere a tetrahidrofurano; “TYK2” se refiere a tirosina quinasa 2; “UVB” se refiere a ultravioleta B; “STAT” se refiere a proteína transductora de señales y activadora de la transcripción; e “YSI” se refiere a silicato de itrio.

Los compuestos de la presente invención, o las sales de los mismos, se pueden preparar por medio de una diversidad de procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en los esquemas, las preparaciones y los ejemplos siguientes. Los productos de cada etapa de los esquemas que se presentan a continuación se pueden recuperar por medio de procedimientos convencionales muy conocidos en la técnica, que incluyen la extracción, la evaporación, la precipitación, la cromatografía, la filtración, la trituración y la cristalización. En los esquemas que se presentan a continuación, todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, son los definidos anteriormente. Los reactivos y los materiales de partida están fácilmente disponibles para los expertos en la técnica. Sin limitar el alcance de la invención, los siguientes esquemas, preparaciones y ejemplos se proporcionan para ilustrar mejor la invención.

Esquema 1

Fórmula I 1

El Esquema 1, la etapa A representa la adición de DEM al compuesto (1) y la posterior ciclización al compuesto (2) mediante el uso de una base adecuada tal como NaOEt o t-butóxido de potasio a aproximadamente 80 °C en un disolvente tal como EtOH.

En la etapa B, los grupos 7-hidroxi y 5-oxo del compuesto (2) se pueden clorar mediante el uso de una fuente de cloro adecuada tal como POChy una base orgánica adecuada tal como piridina a aproximadamente 50 a 100 °C en un disolvente adecuado tal como acetonitrilo para dar el compuesto (3).

En la etapa C, se puede llevar a cabo una sustitución aromática nucleofílica selectiva en el grupo 7-cloro del compuesto (3) en condiciones muy conocidas en la técnica mediante el uso de un nucleófilo tal como 1-(4-metoxifenil)-N-metilmetanamina y una base orgánica adecuada tal como DIEA en un disolvente adecuado tal como 1,4-dioxano a temperatura ambiente para dar el compuesto (4).

En la etapa D, se puede llevar a cabo un acoplamiento de Buchwald en condiciones muy conocidas en la técnica sobre el compuesto (4) con aminas tales como 2-metoxianilina o 2-etoxianilina para formar el compuesto (5) mediante el uso de una combinación adecuada de catalizador y ligando tal como Pd(OAc)2 y BrettPhos, y una base adecuada tal como carbonato de potasio en un disolvente tal como 1,4-dioxano con calentamiento por microondas a aproximadamente 120 °C.

El compuesto (5) se puede tratar con NaOH acuoso en disolventes tales como 1,4-dioxano y EtOH a aproximadamente 90 °C para dar el compuesto (6) por medio de hidrólisis básica del éster como se muestra en la etapa E.

En la etapa F, se puede llevar a cabo un acoplamiento amida entre el compuesto (6) y una amina tal como 3-amino-1 -metil-pirrolidin-2-ona mediante el uso de una base orgánica adecuada tal como DIEA y un agente de acoplamiento adecuado tal como BOP en un disolvente adecuado tal como DMF para dar el compuesto (7). Los expertos en la técnica reconocerán que existen diversos procedimientos apropiados para la formación de amidas resultantes de la reacción de un ácido carboxílico y una amina. Por ejemplo, la reacción del compuesto de amina con un ácido carboxílico apropiado en presencia de un reactivo de acoplamiento con o sin una base orgánica tal como DIEA o TEA puede proporcionar un compuesto de la etapa F. Los reactivos de acoplamiento incluyen carbodiimidas, tales como DCC, DIC, EDCI o un carbonildiimidazol tal como CDI. También se pueden usar aditivos de acoplamiento amida, tales como HOBt y HOAt, para potenciar la reacción. Además, se podrían usar sales de uronio o fosfonio de aniones no nucleófilos, tales como HBT^u, HATU, PyBOP y PyBrOP, en lugar de los reactivos de acoplamiento más tradicionales. Se puede usar un aditivo tal como DMAP para potenciar la reacción.

En la etapa G, el compuesto (7) se desprotege en condiciones estándar mediante el uso de un ácido adecuado, tal como TFA, en un disolvente adecuado, tal como DCM, para dar un compuesto de la Fórmula I.

El Esquema 2 proporciona una síntesis adicional del compuesto racémico de la Fórmula I.

Esquema 2

En el esquema 2, la etapa A, se puede llevar a cabo una sustitución aromática nucleofílica selectiva en el grupo 7-cloro del compuesto (3) en condiciones muy conocidas en la técnica mediante el uso de un nucleófilo apropiado tal como MeNH2 en un disolvente adecuado tal como THF a temperatura ambiente para dar el compuesto (8).

En la etapa B, se puede llevar a cabo un acoplamiento de Buchwald en el compuesto (8) en condiciones estándar de microondas con aminas tales como 2-metoxianilina o 2-etoxianilina para formar el compuesto (9) mediante el uso de un sistema de catalizador y ligando adecuado tal como el dímero de cloruro de alilpaladio(II) y (R)-(+)-22'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo con una base adecuada tal como carbonato de potasio en un sistema disolvente adecuado tal como 1,4-dioxano, 2-metil-2-butanol y ácido acético con calentamiento a 105 °C.

El compuesto (9) se puede tratar con una base adecuada tal como hidróxido de litio acuoso en un disolvente adecuado tal como EtOH a aproximadamente 90 °C para dar el compuesto (10) por medio de hidrólisis básica del éster como se muestra en la etapa C.

la etapa D representa la formación de la Fórmula I por medio de un acoplamiento de amida en condiciones muy conocidas en la técnica, como se describe en general en el Esquema 1, la etapa F, entre el compuesto (10) y una amina tal como 3-amino-1-metil-pirrolidin-2-ona mediante el uso de una base orgánica adecuada tal como DIEA y un agente de acoplamiento adecuado tal como EDCI con un aditivo adecuado tal como HOBt en un disolvente tal como THF.

Esquema 3

14

En el esquema 3, la etapa A, la formación del compuesto (12) se muestra como un acoplamiento de amida en condiciones muy conocidas en la técnica, como se describe en general en el esquema 1, etapa F, entre el compuesto (11) y MeNH2 mediante el uso de una base orgánica adecuada tal como DIEA y un agente de acoplamiento adecuado tal como HATU en un disolvente tal como DMF a 0 a 22 °C.

En la etapa B, se puede usar la adición de MeI al compuesto (12) para formar una sal de yoduro de dimetilsulfonio seguida por tratamiento con una base adecuada tal como LiHMDS en un disolvente adecuado tal como THF a 0 a 22 °C para dar el compuesto ciclizado (13).

En la etapa C, el compuesto (13) se desprotege en condiciones estándar mediante el uso de un ácido adecuado tal como el ácido 4-metilbencenosulfónico en un disolvente adecuado tal como el acetonitrilo a aproximadamente 55 °C, seguido por la adición de un disolvente tal como el MTBE para precipitar el compuesto (14).

En el esquema 4, la formación de la Fórmula Ia(ii) se representa como un acoplamiento amida en condiciones muy conocidas en la técnica, como se describe en general en el Esquema 1, la etapa F, entre el compuesto (10) y el compuesto (14) mediante el uso de una base orgánica adecuada, tal como piridina, y un agente de acoplamiento adecuado, tal como T3P, en un disolvente, tal como EtOAc, a aproximadamente 80 °C.

Preparación 1

7-hidroxi-5-oxo-4H-pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxilato de etilo

Esquema 1, etapa A: El 5-amino-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (12,5 g, 80,6 mmol) y el DEM (18,5 ml, 121 mmol) se disuelven en EtOH (90 ml). A esta mezcla se añade NaOEt (21 m% en EtOH, 45,1 ml, 121 mmol) y la reacción se agita a 90 °C durante 24 horas. Transcurrido este tiempo, la reacción se enfría a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se acidifica con una solución acuosa de HCl 5 N y el precipitado resultante se filtra para dar el compuesto del título como sólido blanco (11,7 g, 65,1%). ES/MS m/z 224 (M+H).

Preparación Alternativa 1

Esquema 1, etapa A: A una solución de 5-amino-lH-pirazol-4-carboxilato de etilo (400 g, 2,58 mol) y DEM (584 ml, 3,87 mol) en EtOH (6,00 L) se añade t-butóxido de potasio (578 g, 5,16 mol) a 25 °C bajo nitrógeno. La solución se agita a 80 °C durante 12 horas y después la reacción se enfría a 22 °C. Se diluye la mezcla de reacción con HCl 0,1 N (2 L) y se ajusta el pH a 3 con HCl 5 N. La mezcla se filtra y la torta de filtración se lava con agua (800 ml). El sólido se seca al vacío hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido blanquecino (460 g, 81%). ES/MS m/z 224 (M+H).

Preparación 2

5,7-dicloropirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo

Esquema 1, etapa B: El 7-hidroxi-5-oxo-4H-pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (11,7 g, 52,4 mmol) se suspende en acetonitrilo (50 ml) y se purga con nitrógeno durante 5 minutos. A esta mezcla se añade POCl3 (14,8 ml, 157 mmol) seguido por piridina (4,28 ml, 52,4 mmol) a 50 °C y después se agita la reacción a 100 °C durante 5 horas. Transcurrido este tiempo, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se vierte en una mezcla de hielo y agua. Esta mezcla se neutraliza con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y el precipitado resultante se filtra para dar el compuesto del título como sólido blanco (13 g, 95,3%). ES/MS (m/z) (35Cl/37Cl) 260/262 [M+H]+.

Preparación Alternativa 2

Esquema 1, etapa B: A una suspensión de 7-hidroxi-5-oxo-4H-pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (400 g, 1,79 mol) en acetonitrilo (2 L), se añaden gota a gota POCl3 (416 ml, 4,48 mol) y piridina (217 ml, 2,69 mol) a 50 °C bajo nitrógeno. La reacción se agita a 80 °C durante 12 horas. La mezcla de reacción se evapora y el residuo se vierte en agua (2 L). La mezcla de reacción se filtra y el sólido se lava con agua (800 ml). El sólido se seca al vacío hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido naranja (360 g, 66%). ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 260/262 [M+H]+.

Preparación 3

5-cloro-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo

Esquema 1, etapa C: El 5,7-dicloropirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (5 g, 19,2 mmol) se disuelve en 1,4-dioxano (40 ml). A esta mezcla se añade 1-(4-metoxifenil)-N-metilmetanamina (3,5 g, 20 mmol) seguida por DIEA (6,7 ml, 38,4 mmol) y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. Transcurrido este tiempo, se apaga la reacción con agua (100 ml) y se extrae con EtOAc (3 * 100 ml). Los orgánicos combinados se secan sobre sulfato de magnesio, se filtran y se evaporan. Este residuo se purifica por medio de cromatografía en gel de sílice (0 a 70% EtOAc en hexanos) para dar el compuesto del título como un aceite claro espeso que se solidifica en un sólido blanco al reposar (3,55 g, 49,3%). ES/MS (m/z) (35Cl/37Cl) 375/377 [M+H]+.

Preparación 3a

5-cloro-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo

Esquema 2, etapa A: Se añade 5,7-dicloropirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (50,0 g, 192 mmol) a THF (250 ml) y se enfría la disolución a 10 °C. A continuación se añade una disolución de MeNH2 (33% p/p en etanol) (79 ml, 634 mmol). A continuación, se añade una disolución de MeNH2 (33% p/p en etanol) (79 ml, 634 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 20 °C. La mezcla de reacción se agita y se calienta a 22 °C y se agita durante 4 horas. Se añade agua (300 ml) y se agita la mezcla a 140 °C durante 1 hora.

Los sólidos resultantes se recolectan por filtración y se lavan con una mezcla de THF/agua (2:3) (100 ml) y agua (400 ml). A continuación, el sólido se seca al vacío (10 mbar/ 50 °C) hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido marrón pálido (49,5 g, 90%). ES/MS (m/z) (35Cl/37Cl) 255/257 [M+H]+.

Preparación 4

5-(2-metoxianiNno)-7-[(4-metoxifenN)metN-metN-amino]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxNato de etilo

Esquema 1, etapa D: En cada uno de los cuatro viales de microondas se disuelve 5-cloro-7-[(4-metoxifenil)metil-metilamino]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (2,5 g, 6,7 mmol) y 2-metoxianilina (0,9 g, 7,3 mmol) en 1,4 dioxano (17 ml). A esta mezcla se añade carbonato de potasio (1,4 g, 10 mmol) seguido por BrettPhos (0,37 g, 0,67 mmol) y Pd(OAc)2 (0,15 g, 0,67 mmol). Las reacciones se calientan en microondas a 120 °C durante 2 horas. Transcurrido este tiempo, las reacciones se enfrían a temperatura ambiente. Las mezclas de reacción se combinan, se filtran a través de tierra de diatomeas y se evaporan. El residuo resultante se purifica por medio de cromatografía en gel de sílice (30 a 50% EtOAc en hexanos) para dar el compuesto del título como una espuma blanquecina (10,8 g, 88,0%). ES/MS m/z 462 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 4.

Tabla 1

Preparación 4a

5-(2-metoxianilino)-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo

Esquema 2, etapa B: A un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 L con agitador mecánico, condensador y entrada de nitrógeno, se añade 5-doro-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxilato de etilo (53.0 g, 197,7 mmol), 2-metoxianilina (25,1 g, 203,9 mmol) y carbonato de potasio (60,0 g, 434,1 mmol) seguido por 1,4-dioxano (250 ml) y 2-metil-2-butanol anhidro (250 ml). La mezcla se agita y se purga con nitrógeno durante 30 minutos. A continuación, se añaden ácido acético (23,0 ml, 401,4 mmol), dímero de cloruro de alilpaladio(II) (0,4 g, 1,07 mmol) y (R)-(+)-2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (1,37 g, 2,13 mmol), y se continúa purgando con nitrógeno durante 15 minutos. La mezcla de reacción se calienta a 105 °C durante 20 horas. Transcurrido este tiempo, se interrumpe el calentamiento y se añade agua (400 ml) en chorro fino. La mezcla resultante se enfría a temperatura ambiente mientras se agita y, a continuación, se vuelve a enfriar a 15 °C durante 2 horas. Los sólidos resultantes se recolectan por filtración y se lavan con una mezcla de agua/alcohol etílico (9:1) (3 x 100 ml) y agua (150 ml). El sólido se saca al vacío (10 mbar / 35 °C) hasta peso constante para dar el compuesto del título como un sólido beige (66,5 g, 95,6%). ES/^mS m/z 342 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 4a.

Tabla 2

Preparación 6

ácido 5-(2-metoxianilino)-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico

Esquema 1, etapa E: El 5-(2-metoxianilino)-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (10,8 g, 23,4 mmol) se disuelve en 1,4-dioxano (117 ml) y EtOH (4,7 ml). A esta mezcla se añade NaOH acuoso 2,5 N (37 ml, 93,6 mmol) y la reacción se agita a 90 °C durante 20 horas. Transcurrido este tiempo, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se evapora para eliminar los orgánicos volátiles. La solución acuosa restante se lleva entonces a aproximadamente pH 5 con HCl acuoso 1 N y el precipitado sólido se extrae con cloroformo/IPA (3:1) (3 * 300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se evaporan para dar el compuesto del título como sólido blanquecino (9,54 g, 89,9%). ES/MS m/z 434 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 6.

Tabla 3

Preparación 6a

ácido 5-(2-Metoxianilino)-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxílico

Esquema 2, etapa C: Una mezcla de 5-(2-metoxianilino)-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxilato de etilo (5,98 g, 17,3 mmol), EtOH (48 ml), agua (30 ml) e hidróxido de litio (1,2 g, 50,0 mmol) se somete a reflujo durante 4 horas. Transcurrido este tiempo, la mezcla de reacción se enfría a 70 °C y se neutraliza añadiendo HCl (10% p/p) para ajustarla a pH 2. Posteriormente, la mezcla de reacción se enfría hasta 2 °C y se agita durante 2 horas. El sólido resultante se recolecta por filtración y se lava con agua (30 ml). El sólido se seca al vacío hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido crema (5,55 g, 100%). ES/MS m/z 314 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 6a.

Tabla 4

Preparación 8

5-(2-metoxianilino)-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]-N-[rac-1 -metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida

Esquema 1, etapa F: A una mezcla de ácido 5-(2-metoxianilino)-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxílico (0,30 g, 0.69 mmol) y 3-amino-1-metil-pirrolidin-2-ona racémica (0,095 g, 0,83 mmol) en DMF (3,5 ml) se añade BOP (0,41 g, 0,93 mmol) y DIEA (0,48 ml, 2,77 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 60 horas. Transcurrido este tiempo, se apaga la reacción con solución acuosa saturada de cloruro amónico (30 ml) y se extrae con EtOAc (50 ml). La capa orgánica se lava con agua y solución acuosa saturada de NaCl, se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se evapora. El residuo se purifica a través de cromatografía de gel de sílice (2 a 4% de MeOH en DCM) para dar el compuesto del título (0,30 g, 83,2%). ES/MS m/z 530 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 8.

Tabla 5

Preparación 10

5-(2-Metoxianilino)-7-(metilamino)-N-[rac-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida

Esquema 1, etapa G: Una solución de 5-(2-metoxianilino)-7-[(4-metoxifenil)metil-metil-amino]-N-[rac-1-metil-2-oxopirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida (0,3 g, 0,58 mmol) en DCM (11,5 ml) y TFA (11,5 ml) se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. Transcurrido este tiempo, se evapora la reacción para eliminar los orgánicos volátiles. El residuo se trata con DCM (20 ml) y amoniaco 7 M en metanol (4 ml). La mezcla resultante se agita durante 10 minutos y se evapora. El residuo se purifica posteriormente a través de cromatografía de gel de sílice (2 a 8% de MeOH en DCM) para dar el compuesto del título (0,18 g, 74,2%). ES/MS m/z 410 (M+H).

El siguiente compuesto se prepara de manera esencialmente análoga al procedimiento de la Preparación 10.

Tabla 6

Preparación Alternativa 11

5-(2-Etoxianilino)-7-(metilamino)-N-[rac-1 -metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida

Esquema 2, etapa D: El ácido 5-(2-etoxianilino)-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxílico (4,5 g, 8,9 mmol), 3-amino-1-metil-pirrolidin-2-ona racémica (1,2 g, 11,0 mmol) y HOBt (1,8 g, 13,0 mmol) se suspenden en THF (89 ml). A esta mezcla se añade EDCI (2,6 g, 13,0 mmol) y DIEA (6,2 ml, 36,0 mmol) a 0 °C. La reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se agita bajo nitrógeno durante 18 horas. Transcurrido este tiempo, se evapora la reacción para eliminar los orgánicos volátiles. El residuo resultante se trata con agua (300 ml) y se extrae con una mezcla de cloroformo/IPA (3:1) (3 * 300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se evaporan. El residuo se purifica por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice con MeOH con MeOH al 10% en DCM para dar el compuesto del título (3,5 g, 92,0%) como un sólido blanco. ES/MS m/z 424 (M+H).

Preparación 12

N-[(1R)-1 -(metilcarbamoil)-3-metilsulfanil-propil]carbamato de tere-butilo

Esquema 3, etapa A: Se enfría a 0 °C una disolución de (terc-butoxicarbonil)-D-metionina (400 g, 1,6 mol), clorhidrato de metilamina (162,47 g, 2,4 mol) y DIEA (700 ml, 4,01 mol) en DMF (4 L) y se añade HATU (732,1 g, 1,92 mol). La reacción se calienta a temperatura ambiente. Tras 2 horas de agitación, se evapora el disolvente. A continuación, se añade agua (10 L) y la solución acuosa se extrae con DCM (2 x 3 L). Se combinan las capas orgánicas, se lavan con bicarbonato de sodio acuoso saturado (3 L), se secan sobre sulfato de sodio y se evaporan. El residuo resultante se purifica por medio de cromatografía en gel de sílice eluyendo con EtOAc en hexano para dar el compuesto del título como sólido blanco (368 g, 87%). ES/MS m/z 263 (M+H).

Preparación 13

N-[(3R)-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il)]carbamato de tere-butilo

Esquema 3, etapa B: Una mezcla de N-[(1R)-1-(metilcarbamoil)-3-metilsulfanil-propil]carbamato de terc-butilo (368 g, 1,40 mol) y Mel (3,68 L, 59,11 mol) se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. A continuación, se evapora la mezcla. Una porción de la sal cruda de yoduro de dimetilsulfonio resultante (210 g, 0,52 mol) se disuelve en t Hf (4,7 L), se enfría a 0 °C bajo atmósfera de nitrógeno y se añade gota a gota LiHMDS (solución 1,00 M en THF, 1,16 L, 1,16 mol). A continuación, la mezcla de reacción se calienta a temperatura ambiente. Transcurridas 4 horas, se añade agua (2,4 L) y se evapora el disolvente hasta la mitad de su volumen. La mezcla se extrae con DCM (2 * 3 L). Los orgánicos se combinan y se evaporan. El residuo se purifica por cromatografía de gel de sílice eluyendo con MeOH en DCM para dar el compuesto del título como un sólido blanco (50 g). ES/MS m/z 215 (M+H). H^pLC quiral: Rt (tiempo de retención) = 9,13 minutos; Columna LC: ChiralPAc IA OD 4,6 * 250 mm 5 ^m; isocrático: 0.1% dietil amina / hexanos / etanol (85/15); Temp. de la Columna 25 °C; Caudal: 1,0 ml/min. Rotación óptica: [a]D20 = 53° (C = 0,5, MeOH). Preparación 14

(3R)-3-amino-1-metil-pirrolidin-2-ona; sal de p-tolueno sulfonilo

Esquema 3, etapa C: Una mezcla de N-[(3R)-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]carbamato de terc-butilo (46 g, 214,69 mmol) y ácido 4-metilbencenosulfónico (74,5 g, 433 mmol) en acetonitrilo (500 ml) se calienta a 55 °C y se agita durante 4 horas. A continuación, se añade MTBE (1 L) y la mezcla se enfría a 22 °C. El sólido resultante se recolecta por filtración, se lava con MTBE adicional y se seca al vacío hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido blanco (60 g, 95%). ES/MS m/z 115 (M+H). Rotación óptica: [a]D20 = 31,3° (C = 0,5, MeOH).

Ejemplo 1

5-(2-Metoxianilino)-7-(metilamino)-N-[(3R)-1 -metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida

Esquema 4: Se agita a temperatura ambiente durante 15 min una mezcla de ácido 5-(2-metoxianilino)-7-(metilamino)pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxílico (50 g, 159,6 mmol) y (3R)-3-amino-1-metilpirrolidin-2-ona; sal de ptolueno sulfonilo (60 g, 222 mmol) en piridina (150 ml). Después se añade T3P (solución 1,67 M en EtOAc, 185 ml, 309 mmol) y la mezcla se calienta a 80 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfría a 60 °C y se añade agua (600 ml). La reacción se enfría a temperatura ambiente y el sólido resultante se recolecta por filtración y se lava con agua (100 ml).

El sólido húmedo resultante se disuelve en DMSO (300 ml) y se calienta a 60 °C. Se añade carbón activado (2 g) y se agita a 60 °C durante 30 minutos. Se añade carbón activado (2 g) y se agita a 60 °C durante 30 minutos. A continuación, la mezcla se filtra sobre tierra de diatomeas. Sobre la disolución filtrada se añade agua (300 ml) gota a gota manteniendo la temperatura a 60 °C. La mezcla se enfría a temperatura ambiente y el sólido resultante se recolecta por filtración y se lava con agua (100 ml). El sólido se seca al vacío hasta peso constante para dar el compuesto del título como sólido blanco (52 g, 78%). Es /MS m/z 410 (M+H). SFC quiral: Rt (tiempo de retención) = 1,63 minutos (UV); Columna SFC: Chiralpak AD (4,6 x 100 mm) 5 ^m; isocrático: IPA (0,2% IPAm); Temp. de la Columna 40 °C; Caudal: 5,0 ml/min. Rotación óptica: [a]D20 = -4,19° (C = 0,3, MeOH).

Ejemplo alternativo 1

5-(2-Metoxianilino)-7-(metilamino)-N-[(3R)-1 -metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida Una mezcla racémica de 5-(2-metoxianilino)-7-(metilamino)-N-[rac-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida se purifica por medio de cromatografía quiral para dar el primer enantiómero eluyente como el compuesto del título. ES/m S m/z 410 (M+H). Condiciones de purificación: CHlRALPAK® AD-H; Fase Móvil: 10% de ACN en MeOH; Caudal: 30 ml/min; UVW: 225 nm; Tiempo de retención: 2,53 minutos. (Tiempo de retención del enantiómero S: 3,78 min).

Ejemplo 2

5-(2-Etoxianilino)-7-(metilamino)-N-[(3R)-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida

Una mezcla racémica de 5-(2-etoxianilino)-7-(metilamino)-N-[rac-1-metil-2-oxo-pirrolidin-3-il]pirazol[1,5-a]pirimidin-3-carboxamida se purifica por medio de cromatografía quiral para dar el primer enantiómero eluyente como el compuesto del título. ES/MS m/z 424 (M+H). Condiciones de purificación: CHIRALPAK® AD-H; Fase Móvil: 40% de EtOH en CO2; Caudal: 70 g/min; UVW: 260 nm; Tiempo de retención: 2,56 minutos. (Tiempo de retención del enantiómero S: 4,28 min).

Unión a TYK2 JH2 por medio de ensayo de proximidad por centelleo

El dominio pseudocinasa (JH2) de la tirosina cinasa 2 (TYK2) humana de la familia JAK (familia Janus de tirosina quinasas citoplasmáticas) con una etiqueta His6 N-terminal se expresa en baculovirus y se purifica por cromatografía de afinidad Ni-NTA y de exclusión por tamaño. Las microesferas de centelleo por proximidad (SPA) His-Tag de itrio (YSi) (cat. Núm. PRNQ0096) se adquieren a PerkinElmer Life Sciences. 3H-N-[(1R)-1-[3-[8-Metil-5-(metilamino)-8H-imidazo[4,5-d]tiazol[5,4-b]piridin-2-il]fenil]etil]-2-(metilsulfonil) benzamida es sintetizada por Quotient Bio con una actividad específica de 63 Ci/mmol y una concentración 6,78 ^M almacenada en etanol (cat. Núm.TRQ41678) (véase también, por ejemplo, J.S. Tokarski, et al., J. Biol. Chem. vol. 290(17), páginas 11061 a 11074 (2015) y R. Moslin, et al., Med. Chem. Commun. vol. 8, páginas 700 a 712 (2017)).

Se prepara una dilución en serie de 3 veces, 10 puntos del Ejemplo 1 en DMSO al 100% (200 nL) y se transfiere a una placa de ensayo de superficie no aglutinante de 96 pocillos, de fondo blanco transparente (Costar 3604) mediante el uso de manipulación acústica de líquidos. Los pocillos de control usados para determinar el porcentaje de inhibición contenían D^mS^o(200 nL) o inhibidor frío no marcado (200 nL, 10 mM, 200 ^M de concentración final). Se añaden TYK2 JH2 marcada con His (20 ^l de 7,1 nM) y 3H-N-[(1R)-1-[3-[8-metil-5-(metilamino)-8H-imidazo[4,5-d]tiazol[5,4-b]piridin-2-il]fenil]etil]-2-(metilsulfonil) benzamida (50 nM) en tampón de ensayo (50 mM HEPES, pH 7,5, 0,005% Tween-20). Tras incubar a temperatura ambiente durante 2 horas, se añaden a cada pocillo perlas SPA His-Tag de cobre YSi (100 ^l de 0,5 mg/ml) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contiene 0,2% de BSA. Tras 15 minutos a temperatura ambiente, se cuenta la radiactividad con el Trilux Microbeta. Se calcula el porcentaje de inhibición de la unión del radioligando a cada concentración de inhibidor y se ajusta a la ecuación logística no lineal de cuatro parámetros mediante el uso de Genedata Screener® para obtener un CI5o para el compuesto del Ejemplo 1 de 0,045 ^M (± 0,016 ^M, n=3) y para el compuesto del Ejemplo 2 de 0,040 ^M (± 0,012 ^M, n=4) expresados como medias geométricas con el error estándar de la media (SEM). Este resultado demuestra que los compuestos del Ejemplo 1 y del Ejemplo 2 se unen al dominio TYK2 JH2 in vitro.

Inhibición de la señalización de IFNa a través de pSTAT1 en células TF1

Las células TF1 (ATCC, CL-2003) se cultivan en RPMI 1640 (GIBCO) suplementado con 10% de FBS dializado, 0,1 mg/ml de Ampicilina y 2 ng/ml de factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos. Las células TF1 (100 K por pocillo) se siembran en placas de 96 pocillos recubiertas de poli-D-lisina en DMEM sin suero y se incuban durante la noche a 37 °C bajo un 5% deCO2. El Ejemplo 1 se diluye en serie en DMSO, se añade a las células y se incuba a 37 °C durante 1 hora. A continuación, se estimulan las células con 10 ng/ml de IFNa2 a 37 °C durante 20 minutos. Tras eliminar el medio, las células se lisan en un tampón que contiene un cóctel inhibidor de proteasas y fosfatasas Halt (Thermo Scientific Núm. 78441) a temperatura ambiente durante 30 minutos. La cantidad de p-Stat1 (Tyr701) se cuantifica como emisión de luz a 615 nm mediante el uso del kit de ensayo AlphaLISA SureFire Ultra p-Stat1 (Tyr701) (Perkin Elmer Núm. ALSU-PST1-A50K) siguiendo el protocolo recomendado por el proveedor. Se calcula el porcentaje de inhibición a cada concentración de inhibidor y se ajusta a la ecuación logística no lineal de cuatro parámetros mediante el uso de Genedata Screener® para obtener una CI50 para el compuesto del Ejemplo 1 de 0,008 ^M (± 0,001 ^M, n=5) y para el compuesto del Ejemplo 2 de 0,010 ^M (± 0,001 ^M, n=4) expresadas como medias geométricas con el error estándar de la media (SEM). Este resultado demuestra que los compuestos del Ejemplo 1 y del Ejemplo 2 son inhibidores de la señalización de IFNa a través de pSTAT1 en células TF1.

IL23 pSTAT3 Ensayo AlphaLISA

Las células Kit225 dependientes de IL2 que expresan receptores de IL23 endógenos se transducen de forma estable con el Lenti STAT3 Reporter unido a luciferasa de luciérnaga (SABiosciences CLS-6028L). Estas células se usan para monitorizar la actividad de TYK2 por medio de la cuantificación de la expresión génica causada por la fosporilación de STAT3 tras la inducción por IL23 en presencia de IL2 mediante el uso de la tecnología AlphaLISA (TGR Biosciences ALSU-TST3-A50K). Las células se cultivan en RPMI 1640 (Gibco 22400) suplementado con un 10% de FBS (Invitrogen 10082), 1X Pen/Strep (Gibco 15140-122), 200 ng/ml de puromicina (Sigma P9620) y 10 ng/ml de IL2 humana recombinante fresca (R&D Systems 202-IL-50).

Para la preparación del ensayo, las células se dispensan en placas Biocoat negras de fondo transparente de 384 pocillos recubiertas de poli-d-lisina (Becton Dickinson Bio-Coat 35-4640) en DMEM (Sigma D5796) a 300.000 células/pocillo y se dejan incubar durante la noche a 37 °C. Los compuestos solubilizados en DMSO se diluyen en serie 1:3 para producir una curva de respuesta de concentración de 10 puntos (DMSO final = 0,1%). Los compuestos solubilizados en DMSO se diluyen en serie 1:3 para producir una curva de respuesta de concentración de 10 puntos (DMSO final = 0,1%). Las células se preincuban con el Ejemplo 1 durante 1 hora a 37 °C y posteriormente se estimulan con II,23 (25 ng/ml final) durante 30 minutos. Tras centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos, los gránulos celulares se lisan con una mezcla de tampón de lisis 1:1 (TGR Biosciences) y cóctel inhibidor de proteasas y fosfatasas Halt (Thermo Scientific 1861281) durante 30 minutos. La reacción AlphaLISA se lleva a cabo siguiendo el protocolo recomendado por el proveedor, y los niveles de luciferasa se miden mediante el uso de un lector de placas Envision (Perkin Elmer). La IC⁵⁰relativa se calcula mediante el uso de una ecuación logística no lineal de 4 parámetros (GeneData Screener 13.0.5) para obtener una IC⁵⁰para el compuesto del Ejemplo 1 de 0,009 j M (± 0,001 j M, n=4) y para el compuesto del Ejemplo 2 de 0,010 j M (± 0,002 j M, n=3) expresadas como medias geométricas con el error estándar de la media (SEM). Este resultado demuestra que los compuestos del Ejemplo 1 y del Ejemplo 2 son inhibidores de la señalización de IL-23 en un ensayo basado en células.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula:

en la que R es metilo o etilo;

o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es metilo; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es etilo; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el compuesto es:

o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en el que compuesto es:

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 3, en el que el compuesto es:

o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 6, en el que compuesto es:

8. Un compuesto, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en terapia.

9. Un compuesto, o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en el tratamiento de la psoriasis.

10. Un compuesto o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en el tratamiento de lupus eritematoso sistémico.

11. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico.

12. Un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, que comprende mezclar un compuesto o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, con uno o más portadores, diluyentes o excipientes aceptables para uso farmacéutico.