ES2927305T3 - Régimen contra el cáncer usando anticuerpos anti-CD47 y anti-CD20 - Google Patents

Abstract

Se divulga un régimen para tratar un cáncer CD20+, en particular un linfoma. El régimen implica varios ciclos de administración de anticuerpos anti-CD20 y anti-CD47 en dosis e intervalos de administración apropiados. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Régimen contra el cáncer usando anticuerpos anti-CD47 y anti-CD20

ANTECEDENTES

La CD47 se ha identificado como una molécula clave que media en la evasión de las células cancerosas de la fagocitosis por parte del sistema inmunitario innato. La CD47 parece ser un medio importante por el cual las células cancerosas, incluyendo las células madre cancerosas, superan a menudo la expresión intrínseca de sus señales profagocíticas de "cómeme". La progresión de una célula normal a una célula cancerosa puede implicar cambios en los genes y/o en la expresión de genes que desencadenan la muerte celular programada (PCD) y la eliminación celular programada (PCR). Muchos de los pasos en la progresión del cáncer subvierten múltiples mecanismos de PCD, y la expresión de la señal antifagocítica, CD47, puede representar un punto de control importante.

La expresión de CD47 aumenta en la superficie de muchas células cancerosas de un gran número de diversos tipos de tumores humanos incluyendo las siguientes enfermedades malignas primarias: cabeza y cuello, melanoma, mama, pulmón, ovario, páncreas, colon, vejiga, próstata, leiomiosarcoma, glioblastoma, meduloblastoma, oligodendroglioma, glioma, linfoma, leucemia y mieloma múltiple. En estudios de xenoinjertos murinos, se ha demostrado que los anticuerpos bloqueadores de CD47 inhiben el crecimiento y la metástasis del cáncer humano permitiendo la fagocitosis y la eliminación de células cancerosas de varias enfermedades malignas hematológicas y varios tumores sólidos.

CD47 sirve como ligando para SIRPa, que se expresa en células fagocíticas, incluyendo macrófagos y células dendríticas. Cuando SIRPa se activa mediante la unión de CD47, inicia una cascada de transducción de señales que da como resultado la inhibición de la fagocitosis. De esta manera, CD47 funciona como una señal antifagocítica al enviar una señal inhibidora dominante a las células fagocíticas.

Los métodos para la administración eficaz de anticuerpos que bloquean CD47 en humanos con cáncer son de interés clínico y se proporcionan en la presente.

Liu et al. (2015) PLOS ONE 10(9):e0137345 describe el desarrollo preclínico de un anticuerpo anti-CD47 humanizado. Genentech: "Rituxan and Rituxan Hycela dosing and administration brochure" describe los regímenes de dosificación y administración de Rituxan y Rituxan Hycela.

SUMARIO

La invención proporciona un anticuerpo anti-CD47 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después de T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrando una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas; en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

La invención también proporciona un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas; en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

La invención también proporciona un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 a 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas; en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

En algunos aspectos, el linfoma es linfoma no Hodgkin (NHL).

En algunos aspectos, el NHL es un linfoma indolente. En algunos aspectos, el linfoma indolente es un linfoma folicular (FL). En algunos aspectos, el linfoma indolente es un linfoma de la zona marginal.

En algunos aspectos, el NHL es un linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).

En algunos aspectos, el linfoma es DLBCL, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal, linfoma de células del manto, macroglobulinemia de Waldenstrom/linfoma linfoplasmocitario, linfoma primario de células B del mediastino, linfoma de Burkitt, linfoma de células B no clasificado o enfermedad linfoproliferativa postrasplante (PTLD), opcionalmente en donde el linfoma se clasifica en base a la histopatología, citometría de flujo, clasificación molecular, uno o más ensayos equivalentes o una combinación de los mismos. En algunos aspectos, el linfoma es un linfoma de doble golpe. En algunos aspectos, el linfoma es un linfoma con reordenamiento myc.

En algunos aspectos, el sujeto tiene una recaída o es refractario a por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de 10 líneas previas de terapia contra el cáncer. En algunos aspectos, el sujeto es refractario a rituximab. En algunos aspectos, el estado refractario a rituximab es la falta de respuesta o la progresión durante cualquier régimen previo que contuviese rituximab, o la progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab. En algunos aspectos, el estado refractario a rituximab es la falta de respuesta o la progresión durante el último régimen anterior que contuviese rituximab, o la progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab.

En algunos aspectos, el sujeto tiene linfoma folicular (FL) y ha recibido por lo menos dos terapias sistémicas previas. En algunos aspectos, el sujeto tiene linfoma folicular (FL) y recayó después de, o es refractario a, un régimen que contiene rituximab.

En algunos aspectos, el sujeto tiene linfoma de células B grandes en recaída o refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica. En algunos aspectos, el sujeto tiene un linfoma de células B grandes de novo o transformado refractario a la terapia de primera línea, o recidivante o refractario a regímenes de rescate de segunda línea o trasplante autólogo de células hematopoyéticas. En algunos aspectos, el sujeto tiene linfoma de células B grandes y recayó después, o es refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica, incluyendo un régimen que contiene rituximab.

El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4.

En algunos aspectos, la administración del anticuerpo anti-CD47 da como resultado una saturación del receptor mayor o igual al 90%, opcionalmente una saturación del receptor del 90-100, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100%, opcionalmente en donde la saturación del receptor se mide usando citometría de flujo o un ensayo equivalente.

El anticuerpo anti-CD20 es rituximab. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD20 es un biosimilar de rituximab (blitzima, ritemvia, tuxella).

El anticuerpo anti-CD20 se administra a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 se administran concurrente o secuencialmente, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-CD20 se administra antes que el anticuerpo anti-CD47.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 se formula en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 se administra por vía intravenosa.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD20 se formula en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD20 se administra por vía intravenosa.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto como una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal, 45 mg de anticuerpo por kg de peso corporal, 60 mg de anticuerpo por kg de peso corporal o 67,5 mg de anticuerpo por kg de peso corporal.

El método divulgado en la presente comprende además administrar una dosis de cebado del anticuerpo anti-CD47. El anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto como una dosis de cebado de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal. En algunos aspectos, la dosis de cebado se administra al sujeto durante aproximadamente 3 horas.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto en un primer ciclo que comprende una dosis de cebado de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal el día 1 seguido de una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal una vez cada semana con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2). El primer ciclo tiene una duración de 4 semanas. El anticuerpo anti-CD20 se administra al sujeto en el primer ciclo una vez a la semana a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo.

En algunos aspectos, el anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto en un segundo ciclo que comprende una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal una vez cada 2 semanas. El segundo ciclo tiene una duración de 4 semanas. El anticuerpo anti-CD20 se administra al sujeto en el segundo ciclo una vez cada cuatro semanas a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo.

En algunos aspectos, un método divulgado en la presente comprende además por lo menos un ciclo adicional, opcionalmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más de 20 ciclos adicionales. En algunos aspectos, el régimen de dosificación del por lo menos un ciclo adicional es el mismo que el del segundo ciclo, opcionalmente en donde la parte del régimen de dosificación del anticuerpo anti-CD20 se interrumpe después de completar 6 ciclos en total. En algunos aspectos, el por lo menos un ciclo adicional tiene una duración de 4 semanas.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene NHL, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de a un sujeto humano que tiene linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-D20, rituximab, al sujeto durante por 10 menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30­ 50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma indolente que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma folicular (FL), que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma de la zona marginal, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

En algunos aspectos, un método divulgado en la presente da como resultado una respuesta objetiva (OR) en el sujeto. En algunos aspectos, un método divulgado en la presente da como resultado el control de la enfermedad en el sujeto. En algunos aspectos, un método divulgado en la presente da como resultado una respuesta parcial (PR) en el sujeto. En algunos aspectos, un método divulgado en la presente da como resultado una respuesta completa (CR) en el sujeto. En algunos aspectos, un método divulgado en la presente da como resultado una enfermedad estable (SD) en el sujeto. En algunos aspectos, un método divulgado en la presente reduce el tamaño del cáncer con respecto al valor de referencia en donde el valor de referencia se determina antes de la administración del anticuerpo anti-CD47.

En algunos aspectos, en un método divulgado en la presente, el sujeto es refractario al rituximab y el método da como resultado una reversión de la refractariedad al rituximab.

En algunos aspectos, en un método divulgado en la presente, uno o ambos anticuerpos son administrados por un profesional médico, opcionalmente un médico. En algunos aspectos, en un método divulgado en la presente uno o ambos anticuerpos son administrados por el sujeto.

En algunos aspectos, un método divulgado en la presente comprende además determinar el nivel de expresión de CD47 en tejido de linfoma de un sujeto. La expresión de CD47 puede ser expresión de proteínas mediante inmunohistoquímica, citometría de flujo, citometría de masas (CyTOF) o expresión génica mediante secuenciación de ARN, análisis de micromatrices u otro método de elaboración de perfiles de expresión génica. En algunos aspectos, el sujeto tiene DLBCL de células B activadas (ABC). En algunos aspectos, el sujeto tiene DLBCL de células B del centro no germinal (GCB). En algunos aspectos, el sujeto tiene una expresión aumentada de CD47 con respecto al control (normal) y se administra el anticuerpo anti-CD47 al sujeto, opcionalmente el sujeto tiene DLBCL ABC o de células B del centro no germinal (GCB).

En algunos aspectos, un método divulgado en la presente comprende además la administración de un inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL al sujeto. Un inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL puede incluir venetoclax, navitoclax y/o AZD0466 u otros.

En algunos aspectos, un método divulgado en la presente comprende además la administración de un inhibidor de PD1/PDL1 al sujeto. En algunos aspectos, el inhibidor de PD1/PDL1 es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo. Un inhibidor de PD1/PDL1 puede incluir atezolizumab, avelumab, pembrolizumab, nivolumab, durvalumab, tislelizumab y/o cemiplimab, u otros.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 muestra un esquema de diseño de estudio para: Ensayo de fase 1b/2 de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes con linfoma no Hodgkin de células B en recaída/refractario. Se utilizó una dosis de cebado de 5F9 (1 mg/kg) para mitigar la anemia en el objetivo, con un aumento de la dosis de mantenimiento de 10 a 30 mg/kg en combinación con rituximab en un diseño estándar 3+3.

La FIG. 2A muestra anemia con reticulocitosis compensatoria.

La FIG. 2B muestra eventos adversos relacionados con el tratamiento con 5F9 y/o rituximab. Para reacciones relacionadas con la infusión, el lado izquierdo de la barra es Grado 2, el lado derecho es grado 3. Para vómitos, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el lado derecho es grado 2. Para náuseas, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el lado derecho es grado 2. Para embolia pulmonar, la barra es grado 3. Para ITP, la barra es grado 4. Para trombocitopenia, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el medio es grado 2, el derecho es grado 4. Para neutropenia, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el lado derecho es grado 4. Para anemia, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el medio es grado 2, el derecho es grado 3. Para el dolor de cabeza, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el lado derecho es grado 2. Para el dolor de espalda, la barra es grado 2. Para la fatiga, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el derecho es grado 2. Para la pirexia, el lado izquierdo de la barra es grado 1, el medio es grado 2, el derecho es grado 3. Para los escalofríos, el lado izquierdo de la barra es grado 1,

La FIG. 2C muestra el aumento de dosis de Fase 1B de los 22 pacientes tratados en todas las cohortes.

La FIG. 3 muestra la farmacocinética de Hu5F9-G4.

La FIG. 4A muestra la ocupación del receptor de CD47 en la sangre periférica en los glóbulos blancos. Se observó rápidamente una alta ocupación del receptor objetivo de CD47 en todos los niveles de dosis; la ocupación del receptor de CD47 (RO) demuestra una saturación >90%.

La FIG. 4B muestra la actividad antitumoral observada con 5F9 y rituximab en NHL en recaída o refractario a partir de abril de 2018. Las dosificaciones de 10 mg/kg y 20 mg/kg están marcadas en el eje 0; el resto de las barras son 30 mg/kg.

La FIG. 4C muestra respuestas duraderas en pacientes con DLBCL y FL en fase 1b a partir de abril de 2018. La FIG. 5 muestra dos ejemplos de pacientes con enfermedad altamente refractaria a los que se les eliminó todo el cáncer mediante el tratamiento con Hu5F9-G4 Rituximab.

La FIG. 6A muestra un ejemplo adicional de un paciente con enfermedad altamente refractaria en el que se eliminó todo el cáncer mediante el tratamiento con Hu5F9-G4 Rituximab.

La FIG. 6B muestra un ejemplo de un hombre de 56 años con DLBCL refractario primario, 2 líneas de terapia previas, enfermedad voluminosa.

La FIG. 7 muestra un análisis de eficacia de subgrupos de NHL.

La FIG. 8 muestra la dosis de fase 2 establecida para el ensayo clínico.

La FIG. 9 muestra que el anticuerpo anti-CD47 mejoró la fagocitosis de células tumorales in vitro cuando se combinó con rituximab en una línea celular de linfoma resistente a rituximab. La barra izquierda de cada grupo es sensible a rituximab; la barra derecha de cada grupo es resistente a rituximab.

La FIG. 10 muestra la eficacia en subconjuntos de DLBCL tratados en el ensayo de fase 1b/2 de Hu5F9-G4 rituximab en NHL

La FIG. 11 muestra la expresión de CD47 en la amígdala. Se tiñó una amígdala de un paciente sano normal con un anticuerpo anti-CD47 humano mediante inmunohistoquímica. La tinción oscura denota una tinción de CD47 positiva. Se muestra aumento bajo (parte superior) y aumento alto (parte inferior) con flechas que indican áreas de muestra que no tienen expresión de CD47, que representan centros germinales.

La FIG. 12 muestra que las concentraciones de 5F9 son más altas con la dosificación semanal frente a la dosificación semanal Q2.

La FIG. 13 muestra un esquema de diseño para el uso de la expresión de CD47 como estrategia de selección de pacientes para el tratamiento con Hu5F9-G4 /- rituximab en pacientes con NHL.

La FIG. 14 muestra un esquema de diseño de estudio para: Un ensayo de fase 1b de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab y atezolizumab en pacientes con linfoma no Hodgkin de células B en recaída/refractario.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que también se divulga específicamente cada valor intermedio, a la décima parte de la unidad del límite inferior a menos que el contexto dicte claramente lo contrario, entre los límites superior e inferior de ese intervalo. Cada intervalo más pequeño entre cualquier valor enunciado o valor intermedio en un intervalo enunciado y cualquier otro valor enunciado o intermedio en ese intervalo enunciado está abarcado dentro de la invención. El límite superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse o excluirse independientemente en el intervalo, y cada intervalo en el que ninguno de los límites o ambos están incluidos en los intervalos más pequeños también está incluido dentro de la invención, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo enunciado. Cuando el intervalo enunciado incluya uno o ambos límites, los intervalos que excluyen cualquiera o ambos de esos límites incluidos también están incluidos en la invención.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque en la puesta en práctica o prueba de la presente invención puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente, se describen ahora algunos métodos y materiales potenciales y preferidos.

Cabe señalar que tal como se usan en la presente y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno" y "el" incluyen referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y la referencia a "el péptido" incluye la referencia a uno o más péptidos y equivalentes de los mismos, por ejemplo, polipéptidos, conocidos por los expertos en la técnica, etc.

Las publicaciones analizadas en la presente se proporcionan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada de lo contenido en la presente debe interpretarse como una admisión de que la presente invención no tiene derecho a ser anterior a dicha publicación en virtud de una invención anterior. Además, las fechas de publicación proporcionadas pueden diferir de las fechas de publicación reales, por lo que es posible que sea necesario confirmarlas independientemente.

Como se usa en la presente, el término "agente anti-CD47" se refiere a cualquier agente que reduzca la unión de CD47 (por ejemplo, en una célula objetivo) a SIRPa (por ejemplo, en una célula fagocítica). El agente anti-CD47 para su uso en la invención es el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4. Los ejemplos no limitativos de reactivos anti-CD47 adicionales incluyen reactivos de SIRPa, incluyendo sin limitación, polipéptidos de SIRPa de alta afinidad, anticuerpos anti-SIRPa, polipéptidos CD47 solubles y anticuerpos o fragmentos de anticuerpos anti-CD47. En algunos casos, un agente anti-CD47 (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD47, un reactivo de SIRPa, etc.) se une específicamente a CD47 para reducir la unión de CD47 a SIRPa. En algunos casos, un agente anti-CD47 (por ejemplo, un anticuerpo anti-SIRPa, un polipéptido de CD47 soluble, etc.) se une específicamente a SIRPa para reducir la unión de CD47 a SIRPa. En algunos casos, un agente anti-CD47 que se une a SIRPa no activa SIRPa (por ejemplo, en la célula fagocítica que expresa SIRPa). La eficacia de un agente anti-CD47 adecuado puede evaluarse ensayando el agente (descrito con más detalle a continuación). En un ensayo ejemplar, las células objetivo se incuban en presencia o ausencia del agente candidato. Un agente para su uso en los métodos de la divulgación regulará por incremento la fagocitosis en por lo menos un 10% (por ejemplo, por lo menos un 20%, por lo menos un 30%, por lo menos un 40%, por lo menos un 50%, por lo menos un 60%, por lo menos un 70%, por lo menos un 80%, por lo menos un 90%, por lo menos un 100%, por lo menos un 120%, por lo menos un 140%, por lo menos un 160%, por lo menos un 180% o por lo menos un 200%) en comparación con la fagocitosis en ausencia del agente De manera similar, un ensayo in vitro para los niveles de fosforilación de tirosina de SIRPa mostrará una disminución en la fosforilación de por lo menos un 5% (por ejemplo, por lo menos un 10%, por lo menos un 15%, por lo menos un 20%, por lo menos un 30%, por lo menos un 40%, por lo menos un 50%, por lo menos un 60%, por lo menos un 70%, por lo menos un 80%, por lo menos un 90%, o un 100%) en comparación con la fosforilación observada en ausencia del agente candidato.

En algunos casos, un agente anti-CD47 no activa CD47 tras unirse.

Cuando se activa CD47, puede producirse un proceso similar a la apoptosis (es decir, muerte celular programada) (Manna y Frazier, Cancer Research, 64, 1026-1036, 1 de febrero de 2004). Por tanto, en algunas realizaciones, el agente anti-CD47 no induce directamente la muerte celular de una célula que expresa CD47.

Algunos patógenos (por ejemplo, los virus de la viruela, el virus del mixoma, el virus de la viruela del venado, el virus de la viruela porcina, el virus de la viruela caprina, el virus de la viruela ovina, etc.) expresan un análogo de CD47 (es decir, un mimético de CD47) (por ejemplo, la proteína M128L) que actúa como un factor para permitir la infección (Cameron et al., Virology. 20 de junio de 2005;337(1):55-67), y algunos patógenos inducen la expresión de CD47 endógeno en la célula huésped. Las células infectadas con un patógeno que expresa un análogo de CD47 pueden, por lo tanto, expresar el análogo de CD47 proporcionado por el patógeno ya sea exclusivamente o en combinación con CD47 endógeno. Este mecanismo permite que el patógeno aumente la expresión de CD47 (mediante la expresión del análogo de CD47) en la célula infectada con o sin aumento del nivel de CD47 endógeno. En algunos casos, un agente anti-CD47 (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD47, un reactivo de SIRPa, un anticuerpo de SIRPa, un polipéptido de CD47 soluble, etc.) puede reducir la unión de un análogo de CD47 (es decir, un imitador de CD47) a SIRPa. En algunos casos, un agente anti-CD47 adecuado (por ejemplo, un reactivo de SIRPa, un anticuerpo anti-CD47, etc.) puede unirse a un análogo de CD47 (es decir, un imitador de CD47) para reducir la unión del análogo de CD47 a SIRPa. En algunos casos, un agente anti-CD47 adecuado (por ejemplo, un anticuerpo anti-SIRPa, un polipéptido de CD47 soluble, etc.) puede unirse a SIRPa. Un agente anti-CD47 adecuado que se une a SIRPa no activa SIRPa (por ejemplo, en la célula fagocítica que expresa SIRPa). Puede usarse un agente anti-CD47 en cualquiera de los métodos descritos en la presente cuando el patógeno es un patógeno que proporciona un análogo de CD47. En otras palabras, el término "CD47", como se usa en la presente, abarca CD47 así como análogos de CD47 (es decir, imitadores de CD47).

Los reactivos de SIRPa de alta afinidad se describen en la solicitud internacional WO 2013/109752.

Como se usa en la presente, un "anticuerpo anti-CD47" se refiere a cualquier anticuerpo que reduzca la unión de CD47 (por ejemplo, en una célula objetivo) a un ligando de CD47 como SIRPa (por ejemplo, en una célula fagocítica). Los ejemplos no limitativos se describen con más detalle a continuación e incluyen, pero no se limitan a, Hu5F9-G4. El agente anti-CD47 en cuestión es un anticuerpo que se une específicamente a CD47 (es decir, un anticuerpo anti-CD47) y reduce la interacción entre CD47 en una célula (por ejemplo, una célula infectada) y SIRPa en otra célula (por ejemplo, una célula fagocítica). El anticuerpo anti-CD47 no activa CD47 tras unirse. El anticuerpo anti-CD47 para su uso de la invención es Hu5F9-G4. Los ejemplos no limitativos de anticuerpos adicionales incluyen los clones B6H12, 5F9, 8B6 y C3 (por ejemplo, como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2011/143624). Los anticuerpos anti-CD47 incluyen versiones de anticuerpos completamente humanos, humanizados o quiméricos. Los anticuerpos humanizados (por ejemplo, hu5F9-G4) son especialmente útiles para aplicaciones in vivo en humanos debido a su baja antigenicidad. Como se usa en la presente, "anticuerpo" incluye la referencia a una molécula basada en inmunoglobulina inmunológicamente reactiva con un antígeno particular (por ejemplo, CD47), e incluye tanto anticuerpos policlonales como monoclonales. El término también incluye formas manipuladas genéticamente como anticuerpos quiméricos (por ejemplo, anticuerpos murinos humanizados) y anticuerpos heteroconjugados. El término "anticuerpo" también incluye formas de unión a antígeno de anticuerpos, incluyendo fragmentos con capacidad de unión a antígeno (por ejemplo, Fab', F(ab')2, Fab, Fv y rIgG. El término también se refiere a fragmentos Fv de cadena sencilla (scFv) recombinantes. El término anticuerpo también incluye moléculas bivalentes o biespecíficas, diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos. A continuación se encuentra una descripción adicional del término anticuerpo.

Un "paciente" para los propósitos de la presente invención es un humano.

Los términos "sujeto", "individuo" y "paciente" se usan indistintamente en la presente para referirse a un mamífero que está siendo evaluado para tratamiento y/o que está siendo tratado. En la presente invención, el mamífero es un humano. El término "muestra" con respecto a un paciente abarca sangre y otras muestras líquidas de origen biológico, muestras de tejido sólido como un espécimen de biopsia o cultivos de tejidos o células derivadas de los mismos y la progenie de los mismos. La definición también incluye muestras que han sido manipuladas de alguna manera después de su obtención, como por tratamiento con reactivos; lavado; o enriquecimiento para ciertas poblaciones de células, como las células cancerosas. La definición también incluye muestras que han sido enriquecidas para tipos particulares de moléculas, por ejemplo, ácidos nucleicos, polipéptidos, etc. El término "muestra biológica" abarca una muestra clínica y también incluye tejido obtenido por resección quirúrgica, tejido obtenido por biopsia, células en cultivo, sobrenadantes celulares, lisados celulares, muestras de tejido, órganos, médula ósea, sangre, plasma, suero y similares. Una "muestra biológica" incluye una muestra obtenida de una célula cancerosa de un paciente, por ejemplo, una muestra que comprende polinucleótidos y/o polipéptidos que se obtiene de una célula cancerosa de un paciente (por ejemplo, un lisado celular u otro extracto celular que comprende polinucleótidos y/o polipéptidos); y una muestra que comprende células cancerosas de un paciente. Una muestra biológica que comprende una célula cancerosa de un paciente también puede incluir células no cancerosas.

El término "diagnóstico" se usa en la presente para referirse a la identificación de un estadomolecular o patológico, enfermedad o afección, como la identificación de un subtipo molecular de cáncer de mama, cáncer de próstata u otro tipo de cáncer.

El término "pronóstico" se usa en la presente para referirse a la predicción de la probabilidad de muerte o progresión atribuible al cáncer, incluyendo recurrencia, diseminación metastásica y resistencia a fármacos, de una enfermedad neoplásica, tal como linfoma. El término "predicción" se usa en la presente para referirse al acto de predecir o estimar, en base a la observación, la experiencia o el razonamiento científico. En un ejemplo, un médico puede predecir la probabilidad de que un paciente sobreviva, después de la extirpación quirúrgica de un tumor primario y/o quimioterapia durante un cierto período de tiempo sin recurrencia del cáncer.

Como se usa en la presente, los términos "tratamiento", "tratar" y similares, se refieren a la administración de un agente, o a la realización de un procedimiento, con el propósito de obtener un efecto. El efecto puede ser terapéutico en términos de efectuar una cura parcial o completa de una enfermedad y/o de los síntomas de la enfermedad. “Tratamiento”, como se usa en la presente, puede incluir el tratamiento de un tumor en un mamífero, particularmente en un humano, e incluye, sin limitación: inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; y aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de la enfermedad.

El tratamiento puede referirse a cualquier indicio de éxito en el tratamiento o mejora de un cáncer, incluyendo cualquier parámetro objetivo o subjetivo, como la reducción; remisión; disminución de los síntomas o hacer que el estado de la enfermedad sea más tolerable para el paciente; ralentización de la tasa de degeneración o declive; o hacer que el punto final de la degeneración sea menos debilitante. El tratamiento o la mejora de los síntomas puede basarse en parámetros objetivos o subjetivos; incluyendo los resultados de un examen realizado por un médico. El término "efecto terapéutico" se refiere a la reducción, eliminación o prevención de la enfermedad, los síntomas de la enfermedad o los efectos secundarios de la enfermedad en el sujeto.

"En combinación con", "terapia de combinación" y "productos de combinación" se refieren, en ciertas realizaciones, a la administración concurrente a un paciente de los agentes descritos en la presente. Cuando se administran en combinación, cada componente puede administrarse al mismo tiempo o secuencialmente en cualquier orden en diferentes puntos temporales. Por tanto, cada componente puede administrarse por separado, pero lo suficientemente cerca en el tiempo como para proporcionar el efecto terapéutico deseado.

"Administración concomitante" de agentes activos en los métodos divulgados en la presente significa la administración con los reactivos en un momento tal que los agentes tendrán un efecto terapéutico al mismo tiempo. Dicha administración concomitante puede implicar la administración concurrente (es decir, al mismo tiempo), anterior o posterior de los agentes.

Tal como se usa en la presente, el término "se correlaciona" o "se correlaciona con" y términos similares se refieren a una asociación estadística entre casos de dos eventos, donde los eventos incluyen números, conjuntos de datos y similares. Por ejemplo, cuando los eventos implican números, una correlación positiva (también denominada en la presente "correlación directa") significa que a medida que uno aumenta, el otro también aumenta. Una correlación negativa (también denominada en la presente "correlación inversa") significa que a medida que uno aumenta, el otro disminuye.

"Unidad de dosificación" o "dosis" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el individuo particular a tratar. Cada unidad puede contener una cantidad predeterminada del compuesto o compuestos activos calculada para producir el efecto o los efectos terapéuticos deseados en asociación con un portador farmacéutico. La especificación de las formas unitarias de dosificación puede estar dictada por (a) las características únicas del compuesto o compuestos activos y el efecto o efectos terapéuticos particulares que se lograrán, y (b) las limitaciones inherentes la técnica de preparar dicho compuesto o compuestos activos.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad que, cuando se administra a un sujeto para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar el tratamiento de esa enfermedad.

El ensayo de ocupación del receptor (RO) mide el nivel de ocupación de CD47 por agentes de unión a CD47, por ejemplo, anticuerpo (Ab) anti-CD47. El propósito de medir el nivel de RO de CD47 es determinar la relación entre la dosis de un agente de unión a CD47, la saturación del receptor de CD47 y el efecto farmacológico. El porcentaje de ocupación del receptor a lo largo del tiempo puede proporcionar información útil referente a la cantidad de fármaco o la duración de la exposición necesaria para producir el efecto farmacológico deseado. Este ensayo puede usarse para determinar la RO total en el cuerpo midiendo la RO de CD47 en células sustitutas, por ejemplo, en glóbulos rojos (RBC) CD45 negativos (-) y glóbulos blancos (WBC) CD45 positivos (+), u otras poblaciones celulares, por ejemplo, células de médula ósea o tejidos obtenidas a través de biopsias tisulares. El ensayo de RO también puede usarse para determinar la RO de CD47 en células objetivo, por ejemplo, RBC, células de leucemia o células de tumores sólidos, para la unión de CD47 y/o terapias de bloqueo.

De particular interés es el uso de este ensayo para determinar el umbral de ocupación del receptor de CD47 que se correlaciona con el efecto farmacológico deseado. Este umbral puede determinarse mediante ensayos realizados ex vivo (in vitro) o mediante análisis de muestras durante la dosificación/tratamiento in vivo.

En una realización del ensayo, se elabora una curva estándar de unión a CD47 en una célula de interés usando anticuerpo conjugado con fluorocromo a varias concentraciones. La ocupación del receptor se mide incubando las células objetivo con anticuerpos no marcados en diferentes concentraciones, y luego las células o se analizaron en fagocitosis in vitro o se incubaron con una concentración saturada de anticuerpo marcado en base a la curva estándar y se analizó para determinar la unión mediante citometría de flujo. La ocupación del receptor se calculó de la siguiente manera:

% de RO — 100 -((MFI ^prueba - MFI ^{sin teñir} ) / (MFI ^{saturado STD} - MFI ^{sin teñir} )) X 100 En otras realizaciones, el ensayo se realiza infundiendo a un paciente una dosis definida de anticuerpo, obteniendo una muestra de tejido, por ejemplo, una muestra de sangre, del paciente, habitualmente antes y después de la infusión del anticuerpo. La muestra de tejido se incuba con una concentración saturada de anticuerpo marcado y se analiza mediante citometría de flujo. El análisis puede seleccionarse, por ejemplo, en glóbulos rojos, glóbulos blancos, células cancerosas, etc.

Se ha descubierto que una dosis de cebado que alcanza por lo menos aproximadamente un 80% de saturación de CD47 en los glóbulos rojos es suficiente para inducir la compensación de la anemia y reducir el grado de anemia en dosis posteriores. En humanos, se ha descubierto que la dosis de cebado es como se ha analizado anteriormente, es decir, de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, por ejemplo, 1 mg/kg. Puede realizarse un ensayo de ocupación del receptor con un agente de unión a CD47 candidato para determinar el nivel de dosis de cebado que proporciona por lo menos aproximadamente el 50% de saturación en glóbulos rojos, por lo menos aproximadamente el 60% de saturación, por lo menos aproximadamente el 70% de saturación, por lo menos aproximadamente el 80% de saturación, por lo menos aproximadamente el 90% de saturación, por lo menos aproximadamente el 95% de saturación, por lo menos aproximadamente el 99% de saturación, o más.

Puede realizarse un ensayo de ocupación del receptor para determinar la dosis de cebado apropiada para un agente anti-CD47 candidato, por ejemplo, un anticuerpo que se une a CD47, un polipéptido SIRPa, etc.

Anticuerpos

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un anticuerpo o anticuerpos, es decir, la administración de un anticuerpo anti CD47 y, en algunas realizaciones, la administración de un anticuerpo adicional. Como se ha descrito anteriormente, el término "anticuerpo" incluye la referencia a una molécula de inmunoglobulina inmunológicamente reactiva con un antígeno particular, e incluye tanto anticuerpos policlonales como monoclonales. El término también incluye formas manipuladas genéticamente como anticuerpos quiméricos (por ejemplo, anticuerpos murinos humanizados) y anticuerpos heteroconjugados. El término "anticuerpo" también incluye formas de unión a antígeno de anticuerpos, incluyendo fragmentos con capacidad de unión a antígeno (por ejemplo, Fab', F(ab')2, Fab, Fv y rIgG. El término también se refiere a fragmentos Fv de cadena sencilla (scFv) recombinantes. El término anticuerpo también incluye moléculas bivalentes o biespecíficas, diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos.

La selección de anticuerpos puede basarse en una variedad de criterios, que incluyen selectividad, afinidad, citotoxicidad, etc. La frase "se une específicamente (o selectivamente)" a un anticuerpo o "específicamente (o selectivamente) inmunorreactivo con", cuando se refiere a una proteína o péptido, se refiere a una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína, en una forma heterogénea. población de proteínas y otros productos biológicos. Por tanto, en las condiciones de inmunoensayo designadas, los anticuerpos especificados se unen a una secuencia de proteína particular por lo menos dos veces el fondo y más típicamente más de 10 a 100 veces el fondo. En general, los anticuerpos descritos en la presente se unen a antígenos en la superficie de las células objetivo en presencia de células efectoras (como células asesinas naturales o macrófagos). Los receptores de Fc en las células efectoras reconocen los anticuerpos unidos.

Puede generarse un anticuerpo inmunológicamente reactivo con un antígeno particular mediante métodos recombinantes como la selección de bibliotecas de anticuerpos recombinantes en fagos o vectores similares, o inmunizando a un animal con el antígeno o con el ADN que codifica el antígeno. Los métodos para preparar anticuerpos policlonales son conocidos por los expertos en la técnica. Los anticuerpos pueden, alternativamente, ser anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales pueden prepararse usando métodos de hibridoma. En un método de hibridoma, típicamente se inmuniza a un animal huésped apropiado con un agente inmunizante para provocar linfocitos que produzcan o sean capaces de producir anticuerpos que se unirán específicamente al agente inmunizante. Alternativamente, los linfocitos pueden inmunizarse in vitro. A continuación, los linfocitos se fusionan con una línea celular inmortalizada usando un agente de fusión adecuado, como polietilenglicol, para formar una célula de hibridoma.

Los anticuerpos humanos pueden producirse usando varias técnicas conocidas en la técnica, incluyendo las bibliotecas de presentación de fagos. De manera similar, los anticuerpos humanos pueden prepararse introduciendo loci de inmunoglobulina humana en animales transgénicos, por ejemplo, ratones en los que los genes de inmunoglobulina endógena han sido parcial o completamente inactivados. Tras el desafío, se observa la producción de anticuerpos humanos, que se asemeja mucho a la observada en humanos en todos los aspectos, incluidos el reordenamiento génico, el ensamblaje y el repertorio de anticuerpos.

Los anticuerpos también existen como una serie de fragmentos bien caracterizados producidos por digestión con varias peptidasas. Así, la pepsina digiere un anticuerpo por debajo de los enlaces disulfuro en la región bisagra para producir F(ab)'2, un dímero de Fab que en sí mismo es una cadena ligera unida a VH-Chi por un enlace disulfuro. El F(ab)'2 puede reducirse en condiciones suaves para romper el enlace disulfuro en la región bisagra, convirtiendo de este modo el dímero F(ab)'2 en un monómero Fab'. El monómero Fab' es esencialmente Fab con parte de la región bisagra. Aunque se definen varios fragmentos de anticuerpos en términos de la digestión de un anticuerpo intacto, un experto apreciará que tales fragmentos pueden sintetizarse de novo. ya sea químicamente o usando la metodología del ADN recombinante. Por tanto, el término anticuerpo, como se usa en la presente, también incluye fragmentos de anticuerpos producidos por la modificación de anticuerpos completos o aquellos sintetizados de novo usando metodologías de ADN recombinante (por ejemplo, Fv de cadena sencilla) o aquellos identificados usando bibliotecas de presentación de fagos.

Un "anticuerpo humanizado" es una molécula de inmunoglobulina que contiene una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. Los anticuerpos humanizados incluyen inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una región determinante de la complementariedad (CDR) del receptor se reemplazan por residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo donante) como ratón, rata o conejo que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos del marco de Fv de la inmunoglobulina humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Los anticuerpos humanizados también pueden comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en las secuencias marco o CDR importadas. En general, un anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de por lo menos uno, y típicamente dos, dominios variables, en el que todas o sustancialmente todas las regiones CDR corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones marco (FR) son las de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá óptimamente por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), típicamente la de una inmunoglobulina humana.

Pueden probarse los anticuerpos de interés para determinar su capacidad para inducir ADCC (citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos) o ADCP (fagocitosis celular dependiente de anticuerpos). La actividad de ADCC asociada a anticuerpos puede monitorizarse y cuantificarse mediante la detección de la liberación del marcador o la lactato deshidrogenasa de las células lisadas, o la detección de la viabilidad reducida de las células objetivo (por ejemplo, ensayo de anexina). Los ensayos de apoptosis pueden realizarse mediante el ensayo de marcado del extremo de corte de digoxigenina-11-dUTP mediado por desoxinucleotidil transferasa terminal (TUNEL) (Lazebnik et al., Nature: 371, 346 (1994). La citotoxicidad también puede detectarse directamente mediante kits de detección conocidos en la técnica, como el kit de detección de citotoxicidad de Roche Applied Science (Indianapolis, Ind ). Agentes anti-CD47

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4. CD47 es una glicoproteína transmembrana ampliamente expresada con un único dominio similar a Ig y cinco regiones que abarcan la membrana, que funciona como un ligando celular para SIRPa con unión mediada a través del dominio similar a V NH2-terminal de SIRPa. SIRPa se expresa principalmente en células mieloides, incluyendo macrófagos, granulocitos, células dendríticas mieloides (DC), mastocitos y sus precursores, incluyendo las células madre hematopoyéticas. Los determinantes estructurales de SIRPa que median la unión de CD47 se analizan en Lee et al. (2007) J. Inmunol. 179:7741-7750; Hatherley et al. (2008) Célula Mol. 31(2):266-77; Hatherley et al. (2007) J.B.C. 282:14567-75; y el papel de la dimerización en cis de SIRPa en la unión de CD47 se analiza en Lee et al. (2010) J.B.C. 285:37953-63. De acuerdo con el papel de CD47 para inhibir la fagocitosis de las células normales, existen evidencias de que se regula por incremento transitoriamente en células madre hematopoyéticas (HSC) y progenitores justo antes y durante su fase migratoria, y que el nivel de CD47 en estas células determina la probabilidad de que sean engullidos in vivo.

El término "agente anti-CD47" o "agente que proporciona el bloqueo de CD47" se refiere a cualquier agente que reduce la unión de CD47 (por ejemplo, en una célula objetivo) a un ligando de CD47 como SIRPa (por ejemplo, en una célula fagocítica). Los ejemplos no limitativos de reactivos anti-CD47 incluyen reactivos de SIRPa, incluyendo sin limitación, polipéptidos de SIRPa de alta afinidad, anticuerpos anti-SIRPa, polipéptidos de CD47 solubles y anticuerpos o fragmentos de anticuerpos anti-CD47. En algunos casos, un agente anti-CD47 (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD47, un reactivo de SIRPa, etc.) se une específicamente a CD47 para reducir la unión de CD47 a SIRPa.

Un agente anti-CD47 puede incluir un agente de SIRPa que incluye SIRPa o una porción del mismo. Por ejemplo, un agente anti-CD47 puede incluir una fusión Fc basada en SIRPa. Ver, por ejemplo, Kipp Weiskopf, et al. Science 341, 88 (2013).

Un agente anti-CD47 puede incluir un agente de SIRPa divulgado en la WO2014094122. Por ejemplo, un agente de SIRPa puede incluir la secuencia de la SEQ ID NO: 3, 25 o 26 como se divulga en la WO2014094122.

Un agente anti-CD47 puede incluir un agente de SIRPa divulgado en la WO2017177333. Por ejemplo, un agente de SIRPa puede incluir la secuencia de la SEQ ID NO: 3 u 8 como se divulga en la WO2017177333.

Un agente anti-CD47 puede incluir un agente de SIRPa divulgado en la WO2016023040. Por ejemplo, un agente de SIRPa puede incluir la secuencia de la SEQ ID NO: 78-85, 98-104, 107-113, 116-122, 135-137 o 152-159 como se divulga en la WO2016023040.

Un agente anti-CD47 puede incluir un agente de SIRPa divulgado en la WO2017027422. Por ejemplo, un agente de SIRPa puede incluir la secuencia de la SEQ ID NO: 3-34 como se divulga en la WO2017027422.

El anticuerpo anti-CD47 en cuestión se une específicamente a CD47 y reduce la interacción entre CD47 en una célula (por ejemplo, una célula infectada) y SIRPa en otra célula (por ejemplo, una célula fagocítica). El anticuerpo anti-CD47 no activa CD47 tras unirse. Algunos anticuerpos anti-CD47 no reducen la unión de CD47 a SIRPa y dicho anticuerpo puede denominarse "anticuerpo anti-CD47 no bloqueante". Un anticuerpo anti-CD47 adecuado que es un "agente anti-CD47" puede denominarse "anticuerpo bloqueante de CD47". El anticuerpo anti-CD47 para el uso de la invención es Hu5F9-G4. Los ejemplos no limitativos de anticuerpos bloqueantes anti-CD47 adicionales incluyen los clones B6H12, 5F9, 8B6 y C3 (por ejemplo, como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2011/143624). Los anticuerpos anti-CD47 adecuados incluyen versiones completamente humanas, humanizadas o quiméricas de dichos anticuerpos. Los anticuerpos humanizados (por ejemplo, hu5F9-G4) son especialmente útiles para aplicaciones in vivo en humanos debido a su baja antigenicidad.

Un anticuerpo anti-CD47 puede comprender una región Fc de IgG humana, por ejemplo, una región constante de IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4. Por tanto, la región Fc de IgG es, por ejemplo, una región constante de IgG4. La bisagra de IgG4 puede estabilizarse mediante la sustitución del aminoácido S241P (ver Angal et al. (1993) Mol. Immunol. 30(1): 105-108).

En algunas realizaciones, se administra un anticuerpo anti-CD47 a una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal.

En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-CD47 da como resultado una saturación del receptor mayor o igual al 90%, opcionalmente del 90-100, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100% de saturación del receptor, en donde opcionalmente la saturación del receptor se mide usando citometría de flujo o un ensayo equivalente.

Un anticuerpo anti-CD47 puede formularse en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Un anticuerpo anti-CD47 puede administrarse por vía intravenosa.

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración del anticuerpo anti-CD47 Hu5F9-G4. En algunas realizaciones, los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un anticuerpo anti-CD47 con secuencias (cadena ligera, cadena pesada y/o CDR) por lo menos un 97%, por lo menos un 98%, por lo menos un 99% o un 100% idénticas a las secuencias de Hu5f9-G4. La Tabla 1 contiene la secuencia de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo Hu5f9-G4. Las regiones CDR se muestran en negrita.

Tabla 1.

Anticuerpos anti-CD20

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un anticuerpo anti-CD20, rituximab. Generalmente, un anticuerpo anti-CD20 se administra junto con un anticuerpo anti-CD47.

Un anticuerpo anti-CD20 puede comprender o consistir de rituximab.

Un anticuerpo anti-CD20 puede comprender o consistir de un biosimilar de rituximab (blitzima, ritemvia, tuxella).

Un anticuerpo anti-CD20 puede comprender un Fc como un Fc activo o un Fc de tipo salvaje. Un anticuerpo anti-CD20 puede comprender un Fc capaz de por lo menos una de ADCC y ADCP. Un anticuerpo anti-CD20 comprende un Fc que comprende una o más modificaciones que dan como resultado una actividad aumentada de ADCC y/o ADCP con respecto al Fc de tipo salvaje.

El anticuerpo anti-CD20 puede administrarse a un sujeto a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo. Un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 pueden administrarse concurrente o secuencialmente, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-CD20 se administra antes que el anticuerpo anti-CD47.

Un anticuerpo anti-CD20 puede formularse en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable. Un anticuerpo anti-CD20 y un anticuerpo anti-CD47 pueden formularse juntos.

Un anticuerpo anti-CD20 puede administrarse por vía intravenosa.

La Tabla 2 contiene las secuencias de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo rituximab.

Métodos de uso

En la presente se divulgan métodos para tratar a un sujeto con una dosis terapéutica de agente anti-CD47. Por ejemplo, un método puede incluir tratar a un sujeto humano que tiene un cáncer CD20+ o reducir el tamaño del cáncer CD20+ en el sujeto humano, que comprende: (a) administrar un anticuerpo anti-CD47 al sujeto en una dosis mayor o igual a 10 mgde anticuerpo por kg de peso corporal; y (b) administrar un anticuerpo anti-CD20 al sujeto.

Los métodos pueden incluir un paso de administrar un agente de cebado al sujeto, seguido de un paso de administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un agente anti-CD47 al sujeto. En algunas realizaciones, el paso de administrar una dosis terapéuticamente eficaz se realiza después de por lo menos 3 días (por ejemplo, por lo menos aproximadamente 4 días, por lo menos aproximadamente 5 días, por lo menos aproximadamente 6 días, por lo menos aproximadamente 7 días, por lo menos aproximadamente 8 días, por lo menos aproximadamente 9 días, o por lo menos aproximadamente 10 días) después de comenzar la administración de un agente de cebado. Este período de tiempo es, por ejemplo, suficiente para proporcionar una mayor producción de reticulocitos por el individuo.

La administración de una dosis terapéuticamente eficaz de un agente anti-CD47 puede lograrse de varias formas diferentes. En algunos casos, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de administrar un agente de cebado. La administración adecuada de una dosis terapéuticamente eficaz puede implicar la administración de una única dosis, o puede implicar la administración de dosis diarias, quincenales, semanales, quincenales, mensuales, anuales, etc. En algunos casos, una dosis terapéuticamente eficaz se administra como dos o más dosis de concentración creciente (es decir, dosis crecientes), donde (i) todas las dosis son dosis terapéuticas, o donde (ii) se administra inicialmente una dosis subterapéutica (o dos o más dosis subterapéuticas) y las dosis terapéuticas se alcanzan mediante dicho aumento. Como un ejemplo no limitativo para ilustrar la concentración creciente (es decir, dosis crecientes), puede administrarse semanalmente una dosis terapéuticamente eficaz, comenzando con una dosis subterapéutica (por ejemplo, una dosis de 5 mg/kg), y cada dosis posterior puede incrementarse en un incremento particular (por ejemplo, en 5 mg/kg), o en incrementos variables, hasta que se alcance una dosis terapéutica (por ejemplo, 30 mg/kg), momento en el cual la administración puede cesar o continuar (por ejemplo, continuación de la dosis terapéutica, por ejemplo, dosis de 30 mg/kg). Como otro ejemplo no limitativo para ilustrar la concentración creciente (es decir, dosis crecientes), puede administrarse semanalmente una dosis terapéuticamente eficaz, comenzando con una dosis terapéutica (por ejemplo, una dosis de 10 mg/kg) y puede aumentarse cada dosis posterior en un incremento particular (por ejemplo, 10 mg/kg), o en incrementos variables, hasta alcanzar una dosis terapéutica (por ejemplo, 30 mg/kg, 100 mg/kg, etc.), momento en el cual la administración puede cesar o puede continuar (por ejemplo, dosis terapéuticas continuas, por ejemplo, dosis de 30 mg/kg, 100 mg/kg, etc.). En algunas realizaciones, la administración de una dosis terapéuticamente eficaz puede ser una infusión continua y la dosis puede modificarse (por ejemplo, aumentarse) con el tiempo.

La dosificación y la frecuencia pueden variar dependiendo de la vida media del agente anti-CD47 en el paciente. Un experto en la técnica entenderá que dichas pautas se ajustarán al peso molecular del agente activo, por ejemplo, en el uso de fragmentos de anticuerpos, en el uso de conjugados de anticuerpos, en el uso de reactivos de SIRPa, en el uso de péptidos de CD47 solubles, etc. La dosificación también puede variarse para la administración localizada, por ejemplo, intranasal, inhalación, etc., o para administración sistémica, por ejemplo, i.m., i.p., i.v., s.c., y similares.

Una dosis inicial de un agente de unión a CD47, que incluye pero no se limita a una dosis de cebado, puede provocar hemaglutinación durante un período de tiempo inmediatamente después de la infusión. Sin querer estar limitados por la teoría, se cree que la dosis inicial de un agente de unión a CD47 multivalente puede provocar la reticulación de los glóbulos rojos unidos al agente. En ciertas realizaciones de la invención, un agente de unión a CD47 se infunde a un paciente en una dosis inicial y, opcionalmente, en dosis posteriores, durante un período de tiempo y/o concentración que reduce la posibilidad de microambientes hematológicos donde hay una alta concentración local de glóbulos rojos y agente.

En algunas realizaciones, se infunde una dosis inicial de un agente de unión a CD47 durante un período de por lo menos aproximadamente 2 horas, por lo menos aproximadamente 2,5 horas, por lo menos aproximadamente 3 horas, por lo menos aproximadamente 3,5 horas, por lo menos aproximadamente 4 horas, por lo menos aproximadamente 4,5 horas, por lo menos aproximadamente 5 horas, por lo menos aproximadamente 6 horas o más. En algunas realizaciones, se infunde una dosis inicial durante un período de tiempo de aproximadamente 2,5 horas a aproximadamente 6 horas; por ejemplo, de aproximadamente 3 horas a aproximadamente 4 horas. En algunas de tales realizaciones, la dosis de agente en la infusión es de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 0,5 mg/ml; por ejemplo, de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 0,25 mg/ml.

En otras realizaciones, se administra una dosis inicial de un agente de unión a CD47, por ejemplo, una dosis de cebado, mediante fusión continua, por ejemplo, como bomba osmótica, parche de administración, etc., donde la dosis se administra durante un período de por lo menos aproximadamente 6 horas, por lo menos aproximadamente 12 horas, por lo menos aproximadamente 24 horas, por lo menos aproximadamente 2 días, por lo menos aproximadamente 3 días. En la técnica se conocen muchos de tales sistemas. Por ejemplo, la tecnología DUROS, proporciona un sistema de dos compartimentos separados por un pistón. Uno de los compartimentos consiste de un motor osmótico específicamente formulado con un exceso de NaCl sólido, de tal manera que permanece presente durante todo el periodo de administración y da como resultado un gradiente osmótico constante. También consiste de una membrana semipermeable en un extremo a través de la cual se introduce agua en el motor osmótico y se establece un gradiente osmótico grande y constante entre el agua tisular y el motor osmótico. El otro compartimento consiste de una solución de fármaco con un orificio por el que se libera el fármaco debido al gradiente osmótico. Esto ayuda a proporcionar un suministro sistémico y específico del fármaco cuando se implanta en humanos. El sitio preferido de implantación es la colocación subcutánea en el interior de la parte superior del brazo.

Después de la administración del agente de cebado, y dejando pasar un período de tiempo efectivo para un aumento en la producción de reticulocitos, se administra una dosis terapéutica de un agente anti-CD47. La dosis terapéutica puede administrarse de varias maneras diferentes. En algunas realizaciones, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de administrar un agente de cebado, por ejemplo, en un programa de dosificación semanal. En algunas realizaciones, se administra una dosis terapéuticamente eficaz de un agente anti-CD47 como dos o más dosis de concentración creciente, en otras, las dosis son equivalentes. Después de la dosis de cebado se reduce la hemaglutinación.

Los agentes adicionales pueden potenciar la eficacia de los agentes anti-CD47. El anticuerpo anti-CD47 puede administrarse en combinación o antes del agente adicional.

Se administra una combinación de un anticuerpo anti-CD47 con un agente adicional descrito en la presente a pacientes con subtipos de tumores que responden a estas terapias. Estos tumores pueden definirse por una mayor frecuencia de mutaciones, lo que da como resultado más antígenos tumorales siendo, por lo tanto, más inmunogénicos, como se describe en la presente. En algunas realizaciones, los pacientes tratados con terapia de combinación responden al tratamiento con un activador inmunitario o un inhibidor de puntos de control; sin embargo, esto representa un subconjunto de aproximadamente el 25% de los pacientes dentro de un subtipo de tumor específico potencialmente sensible. En algunas realizaciones, los individuos pueden ser sensibles o resistentes a la terapia con platino.

En algunas realizaciones, los métodos en cuestión incluyen un paso de administrar un agente de cebado al sujeto, seguido de un paso de administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD47 y un agente adicional al sujeto. En algunas realizaciones, el paso de administrar una dosis terapéuticamente eficaz se realiza después de por lo menos 3 días (por ejemplo, por lo menos aproximadamente 4 días, por lo menos aproximadamente 5 días, por lo menos aproximadamente 6 días, por lo menos aproximadamente 7 días, por lo menos aproximadamente 8 días, por lo menos aproximadamente 9 días, o por lo menos aproximadamente 10 días) después de comenzar la administración de un agente de cebado. Este período de tiempo es, por ejemplo, suficiente para proporcionar una mayor producción de reticulocitos por parte del individuo.

La administración de una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD47 y/o un agente adicional puede lograrse de varias maneras diferentes. En algunos casos, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de administrar un agente de cebado. La administración adecuada de una dosis terapéuticamente eficaz puede implicar la administración de una única dosis, o puede implicar la administración de dosis diarias, bisemanales, semanales, quincenales, mensuales, anuales, etc. En algunos casos, una dosis terapéuticamente eficaz se administra como dos o más dosis de concentración creciente (es decir, dosis crecientes), donde (i) todas las dosis son dosis terapéuticas, o donde (ii) se administra inicialmente una dosis subterapéutica (o dos o más dosis subterapéuticas) y las dosis terapéuticas se alcanzan mediante dicho aumento. Como un ejemplo no limitativo para ilustrar la concentración creciente (es decir, dosis crecientes), puede administrarse semanalmente una dosis terapéuticamente eficaz, comenzando con una dosis subterapéutica (por ejemplo, una dosis de 5 mg/kg), y cada dosis posterior puede incrementarse en un incremento particular (por ejemplo, en 5 mg/kg), o en incrementos variables, hasta que se alcance una dosis terapéutica (por ejemplo, 30 mg/kg), momento en el cual la administración puede cesar o continuar (por ejemplo, continuación de la dosis terapéutica). dosis, por ejemplo, dosis de 30 mg/kg). Como otro ejemplo no limitativo para ilustrar la concentración creciente (es decir, dosis crecientes), puede administrarse semanalmente una dosis terapéuticamente eficaz, comenzando con una dosis terapéutica (por ejemplo, una dosis de 10 mg/kg) y cada dosis posterior puede incrementarse en un incremento particular (por ejemplo, 10 mg/kg), o en incrementos variables, hasta alcanzar una dosis terapéutica (por ejemplo, 30 mg/kg, 100 mg/kg, etc.), momento en el cual la administración puede cesar o puede continuar (por ejemplo, dosis terapéuticas continuas, por ejemplo, dosis de 30 mg/kg, 100 mg/kg, etc.). En algunas realizaciones, la administración de una dosis terapéuticamente eficaz puede ser una infusión continua y la dosis puede modificarse (por ejemplo, aumentarse) con el tiempo.

La dosificación y la frecuencia pueden variar dependiendo de la vida media del anticuerpo anti-CD47 y/o el agente adicional en el paciente. Un experto en la técnica entenderá que dichas pautas se ajustarán al peso molecular del agente activo, por ejemplo, en el uso de fragmentos de anticuerpos, en el uso de conjugados de anticuerpos, en el uso de reactivos de SIRPa, en el uso de péptidos de CD47 solubles, etc. La dosificación también puede variarse para administración localizada, por ejemplo, intranasal, inhalación, etc., o para administración sistémica, por ejemplo, i.m., i.p., i.v., s.c., y similares.

En ciertas realizaciones de la invención, el anticuerpo anti-CD47 se infunde a un paciente en una dosis inicial y, opcionalmente, en dosis posteriores, durante un período de tiempo y/o concentración que reduce la posibilidad de microambientes hematológicos donde hay una alta concentración local de glóbulos rojos y agente.

En algunas realizaciones de la invención, se infunde una dosis inicial anticuerpo anti-CD47 durante un período de por lo menos aproximadamente 2 horas, por lo menos aproximadamente 2,5 horas, por lo menos aproximadamente 3 horas, por lo menos aproximadamente 3,5 horas, por lo menos aproximadamente 4 horas, por lo menos aproximadamente 4,5 horas, por lo menos aproximadamente 5 horas, por lo menos aproximadamente 6 horas o más. En algunas realizaciones, se infunde una dosis inicial durante un período de tiempo de aproximadamente 2,5 horas a aproximadamente 6 horas; por ejemplo, de aproximadamente 3 horas a aproximadamente 4 horas. En algunas de tales realizaciones, la dosis de agente en la infusión es de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 0,5 mg/ml; por ejemplo, de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 0,25 mg/ml.

Cáncer

Los términos "cáncer", "neoplasia" y "tumor" se usan indistintamente en la presente para referirse a células que presentan un crecimiento autónomo no regulado, de tal manera que presentan un fenotipo de crecimiento aberrante caracterizado por una pérdida significativa de control sobre la proliferación celular. Las células de interés para la detección, el análisis o el tratamiento en la presente solicitud incluyen células precancerosas (por ejemplo, benignas), malignas, premetastásicas, metastásicas y no metastásicas. Se conocen cánceres de prácticamente todos los tejidos. La frase "carga de cáncer" se refiere a la cantidad de células cancerosas o volumen de cáncer en un sujeto. Por consiguiente, reducir la carga de cáncer se refiere a reducir el número de células cancerosas o el volumen de cáncer en un sujeto. El término "célula cancerosa" como se usa en la presente, se refiere a cualquier célula que sea una célula cancerosa o que se derive de una célula cancerosa, por ejemplo, un clon de una célula cancerosa. Los expertos en la técnica conocen muchos tipos de cánceres, incluyendo tumores sólidos como carcinomas, sarcomas, glioblastomas, melanomas, linfomas, mielomas, etc., y cánceres circulantes como leucemias.

La "patología" del cáncer incluye todos los fenómenos que comprometen el bienestar del paciente. Esto incluye, sin limitación, crecimiento celular anormal o incontrolable, metástasis, interferencia con el funcionamiento normal de las células colindantes, liberación de citoquinas u otros productos secretores a niveles anormales, supresión o agravamiento de la respuesta inflamatoria o inmunológica, neoplasia, premalignidad, malignidad, invasión de tejidos u órganos circundantes o distantes, como ganglios linfáticos, etc.

Como se usa en la presente, los términos "recurrencia del cáncer" y "recurrencia del tumor", y las variantes gramaticales de los mismos, se refieren al crecimiento adicional de células neoplásicas o cancerosas después del diagnóstico de cáncer. Particularmente, la recurrencia puede producirse cuando se produce un mayor crecimiento de células cancerosas en el tejido canceroso. De manera similar, la "diseminación tumoral" se produce cuando las células de un tumor se diseminan a tejidos y órganos locales o distantes; por lo tanto, la diseminación tumoral abarca la metástasis tumoral. La "invasión tumoral" se produce cuando el crecimiento del tumor se extiende localmente para comprometer la función de los tejidos involucrados por compresión, destrucción o prevención de la función normal del órgano.

Como se usa en la presente, el término "metástasis" se refiere al crecimiento de un tumor canceroso en un órgano o parte del cuerpo, que no está conectado directamente con el órgano del tumor canceroso original. Se entenderá que metástasis incluye micrometástasis, que es la presencia de una cantidad indetectable de células cancerosas en un órgano o parte del cuerpo que no está conectado directamente con el órgano del tumor canceroso original. La metástasis también puede definirse como varios pasos de un proceso, como la salida de las células cancerosas de un sitio tumoral original y la migración y/o invasión de células cancerosas a otras partes del cuerpo.

En algunas realizaciones, el paciente tiene una carga de mutaciones baja. En algunas realizaciones, el paciente tiene una carga de mutaciones alta. Como se sabe en la técnica, los tipos de cáncer pueden variar en el grado de mutación medio o específico, donde los niveles más altos de mutación están asociados con una mayor expresión de neoantígenos. Ver, por ejemplo, Vogelstein et al., (2013), supra. Una carga de mutaciones baja puede ser un tipo de cáncer con un promedio por tumor, o número específico para un tumor individual, de hasta aproximadamente 10, hasta aproximadamente 20, hasta aproximadamente 30, hasta aproximadamente 40, hasta aproximadamente 50 mutaciones no sinónimas por tumor. Una carga de mutaciones alta puede ser un tipo de cáncer con más de aproximadamente 50, más de aproximadamente 75, más de aproximadamente 100, más de aproximadamente 125, más de aproximadamente 150 mutaciones no sinónimas por tumor.

Cáncer CD20+

El cáncer CD20+ en el contexto de la invención es el linfoma.

El linfoma puede incluir el linfoma no Hodgkin (NHL).

El NHL puede incluir linfoma indolente. El linfoma indolente puede incluir linfoma folicular (FL). El linfoma indolente puede incluir el linfoma de la zona marginal.

El NHL puede incluir linfoma difuso de células B grandes (DLBCL). El NHL puede incluir además subtipos de DLBCL, como DLBCL de novo o DLBCL transformado. El DLBCL puede ser de diferentes células de origen, incluyendo las células B activadas, las células B del centro germinal y el linfoma de doble golpe.

El linfoma puede incluir DLBCL, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal, linfoma de células del manto, macroglobulinemia de Waldenstrom/linfoma linfoplasmocitario, linfoma primario de células B del mediastino, linfoma de Burkitt, linfoma de células B no clasificado o enfermedad linfoproliferativa posterior al trasplante (PTLD). Un subtipo de cáncer CD20+ dado, como los divulgados en la presente, puede clasificarse en base a la histopatología, la citometría de flujo, la clasificación molecular, uno o más ensayos equivalentes o una combinación de los mismos.

El linfoma puede incluir linfoma de doble golpe (por ejemplo, linfoma de células C de grado alto con reordenamiento de MYC y BCL2 y/o BCL6). El linfoma puede incluir un linfoma con reordenamiento myc.

Terapias de combinación adicinales

En algunas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en la presente se administra con por lo menos un agente terapéutico adicional. Con un anticuerpo proporcionado en la presente puede administrarse cualquier agente terapéutico adicional adecuado.

En algunas realizaciones, el agente terapéutico adicional comprende un agente inmunoestimulador. En algunas realizaciones, el agente inmunoestimulador es un agente que bloquea la señalización de un receptor inhibidor de una célula inmunitaria, o un ligando del mismo. En algunos aspectos, el receptor inhibidor o ligando es PD-1 o PD-L1. En algunos aspectos, el agente se selecciona de un anticuerpo anti-PD-1 (por ejemplo, pembrolizumab o nivolumab) y un anticuerpo anti-PD-L1 (por ejemplo, atezolizumab) y combinaciones de los mismos. En algunos aspectos, el agente es pembrolizumab. En algunos aspectos, el agente es nivolumab. En algunos aspectos, el agente es atezolizumab.

La Tabla 3 contiene las secuencias de cadena pesada y ligera del atezolizumab.

En algunas realizaciones, el agente terapéutico adicional es un agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1. En algunos aspectos, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de un anticuerpo, un peptidomimético y una molécula pequeña. En algunos aspectos, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se selecciona de pembrolizumab, nivolumab, atezolizumab, avelumab, durvalumab, tislelizumab, cemiplimab, BMS-936559, sulfamonometoxiae 1, sulfametizol 2 y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el agente terapéutico adicional que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 es cualquier agente terapéutico conocido en la técnica que tenga dicha actividad, por ejemplo, como se describe en Weinmann et al., Chem Med Chem, 2016, 14:1576 (DOI: 10.1002/cmdc.201500566), incorporado por referencia en su totalidad. En algunas realizaciones, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se formula en la misma composición farmacéutica y un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se formula en una composición farmacéutica diferente de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra antes de la administración de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra después de la administración de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el agente que inhibe la interacción entre PD-1 y PD-L1 se administra al mismo tiempo que un anticuerpo proporcionado en la presente, pero el agente y el anticuerpo se administran en composiciones farmacéuticas separadas.

En algunas realizaciones, el agente terapéutico adicional comprende un inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL. El inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL puede incluir venetoclax, navitoclax y/o AZD0466 u otros. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL se formula en la misma composición farmacéutica y un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL se formula en una composición farmacéutica diferente de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL se administra antes de la administración de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL se administra después de la administración de un anticuerpo proporcionado en la presente. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL se administra simultáneamente con un anticuerpo proporcionado en la presente, pero el inhibidor de Bcl-2/Bcl-xL y el anticuerpo se administran en composiciones farmacéuticas separadas.

Estado y selección de sujetos

Un sujeto con cáncer al que se le administra un agente anti-CD47 y un agente anti-CD20 puede tener un cierto estado. El estado puede usarse para la selección del sujeto. Un estado puede hacer que un sujeto dado tenga más probabilidades de beneficiarse de la administración de ambos agentes.

Un sujeto puede ser recidivante o refractario a por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de 10 líneas previas de terapia contra el cáncer.

Un sujeto puede ser refractario a rituximab. Un sujeto puede ser resistente a rituximab.

El estado refractario a rituximab puede ser una falta de respuesta o una progresión durante cualquier régimen anterior que contenía rituximab, o una progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab.

El estado refractario a rituximab puede ser una falta de respuesta o una progresión durante el último régimen anterior que contenía rituximab, o una progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab.

En algunos aspectos, un sujeto tiene linfoma folicular (FL) y ha recibido por lo menos dos terapias sistémicas previas. En algunos aspectos, un sujeto tiene linfoma folicular (FL) y recayó después de, o es refractario a, un régimen que contiene rituximab.

En algunos aspectos, un sujeto tiene un linfoma de células B grandes en recaída o refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica. En algunos aspectos, un sujeto tiene un linfoma de células B grandes de novo o transformado refractario a la terapia de primera línea, o recidivante o refractario a regímenes de rescate de segunda línea o trasplante autólogo de células hematopoyéticas. En algunos aspectos, un sujeto tiene linfoma de células B grandes y recayó después, o es refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica, incluyendo un régimen que contiene rituximab.

En algunos aspectos, el nivel de expresión de CD47 en tejido de linfoma de un sujeto puede determinarse mediante un ensayo. La expresión de CD47 puede ser la expresión de proteínas mediante inmunohistoquímica, citometría de flujo, citometría de masas (CyTOF) o expresión génica mediante secuenciación de ARN, análisis de micromatrices u otro método de elaboración de perfiles de expresión génica.

Los ejemplos de ensayos para CD47 incluyen ensayos de ADN (incluyendo la secuenciación del genoma completo o del exoma), micromatrices, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), RT-PCR, transferencias Southern, transferencias Northern, ensayos de unión a anticuerpos, ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA), citometría de flujo, ensayos de proteínas, transferencias Western, nefelometría, turbidimetría, cromatografía, espectrometría de masas, inmunoensayos incluyendo, a modo de ejemplo, pero sin limitación, RIA, inmunofluorescencia, inmunoquimioluminiscencia, inmunoelectroquimioluminiscencia o inmunoensayos competitivos e inmunoprecipitación. La información del ensayo puede ser cuantitativa y enviarse a un sistema informático. La información también puede ser cualitativa, como patrones de observación o fluorescencia, que puede ser traducido a una medida cuantitativa por un usuario o automáticamente por un lector o un sistema informático. En una realización, el sujeto también puede proporcionar información distinta a la información del ensayo a un sistema informático, como la raza, la altura, el peso, la edad, el sexo, el color de los ojos, el color del cabello, el historial médico familiar y cualquier otra información que pueda ser útil para un usuario, como un factor clínico.

Los ensayos de detección de proteínas son ensayos usados para detectar el nivel de expresión de una proteína determinada de una muestra. Los ensayos de detección de proteínas son generalmente conocidos en la técnica y pueden incluir un inmunoensayo, un ensayo de unión a proteínas, un ensayo basado en anticuerpos, un ensayo basado en proteínas de unión a antígenos, una matriz basada en proteínas, un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), citometría de flujo, matriz de proteínas, una transferencia, una transferencia Western, nefelometría, turbidimetría, cromatografía, espectrometría de masas, actividad enzimática y un inmunoensayo seleccionado de RIA, inmunofluorescencia, inmunoquimioluminiscencia, inmunoelectroquimioluminiscencia, inmunoelectroforético, un inmunoensayo competitivo e inmunoprecipitación.

Puede usarse análisis basado en proteínas, usando un anticuerpo como se ha descrito anteriormente que se une específicamente a un polipéptido codificado por un ácido nucleico alterado o un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido codificado por un ácido nucleico no alterado o un anticuerpo que se une específicamente a una variante de corte y empalme particular codificada por un ácido nucleico, para identificar la presencia en una muestra de prueba de una variante de corte y empalme particular o de un polipéptido codificado por un ácido nucleico polimórfico o alterado, o la ausencia en una muestra de prueba de una variante de corte y empalme particular o de un polipéptido codificado por un ácido nucleico no polimórfico o no alterado. La presencia de un polipéptido codificado por un ácido nucleico polimórfico o alterado, o la ausencia de un polipéptido codificado por un ácido nucleico no polimórfico o no alterado, es un diagnóstico para una susceptibilidad a enfermedad de la arteria coronaria.

En un aspecto, se compara el nivel o cantidad de polipéptido codificado por un ácido nucleico en una muestra de prueba con el nivel o cantidad de polipéptido codificado por el ácido nucleico en una muestra de control. Un nivel o cantidad del polipéptido en la muestra de prueba que es mayor o menor que el nivel o la cantidad del polipéptido en la muestra de control, de tal manera que la diferencia sea estadísticamente significativa, es indicativo de una alteración en la expresión del polipéptido codificado por el ácido nucleico, y es de diagnóstico. Alternativamente, la composición del polipéptido codificado por un ácido nucleico en una muestra de prueba se compara con la composición del polipéptido codificado por el ácido nucleico en una muestra de control (por ejemplo, la presencia de diferentes variantes de corte y empalme). Una diferencia en la composición del polipéptido en la muestra de prueba, en comparación con la composición del polipéptido en la muestra de control, es diagnóstica. En otro aspecto, pueden evaluarse tanto el nivel o la cantidad como la composición del polipéptido en la muestra de prueba y en la muestra de control. Una diferencia en la cantidad o nivel del polipéptido en la muestra de prueba, en comparación con la muestra de control; una diferencia en la composición de la muestra de prueba, en comparación con la muestra de control; o tanto una diferencia en la cantidad o el nivel como una diferencia en la composición son indicativos de si un sujeto debe ser tratado con un anticuerpo anti-CD47, ya sea aumentado o disminuido.

Además, un experto también comprenderá que los métodos descritos anteriormente también pueden usarse generalmente para detectar marcadores que no incluyen un polimorfismo. En algunos aspectos, el sujeto del que se toma una muestra para un ensayo tiene DLBCL de células B activadas (ABC). En algunos aspectos, el sujeto del que se toma una muestra para un ensayo tiene DLBCL de células B del centro no germinal (GCB). En algunos aspectos, el sujeto tiene una expresión aumentada de CD47 con respecto al control (normal) y se administra el anticuerpo anti-CD47 al sujeto, opcionalmente el sujeto tiene DLBCL ABC o de células B del centro no germinal (GCB). La determinación del estado de ABC o GCB puede realizar, por ejemplo, mediante generación de perfiles de expresión génica.

Dosificación

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración de una dosis terapéuticamente eficaz de las composiciones, es decir, una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD47 y, opcionalmente, un agente adicional.

Las composiciones se administran a un paciente en una cantidad suficiente para eliminar sustancialmente las células objetivo, como se ha descrito anteriormente. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como una "dosis terapéuticamente eficaz", que puede proporcionar una mejora en las tasas de supervivencia globales. Pueden administrarse administraciones individuales o múltiples de las composiciones dependiendo de la dosificación y de la frecuencia según sea necesario y tolerado por el paciente. La dosis particular usada para un tratamiento dependerá de la condición médica y el historial del mamífero, así como de otros factores como la edad, el peso, el sexo, la vía de administración, la eficacia, etc.

Las dosis eficaces de los agentes combinados de la presente divulgación para el tratamiento del cáncer variarán dependiendo de muchos factores diferentes, incluyendo los medios de administración, el sitio objetivo, el estado fisiológico del paciente, si el paciente es humano o un animal, otros medicamentos administrados y si el tratamiento es profiláctico o terapéutico. Habitualmente, el paciente es un humano, pero también pueden tratarse mamíferos no humanos, por ejemplo, animales de compañía como perros, gatos, caballos, etc., mamíferos de laboratorio como conejos, ratones, ratas, etc., y similares. Las dosificaciones de tratamiento pueden ajustarse para optimizar la seguridad y la eficacia.

Una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-CD47 puede depender del agente específico usado, pero habitualmente es de aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal o más (por ejemplo, aproximadamente 20 mg/kg o más, aproximadamente 25 mg/kg o más, aproximadamente 30 mg/kg o más, aproximadamente 35 mg/kg o más, aproximadamente 40 mg/kg o más, aproximadamente 45 mg/kg o más, aproximadamente 50 mg/kg o más, o aproximadamente 55 mg/kg o más, o aproximadamente 60 mg/kg o más, o aproximadamente 65 mg/kg o más, o aproximadamente 70 mg/kg o más), o de aproximadamente 20 mg/kg a aproximadamente 70 mg/kg (por ejemplo, de aproximadamente 20 mg/kg a aproximadamente 67,5 mg/kg, o de aproximadamente 20 mg/kg a aproximadamente 60 mg/kg).

En algunos casos, la dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-CD47 es de 20, 30, 45, 60 o 67,5 mg/kg. En algunas realizaciones, la dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-CD47 es de 20 a 60 mg/kg. En algunas realizaciones, la dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-CD47 es de 20 a 67,5 mg/kg.

Una dosis de un anticuerpo anti-CD47 puede ser una dosis plana. Por ejemplo, puede administrarse una dosis plana independientemente del peso de un sujeto particular. Alternativamente, puede administrarse una dosis plana en base al peso de un sujeto particular que se encuentre dentro de un intervalo de peso particular, por ejemplo, un primer intervalo menor o igual a 100 kg; o un segundo intervalo de más de 100 kg. Una dosis plana puede ser de, por ejemplo, 1000-5000, 2000-4000, 2000-3500, 2400-3500, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000, 4100, 4200, 4300, 4400, 4500, 4600, 4700, 4800, 4900, 5000 mg, o un número intermedio de mg de los mismos.

La dosis necesaria para alcanzar y/o mantener un nivel particular en suero de la composición administrada es proporcional a la cantidad de tiempo entre las dosis e inversamente proporcional al número de dosis administradas. Por tanto, a medida que aumenta la frecuencia de dosificación, disminuye la dosis necesaria. La optimización de las estrategias de dosificación será fácilmente comprendida y puesta en práctica por un experto en la técnica. Un régimen de tratamiento ejemplar implica la administración una vez cada dos semanas o una vez al mes o una vez cada 3 a 6 meses. Las entidades terapéuticas de la presente divulgación se administran habitualmente en múltiples ocasiones. Los intervalos entre dosificaciones individuales pueden ser semanales, mensuales o anuales. Los intervalos también pueden ser irregulares, como se indica midiendo los niveles en sangre de la entidad terapéutica en el paciente. Alternativamente, las entidades terapéuticas de la presente divulgación pueden administrarse como una formulación de liberación sostenida, en cuyo caso se usa una administración menos frecuente. La dosificación y la frecuencia variarán dependiendo de la vida media del polipéptido en el paciente.

Una "dosis de mantenimiento" es una dosis destinada a ser una dosis terapéuticamente eficaz. Por ejemplo, en experimentos para determinar la dosis terapéuticamente eficaz, pueden administrarse múltiples dosis de mantenimiento diferentes a diferentes sujetos. Como tal, algunas de las dosis de mantenimiento pueden ser dosis terapéuticamente eficaces y otras pueden ser dosis subterapéuticas.

En aplicaciones profilácticas, puede administrarse una dosificación relativamente baja a intervalos relativamente infrecuentes durante un largo período de tiempo. Algunos pacientes continúan recibiendo tratamiento durante el resto de sus vidas. En otras aplicaciones terapéuticas, a veces se usa una dosificación relativamente alta a intervalos relativamente cortos hasta que se reduce o termina la progresión de la enfermedad, y preferiblemente hasta que el paciente muestra una mejoría parcial o completa de los síntomas de la enfermedad. Posteriormente, al paciente se le puede administrar un régimen profiláctico.

En otras realizaciones más, los métodos de la presente divulgación incluyen tratar, reducir o prevenir el crecimiento tumoral, la metástasis tumoral o la invasión tumoral de cánceres que incluyen carcinomas, cánceres hematológicos, melanomas, sarcomas, gliomas, etc. Para aplicaciones profilácticas, se administran composiciones farmacéuticas o medicamentos a un paciente susceptible o en riesgo de otro modo de padecer una enfermedad en una cantidad suficiente para eliminar o reducir el riesgo, disminuir la gravedad o retrasar la aparición de la enfermedad incluyendo los síntomas bioquímicos, histológicos y/o conductuales de la enfermedad, sus complicaciones y fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad.

La toxicidad de los agentes combinados descritos en la presente puede determinarse mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, determinando la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) o la LD100(la dosis letal para el 100% de la población). La relación de dosis entre el efecto tóxico y el terapéutico es el índice terapéutico. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivos celulares y estudios en animales pueden usarse para formular un intervalo de dosificación que no sea tóxico para su uso en humanos. La dosificación de las proteínas descritas en la presente se encuentra preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la dosis eficaz con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación, la vía de administración y la dosificación exactas pueden ser elegidas por el médico individual en vista de la condición del paciente.

Agentes de cebado y dosis de cebado

En la invención, se administra un agente de cebado, concretamente, una dosis de cebado de un anticuerpo anti-CD47, antes de administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD47 al individuo. Otros agentes de cebado incluyen un agente estimulante de la eritropoyesis (ESA). Después de la administración del agente de cebado, y dejando pasar un período de tiempo eficaz para un aumento en la producción de reticulocitos, se administra una dosis terapéutica de un anticuerpo anti-CD47. La administración puede realizarse de acuerdo con los métodos descritos en la solicitud de patente en trámite publicación de patente de Estados Unidos N° 2016/0008429.

En algunas realizaciones, la administración de una combinación de agentes de la invención se combina con una dosis eficaz de un agente que aumenta el hematocrito del paciente, por ejemplo, agentes estimulantes de la eritropoyetina (ESA). Tales agentes son conocidos y se usan en la técnica incluyendo, por ejemplo, Aranesp^(darbepoetina alfa), Epoge^NF/Procrit^NF (epoetina alfa), Omontys^(peginesatida), Pracrito, etc.

El término "dosis de cebado" o como se usa en la presente se refiere a una dosis de un agente anti-CD47 que ceba a un sujeto para la administración de una dosis terapéuticamente eficaz de agente anti-CD47 de tal manera que la dosis terapéuticamente eficaz no de como resultado una pérdida grave de RBC (hematocrito reducido o hemoglobina reducida). La dosis de cebado apropiada específica de un agente anti-CD47 puede variar dependiendo de la naturaleza del agente usado y de numerosos factores específicos del sujeto (por ejemplo, edad, peso, etc.). En la invención, la dosis de cebado es de 1 mg/kg.

En algunas realizaciones de los métodos descritos en la presente, el anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto como una dosis de cebado de 1 mg/kg de anticuerpo. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 se administra al sujeto como una dosis de 30 mg/kg de anticuerpo, 45 mg/kg de anticuerpo, 60 mg/kg de anticuerpo o 67,5 mg/kg de anticuerpo.

Una dosis de cebado de un anticuerpo anti-CD47 puede ser una dosis de cebado plana. Por ejemplo, puede administrarse una dosis de cebado plana independientemente del peso de un sujeto en particular. Alternativamente, puede administrarse una dosis de cebado plana en base al peso de un sujeto particular que se encuentre dentro de un intervalo de peso particular, por ejemplo, un primer intervalo menor o igual a 100 kg; o un segundo intervalo de más de 100 kg. Una dosis de cebado plana puede ser, por ejemplo, de 10-200, 50-100, 70-90, 75-85, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200 mg, o un número intermedio de mg de los mismos.

La dosis terapéutica puede administrarse de varias maneras diferentes. En algunas realizaciones, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de que se haya administrado un agente de cebado. En algunas realizaciones, una dosis terapéuticamente eficaz de un agente anti-CD47 se administra como dos o más dosis de concentración creciente, en otras, las dosis son equivalentes.

En algunas realizaciones de la invención, se proporciona una dosis de cebado eficaz de Hu-5F9G4, donde la dosis de cebado eficaz para un humano es de aproximadamente 1 mg/kg, por ejemplo, de por lo menos aproximadamente 0,75 mg/kg a no más de aproximadamente 1,25 mg/kg; de por lo menos aproximadamente 0,95 mg/kg a no más de aproximadamente 1,05 mg/kg; y puede ser de alrededor de aproximadamente 1 mg/kg

En algunas realizaciones de la invención, se infunde una dosis inicial de un agente de unión a CD47 durante un período de por lo menos aproximadamente 2 horas, por lo menos aproximadamente 2,5 horas, por lo menos aproximadamente 3 horas, por lo menos aproximadamente 3,5 horas, por lo menos aproximadamente 4 horas, por lo menos aproximadamente 4,5 horas, por lo menos aproximadamente 5 horas, por lo menos aproximadamente 6 horas o más. En algunas realizaciones, se infunde una dosis inicial durante un período de tiempo de aproximadamente 2,5 horas a aproximadamente 6 horas; por ejemplo, de aproximadamente 3 horas a aproximadamente 4 horas. En algunas de tales realizaciones, la dosis de agente en la infusión es de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 0,5 mg/ml; por ejemplo, de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 0,25 mg/ml.

En algunas realizaciones, puede administrarse una dosis de cebado por vía subcutánea, mediante inyección, parche, bomba osmótica y similares, como se conoce en la técnica.

Después de la administración del agente de cebado, y dejando pasar un período de tiempo efectivo para un aumento en la producción de reticulocitos, se administra una dosis terapéutica de un agente anti-CD47. La dosis terapéutica puede administrarse de varias maneras diferentes. En algunas realizaciones, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de administrar un agente de cebado, por ejemplo, en un programa de dosificación semanal. En algunas realizaciones, se administra una dosis terapéuticamente eficaz de un agente anti-CD47 como dos o más dosis de concentración creciente, en otras, las dosis son equivalentes.

En otras realizaciones, se administra una dosis inicial de un agente de unión a CD47, por ejemplo, una dosis de cebado, mediante fusión continua, por ejemplo, como bomba osmótica, parche de administración, etc., donde la dosis se administra durante un período de por lo menos aproximadamente 6 horas, por lo menos aproximadamente 12 horas, por lo menos aproximadamente 24 horas, por lo menos aproximadamente 2 días, por lo menos aproximadamente 3 días. En la técnica se conocidos muchos de tales sistemas. Por ejemplo, la tecnología DUROS, proporciona un sistema de dos compartimentos separados por un pistón. Uno de los compartimentos consiste de motor osmótico específicamente formulado con un exceso de NaCl sólido, de tal manera que permanece presente durante todo el periodo de administración y da como resultado un gradiente osmótico constante. También consiste de una membrana semipermeable en un extremo a través de la cual se introduce agua en el motor osmótico y se establece un gradiente osmótico grande y constante entre el agua tisular y el motor osmótico. El otro compartimento consiste de una solución de fármaco con un orificio por el que se libera el fármaco debido al gradiente osmótico. Esto ayuda a proporcionar una administración sistémica y específica del fármaco cuando se implanta en seres humanos. El sitio preferido de implantación es la colocación subcutánea en el interior de la parte superior del brazo.

Después de la administración del agente de cebado, y dejando pasar un período de tiempo eficaz para aumentar la producción de reticulocitos, se administra una dosis terapéutica del anticuerpo anti-CD47. La dosis terapéutica puede administrarse de varias maneras diferentes. En algunas realizaciones, se administran dos o más dosis terapéuticamente eficaces después de administrar un agente de cebado, por ejemplo, en un programa de dosificación semanal. En algunas realizaciones, se administra una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-CD47 como dos o más dosis de concentración creciente, en otras, las dosis son equivalentes. Después de la dosis de cebado se reduce la hemaglutinación.

Ciclos de dosificación

Un anticuerpo anti-CD47 puede administrarse a un sujeto en un ciclo determinado como una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal, 45 mg de anticuerpo por kg de peso corporal, 60 mg de anticuerpo por kg de peso corporal o 67,5 mg de anticuerpo por kg de peso corporal.

Una dosis de cebado de un anticuerpo anti-CD47 a un sujeto en un ciclo determinado antes de administrar un anticuerpo anti-CD47 al sujeto a una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal. La dosis de cebado es de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal. Puede administrarse una dosis de cebado a un sujeto durante aproximadamente 3 horas.

El anticuerpo anti-CD47 puede administrarse a un sujeto en un primer ciclo que comprende una dosis de cebado de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal el día 1 seguido de una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal una vez a la semana. El primer ciclo tiene una duración de 4 semanas. El anticuerpo anti-CD20 se administra al sujeto en el primer ciclo una vez a la semana a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo.

El anticuerpo anti-CD47 puede administrarse en un segundo ciclo que comprende una dosis de 30 mg de anticuerpo por kg de peso corporal una vez cada 2 semanas. El segundo ciclo tiene una duración de 4 semanas. El anticuerpo anti-CD20 se administra en el segundo ciclo una vez cada cuatro semanas a una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo.

Pueden usarse ciclos adicionales. Por ejemplo, pueden usarse por lo menos un ciclo adicional, opcionalmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, o más de 20 ciclos adicionales. El régimen de dosificación del por lo menos un ciclo adicional puede ser el mismo que el del segundo ciclo, opcionalmente en donde la parte del anticuerpo anti-CD20 del régimen de dosificación se interrumpe después de completar 6 ciclos en total. Opcionalmente, la porción anti-CD20 de un ciclo dado puede continuarse después de completar 6 ciclos en total, por ejemplo, siguiendo un protocolo de dosificación de una vez al mes o una vez cada dos meses. Por lo menos un ciclo adicional puede tener una duración de 4 semanas.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método para tratar o reducir el tamaño de un linfoma en un sujeto humano, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg /m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab. El linfoma puede ser por lo menos uno de los siguientes: linfoma no Hodgkin (NHL), linfoma indolente, linfoma folicular (FL), linfoma de la zona marginal o linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método para tratar o reducir el tamaño de un linfoma en un sujeto humano, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 que es Hu5F9-G4 y el anti- Anticuerpo CD20 que es rituximab al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto en una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El linfoma puede ser por lo menos uno de los siguientes: linfoma no Hodgkin (NHL), linfoma indolente, linfoma folicular (FL), linfoma de la zona marginal o linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene NHL, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método para tratar a un sujeto humano que tiene linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-D20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma indolente que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma folicular (FL), que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4, y el anticuerpo anti-CD20., rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

También se divulga en la presente un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma de la zona marginal, que comprende administrar el anticuerpo anti-CD47, Hu5F9-G4 y el anticuerpo anti-CD20, rituximab, al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno, el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 de 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) el día 11 (semana 2) y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg (por ejemplo, 30-50, 30, 35, 40, 45, 50 mg) de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas. El segundo ciclo puede repetirse como ciclos adicionales (por ejemplo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo, octavo, noveno, décimo, etc.) sin límite o, por ejemplo, hasta que se reduzca o pierda el beneficio clínico. Cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y más allá, el anticuerpo anti-CD20 puede administrarse al sujeto a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas. Generalmente, el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo antiCD20 continuarán administrándose al sujeto como se ha indicado anteriormente hasta que el sujeto pierda el beneficio clínico, por ejemplo, a través de CR o muerte. El anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4. El anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

Administración

En los métodos descritos en la presente, las composiciones se administran a un sujeto. Las composiciones pueden administrarse por vía parenteral, tópica, intravenosa, intraabdominal, intratumoral, oral, subcutánea, intraarterial, intracraneal, intraperitoneal, intranasal o intramuscular. Una vía típica de administración es la intravenosa o intratumoral, aunque otras vías pueden ser igualmente eficaces.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 y/o el agente adicional se administran por vía intraabdominal. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 y/o el agente adicional se administran por vía intravenosa. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 y/o el agente adicional se administran por vía intratumoral. En una realización, se administra una dosis de cebado del anticuerpo anti-CD47 y la dosis de cebado se administra por vía subcutánea. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 y el agente adicional se administran concurrentemente. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 y el agente adicional se administran secuencialmente.

Los agentes activos se administran dentro de un período de tiempo para producir un efecto aditivo o sinérgico sobre el agotamiento de las células cancerosas en el huésped. Los métodos de administración incluyen, sin limitación, administración sistémica, administración intratumoral, etc. Habitualmente, el anticuerpo anti-CD47 se administra en el plazo de un período de aproximadamente 45 días, aproximadamente 30 días, aproximadamente 21 días, aproximadamente 14 días, aproximadamente 10 días, aproximadamente 8 días, aproximadamente 7 días, aproximadamente 6 días, aproximadamente 5 días, aproximadamente 4 días, aproximadamente 3 días, aproximadamente 2 días, aproximadamente 1 día o sustancialmente el mismo día que el agente adicional. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 se administra antes que el agente adicional. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD47 se administra después del agente adicional. Puede considerarse que los agentes se combinan si el programa de administración es tal que el nivel en suero de ambos agentes está en un nivel terapéutico al mismo tiempo. La administración puede repetirse según sea necesario para el agotamiento de la población de células cancerosas.

Uno o más anticuerpos divulgados en la presente pueden ser administrados por un profesional médico, opcionalmente un médico.

Uno o más anticuerpos divulgados en la presente pueden ser administrados por el sujeto.

Criterios de valoración clínicos

Los métodos descritos en la presente dan como resultado por lo menos un criterio de valoración mejorado en comparación con el valor de referencia.

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado una respuesta objetiva (OR) en un sujeto. Una respuesta objetiva es una respuesta parcial o una remisión completa según lo definido por los criterios de respuesta a NHL de Cheson, Lugano o similares.

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado el control de la enfermedad en un sujeto. El control de la enfermedad es enfermedad estable más respuesta objetiva.

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado una respuesta parcial (PR) en un sujeto. La RP es una reducción del tumor de por lo menos un 50% según criterios de imagenología (TC o PET/TC) sin desaparición completa de las lesiones tumorales. Según los criterios de PET/CT, una RP es como se ha descrito anteriormente o por una captación metabólica reducida en comparación con el valor de referencia y masas residuales de cualquiertamaño (criterios de Lugano, Cheson et al., JCO 2014).

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado una respuesta completa (CR en un sujeto. Cheson et al., JCO 2014.

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado una enfermedad estable (SD) en un sujeto. Cheson et al., JCO 2014.

Un método divulgado en la presente puede reducir el tamaño del cáncer de un sujeto con respecto al valor de referencia donde el valor de referencia se determina antes de la administración del anticuerpo anti-CD47.

Un método divulgado en la presente puede dar como resultado una reversión de la refractariedad al rituximab en un sujeto.

Composiciones farmacéuticas

Los métodos descritos en la presente incluyen la administración de composiciones farmacéuticas que comprenden el anticuerpo anti-CD47 y/o el agente adicional.

Típicamente, las composiciones se preparan como inyectables, ya sea como soluciones líquidas o suspensiones; también pueden prepararse formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en vehículos líquidos antes de la inyección. La preparación también puede emulsionarse o encapsularse en liposomas o micropartículas como poliláctido, poliglicólido o copolímero para mejorar el efecto adyuvante, como se ha analizado anteriormente. Langer, Science 249: 1527, 1990 y Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997. Los agentes de esta invención pueden administrarse en forma de inyección de depósito o preparación de implante que puede formularse de tal manera que permita una liberación sostenida o pulsátil del ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas se formulan generalmente como estériles, sustancialmente isotónicas y en pleno cumplimiento de todas las normas de Buenas Prácticas de Fabricación (GMP) de la U.S. Food and Drug Administration.

Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación unitaria dependiendo del método de administración. Por ejemplo, las formas de dosificación unitaria adecuadas para administración oral incluyen, pero no se limitan a, polvo, comprimidos, píldoras, cápsulas y pastillas para chupar. Se reconoce que las composiciones, cuando se administran por vía oral, deben protegerse de la digestión. Esto se logra típicamente formando complejos con las moléculas con una composición para hacerlas resistentes a la hidrólisis ácida y enzimática, o empaquetando las moléculas en un portador resistente apropiado, como un liposoma o una barrera de protección. Los medios para proteger a los agentes de la digestión son bien conocidos en la técnica.

Las composiciones para administración comprenderán comúnmente un anticuerpo u otro agente ablativo disuelto en un portador farmacéuticamente aceptable, preferiblemente un portador acuoso. Pueden usarse una variedad de portadores acuosos, por ejemplo, solución salina tamponada y similares. Estas soluciones son estériles y generalmente están libres de materia indeseable. Estas composiciones pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales bien conocidas. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según sea necesario para aproximarse a las condiciones fisiológicas como agentes tamponadores y de ajuste del pH, agentes de ajuste de la toxicidad y similares, por ejemplo, acetato sódico, cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, lactato sódico y similares. La concentración de agente activo en estas formulaciones puede variar ampliamente, y se seleccionará principalmente en base a los volúmenes de fluido, viscosidades, peso corporal y similares de acuerdo con el modo de administración particular seleccionado y las necesidades del paciente (por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Science (15a ed., 1980) y Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)).

"Excipiente farmacéuticamente aceptable" significa un excipiente que es útil para preparar una composición farmacéutica que generalmente es segura, no tóxica y deseable, e incluye excipientes que son aceptables para uso veterinario así como para uso farmacéutico humano. Tales excipientes pueden ser sólidos, líquidos, semisólidos o, en el caso de una composición de aerosol, gaseosos.

"Sales y ésteres farmacéuticamente aceptables" significa sales y ésteres que son farmacéuticamente aceptables y tienen las propiedades farmacológicas deseadas. Tales sales incluyen sales que pueden formarse cuando los protones ácidos presentes en los compuestos son capaces de reaccionar con bases inorgánicas u orgánicas. Las sales inorgánicas adecuadas incluyen las formadas con los metales alcalinos, por ejemplo, sodio y potasio, magnesio, calcio y aluminio. Las sales orgánicas adecuadas incluyen las formadas con bases orgánicas como las bases de amina, por ejemplo, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N metilglucamina y similares. Tales sales también incluyen sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácidos clorhídrico y bromhídrico) y ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido acético, ácido cítrico, ácido maleico y los ácidos alcano- y arenosulfónicos como ácido metanosulfónico y ácido bencenosulfónico). Los ésteres farmacéuticamente aceptables incluyen ésteres formados a partir de grupos carboxi, sulfoniloxi y fosfonoxi presentes en los compuestos, por ejemplo, ésteres de alquilo C1-6. Cuando hay dos grupos ácidos presentes, una sal o éster farmacéuticamente aceptable puede ser un mono-ácido-mono-sal o éster o una di-sal o éster; y de manera similar, cuando hay más de dos grupos ácidos presentes, algunos o todos estos grupos pueden estar salificados o esterificados. Los compuestos pueden estar presentes en forma sin sal o sin esterificar, o en forma con sal y/o esterificados, y se pretende que la denominación de tales compuestos incluya tanto el compuesto original (sin sal y sin esterificar) como sus sales y ésteres farmacéuticamente aceptables. Además, ciertos compuestos pueden estar presentes en más de una forma estereoisómera, y se pretende que la denominación de tales compuestos incluya todos los estereoisómeros individuales y todas las mezclas (ya sean racémicas o no) de tales estereoisómeros.

Los términos "farmacéuticamente aceptable", "fisiológicamente tolerable" y variaciones gramaticales de los mismos, en la medida que se refieren a composiciones, portadores, diluyentes y reactivos, se usan indistintamente y representan que los materiales pueden administrarse a o sobre un humano sin la producción de efectos fisiológicos indeseables hasta un grado que prohibiría la administración de la composición.

Secuencias

En algunas realizaciones, los métodos descritos en la presente incluyen la administración de anticuerpos con secuencias descritas en la presente; por ejemplo, las secuencias de cadena pesada, cadena ligera y/o CDR descritas en la presente. Las secuencias de los anticuerpos administrados pueden ser, por ejemplo, por lo menos un 95, 96, 97, 98, 99 o 100% idénticas a las secuencias descritas en la presente.

El término porcentaje de "identidad", en el contexto de dos o más secuencias de ácidos nucleicos o polipéptidos, se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que tienen un porcentaje específico de residuos de nucleótidos o aminoácidos que son iguales, cuando se comparan y alinean para obtener la correspondencia máxima, como se mide usando uno de los algoritmos de comparación de secuencias descritos a continuación (por ejemplo, BLASTP y BLASTN u otros algoritmos disponibles para los expertos en la técnica) o mediante inspección visual. Dependiendo de la aplicación, el porcentaje de "identidad" puede existir sobre una región de la secuencia que se está comparando, por ejemplo, sobre un dominio funcional o, alternativamente, existe sobre la longitud completa de las dos secuencias que se comparan.

Para la comparación de secuencias, típicamente una secuencia actúa como secuencia de referencia con la que se comparan las secuencias de prueba. Cuando se usa un algoritmo de comparación de secuencias, las secuencias de prueba y de referencia se introducen en un ordenador, se designan las coordenadas de subsecuencias, si es necesario, y se designan los parámetros del programa del algoritmo de secuencia. Luego, el algoritmo de comparación de secuencias calcula el porcentaje de identidad de secuencia para la secuencia o secuencias de prueba con respecto a la secuencia de referencia, en base a los parámetros de programa designados.

El alineamiento óptimo de las secuencias para la comparación puede realizarse, por ejemplo, mediante el algoritmo de homología local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineación de homología de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante el método de búsqueda de similitud de Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Academia Sci. USA 85:2444 (1988), mediante implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el paquete de software genético de Wisconsin, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), o mediante inspección visual (ver de manera general Ausubel et al., infra).

Un ejemplo de un algoritmo que es adecuado para determinar el porcentaje de identidad de secuencia y la similitud de secuencia es el algoritmo BLAST, que se describe en Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). El software para realizar análisis BLAST está disponible públicamente a través del National Center for Biotechnology Information (<www.ncbi.nlm.nih.gov/>)

EJEMPLOS

A continuación se muestran ejemplos de realizaciones específicas para llevar a cabo la presente invención. Los ejemplos se ofrecen únicamente con propósitos ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de la presente invención que se define en las reivindicaciones. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, etc.), pero, por supuesto, deben permitirse algunos errores y desviaciones experimentales.

La puesta en práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, métodos convencionales de química de proteínas, bioquímica, técnicas de ADN recombinante y farmacología, dentro de la experiencia en la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Ver, por ejemplo, T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., complemento actual); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2a Edición, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990); Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3a Ed. (Plenum Press) Volúmenes A y B(1992).

Ejemplo 1: Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes humanos con linfoma no Hodgkin de células B en recaída/refractario.

Introducción

El linfoma no Hodgkin (NHL) se encuentra entre los cánceres más comunes en los Estados Unidos y Europa, con más de 70.000 y 93.000 casos nuevos diagnosticados cada año, respectivamente. El linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) es un subtipo agresivo de NHL con una tasa alta de recaída y una supervivencia a largo plazo deficiente. Además, hay pocas opciones de tratamiento disponibles para pacientes con linfoma indolente que hayan recaído o sean refractarios al rituximab. Se necesitan terapias novedosas y efectivas para abordar estas necesidades médicas insatisfechas. El Hu5F9-G4 es un anticuerpo monoclonal que se dirige a CD47, una proteína de superficie celular antifagocítica. Los estudios no clínicos han demostrado que el bloqueo de la señalización de CD47 a través de este anticuerpo elimina las células tumorales humanas, incluyendo el NHL, facilitando la fagocitosis por los macrófagos. Estudios no clínicos adicionales demuestran que los anticuerpos anti-CD47 pueden crear sinergia con los anticuerpos anticancerosos que activan el receptor Fc, incluyendo el rituximab. La terapia de combinación con Hu5F9-G4 y rituximab, un anticuerpo monoclonal anti-CD20, demostró una respuesta anticancerígena sinérgica en comparación con cualquiera de los agentes por sí solos en modelos no clínicos de NHL Este ensayo de fase 1b/2 establece la seguridad y la tolerabilidad y la estrategia de dosificación del Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes con NHL de células B en recaída/refractario. Hu5F9-G4 y rituximab se administraron por vía intravenosa. Inicialmente, este ensayo utilizó una dosis de inicio reducida de Hu5F9-G4 en combinación con dosis completas de rituximab. Las cohortes de dosis posteriores aumentaron la dosis de Hu5F9-G4. Además, se investigó la actividad anticancerígena preliminar con esta combinación de anticuerpos.

Elegibilidad del paciente

Los criterios de inclusión fueron los siguientes:

1. Adultos > 18 años

2. Solo fase 1b: NHL de células B que expresa CD20 por inmunohistoquímica (IHC) o citometría de flujo, en recaída o refractario a por lo menos 2 líneas de terapia previas

3. Cohorte de fase 2 de DLBCL: DLBCL confirmado histológicamente de novo o transformado que expresa CD20 mediante IHC o citometría de flujo, refractario a la terapia de primera línea; o recidivante o refractario a regímenes de rescate de segunda línea o trasplante autólogo de células hematopoyéticas

4. Cohorte de fase 2 de linfoma indolente: linfoma folicular o de la zona marginal confirmado histológicamente (Grado 1-3a) que expresa CD20 por IHC o citometría de flujo, recidivante o refractario a por lo menos 2 líneas de tratamiento anteriores

5. Puntuación 0-2 del Grupo Oncológico Cooperativo Oriental (ECOG)

6. Enfermedad cuya respuesta es medible o evaluable según la Clasificación de Lugano para linfomas

7. Mediciones de laboratorio, recuentos sanguíneos:

o Hemoglobina > 9,5 g/dl

o Recuento absoluto de neutrófilos (RAN) > 1,0 * 109/ml

o Plaquetas > 50 * 109/ml

8. Mediciones de laboratorio, función hepática:

o Aspartato aminotransferasa (AST)/alanina aminotransferasa (ALT) < 5 x límite superior normal (ULN) o Bilirrubina < 1,5 x o 3,0 x ULN y principalmente no conjugada si el paciente tiene historial documentado de síndrome de Gilbert o un equivalente genético

9. Mediciones de laboratorio, función renal:

o Creatinina en suero < 1,5 x ULN o tasa de filtración glomerular calculada (TFG) > 40 ml/min/1,73 m2

10. Prueba de embarazo en orina o suero negativa en el plazo de los 30 días anteriores a la inscripción y en el plazo de las 72 horas anteriores a la primera administración de Hu5F9-G4 para mujeres en edad fértil.

11. Las mujeres en edad fértil deben estar dispuestas a usar 1 método anticonceptivo altamente eficaz durante el estudio y durante 12 meses después de la última dosis de rituximab o 4 meses después de la última dosis de Hu5F9-G4, lo que se produzca más tarde.

12. Los hombres deben estar dispuestos a usar 1 método anticonceptivo eficaz durante el estudio y durante 12 meses después de la última dosis de rituximab o 4 meses después de la última dosis de Hu5F9-G4, lo que se produzca más tarde, si la pareja es una mujer en edad fértil.

13. El sujeto ha dado su consentimiento informado

14. Debe estar dispuesto y ser capaz de cumplir con las visitas a la clínica y los procedimientos descritos en el protocolo del estudio.

15. Fase 2 solamente: Dispuesto a dar su consentimiento para 1 pretratamiento obligatorio y 1 biopsia tumoral durante el tratamiento, a menos que no sea factible según lo determine el investigador (las razones incluyen, pero no se limitan a, falta de tejido tumoral accesible para la biopsia y problemas de seguridad del paciente) Los criterios de exclusión fueron los siguientes:

1. Pacientes con metástasis cerebrales activas. (Los pacientes con lesiones del sistema nervioso central [SNC] tratadas estables que no reciben tratamiento con corticosteroides durante por lo menos 3 semanas no se consideran activos).

2. Terapia anticancerígena previa que incluye quimioterapia, terapia hormonal o agentes en investigación en el plazo de las 2 semanas o en el plazo de por lo menos 4 semividas antes de la dosificación de Hu5F9-G4 (hasta un máximo de 4 semanas), lo que sea más largo. En todas las situaciones, el período de reposo máximo requerido no excederá las 4 semanas antes del día del primer tratamiento con Hu5F9-G4. Las dosis bajas de esteroides (prednisona oral o equivalente < 20 mg por día), la radioterapia localizada fuera del SNC, la terapia hormonal previa preexistente con agonistas de la LHRH para el cáncer de próstata y el tratamiento con bisfosfonatos e inhibidores de RANKL no son criterios de exclusión.

3. Infección por hepatitis B o C activa o crónica conocida o virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

4. Dependencia de transfusiones de glóbulos rojos (RBC), definida como la necesidad de más de 2 unidades de transfusiones de glóbulos rojos durante el período de 4 semanas antes de la selección. Las transfusiones de glóbulos rojos están permitidas durante la selección y antes de la inscripción para cumplir con los criterios de inclusión de hemoglobina.

5. Historial de anemia hemolítica o síndrome de Evans en los últimos 3 meses.

6. Prueba de antiglobulina directa (DAT) positiva.

7. Tratamiento previo con agentes de direccionamiento de CD47 o proteína alfa reguladora de la señal (SIRPa).

8. Segunda enfermedad maligna, excepto carcinomas basocelulares o de piel escamosa localizados tratados, cáncer de próstata localizado u otras enfermedades malignas para las cuales los pacientes no reciben una terapia activa contra el cáncer según se define en el Criterio de exclusión 2.

9. Hipersensibilidad al principio activo, a las proteínas murinas o a cualquiera de los otros excipientes de rituximab enumerados en: información de prescripción de RITUXAN® (rituximab) http://www.gene.com/download/pdf/rituxan_prescribing.pdf; Información de prescripción de MabThera® (rituximab) http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Product_Information/human/000165/WC500025821.pdf. Cada enlace es el del 27 de abril de 2017.

10. Enfermedades o afecciones médicas significativas, según la evaluación de los investigadores y el patrocinador, que aumentarían sustancialmente la relación riesgo-beneficio de participar en el estudio. Esto incluye, pero no se limita a, infarto agudo de miocardio en los últimos 6 meses, angina inestable, diabetes mellitus no controlada, infecciones activas significativas, estado gravemente inmunocomprometido e insuficiencia cardíaca congestiva Clase II-IV de la New York Heart Association (NYHA).

11. Historial de enfermedad psiquiátrica o abuso de sustancias que puedan interferir con la capacidad de cumplir con los requisitos del protocolo o dar un consentimiento informado.

12. Embarazo o lactancia activa.

Objetivos del estudio

Objetivos principales

(1) Investigación de seguridad y tolerabilidad, y definición de la dosis de Fase 2 para Hu5F9-G4 en combinación con rituximab.

(2) En la Fase 2, evaluación de la eficacia de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes con linfoma indolente y DLBCL medido por la tasa de respuesta global (ORR).

Objetivos secundarios

(1) En las Fases 1b y 2, evaluación del perfil farmacocinético (PK) de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab. (2) En Fase 1b y 2, evaluación de inmunogenicidad de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab.

(3) En la Fase 2, evaluación de la eficacia de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en linfoma indolente y DLBCL medido por la duración de la respuesta, la mejor respuesta general, la supervivencia libre de progresión y la supervivencia general.

(4) Evaluación de las tasas de respuesta de acuerdo con los criterios LYRIC para linfomas.

Objetivos exploratorios

(1) Evaluación de biomarcadores de eficacia de células inmunitarias y penetración tumoral de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab.

(2) Evaluación de la eficacia en subtipos moleculares de NHL.

Criterios de valoración

Primarios

(1) Toxicidades limitantes de la dosis (DLT) (solo Fase 1b) y eventos adversos (EA) de acuerdo con NCI cTcAE, Versión 4.03.

(2) Fase 2: Respuesta objetiva de acuerdo con la Clasificación de Lugano para linfomas.

Secundarios

(1) Fase 1b y 2: Mediciones de concentración frente a tiempo para Hu5F9-G4 en combinación con rituximab y parámetros PK, incluyendo la concentración en plasma máxima (Cmax), el tiempo hasta la concentración máxima (Tmax), la vida media terminal (t-io), área bajo la curva (AUC), depuración (CL) y volumen de distribución durante la fase terminal (Vz).

(2) Fase 1b y 2: Anticuerpos antifármacos contra Hu5F9-G4 y rituximab.

(3) Fase 2: duración de la respuesta (DOR), mejor respuesta general (BOR), supervivencia libre de progresión (PFS) y supervivencia general (OS).

(4) Respuesta objetiva de acuerdo con los criterios LYRIC para linfomas.

Exploratorios

(1) Ocupación del receptor CD47 en glóbulos rojos y glóbulos blancos (WBC) periféricos y células de linfoma, cuando corresponda.

(2) Marcadores farmacodinámicos de la actividad biológica de Hu5F9-G4 que incluyen potencialmente, pero no se limitan a, estudios de perfiles de citoquinas circulantes, secuenciación de receptores de células T en células T circulantes, citometría de masas (CyTOF)/citometría de flujo de leucocitos circulantes y activación de células T.

(3) En pacientes sometidos a biopsias tumorales, saturación de células tumorales con Hu5F9-G4 y cambios en el microambiente tumoral incluyendo, pero no limitado a, infiltración tumoral de macrófagos y células T.

(4) En pacientes sometidos a biopsias tumorales, correlación de la respuesta anticancerígena a los subtipos moleculares de NHL incluyendo, pero no limitado a, la célula de origen en DLBCL y BCL2, BCL6 y el estado de mutación/expresión de ^m Y^c .

Intervención y modo de administración

Hu5F9-G4 es un anticuerpo monoclonal humanizado contra CD47 y rituximab es un anticuerpo monoclonal quimérico contra CD20. Ambos fármacos se administraron por vía intravenosa. Hu5F9-G4 se administró los días 1, 8, 15 y 22 durante todos los ciclos de fase 1b, mientras que rituximab se administró los días 8, 15 y 22 durante el primer ciclo seguido del día 1 durante los ciclos 2-6.

Duración de la intervención y evaluación

Fase 1b/2: Para la parte de la Fase 1b del estudio, los pacientes fueron tratados con Hu5F9-G4 y rituximab en un diseño de aumento de dosis estándar de 3+3. La evaluación de seguridad de DLT usada para la determinación de la dosis máxima tolerada (MTD) se produjo en el plazo de las primeras 4 semanas. Se realizó una evaluación de la respuesta cada 2 ciclos (8 semanas) hasta la progresión de la enfermedad. El rituximab se administró o se administra durante un total de 6 ciclos, mientras que el tratamiento con Hu5F9-G4 se extendió o se extiende más allá de los 6 ciclos para aquellos que no tienen progresión de la enfermedad.

Fase 1b: de 9 a 18 pacientes en total

Por nivel de dosis:

Nivel 1: 3-6

Nivel 2: 3-6

Nivel 3: 3-6

Fase 2: 48 pacientes (24 pacientes para linfoma indolente; 24 pacientes para DLBCL)

Total del estudio: 57-66 pacientes (suponiendo progresión a la Etapa 2 de la Fase 2)

Métodos estadísticos

Se usará el conjunto de análisis de eficacia (EAS) para el análisis del criterio principal de valoración de eficacia en Fa fase 2. En la fase 1b se usó el conjunto de análisis de DLT para determinar la MTD. Se usará el conjunto de análisis completo (FAS) para OS, PFS y análisis de seguridad en la Fase 2. Para análisis adicionales se usaron o se usarán el conjunto por protocolo (PP) y el conjunto de análisis PK (PAS). El PAS se usó o se usará para resúmenes de datos de concentración de FC y parámetros de FC. Los datos de la Fase 1b y la Fase 2 se resumen o se resumirán por separado. En la Fase 2, los datos para el linfoma indolente y DLBCL se resumirán por separado. Cálculos del tamaño de la muestra

Fase 1b: El tamaño de la muestra se determinó en base al número de niveles de dosis evaluados y las toxicidades emergentes relacionadas con el fármaco del estudio. Esta fase incluye hasta 18 pacientes.

Fase 2: Diseño Minimax de dos etapas de Simon

Linfoma indolente: la hipótesis nula de que la verdadera tasa de respuesta es del 20% se probará frente a una alternativa unilateral. La hipótesis nula del 20% se basa en la actividad de rituximab como agente individual en pacientes previamente tratados y refractarios a rituximab. La suposición es que Hu5F9-G4 en combinación con rituximab dará como resultado una tasa de respuesta general (ORR) de por lo menos el 40%. En la primera etapa se acumularán 14 pacientes. Si hay 2 o menos respuestas en estos 14 pacientes después de por lo menos 8 semanas de participación en el estudio, se detendrá la inscripción en este brazo. En caso contrario, se acumularán 10 pacientes adicionales para un total de 28. Se rechazará la hipótesis nula si se observan 8 o más respuestas en 24 pacientes. Este diseño proporciona una tasa de error de tipo I de 0,10 y una potencia de 0,80 cuando la tasa de respuesta real es del 40%.

DLBCL: La hipótesis nula de que la verdadera tasa de respuesta es del 20% se probará frente a una alternativa unilateral. La hipótesis nula del 20% se basa en la actividad de rituximab como agente individual en pacientes que reciben por lo menos 2 líneas anteriores de terapias que contienen rituximab. La suposición es que Hu5F9-G4 en combinación con rituximab dará como resultado una ORR de por lo menos el 40%. En la primera etapa se acumularán 14 pacientes. Si hay 2 o menos respuestas en estos 14 pacientes después de por lo menos 8 semanas de participación en el estudio, se detendrá la inscripción en este brazo. En caso contrario, se acumularán 10 pacientes adicionales para un total de 24. Se rechazará la hipótesis nula si se observan 8 o más respuestas en 24 pacientes. Este diseño proporciona una tasa de error de tipo I de 0,10 y una potencia de 0,80 cuando la tasa de respuesta real es del 40%.

Resumen y esquema de diseño del estudio

La FIG. 1 muestra el esquema de diseño del estudio para: Ensayo de fase 1b/2 de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes con linfoma no Hodgkin de células B en recaída/refractario.

Los pacientes elegibles tenían linfoma de células B que expresan CD20 en recaída/refractario para por lo menos 2 líneas de terapia previas, una puntuación del estado funcional del Grupo Oncológico Cooperativo del Este (ECOG) (Oken MM, Creech RH, Tormey DC, et al. Toxicity and response criteria of the Eastern Cooperative Oncology Group. Am J Clin Oncol 1982;5:649-55.) de 0-2 (una escala de 5 puntos donde los números más altos reflejan una mayor discapacidad), hemoglobina > 9,5 g/dl, recuento absoluto de neutrófilos > 1 x 109/ml y plaquetas > 50 x 109/ml.

El estudio de Fase 1b tuvo 3 cohortes de aumento de dosis usando un diseño 3+3, que incluye un mínimo de 3 pacientes por cohorte para cada nivel de dosis, con el perfil de seguridad informando del aumento de la dosis para la próxima cohorte (Le Tourneau C, Lee JJ, Siu LL. Dose escalation methods in phase I cancer clinical trials. J Natl Cancer Inst 2009;101:708-20). Se evaluaron las toxicidades limitantes de la dosis durante los primeros 28 días. Todos los pacientes recibieron una dosis de cebado de 5F9 de 1 mg/kg por vía intravenosa seguido 1 semana más tarde de dosis de mantenimiento crecientes de 10, 20 o 30 mg/kg a la semana. En la cohorte de 30 mg/kg, se administró una dosis adicional de 30 mg/kg el día 11. Para todas las cohortes, se administró rituximab semanalmente a una dosis de 375 mg/m2 dosis por vía intravenosa en el ciclo 1 a partir de la semana 2, y luego mensualmente a través de los ciclos 2-6. Se administró 5F9 hasta la progresión de la enfermedad, falta de beneficio clínico o toxicidad inaceptable. Los objetivos primarios evaluaron la seguridad, la tolerabilidad y la determinación del intervalo de dosis recomendado de Fase 2 de 5F9 en combinación con rituximab. Los objetivos secundarios evaluaron la eficacia y los perfiles de farmacocinética (PK) e inmunogenicidad de 5F9.

Los eventos adversos se evaluaron durante todo el estudio y 30 días después de la última dosis del fármaco del estudio mediante los Criterios de terminología común para eventos adversos del Instituto Nacional del Cáncer, versión 4.03 (Servicios USDoHaH. Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE). Versión 4.03. 2010). Un evento adverso emergente del tratamiento se definió como un evento adverso que se produjo o empeoró en intensidad o frecuencia después del inicio del tratamiento (independientemente de la causalidad). Un evento adverso relacionado con el tratamiento se definió como un evento adverso como se ha descrito anteriormente que está relacionado con el fármaco del estudio (ya sea 5F9 y/o rituximab) según lo evaluado por el investigador. Se evaluó la eficacia de los pacientes cada 8 semanas con tomografía computarizada y tomografía por emisión de posición con 18F-fluorodesoxiglucosa. La eficacia evaluada por el investigador se evaluó mediante los Criterios de Lugano (Cheson BD, Fisher RI, Barrington SF, et al. Recommendations for initial evaluation, staging, and response assessment of Hodgkin and non-Hodgkin lymphoma: the Lugano classification. J Clin Oncol 2014;32:3059-68). Se requirieron biopsias de médula ósea para confirmar la respuesta completa si la implicación de la enfermedad estaba presente en la selección. El estado refractario a rituximab se definió como la falta de respuesta o la progresión durante cualquier régimen previo que contuviese rituximab (monoterapia o combinación con quimioterapia), o la progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab (Sehn LH, Chua N, Mayer J, et al. Obinutuzumab plus bendamustine versus bendamustine monotherapy in patients with rituximab-refractory indolent non-Hodgkin lymphoma (GADOLIN): a randomised, controlled, open-label, multicentre, phase 3 trial. The lancet oncology 2016;17:1081-93.).

Se midieron los niveles en suero de 5F9 usando un ensayo ELISA validado. Los anticuerpos antifármacos se midieron usando un enfoque escalonado (selección, confirmación y título) usando un ensayo de electroquimioluminiscencia validado. La ocupación del receptor de CD47 en las células objetivo se evaluó mediante un ensayo basado en citometría de flujo. La penetración tumoral del anticuerpo 5F9 se detectó usando un anticuerpo de IgG4 antihumano medido por inmunohistoquímica.

Ejemplo 2: resultados humanos

Seguridad de Hu5F9-G4

La Tabla A muestra que Hu5F9-G4 fue seguro y bien tolerado en un entorno de monoterapia.

Los descubrimientos de glóbulos rojos no fueron clínicamente significativos y se manejaron fácilmente mediante una estrategia de dosis de cebado patentada. No se observaron efectos adversos constantes con una exposición alta o prolongada ni toxicidades superpuestas con anticuerpos antitumorales. No se alcanzó la MTD con el aumento de la dosis hasta 45 mg/kg y >130 pacientes tratados. Los pacientes se trataron durante más de 72 semanas sin que se observaran aumentos en las señales de seguridad.

Anemia

La FIG. 2A muestra anemia con reticulocitosis compensatoria. Una dosis de cebado inicial dio como resultado una disminución temprana, temporal y leve de los niveles de hemoglobina, probablemente a través de la depuración de glóbulos rojos envejecidos. Los niveles de hemoglobina vuelven al valor de referencia incluso con el tratamiento continuo con 5F9 en dosis significativamente más altas (por ejemplo, hasta 30 mg/kg).

Anemia: la Hgb cae 1,5-2 g/dl y luego se resuelve gradualmente. Se observó anemia Gr 1-2 con un inicio en el plazo de 7-10 días de la primera dosis. Estos descubrimientos son consistentes con los estudios de toxicología de NHP. Se observó reticulocitosis reversible asociada y se resuelve durante el período de dosificación. Solo un paciente con tumor (tumor sólido) hasta la fecha (en enero de 2018) necesitó una transfusión (n > 58 pacientes). Pruebas y seguridad de Hu5F9-G4 Rituximab en NHL de células B

La Tabla B muestra la tolerabilidad de Hu5F9-G4 Rituximab en NHL de células B

La FIG. 2B muestra eventos adversos relacionados con el tratamiento para 5F9 y/o rituximab.

5F9+rituximab fue bien tolerado. Los eventos adversos comunes relacionados con el tratamiento fueron escalofríos, dolor de cabeza, anemia y fiebre. Todos fueron de grado 1-2 excepto 3 EA de G3 (escalofríos, fiebre, anemia). La dosificación de cebado/mantenimiento de 5F9 mitigó significativamente la anemia en el objetivo, un efecto principalmente de la primera dosis con recuperación espontánea. Solo 2 pacientes necesitaron una transfusión una vez. Se observaron 3 DLT separadas en niveles de dosis de 10, 20 mg/kg y 30 mg/kg. No se observaron EA autoinmunes, se observaron toxicidades mínimas de Grado 3/4. La interrupción del tratamiento debido a EA se produjo en solo 1 de 22 (4,5%) de los pacientes hasta abril de 2018. Los pacientes se trataron a largo plazo (hasta más de 18 meses) sin señales de seguridad tardías significativas. No se alcanzó una dosis máxima tolerada (MTD) hasta 30 mg/kg semanales de dosificación de 5F9.

5F9 se tolera bien en combinación con rituximab sin que se haya alcanzado la MTD hasta la fecha. La anemia en el objetivo es transitoria y se mitiga significativamente mediante el uso de un régimen de dosificación de cebado/de mantenimiento.

La FIG. 2C muestra el aumento de dosis de Fase 1B de los 22 pacientes tratados en todas las cohortes.

Hu5F9-G4 alcanza los niveles PK objetivo en dosis clínicas

La FIG. 3 muestra la farmacocinética de Hu5F9-G4.

Hu5F9-G4 supera el sumidero de antígeno tisular CD47 no lineal a 10 mg/kg o más. La postsaturación de la semivida del anticuerpo fue de ~14 días. Los niveles de fármaco en plasma libre excedieron los umbrales de actividad preclínica (>100 a 250 |jg/ml).

Ocupación del receptor de CD47 y penetración del tumor de 5F9

La FIG. 4A muestra la ocupación del receptor de CD47 en la sangre periférica en los glóbulos blancos. Se observó rápidamente una alta ocupación del receptor objetivo de CD47 en todos los niveles de dosis; la ocupación del receptor (RO) de CD47 demuestra una saturación >90%, acercándose a casi el 100% de saturación en los glóbulos blancos circulantes. Además, se ha observado la penetración del tumor de 5F9 en el entorno del tumor el día 36 de tratamiento en un paciente con DLBCL (datos no mostrados; se usó tinción anti-IgG4 para detectar 5F9 en el ganglio linfático supraclavicular con 20 mg/kg administrados de mantenimiento con 5F9).

Actividad antitumoral y duración

La Tabla C1 muestra un resumen de la actividad antitumoral observada con la combinación de Hu5F9 y rituximab en R/R-NHL a partir de enero de 2018

La Tabla C2 muestra un resumen de la actividad antitumoral observada con la combinación de Hu5F9 y rituximab en R/R-NHL a partir de abril de 2018.

El 90% (9/10) de los pacientes con respuesta evaluable (DLBCL y FL) continuaron con la terapia, lo que sugiere durabilidad; el tratamiento ha durado entre 9 y 54+ semanas y está en curso (datos no mostrados).

En enero de 2018, el 90% de los pacientes que respondieron continuaron respondiendo, incluyendo 1 paciente durante más de 13 meses (mediana de seguimiento de 4,4 meses). A partir de abril de 2018, el ORR fue del 50%, el 36% logró RC. El % de ORR/RC fue de 40/33 en DLBCL y de 71/43 en FL, respectivamente. Más del 90% de los pacientes continuaron en respuesta con una duración mediana del seguimiento de 6,2 meses para DLBCL y 8,1 meses para FL. El paciente más largo en la respuesta en este corte de datos fue de 14,8 meses y en curso.

La FIG. 4B muestra la actividad antitumoral observada con 5F9 y rituximab en NHL recidivante o refractario a partir de abril de 2018. Se han observado múltiples CR en poblaciones de Fase 1b tanto de DLBCL como de FL. El tiempo mediano de respuesta es rápido, en el plazo de los dos primeros meses. Se observa eficacia en pacientes refractarios a rituximab.

La FIG. 4C muestra respuestas duraderas en pacientes con DLBCL y FL en fase 1b a partir de abril de 2018. Uno de cada 11 pacientes que respondieron tuvo una progresión de la enfermedad con una mediana de seguimiento de más de 6 meses. Un paciente con DLBCL pasó de PR a los 2 meses a RC a los 4 meses (y en curso). La duración mediana de la respuesta no se alcanzó en ninguna de las cohortes con el paciente más largo en CR durante más de 14 meses.

Datos demográficos de los pacientes con NHL para la Fase 1b

La tabla D1 muestra los datos demográficos de los pacientes con NHL para la Fase 1b a partir de enero de 2018.

La Tabla D2 muestra los datos demográficos de los pacientes con NHL para la Fase 1b a partir de abril de 2018.

continuación

Tener en cuenta que: refractario a rituximab (cualquier régimen) significa: falta de respuesta o progresión durante cualquier régimen previo que contenga rituximab, o progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab (Sehn et al., 2016: GADOLIN trial: Obinutuzumab approval in FL); rituximab refractario (último régimen) significa: falta de respuesta o progresión durante el último régimen previo que contenía rituximab, o progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab.

La población de pacientes era una población muy pretratada con una mediana de 4 líneas de terapia previas, y algunos pacientes tenían 9 o 10 líneas de terapia previas. Todos los pacientes con LF analizados recibieron tratamiento previo con rituximab y alquilantes. Más del 90% de los pacientes eran refractarios a un régimen previo que contenía rituximab.

Hu5F9-G4 Rituximab elimina la enfermedad en 2 pacientes muy refractarios

La FIG. 5 muestra dos ejemplos de pacientes con enfermedad altamente refractaria a los que se les eliminó todo el cáncer mediante el tratamiento con Hu5F9-G4 Rituximab. Tanto los pacientes con linfoma folicular como con linfoma difuso de células B grandes lograron la eliminación completa del cáncer con la terapia con Hu5F9-G4 rituximab.

Hu5F9-G4 Rituximab elimina la enfermedad en pacientes muy refractarios adicionales

La FIG. 6A muestra un ejemplo adicional de un paciente con enfermedad altamente refractaria en el que se eliminó todo el cáncer mediante el tratamiento con Hu5F9-G4 Rituximab.

La paciente era una mujer de 58 años con DLBCL, enfermedad voluminosa refractaria a rituximab, con 4 líneas de terapia previas con progresión rápida de la enfermedad antes del ingreso al estudio. El tratamiento a las 8 semanas logró una CR, incluyendo la eliminación de todas las lesiones de linfoma y la enfermedad de la médula ósea. Se informó/observó la resolución de los síntomas B (fiebre, pérdida de peso), con una mejora sustancial en las actividades de la vida diaria en el plazo de varias semanas.

La FIG. 6B muestra un ejemplo de un hombre de 56 años con DLBCL refractario primario, 2 líneas de terapia previas, enfermedad voluminosa. Se logró una CR a las 8 semanas.

Análisis de eficacia de subgrupos de NHL

Se muestran los datos demográficos de los pacientes (Tabla D) y los análisis de eficacia (Tabla E) para todos los pacientes tratados en la Fase 1b de aumento de la dosis como parte del ensayo de Hu5F9-G4 en combinación con rituximab en pacientes con linfoma no Hodgkin (NHL) de células B en recaída/refractario a partir de enero de 2018. Los datos preliminares de duración de la respuesta se presentan en la Tabla F. Se utilizó dosificación con Rituximab a 375 mg/m2 semanal durante el ciclo 1 y mensual de los ciclos 2-6 en combinación con una dosis de cebado de 1 mg/kg de Hu5F9-G4 el día 1 y el aumento de la dosis de las dosis de mantenimiento semanales posteriores de Hu5F9-G4 de 10 mg/kg a 30 mg /kg. Tanto los pacientes con linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) como con linfoma folicular (FL) se inscribieron en la parte de la Fase 1b. Aunque pacientes presentaban por lo menos una recaída o eran refractarios a por lo menos dos líneas de tratamiento anteriores, los pacientes inscritos representaban generalmente una población mucho más pretratada en la que la mayoría de los pacientes eran refractarios a rituximab según dos definiciones clínicas (Tabla D). Además, muchos de los pacientes inscritos necesitaban terapia rápidamente debido a la progresión significativa de la enfermedad. A pesar del pretratamiento extenso y de que la mayoría de ellos refractarios a la terapia previa con rituximab, una proporción significativa de los pacientes experimento respuestas objetivas.

La FIG. 7 muestra un análisis de eficacia de subgrupos de NHL.

Tabla E1: Datos de eficacia para pacientes evaluables en la población de aumento de la dosis de la Fase 1b a artir de enero de 2018.

Tabla E2: Datos de eficacia para pacientes evaluables en los subconjuntos de DLBCL de Fase 1b a partir de abril de 2018

continuación

T l F: Dr i n l r r i n inivi l.

Se observó una correlación positiva de respuesta a la dosis con la eficacia. Se descubrió que la eficacia en pacientes refractarios a rituximab era similar a la de todos los pacientes. Se ha observado eficacia en los subtipos de DLBCL ABC, GCB y linfoma de doble impacto.

En el ensayo, se observaron tasas de respuesta objetiva más altas en pacientes con DLBCL transformado (4/7, 57%) en comparación con pacientes con DLBCL de novo (no transformados) (2/8, 25%) (FIG. 10). Los pacientes con DLBCL transformado tienen un linfoma indolente anterior (es decir, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal o linfoma linfocítico pequeño) que luego se transforma en un fenotipo de DLBCL agresivo. A menudo, los pacientes con DLBCL transformado tienen una mezcla de características de linfoma de células B indolente y agresivo. El aumento de las respuestas objetivas observadas en el DLBCL transformado puede deberse a la capacidad de 5F9+rituximab para eliminar de forma más eficaz la enfermedad indolente, ya que las tasas de respuesta inicial en FL fueron del 71% (FIG. 4B).

Resumen y conclusiones

Veintidós pacientes con DLBCL o FL en recaída/refractario se inscribieron en 3 cohortes de dosis entre noviembre de 2016 y octubre de 2017. Los datos se presentan hasta abril de 2018. 5F9 fue bien tolerado en combinación con rituximab sin que se haya alcanzado la MTD hasta la fecha. La anemia en el objetivo fue transitoria y se mitigó significativamente mediante el uso de un régimen de dosificación de cebado/de mantenimiento. Se observó actividad antitumoral con tasas de CR del 33% y 43% en DLBCL y FL, respectivamente, a partir de abril de 2018. La duración mediana de la respuesta no se alcanzó con un seguimiento de 6,2-8,1 meses.

Las características de referencia de los pacientes incluyeron una edad mediana de 59 años (intervalo 44-82 años), 21 pacientes (95%) con un estado funcional ECOG de 0 o 1 y 4 (18%) con un trasplante autólogo anterior de células madre. El número de líneas de terapia previas mediano fue de 4 (intervalo 2-10), con 21 (95%) pacientes con tumores refractarios al rituximab anterior y 14 (64%) pacientes con tumores refractarios al último régimen de tratamiento. Se inscribieron pacientes con DLBCL con diversos fenotipos moleculares de DLBCL.

La duración mediana del tratamiento fue de 22 semanas (intervalo de 1,7 a 71,1 semanas y en curso). Los 22 pacientes recibieron 5F9 y rituximab y en un paciente no se pudo evaluar su eficacia debido a la interrupción del fármaco del estudio debido a un evento adverso (púrpura trombocitopénica idiopática) aproximadamente a las 2 semanas. Este paciente se añadió al denominador (como no respondedor) en la evaluación de la eficacia. En general, tres pacientes fallecieron, todos debido a la progresión de la enfermedad con una mortalidad por todas las causas del 14%.

Seguridad

La mayoría de los eventos adversos que surgieron con el tratamiento fueron de Grado 1 y 2. Los eventos adversos más comunes relacionados con el tratamiento fueron escalofríos (41%), dolor de cabeza (41%), anemia (41%) y reacciones relacionadas con la infusión (36%). (FIG. S3A). La mayoría de los eventos adversos relacionados con el tratamiento se produjeron en el plazo de las primeras semanas y no se observaron toxicidades a largo plazo. Los eventos adversos graves se han descrito anteriormente. Se observaron tres toxicidades limitantes de la dosis. En la cohorte 2, se observó una embolia pulmonar de grado 3. Este paciente experimentó síntomas respiratorios durante una infusión de 5F9 y más tarde se descubrió que tenía una trombosis venosa profunda oculta como resultado de la compresión vascular por un linfoma que probablemente fue la fuente de la embolia pulmonar. El paciente fue tratado con anticoagulación con resolución de los síntomas y continuó con el tratamiento hasta la progresión de la enfermedad varias semanas después. Esta toxicidad llevó a la expansión de la cohorte a 6 pacientes, sin que se observaran toxicidades limitantes de la dosis adicionales. La cohorte 3 inscribió inicialmente a 6 pacientes sin que se observaran toxicidades limitantes de la dosis. Esta cohorte se amplió a 13 pacientes para recopilar datos PK y farmacocinéticos adicionales. Dos pacientes adicionales tuvieron una toxicidad limitante de la dosis: una neutropenia de grado 4 y una púrpura trombocitopénica idiopática de grado 3. El paciente con neutropenia de grado 4 se resolvió con soporte de G-CSF y continuó el estudio con resolución completa de la neutropenia sin más soporte de factor de crecimiento. El paciente con púrpura trombocitopénica idiopática grado 3 suspendió el tratamiento y recibió tratamiento con glucocorticoides e inmunoglobulina intravenosa con resolución de la trombocitopenia. La frecuencia de toxicidad limitante de la dosis para la cohorte 3 fue del 15%, por debajo de la tasa del 33% que excedería el umbral de dosis máxima tolerada. Por tanto, no se alcanzó la dosis máxima tolerada. La dosis de mantenimiento de 30 mg/kg de 5F9 en combinación con rituximab se estableció como una dosis de Fase 2 recomendada para estudios adicionales basados en datos farmacocinéticos y datos farmacodinámicos que documentan la saturación de la unión de CD47 en las células circulantes.

La anemia es un efecto farmacodinámico esperado en el objetivo del bloqueo de CD47. El bloqueo de CD47 puede acelerar la eliminación de los glóbulos rojos (RBC) envejecidos, después del desenmascaramiento de las señales profagocíticas en los glóbulos rojos envejecidos. A medida que los glóbulos rojos envejecen, pierden la expresión de CD47 y ganan expresión de señales profagocíticas que llevan a la depuración homeostática (Oldenborg PA, ZheleznyakA, Fang YF, Lagenaur CF, Gresham HD, Lindberg FP. Role of CD47 as a markerof self on red blood células Science 2000;288:2051-4). Para mitigar esta anemia en el objetivo, se administró una dosis de cebado de 1 mg/kg de 5F9 para eliminar selectivamente los glóbulos rojos envejecidos y evitar los glóbulos rojos más jóvenes, que carecen de señales profagocíticas. Esta dosis de cebado llevó a una anemia leve transitoria seguida de una reticulocitosis compensatoria que cambió la edad de los glóbulos rojos de glóbulos rojos viejos a glóbulos rojos jóvenes. Posteriormente, podrían administrarse dosis de mantenimiento más altas con resolución de la anemia sin recurrencia. Esta estrategia de dosis de cebado/mantenimiento mitigó sustancialmente la anemia en el objetivo sen base a los estudios seminales de 5F9 en primates no humanos (Liu J, Wang L, Zhao F, et al. Pre-Clinical Development of a Humanized Anti-CD47 Antibody with Anti-Cancer Therapeutic Potential. PLoS One 2015;10:e0137345). En apoyo de esta observación, la anemia relacionada con el tratamiento observada en los pacientes con linfoma fue principalmente de grado 1 y 2 y se produjo principalmente en la primera semana. Se observó evidencia mínima de hemólisis, con un aumento leve y transitorio de la bilirrubina indirecta que se correlacionó con la anemia transitoria inicial. Se observó una disminución transitoria de la haptoglobina por debajo del intervalo normal en 3/22 (14%) de los pacientes que se normalizó después de las dos primeras semanas de tratamiento. La hemoglobina pretratamiento media fue de 12,1 g/dl. La caída media de hemoglobina en todas las dosis de 5F9 fue de 0,91 g/dl (caída máxima de 2,4 g/dl). Tres pacientes requirieron transfusiones de glóbulos rojos durante el estudio; 2 pacientes recibieron solo 1 transfusión (2 unidades) mientras que el tercero recibió 4 transfusiones (8 unidades). Todas las transfusiones se administraron con éxito con el aumento esperado en la post­ transfusión de hemoglobina.

Farmacocinética, farmacodinamia y anticuerpos antifármacos

A dosis de 10 a 30 mg/kg, se observaron perfiles farmacocinéticos proporcionales a la dosis después de la cuarta dosis de mantenimiento, lo que indica la saturación del sumidero del antígeno de CD47. Una vez que se logró la saturación, la vida media terminal aparente de 5F9 fue de aproximadamente 13 días. Las muestras de suero de un sujeto (4,5%) al inicio y después del inicio del tratamiento con 5F9 dieron positivo para anticuerpos anti-5F9. No hubo impacto sobre la farmacocinética en este paciente. La ocupación del receptor de CD47 se midió como criterio de valoración farmacodinámico. Con una dosis de cebado de 1 mg/kg de 5F9 seguido de una dosificación de mantenimiento de 30 mg/kg, se observó una ocupación del receptor de CD47 cercana al 100% en los glóbulos rojos y blancos circulantes. Se observó penetración tumoral del anticuerpo 5F9 en un paciente con DLBCL tratado con 5F9.

Eficacia

En un análisis de intención de tratar, la tasa de respuesta general para todos los pacientes fue del 50% y el 36% logró una respuesta completa. En DLBCL, la tasa de respuesta fue 6/15 (40%) con 5/15 (33%) logrando una respuesta completa. En FL, la tasa de respuesta fue de 5/7 (71%) con 3/7 (43%) logrando una respuesta completa. El tiempo mediano de respuesta fue de 1,7 meses (intervalo 1,6-6,6 meses). La duración mediana de la respuesta no se alcanzó para los pacientes con DLBCL o FL con una mediana de seguimiento de 6,2 y 8,1 meses, respectivamente. Diez de los 11 (91%) pacientes que respondieron han mantenido las respuestas en curso en el momento del punto de corte de los datos. Un paciente con DLBCL fuertemente pretratado que recayó en el plazo de los 3 meses posteriores al trasplante autólogo de células madre con enfermedad voluminosa e infiltración de la médula logró una respuesta completa en el estudio. Luego, este paciente se sometió a un trasplante alogénico de células madre con un donante relacionado coincidente y continuó con una respuesta completa durante 7 meses en curso en el momento del punto de corte de los datos. Dos pacientes con DLBCL en el estudio mejoraron sus respuestas a la terapia a lo largo del tiempo. Un paciente mejoró de una enfermedad estable a una respuesta completa en el mes 6 y otro paciente mejoró de una respuesta parcial a los 2 meses a una respuesta completa en el mes 4. Ambos pacientes continuaron con una respuesta completa en el momento del punto de corte de los datos. También se observaron respuestas completas en pacientes con enfermedad voluminosa. También se han observado respuestas en múltiples subtipos de DLBCL.

Conclusiones

22 pacientes [15 con linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y 7 con linfoma folicular (FL)] inscritos con una mediana de 4 terapias anteriores (intervalo 2-10); el 95% eran refractarios a rituximab. Los eventos adversos fueron predominantemente de grado 1/2. Los eventos adversos más comunes fueron anemia y reacciones a la infusión. La anemia (un efecto esperado en el objetivo) se mitigó con la dosificación de cebado/mantenimiento de 5F9. No se observaron efectos secundarios limitantes de la dosis. Una dosis seleccionada de fase 2 de 5F9 de 30 mg/kg logró una ocupación del receptor CD47 de ~100% en los glóbulos blancos y rojos circulantes. El cincuenta por ciento de los pacientes tuvo una respuesta objetiva con un 36% de respuestas completas. Las respuestas/respuestas completas fueron del 40%/33% en DLBCL y del 71%/43% en FL. Con un tiempo de seguimiento mediano de 6,2 meses para DLBCL y 8,1 meses para FL, el 91% de las respuestas continúan.

La FIG. 8 muestra la dosis de fase 2 establecida para el ensayo clínico.

La estrategia de dosis de cebado patentada mitiga los efectos de los glóbulos rojos en el objetivo Ciclo 1, semanal: satura rápidamente el sumidero de antígenos.

Ciclo 2 y posteriores, cada 2 semanas.

Ejemplo 3: El anticuerpo anti-CD47 mejora la fagocitosis de células tumorales in vitro cuando se combina con rituximab en una línea celular de linfoma resistente a rituximab

La combinación de Hu5F9-G4 y rituximab tiene un MOA único de sinergia fagocítica a través del bloqueo simultáneo de la señal antifagocítica de CD47 con mejora de una señal profagocítica a través de la fagocitosis celular dependiente de anticuerpos por el receptor Fc de rituximab. En modelos preclínicos, este nuevo MOA ha llevado a una eficacia antitumoral en entornos refractarios/resistentes a rituximab.

Se incubaron macrófagos derivados de médula ósea de ratón con los anticuerpos indicados en presencia de células de linfoma Raji sensibles o resistentes a rituximab. El rituximab indujo una fagocitosis significativamente menor en la línea celular resistente en comparación con la sensible. Sin embargo, anti-CD47 rituximab indujo una fagocitosis robusta tanto en entornos sensibles como resistentes a rituximab. Las células Raji se cultivaron en serie con rituximab y macrófagos en múltiples pases para seleccionar clones resistentes a rituximab.

La combinación de anticuerpo anti-CD47 rituximab llevó a una fagocitosis mejorada in vitro en una línea celular de linfoma que era resistente a rituximab (FIG. 9). Todavía se observaba actividad de combinación con anticuerpo anti-CD47 rituximab en la línea celular resistente similar a la línea celular sensible.

Estos datos respaldan el fundamento científico de la eficacia de Hu5F9-G4 rituximab en pacientes con NHL refractario a rituximab.

Ejemplo 4: Utilización de una dosis de 30 o 45 mg/kg de Hu5F9-G4 en una estrategia de dosis de cebado, carga y mantenimiento en combinación con rituximab para el tratamiento de pacientes con NHL

CD47 se expresa en la mayoría de los tejidos normales y, por tanto, CD47 representa un gran sumidero de antígeno tisular. Por lo tanto, se usan dosis altas de Hu5F9-G4 para superar este sumidero de antígenos normal y llevar a la penetración de anticuerpos en el tumor para lograr la eficacia anticancerígena. Para superar este desafío, se dosificó Hu5F9-G4 en un programa de dosis de cebado, carga y mantenimiento, mediante el cual se administra una dosis inicial baja (de cebado) para mitigar la anemia objetivo, seguido de una dosis de mantenimiento con una dosis de carga adicional en la semana 2, y continuaron con la dosificación semanal de mantenimiento hasta el ciclo 2 (Tabla G). Luego, se dosifica Hu5F9-G4 Q2 semanas a partir del Ciclo 3 y más allá. El mantenimiento semanal con un paradigma de dosis de carga adicional está diseñado para saturar rápidamente el sumidero de antígenos normal de CD47, lo que lleva a la penetración de anticuerpos en el tumor, por lo que se observa una farmacocinética lineal después de la saturación. De hecho, la dosificación semanal de 5F9 con una dosis de carga adicional en la semana 2 durante los primeros 2 ciclos (meses) llevó a concentraciones más altas de 5F9 en comparación con la dosificación semanal de 5F9 solo en el primer ciclo (FIG. 12). Además de lograr rápidamente concentraciones de saturación del fármaco, las dosis más altas de 5F9 también pueden mejorar la eficacia terapéutica. En el ensayo de Fase 1b descrito anteriormente, se observó una respuesta a la dosis positiva con eficacia en dosis de 5F9 que variaban entre 10, 20 y 30 mg/kg sin alcanzar una meseta. Por lo tanto, las dosis superiores a 30 mg/kg pueden aumentar la eficacia. En base a este descubrimiento, 5F9 se prueba en un régimen de dosificación de 45 mg/kg (Tabla G), además de un régimen de dosificación de 30 mg/kg, y demuestra eficacia.

T l : R ím n ifi i n F ri xim n i n n NHL

Ejemplo 5: Selección de pacientes en base a la expresión de CD47

Los pacientes con DLBCL pueden subdividirse en categorías de células de origen en base a los patrones de expresión génica de las células B del centro germinal (GCB) y las células B activadas (ABC), que han llevado a significativas implicaciones pronósticas y terapéuticas. En un tamaño de muestra pequeño en el ensayo de Fase 1b/2 anterior, 2 de 3 (el 67%) de los pacientes con DLBCL con el fenotipo ABC tuvieron respuestas objetivas, mientras que 1 de 6 (el 17%) de los pacientes con GCB tuvieron respuestas (FIG. 10). Esta diferencia en las respuestas clínicas puede permitir un enriquecimiento de la eficacia de los pacientes con el fenotipo ABC o excluyendo a los pacientes GCB.

El nivel de expresión de CD47 puede ser un factor determinante en una potencial eficacia diferencial entre pacientes ABC y GCB. Curiosamente, cuando una amígdala de un paciente sano normal se tiñó para la expresión de CD47 humano, los centros germinales fueron negativos para la expresión de CD47 (FIG. 11). Estas observaciones sugieren que los pacientes con DLBCL GCB pueden tener una eficacia relativa más baja con 5F9 debido a la ausencia o disminución de la expresión de CD47. Este descubrimiento sugiere que la eficacia clínica de 5F9 (+/-rituximab) puede aumentarse mediante la evaluación de la expresión de CD47 en tejidos de linfoma.

La FIG. 13muestra un esquema de diseño para el uso de la expresión de CD47 como estrategia de selección de pacientes para el tratamiento con Hu5F9-G4 /- rituximab en pacientes con NHL.

Ejemplo 6: Combinación terapéutica de 5F9+ venetoclax /- rituximab en pacientes con NHL de células B La familia de proteínas Bcl-2 son mediadores clave de la vía apoptótica. La proteína específica, Bcl-2, es una proteína antiapoptótica que promueve la supervivencia celular. Varios subtipos de NHL sobreexpresan frecuentemente Bcl-2 de múltiples maneras (translocación que implica BCL2, amplificación del cromosoma 18q21 y alteraciones en los microARN que regulan la expresión de Bcl-2). La sobreexpresión de Bcl-2 en estos linfomas lleva a una proliferación celular aumentada. Se están desarrollando múltiples agentes para inhibir la función de Bcl-2, lo que lleva a la apoptosis y muerte celular de las células de linfoma. Por ejemplo, el venetoclax, un inhibidor oral de Bcl-2 aprobado por la ^f D^a , restaura la apoptosis uniéndose directamente a la proteína Bcl-2 y desencadenando la activación de la caspasa. Como los inhibidores de Bcl-2 como venetoclax y navitoclax inducen la apoptosis, estos agentes también pueden inducir señales profagocíticas que llevan a la apoptosis. En este sentido, el bloqueo de CD47 puede actuar sinérgicamente con la inhibición de Bcl-2 a través de la inducción de señales profagocíticas en las células de linfoma junto con el bloqueo de la señal antifagocítica de CD47. Estos mecanismos complementarios conducirían entonces a una fagocitosis mejorada cuando el bloqueo de CD47 se combina con la inhibición de Bcl-2. Por ejemplo, la combinación de 5F9 con venetoclax podría llevar a una actividad antilinfoma mejorada en pacientes con NHL en comparación con cualquiera de los dos agentes por separado. Además, una combinación triple de 5F9 con un anticuerpo anti-CD20 y venetoclax también tiene una eficacia potencial mejorada a través del envío de señales profagocíticas en las células de linfoma de dos maneras: inducción por inhibición de Bcl-2 y envío de una señal profagocítica externa por rituximab a través de la participación del receptor Fc. Además, la actividad clínica con 5F9+rituximab y venetoclax+rituximab en pacientes con NHL. Para 5F9+rituximab, se observó un ORR del 50% en un ensayo de Fase 1b de pacientes con DLBCL y FL combinados. Para rituximab+venetoclax, se observó un ORR del 86% en pacientes con leucemia linfocítica crónica (Seymour JF, Kipps TJ, Eichhorst B, et al. Venetoclax-Rituximab in Relapsed or Refractory Chronic Lymphocytic Leukemia. N Engl J Med 2018;378:1107-20) y un ORR del 33% en pacientes con FL (Zinzani PL TM, Yuen S, Rusconi C, Fleury I, Pro B, Gritti G, Crump M, Hsu W, Punnoose E, Hilger J, Mobasher M, Hiddermann W. Phase 2 Study of Venetoclax Plus Rituximab or Randomized Ven Plus Bendamustine+Rituximab (BR) Versus BR in Patients with Relapsed/Refractory Follicular Lymphoma: Interim Data. Blood ASH abstract 2016; 128:617). La combinación de los datos clínicos y los fundamentos científicos lleva a un fundamento sólido para la combinación doble de 5F9+venetoclax o la combinación triple de 5F9+venetoclax+rituximab.

La fórmula molecular del venetoclax es C45H50ClN7OyS.

Los regímenes de tratamiento ejemplares son los siguientes:

1. Venetoclax 20 mg PO durante 7 días, seguido de un programa de aumento de dosificación semanal hasta la dosis diaria recomendada de 400 mg

2. Venetoclax 20 mg PO x 1 semana, 50 mg PO x 1 semana, 100 mg PO x 1 semana, luego 200 mg PO x 1 semana y dosificación diaria continua de 200 mg

3. Venetoclax 20 mg PO x 1 semana, 50 mg PO x 1 semana, 100 mg PO x 1 semana, luego 200 mg PO x 1 semana, 400 mg PO x 1 semana, luego dosificación semanal de 400 mg

4. Venetoclax 50 mg PO x 1 semana, 100 mg PO x 1 semana, 200 mg PO x 1 semana, luego 400 mg PO x 1 semana y dosificación diaria continua de 400 mg

5. Venetoclax 100 mg PO x 1 semana, 200 mg PO x 1 semana, 400 mg PO x 1 semana, luego 800 mg PO x 1 semana y dosificación diaria continua de 800 mg

-células B en recaída/refractario

A continuación, se incluye un protocolo para evaluar Hu5F9-G4 en combinación con rituximab y atezolizumab en pacientes con linfoma no Hodgkin de células B en recaída/refractario.

Terapia anticancerígena previa que incluye quimioterapia, terapia hormonal o agentes en investigación en el plazo de las 2 semanas o en el plazo de por lo menos 4 semividas antes de la dosificación de Hu5F9-G4 (hasta un máximo de 4 semanas), lo que sea más largo. Las dosis bajas de esteroides (prednisona oral o equivalente < 10 mg por día) y la radioterapia localizada fuera del SNC no son criterios de exclusión. Infección por hepatitis B o C activa o crónica conocida o virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Dependencia de transfusiones de glóbulos rojos (RBC), definida como la necesidad de más de 2 unidades de transfusiones de glóbulos rojos durante el período de 4 semanas antes de la selección. Las transfusiones de glóbulos rojos están permitidas durante la selección y antes de la inscripción para cumplir con los criterios de inclusión de hemoglobina.

Historial de anemia hemolítica o síndrome de Evans en los últimos 3 meses.

Tratamiento previo con agentes de direccionamiento de CD47 o proteína alfa reguladora de la señal (SIRPa).

Tratamiento previo con agentes inhibidores de puntos de control de células T

Historial de fibrosis pulmonar idiopática, neumonitis organizada (por ejemplo, bronquiolitis obliterante), neumonitis inducida por fármacos o neumonitis idiopática

Historial de enfermedad autoinmune

Los pacientes con historial de hipotiroidismo autoinmune que reciben una dosis estable de reemplazo de tiroides pueden ser elegibles para este estudio.

Los pacientes con diabetes mellitus tipo 1 controlada que reciben un régimen de insulina estable pueden ser elegibles para este estudio.

Los pacientes con eccema, psoriasis, liquen simple crónico o vitíligo con manifestaciones dermatológicas únicamente (por ejemplo, se excluyen los pacientes con artritis psoriásica) son elegibles para el estudio siempre que se cumplan todas las condiciones siguientes:

- La erupción debe cubrir <10 % de la superficie corporal.

- La enfermedad está bien controlada al inicio del estudio y solo requiere corticosteroides tópicos de baja potencia.

Ausencia de exacerbaciones agudas de la afección subyacente que requieran psoraleno más radiación ultravioleta A, metotrexato, retinoides, agentes biológicos, inhibidores orales de la calcineurina o corticosteroides orales o de alta potencia en los 12 meses anteriores.

Terapia inmunosupresora (incluyendo, pero no limitada a, azatioprina, micofenolato mofetilo, ciclosporina, tacrolimus, metotrexato y agentes anti-factor de necrosis tumoral [anti-TNF]) en el plazo de las 6 semanas del Día 1 del Ciclo 1

Requerimiento diario de corticosteroides (>10 mg de prednisona diaria o equivalente, excepto para corticosteroides inhalados) en el plazo de las 2 semanas anteriores al Día 1 del Ciclo 1

Tratamiento con agentes inmunoestimuladores sistémicos (incluyendo, pero no limitados a, interferón [IFN]-a e interleucina [IL]-2) en el plazo de las 4 semanas o 5 semividas del fármaco, lo que sea más largo, antes del Día 1 del Ciclo 1

Tratamiento con denosumab (u otro inhibidor de RANKL) 4 semanas antes de la primera dosis y durante 10 semanas después de la última dosis de atezolizumab

Los pacientes que reciben terapia con denosumab deben estar dispuestos a recibir tratamiento con un bisfosfonato mientras reciben el tratamiento del estudio.

Administración de una vacuna viva atenuada en el plazo de las 4 semanas del Día 1 del Ciclo 1 o anticipación de que se requerirá dicha vacuna viva atenuada durante el estudio.

La vacunación contra la gripe debe administrarse únicamente durante la temporada de gripe (aproximadamente de octubre a mayo en el hemisferio norte y aproximadamente de abril a septiembre en el hemisferio sur). Los pacientes deben aceptar no recibir vacunas vivas atenuadas (por ejemplo,

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-CD47 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno,

el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 a 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y

el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas;

en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

2. Un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno,

el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 a 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez a la semana; y

el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas;

en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

3. Un anticuerpo anti-CD47 y un anticuerpo anti-CD20 para su uso en un método de tratamiento de un sujeto humano que tiene linfoma, en donde el método comprende administrar el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 al sujeto durante por lo menos dos ciclos distintos de cuatro semanas cada uno,

el primer ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de cebado de anticuerpo anti-CD47 a 1 mg de anticuerpo por kg de peso corporal en el momento 0 (T0), (2) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez a la semana comenzando una semana después del T0 con una dosis de carga adicional (opcional) de por lo menos 30 mg/kg el día 11 (semana 2), y (3) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-D20 una vez a la semana; y

el segundo ciclo comprendiendo (1) administrar una dosis de por lo menos 30 mg de anticuerpo anti-CD47 por kg de peso corporal una vez cada dos semanas, y (2) administrar una dosis de 375 mg/m2 de anticuerpo anti-CD20 una vez cada cuatro semanas;

en donde el anticuerpo anti-CD47 es Hu5F9-G4, que tiene la secuencia de cadena pesada expuesta en la SEQ ID NO: 1 y la secuencia de cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 2; y en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab.

4. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de las reivindicaciones 1-3, en donde el segundo ciclo se repite como uno o más ciclos adicionales sin límite o hasta que se reduzca o se pierda un beneficio clínico; opcionalmente, cuando se alcanza y comenzando en el Ciclo 6 y posteriores, se administra al sujeto anticuerpo anti-CD20 a una dosis de 375 mg/m2 una vez cada ocho semanas; opcionalmente se administran al sujeto anticuerpo anti-CD47 y anticuerpo anti-CD20 hasta que el sujeto pierde un beneficio clínico.

5. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el sujeto tiene una recaída o es refractario a por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de 10 líneas anteriores de terapia contra el cáncer, opcionalmente en donde el sujeto es refractario a rituximab.

6. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de la reivindicación 5, en donde el estado refractario de rituximab es: (a) falta de respuesta o progresión durante cualquier régimen anterior que contuviese rituximab, o progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab, o

(b) falta de respuesta o progresión durante el último régimen anterior que contenía rituximab, o progresión en el plazo de los 6 meses posteriores a la última dosis de rituximab.

7. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el linfoma es linfoma no Hodgkin (NHL), opcionalmente en donde el NHL es: (a) linfoma indolente, como linfoma folicular (FL) o linfoma de zona marginal, o (b) linfoma difuso de células B grandes (DLBCL).

8. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el linfoma es DLBCL, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal, linfoma de células del manto, macroglobulinemia de Waldenstrom/linfoma linfoplasmacítico, linfoma primario de células B del mediastino, linfoma de Burkitt, linfoma de células B linfoma no clasificado, o enfermedad linfoproliferativa postrasplante (PTLD), opcionalmente en donde el linfoma se clasifica en base a la histopatología, citometría de flujo, clasificación molecular, uno o más ensayos equivalentes, o una combinación de los mismos.

9. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el linfoma es un linfoma de doble golpe o un linfoma con reordenamiento myc.

10. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el sujeto tiene: (a) linfoma folicular (FL) y ha recibido por lo menos dos terapias sistémicas previas,

(b) linfoma folicular (FL) y ha recaído después de, o es refractario a, un régimen que contiene rituximab, (c) linfoma de células B grandes en recaída o refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica, (d) linfoma de células B grandes de novo o transformado refractario a la terapia de primera línea, o en recaída o refractario a regímenes de rescate de segunda línea o trasplante autólogo de células hematopoyéticas, o (e) linfoma de células B grandes y ha recaído después, o es refractario después de dos o más líneas de terapia sistémica incluyendo un régimen que contiene rituximab.

11. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde:

(a) el anticuerpo anti-CD47 y el anticuerpo anti-CD20 se administran concurrente o secuencialmente, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-CD20 se administra antes que el anticuerpo anti-CD47, y/o

(b) el anticuerpo anti-CD47 se formula en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-CD47 se administra por vía intravenosa, y/o

(c) el anticuerpo anti-CD20 se formula en una composición farmacéutica con un excipiente farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-CD20 se administra por vía intravenosa, y/o

(d) uno o ambos anticuerpos son administrados por un profesional médico, opcionalmente un médico, y/o (e) uno o ambos anticuerpos son administrados por el sujeto.

12. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la dosis de cebado se administra al sujeto durante aproximadamente 3 horas.

13. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además por lo menos un ciclo adicional, opcionalmente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más de 20 ciclos adicionales, opcionalmente en donde el régimen de dosificación del por lo menos un ciclo adicional es el mismo que el segundo ciclo, opcionalmente en donde la porción de anticuerpo anti-CD20 del régimen de dosificación se interrumpe después de completar 6 ciclos en total.

14. El anticuerpo o anticuerpos para el uso de la reivindicación 13, en donde el por lo menos un ciclo adicional tiene una duración de 4 semanas.