ES2900048T3

ES2900048T3 - Nueva sal de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, su preparación y formulaciones que la contienen

Info

Publication number: ES2900048T3
Application number: ES18732820T
Authority: ES
Inventors: Massimo Zampieri; Marina Caldarelli; Ilaria Candiani; Matteo D'anello; Germano D'arasmo
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2017-06-29
Filing date: 2018-06-28
Publication date: 2022-03-15
Anticipated expiration: 2038-06-28
Also published as: US11160806B2; CL2019003848A1; KR20200020905A; CN110896636B; EA039764B1; IL271628B1; BR112019027924A2; IL271628A; AR112040A1; UY37778A; TWI750393B; CN110896636A; KR102609333B1; US20220016122A1; AU2018293729A1; JP2020525477A; AU2018293729B2; AU2018293729B9; EP3645535B1; CA3068357A1

Abstract

Fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil)amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H- pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida de fórmula (II): **(Ver fórmula)**

Description

DESCRIPCIÓN

Nueva sal de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, su preparación y formulaciones que la contienen

La presente invención se refiere a una nueva sal de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida de fórmula (I):

a su proceso de preparación y también a las composiciones farmacéuticas que la contienen.

N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil)amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h] quinazolin-3-carboxamida tiene propiedades farmacológicas muy valiosas en el campo de la oncología. De hecho, se ha demostrado que N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida tiene la capacidad de inhibir MPS1 (Huso monopolar 1) cinasa, también conocida como TTK (tirosina y serina/treonina cinasa). Esta capacidad confiere a la molécula beneficio terapéutico en el tratamiento de varios cánceres diversos, trastornos de proliferación celular, infecciones víricas, trastornos autoinmunes y neurodegenerativos. Entre los cánceres previstos para tratamiento se pueden mencionar, sin que ello implique ninguna limitación, carcinoma tal como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluidas las leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluido fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluido astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluidos melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer folicular de tiroides y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobreexpresan componentes de puntos de control mitóticos como MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1, BUB3 y otros.

Entre los trastornos proliferativos celulares previstos para el tratamiento se pueden mencionar, sin que ello implique ninguna limitación, hiperplasia benigna de próstata, poliposis adenomatosa familiar, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.

La preparación y el uso terapéutico de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida se ha descrito, por ejemplo, en la memoria descriptiva de la patente europea EP2303891.

En vista del valor farmacéutico de este compuesto es importante ser capaz de obtener el compuesto activo en excelentes rendimientos, con alta pureza y con excelente reproducibilidad. Además, teniendo en cuenta la vía de administración intravenosa, también es crucial que tenga muy buenas propiedades de solubilidad. Se descubrió rápidamente que la base descrita en la técnica anterior presentaba problemas de purificación que tenían como resultado una pureza no óptima y presentaba también escasa solubilidad. Después de numerosos estudios de investigación, fue posible identificar una nueva sal que combina varias ventajas, especialmente en lo que respecta a la purificación, a la reproducibilidad del proceso de obtención y al rendimiento, pero también inesperadamente con la ventaja de una mejora muy significativa de la solubilidad del principio activo. Además, aunque es mucho más soluble en agua, esta nueva sal no presenta mayor higroscopicidad que la base libre. En consecuencia, esta nueva sal tiene todas las cualidades esenciales para su uso como medicamento, tanto desde el punto de vista fisicoquímico como farmacocinético.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a una nueva sal de /V-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, más especialmente fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil)amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida de fórmula (II):

Esta nueva sal tiene las siguientes ventajas:

- un proceso simple y reproducible para su obtención con excelente rendimiento;

- una alta pureza químicay baja higroscopicidad;

- una mayor solubilidad tanto en agua como en suero fisiológico, por lo que es de gran interés para la administración intravenosa.

La invención se refiere también a un proceso para la obtención de fosfato de /V-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida.

Por ejemplo, se puede partir del material de partida 8-[(4-bromo-2-metoxifenil)amino]-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxilato de etilo, como se obtiene en el documento EP 2303891, que se hace reaccionar con 2,6-dietilanilina en presencia de una basefuerte para rendir 8-[(4-bromo-2-metoxifenil)amino]-N-(2,6-dietilfenil)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, que luego se hace reaccionar con N,N-dimetilpiperidin-4-amina para rendir el compuesto de fórmula (I) que luego se mezcla con 1 a 2 equivalentes de una solución de H³PO⁴para rendir fosfato de N- (2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida de fórmula (II).

El compuesto de fórmula (II) según la invención tiene una buena estabilidad a lo largo del tiempo bajo condiciones desnaturalizantes (40°C / 75% de humedad relativa (HR)):

Se ha establecido que la nueva sal de la invención tenía también propiedades de solubilidad mejoradas:

- en un ensayo preliminar, la formación in situ de sal a partir de la base amorfa a temperatura ambiente indicó que la sal de fosfato tenía la capacidad de mejorar la solubilidad al menos 25 veces más que la sal de clorhidrato y al menos 24000 veces más que la base libre:

- investigaciones posteriores con la forma I cristalina de la sal de fosfato de fórmula (II) indicaron una solubilidad a temperatura ambiente de al menos 130 mg/ml expresada como base libre, tanto en agua como en NaCl 0,9%:

Durante el cribado de la sal se identificó que la sal de fosfato mejoraba significativamente la solubilidad del fármaco mientras muestra una baja propensión a la higroscopicidad, como lo demuestra el análisis por Sorción Dinámica de Vapor a continuación:

En una alternativa ventajosa, la última etapa del proceso usado para obtener el compuesto de fórmula (II) puede llevarse a cabo en un solvente orgánico, y más específicamente un solvente polar como por ejemplo THF (tetrahidrofurano), EtOH, MeOH, (1- o 2-) propanol, (1- o 2-) butanol, terc-butanol, 2-metoxietanol, dioxano, acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetonitrilo, acetona, MTBE (metiltercbutiléter), MIBK (metilisobutilcetona), DMSO (dimetilsulfóxido) y mezclas de estos.

En ese caso, el compuesto de fórmula (II) obtenido se caracteriza por la forma polimórfica denominada forma I.

Esta nueva forma I se caracteriza por los siguientes ángulos de Bragg 2-theta (expresados en °± 0,2) obtenidos del difractograma de rayos X de polvo: 2,76, 8,10, 10,79, 13,49, 16,13, 17,37, 17,62, 19,77, 21,94, 24,18, 24,66.

En otra alternativa ventajosa, la última etapa del proceso usado para obtener el compuesto de fórmula (II) se lleva a cabo en agua dando lugar a una nueva forma polimórfica hidratada denominada forma II.

Esta nueva forma II se caracteriza por los siguientes ángulos de Bragg 2-theta (expresados en °± 0,2) obtenidos del difractograma de rayos X de polvo: 9,43, 9,86, 12,23, 13,70, 14,81, 18,01, 19,78, 20,73, 24,55, 24,82, 26,81.

La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que comprenden como ingrediente activo el compuesto de fórmula (II) según la invención, junto con uno o varios excipientes apropiados inertes, no tóxicos. Entre las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden mencionar más especialmente aquellas que son adecuadas para la administración oral, parenteral (intravenosa o subcutánea) o nasal, comprimidos o grageas, gránulos, comprimidos sublinguales, cápsulas, pastillas, supositorios, cremas, ungüentos, geles dérmicos, preparaciones inyectables, suspensiones bebibles y gomas de mascar.

Las formas farmacéuticas que comprenden el compuesto de fórmula (II) según la invención, se utilizarán en el tratamiento de cánceres, trastornos de proliferación celular, infecciones víricas, trastornos autoinmunes y neurodegenerativos. Entre los cánceres previstos para tratamiento se pueden mencionar, sin que ello implique limitación alguna, carcinoma como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer de tiroides folicular y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobre-expresan componentes del punto de control mitótico como MPS1, MAD2, MAD1, Bu B1, BUBR1, BUB3 y otros.

Entre los trastornos proliferativos celulares previstos para el tratamiento se pueden mencionar, sin que ello implique limitación alguna, hiperplasia benigna de próstata, poliposis adenomatosa familiar, neurofibromatosis, psoriasis, proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.

La dosis útil se puede variar según la naturaleza y gravedad del trastorno, la vía de administración y la edad y el peso del paciente. La dosis varía de 1 mg a 1 g al día, en términos del equivalente de base libre, en una o varias administraciones.

Breve descripción de las Figuras:

La Figura 1 describe el diagrama de difracción de rayos X de la forma amorfa de la base libre W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h] quinazolin-3-carboxamida.

La Figura 2 describe el diagrama de difracción de rayos X de la forma I del fosfato de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida. La Figura 3 describe el diagrama DSC de la forma I del fosfato de A/-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida.

La Figura 4 describe el diagrama de difracción de rayos X de la forma II del fosfato de A/-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida. La Figura 5 describe el diagrama DSC de la forma II del fosfato de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida.

Los ejemplos siguientes ilustran la invención pero no la limitan de ninguna manera.

Ejemplo 1: Fosfato de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, Forma I

Etapa A : 8-([4-Bromo-2-metoxifenil}amino)-W-(2,6-dietilfenil)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida

A una solución que contiene 2,32 kg de 8-[(4-bromo-2-metoxifenil)amino]-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida en 34,8 L de THF se le añaden 0,877 L de 2,6-dietilanilina. Después se añaden 15,2 L de LiHMDS gota a gota a -10°C. La reacción se agita durante 1,5 horas y se añade LiHMDS hasta que se completa. Luego se añaden 30,17 L de una solución de NaCl y la fase orgánica se lava dos veces con solución de NaCl y se evapora. Después, una solución de agua/acetona se añade al residuo, y la solución se calienta a reflujo, luego se enfría a 5°C. A continuación, el precipitado se filtra para rendir el producto del título como un polvo amarillo claro. Punto de fusión: 218-220°C

EM calc.: 561,1608; EM encontrado: 561,1591

Etapa B: Fosfato de W-(2,6-Dietilfenil)-8-(14-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il}-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, Forma I

0,55 kg de 8-[(4-bromo-2-metoxifenil)amino]-A/-(2,6-dietilfenil)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida obtenida en la etapa A se cargan en un reactor con 6 L de THF. A la mezcla agitada, se añaden 3,3 g de acetato de paladio y 13,7 g de RuPhos en 3,9 L de THF a temperatura ambiente bajo nitrógeno.

Se añaden 0,15 kg de 4-dimetilamino-piperidina a la mezcla de reacción con 0,55 L de THF, la temperatura interna aumenta a 50°C y se añaden gota a gota 3,9 L de LiHMDS 1 M en THF.

La mezcla de reacción se agita a 50°C durante 4,5 horas y luego se enfría a temperatura ambiente. Se añaden 12 L de agua; se separan las fases y la acuosa se extrae una vez con 7 L de MTBE.

Las fases orgánicas se lavan con salmuera y luego se extraen dos veces con una solución acuosa de ácido cítrico al 10%. Las fases de ácido cítrico se combinan y se añaden con una mezcla 2/1 de MTBE/THF. La mezcla bifásica se enfría a 10°C y se añade NaOH acuoso al 35% hasta pH 9. La fase orgánica se separa y se trata con resina SPM32 a reflujo. La resina se separa por filtración lavando con una mezcla 2/1 de MTBE/THF y el disolvente se evapora parcialmente. Se añade etanol absoluto y se evapora; se repite el procedimiento y luego se añaden 12 L de etanol absoluto. La solución obtenida se calienta a 60°C y se añade gota a gota una solución de 67 mL de H³PO⁴al 85% mezclada con 0,6 L de EtOH absoluto. Se mantiene una solución hasta aproximadamente la mitad de la adición y luego se forma un precipitado. La suspensión se calienta a reflujo (78,0°C) durante 18 minutos y luego se enfría a 23°C en 1 hora y 25 minutos. La suspensión se sigue enfriando a 5°C durante 1 hora y se mantiene a 5°C durante 22,5 horas. El compuesto del título se aísla por filtración; la torta húmeda se lava con 2,5 L de EtOH absoluto y se seca al vacío a 50°C hasta peso constante. El compuesto del título se obtiene en forma de un polvo amarillo.

Punto de fusión 220-223°C con descomposición.

Ejemplo 2: Fosfato de W-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qumazolm-3-carboxam¡da, Forma I

Etapa A: W-(2,6-D¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qu¡nazol¡n-3-carboxam¡da (base l¡bre)

Se añade una solución que contiene 213 mg de Pd(OAc)²y 897 mg de RuPhos en 177 ml de THF a 21,53 g de 8-[(4-bromo-2-metoxifenil)amino]-A/-(2,6-dietilfenil)-1-metil-4,5-dihidro-1H-1-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida obtenida en la Etapa A del Ejemplo 1 en 250 mL de THF, a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La mezcla se calienta a 40°C antes de la adición secuencial de 152 mL de LiHMDS 1M en THF y 10,7 mL de N,N-dimetilpiperidin-4-amina. La reacción se mantiene a 40°C durante 2,5 horas y luego se enfría a temperatura ambiente. Luego se agregan 300 mL de salmuera y la fase orgánica separada se lava con 200 mL de salmuera.

La fase orgánica se trata con 2,8 g de carbón activado; la mezcla se filtra en un lecho de dicalite, se evapora a sequedad y se purifica mediante cromatografía en gel de sílice eluyendo con DCM/EtOH/NH³95:5:0,5. Las fracciones agrupadas se evaporan hasta obtenerse un residuo, se disuelven en EtOAc, se lavan cinco veces con una solución saturada de bicarbonato de sodio y con agua, y luego se evaporan hasta sequedad. El producto se seca en estufa a 50°C durante 7 horas y a 40°C durante 64 horas. La base libre se obtiene como un polvo amarillo amorfo y se caracteriza por su diagrama de difracción de rayos X (ver Figura 1).

Etapa B: Fosfato de W-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo [4,3-h]qu¡nazol¡n-3-carboxam¡da, Forma I

3,50 g de base libre amorfa de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida obtenida en la Etapa A, en 105 mL de etanol absoluto se calienta a 60°C bajo nitrógeno. A esta mezcla, se añadió gota a gota una solución recién preparada de 0,682 g de ácido fosfórico al 85% en 17,5 ml de etanol durante un período de 20 minutos con agitación eficaz. La suspensión resultante se calentó a reflujo (temperatura del baño 82-84°C) durante 5 minutos, luego se dejó enfriar espontáneamente a temperatura ambiente durante un período de 2 horas y finalmente se envejeció a 4°C durante 16 horas. El sólido se aisló por filtración, se lavó con 17,5 ml de etanol en el filtro y se secó a 50°C al vacío durante 10 horas rindiendo el compuesto del título en forma de un polvo amarillo.

Punto de fusión 220-223°C con descomposición.

El producto del título fosfato de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, Forma I de los Ejemplos 1 y 2 se caracteriza por su diagrama de difracción de rayos X en polvo llevado a cabo usando un equipo Thermo/ARL XTRA, y se muestra en la Figura 2.

Este instrumento se basa en la geometría de Bragg-Brentano y está equipado con un generador de Cu Ka que funciona a 45KV/40mA (1,8 kW de potencia) y un detector de estado sólido refrigerado por Peltier. El rango espectral fue de 2 a 40° 20 con una adquisición de exploración en continuo a una velocidad de 1,20° 20 / min. Las muestras se cargaron en placas de silicio de fondo bajo. El polvo se aplanó dentro del soporte presionando suavemente con un portaobjetos de vidrio de microscopio u otras herramientas adecuadas.

Los resultados se expresan en términos de distancia interplanar d, ángulo de Bragg 2 theta (expresado en °±0,2) e intensidad relativa (expresada como un porcentaje relativo a la línea más intensa):

continuación

Los ángulos de Bragg 2-theta (expresados en °±0,2) característicos del diagrama de difracción de rayos X en polvo son los siguientes: 2,76, 8,10, 10,79, 13,49, 16,13, 17,37, 17,62, 19,77, 21,94, 24,18, 24,66.

El compuesto del título de los Ejemplos 1 y 2 también se caracterizó por su diagrama de DSC, realizado con un Perkin-Elmer DSC-7, utilizando cápsulas de DSC de aluminio ventiladas de 50 j l cargadas con aproximadamente 2-4 mg de muestra. Se colocó un disco de aluminio sobre el polvo obteniendo una fina capa y mejorando el intercambio térmico. La referencia fue una cápsula vacía del mismo tipo. Se utilizaron indio, estaño y plomo (materiales de referencia certificados para LGC) para evaluar la calibración del aparato con respecto a la escala de temperatura y la respuesta de entalpia. Las muestras se analizaron bajo flujo de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 1o°C/min. Las temperaturas de inicio y pico (°C) se consideraron generalmente parámetros de interés.

El diagrama obtenido se muestra en la Figura 3 con un inicio de fusión de 229°C.

Ejemplo 3: Fosfato de W-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡metMammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-dihidro-1H-p¡razolo[4,3-h]qumazolm-3-carboxam¡da, tetrah¡drato, Forma II

Se cargan 304 mg del compuesto obtenido en la Etapa A del Ejemplo 2 en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 25 mL y se añaden 12 mL de agua a temperatura ambiente. La suspensión que se obtiene se agita mientras se calienta a 61-62°C; el pH es aproximadamente 5,3. Después de 1 hora de agitación, se agregan 35,9 DL de H3PO4 más 5 mL de agua y casi instantáneamente se disuelve todo y el pH se reduce a 3,1. La solución se calienta a 70°C durante 1 hora para asegurar una disolución completa, pH = 3,2. Se retira el baño calefactor y se deja enfriar el recipiente a temperatura ambiente, luego se agita durante 2 horas. El recipiente se enfría a 5°C dejándolo en la nevera durante la noche, lo que conduce a la aparición de un precipitado amarillo en la solución. El sólido se dejó sedimentar dentro de la mezcla a temperatura ambiente y se eliminó la solución sobrenadante. El sólido restante se secó en un horno a 50°C al vacío durante 18 h. Se obtuvo el compuesto del título como un sólido amarillo.

Endotermia de deshidratación amplia: 35-125°C

Exoterma de cristalización (Tinicio): 190°C

El producto del título se caracteriza por su diagrama de difracción de polvo, llevado a cabo usando un equipo Thermo/ ARL XTRA. Este instrumento se basa en la geometría de Bragg-Brentano y está equipado con un generador de Cu Ka que trabaja a 45KV / 40mA (1,8 kW de potencia) y un detector de estado sólido refrigerado por Peltier. El rango espectral fue de 2 a 40° 20 con una adquisición de exploración en continuo a una velocidad de 1,20° 20/min que permite identificar los siguientes parámetros del cristal:

- parámetros de la celda unitaria: a = 13,866(2) A; b = 18,824(2) A; c = 7,2575(7) A; alfa = 92,014(8)°; beta = 91,813(7)°; gamma = 107,294(8)°

- grupo espacial: P-1 (2) (triclínico)

El producto del título también se caracterizó por su diagrama de difracción de rayos X en polvo que se muestra en la Figura 4 llevado a cabo usando un equipo Thermo/ARL XTRA. Este instrumento se basa en la geometría de Bragg Brentano y está equipado con un generador de Cu Ka que funciona a 45KV / 40mA (1,8 kW de potencia) y un detector de estado sólido refrigerado por Peltier. El rango espectral fue de 2 a 40° 20 con una adquisición de exploración en continuo a una velocidad de 1,20° 20 / min. Las muestras se cargaron en placas de silicio de fondo bajo. El polvo se aplanó dentro del soporte presionando suavemente con un portaobjetos de vidrio de microscopio u otras herramientas adecuadas.

Ángulos de Bragg 2-theta (expresados en °±0,2) característicos del diagrama de difracción de rayos X en polvo: 9,43, 9,86, 12,23, 13,70, 14,81, 18,01, 19,78, 20,73, 24,55, 24,82, 26,81.

El compuesto del Ejemplo 3 también se caracterizó por su diagrama de DSC, realizado con un Perkin-Elmer DSC-7, utilizando cápsulas de DSC de aluminio ventiladas de 50 □! cargadas con aproximadamente 2-4 mg de muestra. Se colocó un disco de aluminio sobre el polvo obteniendo una fina capa y mejorando el intercambio térmico. La referencia fue una cápsula vacía del mismo tipo. Se utilizaron indio, estaño y plomo (materiales de referencia certificados para LGC) para evaluar la calibración del aparato con respecto a la escala de temperatura y la respuesta de entalpia. Las muestras se analizaron bajo flujo de nitrógeno a una velocidad de calentamiento de 10°C/min. Las temperaturas de inicio y pico (°C) se consideraron generalmente parámetros de interés.

El diagrama obtenido se muestra en la Figura 5.

Ejemplo 4: Pureza y estabilidad del fosfato de W-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qumazolm-3-carboxam¡da Forma I bajo cond¡c¡ones a largo plazo

Se ha estudiado la pureza y la estabilidad del fosfato de W-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida Forma I bajo condiciones a largo plazo de la siguiente manera:

Los resultados muestran que el fosfato de A/-(2,6-d¡et¡lfen¡l)-8-({4-[4-(d¡met¡lam¡no)p¡per¡d¡n-1-¡l]-2-metox¡fen¡l}am¡no)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qu¡nazol¡n-3-carboxam¡da Forma I es estable al menos hasta 24 meses.

Ejemplo 5: Solubilidad de fosfato de W-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡l]-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qumazolm-3-carboxam¡da Forma I

Cond¡c¡ones de prueba: se suspend¡eron aprox¡madamente 730 mg del compuesto de prueba en 4 ml de WFI (agua para ¡nyecc¡ón) o soluc¡ón sal¡na (NaCl al 0,9%) para probar una solub¡l¡dad objet¡vo de 150 mg/ml como base l¡bre. Las suspens¡ones se ag¡taron magnét¡camente durante 24 horas a temperatura amb¡ente y se proteg¡eron de la luz en v¡al de v¡dr¡o ámbar. Las concentrac¡ones de los compuestos de prueba se determ¡naron después de 1 y 24 horas. Todas las cant¡dades de suspens¡ón/soluc¡ón extraídas se centr¡fugaron y las soluc¡ones super¡ores se anal¡zaron med¡ante HPLC después de f¡ltrac¡ón y d¡luc¡ón.

Los resultados obten¡dos se resumen en la tabla s¡gu¡ente:

Ejemplo 6: Med¡c¡ón de la h¡groscop¡c¡dad del fosfato de N-(2,6-d¡et¡lfeml)-8-({4-[4-(d¡met¡lammo)p¡per¡dm-1-¡lj-2-metox¡feml}ammo)-1-met¡l-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-h]qumazolm-3-carboxam¡da, Forma I

El compuesto a ensayar se somete al ensayo de h¡groscop¡c¡dad med¡ante un aparato de Sorc¡ón D¡nám¡ca de Vapor (DVS 1000 - S¡stemas de med¡c¡ón de superf¡c¡es).

El aparato se def¡ne brevemente como una "m¡crobalanza de atmósfera controlada" donde la muestra pesada se expone a var¡ac¡ones de la humedad relat¡va (HR) a una temperatura constante y controlada. Se anal¡zó una cant¡dad del producto pesada exactamente (generalmente 5-10 mg).

Ejemplo 7: Composiciones farmacéuticas

A. Comprimidos

1000 comprimidos que contienen cada uno una dosis de 35 mg del Ejemplo 1 100 g Almidón de trigo 20 g Almidón de maíz 20 g Lactosa 30 g Estearato de magnesio 2 g Sílice 1 g Hidroxipropilcelulosa 2 g

B. Viales liofilizados

Se prepara una solución a granel que contiene el compuesto del Ejemplo 1, manitol y Tween 80, luego se liofiliza para obtener viales que contienen cada uno 35 mg del compuesto del Ejemplo 1, 300 mg de manitol y 5 mg de Tween 80.

El liofilizado se resuspende en 10 ml de agua para inyección.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil)amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida de fórmula (II):

2. Compuesto según la reivindicación 1, obtenido como forma I cristalina caracterizado por su difractograma de rayos X de polvo mediante los siguientes ángulos de Bragg 2-theta (expresados en términos de °± 0,2) 2,76, 8,10, 10,79, 13,49, 16,13, 17,37, 17,62, 19,77, 21,94, 24,18, 24,66.

3. Proceso para la obtención del compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 1 o 2, comprendiendo dicho proceso la reacción del material de partida N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, con 1 a 2 equivalentes de una solución de H³PO⁴en un disolvente orgánico.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que el disolvente orgánico es EtOH.

5. Compuesto según la reivindicación 1, obtenido como forma cristalina II caracterizado por su difractograma de rayos X de polvo mediante los ángulos de Bragg 2 theta (expresados en términos de °± 0,2) 9,43, 9,86, 12,23, 13,70, 14,81, 18,01, 19,78, 20,73, 24,55, 24,82, 26,81.

6. Proceso para la obtención del compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 1 o 5, cuyo proceso comprende hacer reaccionar el material de partida N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida, con 1 a 2 equivalentes de una solución de H³PO⁴en agua.

7. Composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (II) según las reivindicaciones 1, 2 o 5 en combinación con uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables.

8. Composición farmacéutica según la reivindicación 7, en la que el compuesto de fórmula (II) es fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida Forma I.

9. Composición farmacéutica según la reivindicación 7, en la que el compuesto de fórmula (II) es fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida Forma II.

10. Composiciones farmacéuticas según las reivindicaciones 7 a 9 para su uso en el tratamiento de trastornos proliferativos celulares, infecciones víricas, trastornos autoinmunes y neurodegenerativos.

11. Composiciones farmacéuticas según las reivindicaciones 7 a 9 para su uso en el tratamiento de carcinomas tales como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer de tiroides folicular y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobreexpresan componentes del punto de control mitótico como MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1, b Ub 3 y otros; hiperplasia benigna de próstata; poliposis por adenomatosis familiar; neurofibromatosis; soriasis; proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis; fibrosis pulmonar; artritis; glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.

12. Uso de una composición farmacéutica según las reivindicaciones 7 a 9 en la fabricación de medicamentos para su uso en el tratamiento de trastornos proliferativos celulares, infecciones víricas, trastornos autoinmunes y neurodegenerativos.

13. Uso de una composición farmacéutica según las reivindicaciones 7 a 9 en la fabricación de medicamentos para su uso en el tratamiento de carcinomas tales como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer de tiroides folicular y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobre-expresan componentes del punto de control mitótico como MPS1, MAD2, MAD1, Bu B1, BUBR1, BUB3 y otros; hiperplasia benigna de próstata; poliposis por adenomatosis familiar; neurofibromatosis; soriasis; proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis; fibrosis pulmonar; artritis; glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.

14. Una combinación de un compuesto de fórmula (II) según la reivindicación 1 con un agente anticanceroso seleccionado entre agentes genotóxicos, venenos mitóticos, antimetabolitos, inhibidores del proteasoma e inhibidores de la cinasa.

15. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el compuesto de fórmula (II) es fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida Forma I.

16. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el compuesto de fórmula (II) es fosfato de N-(2,6-dietilfenil)-8-({4-[4-(dimetilamino)piperidin-1-il]-2-metoxifenil}amino)-1-metil-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-h]quinazolin-3-carboxamida Forma II.

17. Una combinación de acuerdo con las reivindicaciones 14 a 16 para su uso en el tratamiento de cánceres.

18. Una combinación de acuerdo con las reivindicaciones 14 a 16 para su uso en el tratamiento de carcinomas tales como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer de tiroides folicular y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobre-expresan componentes del punto de control mitótico como MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, b Ub R1, BUB3 y otros; hiperplasia benigna de próstata; poliposis por adenomatosis familiar; neurofibromatosis; soriasis; proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis; fibrosis pulmonar; artritis; glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.

19. Uso de una combinación según las reivindicaciones 14 a 16 en la fabricación de medicamentos para su uso en el tratamiento de cánceres.

20. Uso de una combinación según las reivindicaciones 14 a 16 en la fabricación de medicamentos para su uso en el tratamiento de carcinoma como de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, incluyendo cáncer de pulmón de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides, próstata y piel, incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluyendo leucemias mielógenas agudas y crónicas, síndrome mielodisplásico y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimal, incluyendo fibrosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xeroderma pigmentoso, queratoxantoma, cáncer de tiroides folicular y sarcoma de Kaposi, mesotelioma, tumores altamente aneuploides y tumores que sobreexpresan componentes del punto de control mitótico como MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1, BUB3 y otros; hiperplasia benigna de próstata; poliposis por adenomatosis familiar; neurofibromatosis; soriasis; proliferación de células lisas vasculares asociada con aterosclerosis; fibrosis pulmonar; artritis; glomerulonefritis y estenosis y reestenosis posquirúrgicas.