KR102609333B1

KR102609333B1 - Ｎ-（2,6-디에틸페닐）-8-（｛4-〔4-（디메틸아미노）피페리딘-1-일〕-2-메톡시페닐｝아미노）-1-메틸-4,5-디하이드로-1ｈ-피라졸로〔4,3-ｈ〕퀴나졸린-3-카복사미드의 신규한 염, 이의 제조, 및 이를 함유하는 제형

Info

Publication number: KR102609333B1
Application number: KR1020207002339A
Authority: KR
Inventors: 마시모 잠피에리; 마리나 칼다렐리; 일라리아 칸디아니; 마떼오 디'안넬로; 게르마노 디'아라스모
Original assignee: 네르비아노 메디칼 사이언시스 에스.알.엘.
Priority date: 2017-06-29
Filing date: 2018-06-28
Publication date: 2023-12-01
Also published as: SG11201912651WA; PL3645535T3; KR20200020905A; CL2019003848A1; IL271628B2; EP3645535A1; WO2019002454A1; CN110896636A; US20220016122A1; US11160806B2; IL271628A; AR112040A1; EP3645535B1; BR112019027924A2; CA3068357A1; TWI750393B; CA3068357C; AU2018293729B2; TW201904971A; MA49498A

Abstract

하기 화학식 (II)의 신규한 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 약제:

Description

Ｎ-（2,6-디에틸페닐）-8-（｛4-〔4-（디메틸아미노）피페리딘-1-일〕-2-메톡시페닐｝아미노）-1-메틸-4,5-디하이드로-1Ｈ-피라졸로〔4,3-Ｈ〕퀴나졸린-3-카복사미드의 신규한 염, 이의 제조, 및 이를 함유하는 제형

본 발명은 하기 화학식 (I)의 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸 아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 신규한 염, 이의 제조 방법 및 또한 이를 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다:

N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드는 종양학 분야에서 매우 가치 있는 약리학적 특성을 갖는다. 실제로, N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드는 TTK(티로신 및 세린/트레오닌 키나제)로도 알려진 MPS1(단극성 스핀들 1) 키나제를 억제하는 능력을 갖는 것으로 밝혀졌다. 이러한 능력은 여러 다양한 암, 세포 증식성 장애, 바이러스 감염, 자가면역 및 신경퇴행성 장애의 치료에서 분자 치료학적 이점을 준다. 치료를 위해 구상되는 암들 중에서, 임의의 제한을 의미하지 않으면서, 암종, 예컨대, 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 예컨대, 소세포 폐암, 식도, 담당, 난소, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상선, 전립선, 및 피부, 예컨대, 편평 세포 암종; 림프계의 조혈 종양, 예컨대, 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocitic leukemia), 급성 림프아구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia), B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 모발 세포 림프종(hairy cell lymphoma) 및 버킷 림프종(Burkett's lymphoma); 골수 계통의 조혈 종양, 예컨대, 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndrome) 및 전골수구성 백혈병(promyelocytic leukemia); 간엽성 기원의 종양, 예컨대, 섬유육종(fibrosarcoma) 및 횡문근육종(rhabdomyosarcoma); 중추 및 말초 신경계의 종양, 예컨대, 성상세포종 신경아세포종(astrocytoma neuroblastoma), 신경교종(glioma) 및 신경초종(schwannomas); 기타 종양, 예컨대, 흑색종(melanoma), 반종(seminoma), 기형암종(teratocarcinoma), 골육종(osteosarcoma), 색소성 건피증(xeroderma pigmentosum), 각막암종(keratoxanthoma), 갑상선 난포암(thyroid follicular cancer) 및 카포시 육종 악성중피종(Kaposi's sarcoma mesothelioma), 고도 이수성 종양(highly aneuploid tumor) 및 MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1, BUB3 및 등과 같은 유사분열 체크포인트 성분을 과발현하는 종양이 언급될 수 있다.

치료를 위해 구상되는 세포 증식성 장애 중에서는, 임의의 제한을 의미하지 않으면서, 양성 전립선 비대증(benign prostate hyperplasia), 가족성 선종성 용종증(familial adenomatosis polyposis), 신경섬유종증(neurofibromatosis), 건선(psoriasis), 죽상 동맥 경화증(atherosclerosis)과 관련된 혈관 평활 세포 증식, 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 관절염(arthritis), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 수술후 협착증 및 재협착증이 언급될 수 있다.

N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸 아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드의 제조 및 치료학적 용도는, 예를 들어, 내용이 참조로 포함되는 유럽 특허 명세서 EP2303891호에 기재되어 있다.

이러한 화합물의 약제학적 가치의 관점에서, 활성 화합물을 고순도 및 탁월한 재현성과 함께 탁월한 수율로 수득할 수 있는 것이 중요하다. 더욱이, 정맥내 투여 방식을 고려할 때, 매우 우수한 용해도 특성을 갖는 것이 또한 중요하다. 종래 기술에 기술된 염기는 최적이 아닌 순도를 초래하는 정제 문제를 제기하고, 또한 불량한 용해도를 제기한 것이 비약적으로 밝혀졌다. 수많은 연구 후에, 특히 정제와 관련된 다양한 이점과 이를 수득하기 위한 공정의 재현성 및 수율이 조합될 뿐만 아니라, 예기치 않게도 활성 화합물의 용해도를 매우 유의하게 향상시키는 이점을 갖는 신규한 염을 찾을 수 있었다. 또한, 훨씬 더 수용성이지만, 이러한 신규한 염은 유리 염기보다 더 높은 흡습성을 나타내지 않는다. 따라서, 이러한 신규한 염은 물리화학적 관점과 약동학적 관점 둘 모두에서 약제로서의 이의 용도에 필수적인 품질 모두를 갖는다.

따라서, 본 발명은 하기 화학식 (II)의 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드, 더욱 특히, N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트의 신규한 염에 관한 것이다:

이러한 신규한 염은 하기 이점들을 갖는다:

- 탁월한 수율로 이를 수득하기 위한 간단하고 재현 가능한 공정;

- 높은 화학적 순도, 및 낮은 흡습성;

- 정맥내 투여로 크게 고려되는, 물과 생리학적 혈청 둘 모두에서의 증가된 용해도.

본 발명은 또한 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트를 수득하기 위한 공정에 관한 것이다.

예를 들어, 이는 EP 2303891호에서 수득되는 바와 같은 출발 물질 에틸 8-[(4-브로모-2-메톡시 페닐)아미노]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복실레이트로부터 출발할 수 있고, 이것이 강염기의 존재에서 2,6-디에틸아닐린과 반응하여 8-[(4-브로모-2-메톡시페닐)아미노]-N-(2,6-디에틸페닐)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 제공하고, 이는 이후 N,N-디메틸피페리딘-4-아민과 반응하여 화학식 (I)의 화합물을 수득하고, 이는 이후 1 내지 2당량의 H₃PO₄ 용액과 혼합되어 화학식 (II)의 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노) 피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트를 제공할 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 (II)의 화합물은 변성 조건(40℃/75% 상대 습도(RH)) 하에서 시간 경과에 따라 우수한 안정성을 갖는다:

본 발명의 신규한 염은 또한 향상된 용해도 특성을 갖는 것으로 확립되었다:

- 예비 시험에서, 실온에서 비정질 염기로부터의 인 시투(in situ) 염 형성은 포스페이트 염이 하이드로클로라이드 염보다 적어도 25배 더 크고, 유리 염기보다 적어도 24,000배 더 크게 용해도를 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 지시하였다:

- 화학식 (II)의 포스페이트 염의 결정질 형태 I으로의 추가 연구는 물과 NaCl 0.9% 둘 모두 중 유리 염기로서 표시된 적어도 130 mg/ml의 실온에서의 용해도를 지시하였다:

포스페이트 염은 염 스크리닝 동안 하기 동적 증기 흡착 분석(Dynamic Vapour Sorption analysis)에 의해 입증된 바와 같은 낮은 흡습성 경향을 가지면서 약물 물질의 용해도를 유의하게 향상시킨 것으로 확인되었다.

유리한 대안에서, 화학식 (II)의 화합물을 수득하기 위해 이용되는 공정의 마지막 단계는 유기 용매, 및 더욱 특히 극성 용매, 예컨대, THF (테트라하이드로푸란), EtOH, MeOH, (1- 또는 2-) 프로판올, (1- 또는 2-) 부탄올, 3차부탄올, 2-메톡시에탄올, 디옥산, 에틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 아세토니트릴, 아세톤, MTBE (메틸3차부틸에테르), MIBK (메틸이소부틸케톤), DMSO (디메틸설폭사이드) 및 이들의 혼합물에서 수행될 수 있다.

그러한 경우에, 수득된 화학식 (II)의 화합물은 형태 I으로 명명되는 다형태로 특징화된다.

이러한 신규한 형태 I은 X-선 분말 회절계로부터 얻어진 다음 브래그 각(Bragg's angle) 2-쎄타(°±0.2로 표시됨)에 의해 특징화된다: 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66.

또 다른 유리한 대안에서, 화학식 (II)의 화합물을 수득하기 위해 이용되는 공정의 마지막 단계는 물에서 수행되어 형태 II로 명명되는 신규한 수화된 다형태를 야기한다.

이러한 신규한 형태 II는 X-선 분말 회절계로부터 수득된 다음 브래그 각 2-쎄타(°±0.2로 표시됨)에 의해 특징화된다: 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81.

본 발명은 또한 하나 이상의 불활성이고 비-독성인 적절한 부형제와 함께 활성 성분으로서 본 발명에 따른 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물 중에서, 더욱 특히, 경구, 비경구(정맥내 또는 피하) 또는 비내 투여에 적합한 것, 정제 또는 당의정(), 과립, 설하 정제, 캡슐, 로젠지, 좌약, 크림, 연고, 피부용 젤, 주사용제, 음용 가능한 현탁액 및 츄잉 검이 언급될 수 있다.

본 발명에 따른 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 약제학적 형태는 암, 세포 증식성 장애, 바이러스 감염, 자가면역 및 신경퇴행성 장애의 치료에 사용될 것이다. 치료를 위해 구상되는 암들 중에서, 임의의 제한을 의미하지 않으면서, 암종, 예컨대, 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 예컨대, 소세포 폐암, 식도, 담당, 난소, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상선, 전립선, 및 피부, 예컨대, 편평 세포 암종; 림프계의 조혈 종양, 예컨대, 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 모발 세포 림프종 및 버킷 림프종; 골수 계통의 조혈 종양, 예컨대, 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군 및 전골수구성 백혈병; 간엽성 기원의 종양, 예컨대, 섬유육종 및 횡문근육종; 중추 및 말초 신경계의 종양, 예컨대, 성상세포종 신경아세포종, 신경교종 및 신경초종; 기타 종양, 예컨대, 흑색종, 반종, 기형암종, 골육종, 색소성 건피증, 각막암종, 갑상선 난포암 및 카포시 육종 악성중피종, 고도 이수성 종양 및 MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1, BUB3 및 등과 같은 유사분열 체크포인트 성분을 과발현하는 종양이 언급될 수 있다.

치료를 위해 구상되는 세포 증식성 장애 중에서는, 임의의 제한을 의미하지 않으면서, 양성 전립선 비대증, 가족성 선종성 용종증, 신경섬유종증, 건선, 죽상 동맥 경화증과 관련된 혈관 평활 세포 증식, 폐 섬유증, 관절염, 사구체신염 및 수술후 협착증 및 재협착증이 언급될 수 있다.

유용한 투여량은 장애의 성질 및 중증도, 투여 경로 및 환자의 나이 및 체중에 따라 다를 수 있다. 투여량은 하나 이상의 투여에서 유리 염기 당량에 대해 일일 1 mg 내지 1g으로 다르다.

도 1은 비정질 형태의 유리 염기 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드의 X-선 회절 다이어그램을 기술하는 것이다.
도 2는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트의 형태 I의 X-선 회절 다이어그램을 기술한 것이다.
도 3은 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트의 형태 I의 DSC 다이어그램을 기술한 것이다.
도 4는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트의 형태 II의 X-선 회절 다이어그램을 기술한 것이다.
도 5는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h] 퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트의 형태 II의 DSC 다이어그램을 기술한 것이다.

이하의 실시예는 본 발명의 예시하는 것이고, 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하는 것이 아니다.

실시예 1 : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 형태 I

단계 A : 8-([4-브로모-2-메톡시페닐}아미노)-N-(2,6-디에틸페닐)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드

34.8 L의 THF 중에 2.32 kg의 8-[(4-브로모-2-메톡시페닐)아미노]-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 함유하는 용액에 0.877 L의 2,6-디에틸아닐린을 첨가하였다. 이후, 15.2 L의 LiHMDS를 -10℃에서 적가하였다. 반응물을 1.5 시간 동안 교반하고, LiHMDS를 완료될 때까지 첨가하였다. 그 후에, 30.17 L의 NaCl 용액을 첨가하고, 유기 상을 NaCl 용액으로 2회 세척하고, 증발시켰다. 물/아세톤의 용액을 이후 잔류물에 첨가하고, 용액을 환류시킨 다음 5℃에서 냉각시켰다. 그 후에, 침전물을 여과하여 옅은 황색 분말로서 표제 생성물을 제공하였다.

융점: 218 내지 220℃

MS 계산치: 561.1608; MS 실측치: 561.1591

단계 B : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시 페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 형태 I

단계 A에서 수득된 0.55 kg의 8-[(4-브로모-2-메톡시페닐)아미노]-N-(2,6-디에틸페닐)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 6 L의 THF와 함께 반응기에 충전시켰다. 교반된 혼합물에, 3.9 L의 THF 중의 3.3 g의 팔라듐 아세테이트 및 13.7 g의 RuPhos를 질소 하에 실온에서 첨가하였다.

0.15 kg의 4-디메틸아미노-피페리딘을 0.55 L의 THF와 함께 반응 혼합물에 첨가하고, 내부 온도를 50℃로 증가시키고, 3.9 L의 THF 중 1M LiHMDS를 떨어뜨렸다.

반응 혼합물을 50℃에서 4.5 시간 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시켰다. 12 L의 물을 첨가하고; 상을 분리하고; 수성 상을 7 L의 MTBE로 1회 추출하였다.

유기 상을 염수로 세척한 후, 10% 시트르산 수용액으로 2회 추출하였다. 시트르산 상을 풀링하고, MTBE/THF의 2/1 혼합물을 첨가하였다. 이상 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 35% 수성 NaOH를 pH 9까지 첨가하였다. 유기 상을 분리하고, 환류에서 SPM32 수지로 처리하였다. 수지를 MTBE/THF의 2/1 혼합물로 세척하면서 여과해 내고, 용매를 부분 증발시켰다. 무수 에탄올을 첨가하고, 증발시키고; 절차를 반복한 후, 12 L의 무수 에탄올을 첨가하였다. 수득된 용액을 60℃에서 가열하고, 0.6 L의 무수 EtOH와 혼합된 67 mL의 85% H₃PO₄의 용액을 적가하였다. 용액을 대략 절반 첨가될 때까지 유지시켰고, 이후 침전물이 형성되었다. 현탁액을 환류(78.0℃)로 18분 동안 가열한 후, 23℃로 1시간 25분 이내로 냉각시켰다. 현탁액을 5℃로 1시간 이내로 더 냉각시키고, 5℃에서 22.5 시간 동안 유지시켰다. 표제 화합물을 여과에 의해 분리하고; 습윤 케이크를 2.5 L의 무수 EtOH로 세척하고, 일정한 중량이 될 때까지 진공 하에 50℃에서 건조시켰다. 표제 화합물을 황색 분말의 형태로 수득하였다.

분해시 융점 220 내지 223℃.

실시예 2 : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 형태 I

단계 A : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시 페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 (유리 염기)

177 mL의 THF 중에 213 mg의 Pd(OAc)₂ 및 897 mg의 RuPhos를 함유하는 용액을 250 mL의 THF 중의 실시예 1의 단계 A에서 수득된 21.53 g의 8-[(4-브로모-2-메톡시페닐)아미노]-N-(2,6-디에틸페닐)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드에 질소 하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 가열한 후, 152 mL의 THF 중 1M LiHMDS 및 10.7 mL의 N,N-디메틸피페리딘-4-아민을 순차적으로 첨가하였다. 반응을 40℃에서 2.5 시간 동안 유지시킨 후, 실온으로 냉각시켰다. 300 mL의 염수를 이후 첨가하고, 분리된 유기 상을 200 mL의 염수로 세척하였다.

유기 상을 2.8 g의 활성탄으로 처리하고; 혼합물을 디칼라이트(dicalite) 패드 상에서 여과하고, 증발 건조시키고, DCM/EtOH/NH₃ 95:5:0.5로 용리하는 실리카-겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 풀링된 분획을 잔류물로 증발시키고, EtOAc에 용해시키고, 소듐 바이카보네이트 포화 용액 및 물로 5회 세척한 후, 증발 건조시켰다. 생성물을 오븐에서 50℃에서 7 시간, 및 40℃에서 64 시간 동안 건조시켰다. 유리 염기를 비정질 황색 분말로서 수득하고, 이의 X-선 회절 다이어그램에 의해 특징화하였다(도 1 참조).

105 mL의 무수 에탄올 중의 단계 A에서 수득된 3.50 g의 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시 페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 비정질 유리 염기를 질소 하에 60℃로 가열하였다. 이 혼합물에 17.5 mL의 에탄올 중의 0.682 g의 85% 인산의 새로 제조된 용액을 효율적인 교반 하에 20분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 현탁액을 5분 동안 환류로 가열하고(배쓰 온도 82 내지 84℃), 이후 실온으로 2시간의 기간에 걸쳐 자연적으로 냉각되게 하고, 마지막으로 +4℃에서 16 시간 동안 에이징시켰다. 고형물을 여과에 의해 분리하고, 필터 상에서 17.5 mL의 에탄올로 세척하고, 진공 하에 +50℃에서 10시간 동안 건조시켜 황색 분말 형태의 표제 화합물을 수득하였다.

분해시 융점: 220 내지 223℃.

실시예 1 및 2의 표제 생성물 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 형태 I을 Thermo/ARL XTRA 장치를 사용하여 수행된 이의 X-선 분말 회절 다이어그램에 의해 특징화하였고, 이는 도 2에 나타나 있다.

이 기기는 브래그-브렌타노(Bragg-Brentano) 기하학적 형태를 기초로 하고, 45 KV/40 mA(1.8 kW 전력)에서 작동되는 Cu Kα 발생기 및 Peltier-냉각 고체 상태 검출기가 장착되어 있었다. 스펙트럼 범위는 1.20°2θ/min의 속도에서 연속 스캔 획득으로 2 내지 40°2θ였다. 샘플을 규소 저 백그라운드 플레이트 상에 놓았다. 분말을 현미경 유리 슬라이드 또는 다른 적합한 도구로 부드럽게 눌러 홀더 내부에 평평하게 폈다.

결과는 면간 거리(d), 브래그 각 2 쎄타(°±0.2로 표시됨) 및 상대 세기(가장 센 선에 대해 백분율로 표시됨)에 관하여 나타나 있다.

X-선 분말 회절 다이어그램에 특징적인 브래그 각 2-쎄타(°±0.2로 표시됨)는 다음과 같았다: 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66.

실시예 1 및 2의 표제 화합물을 또한 약 2 내지 4 mg의 샘플이 투입된 50 μL 배기 알루미늄 DSC 팬(vented aluminum DSC pan)을 사용하여 Perkin-Elmer DSC-7로 수행되는 이의 DSC 다이어그램으로 특징화하였다. 알루미늄 디스크를 분말 위에 배치하여 얇은 층을 수득하고, 열 교환을 향상시켰다. 참조는 동일한 종류의 보이드 팬(void pan)이었다. 인듐, 주석 및 납(LGC 인증 참조 물질)을 온도 규모 및 엔탈피 반응에 대하여 장치의 보정을 정밀화하는 데 사용하였다. 샘플을 10℃/min의 가열 속도로 질소 흐름 하에 분석하였다. 개시 및 피크 온도(℃)가 일반적으로 관심의 대상이 되는 파라미터로 고려되었다.

얻어진 다이어그램은 229℃의 용융 개시로 도 3에 나타나 있다.

실시예 3 : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 사수화물, 형태 II

304 mg의 실시예 2의 단계 A에서 수득된 화합물을 25 mL 3 목 둥근 바닥 플라스크에 투입하고, 12 mL의 물을 실온에서 첨가하였다. 수득된 현탁액을 61 내지 62℃에서 가열하면서 교반하였고; pH는 약 5.3이었다. 1시간 교반 후, 35.9 μL의 H₃PO₄를 5 mL의 물과 함께 첨가하고, 거의 동시에 모두 용액에 넣고, pH를 3.1로 감소시켰다. 용액을 70℃로 1시간 동안 가열하여 완전 용해를 보장하였고, pH는 3.2였다. 가열 배쓰를 옮기고, 용기가 실온으로 냉각되게 정치시킨 후, 2시간 동안 교반하였다. 용기를 냉장고에 밤새 두어 5℃로 냉각시켜 용액으로부터 황색 침전물이 부서져 나오게 하였다. 고형물이 실온에서 혼합물 중에 침강되게 정치시키고, 상청액을 제거하였다. 잔여 고형물을 진공 하에 50℃에서 18시간 동안 오븐에서 건조시켰다. 표제 화합물을 황색 고형물로서 수득하였다.

넓은 탈수 흡열: 35 내지 125℃

결정화 발열(T_개시): 190℃

표제 생성물은 Thermo/ARL XTRA 장치를 사용하여 수행되는 이의 분말 회절 다이어그램에 의해 특징화하였다. 이 기기는 브래그-브렌타노 기하학적 형태를 기초로 하고, 45 KV/40 mA(1.8 kW 전력)에서 작동되는 Cu Kα 발생기 및 Peltier-냉각 고체 상태 검출기가 장착되어 있었다. 스펙트럼 범위는 1.20°2θ/min의 속도에서 연속 스캔 획득으로 2 내지 40°2θ였고, 이에 의해서 하기 결정 파라미터를 확인할 수 있었다:

- 유닛 셀 파라미터: a = 13.866(2) Å; b = 18.824(2) Å; c = 7.2575(7) Å; 알파 = 92.014(8)°; 베타 = 91.813(7)°; 감마 = 107.294(8)°

- 스페이스 기: P-1 (2) (삼사정계)

표제 생성물을 또한 Thermo/ARL XTRA 장치를 사용하여 수행되는 도 4에 나타나 있는 이의 X-선 분말 회절 다이어그램에 의해 특징화하였다. 이 기기는 브래그-브렌타노 기하학적 형태를 기초로 하고, 45 KV/40 mA(1.8 kW 전력)에서 작동되는 Cu Kα 발생기 및 Peltier-냉각 고체 상태 검출기가 장착되어 있었다. 스펙트럼 범위는 1.20°2θ/min의 속도에서 연속 스캔 획득으로 2 내지 40°2θ였다. 샘플을 규소 저 백그라운드 플레이트 상에 놓았다. 분말을 현미경 유리 슬라이드 또는 다른 적합한 도구로 부드럽게 눌러 홀더 내부에 평평하게 폈다.

X-선 분말 회절 다이어그램에 특징적인 브래그 각 2-쎄타(°±0.2로 표시됨): 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81.

실시예 3의 화합물을 또한 약 2 내지 4 mg의 샘플이 투입된 50 μL 배기 알루미늄 DSC 팬을 사용하여 Perkin-Elmer DSC-7로 수행되는 이의 DSC 다이어그램으로 특징화하였다. 알루미늄 디스크를 분말 위에 배치하여 얇은 층을 수득하고, 열 교환을 향상시켰다. 참조는 동일한 종류의 보이드 팬이었다. 인듐, 주석 및 납(LGC 인증 참조 물질)을 온도 규모 및 엔탈피 반응에 대하여 장치의 보정을 정밀화하는 데 사용하였다. 샘플을 10℃/min의 가열 속도로 질소 흐름 하에 분석하였다. 개시 및 피크 온도(℃)가 일반적으로 관심의 대상이 되는 파라미터로 고려되었다.

얻어진 다이어그램은 도 5에 나타나 있다.

실시예 4 : 장기간 조건 하에서 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노) 피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I의 순도 및 안정성

N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노) 피페리딘-1-일]-2-메톡시 페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I의 순도 및 안정성을 하기와 같이 장기간 조건 하에서 시험하였다:

결과는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I이 적어도 최대 24 개월 동안 안정하다는 것을 보여준다.

실시예 5 : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노) 피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I의 용해도

시험 조건: 약 730 mg의 시험 화합물을 4 ml의 WFI(주사용수) 또는 식염수(0.9% NaCl)에 현탁시켜 유리 염기로서 150 mg/ml의 표적 용해도를 시험하였다. 현탁액을 실온에서 24시간 동안 자성 교반하고, 호박색 유리 바이알에서 광으로부터 보호하였다. 시험 화합물 농도를 1 및 24시간 후에 측정하였다.

모든 배출된 현탁액/용액 양을 원심분리하고, 여과 및 희석 후에 HPLC에 의해 상청액을 분석하였다.

얻어진 결과는 하기 표에 요약되어 있다:

실시예 6 : N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시 페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트, 형태 I의 흡습성 측정

시험하고자 하는 화합물을 동적 증기 흡착 장치(DVS 1000 - Surface Measurement Systems)에 의해 흡습성 시험에 제출하였다.

장치를 간단히 "대기 제어 미세저울(controlled atmosphere microbalance)"로 정의하였고, 여기서 칭량된 샘플을 일정한 및 제어 온도에서 상대 습도(RH) 변화에 노출시켰다. 정확하게 칭량된 양의 생성물(일반적으로 5 내지 10 mg)을 분석하였다.

결과는 하기 표에 보고되어 있다:

실시예 7 : 약제학적 조성물

A. 정제

각각 35 mg 용량의 실시예 1을 함유하는 1000개의 정제..............100 g

밀 전분..........................................................20 g

옥수수 전분......................................................20 g

락토스...........................................................30 g

마그네슘 스테아레이트............................................2 g

실리카...........................................................1 g

하이드록시프로필셀룰로스.........................................2 g

B. 바이알 동결건조물

실시예 1의 화합물, 만니톨 및 Tween 80을 함유하는 벌크 용액을 제조한 후, 동결건조시켜, 각각 35 mg의 실시예 1의 화합물, 300 mg의 만니톨 및 5 mg의 Tween 80을 함유하는 바이알을 수득하였다.

동결건조물을 10 ml의 주사용수에 재현탁시켰다.

Claims

하기 화학식 (II)의 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 화합물:
제1항에 있어서, 브래그 각(Bragg's angle) 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66으로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 결정질 형태 I로서 수득되는, 화합물.
제1항 또는 제2항에 따른 화학식 (II)의 화합물을 수득하기 위한 방법으로서, 상기 방법이 출발 물질 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 유기 용매 중 1 내지 2 당량의 H₃PO₄ 용액과 반응시킴을 포함하는 방법.
제3항에 있어서, 유기 용매가 EtOH인 방법.
제1항에 있어서, 브래그 각 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 결정질 형태 II로서 수득되는, 화합물.
제1항 또는 제5항에 따른 화학식 (II)의 화합물을 수득하기 위한 방법으로서, 상기 방법이 출발 물질 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드를 물 중 1 내지 2 당량의 H₃PO₄ 용액과 반응시킴을 포함하는 방법.
하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 제1항, 제2항 또는 제5항에 따른 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물로서, 세포 증식성 장애, 바이러스 감염, 자가면역 및 신경퇴행성 장애의 치료에서 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각(Bragg's angle) 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66으로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I인, 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 II인, 약제학적 조성물.
제1항, 제2항 및 제5항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물로서, 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 폐암(소세포 폐암 포함), 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암, 전립선암, 및 피부암(편평 세포 암종 포함)으로부터 선택되는 암종; 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocitic leukemia), 급성 림프아구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia), B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 모발 세포 림프종(hairy cell lymphoma) 및 버킷 림프종(Burkett's lymphoma)을 포함하는 림프계의 조혈 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndrome) 및 전골수구성 백혈병(promyelocytic leukemia)을 포함하는 골수 계통의 조혈 종양; 섬유육종(fibrosarcoma) 및 횡문근육종(rhabdomyosarcoma)을 포함하는 간엽성 기원의 종양; 성상세포종 신경아세포종(astrocytoma neuroblastoma), 신경교종(glioma) 및 신경초종(schwannomas)을 포함하는 중추 및 말초 신경계의 종양; 흑색종(melanoma), 반종(seminoma), 기형암종(teratocarcinoma), 골육종(osteosarcoma), 색소성 건피증(xeroderma pigmentosum), 각막암종(keratoxanthoma), 갑상선 난포암(thyroid follicular cancer) 및 카포시 육종 악성중피종(Kaposi's sarcoma mesothelioma), 고도 이수성 종양(highly aneuploid tumor) 및 MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1 및 BUB3으로부터 선택되는 유사분열 체크포인트 성분을 과발현하는 종양을 포함하는 기타 종양; 양성 전립선 비대증(benign prostate hyperplasia), 가족성 선종성 용종증(familial adenomatosis polyposis), 신경섬유종증(neurofibromatosis), 건선(psoriasis), 죽상 동맥 경화증(atherosclerosis)과 관련된 혈관 평활 세포 증식, 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 관절염(arthritis), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 수술후 협착증 및 재협착증의 치료에서 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
암의 치료에서 사용하기 위한, 유전자독성제, 유사분열 저해물질(mitotic poison), 항대사물질, 프로테아좀 억제제 및 키나제 억제제로부터 선택된 항암제와 제1항에 따른 화학식 (II)의 화합물의 조합물.
제11항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각(Bragg's angle) 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66으로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I인, 조합물.
제11항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 II인, 조합물.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 폐암(소세포 폐암 포함), 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암, 전립선암, 및 피부암(편평 세포 암종 포함)으로부터 선택되는 암종; 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포-림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 모발 세포 림프종 및 버킷 림프종을 포함하는 림프계의 조혈 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상 증후군 및 전골수구성 백혈병을 포함하는 골수 계통의 조혈 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 간엽성 기원의 종양; 성상세포종 신경아세포종, 신경교종 및 신경초종을 포함하는 중추 및 말초 신경계의 종양; 흑색종, 반종, 기형암종, 골육종, 색소성 건피증, 각막암종, 갑상선 난포암 및 카포시 육종 악성중피종, 고도 이수성 종양 및 MPS1, MAD2, MAD1, BUB1, BUBR1 및 BUB3으로부터 선택되는 유사분열 체크포인트 성분을 과발현하는 종양을 포함하는 기타 종양; 양성 전립선 비대증, 가족성 선종성 용종증, 신경섬유종증, 건선, 죽상 동맥 경화증과 관련된 혈관 평활 세포 증식, 폐 섬유증, 관절염, 사구체신염 및 수술후 협착증 및 재협착증의 치료에서 사용하기 위한, 조합물.
암의 치료에서 방사선요법과 함께 사용하기 위한 제1항에 따른 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
제15항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각(Bragg's angle) 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 2.76, 8.10, 10.79, 13.49, 16.13, 17.37, 17.62, 19.77, 21.94, 24.18, 24.66으로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 I인, 약제학적 조성물.
제15항에 있어서, 화학식 (II)의 화합물이 브래그 각 2 쎄타(°±0.2에 대해 표시됨) 9.43, 9.86, 12.23, 13.70, 14.81, 18.01, 19.78, 20.73, 24.55, 24.82, 26.81로 이의 X-선 분말 회절계에 의해 특징화되는 N-(2,6-디에틸페닐)-8-({4-[4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일]-2-메톡시페닐}아미노)-1-메틸-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-h]퀴나졸린-3-카복사미드 포스페이트 형태 II인, 약제학적 조성물.
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