ES2882080T3 - Tratamiento del cáncer con estimuladores inmunitarios - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento del cáncer o una metástasis del mismo en un sujeto, en la que la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un primer estimulador inmunitario y un segundo estimulador inmunitario, en la que el primer estimulador inmunitario es un péptido de alfa timosina, y el segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de PD-1.

Description

DESCRIPCIÓN

Tratamiento del cáncer con estimuladores inmunitarios

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente descripción se refiere a composiciones y métodos para tratar el cáncer, tal como el melanoma, o metástasis del mismo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se han desarrollado muchos fármacos o candidatos a fármacos para el tratamiento de diversos cánceres, incluyendo algunos compuestos de moléculas pequeñas. Sin embargo, los tratamientos actuales para muchos cánceres no son muy efectivos en pacientes con subconjuntos específicos de cánceres, o son demasiado tóxicos en tales pacientes o en general.

El cáncer de piel es la forma más común de cáncer en los Estados Unidos de América. En 2007, The American Cancer Society estima que se producirán aproximadamente 8.110 muertes por melanoma, y se espera que se diagnostiquen otros 59.940 casos de melanoma en este país.

El melanoma es un tumor maligno de los melanocitos que se encuentra predominantemente en la piel, pero también en el intestino y el ojo (melanoma uveal). Es uno de los tipos más raros de cáncer de piel, pero causa la mayoría de las muertes relacionadas con el cáncer de piel.

El tratamiento actualmente disponible incluye la extirpación quirúrgica del tumor; tratamiento adyuvante; quimio- e inmunoterapia, o radioterapia. De particular peligro son las metástasis del tumor de melanoma primario. Sin embargo, sigue existiendo una necesidad en la técnica de tratamientos mejorados del melanoma.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

En un aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica para uso en el tratamiento del cáncer o una metástasis del mismo, según la reivindicación 1.

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para uso en métodos de tratamiento de un cáncer o una combinación de cánceres en un sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero. En algunas realizaciones, el mamífero es un ser humano.

En realizaciones de la invención, la composición farmacéutica es para uso en métodos que comprenden administrar una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un primer estimulador inmunitario y un segundo estimulador inmunitario al sujeto. El primer estimulador inmunitario es un péptido de alfa timosina. El segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de PD-1. También se describen ejemplos en los que el segundo estimulador inmunitario es un compuesto distinto de IL-2, interferón-a, o IRX-2. En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario comprende un inmunoestimulante específico. En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario comprende un inmunoestimulante no específico. En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario es un inmunoestimulante que es eficaz en el tratamiento de la septicemia. En algunos ejemplos, el inmunoestimulante comprende factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), inhibidores de muerte celular programada-1 (PD-1), y/o interleucina-7 (IL-7).

En algunas realizaciones, la composición comprende además un agente anticanceroso adicional. En algunas realizaciones, el agente anticanceroso adicional es un agente quimioterapéutico.

En algunas realizaciones, el segundo estimulador inmunitario se administra a dicho sujeto a una dosis de alrededor de 0,01-1000 mg/día.

También se describen aquí ejemplos en los que el segundo estimulador inmunitario comprende GM-CSF, y la dosis de GM-CSF es alrededor de 10 a 500 mcg/m2, por ejemplo, tal como alrededor de 125 a alrededor de 250 10 a 500 mcg/m2.

En realizaciones de la invención, el segundo estimulador inmunitario comprende un inhibidor de PD-1. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 es un agente que inhibe PD-1, tal como un anticuerpo contra PD-1. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 es un agente que inhibe el ligando para PD-1, tal como un anticuerpo contra el ligando para PD-1. En algunas realizaciones, la dosis del inhibidor de PD-1 es alrededor de 0,1 a 10 mg/kg, tal como alrededor de 1-5 mg/kg, o alrededor de 2-3 mg/kg. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 es un anticuerpo anti-PD-LI, y la dosis es alrededor de 15-20 mg/kg. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-LI se usa en una dosis plana de 1200 mg cada dos, tres, o cuatro semanas.

También se describen aquí ejemplos en los que el segundo estimulador inmunitario comprende una interleucina que no es IL-2. En algunos ejemplos, la interleucina es IL-7. En algunos ejemplos, la dosis de IL-7 es alrededor de 0,1 a 100 mcg/kg, tal como alrededor de 1 a 50 mcg/kg, o alrededor de 3 a 30 mcg/kg.

En algunas realizaciones, el péptido de alfa timosina se administra al sujeto durante al menos una parte del tratamiento en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 0,1 a 100 mg/día, tal como alrededor de 0,5-50 mg/día, o alrededor de 0,1-10 mg/día.

En algunas realizaciones, el péptido de alfa timosina es timosina alfa 1 (TA1).

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la invención son para uso en métodos que comprenden la administración de TA1 diariamente durante un período de alrededor de 1-10 días, seguido de alrededor de 1-5 días de no administración de TA1. En algunas realizaciones, TA1 se administra diariamente durante alrededor de 3-5 días, seguido de alrededor de 2-4 días de no administración de TA1. En algunas realizaciones, TA1 se administra diariamente durante alrededor de 4 días, seguido de alrededor de 3 días sin administración de TA1.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas son para uso en métodos que comprenden además la administración de un inhibidor de cinasa. En algunas realizaciones, el inhibidor de cinasa comprende sorafenib. En algunas realizaciones, el inhibidor de cinasa se administra a dicho paciente en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 10-200 mg/kg/día.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas son para uso en métodos que comprenden además administrar un activador antineoplásico de apoptosis por choque térmico (HSAA). En algunas realizaciones, e1HSAA comprende STA-4783 (elesclomol). En algunas realizaciones, el HSAA se administra a dicho paciente en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 0,01-100 mg/kg/día.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas son para uso en métodos que comprenden además administrar un inhibidor del antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA4), tal como un anticuerpo contra CTLA4. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CTLA4 comprende 9H10, MDC010, 1F4, BNI3, Q01, A01, M08, 1B8, WKH203, ab9984, ab13486, ipilimumab, ticilimumab, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CTLA4 se administra a dicho paciente en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 0,001-50 mg/kg/día.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas son para uso en métodos que comprenden además la administración de un agente antineoplásico alquilante (AlkAA). En algunas realizaciones, el agente antineoplásico alquilante (AlkAA) comprende dacarbazina (DTIC). En algunas realizaciones, el agente antineoplásico alquilante (AlkAA) se administra a dicho paciente en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 700-1300 mg/kg/día.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas son para uso en métodos que comprenden además la administración de un agente quimioterapéutico al sujeto. En algunas realizaciones, el agente quimioterapéutico es dacarbazina (DTIC) o cisplatino.

En algunas realizaciones, el cáncer es melanoma.

La presente descripción también proporciona métodos para tratar el cáncer o una metástasis del mismo en un sujeto, que comprenden administrar una composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un estimulador inmunitario, en la que el estimulador inmunitario es eficaz en el tratamiento de la septicemia. En algunos ejemplos, el cáncer es melanoma. En algunos ejemplos, el sujeto es un mamífero. En algunos ejemplos, el mamífero es un ser humano. En algunos ejemplos, el inmunoestimulante que es eficaz en el tratamiento de la septicemia comprende el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), inhibidores de muerte celular programada-1 (PD-1), y/o interleucina-7 (IL-7), o cualquier combinación de los mismos.

En algunos ejemplos, la composición comprende además un agente anticanceroso adicional. En algunos ejemplos, el agente anticanceroso adicional es un péptido de alfa timosina. En algunos ejemplos, el péptido de alfa timosina es timosina alfa 1 (TA1).

En algunos ejemplos, el método comprende además administrar un agente quimioterapéutico al sujeto. En algunos ejemplos, el agente quimioterapéutico es dacarbazina (DTIC) o cisplatino.

La presente descripción también proporciona métodos para determinar la capacidad de respuesta de un sujeto humano al tratamiento del cáncer. En algunos ejemplos, el cáncer es melanoma. En algunos ejemplos, los métodos comprenden determinar el nivel de actividad de uno o más biomarcadores en una muestra biológica de un sujeto humano. En algunos ejemplos, los biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en IL-1 b, IL-4, IL-6, e IL-10. En algunos ejemplos, el tratamiento del cáncer se realiza según los métodos descritos aquí.

En algunos ejemplos, un nivel de actividad de IL-1 b mayor que el normal es indicativo de que el sujeto humano responde al tratamiento.

En algunos ejemplos, un nivel de actividad de IL-4 menor que el normal es indicativo de que el sujeto humano responde al tratamiento.

En algunos ejemplos, un nivel de actividad de IL-6 mayor que el normal es indicativo de que el sujeto humano responde al tratamiento.

En algunos ejemplos, un nivel de actividad de IL-10 mayor que el normal es indicativo de que el sujeto humano responde al tratamiento.

La presente descripción también proporciona métodos para determinar la dosis o el régimen para el tratamiento del cáncer en un sujeto humano. En algunos ejemplos, el cáncer es melanoma. En algunos ejemplos, los métodos comprenden determinar el nivel de actividad de uno o más biomarcadores en una muestra biológica de un sujeto humano en tratamiento. En algunos ejemplos, los biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en IL-1 b, IL-4, IL-6, e IL-10.

En algunos ejemplos, un nivel reducido de actividad de IL-1 b después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento es eficaz. En algunos ejemplos, un nivel sin cambios o aumentado de actividad de IL-1 b después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento no es eficaz. La dosis o régimen del tratamiento se puede modificar en consecuencia.

En algunos ejemplos, un nivel aumentado de actividad de IL-4 después del tratamiento es indicativo de que el sujeto humano responde al tratamiento. En algunos ejemplos, un nivel sin cambios o disminuido de actividad de IL-4 después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento no es eficaz. La dosis o régimen del tratamiento se puede modificar en consecuencia.

En algunos ejemplos, un nivel reducido de actividad de IL-6 después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento es eficaz. En algunos ejemplos, un nivel sin cambios o aumentado de actividad de IL-6 después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento no es eficaz. La dosis o régimen del tratamiento se puede modificar en consecuencia.

En algunos ejemplos, un nivel reducido de actividad de IL-10 después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento es eficaz. En algunos ejemplos, un nivel sin cambios o aumentado de actividad de IL-10 después del tratamiento es indicativo de que el tratamiento no es eficaz. La dosis o régimen del tratamiento se puede modificar en consecuencia.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1A representa el efecto antitumoral del cisplatino en el tratamiento del modelo de melanoma murino B16F10 como se indica por el volumen del tumor después de la inoculación del tumor.

La FIG. 1B representa cambios de peso corporal de ratones en el modelo de melanoma murino B16F10 después de la inoculación del tumor tratados con vehículo o cisplatino.

La FIG. 2 representa la actividad antitumoral de la timosina. Los animales con tumor derivado de B16F10 se trataron con ZADAXIN™ (timalfasina). En todas las dosis ensayadas, los animales mostraron un crecimiento tumoral reducido en comparación con el grupo tratado con vehículo.

La FIG. 3 representa la actividad antitumoral de la timosina a varias dosis diferentes. En todas las dosis ensayadas, la timosina proporcionó una reducción del crecimiento tumoral estadísticamente significativa en comparación con el grupo tratado con vehículo.

La FIG. 4A representa la evaluación de IL-1 b en el modelo de melanoma murino B16F10 subcutáneo en ratones C57BL/6 tratados con timosina. Se administró ZADAXIN™ (timalfasina) a ratones por vía subcutánea dos veces al día durante 6 días a 0,02, 0,06, 0,2, 0,3, 2, o 6 mg/kg 10 pl/g. Los niveles de IL-1 b fueron más bajos en los grupos tratados con ZADAXIN™ (timalfasina) en comparación con los grupos tratados con vehículo en D4 y D7 después del inicio de la dosificación.

La FIG. 4B representa la evaluación de IL-4 en el modelo de melanoma murino B16F10 subcutáneo en ratones C57BL/6 tratados con timosina. Se administró ZADAXIN™ (timalfasina) a ratones por vía subcutánea dos veces al día durante 6 días a 0,02, 0,06, 0,2, 0,3, 2, o 6 mg/kg 10 pl/g. Los niveles de IL-4 fueron más altos en los grupos tratados con ZADAXIN™ (timalfasina) en comparación con los grupos tratados con vehículo en D4 y D7 después del inicio de la dosificación.

La FIG. 4C representa la evaluación de IL-6 en el modelo de melanoma murino B16F10 subcutáneo en ratones C57BL/6 tratados con timosina. Se administró ZADAXIN™ (timalfasina) a ratones por vía subcutánea dos veces al día durante 6 días a 0,02, 0,06, 0,2, 0,3, 2, o 6 mg/kg 10 pl/g. Los niveles de IL-6 fueron más bajos en los grupos tratados con ZADAXIN™ (timalfasina) en comparación con los grupos tratados con vehículo en D4 y D7 después del inicio de la dosificación.

La FIG. 4D representa la evaluación de IL-10 en el modelo de melanoma murino B16F10 subcutáneo en ratones C57BL/6 tratados con timosina. Se administró ZADAXIN™ (timalfasina) a ratones por vía subcutánea dos veces al día durante 6 días a 0,02, 0,06, 0,2, 0,3, 2, o 6 mg/kg 10 pl/g. Los niveles de IL-10 fueron más bajos en los grupos tratados con ZADAXIN™ (timalfasina) en comparación con los grupos tratados con vehículo en D4 y D7 después del inicio de la dosificación.

La FIG. 4E representa la evaluación de IFN-gamma en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4F representa la evaluación de IL-1 b en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG 4G representa la evaluación de IL-4 en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4H representa la evaluación de IL-5 en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4I representa la evaluación de IL-6 en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4J representa la evaluación de IL-10 en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4K representa la evaluación de IL-12 en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 4L representa la evaluación de TNF-a en el modelo de melanoma murino sistémico B16F10 en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos.

La FIG. 5 representa el modelo de melanoma metastásico de pulmón de ratón B16F10 y el diseño del experimento. Se inocularon células de melanoma B16F10 en ratones el día 0.

La FIG. 6A representa la distribución grupal de metástasis pulmonares el día 16 en ratones tratados con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida.

La FIG. 6B representa el porcentaje de cambios en el peso corporal medio del grupo desde el día 1 en ratones B16MET tratados con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida.

La FIG. 7A representa la distribución grupal de metástasis pulmonares el día 15 en ratones tratados con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida a diferentes dosis.

La FIG. 7B representa IL-1 a en el modelo de melanoma metastásico de pulmón de ratón B16F10 después del tratamiento con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida a diferentes dosis.

La FIG. 7C representa el porcentaje de cambios en el peso corporal medio del grupo desde el día 1 en ratones B16F10 tratados con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida.

La FIG. 8 representa focos de metástasis pulmonares en los diferentes grupos el día 13 después de la inoculación del tumor tratados con vehículo, timosina sola, anti-PD-1 solo, timosina más anti-PD-1, o ciclofosfamida.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

La presente descripción se refiere a métodos para tratar y/o prevenir el cáncer en un sujeto. En algunos ejemplos, el cáncer es melanoma o metástasis del mismo. En algunos ejemplos, los métodos implican administrar una composición que comprende al menos un estimulador inmunitario al sujeto.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención se pueden aplicar en el tratamiento de cánceres en etapa temprana, incluyendo las neoplasias tempranas que pueden ser pequeñas, de crecimiento lento, localizadas, y/o no agresivas, por ejemplo con la intención de curar la enfermedad o causando la regresión del cáncer, así como en el tratamiento de la etapa intermedia y en el tratamiento de cánceres en etapa tardía, incluyendo las neoplasias avanzadas y/o metastásicas y/o agresivas, por ejemplo para ralentizar la progresión de la enfermedad, para reducir la metástasis, o para aumentar la supervivencia del paciente. De manera similar, las combinaciones pueden usarse en el tratamiento de cánceres de grado bajo, cánceres de grado intermedio, y cánceres de grado alto.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención también se pueden usar en el tratamiento de cánceres indolentes, cánceres recurrentes que incluyen cánceres localmente recurrentes, recurrentes a distancia, y/o refractarios (es decir, cánceres que no han respondido al tratamiento), cánceres metastásicos, cánceres localmente avanzados, y cánceres agresivos. De este modo, un cáncer “avanzado” incluye cáncer localmente avanzado y cáncer metastásico, y se refiere a una enfermedad manifiesta en un paciente, en la que dicha enfermedad manifiesta no es susceptible de curación mediante modalidades locales de tratamiento, tales como cirugía o radioterapia. La expresión “cáncer metastásico” se refiere al cáncer que se ha diseminado de una parte del cuerpo a otra. Los cánceres avanzados también pueden ser irresecables, es decir, se han diseminado al tejido circundante y no se pueden extirpar quirúrgicamente.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención también se pueden usar en el tratamiento de cánceres resistentes a fármacos, incluyendo tumores resistentes a múltiples fármacos. Como se conoce en la técnica, la resistencia de las células cancerosas a la quimioterapia es uno de los problemas centrales en el tratamiento del cáncer.

Un experto en la técnica apreciará que muchas de estas categorías pueden solaparse, por ejemplo, los cánceres agresivos típicamente también son metastásicos. “Cáncer agresivo”, como se usa aquí, se refiere a un cáncer de crecimiento rápido. Un experto en la técnica apreciará que, para algunos cánceres, tal como el cáncer de mama o el cáncer de próstata, la expresión “cáncer agresivo” se referirá a un cáncer avanzado que ha recaído en alrededor de los dos tercios anteriores del espectro de tiempos de recaída para un cáncer, mientras que para otros tipos de cáncer, casi todos los casos presentan cánceres de crecimiento rápido que se consideran agresivos. De este modo, la expresión puede abarcar una subsección de un determinado tipo de cáncer, o puede abarcar todos los demás tipos de cáncer.

En algunas realizaciones, los cánceres que se van a tratar con las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, cánceres relacionados con el SIDA, cáncer de la corteza suprarrenal, cáncer de ano, cáncer de vejiga, cáncer de intestino, cánceres del cerebro y del sistema nervioso central, cáncer de mama, cánceres carcinoides, cáncer de cuello uterino, condrosarcoma, coriocarcinoma, cáncer colorrectal, cánceres endocrinos, cáncer de endometrio, sarcoma de Ewing, cáncer de ojo, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cánceres genitourinarios, glioma, cáncer ginecológico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, enfermedad de Hodgkin, cáncer de hipofaringe, cáncer de células de los islotes, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, cáncer de laringe, leucemia, cáncer de hígado, cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón no microcítico), linfoma, melanoma, carcinoma de células basales, mesotelioma, mieloma, cáncer de nasofaringe, neuroblastoma, linfoma no de Hodgkin, cáncer de esófago, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de pituitaria, carcinoma de células renales, cáncer de próstata, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, sarcoma, cáncer de piel, carcinoma de células escamosas, cáncer de estómago, cáncer de testículo, cáncer de timo, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición, cáncer trofoblástico, cáncer de útero, cáncer de vagina, macroglobulinemia de Waldenstrom, cáncer de Wilm, y leucemia.

De acuerdo con las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención, el término “sujeto”, y variantes del mismo como se usa aquí, incluye cualquier sujeto que tenga, se sospeche que tenga, o esté en riesgo de tener una enfermedad o afección. Los sujetos (o pacientes) adecuados incluyen mamíferos, tales como animales de laboratorio (por ejemplo, ratón, rata, conejo, conejillo de indias), animales de granja, y animales domésticos o mascotas (por ejemplo, gato, perro). Se incluyen primates no humanos, y, preferiblemente, pacientes humanos. Un sujeto “en riesgo” puede tener o no una enfermedad detectable, y puede o no haber mostrado una enfermedad detectable antes de los métodos de diagnóstico o tratamiento descritos aquí. “En riesgo” denota que un sujeto tiene uno o más de los denominados factores de riesgo, que son parámetros medibles que se correlacionan con el desarrollo de una afección descrita aquí, que se describen aquí. Un sujeto que tiene uno o más de estos factores de riesgo tiene una mayor probabilidad de desarrollar una afección descrita aquí que un sujeto sin este factor o factores de riesgo. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano diagnosticado de melanoma. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano sospechoso de tener melanoma. En algunas realizaciones, el sujeto es un ser humano que tiene un alto riesgo de desarrollar melanoma. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente con melanoma con metástasis. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente con melanoma con alto riesgo de metástasis.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la presente invención se usan en el tratamiento del melanoma. En algunas realizaciones, el melanoma es uno de lentigo maligno, lentigo maligno melanoma, melanoma de extensión superficial, melanoma lentiginoso acral, melanoma mucoso, melanoma nodular, melanoma polipoide, melanoma desmoplásico, melanoma amelanótico, melanoma de tejidos blandos, melanoma con células de tipo nevo pequeñas, melanoma con características de un nevo de Spitz, melanoma uveal, o combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, el paciente humano tiene un melanoma en la Etapa 0, I, II, III o IV, o sus respectivas subdivisiones. En ciertas realizaciones, el melanoma que se está tratando es un melanoma metastásico maligno. En ciertas realizaciones, el melanoma que se está tratando es estadio I, estadio II, estadio III, o estadio IV. En otras realizaciones, el melanoma que se está tratando es melanoma en estadio M1a, M1b, o M1c. Para obtener información detallada sobre la estadificación, véase Balch et al. (2001, “Final version of the American Joint Committee on Cancer staging system for cutaneous melanoma”. J Clin Oncol 19 (16): 3635-48. PMID 11504745).

En algunas realizaciones, el paciente humano tiene uno o más signos tempranos de melanoma, tales como cambios en la forma o el color de los lunares existentes, que incluyen, pero no se limitan a, asimetría, bordes irregulares, color abigarrado, diámetro mayor que alrededor de 6 mm, evolucionan con el tiempo, pican, se ulceran, o sangran. En algunas realizaciones, el paciente humano tiene melanoma nodular, y los primeros signos incluyen, pero no se limitan a, la aparición de un nuevo bulto en cualquier parte de la piel, elevado por encima de la superficie de la piel, firme al tacto, y de crecimiento continuo.

La metástasis, o enfermedad metastásica, es la propagación de un cáncer de un órgano a otro. Algunas células cancerosas adquieren la capacidad de penetrar las paredes de los vasos linfáticos y/o sanguíneos, después de lo cual pueden circular a través del torrente sanguíneo a otros sitios y tejidos del cuerpo. Después de que las células tumorales descansan en otro sitio, vuelven a penetrar el vaso o las paredes y continúan multiplicándose, formando finalmente otro tumor clínicamente detectable.

En algunas realizaciones, el melanoma es un melanoma metastásico maligno. En algunas realizaciones, el melanoma metastásico provoca síntomas paraneoplásicos inespecíficos en el paciente, que incluyen, pero no se limitan a, pérdida de apetito, náuseas, vómitos, y fatiga. En algunas realizaciones, el paciente tiene metástasis cerebrales. En algunas realizaciones, el melanoma se diseminó al hígado, los huesos, el abdomen, y/o los ganglios linfáticos distantes.

En algunas realizaciones, el sujeto a tratar tiene un alto riesgo de desarrollar melanoma. En algunas realizaciones, el sujeto humano es caucásico. En algunas realizaciones, el paciente humano vive en climas soleados con una exposición extensa a la luz ultravioleta. En algunas realizaciones, el sujeto a tratar tiene una o más mutaciones genéticas que aumentan su susceptibilidad al melanoma. En algunas realizaciones, las mutaciones genéticas están en el BRAF, MC1R, CDKN2A, CDK4, enzimas reparadoras por escisión de nucleótidos (NER) (también conocido como xerodermia pigmentosa, XP), supresor de tumores múltiples 1 (MTS1), y/o MDM2.

Los métodos para el diagnóstico del melanoma son bien conocidos, tales como los descritos en Wurmand Soyer (octubre de 2010, “Scanning for melanoma”. Australian Prescriber (33): 150-5). En algunos ejemplos, el diagnóstico se realiza mediante examen virtual. En algunos ejemplos, el diagnóstico se realiza mediante radiografías, tomografías computarizadas, resonancias magnéticas, PET y PET/CT, ultrasonido, pruebas de LDH, y/o detección fotoacústica.

Una vez que se ha diagnosticado el melanoma, se pueden utilizar más pruebas para determinar si las células cancerosas se han diseminado dentro de la piel u otras partes del cuerpo. Las pruebas incluyen, pero no se limitan a, examen físico y antecedentes, cartografiado de ganglios linfáticos y biopsia de ganglio linfático centinela, tomografía computarizada, tomografía por emisión de positrones, resonancia magnética, y estudios de química sanguínea.

Los términos “tratar” y “tratamiento”, como se usan aquí, se refieren a un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados que incluyen resultados clínicos, y pueden incluir incluso cambios mínimos o mejoras en uno o más marcadores medibles de la enfermedad o afección que se está tratando. Un tratamiento suele ser eficaz para reducir al menos un síntoma de una afección, enfermedad, trastorno, lesión, o daño. Los ejemplos de marcadores de mejora clínica serán evidentes para los expertos en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: disminución de la gravedad y/o frecuencia de uno o más síntomas resultantes de la enfermedad, disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización la enfermedad (por ejemplo, prevención o retraso del empeoramiento de la enfermedad), retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora del estado de la enfermedad, disminución de la dosis de uno o más medicamentos necesarios para tratar la enfermedad, y/o aumento la calidad de vida, etc.

“Profilaxis”, “tratamiento profiláctico”, o “tratamiento preventivo” se refieren a prevenir o reducir la aparición o gravedad de uno o más síntomas y/o su causa subyacente, por ejemplo, la prevención de una enfermedad o afección en un sujeto susceptible de desarrollar una enfermedad o afección (por ejemplo, de mayor riesgo, como resultado de predisposición genética, factores ambientales, enfermedades o trastornos predisponentes, o similares).

En algunos ejemplos, los métodos comprenden administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz y/o una cantidad profilácticamente eficaz de una composición que comprende al menos un inmunoestimulante. La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa aquí, se refiere al nivel o cantidad de uno o más agentes necesarios para tratar una afección, o reducir o prevenir lesiones o daños, opcionalmente sin causar efectos secundarios negativos o adversos significativos. Una “cantidad profilácticamente eficaz” se refiere a una cantidad de un agente suficiente para prevenir o reducir la gravedad de una enfermedad o afección futura cuando se administra a un sujeto que es susceptible y/o que puede desarrollar una enfermedad o afección.

Los estimuladores inmunitarios, también conocidos como inmunoestimulantes, o inmunoestimuladores, se refieren a sustancias que estimulan el sistema inmunitario. En algunos ejemplos, los estimuladores inmunitarios de la presente descripción pueden inducir la activación o aumentar la actividad de uno o más reguladores positivos del sistema inmunitario. En algunos ejemplos, los estimuladores inmunitarios de la presente descripción pueden inducir la desactivación o disminuir la actividad de uno o más reguladores negativos del sistema inmunitario. Como se usa aquí, el término actividad se refiere a la actividad de una diana dada a nivel de ADN genómico, nivel transcripcional, nivel postranscripcional, nivel traduccional, nivel postraduccional, que incluye, pero no se limita a, el número de copias del gen, la tasa de transcripción de ARNm, abundancia de ARNm, estabilidad de ARNm, tasa de traducción de proteínas, estabilidad de proteínas, modificación de proteínas, actividad de proteínas, actividad de complejos de proteínas, etc. En algunos ejemplos, un estimulador inmunitario puede ser un inmunoestimulante específico. Los inmunoestimulantes específicos son sustancias que proporcionan especificidad antigénica en la respuesta inmunitaria, tales como vacunas o antígenos. En algunos ejemplos, un estimulador inmunitario puede ser un inmunoestimulante no específico. Los inmunoestimulantes no específicos actúan independientemente de la especificidad antigénica para aumentar la respuesta inmunitaria de otros antígenos o estimular componentes del sistema inmunitario sin especificidad antigénica, tales como los adyuvantes. Un estimulador inmunitario a utilizar en los métodos de la presente descripción puede ser preparaciones naturales, sintéticas, recombinantes, o combinaciones de las mismas.

En algunos ejemplos, al menos un inmunoestimulante es eficaz para tratar la septicemia.

En algunos ejemplos, al menos un inmunoestimulante es un péptido de timosina (timosinas). Las timosinas son proteínas pequeñas, y están presentes en muchos tejidos animales. Las timosinas se aislaron originalmente del timo, pero ahora se sabe que la mayoría están presentes en muchos otros tejidos. Como se usa aquí, las timosinas incluyen timosina a, timosina b, timosina g, y variantes funcionales de las mismas. En realizaciones de la invención, la timosina es timosina alfa (o alfa timosina). En ciertas realizaciones, la timosina es protimosina alfa (PTMA). En ciertas realizaciones, la timosina es timosina alfa 1 (“TA1 ”, también conocida como timosina alfa-1, timosina a-1, timosina a-1, o alfa timosina) y variantes funcionales que tienen homología estructural con TA1. En algunas realizaciones, TA1 es un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos (N-acetil)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH (SEQ ID NO: 1). La secuencia de aminoácidos de TA1 se describe en la patente U.S. 4.079.137. TA1 es un péptido de 28 aminoácidos no glicosilado que tiene un término N acetilado, y un peso molecular de alrededor de 3108. En algunas realizaciones, se usa una versión sintética de TA1. En algunas realizaciones, la versión sintética de TA1 está disponible comercialmente en ciertos países con el nombre comercial ZADAXIN (timalfasina). Como se usa aquí, el término TA1 también se refiere a variantes funcionales o fragmentos derivados de SEQ ID NO: 1.

En algunas realizaciones, al menos un estimulador inmunitario es timosina alfa 1 (TA1). Los péptidos de alfa timosina comprenden péptidos de timosina alfa 1 (TA1) que incluyen TA1 de origen natural así como TA1 sintético o TA1 recombinante que tiene la secuencia de aminoácidos de TA1 de origen natural, secuencias de aminoácidos sustancialmente similares a las mismas, o una forma de secuencia abreviada de las mismas, y sus análogos biológicamente activos que tienen secuencias sustituidas, eliminadas, alargadas, reemplazadas, o modificadas de otra manera que poseen una bioactividad sustancialmente similar a la de TA1, por ejemplo un péptido derivado de TA1 que tiene suficiente homología de aminoácidos con TA1 de modo que funciona sustancialmente de la misma manera con sustancialmente la misma actividad que TA1. Las dosis adecuadas del péptido de alfa timosina pueden estar dentro del intervalo de alrededor de 0,001-10 mg/kg/día. En algunas realizaciones, TA1 tiene la secuencia de aminoácidos descrita en la patente U.S. n° 4.079.137. TA1 aislada inicialmente de la Fracción 5 de Timosina (TF5) se ha secuenciado y sintetizado químicamente. TA1 es un péptido de 28 aminoácidos con un peso molecular de 3108.

En algunas realizaciones, las cantidades eficaces de un péptido de alfa timosina son cantidades que pueden ser unidades de dosificación dentro de un intervalo correspondiente a alrededor de 0,01-20 mg de TA1, alrededor de 1­ 10 mg de TA1, alrededor de 2-10 mg de TA1, alrededor de 2-7 mg de TA1, o alrededor de 3-6,5 mg de TA1, y pueden comprender alrededor de 1,6, 3,2 o 6,4 mg de TA1, o alrededor de 3,2 o 6,4 mg de TA1. Una unidad de dosificación se puede administrar una vez al día, o una pluralidad de veces al día. En algunas realizaciones, TA1 se administra a un sujeto en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 0,5-10 mg/día. En ciertas realizaciones, la dosis de TA1 está dentro de un intervalo de alrededor de 1,5-7 mg/día, o dentro de un intervalo de alrededor de 1,6-6,4 mg/día. En ciertas realizaciones, la dosis de TA1 está dentro de un intervalo de alrededor de 1,7-10 mg/día, alrededor de 1,7-7 mg/día, o alrededor de 3-7 mg/día. En algunas realizaciones, las dosis eficaces incluyen alrededor de 1,6, 3,2 o 6,4 mg/día. En algunas realizaciones, TA1 se administra a un sujeto en una dosis de alrededor de 0,01 a alrededor de 6 mg/kg. En algunas realizaciones, TA1 se administra a un sujeto una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, o más. En algunas realizaciones, TA1 se administra a un sujeto sola o con uno o más estimuladores inmunitarios adicionales.

Los péptidos de TA1 incluyen TA1 de origen natural así como TA1 sintética o TA1 recombinante que tiene la secuencia de aminoácidos de TA1 de origen natural, secuencias de aminoácidos sustancialmente similares a las mismas, o una forma de secuencia abreviada de las mismas, y sus análogos biológicamente activos que tienen secuencias sustituidas, eliminadas, alargadas, reemplazadas, o modificadas de otro modo que poseen una bioactividad sustancialmente similar a la de TA1, por ejemplo un péptido derivado de TA1 que tiene suficiente homología de aminoácidos con TA1 de manera que funciona sustancialmente de la misma manera con sustancialmente la misma actividad que TA1. En algunas realizaciones, las dosis adecuadas de timosina pueden estar dentro del intervalo de alrededor de 0,001-10 mg/kg/día, tal como 0,001, 0,005, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, o más mg/kg/día. En algunas realizaciones, TA1 tiene la secuencia de aminoácidos descrita en la patente U.S. n° 4.079.137.

TA1 aislada inicialmente de la Fracción 5 de Timosina (TF5) se ha secuenciado y sintetizado químicamente. TA1 es un péptido de 28 aminoácidos con un peso molecular de 3108. El término TA1 también incluye variantes funcionales y fragmentos funcionales de TA1, timosina natural, sintética, o recombinante. TA1 se aisló originalmente de timo bovino, en el que se demostró que reconstituye la “función inmunitaria” en modelos animales timectomizados. En algunas realizaciones, la timosina comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (en la que un término N acilado, por ejemplo, acetilado, es opcional). En algunas realizaciones, la timosina comprende una secuencia de aminoácidos que es sustancialmente similar a TA1, y mantiene la actividad inmunomoduladora de TA1. La secuencia sustancialmente similar puede tener, por ejemplo, de alrededor de 1 a alrededor de 10 supresiones, inserciones, y/o sustituciones de aminoácidos (colectivamente) con respecto a TA1. Por ejemplo, la timosina puede tener de alrededor de 1 a alrededor de 5 (por ejemplo, 1, 2 o 3) inserciones, supresiones, y/o sustituciones de aminoácidos (colectivamente) con respecto a TA1.

De este modo, la timosina puede comprender una secuencia de TA1 abreviada, por ejemplo, que tiene supresiones de 1 a alrededor de 10 aminoácidos, o de alrededor de 1 a 5 aminoácidos, o 1,2 o 3 aminoácidos con respecto a TA1. Tales supresiones pueden estar en el término N o C, y/o pueden ser internas, siempre que la actividad inmunomoduladora del péptido se mantenga sustancialmente. Como alternativa, o además, la secuencia sustancialmente similar puede tener de alrededor de 1 a alrededor de 5 inserciones de aminoácidos (por ejemplo, 1, 2 o 3 inserciones de aminoácidos) con respecto a TA1, en la que la actividad inmunomoduladora de TA1 se mantiene sustancialmente. Como alternativa, o además, la secuencia sustancialmente similar puede tener de 1 a alrededor de 10 sustituciones de aminoácidos, en la que la actividad inmunomoduladora se mantiene sustancialmente. Por ejemplo, la secuencia sustancialmente similar puede tener de 1 a alrededor de 5, o 1,2 o 3 sustituciones de aminoácidos, que pueden incluir sustituciones conservativas y no conservativas. En algunas realizaciones, las sustituciones son conservativas. Generalmente, las sustituciones conservativas incluyen sustituciones de un aminoácido químicamente similar (por ejemplo, polar, no polar, o cargado). Los aminoácidos sustituidos pueden seleccionarse de los 20 aminoácidos estándar, o puede ser un aminoácido no estándar (por ejemplo, un aminoácido no estándar conservado).

En algunas realizaciones, la timosina comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 1, mientras se mantiene la actividad inmunomoduladora de TA1. Por ejemplo, la timosina puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80%, 85%, 90%, 95% de identidad de secuencia con SEQ ID NO: 1. La timosina puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de 100% con SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones, el término N puede estar opcionalmente acilado (por ejemplo, acetilado) o alquilado, por ejemplo con un grupo alquilo o acilo de C1-10 o C1-C7.

En ciertas realizaciones, los péptidos sustancialmente similares y homólogos descritos anteriormente pueden funcionar a un nivel de al menos alrededor de 50%, 70%, 80%, 90%, o alrededor de 100% con respecto a TA1 (SEQ ID NO: 1).

La timosina puede prepararse sintéticamente, por ejemplo, mediante síntesis en fase sólida, o puede prepararse de forma recombinante y purificarse mediante técnicas conocidas. La timosina también puede proporcionarse en forma liofilizada, y reconstituirse con diluyente estéril (por ejemplo, acuoso) antes de la administración. Las formulaciones de timosina se pueden administrar mediante inyección subcutánea, u otra vía eficaz.

En ciertas realizaciones, la timosina se pegila para aumentar su vida media en circulación. Estas estrategias para aumentar la vida media de las proteínas terapéuticas son bien conocidas.

Se cree que la timosina desempeña un papel en las respuestas inmunitarias innatas e inflamatorias, y facilita la discriminación entre propias y no propias en mamíferos. La activación de ligandos de PAMP (patrones moleculares asociados a patógenos) por la timosina conduce a la estimulación de las rutas de transducción de señales intracelulares, que da como resultado la expresión de moléculas coestimuladoras, citocinas proinflamatorias, óxido nítrico, y eicosanoides. La timosina puede afectar, por ejemplo, a las células dendríticas, las células T, las células B, y las células NK.

En realizaciones de la invención, TA1 se combina con un segundo estimulador inmunitario.

En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario es un estimulador inmunitario eficaz para tratar la septicemia. En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario es GM-CSF, interferón (por ejemplo, interferón-g), interleucina 7, interleucina 15, o un inhibidor de PD-1. En algunas realizaciones, el estimulador inmunitario que es eficaz en el tratamiento de la septicemia es capaz de reducir el agotamiento de las células T en el sujeto. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario es una sustancia capaz de aumentar la actividad de GM-CSF, interferón (por ejemplo, interferón-g), o interleucina 7 o interleucina 15; véase Boomer (“The changing immune system in sepsis: Is individualized immuno-modulatory therapy the answer?”, Virulence 5:1,45-56; enero 1,2014).

En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de una proteína de puntos de control (también conocido como inhibidor de puntos de control, moduladores de puntos de control inmunitario, o CPM). Como se usa aquí, una proteína de puntos de control es aquella que evita que el sistema inmunitario ataque las células. Los inhibidores de puntos de control están diseñados para disminuir la eficacia de las proteínas de puntos de control. En algunos ejemplos, las proteínas de puntos de control incluyen, pero no se limitan a, PD1, PDL1, CTLA4, KIR, IDOl, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134), y LAG3.

En algunos ejemplos, los segundos inmunoestimulantes son capaces de atenuar la inmunosupresión anormal en el sujeto. En algunos ejemplos, la inmunosupresión anormal se debe a una actividad anormalmente alta de un inmunosupresor en el sistema inmunitario. En algunos ejemplos, el inmunosupresor con actividad anormalmente alta en el sujeto es receptor de muerte programada (PD-1), ligando de muerte programada (PD-L), atenuador de linfocitos B y T (BTLA), mediador de entrada de herpesvirus (HVEM), o citocina IL-10. En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario eficaz en el tratamiento de la septicemia es un inhibidor del inmunosupresor que tiene una actividad anormalmente alta en un paciente con septicemia durante la fase hipoinflamatoria; véase Boomer (“The changing immune system in sepsis: Is individualized immuno-modulatory therapy the answer?”, Virulence 5:1,45-56; enero 1, 2014). En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de PD-L, BTLA, HVEM, y/o IL-10. En algunos ejemplos, el inhibidor reduce la actividad de PD-L, BTLA, HVEM, y/o IL-10 a nivel de ADN, a nivel de ARNm, y/o a nivel de proteína. En algunos ejemplos, el inhibidor es un anticuerpo contra PD-L, BTLA, HVEM, o IL-10. En realizaciones de la invención, el segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de PD-1. En algunas realizaciones, el inhibidor reduce la actividad de PD-1 a nivel de ADN, a nivel de ARNm, y/o a nivel de proteína. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo contra PD-1. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo contra PD-1, tales como los descritos en las patentes U.S. nos 8552154, 8741295, 8008449, 8460886 y 7029674, o las publicaciones de solicitud de patente de U.S. nos 20110171220, 20110271358, 20140044738. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo contra el ligando de PD. En algunas realizaciones, el inhibidor inhibe la interacción entre PD-1 y su ligando.

En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 es un anticuerpo contra PD-1. En algunas realizaciones, la dosis del anticuerpo anti-PD-1 es alrededor de 0,1 a 10 mg/kg, tal como alrededor de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, o 10 mg/kg. En algunas realizaciones, la dosis de anticuerpo anti-PD-1 es alrededor de 1-5 mg/kg, o alrededor de 2-3 mg/kg.

Como se usa aquí, la frase “un inhibidor de PD-1” se refiere a un compuesto que inhibe la ruta de señalización mediada por PD-1, tal como un inhibidor de un componente en la ruta de señalización de PD-1. La ruta de señalización de PD-1 se describe en Riley (Immunol Rev. mayo 2009; 229(1): 114-125.). Como se usa aquí, el término “actividad” de un componente en la ruta de señalización de PD-1 puede ser un parámetro a nivel de ADN genómico, a nivel transcripcional, a nivel postranscripcional, a nivel traduccional, a nivel postraduccional, incluyendo, pero sin limitarse a, actividad de genes, actividad de ARN, y actividad de proteínas. La actividad de genes puede ser el número de copias de genes, el número de amplificación de genes, o la actividad promotora, etc. La actividad del ARN puede ser la abundancia del ARNm, la tasa de síntesis, y/o la estabilidad, etc. La actividad de la proteína puede ser la abundancia de la proteína, la tasa de síntesis, la estabilidad, la actividad enzimática, la tasa de fosforilación, modificaciones, la actividad de unión, etc. En algunas realizaciones, los inhibidores reducen la actividad de PD-1. En algunas realizaciones, los inhibidores reducen la actividad de un ligando para PD-1. En algunas realizaciones, el inhibidor es un inhibidor de PD-1, tal como un anticuerpo anti-PD-1, o un inhibidor del ligando para PD-1 (también conocido como PDL-1), tal como un anticuerpo anti-PDL-1. El anticuerpo puede ser monoclonal, policlonal, o una combinación de los mismos.

También se describen ejemplos en los que el segundo estimulador inmunitario es una citocina. En algunos ejemplos, las citocinas incluyen, pero no se limitan a, quimiocinas, interferones, interleucinas, linfocinas, factor de necrosis tumoral.

En algunos ejemplos, la citocina como segundo estimulador inmunitario es un factor estimulante de colonias (CSF). Como se usa aquí, el término CSF se refiere a CSF aislados, sintéticos, o recombinantes, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de los mismos. Como se usa aquí, el término CSF se refiere a sustancias que comprenden un polipéptido del factor estimulante de colonias de longitud completa, un fragmento funcional del mismo, y/o derivados funcionales del mismo. Los factores estimulantes de colonias son glicoproteínas segregadas que se unen a proteínas receptoras en las superficies de las células madre hematopoyéticas, activando así las rutas de señalización intracelulares que conducen a la proliferación y/o diferenciación celular en tipos específicos de células de la sangre, tal como glóbulos blancos.

En algunos ejemplos, el CSF comprende un polipéptido de factores estimulantes de colonias de macrófagos (por ejemplo, CSF1, o M-CSF), factores estimulantes de colonias de granulocitos y macrófagos (por ejemplo, CSF2, también conocido como GM-CSF), factores estimulantes de colonias de granulocitos (por ejemplo, CSF3, también conocido como GCSF o G-CSF), y/o análogos de los mismos, tales como promegapoyetina o filgrastim, o un fragmento funcional de los mismos capaz de estimular el sistema inmunitario en un sujeto.

En algunos ejemplos, la citocina como segundo estimulador inmunitario es GM-CSF. Como se usa aquí, el término GM-CSF se refiere a GM-CSF aislados, sintéticos, o recombinantes, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de los mismos. Naturalmente, GM-CSF se puede segregar por macrófagos, células T, mastocitos, células NK, células endoteliales, y fibroblastos. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario puede ser análogos farmacéuticos de GM-CSF natural, tal como sargramostim y molgramostim. En algunos ejemplos, el GM-CSF está en forma de homodímero o heterodímero. En algunos ejemplos, el GM-CSF se fabrica usando tecnología recombinante (por ejemplo, molgramostim o sargramostim (también conocido como leucina)).

En algunos ejemplos, la dosis de GM-CSF es alrededor de 1 a 1000 mcg/m2, tal como alrededor de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 mcg/m2. En algunos ejemplos, la dosis de GM-CSF es alrededor de 125 a alrededor de 250 mcg/m2.

En algunos ejemplos, la citocina como segundo estimulador inmunitario es un interferón. Como se usa aquí, el término interferón se refiere a interferones aislados, sintéticos, o recombinantes, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de los mismos. Como se usa aquí, los interferones (IFN) se refieren a polipéptidos producidos y liberados por las células hospedantes en respuesta a la presencia de patógenos, tales como virus, bacterias, parásitos, o células tumorales. En algunos ejemplos, el interferón activa las células inmunitarias. En algunos ejemplos, el interferón activa las células asesinas naturales y los macrófagos. En algunos ejemplos, el interferón aumenta la actividad de los antígenos del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC). En algunos ejemplos, el interferón pertenece al IFN de tipo I, al IFN de tipo II, o al IFN de tipo III. En algunos ejemplos, el IFN de tipo I es IFN-a, IFN-p, IFN-e, IFN-k, o IFN -w. En algunos ejemplos, el IFN de tipo II se une al IFNR que consiste en las cadenas IFNFGR1 e IFNGR2, tal como IFN-g. En algunos ejemplos, el IFN de tipo III envía señales a través de un complejo receptor que consiste en CRF2-4 e IFNLLR1. En algunos ejemplos, un interferón de la presente solicitud aumenta la actividad de MHC I y/o MHC II. En algunos ejemplos, el interferón aumenta la actividad del inmunoproteasoma en el sujeto. En algunos ejemplos, el interferón aumenta la actividad de las células T citotóxicas. En algunos ejemplos, el interferón activa complejos de transductores de señales y activadores de la transcripción (STAT). En algunos ejemplos, el interferón activa la ruta de señalización de Janus cinasa-STAT (JAK-STAT). En algunos ejemplos, el interferón activa la familia CRK de la proteína adaptadora CRKL, que es un adaptador nuclear para STAT5 que también regula la señalización a través de la ruta de C3G/Rap1. En algunos ejemplos, el interferón activa la proteína cinasa activada por mitógeno p38 (MAP cinasa) para inducir la transcripción de genes. En algunos ejemplos, el interferón activa la ruta de señalización de la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K). En algunos ejemplos, el interferón aumenta la actividad de las células T auxiliares. En algunos ejemplos, el interferón es IFN-g. En algunos ejemplos, los interferones activan directamente macrófagos y/o células asesinas naturales. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario puede inducir interferones. En algunos ejemplos, el interferón está unido al polietilenglicol.

En algunos ejemplos, la citocina como segundo estimulador inmunitario es un factor de necrosis tumoral (TNF). Como se usa aquí, el término TNF se refiere a TNF aislado, sintético, o recombinante, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de los mismos. En algunos ejemplos, el TNF puede ser producido por macrófagos activados, linfocitos CD4+, células NK, neutrófilos, mastocitos, eosinófilos, o neuronas.

En algunos ejemplos, la citocina como segundo estimulador inmunitario es una interleucina. Como se usa aquí, el término interleucina se refiere a interleucinas aisladas, sintéticas, o recombinantes, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de los mismos. En algunos ejemplos, la interleucina puede ser sintetizada por linfocitos T CD4 auxiliares, monocitos, macrófagos, o células endoteliales. En algunos ejemplos, la interleucina promueve el desarrollo y/o diferenciación de linfocitos T, linfocitos B, y/o células hematopoyéticas. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende interleucina 1, interleucina 3, interleucina 4, interleucina 5, interleucina 6, interleucina 7, interleucina 8, interleucina 9, interleucina 10, interleucina 11, interleucina 12, interleucina 13, interleucina 14, interleucina 15, interleucina 16, o interleucina 17. Como se usa aquí, el término interleucina se refiere tanto a interleucinas aisladas, sintéticas, o recombinantes, incluyendo derivados funcionales y fragmentos funcionales de las mismas. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende IL-7, IL-9, y/o IL-15. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una interleucina que puede servir como factor de crecimiento para células linfoides, tales como linajes de células B, linajes de células T, y/o células NK. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una interleucina que puede favorecer el crecimiento de las células T auxiliares. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una interleucina que puede estimular y mantener las respuestas inmunitarias celulares. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una interleucina que puede estimular la proliferación de células linfoides, tales como linajes de células B y/o linajes de células T.

En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario comprende una sustancia que puede mejorar la actividad de un receptor de IL. En algunos ejemplos, el receptor de IL es el receptor de IL-7. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una sustancia que puede mejorar la interacción de IL-7 y el receptor de IL-7. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende el receptor alfa de interleucina-7. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende un receptor de cadena gamma común, que forma un heterodímero con el receptor alfa de interleucina-7. En algunas realizaciones, el receptor de IL es el receptor de IL-9. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una sustancia que puede potenciar la interacción de IL-9 y el receptor de IL-9. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende el receptor de interleucina-9. En algunos ejemplos, el receptor de IL es el receptor de IL-15. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende una sustancia que puede mejorar la interacción de IL-15 y el receptor de IL-15. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende la cadena beta del receptor de interleucina-15 (CD122). En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario comprende la cadena gamma común del receptor de interleucina-15 (gamma-C, CD132).

En algunos ejemplos, el segundo estimulador inmunitario comprende una interleucina. En algunos ejemplos, la interleucina es IL-7. En algunos ejemplos, la dosis de IL-7 es alrededor de 0,1 a 100 mcg/kg, tal como alrededor de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, o 100 mcg/kg. En algunos ejemplos, la dosis es alrededor de 1 a 50 mcg/kg, o alrededor de 3 a 30 mcg/kg.

Se pueden utilizar otros estimuladores inmunitarios. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario puede funcionar como un factor de crecimiento de glóbulos blancos. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario estimula las células madre para que produzcan granulocitos (por ejemplo, neutrófilos, eosinófilos, y basófilos) y/o monocitos. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario puede prevenir la neutropenia después de la quimioterapia. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario puede estimular la supervivencia, proliferación, diferenciación, y/o función de precursores de neutrófilos y neutrófilos maduros. En algunos ejemplos, el estimulador inmunitario funciona mediante el uso de una o más rutas de señalización, incluyendo, pero sin limitarse a, la ruta de transducción de señales de Janus cinasa (JAK), transductor de señales y activador de la transcripción (STAT), proteína cinasa activada por Ras/mitógenos (MAPK), fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K), y proteína cinasa B (Akt).

En algunas realizaciones, un inmunoestimulante o una combinación de al menos dos inmunoestimulantes de la presente solicitud se combina con un agente anticanceroso.

En algunas realizaciones, un agente anticanceroso que puede usarse en combinación con un inmunoestimulante de la presente solicitud puede incluir, pero no se limita a, antagonista del receptor de estrógeno, inhibidores de la tirosina cinasa receptora, inhibidores de la replicación de las células cancerosas, inhibidores de la señalización de las células cancerosas o silenciadores y otros inhibidores de la superficie de las células tumorales de las moléculas de señalización celular internas implicadas en el crecimiento de las células cancerosas, la resistencia de las células cancerosas a la apoptosis, y/o las metástasis de las células cancerosas.

En algunas realizaciones, se usa un inmunoestimulante de la presente solicitud en combinación con un antagonista del receptor de estrógeno (ERANT), un inhibidor del receptor de estrógeno, o un inhibidor del ligando del receptor de estrógeno.

En algunas realizaciones, se usa un inmunoestimulante de la presente solicitud en combinación con un inhibidor de la tirosina cinasa receptora. Los inhibidores de tirosina cinasas representan una clase de agentes terapéuticos o fármacos que se dirigen a tirosina cinasas receptoras y/o no receptoras en células tales como células tumorales. En ciertos casos, el inhibidor de tirosina cinasa es una forma de terapia dirigida basada en anticuerpos (por ejemplo, anticuerpo monoclonal anti-tirosina cinasa, etc.) o basada en polinucleótidos (por ejemplo, oligonucleótido antisentido de tirosina cinasa, ácido ribonucleico interferente pequeño, etc.). En algunas realizaciones, el inhibidor de tirosina cinasa es una molécula pequeña que inhibe las tirosina cinasas diana uniéndose al sitio de unión de ATP de la enzima.

En algunas realizaciones, se usa un inmunoestimulante de la presente solicitud en combinación con un inhibidor de la replicación de células cancerosas, tales como agentes anti-microtúbulos, que se refieren a sustancias químicas que bloquean la división celular al prevenir la función de los microtúbulos.

En algunas realizaciones, se usa un inmunoestimulante de la presente solicitud en combinación con un inhibidor de señalización de células cancerosas. En algunas realizaciones, el inhibidor de señalización de células cancerosas incluye agentes que pueden inhibir las respuestas de EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico), tales como anticuerpos anti-EGFR, anticuerpos anti-EGF, y moléculas que son inhibidores de EGFR; inhibidores de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular); e inhibidores del receptor de erbB2, tales como moléculas orgánicas o anticuerpos que se unen al receptor de erbB2.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso adicional se puede administrar antes, al mismo tiempo, o después de la administración de un primer estimulador inmunitario.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso comprende ipilimymab o derivados como se describe en las patentes U.S. nos 7.611.702, 7.741.345, y 8.088.770.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso comprende un inhibidor de la transducción de señales. En algunas realizaciones, el inhibidor de la transducción es un inhibidor de BRAF, tal como vemurafenib y dabrafenib. En algunas realizaciones, el inhibidor de la transducción es un inhibidor de MEK, tal como trametinib. En algunas realizaciones, el inhibidor de la transducción es un inhibidor de c-KIT, tal como imatinib.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso comprende un inhibidor de cinasa. En algunas realizaciones, el inhibidor de cinasa comprende sorafenib o derivados como se describe en la patente U.S. n° 7.235.576. El inhibidor de cinasa se puede administrar de forma continua (es decir, diariamente), varias veces al día, cada dos días, etc., y se puede administrar antes, al mismo tiempo, o después de la administración de un estimulador inmunitario de la presente, por ejemplo, en el mismo día o días o en días diferentes durante el curso del régimen de tratamiento. En ciertas realizaciones, el inhibidor de cinasa se administra en un intervalo de dosificación de, por ejemplo, alrededor de 10-2000 mg/día de administración, alrededor de 50-1000 mg/día, o alrededor de 50-800 mg/día. Las dosis diarias pueden ser, por ejemplo, alrededor de 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, etc.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso comprende un activador antineoplásico de apoptosis por choque térmico (HSAA); véase la publicación de solicitud de patente US n° 20100317583. En algunas realizaciones, e1HSAA comprende STA-4783 (elesclomol). El HSAA puede administrarse continuamente (es decir, diariamente), varias veces al día, cada dos días, etc., y puede administrarse antes, al mismo tiempo, o después de la administración de un estimulador inmunitario de la presente, por ejemplo, el mismo día o días o en días diferentes durante el curso del régimen de tratamiento. En ciertas realizaciones, el HSAA se administra en intervalos de dosificación de, por ejemplo, alrededor de 0,01-1000 mg/kg/día de administración, alrededor de 0,1-500 mg/kg/día, o alrededor de 1-200 mg/kg/día. Las dosis diarias pueden ser, por ejemplo, 25 mg/kg, 100 mg/kg, etc.

En algunas realizaciones, el agente anticanceroso comprende un inhibidor contra el antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA4); véase la publicación de solicitud de patente US n° 20100330093. En algunas realizaciones, el inhibidor es un anticuerpo contra CTLA4. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-CTLA4 incluyen, pero no se limitan a, 9H10 (EBIOSCIENCE), MDX010 (MEDAREX), 1F4 (GENETEX), BNI3 (GENETEX), Q01 (ABNOVA), A01 (ABNOVA), M08 (ABNOVA), IB8 (ABCAM), WKH203 (ABCAM), ab9984 (ABCAM), ab13486 (ABCAM), ipilimumab, ticilimumab, o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-CTLA4 se pueden administrar de forma continua (es decir, diariamente), varias veces al día, cada dos días, etc., y se pueden administrar antes, al mismo tiempo, o después de la administración de un estimulador inmunitario de la presente, por ejemplo en el mismo día o días o en días diferentes durante el curso del régimen de tratamiento. En algunas realizaciones, los anticuerpos anti-CTLA4 se administran en un intervalo de dosificación de, por ejemplo, 0,001-50 mg/kg de peso corporal del paciente por día de administración, o alrededor de 0,01-20 mg/kg, o alrededor de 1-15 mg/kg.

En ciertas realizaciones, el agente anticanceroso comprende uno o más agentes antineoplásicos. En algunas realizaciones, los agentes antineoplásicos son sustancias quimioterapéuticas. En algunas realizaciones, las sustancias quimioterapéuticas se seleccionan de agentes alquilantes, antimetabolitos, agentes antimicrotúbulos, inhibidores de topoisomerasa, y antibióticos citotóxicos.

Como se usa aquí, la expresión “agentes alquilantes” se refiere a agentes que tienen la capacidad de alquilar moléculas en un sujeto, incluyendo proteínas, ARN y ADN. Los ejemplos no limitantes de agentes alquilantes incluyen mostazas nitrogenadas, nitrosoureas, tetrazinas, aziridinas, cisplatinos y derivados, y agentes alquilantes no clásicos. Las mostazas nitrogenadas incluyen mecloretamina, ciclofosfamida, melfalán, clorambucilo, ifosfamida, y busulfán.

Como se usa aquí, el término “antimetabolitos” se refiere a una molécula que impide la síntesis de ADN, ARN, o proteínas. En algunas realizaciones, los antimetabolitos se parecen a nucleobases o nucleósidos (un nucleótido sin el grupo fosfato), pero tienen grupos químicos alterados. Estos fármacos ejercen su efecto bloqueando las enzimas necesarias para la síntesis de ADN o incorporándose al ADN o al ARN. Al inhibir las enzimas involucradas en la síntesis de ADN, previenen la mitosis debido a que el ADN no puede duplicarse. Además, después de la incorporación errónea de las moléculas en el ADN, puede ocurrir daño al ADN, y se induce la muerte celular programada (apoptosis). En algunas realizaciones, los antimetabolitos son antifolatos, fluoropirimidinas, análogos de desoxinucleósidos, y tiopurinas. En algunas realizaciones, los antimetabolitos se seleccionan de metotrexato, pemetrexed, fluorouracilo, capecitabina, citarabina, gemcitabina, decitabina, Vidaza, fludarabina, nelarabina, cladribina, clofarabina, pentostatina, tioguanina, y mercaptopurina.

Como se usa aquí, la expresión “agentes anti-microtúbulos” se refiere a sustancias químicas que bloquean la división celular al impedir la función de los microtúbulos.

En algunas realizaciones, los agentes antitumorales son inhibidores mitóticos.

Como se usa aquí, la expresión “inhibidores de la topoisomerasa” se refiere a agentes que pueden modular la actividad de la topoisomerasa I y/o la topoisomerasa II. En algunas realizaciones, el inhibidor de topoisomerasa para uso con esta invención puede ser un inhibidor de topoisomerasa I. En realizaciones adicionales de esta invención, el inhibidor de topoisomerasa es un inhibidor de topoisomerasa II.

Como se usa aquí, la expresión “antibióticos citotóxicos” incluyen, pero no se limitan a, antinomicina, bleomicina, mitomicina, plicamicina, y similares. Los ejemplos de inhibidores de tirosina cinasa incluyen, pero no se limitan a, nilotinib, imatinib, gefitinib, erlotinib, cetuximab, panitumumab, zalutumumab, nimotuzumab, matuzuman, y similares.

En algunas realizaciones, los otros agentes anticancerosos son anticuerpos monoclonales, tales como alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, gemtuzumab, rituximab, y trastuzumab; fotosensibilizadores, tales como ácido aminolevulínico, aminolevulinato de metilo, porfímero sódico, y verteporfina; y otros agentes, tales como alitretinoína, altretamina, amsacrina, anagrelida, trióxido de arsénico, asparaginasa, bexaroteno, bortezomib, celecoxib, denileucina diftitox, erlotinib, estramustina, gefitinib, hidroxicarbamida, imatinib, pentoscoltatina, masoprocol, mitotano, pegaspargasa, y tretinoína.

En algunas realizaciones, el agente antineoplásico comprende agentes antineoplásicos alquilantes (AlkAA). En algunas realizaciones, el AlkAA comprende dacarbazina (DTIC). En algunas realizaciones, un agente antineoplásico alquilante se puede administrar al paciente dentro de un intervalo de dosificación de, por ejemplo, alrededor de 700­ 1300 mg/m2/día, más preferiblemente en un intervalo de dosificación de alrededor de 800-1200 mg/m2/día, y lo más preferible alrededor de 1000 mg/m2/día.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención puede mejorar, tratar, y/o prevenir uno o más síntomas de melanoma de una manera clínicamente relevante, estadísticamente significativa, y/o persistente. En algunas realizaciones, la administración de una composición farmacéutica para uso de la presente invención proporciona un efecto terapéutico estadísticamente significativo para mejorar, tratar, y/o prevenir uno o más síntomas de melanoma. En una realización, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en uno o más estándares o criterios proporcionados por una o más agencias reguladoras en los Estados Unidos de América, por ejemplo, la FDA, u otros países. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en los resultados obtenidos de la configuración y/o procedimiento de ensayo clínico aprobado por la agencia reguladora. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención proporciona un efecto terapéutico estadísticamente significativo medido por la supervivencia sin recurrencia (RFS, el período de tiempo antes de la recurrencia o muerte). En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención proporciona un efecto terapéutico estadísticamente significativo medido por la frecuencia y/o gravedad de las metástasis.

En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en una población de pacientes de al menos 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, o más. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en los datos obtenidos a partir de la configuración ensayos clínicos aleatorizados y bienmascarados. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en datos con un valor de p menor o igual a alrededor de 0,05, 0,04, 0,03, 0,02, o 0,01. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina basándose en datos con un intervalo de confianza mayor o igual a 95%, 96%, 97%, 98% o 99%. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina tras la aprobación del ensayo clínico de fase III de los métodos proporcionados por la presente descripción, por ejemplo, por la FDA en los Estados Unidos de América.

En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina mediante un ensayo clínico aleatorizado bienmascarado de una población de pacientes de al menos 50, 100, 200, 300, o 350, tratada con una composición farmacéutica para uso de la presente invención, pero no en combinación con ningún otro agente para tratar los síntomas de la MD. En algunas realizaciones, el efecto terapéutico estadísticamente significativo se determina mediante un ensayo clínico aleatorizado de una población de pacientes de al menos 50, 100, 200, 300, o 350, y usando cualquier criterio comúnmente aceptado para la evaluación de síntomas de MD, tales como los criterios descritos aquí.

En general, el análisis estadístico puede incluir cualquier método adecuado permitido por una agencia reguladora, por ejemplo, la FDA en los Estados Unidos de América, o China o cualquier otro país. En algunas realizaciones, el análisis estadístico incluye análisis no estratificado, análisis de rangos logarítmicos, por ejemplo, de Kaplan-Meier, Jacobson-Truax, Gulliken-Lord-Novick, Edwards-Nunnally, Hageman-Arrindel y modelo lineal jerárquico (HLM), y análisis de regresión de Cox.

En algunas realizaciones, los métodos comprenden administrar el estimulador inmunitario en una fase específica de la progresión del melanoma. En algunas realizaciones, el estimulador inmunitario se administra al sujeto cuando comienza la apoptosis de las células T en el sujeto. Los métodos para detectar la apoptosis de las células T son bien conocidos, tales como los que usan FITC anexina V. En algunas realizaciones, el estimulador inmunitario se administra al sujeto cuando el sujeto experimenta el agotamiento de las células T debido a la apoptosis de las células T. Los métodos de cuantificación de células T son bien conocidos, tales como los que usan citometría de flujo. En algunas realizaciones, el estimulador inmunitario se administra al sujeto para mantener un nivel predeterminado de poblaciones de células T activas en el sujeto. En algunas realizaciones, las células T activadas son células T CD8+ y/o células T CD4+.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende una pluralidad de días de una composición farmacéutica para uso de la presente invención, y el estimulador inmunitario se puede administrar al sujeto durante al menos una parte del régimen de tratamiento.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende administrar la composición farmacéutica durante un período de alrededor de 1-10 días, alrededor de 1 -20 días, alrededor de 1 -30 días, alrededor de 1 -40 días, alrededor de 1 -50 días, alrededor de 1 -60 días, alrededor de 1-70 días, alrededor de 1 -80 días, alrededor de 1 -90 días, alrededor de 1-100 días, o más.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende además alrededor de 1 -5 días, alrededor de 5-10 días, alrededor de 10-20 días, alrededor de 20-30 días, o más de no administración de la composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se puede administrar diariamente durante 1 -10 días, alrededor de 1-20 días, alrededor de 1-30 días, alrededor de 1-40 días, alrededor de 1-50 días, alrededor de 1-60 días, alrededor de 1-70 días, alrededor de 1-80 días, alrededor de 1-90 días, alrededor de 1-100 días, o más, seguido de alrededor de 1 -5 días, alrededor de 5-10 días, alrededor de 10-20 días, alrededor de 20-30 días de no administración del péptido alfa timosina.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la invención son para uso en métodos que comprenden además monitorizar la respuesta del sujeto después de la administración para evitar reacciones adversas mediadas por el sistema inmunitario graves y/o mortales debidas a sobreactivación y proliferación. En algunas realizaciones, la administración del estimulador inmunitario se modifica, tal como se reduce, se detiene, o se termina si el paciente muestra reacciones adversas moderadas persistentes. En algunas realizaciones, la dosis se modifica si el paciente no responde en alrededor de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, o más desde la administración de la primera dosis. En algunas realizaciones, la dosis se modifica si el paciente muestra reacciones adversas graves o potencialmente mortales, que incluyen, pero no se limitan a, colitis con dolor abdominal, fiebre, íleo, o signos peritoneales; aumento de la frecuencia de las deposiciones (>7 sobre el valor inicial), incontinencia fecal, necesidad de hidratación intravenosa durante >24 horas, hemorragia gastrointestinal, y perforación gastrointestinal, AST o ALT >5X el límite superior normal (LSN) o bilirrubina total >3X LSN, síndrome de Stevens-Johnson, necrólisis epidérmica tóxica, o erupción complicada con ulceración dérmica de grosor total o manifestaciones necróticas, ampollosas, o hemorrágicas, neuropatía motora o sensorial grave, síndrome de Guillain-Barré, miastenia grave, reacciones inmunomediadas graves que implican cualquier enfermedad ocular inmunomediada del sistema orgánico que no responda a la terapia inmunosupresora tópica.

En algunas realizaciones, los métodos comprenden determinar la actividad de uno o más componentes en el sistema inmunitario antes, durante, y/o después de la administración de un estimulador inmunitario de la presente descripción. En algunas realizaciones, un régimen de tratamiento de la presente descripción puede modificarse basándose en la actividad de uno o más componentes del sistema inmunitario. En algunas realizaciones, los componentes del sistema inmunitario incluyen, pero no se limitan a, apoptosis de células T, células T CD8+, y células T CD4+. En algunas realizaciones, los métodos comprenden determinar uno o más biomarcadores que indican la actividad de la apoptosis de células T, células T CD8+, y/o células T CD4+. En algunas realizaciones, los métodos comprenden determinar la actividad de las células T efectoras. En algunas realizaciones, los métodos comprenden determinar la actividad de las células T auxiliares.

En algunas realizaciones, la actividad de uno o más componentes en el sistema inmunitario del sujeto se compara con un estándar predeterminado para decidir si una composición farmacéutica para uso de la presente invención debe administrarse al sujeto, y/o cuándo la composición farmacéutica puede administrarse al sujeto. En algunas realizaciones, el componente puede ser IL-2, receptor de IL-2, IL-7, receptor de IL-7, IL-15, receptor de IL-15, CD69, IFNg, IL-6, TNF, IL-1, GM-CSF, PD-L, PD-1, IL-10, BTLA, HVEM, IL-1 b, IL-4, IL-6, IL-10, o combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de PD-L, PD-1, IL-10, TLA, y/o HVEM es mayor en comparación con el estándar predeterminado. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de IL-2, receptor de IL-2, IL-7, receptor de IL-7, IL-15, receptor de IL-15, CD69, IFNg, IL-6, TNF, y/o GM-CSF es menor en comparación con el estándar predeterminado. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de IL-1 b es mayor en comparación con el estándar predeterminado. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de IL-4 es menor en comparación con el estándar predeterminado. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de IL-6 es mayor en comparación con el estándar predeterminado. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica para uso de la presente invención se administra a un sujeto cuando la actividad de IL-10 es mayor en comparación con el estándar predeterminado.

En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso de la invención son para uso en métodos que se combinan con uno o más tratamientos adicionales para el cáncer. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es cirugía. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es un tratamiento adyuvante. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es quimioterapia. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es inmunoterapia. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es radioterapia. En algunas realizaciones, el tratamiento adicional es una terapia dirigida, tal como la terapia celular adoptiva o la terapia génica.

En ciertas realizaciones, el sujeto es inmunodeficiente. Un sujeto inmunodeficiente (por ejemplo, un sujeto humano) exhibe una capacidad reducida para combatir enfermedades infecciosas, y/o una capacidad reducida para responder a la exposición a patógenos. Ejemplos de tales sujetos inmunodeficientes incluyen un paciente anciano, un neonato, un paciente leucémico o neutropénico, un paciente en hemodiálisis (por ejemplo, para el tratamiento de una enfermedad renal crónica), un paciente que recibe terapia inmunosupresora, un paciente con SIDA, un paciente diabético, un paciente que recibe quimioterapia o radioterapia para cáncer, inmunodeficiencia causada por un defecto genético, desnutrición, abuso de drogas, alcoholismo, u otra enfermedad o afección que comprometa el sistema inmunitario.

En ciertas realizaciones, el sujeto inmunodeprimido es anciano. A medida que los animales envejecen, su respuesta inmune se reduce, y la robustez de la respuesta inmune disminuye debido a la prevalencia de la respuesta de anticuerpos de baja afinidad. Por consiguiente, el sujeto en estas realizaciones puede ser un paciente humano mayor de 45 años o mayor de 50 años. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente humano de 60 años o más, 65 años o más, o 70 años o más.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende además determinar la respuesta del paciente durante el tratamiento. En algunas realizaciones, uno o más síntomas asociados con la infección se evalúan para determinar la respuesta del sujeto al régimen de tratamiento.

En algunas realizaciones, una composición para uso de la presente invención induce una respuesta inmunitaria rápida y fuerte a los patógenos en el sujeto o la población de sujetos. El régimen de timosina como se describe aquí proporciona al paciente una respuesta inmunitaria más robusta frente a la exposición a patógenos, que incluye, pero no se limita a, títulos de anticuerpos más altos y/o una respuesta de anticuerpos más rápida. En algunas realizaciones, el régimen proporciona tales ventajas hasta alrededor de 10 días, 20 días, 30 días, 40 días, 50 días, o más, con tan solo una, dos, tres, o cuatro administraciones.

En algunas realizaciones, se ha diagnosticado que el sujeto tiene cáncer. En algunas realizaciones, el cáncer es melanoma.

En algunas realizaciones, una composición para uso de la presente invención se administra mediante cualquier método adecuado conocido en la técnica. En algunas realizaciones, la administración de una composición para uso de la presente invención puede realizarse por vía oral, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, por instilación intranasal, por implantación, por instilación intracavitaria o intravesical, por vía intraocular, intraarterial, intralesional, transdérmica, o por aplicación a las membranas mucosas. El inhibidor se puede administrar con un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la timosina se administra a un sujeto mediante inyección (por ejemplo, intramuscular, intraarterial, intravascular, intravenosa, intraperitoneal, o subcutánea). Por “farmacéuticamente aceptable” se entiende un material que no es biológicamente o de otra manera indeseable, es decir, el material puede incorporarse en una composición farmacéutica administrada a un paciente sin causar ningún efecto biológico indeseable significativo o interactuar de manera perjudicial con cualquiera de los demás componentes de la composición en la que está contenido. Cuando la expresión “farmacéuticamente aceptable” se usa para referirse a un vehículo o excipiente farmacéutico, se da a entender que el vehículo o excipiente ha cumplido con los estándares requeridos de ensayos toxicológicos y de fabricación, o que está incluido en la Guía de Ingredientes Inactivos preparada por la Administración de Alimentos y Medicamentos de Estados unidos de América.

En algunas realizaciones, una composición para uso de la presente invención se puede proporcionar en composiciones farmacéuticas que comprenden un vehículo, tal como una vesícula de membrana artificial (que incluye un liposoma, micela lipídica, y similares), micropartículas, o microcápsulas.

Las composiciones destinadas a uso oral se pueden preparar en formas de dosificación unitarias sólidas o fluidas. La forma de dosificación unitaria fluida se puede preparar de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, y agentes conservantes, con el fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y apetitosas. Un elixir se prepara usando un vehículo hidroalcohólico (por ejemplo, etanol) con edulcorantes adecuados tales como azúcar y sacarina, junto con un agente aromatizante aromático. Las suspensiones se pueden preparar con un vehículo acuoso con la ayuda de un agente de suspensión tal como goma arábiga, tragacanto, metilcelulosa, y similares.

Las formulaciones sólidas tales como los comprimidos contienen el ingrediente activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, fosfato cálcico, o fosfato sódico; agentes granulantes y disgregantes, por ejemplo almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina, o goma arábiga; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco; y otros ingredientes convencionales tales como fosfato dicálcico, silicato de magnesio y aluminio, sulfato de calcio, almidón, lactosa, metilcelulosa, y materiales funcionalmente similares. Los comprimidos pueden no estar recubiertos, o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y la absorción en el tubo digestivo y de ese modo proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de retardo de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.

Las formulaciones para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina duras en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blandas en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida, o aceite de oliva. Las cápsulas de gelatina blandas se preparan encapsulando a máquina una suspensión del compuesto con un aceite vegetal aceptable, vaselina líquida ligera, u otro aceite inerte.

Las suspensiones acuosas contienen materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo carboxilmetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidropropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, y goma arábiga; los agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido de origen natural, por ejemplo lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo hepta-decaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitán. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o de n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes, o uno o más agentes edulcorantes, tal como sacarosa o sacarina.

Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo los ingredientes activos en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo, o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura, o alcohol cetílico. Para proporcionar preparaciones orales agradables, pueden añadirse agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y agentes aromatizantes. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.

Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante adición de agua proporcionan el ingrediente activo mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión, y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes, y colorantes.

Las composiciones farmacéuticas para uso de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida, o mezclas de éstos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas naturales, por ejemplo, goma arábiga o goma de tragacanto, fosfátidos naturales, por ejemplo, soja, lecitina, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y aromatizantes.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con la técnica conocida usando aquellos agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución inyectable estéril o una suspensión en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una disolución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, disolución de Ringer, y disolución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijos estériles se emplean convencionalmente como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo blando, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. En la disolución o suspensión inyectable también se pueden incluir adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes, y agentes amortiguadores.

En algunas realizaciones, los sistemas de administración adecuados incluyen sistemas de administración de liberación prolongada, liberación retardada, liberación sostenida, o liberación controlada. En algunas realizaciones, una composición para uso de la presente invención puede administrarse en un sistema de liberación controlada, tal como matrices de liberación sostenida. Los ejemplos no limitantes de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) como se describe por Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277 y Langer, 1982, Chem. Tech., 12:98-105), o poli(alcohol vinílico)], polilactidas (patente U.S. n° 3.773.919; EP 58.481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma etil-L-glutamato (Sidman et al., 1983, Biopolymers, 22:547-556), etileno-acetato de vinilo no degradable (Langer et al., más arriba), copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tal como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida), y poli-ácido D-(-)-3-hidroxibutírico (documento EP 133.988). En algunas realizaciones, la composición se puede administrar usando infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, un parche transdérmico, liposomas, u otros modos de administración. En una realización, se puede usar una bomba (véase Langer, más arriba; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989). En otra realización, se pueden usar materiales poliméricos. En aún otra realización, se puede colocar un sistema de liberación controlada cerca de la diana terapéutica, por ejemplo, el hígado, requiriendo así solo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, más arriba, vol. 2, p. 115-138 (1984). Otros sistemas de liberación controlada se analizan en la revisión de Langer (Science 249:1527-1533 (1990). En algunas realizaciones, la composición se puede administrar mediante inyección subcutánea.

En algunas realizaciones, la liberación de la composición se produce en ráfagas. Ejemplos de sistemas en los que se produce la liberación en ráfagas incluyen, por ejemplo, sistemas en los que la composición está atrapada en liposomas que están encapsulados en una matriz polimérica, siendo los liposomas sensibles a estímulos específicos, por ejemplo, temperatura, pH, luz, o una enzima degradante, y sistemas en los que la composición está encapsulada por una microcápsula recubierta iónicamente con una enzima que degrada el núcleo de la microcápsula.

En algunas realizaciones, la liberación de la composición es gradual/continua. Ejemplos de sistemas en los que la liberación del inhibidor es gradual y continua incluyen, por ejemplo, sistemas de erosión en los que la composición está contenida en una forma dentro de una matriz, y sistemas de efusión en los que la composición se libera a una velocidad controlada, por ejemplo, a través de un polímero. Dichos sistemas de liberación sostenida pueden estar, por ejemplo, en forma de peletes, o cápsulas.

Otras realizaciones de las composiciones para uso según la invención incorporan formas en partículas, recubrimientos protectores, inhibidores de proteasas, o potenciadores de la permeación para diversas vías de administración, tales como parenteral, pulmonar, nasal, y oral. Otras composiciones farmacéuticas y métodos para preparar composiciones farmacéuticas se conocen en la técnica, y se describen, por ejemplo, en “Remington: The Science and Practice of Pharmacy” (anteriormente “Remingtons Pharmaceutical Sciences”); Gennaro, A., Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. (2000). En algunas realizaciones, la composición farmacéutica puede incluir además un diluyente, excipiente, vehículo, o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

La dosis a administrar no está sujeta a límites definidos, pero normalmente será una cantidad eficaz, o una cantidad terapéutica/farmacéuticamente eficaz. La expresión “cantidad eficaz” se refiere a la cantidad de uno o más compuestos que produce un resultado de tratamiento deseado. Una cantidad eficaz puede estar comprendida dentro de una o más dosis, es decir, puede ser necesaria una única dosis o múltiples dosis para lograr el punto final del tratamiento deseado. La expresión “cantidad terapéutica/farmacéuticamente eficaz”, como se usa aquí, se refiere al nivel o cantidad de uno o más agentes necesarios para tratar una afección, o reducir o prevenir lesiones o daños, opcionalmente sin causar efectos secundarios negativos o adversos significativos. Normalmente será el equivalente, en una base molar, de la forma libre farmacológicamente activa producida a partir de una formulación de dosificación tras la liberación metabólica del fármaco libre activo para lograr sus efectos farmacológicos y fisiológicos deseados. En algunas realizaciones, las composiciones se pueden formular en forma de dosificación unitaria. La expresión “forma de dosificación unitaria” se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado.

En algunas realizaciones, el régimen de dosificación de timosina incluye, sin ninguna limitación, la cantidad por dosis, la frecuencia de dosificación, por ejemplo, por día, semana, o mes, cantidad total por ciclo de dosificación, intervalo de dosificación, variación de la dosificación, patrón o modificación por ciclo de dosificación, dosificación máxima acumulada, o dosificación de calentamiento, o cualquier combinación de los mismos. En algunas otras realizaciones, el régimen de dosificación de timosina incluye la frecuencia de dosificación, por ejemplo, por día o por semana.

En todavía algunas realizaciones, el régimen de dosificación incluye una cantidad predeterminada o fija por dosis en combinación con una frecuencia de tal dosis. Por ejemplo, el régimen de dosificación de timosina incluye una cantidad fija por dosis en combinación con la frecuencia de tal dosis de timosina que se administra a un sujeto.

En algunas realizaciones, las cantidades eficaces de timosina son cantidades que pueden ser unidades de dosificación dentro de un intervalo correspondiente a alrededor de 0,1-20 mg de TA1, alrededor de 1-10 mg de TA1, alrededor de 2-10 mg de TA1, alrededor de 2-7 mg de TA1, o alrededor de 3-6,5 mg de TA1, y pueden comprender alrededor de 1,6, 3,2, o 6,4 mg de TA1, o alrededor de 3,2 o 6,4 mg de TA1. Una unidad de dosificación se puede administrar una vez al día o una pluralidad de veces al día. En algunas realizaciones, TA1 se administra a un sujeto en una dosis dentro de un intervalo de alrededor de 0,5-10 mg/día. En ciertas realizaciones, la dosis de TA1 está dentro de un intervalo de alrededor de 1,5-7 mg/día, o dentro de un intervalo de alrededor de 1,6-6,4 mg/día. En ciertas realizaciones, la dosis de TA1 está dentro de un intervalo de alrededor de 1,7-10 mg/día, alrededor de 1,7-7 mg/día, o alrededor de 3-7 mg/día. En algunas realizaciones, las dosis eficaces incluyen alrededor de 1,6, 3,2, o 6,4 mg/día.

En algunas realizaciones, la administración proporciona un nivel sérico de timosina de alrededor de 0,1 a 1,0 ng/ml. En algunas realizaciones, la administración proporciona un nivel máximo en plasma después de la inyección de alrededor de 100 ng/ml. En algunas realizaciones, la vida media de TA1 en la circulación es alrededor de 2 horas.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende una pluralidad de días de una composición farmacéutica que comprende TA1, o TA1 puede administrarse al sujeto durante al menos una parte del régimen de tratamiento.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende administrar la composición farmacéutica durante un período de alrededor de 1-10 días, alrededor de 1 -20 días, alrededor de 1 -30 días, o más.

En ciertas realizaciones, el régimen de tratamiento comprende además alrededor de 1-5 días, alrededor de 5-10 días, alrededor de 10-20 días, alrededor de 20-30 días, o más de no administración de la composición farmacéutica. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica puede administrarse diariamente, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez cada cuatro días, una vez cada cinco días, una vez cada seis días, una vez a la semana, durante alrededor de 1-10 días, alrededor de 1 -20 días, o más, seguidos de alrededor de 1 -5 días, alrededor de 5-10 días de no administración de la timosina.

En algunas realizaciones, los métodos comprenden además monitorizar la respuesta del sujeto después de la administración para evitar reacciones adversas mediadas por el sistema inmunitario graves y/o mortales debido a la sobreactivación y la proliferación. En algunas realizaciones, la administración del estimulador inmunitario se modifica, tal como se reduce, se detiene, o se termina, si el paciente muestra reacciones adversas moderadas persistentes. En algunas realizaciones, la dosis se modifica si el paciente no responde en alrededor de 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 1 semana, 2 semanas, o más, desde la administración de la primera dosis.

La composición farmacéutica para uso de la presente invención también puede aliviar, reducir la gravedad, o reducir la aparición de uno o más de los síntomas asociados con el melanoma. En algunas realizaciones, tales síntomas incluyen, pero no se limitan a, los primeros signos de melanoma son cambios en la forma o el color de los lunares existentes o, en el caso del melanoma nodular, la aparición de un nuevo bulto en cualquier parte de la piel (tales lesiones deben ser derivadas sin demora a un dermatólogo). En etapas posteriores, el lunar puede picar, ulcerarse, o sangrar. Los primeros signos de melanoma incluyen, pero no se limitan a, asimetría en la forma, bordes irregulares, color abigarrado, diámetro mayor que 6 mm, y evolución con el tiempo.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica para uso de la presente invención previene la metástasis, o reduce la velocidad y/o gravedad de la metástasis.

La presente descripción también proporciona una colección de perfiles de actividad de un panel de biomarcadores. Como se usa aquí, la expresión “perfil de actividad” se refiere a un conjunto de datos que representan rasgos o características distintivas de uno o más biomarcadores. Tales rasgos o características incluyen, pero no se limitan a, abundancia del transcrito, estabilidad del transcrito, tasa de transcripción, tasa de traducción, modificación posterior a la traducción, abundancia de proteínas, estabilidad de proteínas, y/o actividad enzimática de proteínas, etc. En algunos ejemplos, el perfil de actividad comprende datos relacionados con el nivel de expresión génica de cada biomarcador. En algunos ejemplos, la colección que comprende los perfiles de actividad se obtiene de una población específica de sujetos. En algunos ejemplos, la población específica de sujetos consiste en sujetos clínicamente normales. En algunos ejemplos, la población consiste en pacientes que responden a uno o más agentes anti-melanoma de la presente descripción. En algunos ejemplos, la población consiste en pacientes que no responden a uno o más agentes anti-melanoma de la presente descripción.

En algunos ejemplos, la colección comprende perfiles de actividad que son estadísticamente homogéneos en uno o más aspectos, por ejemplo, estadísticamente homogéneos en uno o más parámetros cuantitativos o semicuantitativos que describen los rasgos y características de los perfiles de actividad. En algunos ejemplos, los parámetros cuantitativos incluyen, pero no se limitan a, abundancia del transcrito, estabilidad del transcrito, tasa de transcripción, tasa de traducción, modificación posterior a la traducción, abundancia de proteínas, estabilidad de proteínas, y/o actividad enzimática de proteínas, etc. El hecho de que un grupo de perfiles de actividad sea estadísticamente homogéneo o no en uno o más aspectos puede determinarse mediante cualquier ensayo estadístico y/o algoritmo adecuados conocidos por un experto en la técnica.

En algunos ejemplos, uno o más de los biomarcadores aumentan su actividad en respuesta al tratamiento. En algunos ejemplos, uno o más de los biomarcadores disminuyen su actividad en respuesta al tratamiento. En algunos ejemplos, uno o más de los biomarcadores mantienen su actividad en respuesta al tratamiento. Como se usa aquí, la actividad de un biomarcador puede ser un parámetro a nivel de ADN genómico, nivel transcripcional, nivel postranscripcional, nivel traduccional, nivel postraduccional, que incluye, pero no se limita a, actividad génica, actividad de ARN, y actividad proteica. La actividad génica puede ser el número de copias del gen, el número de amplificación del gen, o la actividad promotora, etc. La actividad de ARN puede ser la abundancia de ARNm, la tasa de síntesis, y/o la estabilidad, etc. La actividad de la proteína puede ser la abundancia de la proteína, la tasa de síntesis, la estabilidad, la actividad enzimática, la tasa de fosforilación, modificaciones, actividad de unión, etc.

Como se usa aquí, cuando el nivel de un biomarcador se acerca al nivel de un nivel estándar predeterminado, se denomina normalización.

Como se usa aquí, cuando el nivel de un biomarcador reduce su velocidad de alejarse del nivel de un nivel estándar predeterminado, se denomina estabilización.

En algunos ejemplos, los perfiles de actividad de uno o más biomarcadores de la presente descripción en un sujeto se determinan y comparan con un nivel estándar predeterminado. Como se usa aquí, la expresión “nivel estándar predeterminado” o “perfiles de actividad predeterminados” se refiere a datos o conjuntos de datos estandarizados que representan los rasgos o características representativos promedio de uno o más biomarcadores en una población específica. Dichos rasgos o características incluyen, pero no se limitan a, número de copias de genes, amplificación de genes, abundancia de transcritos, estabilidad de transcritos, tasa de transcripción, tasa de traducción, modificación postraducción, abundancia de proteínas, estabilidad de proteínas, y/o actividad enzimática de proteínas, etc. En algunos ejemplos, la población específica de sujetos consiste en alrededor de 5, alrededor de 10, alrededor de 20, alrededor de 50, alrededor de 100, alrededor de 200, alrededor de 300, alrededor de 400, alrededor de 500, alrededor de 1000, alrededor de 5000, alrededor de 10K, o más sujetos individuales. El perfil de actividad predeterminado pueden ser datos o conjunto de datos estandarizados recopilados antes, durante, o después de que la población específica de sujetos haya estado expuesta a un fármaco. En algunos ejemplos, la población específica está formada por sujetos que responden a un fármaco determinado.

En algunos ejemplos, un sujeto “responde” a un fármaco para tratar cuando el nivel de uno o más de los biomarcadores de la presente descripción aumenta o disminuye con respecto a un nivel estándar predeterminado cuando el sujeto se expone a un fármaco, o cuando el fármaco modifica la velocidad de los cambios de nivel de uno o más biomarcadores de la presente descripción en comparación con un placebo. Para conocer los métodos relacionados con la detección, cuantificación y comparación de los niveles de biomarcadores, véanse, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology, Ed. Ausubel, Frederick M. (2010); Current Protocols in Protein Science Last, Ed. Coligan, John E., et al. (2010); Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Ed. Egli, Martin (2010); Current Protocols in Bioinformatics, Ed. Baxevanis, Andreas D. (2010); y Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercera Edición, Sambrook, Joseph (2001).

En ciertos ejemplos, al medir biomarcadores u otros indicadores de tratamiento, una cantidad o nivel “aumentado” o “disminuido” puede incluir una cantidad “estadísticamente significativa”. Por lo general, un resultado se denomina estadísticamente significativo si es poco probable que ocurra por casualidad. El nivel de significancia de un ensayo o resultado se relaciona tradicionalmente con la cantidad de evidencia requerida para aceptar que es poco probable que un evento haya surgido por casualidad. En ciertos casos, la significancia estadística puede definirse como la probabilidad de tomar una decisión para rechazar la hipótesis nula cuando la hipótesis nula es realmente verdadera (una decisión conocida como error Tipo I, o “determinación falsa positiva”). Esta decisión se toma a menudo usando el valor p: si el valor p es menor que el nivel de significancia, entonces se rechaza la hipótesis nula. Cuanto menor sea el valor p, más significativo será el resultado. Los factores de Bayes también se pueden utilizar para determinar la significancia estadística (véase, por ejemplo, Goodman S., Ann Intern Med. 130:1005-13, 1999). En algunos ejemplos, una cantidad o nivel “aumentado” o “disminuido” es alrededor de 1,1x, 1,2x, 1,3x, 1,4x, 1,5x, 2x, 2,5x, 3x, 3,5x, 4x, 4,5x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x, 15x, 20x, 25x, 30x, 40x, o 50x más o menos la cantidad de un estándar predeterminado, o la cantidad de un punto de tiempo determinado con respecto a un punto de tiempo previo o anterior.

También se proporcionan métodos para monitorizar la eficacia de un agente activo en el tratamiento del cáncer. Estos métodos incluyen determinar la actividad de uno o más biomarcadores de la presente descripción en una muestra biológica de un paciente, y proporcionar esa información con respecto a los biomarcadores a una entidad que proporciona una determinación o evaluación del tratamiento o eficacia basada en información de biomarcadores. En algunas realizaciones, la actividad del biomarcador se determina durante o después de tomar al menos una dosis del agente activo de la presente invención. En algunas realizaciones, la entidad puede proporcionar una determinación de que el tratamiento con el agente activo debe usarse o debe continuarse, si el sujeto humano cumple uno o más criterios de selección que se describen a continuación:

• El sujeto humano tiene un nivel reducido de actividad de IL-1 b en comparación con el del mismo sujeto humano antes del tratamiento, y/o tiene una normalización o estabilización de la actividad de IL-1 b en comparación con el de un sujeto humano o un grupo de sujetos humanos que responden a un tratamiento de la presente invención;

• El sujeto humano tiene un nivel aumentado de actividad de IL-4 en comparación con el del mismo sujeto humano antes del tratamiento, y/o tiene una normalización o estabilización de la actividad de IL-4 en comparación con el de un sujeto humano o un grupo de sujetos humanos que responden a un tratamiento de la presente invención;

• El sujeto humano tiene un nivel disminuido de actividad de IL-6 en comparación con el del mismo sujeto humano antes del tratamiento, y/o tiene una normalización o estabilización de la actividad de IL-1 b en comparación con el de un sujeto humano o un grupo de sujetos humanos que responden a un tratamiento de la presente invención;

• El sujeto humano tiene un nivel reducido de actividad de IL-10 en comparación con el del mismo sujeto humano antes del tratamiento, y/o tiene una normalización o estabilización de la actividad de IL-1 b en comparación con el de un sujeto humano o un grupo de sujetos humanos que responden a un tratamiento de la presente invención.

Los métodos para detectar los niveles de ácidos nucleicos, tales como ARN o ADN, se han descrito bien y son bien conocidos por los expertos en la técnica. Los métodos para detectar ARN pueden incluir, pero no se limitan a, RT-PCR, análisis de transferencia Northern, análisis de expresión génica, análisis de micromatrices, análisis de chips de expresión génica, técnicas de hibridación (incluyendo FISH), matrices de expresión BeadChip, y cromatografía, así como cualquier otra técnica conocida en la técnica. Los métodos para detectar ADN pueden incluir, pero no se limitan a, PCR, PCR en tiempo real, PCR digital, hibridación (incluyendo FISH), análisis de micromatrices, ensayos de detección de SNP, ensayos de genotipado de SNP, y cromatografía, así como cualquier otra técnica conocida en la técnica.

Los métodos para detectar proteínas y polipéptidos pueden incluir, pero no se limitan a, determinación espectrofotométrica de la concentración de proteínas, análisis cuantitativo de aminoácidos, ensayos de concentración de proteínas, ensayos de cromatografía, análisis de transferencia Western, electroforesis en gel (seguida de procedimientos de tinción que incluyen, pero no se limitan a, azul de Coomassie, tinción con plata, Syber Green, Syber Gold), hibridación, ensayos de citocinas multiplex, inmunoensayos, ELISA, ensayos de proteínas de ácido bicinconínico (BCA), ensayos de proteínas de Bradford, y ensayos de proteínas de Lowry, así como cualquier otra técnica conocida en la técnica. La detección de proteínas también puede incluir la detección de los niveles de proteínas estables o activas, y también pueden emplearse métodos tales como ensayos cinéticos, ensayos de cinasas, ensayos enzimáticos, y ensayos de modificación posterior a la traducción (por ejemplo, ensayos para determinar el estado de fosforilación y glicosilación).

Para conocer más métodos relacionados con la detección, cuantificación y comparación de los niveles de biomarcadores, véanse, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology, Ed. Ausubel, Frederick M. (2010); Current Protocols in Protein Science Last, Ed. Coligan, John E., et al. (2010); Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Ed. Egli, Martin (2010); Current Protocols in Bioinformatics, Ed. Baxevanis, Andreas D. (2010); y Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercera Edición, Sambrook, Joseph (2001).

En algunos ejemplos, la información relativa a los biomarcadores se obtiene de uno o más ensayos. El ensayo puede ser realizado por el propio sujeto, por un médico, por una enfermera, por un laboratorio de ensayo, por un proveedor de atención médica, o por cualquier otra parte capaz de realizar el ensayo. Los resultados del ensayo que contienen la información del biomarcador pueden ser analizados por la misma parte o por una segunda parte, tal como el propio sujeto, un médico, una enfermera, un laboratorio de ensayo, un proveedor de atención médica, un médico, un personal del ensayo clínico, un hospital, un laboratorio, un instituto de investigación, o cualquier otra parte capaz de analizar el ensayo para determinar si el sujeto responde al fármaco.

Los siguientes ejemplos ilustran diversos aspectos de la invención. Por supuesto, debe entenderse que los ejemplos son meramente ilustrativos de solo ciertas realizaciones de la invención.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Tratamiento del melanoma mediante timosina en el modelo de melanoma murino B16F10 subcutáneo

El modelo de melanoma murino B16F10 deriva de la línea MB16 por selección sucesiva de clones metastásicos. Se generaron B16F1 a B16F10 (ATCC Número CRL-6475™), pasando F10 en ratones 10 veces, y de este modo es muy metastásico. Este modelo es ampliamente utilizado en el estudio de los mecanismos de metástasis, evaluando la terapéutica del cáncer. También es uno de los modelos singénicos más comunes para la inmunoterapia contra el cáncer. Los modelos de metástasis subcutáneos y experimentales son muy útiles.

Para estudiar el efecto de la timosina en el tratamiento del melanoma, se administró péptido de timosina alfa (ZADAXIN) a ratones inoculados con B16F10 en dos estudios separados:

Tabla 1. Diseño de estudio n° 1

Tabla 2. Diseño del estudio n° 2

Los volúmenes de los tumores y los pesos corporales se monitorizaron durante todo el estudio. Se administró cisplatino al grupo de control positivo en un estudio de control histórico separado. Al grupo de control negativo se le administró vehículo solo en todos los estudios.

Los ratones B16F10 tratados con cisplatino muestran típicamente un volumen tumoral reducido (FIG. 1A y Tabla 3). Sin embargo, estos ratones también tenían un peso corporal significativamente reducido como resultado de la toxicidad del cisplatino (FIG. 1B).

Tabla 3 Tamaño del tumor en ratones B16F10 tratados con cisplatino Tratamiento 3 Tamaño del tumor (mm3) el día 28 Valor T/C (%) el Día 28 T-C (días) 3 a 800 mm3 Valor P Vehículo 2904 ± 538 -- -- --Cisplatino 862 ± 233 30 > 4 0,006 Los animales con tumor derivado de B16F10, a los que se les administró ZADAXIN™ (timalfasina) en todas las dosis ensayadas, mostraron un crecimiento tumoral reducido en comparación con el grupo tratado con vehículo (FIG. 2 y FIG. 3).

En el estudio I, el tamaño medio del tumor del grupo tratado con vehículo (Grupo1) alcanzó 1.995 mm3 el día 14 después de la inoculación del tumor. El tratamiento con TA1 a 0,2 mg/kg y 2 mg/kg produjo una actividad antitumoral significativa el día 14 después de la inoculación del tumor. El tamaño medio del tumor fue 1.148 mm3 (valor T/C = 57,56%, valor p <0,001) y 1.384 mm3 (valor T/C = 69,36%, valor p = 0,006), con un retraso en el crecimiento del tumor de 1,5 y 0,5 días respectivamente con un tamaño de tumor de 1.140 mm3. El tratamiento con TA1 a 6 mg/kg puede retrasar el crecimiento tumoral, pero la disminución no alcanzó una diferencia significativa (valor p = 0,146). Además, TA1 a 0,2 mg/kg produjo una mejor actividad antitumoral que TA1 a 6 mg/kg.

Además, no se observaron cambios de peso significativos por grupo. Por lo tanto, la timosina se puede usar para tratar el melanoma.

Ejemplo 2

Estudios de biomarcadores

En los estudios descritos anteriormente, se evaluó un grupo de biomarcadores potenciales, incluyendo IL-7, I1-18, TREM-1, IFN-a, procalcitonina, GM-CSF, IL-1a, IFN-g, TNF a, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, e IL-1 p. La concentración de algunos biomarcadores particulares en ratones tratados con vehículo o ZADAXIN™ (timalfasina) se muestra en la FIG. 4A a 4D. Los resultados indican que estos biomarcadores pueden usarse para evaluar la eficacia de un tratamiento contra el cáncer (ya sea un agente individual o terapias de combinación), para seleccionar pacientes para un tratamiento eficaz, y para optimizar la dosis y/o el régimen para estudios clínicos o tratamiento.

En otro estudio, se analizaron mediante ELISA 8 citocinas (IFNg, IL-1 p, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, TNFa) en muestras de suero del modelo de melanoma murino B16F10 sistémico en ratones C57BL/6 con diferentes tratamientos. Los tratamientos fueron:

1. Vehículo BIDX10 s.c.

2. Anticuerpo anti-PD-1 100 ug/ratón bisem.X2 i.p.

3. TA1 0,486 ug/ratón bidX10 s.c.

4. TA1 4,86 ug/ratón bidX10 s.c.

5. TA1 48,6 ug/ratón bidX10 s.c.

6. Anticuerpo anti-PD-1 TA1 (100 ug/ratón 0,486 ug/ratón; bisem.X2 bidX10 i.p. s.c.)

7. Anticuerpo anti-PD-1 TA1 (100 ug/ratón 4,86 ug/ratón; bisem.X2 bidX10 i.p. s.c.)

8. Anticuerpo anti-PD-1 TA1 (100 ug/ratón 48,6 ug/ratón; bisem.X2 bidX10 i.p. s.c.)

9. Ciclofosfomida 300 mg/kg QDX1 i.p.

La concentración de estos biomarcadores en ratones después del tratamiento se muestra en la FIG. 4E a 4L. Los resultados indican que estos biomarcadores podrían vincularse al mecanismo de acción de la timosina, o utilizarse como marcadores farmacodinámicos.

Ejemplo 3

Tratamiento del melanoma con timosina en el modelo de melanoma metastásico de pulmón de ratón B16F10

Materiales y métodos

Ratones: Los ratones hembra B6D2F1/Crl (Charles River) tenían 9 semanas de edad en el día D1 del estudio, y tenían un intervalo de peso corporal de 19,2 a 24,5 g. Los animales fueron alimentados a voluntad con agua (ósmosis inversa, 1 ppm de Cl) y NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet® que consiste en 18,0% de proteína bruta, 5,0% de grasa bruta, y 5,0% de fibra bruta. Los ratones se alojaron lechos Enrich-o’cobs™ irradiados en microaisladores estáticos en un ciclo de luz de 12 horas a 20-22°C (68-72°F) y 40-60% de humedad. DRS-NC cumple específicamente con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio con respecto a la contención, la cría, los procedimientos quirúrgicos, la regulación de alimentos y líquidos, y el cuidado veterinario. El programa de cuidado y uso de animales en DRS-NC está acreditado por la Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International, que asegura el cumplimiento de los estándares aceptados para el cuidado y uso de animales de laboratorio.

Implantación in vivo: Los ratones de ensayo se clasificaron en cinco grupos de tratamiento (n=10), como se muestra en la Tabla 1. Se incluyó un sexto grupo de animales como el grupo “mirar-ver” (n = 9). Las células B16-F10 se recogieron durante el crecimiento en fase logarítmica, y se resuspendieron a una concentración de 7,5 x 10⁵ células/ml en PBS. Cada ratón recibió una inyección intravenosa (i.v.) en la vena de la cola de 1,5 x 10⁵ células B16-F10 (suspensión celular de 0,2 ml) en D1 del estudio.

Artículos de ensayo: péptido anti-PD1 alfa (codificado como anti-PD-1-SCE, lote n° 5177/0214) y péptido timosina alfa-1 (timalfasina, nombre de código SR1, lote n° 1402-224). DRS-NC asignó nombres de código con el fin de mantener la confidencialidad durante los ensayos en el propio laboratorio. Como control de referencia, se incluyó ciclofosfamida (Baxter Pharmaceutical, lote n° 2E718F, recibido el 7/6/2013). SR1 se proporcionó como un polvo liofilizado (90,7% de base libre), y se disolvió en PBS para producir una disolución de dosificación de 22,051 mg/ml, que proporcionó una dosis de 220,51 mg/kg en un volumen de dosificación de 10 ml/kg. La dosis no se ajustó por peso corporal. El anticuerpo anti-PD-1-SCE se diluyó en PBS para producir una disolución de dosificación de 10,0 mg/ml, que proporcionó una dosis de 100 mg/kg en un volumen de dosificación de 10 ml/kg. La dosis no se ajustó por peso corporal. Se diluyó ciclofosfamida en disolución salina para producir una disolución de dosificación de 15,0 mg/ml, que proporcionó una dosis de 300 mg/kg en un volumen de dosificación de 15 ml/kg. La dosis se ajustó por peso corporal. La ciclofosfamida se preparó una vez al comienzo del estudio, y se almacenó a 4°C.

Tratamiento: La Tabla 4A presenta un resumen del plan de tratamiento:

Los animales del Grupo 1 recibieron PBS s.c. (bid hasta el final), y sirvieron como el grupo de tratamiento de control.

El Grupo 2 recibió SR1 s.c. a 220,51 mg/kg (200 mg/kg de base libre) (bid hasta el final).

El Grupo 3 recibió anti-PD-1-SCE administrado i.p. a 100 mg/kg (bisem. x3).

El Grupo 4 recibió tanto SR1 como anti-PD-1-SCE administrados a 220,51 mg/kg s.c. (bid hasta el final) y 100 mg/kg i.p. (bisem. x3), respectivamente.

El Grupo 5 se estableció como grupo de control positivo, y recibió ciclofosfamida a 300 mg/kg i.p. (qd x 1),

El Grupo 6 se estableció como los animales de “mirar-ver” y no recibió tratamiento.

Punto final: El punto final del estudio B16MET-e117 se definió como 100 metástasis por conjunto pulmonar. Se sacrificaron dos a tres animales del grupo “mirar-ver” en intervalos de tres días, comenzando el Día 9, y se contaron los focos metastásicos pulmonares. Los recuentos totales se obtuvieron sumando el número de focos contados en los lóbulos superior, medio, inferior, y poscava del pulmón derecho al número de focos contados en el pulmón izquierdo. El estudio terminó el D16, y todos los animales se sacrificaron y se contaron sus metástasis. El porcentaje de inhibición se definió como la diferencia entre el número de focos metastásicos del grupo de control designado y el número de focos metastásicos del grupo tratado con fármaco, expresado como un porcentaje del número de focos metastásicos del grupo de control designado:

% de inhibición = [1-(#Focos^{tratado con fármaco}/#Focos^control)] x 100

Toxicidad: Los animales se pesaron diariamente durante los primeros cinco días del estudio, y posteriormente dos veces por semana. Los ratones se observaron con frecuencia para detectar signos evidentes de cualquier efecto secundario adverso relacionado con el tratamiento, y se registraron los signos clínicos de toxicidad cuando se observaron. La toxicidad aceptable se definió como una pérdida de peso corporal media del grupo de menos de 20% durante el estudio y no más de una muerte relacionada con el tratamiento (TR) entre diez animales tratados. Cualquier régimen de dosificación que dé como resultado una mayor toxicidad se considera por encima de la dosis máxima tolerada (MTD). Una muerte se clasifica como TR si es atribuible a efectos secundarios del tratamiento según lo evidencian los signos clínicos y/o la necropsia, o si se debe a causas desconocidas durante el período de dosificación o dentro de los catorce días posteriores a la última dosis. Una muerte se clasifica como no relacionada con el tratamiento (NTR) si no hay pruebas de que la muerte esté relacionada con los efectos secundarios del tratamiento. Análisis estadístico y gráfico: Se utilizó Prism (GraphPad) para Windows 6.02 para todas las presentaciones gráficas y análisis estadísticos. La prueba de la U de Mann-Whitney, para el análisis de las medianas, se utilizó para determinar la significancia estadística entre los focos metastásicos B16F10 del D16 en los grupos de control y tratados. Se realizaron análisis estadísticos de dos colas a P = 0,05. Se construyó un diagrama de “caja y bigotes” para mostrar la distribución de focos metastásicos enumerados para cada grupo de tratamiento en el D16.

Prism da a conocer resultados como no significativos (ns) a P > 0,05, significativos (simbolizados por “*”) a 0,01 < P < 0,05, muy significativos (“**”) a 0,001 < P < 0,01, y extremadamente significativos (“***”) a P < 0,001. Puesto que la prueba de U de Mann-Whitney es un ensayo de significancia y no proporciona una estimación del tamaño de la diferencia entre los grupos, todos los niveles de significancia se dan a conocer como significativos o no significativos en la Tabla 4B.

Procedimientos:

Implante de células (1) día antes del inicio del estudio.

Establezca 59 ratones B6D2F1 hembras CR con 1,5x105 células tumorales B16MET en 0% de Matrigel iv vena de la cola.

El volumen de inyección celular es 0,2 ml/ratón.

Edad en la fecha de inicio: 8 a 12 semanas.

Peso corporal: 5/2, después bisemanal hasta el final

Recuento de metástasis: en el punto final

Informe cualquier reacción adversa o muerte a RM, SD, RD o SH inmediatamente.

Cualquier animal individual con una sola observación de > 30% de pérdida de peso corporal o tres medidas consecutivas de > 25% de pérdida de peso corporal será sacrificado.

Cualquier grupo con una pérdida de peso corporal media de > 20% o > 10% de mortalidad dejará de dosificarse. No se sacrifica al grupo y se permite la recuperación. Dentro de un grupo con > 20% de pérdida de peso, los animales que alcancen el punto final de pérdida de peso corporal individual serán sacrificados. Si la pérdida de peso corporal relacionada con el tratamiento de grupo se recupera dentro del 10% de los pesos originales, la dosificación puede reanudarse con una dosis más baja o con un esquema de dosificación menos frecuente. Se pueden permitir excepciones a la recuperación del % del peso corporal sin tratamiento según el caso.

• Punto final: alrededor de 100 metástasis por conjunto de pulmones.

• Eutanasiar animales moribundos según CRL-NC SOP #687. Los animales que muestren signos de dificultad respiratoria también se sacrificarán como se señala anteriormente.

Cultivo de células tumorales: Se cultivaron células B16MET hasta la fase logarítmica media en medio RPMI 1640 que contenía suero bovino fetal al 10%, HEPES 10 mM, glutamina 2 mM, penicilina G sódica 100 unidades/ml, bicarbonato sódico al 0,075%, gentamicina 25 mg/ml, y sulfato de estreptomicina 100 mg/ml. Las células tumorales se cultivaron en matraces de cultivo de tejidos en una incubadora humidificada a 37°C, en una atmósfera de CO2 al 5% y aire al 95%. Se desarrolló el modelo de melanoma metastásico de pulmón de ratón B16F10. Se cultivaron alrededor de 1,5 x 105 células B16-F10 (0,2 ml de suspensión celular) in vitro, y se administraron por vía intravenosa (Día 0) a ratones hembra B6D2F1/Crl. El Día 1 se inició la dosificación con los agentes de ensayo.

Se estableció un grupo “mirar-ver” - no tratado - para evaluar, durante un período de 15 días, el número de metástasis. El Día 9, tres animales del grupo “mirar-ver” se sacrificaron, y se contaron las metástasis pulmonares (nuestros datos históricos indican que en este momento podríamos encontrar alrededor de > 50 metástasis en el pulmón de ratones no tratados). Tres días después se examinaron otros tres ratones. Cuando el recuento de metástasis alcanzó aproximadamente 50-100 recuentos, todos los grupos del estudio se sacrificaron, y se establecieron los recuentos finales de metástasis. El recuento del grupo “mirar-ver” no se incluyó en el análisis de eficacia final. El recuento de 50­ 100 metástasis se definió como el número diana debido a que la mayoría de las metástasis individuales se podían contar fácilmente, y era menos probable que las metástasis se fusionaran entre sí en el recuento. Véase la FIG. 5.

En un estudio (Estudio I), se administró vehículo (control negativo), ciclofosfamida (control positivo), TA1, anti-PD-1, o TA1 anti-PD-1 a ratones, y se evaluó el recuento de metástasis. El resultado se da en la Tabla 4B a continuación, y en la FIG. 6A y FIG. 6B.

Tabla 4A Diseño del Estudio 1

El porcentaje de cambios en el peso corporal medio del grupo desde el Día 1 en ratones B16MET-e117 se muestra en la FIG. 6B.

El resultado indica que la timosina disminuye las metástasis al pulmón en el modelo de melanoma, pero no hay un efecto aditivo con anti-PD-1 en estas dosis particulares.

En un segundo estudio (Estudio II), se administró vehículo (control negativo), ciclofosfamida (control positivo), TA1, anti-PD-1, o TA1 anti-PD-1 a ratones a diferentes dosis. El diseño del estudio y el resultado se dan en la Tabla 5A y la Tabla 5B a continuación, y en la FIG. 7A a la FIG. 7C.

Plan de tratamiento para el Estudio II: En este estudio, se dosificaron trece grupos de ratones hembra B6D2F1 de acuerdo con el protocolo de la Tabla 5A. El SR1 y el vehículo se administraron cada uno por vía subcutánea (s.c.) dos veces al día durante la duración del estudio (bid hasta el final). El anticuerpo anti-PD1 se administró por vía intraperitoneal (i.p.) dos veces por semana durante dos semanas (bisem. x 2). Se administró una única dosis de ciclofosfamida i.p. (qd x 1). La Tabla 5A presenta un resumen del plan de tratamiento.

Los animales del Grupo 1 recibieron PBS, y sirvieron como el grupo de tratamiento de control.

Los Grupos 2 - 4 recibieron SR1 a 0,4862, 4,862 y 48,62 mg/ratón (0,441, 4,41 y 44,1 mg de base libre/ratón), respectivamente.

Los Grupos 5 y 6 recibieron anti-PD-1 administrado a 33,33 y 100 mg/ratón, respectivamente.

Los Grupos 7 - 9 recibieron SR1 a 0,4862, 4,862 y 48,62 mg/ratón en combinación con anti-PD-1 administrado a 33 mg/ratón, respectivamente

Los Grupos 10 - 12 recibieron SR1 a 0,4862, 4,862 y 48,62 mg/ratón en combinación con anti-PD-1 administrado a 100 mg/ratón, respectivamente

El Grupo 13 se estableció como el grupo de control positivo, y recibió ciclofosfamida a 300 mg/kg.

El Grupo 14 se estableció como los animales de “mirar-ver”, y no recibió tratamiento.

Tabla 5A Diseño del Estudio II

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento del cáncer o una metástasis del mismo en un sujeto, en la que la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un primer estimulador inmunitario y un segundo estimulador inmunitario, en la que el primer estimulador inmunitario es un péptido de alfa timosina, y el segundo estimulador inmunitario es un inhibidor de PD-1.

2. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el sujeto es un ser humano.

3. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que la composición comprende además un agente anticanceroso adicional.

4. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el péptido de alfa timosina se administra al sujeto durante el tratamiento a una dosis dentro de un intervalo de 0,1-10 mg/día.

5. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el péptido de alfa timosina es timosina alfa 1 (TA1).

6. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 5, que comprende la administración de TA1 diariamente durante un período de alrededor de 1-10 días, seguido de alrededor de 1-5 días de no administración de TA1.

7. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 6, en la que TA1 se administra diariamente durante alrededor de 3-5 días, seguido de alrededor de 2-4 días de no administración de TA1.

8. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 7, en la que TA1 se administra diariamente durante alrededor de 4 días, seguido de alrededor de 3 días de no administración de TA1.

9. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 3, en la que la combinación comprende además un inhibidor de cinasa, un activador antineoplásico de apoptosis por choque térmico (HSAA), un anticuerpo contra el antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA4), un agente antineoplásico alquilante (AlkAA), o un agente quimioterapéutico.

10. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que el cáncer es melanoma.