ES2873362T3 - Dispositivo microfluídico y método para la purificación de ácidos nucleicos - Google Patents

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Abstract

Un dispositivo microfluídico que comprende: (a) uno o más depósitos; (b) uno o más recipientes receptores; (c) una cavidad de purificación configurada para ser desmontable del dispositivo microfluídico, comprendiendo la cavidad de purificación: (i) un primer puerto que permite la comunicación de gas de la cavidad de purificación con un generador de vacío, a través de una primera vía de flujo; (ii) un segundo puerto que permite la comunicación de líquido de la cavidad de purificación con el uno o más depósitos, a través de una segunda vía de flujo; y (iii) un tercer puerto que permite la comunicación de gas y líquido de la cavidad de purificación con tanto el uno o más recipientes receptores como un generador de vacío, a través de una tercera vía de flujo; y (d) un filtro de membrana configurado para purificar analitos biológicos o químicos a partir de una muestra biológica compleja y colocado directamente sobre el tercer puerto de manera que el fluido que entra en la cavidad de purificación a través del primer y/o segundo puerto y sale de la cavidad de purificación a través del tercer puerto fluya a través del filtro de membrana, en donde la cavidad de purificación comprende un elemento de sujeción configurado para fijar la posición del filtro de membrana y la cavidad de purificación en el dispositivo microfluídico.

Description

DESCRIPCIÓN
Dispositivo microfluídico y método para la purificación de ácidos nucleicos
Introducción
El método de purificación de ácidos nucleicos original basado en la afinidad del ADN y el ARN por las superficies de sílice (adsorción en fase sólida) fue descrito por Boom et al. La atracción de los ácidos nucleicos por superficies de sílice es promovida por una alta concentración de sales caotrópicas (típicamente isotiocianato de guanidina o clorhidrato de guanidina). El método de Boom utiliza una solución de sal caotrópica para desnaturalizar la muestra biológica y hacerla pasar por el filtro utilizando fuerzas centrífugas para promover la adsorción de ADN y ARN sobre la superficie de sílice. Una vez que los ácidos nucleicos se unen al filtro, se realizan uno o más lavados con tampones etanólicos para retirar las sales caotrópicas y otras impurezas biológicas mientras se mantienen unidos los ácidos nucleicos (las sales caotrópicas son perjudiciales para la mayoría de los ácidos nucleicos en aplicaciones posteriores). Como etapa final, después de deshacerse del etanol (con un centrifugado de alta velocidad), los ácidos nucleicos deben rehidratarse utilizando un tampón de elución (agua o tampón bajo en sal). La rehidratación promueve la separación del ADN y el ARN de la superficie de sílice y un centrifugado final produce una solución en donde se resuspenden los ácidos nucleicos purificados.
En otra parte se han descrito variaciones de este protocolo, utilizando la fuerza centrífuga o el vacío como fuerza impulsora del flujo de líquido. Sin embargo, todos estos métodos son bastante complicados y requieren mucho tiempo, comprenden varias etapas de pipeteo y la aplicación secuencial de diferentes fuerzas impulsoras para controlar el flujo de líquido, lo que normalmente produce una alta variación de rendimiento entre los procesos de purificación repetidos.
Por ejemplo, en una ejecución manual del protocolo de purificación por vacío, el proceso de purificación consiste en 5 etapas principales correspondientes al flujo de 5 líquidos diferentes a través del filtro de sílice, es decir: mezcla de muestra que contiene los ácidos nucleicos, tampón de lavado 1 y tampón de lavado 2 para enjuagar el filtro y eliminar cualquier cantidad de contaminantes, aire para secar el filtro y eliminar cualquier traza de contaminantes volátiles, y tampón de elución para liberar los ácidos nucleicos del filtro, de modo que los ácidos nucleicos estén más disponibles para aplicaciones posteriores (tal como la amplificación y detección por qPCR). Al final de cada etapa, la succión por vacío se mantiene durante uno o dos minutos incluso después de que el volumen del líquido haya fluido a través del filtro con el fin de garantizar que casi no quede líquido dentro de las hendiduras del filtro antes de pipetear el siguiente líquido.
La reproducibilidad del rendimiento de ácidos nucleicos depende de la posibilidad de reproducir el tiempo de contacto de la muestra y los tampones con el filtro y la magnitud y distribución del flujo de líquido, que depende de la habilidad del operador.
El documento US-A-2013/0288234 divulga un dispositivo para preparar una muestra de fluido.
Por tanto, un objetivo de la invención es proporcionar un dispositivo de purificación que proporcione resultados de purificación reproducibles independientemente del operador individual.
Esto se logra mediante un dispositivo microfluídico y un método para purificar analitos biológicos o químicos a partir de una muestra biológica compleja. El dispositivo microfluídico comprende una cámara en donde está incrustado un filtro, varios depósitos y válvulas. El dispositivo se puede conectar con bombas externas que son operadas por un instrumento automatizado. Por tanto, el dispositivo y el método del presente documento proporcionan una implementación automatizada de principio a fin del método clásico de purificación de ácidos nucleicos.
Descripción
La presente invención se refiere a un dispositivo microfluídico como se define en la reivindicación 1 adjunta.
La invención divulgada en el presente documento también se refiere a un método para purificar un analito biológico o químico a partir de una muestra biológica compleja utilizando el dispositivo microfluídico divulgado en el presente documento, el método comprende las etapa de: (a) permitir que una muestra líquida entre en la cámara a través del segundo puerto aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y el primer depósito, y abriendo una primera válvula en la primera vía de flujo y una segunda válvula en la segunda vía de flujo, y cerrando una tercera válvula en la tercera vía de flujo; (b) permitir que la muestra fluya a través del filtro de membrana dentro de un primer recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho primer recipiente receptor y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica y abriendo la tercera válvula; y (c) eluir el analito del filtro de membrana aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y uno de los recipientes receptores, y abriendo la primera y la segunda válvula y cerrando la tercera válvula.
Descripción detallada
En principio, la purificación puede basarse en cualquier efecto ampliamente conocido en cromatografía (por ejemplo, desplazamiento, afinidad, intercambio catiónico, intercambio aniónico, exclusión por tamaño, fase reversa y fase normal) y su elección depende principalmente del analito a purificar. Sin embargo, la exclusión por tamaño es menos preferida que las otras técnicas, porque en el caso de la primera técnica no se puede lograr una unión permanente. Para esto último, se pueden encontrar condiciones bajo las cuales el analito a purificar se une selectivamente al medio, mientras que, idealmente, los otros constituyentes de la muestra pasan a través del medio sin unirse.
El dispositivo microfluídico de la presente invención comprende un filtro de membrana. Un filtro en el presente documento denota un medio que interactúa diferencialmente con diferentes constituyentes de una muestra. En la cromatografía convencional, dicho medio normalmente se llamaría fase estacionaria. La interacción diferencial (también llamada partición) provocará tiempos de retención diferenciales y, por tanto, un efecto de purificación, si una muestra se mueve en un tampón adecuado (en cromatografía normalmente llamado fase móvil) a través de dicho medio.
El filtro de membrana utilizado en el dispositivo divulgado en el presente documento es uno que está configurado para purificar analitos biológicos o químicos a partir de una muestra biológica compleja. El analito es la sustancia a purificar. Una muestra biológica compleja es una muestra que comprende, además del analito a purificar, muchos constituyentes diferentes de tamaño y química variables, tales como proteínas, ácidos nucleicos, hormonas, lípidos, sales. Una muestra preferida es un lisado celular.
En una realización preferida, el filtro de membrana está hecho o al menos comprende sílice. Por ejemplo, el filtro de membrana puede tener la forma de una membrana de sílice o una resina que contenga perlas de sílice o perlas recubiertas de sílice. Las superficies de sílice son útiles para separar o purificar ácidos nucleicos, en particular ADN. Se sabe que la sílice adsorbe moléculas de ADN en determinadas condiciones de sal y pH, y la adsorción de sílice se ha convertido en una técnica importante para purificar el ADN.
En una realización no según la invención, el elemento de filtro está integrado en la cavidad de purificación y fijado por un anillo de fijación. En una realización no según la invención, los filtros de membrana de purificación están insertados en una cavidad, que forma parte del cuerpo del dispositivo microfluídico, y el filtro de membrana se mantiene en posición mediante un anillo de fijación que lo comprime. (Figura 2A y B)
En una realización según la invención, la cavidad de purificación es una parte separada que se ensambla en el dispositivo microfluídico y elimina la necesidad de un anillo de fijación para mantener el filtro de membrana en su lugar. La propia cavidad de purificación proporciona un elemento de sujeción que fija la cavidad y el filtro de membrana en su posición, con la compresión correcta de la membrana (Figura 2c y D).
Una cavidad separada, que se mantiene en posición mediante un elemento de sujeción, tiene varias ventajas en comparación con las cavidades que comprenden un anillo de fijación:
Una compresión reproducible del filtro de membrana se logra mediante un elemento de sujeción. Esto garantiza una compresión reproducible, que genera un flujo reproducible de líquidos a través del filtro de membrana y, por lo tanto, un rendimiento reproducible de ácidos nucleicos purificados u otro analito purificado.
El correcto posicionamiento de la cavidad de purificación en el dispositivo microfluídico está garantizado por su elemento de sujeción, sin necesidad de controlar la cantidad de compresión, que viene dada por el diseño. Esto facilita la fabricación.
La cavidad de purificación elimina la necesidad de un anillo de fijación, lo que reduce la contaminación de la muestra. Los anillos de fijación interrumpen la vía fluídica y acumulan restos de líquidos, lo que crea una contaminación entre los tampones y da como resultado una determinada cantidad de contaminantes en el eluido purificado final, lo que puede inhibir el análisis posterior, tal como la PCR. Una cavidad de purificación desmontable crea una transición suave en sus paredes que reduce la cantidad de contaminantes que se pueden pegar a la pared, típicamente de 5 a 10 veces.
Se prefiere que los analitos sean ácidos nucleicos. El término ácido nucleico comprende ARNm (ARN mensajero) en forma procesada y sin procesar, ARNt (ARN de transferencia), ARNhn (ARN heterogéneo nuclear), ARNr (ARN ribosómico), LNA (ácido nucleico bloqueado), ARNmt (ARN mitocondrial), ARNn (ARN nuclear), a Rníc (ARN de interferencia corto), ARNpn (ARN pequeño nuclear), ARNpno (ARN pequeño nucleolar), ARNpca (ARN pequeño específico de cuerpos de Cajal), microARN, ARNbc (ARN bicatenario), ribozima, ribointerruptor, ARN viral, ADNbc (ADN bicatenario), ADNmc (ADN monocatenario), ADN plasmídico, ADN cósmido, ADN cromosómico, ADN viral, ADNmt (ADN mitocondrial), ADNn (ADN nuclear), ADNpn (ADN pequeño nuclear) o similares o así como todos los demás ácidos nucleicos imaginables.
La cavidad de purificación alberga una pluralidad de puertos además de dicho filtro de membrana, como sigue: un primer puerto que permite la comunicación de gas de la cavidad de purificación con un generador de vacío, a través de una primera vía de flujo; un segundo puerto que permite la comunicación de líquido de la cavidad de purificación con uno o más depósitos, a través de un segunda vía de flujo; un tercer puerto que permite la comunicación de gas y líquido de la cavidad de purificación con uno o más recipientes receptores y un generador de vacío, a través de una tercera vía de flujo.
El generador de vacío está ubicado aguas arriba de la cavidad de purificación. El uno o más depósitos también están ubicados aguas arriba de la cavidad de purificación, pero en otra vía de flujo que el generador de vacío. Los uno o más recipientes receptores están ubicados aguas abajo de la cavidad de purificación. Más aguas abajo del(de los) recipiente(s) receptor(es) se encuentra el generador de vacío de la tercera vía de flujo.
El(los) depósito(s) normalmente comprenden al menos un depósito que contiene la muestra a purificar y opcionalmente uno o más depósitos que comprenden uno o más tampones de lavado y/o un tampón de elución y/o un tampón de regeneración. El uno o más recipientes normalmente comprende al menos un recipiente para recibir el analito y opcionalmente uno o más recipientes para recibir otros líquidos, por ejemplo, el flujo a través, tampón(es) de lavado y/o tampón(es) de regeneración.
Se coloca un filtro de membrana directamente sobre el tercer puerto, de modo que un fluido que entra en la cavidad de purificación a través del primer y/o segundo puerto y sale de la cavidad de purificación a través del tercer puerto fluya a través del filtro de membrana. Más convenientemente, el filtro de membrana se expande a través de la sección transversal completa de la cámara. Sin embargo, no es necesario que el medio llene toda la altura de la cámara.
Se prefiere que el dispositivo sea un cartucho microfluídico. Un cartucho significa un componente consumible que puede ser accionado por una unidad más grande a través de una interfaz adecuada. Normalmente, la unidad contiene elementos costosos y/o soportables o elementos que son fáciles de limpiar, y un código de un programa informático para automatizar el control del proceso. Alternativamente, la unidad puede comprender elementos adicionales para realizar otros procesos aguas arriba o aguas abajo de la unidad de purificación.
En una realización, el dispositivo es desechable, lo que significa que el dispositivo está diseñado para un solo uso, después del cual se desecha. En otra realización, el dispositivo es reutilizable, lo que normalmente requiere una regeneración del dispositivo después de cada uso.
El dispositivo puede comprender además las válvulas, idealmente el generador de vacío está separado. El generador de vacío evacua la presión de la cavidad de purificación generando así una presión negativa relativa.
Dependiendo de la configuración de los puertos (es decir, abiertos o cerrados), se aspira un fluido de uno de los depósitos dentro de la cavidad de purificación y/o fuera de la cavidad de purificación dentro de uno de los recipientes receptores. En una realización preferida, el generador de vacío es una bomba de jeringa o una bomba de diafragma. En una realización preferida adicional, el vacío se puede aplicar al primer puerto y/o al tercer puerto con el mismo generador de vacío.
Los dispositivos microfluídicos conocidos no incluyen medios para rastrear la presión en el sistema. La presente invención incluye preferiblemente uno o más sensores de presión. Preferiblemente, un sensor de presión se encuentra dentro de la tercera vía de flujo aguas arriba de los recipientes receptores. Otro sensor de presión se encuentra preferiblemente dentro de la primera vía de flujo aguas abajo del generador de vacío. Los sensores de presión anteriores se pueden utilizar para determinar la caída de presión causada por el filtro que indica el estado fluídico del filtro. De este modo, se puede determinar (i) cuándo se completa un etapa del método, minimizando así el tiempo y los tampones (por ejemplo, cuando el filtro está completamente seco durante un etapa de secado; cuando el filtro está suficientemente purgado de los restos de líquido durante las etapa de purga, que tienen lugar ventajosamente después del flujo de cada líquido y antes del flujo del siguiente); (ii) si los líquidos han fluido completamente a través del filtro, permitiendo que el sistema aplique un aumento "justo a tiempo" en la presión de succión si hay una mayor resistencia al flujo del líquido debido a la densidad y la viscosidad de la muestra; (iii) si el filtro está obstruido; y (iv) el tiempo requerido para que cada líquido fluya a través del filtro, que puede compararse con un umbral predeterminado como control para el método de purificación.
Como se ha descrito anteriormente, el dispositivo descrito en el presente documento tiene tres puertos para la comunicación con la cavidad de purificación: un primer puerto (puerto de salida de gas), un segundo puerto (puerto de entrada de líquido) y un tercer puerto (puerto de salida de líquido/gas). Cada puerto se puede abrir, cerrar o ventilar a la atmósfera individualmente por medio de una válvula ubicada dentro de la respectiva vía de flujo. Convenientemente, se utilizan válvulas multipuerto y, si se desea, dos o tres puertos activados con la misma válvula multipuerto. Se prefiere que el volumen muerto encerrado por la tercera vía de flujo entre su válvula correspondiente y el filtro esté entre 1 ul y 10 ml. El flujo controlado de líquidos (incluida la situación sin flujo para una humectación completa del filtro) se logra aplicando vacío al puerto apropiado y abriendo y cerrando las válvulas apropiadas en cada etapa. Esto confiere una mayor reproducibilidad al dispositivo que los dispositivos conocidos independientemente del tipo de muestra biológica.
Por ejemplo, en un kit de purificación convencional con una ejecución manual del protocolo de purificación por vacío, el proceso de purificación consiste en cinco etapas principales correspondientes al flujo de cinco líquidos diferentes a través del filtro, es decir, cargar una mezcla de muestra que contiene los ácidos nucleicos, lavar con tampón de lavado 1 y tampón de lavado 2 para enjuagar el filtro y eliminar cualquier cantidad de contaminantes, secar al aire el filtro y eliminar cualquier traza de contaminantes volátiles, y eluir para liberar los ácidos nucleicos del filtro con el fin de estar más disponibles para aplicaciones posteriores (tales como la amplificación y detección por qPCR). Al final de cada etapa, la succión por vacío se mantiene durante uno o dos minutos incluso después de que el volumen del líquido haya fluido a través del filtro con el fin de garantizar que casi no quede líquido dentro de las hendiduras del filtro antes de pipetear el siguiente líquido, una operación denominada “purga”.
Con el fin de lograr el mismo efecto, el protocolo automatizado comprende básicamente los mismas etapas, que se logran conectando cada puerto a los depósitos apropiados y aplicando las diferencias de presión apropiadas en todo momento, por medio de una fuente de presión (por ejemplo, jeringa o bomba rotativa), un conjunto de válvulas, un conjunto de canales microfluídicos y un microcontrolador que utiliza un programa informático para automatizar todas las etapa.
El dispositivo microfluídico divulgado en el presente documento es particularmente adecuado para su uso en métodos en los que uno o más analitos deben separarse de otros constituyentes, es decir, en un método de purificación. Por tanto, otro objetivo de la invención es un método de purificación de un analito biológico o químico a partir de una muestra biológica compleja utilizando el dispositivo microfluídico descrito en el presente documento, comprendiendo el método en este orden los siguientes etapas: (a) permitir que una muestra líquida entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y el primer depósito, y abriendo una primera válvula en la primera vía de flujo y una segunda válvula en la segunda vía de flujo, y cerrando una tercera válvula en la tercera vía de flujo; (b) permitir que la muestra fluya a través del filtro de membrana dentro de un primer recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho primer recipiente receptor y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica y abriendo la tercera válvula; y (c) eluir el analito del filtro de membrana aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y uno de los recipientes receptores, y abriendo la primera y la segunda válvula y cerrando la tercera válvula.
La presión en la etapa a puede ser generada por el generador de vacío ubicado en la primera vía de flujo. La presión en la etapa b puede ser generada por el generador de vacío ubicado en la tercera vía de flujo.
La elución en la etapa c se puede llevar a cabo en detalle como sigue:
i) permitir que un tampón de elución contenido en un tercer depósito entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y el tercer depósito, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo están abiertas para el primer y segundo puerto y cerradas para el tercer puerto. La presión puede ser generada por el generador de vacío ubicado en la primera vía de flujo; y
ii) permitir que el tampón de elución esté en contacto con el filtro de membrana durante un tiempo predeterminado, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo están abiertas para el primer y segundo puerto y cerradas para el tercer puerto. Esta etapa permite una humectación suficiente del filtro de membrana con el fin de liberar el analito deseado; y
iii) permitir que el tampón de elución (que contiene el analito liberado) fluya a través del filtro de membrana dentro de un segundo recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho segundo recipiente receptor y la cavidad de purificación, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo están cerradas para el primer puerto, ventiladas a presión atmosférica para el segundo puerto y abiertas para el tercer puerto. La presión puede ser generada por el generador de vacío de la tercera vía de flujo.
Preferiblemente, el método comprende además entre las etapas a y b la etapa de permitir que la muestra esté en contacto con el filtro de membrana durante un tiempo predeterminado, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo permanecen abiertas para el primer y segundo puerto y cerradas para el tercer puerto.
El método puede comprender opcionalmente entre las etapas b y c uno o más de las siguientes etapas:
(i) limpiar y secar el filtro durante un tiempo predeterminado aplicando una presión negativa entre la tercera vía de flujo y la cavidad de purificación, siendo dicha diferencia de presión negativa generada por el generador de vacío ubicado en la tercera vía de flujo, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo están cerradas para el primer puerto, ventiladas a presión atmosférica para el segundo puerto y abiertas para el tercer puerto; y/o
(ii) permitir que un tampón de lavado ubicado en un segundo depósito entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto y fluya a través del filtro de membrana dentro de un recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho depósito receptor y dicho segundo depósito, mientras que las válvulas dentro de las vías fluídicas están abiertas para el segundo y tercer puerto y cerradas para el primer puerto. La presión puede ser generada por el generador de vacío ubicado en la tercera vía de flujo; y/o
iii) permitir que el gas fluya a través del filtro de membrana durante un tiempo predeterminado, aplicando una presión negativa entre la tercera vía de flujo y la cavidad de purificación, mientras que las válvulas dentro de las vías de flujo están cerradas para el primer puerto, ventiladas a presión atmosférica para el segundo puerto y abiertas para el tercer puerto. El gas desplaza el líquido y seca el filtro de membrana. La presión puede ser generada por el generador de vacío ubicado en la tercera vía de flujo.
Preferiblemente, la diferencia de presión se determina con el fin de determinar cuándo deben conmutarse una o más válvulas y, por tanto, debe realizarse la siguiente etapa del método. Una caída de presión a través del filtro de membrana indica que la(s) válvula(s) se puede(n) activar para realizar la siguiente etapa del método.
Se prefiere además que el flujo de gas para secar el filtro de membrana se aplique solo si el valor de la primera derivada de la diferencia de presión entre el primer y el segundo sensor de presión está por debajo de un valor umbral predefinido.
La Tabla 1 detalla un ejemplo de las etapas del método a realizar para un proceso de purificación por medios automáticos. Los diagramas de fluidos que se muestran en las figuras muestran la configuración del puerto/válvula para cada uno de dichas etapas.
Tabla 1. Protocolo detallado para un ejemplo de un proceso de purificación.
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La invención tiene la ventaja de que se puede lograr una automatización completa y no se necesita manipulación manual para completar el proceso de purificación, logrando así resultados reproducibles. Además, el dispositivo/proceso de purificación se puede vincular a otros dispositivos/procesos aguas arriba o aguas abajo (por ejemplo, lisis, amplificación y detección). A diferencia de la técnica anterior, los líquidos se mueven al interior de la cámara y al filtro por medio de un vacío aplicado al primer puerto, mientras que el tercer puerto está cerrado. Esto evita el flujo a través del filtro mientras permite el humedecimiento previo del filtro durante un tiempo de incubación predeterminado. Los líquidos se mueven a través del filtro por medio de un vacío aplicado al tercer puerto, después de abrir la válvula de ese puerto. Tomados en conjunto, se obtienen rendimientos de ácido nucleico iguales o superiores en comparación con los métodos conocidos.
Leyendas de las figuras
La figura 1 muestra una columna de purificación (1) de un kit comercial para purificación manual que consiste en un cuerpo de plástico (2) y un filtro de membrana (3) comprimidos y mantenidos en su lugar mediante un anillo de fijación (10). El cuerpo de plástico comprende una entrada de líquido (4) y una salida de líquido (5).
La figura 2A muestra parte de un dispositivo microfluídico (100) con una cavidad de purificación integrada (101) y un filtro de membrana (3) mantenido en su lugar por un anillo de fijación (10) (no según la invención actualmente reivindicada).
La figura 2B muestra una vista rotada del dispositivo microfluídico (100) con una cavidad de purificación integrada (101) y un filtro de membrana (3) mantenido en su lugar por un anillo de fijación (10). También se muestran el puerto de gas (102), el puerto de entrada de líquido (103) y el puerto de salida (104) conectados a la cavidad de purificación (101) (no según la invención actualmente reivindicada).
La figura 2C muestra una cavidad de purificación separada (200).
La figura 2D muestra una cavidad de purificación (200) ensamblada en un dispositivo microfluídico (100). El elemento de sujeción (201) mantiene la cavidad de purificación (200) en su lugar y aplica la compresión correcta al filtro de membrana (3). También se muestran el puerto de gas (203), el puerto de entrada de líquido (204) y el puerto de salida (205).
La figura 2E ilustra la configuración del puerto y la dirección del flujo durante la carga de líquido (ETAPA 1) y el lavado/elución (ETAPA 2). La flecha continua indica el flujo de líquido; la flecha discontinua indica el flujo de gas; X indica puerto cerrado por válvula.
Figuras 3 a 11: Diagramas de fluidos detallados que muestran la configuración del puerto/válvula para cada uno de las etapas detalladas en la tabla 1. Debe entenderse que el dispositivo de la presente invención puede comprender, pero no necesariamente, cada uno de los elementos mostrados en las figuras. La descripción y/o las reivindicaciones denotan los elementos esenciales. Además de dichos elementos, uno o más elementos opcionales adicionales pueden elegirse independientemente entre sí. Los elementos opcionales se indican a continuación. 1: generador de vacío 1 (por ejemplo, bomba de jeringa); 2: generador de vacío 2 (opcional, por ejemplo, bomba de diafragma); 3 - 7: válvulas (por ejemplo, válvulas multipuerto); 8 y 9: sensores de presión (opcional); 10: cámara; 11: anillo de fijación (no según la invención actualmente reivindicada); 12: filtro; 13: recipiente receptor de residuos (opcional); 14: recipiente receptor de eluido; 15: depósito de muestra; 16 - 17: depósitos (opcional); 18: depósito de tampón de elución.

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un dispositivo microfluídico que comprende:
(a) uno o más depósitos;
(b) uno o más recipientes receptores;
(c) una cavidad de purificación configurada para ser desmontable del dispositivo microfluídico, comprendiendo la cavidad de purificación:
(i) un primer puerto que permite la comunicación de gas de la cavidad de purificación con un generador de vacío, a través de una primera vía de flujo;
(ii) un segundo puerto que permite la comunicación de líquido de la cavidad de purificación con el uno o más depósitos, a través de una segunda vía de flujo; y
(iii) un tercer puerto que permite la comunicación de gas y líquido de la cavidad de purificación con tanto el uno o más recipientes receptores como un generador de vacío, a través de una tercera vía de flujo; y
(d) un filtro de membrana configurado para purificar analitos biológicos o químicos a partir de una muestra biológica compleja y colocado directamente sobre el tercer puerto de manera que el fluido que entra en la cavidad de purificación a través del primer y/o segundo puerto y sale de la cavidad de purificación a través del tercer puerto fluya a través del filtro de membrana,
en donde la cavidad de purificación comprende un elemento de sujeción configurado para fijar la posición del filtro de membrana y la cavidad de purificación en el dispositivo microfluídico.
2. El dispositivo microfluídico de la reivindicación 1, en donde el dispositivo microfluídico es un cartucho microfluídico y es desechable o reutilizable.
3. El dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 a 2, en donde el filtro de membrana comprende sílice.
4. El dispositivo microfluídico de la reivindicación 3, en donde el filtro de membrana comprende una membrana de sílice o una resina que contiene perlas de sílice o perlas recubiertas de sílice.
5. El dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el generador de vacío es una bomba de jeringa, una bomba de diafragma o una combinación de las mismas.
6. El dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 a 5, en donde se puede aplicar vacío al primer puerto y/o al tercer puerto con el mismo generador de vacío.
7. El dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 a 6, en donde un sensor de presión está ubicado dentro de la tercera vía de flujo aguas arriba de los recipientes receptores.
8. El dispositivo microfluídico de la reivindicación 7, en donde otro sensor de presión está ubicado dentro de la primera vía de flujo entre la cavidad de purificación y el generador de vacío.
9. El dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 a 8, en donde los puertos se pueden abrir, cerrar o ventilar a la atmósfera individualmente por medio de una o más válvulas multipuerto dentro de sus vías de flujo.
10. El dispositivo microfluídico de la reivindicación 9, en donde el volumen muerto encerrado por la tercera vía fluídica entre su válvula correspondiente y el filtro está entre 1 pl y 10 ml.
11. Un método para purificar un analito biológico o químico a partir de una muestra biológica compleja utilizando el dispositivo microfluídico según las reivindicaciones 1 a 10, el método comprende las etapas de:
(a) permitir que una muestra líquida entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y un primer depósito, y abriendo una primera válvula en la primera vía de flujo y una segunda válvula en la segunda vía de flujo y cerrando una tercera válvula en la tercera vía de flujo.
(b) permitir que la muestra fluya a través del filtro de membrana dentro de un primer recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho primer recipiente receptor y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica y abriendo la tercera válvula; y
(c) eluir el analito del filtro de membrana aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y uno de los recipientes receptores, y abriendo la primera y la segunda válvula y cerrando la tercera válvula.
12. El método de la reivindicación 11, en donde la elución en la etapa c se lleva a cabo como sigue:
(i) permitir que un tampón de elución contenido en un tercer depósito entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto aplicando una diferencia de presión negativa entre la cavidad de purificación y el tercer depósito, y abriendo la primera y la segunda válvula y cerrando la tercera válvula;
(ii) permitir que el tampón de elución esté en contacto con el filtro de membrana durante un tiempo de incubación predeterminado, mientras que la primera y la segunda válvula están abiertas y la tercera válvula está cerrada; y (iii) permitir que el tampón de elución fluya a través del filtro de membrana dentro de un segundo recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho segundo recipiente receptor y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica, y abriendo la tercera válvula.
13. El método de la reivindicación 11 o 12 que comprende además, entre las etapa a y b, la etapa de permitir que la muestra esté en contacto con el filtro de membrana durante un tiempo de incubación predeterminado, mientras que la primera y la segunda válvula están abiertas, y la tercera válvula está cerrada.
14. El método de las reivindicaciones 11 a 13, que comprende además, entre las etapa b y c, uno o más de los siguientes etapas:
(i) limpiar y secar el filtro de membrana durante un tiempo predeterminado aplicando una presión negativa entre la tercera vía de flujo y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica y abriendo la tercera válvula; y/o
(ii) permitir que un tampón de lavado ubicado en un segundo depósito entre en la cavidad de purificación a través del segundo puerto y fluya a través del filtro de membrana y dentro de un recipiente receptor aplicando una diferencia de presión negativa entre dicho depósito receptor y dicho segundo depósito, y cerrando la primera válvula y abriendo la segunda y tercera válvula; y/o
(iii) permitir que el gas fluya a través del filtro de membrana durante un tiempo predeterminado, aplicando una presión negativa entre la tercera vía de flujo y la cavidad de purificación, y cerrando la primera válvula, abriendo la segunda válvula a presión atmosférica y abriendo la tercera válvula.
15. El método de las reivindicaciones 11 a 14, que comprende además activar una o más de las válvulas dentro de la primera vía de flujo, la segunda vía de flujo y la tercera vía de flujo mediante una diferencia de presión.
16. Uso del dispositivo microfluídico de las reivindicaciones 1 o 2 para la purificación de analitos, en donde los analitos a purificar son ácidos nucleicos.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EP2971033B8 (en) 2013-03-15 2019-07-10 ModernaTX, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014152031A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Ribonucleic acid purification
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
WO2014144767A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
EP3052511A4 (en) 2013-10-02 2017-05-31 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
WO2015196128A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
AU2015289656A1 (en) 2014-07-16 2017-02-16 Modernatx, Inc. Circular polynucleotides
US11434486B2 (en) 2015-09-17 2022-09-06 Modernatx, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
US20200318098A1 (en) * 2016-06-24 2020-10-08 Modernatx, Inc. Methods and apparatus for filtration
GB201703383D0 (en) 2017-03-02 2017-04-19 Gargle Tech Ltd Testing for particulates
KR102065649B1 (ko) * 2017-12-28 2020-01-13 에스디 바이오센서 주식회사 핵산 추출용 카트리지의 피스톤
JP7454264B2 (ja) 2018-09-05 2024-03-22 ヒーロー サイエンティフィック リミテッド 粒子検査
GB201819417D0 (en) * 2018-11-29 2019-01-16 Quantumdx Group Ltd Vacuum-assisted drying of filters in microfluidic systems
WO2021037945A1 (en) * 2019-08-30 2021-03-04 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Filter instrument, kit and method for pretreating a sample
CN111545256B (zh) * 2020-03-31 2022-05-13 深圳市刚竹医疗科技有限公司 离心微流控芯片
WO2022149135A2 (en) 2021-01-06 2022-07-14 Hero Scientific Ltd. Filtration sampling devices
CN112899132B (zh) * 2021-01-13 2021-10-15 上海金鑫生物科技有限公司 一种用于核酸提取与纯化的硅胶过滤吸头

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4617102A (en) 1985-03-21 1986-10-14 Lifecodes Corp. Process and apparatus for purifying and concentrating DNA from crude mixtures containing DNA
FR2657543B1 (fr) * 1990-01-26 1992-12-18 Biocom Sa Dispositif modulaire pour le recueil, l'incubation, la filtration d'echantillons multiples.
US5380437A (en) * 1993-02-02 1995-01-10 Biomedical Research And Development Laboratories, Inc. Multifunctional filtration apparatus
GB9422504D0 (en) * 1994-11-08 1995-01-04 Robertson Patricia M B Blood testing
EP0927077A4 (en) * 1996-09-18 2000-07-19 Promega Corp IMPROVED FILTER SYSTEM AND METHOD
JP2002345465A (ja) * 2001-05-24 2002-12-03 Fuji Photo Film Co Ltd 核酸精製ユニット及び核酸精製方法
US8747669B1 (en) * 2005-12-29 2014-06-10 Spf Innovations, Llc Method and apparatus for the filtration of biological samples
US20120107799A1 (en) * 2010-10-29 2012-05-03 Longhorn Vaccines & Diagnostics LLC. Disposable, rapid extraction apparatus and methods
KR20110030415A (ko) * 2008-01-22 2011-03-23 인터젠엑스 인크. 만능 샘플 제조 시스템 및 집적 분석 시스템에서의 용도
KR101786506B1 (ko) * 2009-02-03 2017-10-18 네트바이오, 인코포레이티드 핵산 정제
WO2012096480A2 (en) * 2011-01-10 2012-07-19 Lg Electronics Inc. Diagnostic cartridge and control method for diagnostic cartridge
KR101890743B1 (ko) * 2011-10-05 2018-08-23 삼성전자주식회사 유체 제어 장치 및 이를 사용하는 유체 제어 방법
US8685708B2 (en) * 2012-04-18 2014-04-01 Pathogenetix, Inc. Device for preparing a sample

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CA2959954A1 (en) 2016-03-10
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