ES2871977T3 - Biomateriales inyectables - Google Patents

Abstract

Composición inyectable formada a partir de tropoelastina, para su uso en el tratamiento o corrección de un defecto tisular en un individuo que lo necesita, donde la composición comprende: (a) una sustancia que contiene tropoelastina con una concentración de tropoelastina de 5 mg/ml a 300 mg/ml y (b) un agente seleccionado de entre ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa, en una cantidad de un 0,5 % a un 3,5 % p/v, preferiblemente en una cantidad de 0,5 % a 2,0 % p/v, en el que la cantidad de agente es eficaz para dotar a la sustancia de propiedades de flujo que permitan la inyección de la composición.

Description

DESCRIPCIÓN

Biomateriales inyectables

Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere a la tropoelastina y a la reparación y restauración de tejidos utilizando biomateriales.

Antecedentes de la invención

[0002] La elastina es una proteína de la matriz extracelular que se encuentra principalmente en la piel, los vasos sanguíneos, los pulmones y otros tejidos y órganos que requieren cierto grado de elasticidad para funcionar. Se forma tradicionalmente cuando los residuos de lisina en las moléculas de tropoelastina se reticulan con los residuos de lisina en otras moléculas de tropoelastina para formar una masa que es más o menos insoluble en una solución acuosa.

[0003] Se espera que la elastina, la tropoelastina y las proteínas relacionadas sean útiles en aplicaciones médicas que incluyen la reparación y restauración de tejidos y existe una necesidad particular de composiciones que tengan un alto contenido de sólidos de tales proteínas que puedan administrarse al tejido mediante inyección. Mientras que las micropartículas formadas a partir de biomateriales se mencionan en los documentos WO99/11196 y WO2008/058323, no se conocen composiciones con una estructura menos particulada que tengan un alto contenido de sólidos de tales proteínas y propiedades de flujo suficientes para permitir la administración tisular por inyección. Un problema ha sido que, con un alto contenido de sólidos, la tropoelastina forma una masa que no se puede administrar a través de agujas de diferentes calibres que se utilizan en aplicaciones clínicas y cosméticas.

[0004] Sigue existiendo la necesidad de contar con composiciones que tengan un alto contenido de sólidos de tropoelastina u otro material elástico y propiedades de flujo que permitan que la composición se administre al tejido mediante inyección.

[0005] La referencia a cualquier estado de la técnica en la memoria no es, y no debe considerarse, un reconocimiento o cualquier forma de sugerencia de que este estado de la técnica forma parte del conocimiento general común en Australia o en cualquier otra jurisdicción, o que este estado de la técnica podría razonablemente esperarse que sea determinado, comprendido y considerado relevante por un experto en la materia.

Sumario de la invención

[0006] En determinadas formas de realización, se proporciona una composición inyectable formada a partir de tropoelastina, incluyendo la composición una sustancia que contiene tropoelastina, en la que la sustancia incluye, además, un agente en una cantidad eficaz para dotar a la sustancia de propiedades de flujo que permitan la inyección de la composición. La sustancia que contiene tropoelastina puede ser particulada o no particulada.

[0007] En determinadas formas de realización, se proporciona una composición inyectable para corregir un defecto tisular, incluyendo la composición una fase líquida que contiene una pluralidad de micropartículas formadas a partir de tropoelastina, presentando la fase líquida un agente de control de la coalescencia disuelto en la misma en una cantidad eficaz para reducir la coalescencia de la micropartículas.

[0008] En determinadas formas de realización, se proporciona un proceso para producir micropartículas formadas a partir de tropoelastina que incluye la etapa de coacervar o polimerizar la tropoelastina en una fase líquida que tiene un agente de control de la coalescencia disuelto en esta.

[0009] Según se utiliza en este documento, excepto cuando el contexto requiera lo contrario, el término "comprender" y las variaciones del término, tales como "comprendiendo", "comprende" y "comprendido", no pretenden excluir aditivos, componentes, números enteros o etapas adicionales.

Breve descripción de los dibujos

[0010]

Figura 1A: imagen SEM de micropartículas formadas a partir de tropoelastina con un diámetro estimado de 1 l_im, preparadas tratando una solución de tropoelastina de 2 mg/ml con álcali [ejemplo 1] y después con una incubación a 37 °C durante 4 h.

Figura 1B: imagen de la masa de material elástico producida cuando una solución de 10 mg/ml de tropoelastina se trata con álcali e incubando después a 37 °C en ausencia de un agente de control de la coalescencia, como se describe en el Ejemplo 2. El material producido es una masa densa elástica que no se puede inyectar.

Figura 2: imagen SEM de glóbulos formados a partir de tropoelastina preparada mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 50 mg/ml con glutaraldehído al 0,05 % (v/v) en presencia de CMC al 1 % (p/v) seguido de incubación a 37 °C durante 24 h.

Figura 3: imagen SEM de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina preparada mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 50 mg/ml con glutaraldehído al 0,05 % (v/v) en presencia de HA de viscosidad media al 1 % (p/v) seguido de incubación a 37 °C durante 16 horas.

Figura 4A: imagen SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina con un rango de diámetros aparentes de aproximadamente 1 a 4 |_im, preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 10 mg/ml con base en presencia de HA al 1 % (p/v), seguido de incubación a 37 °C durante la noche.

Figura 4B: imagen SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina con un rango de diámetros aparentes de aproximadamente 1 a 4 |_im, preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 25 mg/ml con base en presencia de Ha al 1 % (p/v), seguido de incubación a 37 °C durante la noche.

Figura 4C: imagen SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina con un rango de diámetros aparentes de aproximadamente 1-10 |_im, preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 50 mg/ml con base en presencia de Ha al 1 % (p/v), seguido de incubación a 37 °C durante la noche.

Figura 4D: imagen SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina con un rango de diámetros aparentes de aproximadamente 0,5 a 20 |_im, preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 75 mg/ml con base en presencia de hA al 1 % (p/v), seguido de incubación a 37 °C durante la noche.

Figura 5: Distribución del tamaño de los glóbulos (diámetro del glóbulo (|_im) frente al porcentaje de glóbulos contados) preparados mediante el tratamiento de (°) 10 mg/ml de tropoelastina; (•) 25 mg/ml de tropoelastina; (□) 50 mg/ml de tropoelastina; y (■) 75 mg/ml de tropoelastina con álcali en presencia de HA al 1 % (p/v), seguido de incubación a 37 °C durante la noche. Los datos se obtienen a partir de imágenes SEM en las Figuras 4A-4D.

Figura 6A y 6B: imagen SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina de diferentes tamaños preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 100 mg/ml con GA al 0,05 % (v/v) en presencia de CMC al 1 % (p/v), seguido de agitación a 37 °C durante 4 h.

Figura 7A y 7B: imágenes SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina preparada mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 100 mg/ml con álcali en presencia de CMC al 1 % (p/v), seguido de incubación con agitación a 37 °C durante 4 h.

Figura 7C y 7D: imágenes SEM de material elaborado a partir de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina, preparados mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 100 mg/ml con álcali en presencia de CMC al 1 % (p/v) seguido de incubación con agitación a 37 °C durante 4 h, refrigeración a 4 °C durante 16 h, y luego neutralización de la solución con HCl 1 M.

Figura 8A y 8B: imagen SEM del material elaborado mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 100 mg/ml con GA al 0,05 % (v/v) en presencia de 1,5 % (p/v) de goma xantana, seguido de agitación a 37 °C durante 4 h.

Figura 9A y 9B: fotografía e imagen SEM del material elaborado mediante el tratamiento de una solución de tropoelastina de 100 mg/ml con GA al 0,05 % (v/v) en presencia de HPC al 2 % (p/v) seguido de agitación a 37 °C durante 4 h.

Descripción detallada de las formas de realización

[0011] Los inventores han descubierto que cuando la tropoelastina se coacerva y se reticula para formar elastina, y/o se somete a polimerización alcalina para formar un material elástico (como en el documento WO 2008/058323, cuyo contenido se incorpora aquí en su totalidad como referencia) con un alto contenido de sólidos de tropoelastina, se forma una masa que no puede pasar a través de una aguja quirúrgica. Los inventores han descubierto que la masa no inyectable se forma porque, con un alto contenido de sólidos, los monómeros de tropoelastina se agregan o coalescen en micropartículas o glóbulos que se agregan o coalescen adicionalmente para formar una masa no inyectable. Los inventores han descubierto, además, que la formación de la masa no inyectable con un alto contenido de sólidos de tropoelastina se puede reducir, si no evitarse, coacervando o polimerizando la tropoelastina en presencia de un agente de control de la coalescencia, dando como resultado la formación de una composición que tiene un alto contenido de sólidos y propiedades de flujo requeridas en una composición inyectable. Además, se ha descubierto que, ajustando las cantidades relativas de tropoelastina y de agente de control de la coalescencia, es posible controlar el grado de agregación de los glóbulos, produciendo así una sustancia que contiene tropoelastina en forma de glóbulos agregados de tamaño o estructura predeterminados con las propiedades de flujo deseadas para aplicaciones inyectables. También es posible producir una sustancia que contiene tropoelastina en forma de una masa que también es inyectable pero que carece sustancialmente de estructura microparticulada o globular. En este caso, el material inyectable puede describirse mejor como una masa deformable en lugar de como partículas o glóbulos discretos. Esto es notable porque normalmente las masas formadas a partir de tropoelastina reticulada o polimerizada con álcali no son fácilmente inyectables. Estas formas de realización son particularmente ventajosas en circunstancias en las que una aplicación clínica o cosmética requiere un implante que puede inyectarse en el lugar de aplicación.

I DEFINICIONES

[0012] Se entenderá que "tropoelastina" se refiere a una proteína que contiene al menos parte de un dominio hidrófobo derivado de una molécula de proteína que puede reticularse, normalmente en los residuos de lisina por lisil-oxidasa, para formar elastina. Se conocen varias isoformas de tropoelastina (véase, por ejemplo, WO 99/03886, cuyo contenido se incorpora aquí en su totalidad como referencia). La tropoelastina normalmente no se puede encontrar en una cantidad significativa en los tejidos, ya que tiende a reticularse para formar elastina más o menos justo después de la síntesis. La tropoelastina puede tener una secuencia que es la misma que la entrada que se muestra en la entrada AAC98394 de GenBank. En la técnica se conocen otras secuencias de tropoelastina, que incluyen, sin carácter limitativo, CAA33627 (Homo sapiens), P15502 (Homo sapiens), AAA42271 (Rattus norvegicus), AAA42272 (Rattus norvegicus), AAA42268 (Rattus norvegicus), AAA42269 (Rattus norvegicus), AAA80155 (Mus musculus), AAA49082 (Gallus gallus), P04985 (Bos taurus), ABF82224 (Danio rerio), ABF82222 (Xenopus tropicalis), P11547 (Ovis aries). La tropoelastina también puede ser un fragmento de estas secuencias. Un ejemplo son los aminoácidos 27 a 724 de AAC98394. Otro ejemplo de tropoelastina se describe en la entrada P15502 de UniProtKB/Swiss Prot. El término tropoelastina también pretende referirse a un péptido similar a elastina o "ELP". La tropoelastina puede ser natural o recombinante. Por ejemplo, la tropoelastina puede obtenerse a partir de un sistema de expresión recombinante, cuyos ejemplos se describen en los documentos WO 00/04043 y WO 94/14958, cuyo contenido se divulga aquí en su totalidad por referencia, y en el documento WO 99/03886, o de síntesis de péptidos, tal como síntesis de péptidos en fase sólida.

[0013] Un "homólogo de tropoelastina" se refiere a una proteína que tiene una secuencia que no es la misma, pero que es similar, a una secuencia de referencia de tropoelastina. También tiene la misma función que la secuencia de referencia.

[0014] "Elastina" se refiere a una proteína de la matriz extracelular que normalmente se encuentra en la piel, los vasos sanguíneos, los pulmones y otros tejidos y órganos que requieren elasticidad para su formación. Se forma cuando los residuos de lisina en las moléculas de tropoelastina se reticulan covalentemente para formar una masa que es más o menos insoluble en una solución acuosa. La reticulación de las moléculas de tropoelastina in vivo se produce tradicionalmente a través de una o más lisil-oxidasas. La reticulación de las moléculas de tropoelastina puede estar mediada in vitro por agentes de reticulación químicos tales como glutaraldehído o hexametilendiisocianato u otros agentes de reticulación capaces de reaccionar con proteínas. Entre los ejemplos de reticulantes reactivos con amina se incluyen glutarato de disuccinimidilo (DSG), suberato de bis (sulfosuccinimidilo) (BS3), éter diglicidílico de etilenglicol (EGDE) en condiciones neutrales (pH 7), aminotriacetato de tris-succinimidilo (TSAT), suberato de disuccinimidilo (DSS) y ácido □-[tris(hidroximetil)fosfino]propiónico (THPP). Ejemplos de reticulantes reactivos con carboxilo incluyen clorhidrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil] carbodiimida (EDC) y éter diglicidílico de etilenglicol (EGDE) en condiciones ácidas (pH <4). Como la tropoelastina se puede proporcionar en una variedad de formas, la propia elastina puede estar compuesta por una variedad de estructuras, que influyen en las propiedades elásticas de la elastina. No es necesario que el grado de reticulación sea completo, donde todos los sitios reactivos potenciales en las moléculas de tropoelastina se hayan reticulado. En cambio, la tropoelastina puede estar solo parcialmente reticulada.

[0015] "Coacervación" y "coacervar" se refieren a un proceso mediante el cual la tropoelastina, que generalmente es soluble en solución acuosa a bajas temperaturas, tiende a agregarse para formar una fase viscoelástica densa a medida que la temperatura se eleva al intervalo fisiológico. El proceso se debe principalmente a las interacciones entre los dominios hidrófobos de la tropoelastina. Se entiende generalmente que la coacervación es un precursor esencial de la reticulación covalente en la formación de elastina a partir de tropoelastina.

[0016] Un "material elástico" se refiere a un material formado a partir de tropoelastina mediante un proceso de polimerización alcalina que involucra los dominios hidrófilos de la tropoelastina, como se describe en el documento WO 2008/058323, un proceso irreversible que forma un sólido que tiene propiedades elásticas al ser estirable, extensible, resistente y capaz de retroceder. El material elástico puede estar polimerizado solo parcialmente; en determinadas formas de realización, la reacción de polimerización no está completa. El material elástico posee propiedades elásticas, esté reticulado o no; por lo tanto, el proceso de polimerización alcalina para formar material elástico también puede incluir opcionalmente una etapa de reticulación química.

[0017] Los "glóbulos formados a partir de tropoelastina" o las "micropartículas formadas a partir de tropoelastina" se refieren a partículas que contienen o consisten en uno o ambos de entre "elastina" y "material elástico". Estas partículas tienden a coalescer o a agregarse más en una masa no inyectable en ausencia de un agente de control de la coalescencia.

[0018] Una "composición inyectable sustancialmente desprovista de estructura particulada" es una composición formada a partir de tropoelastina, en la que los glóbulos formados a partir de tropoelastina se han coalescido o agregado hasta el punto de que la estructura globular o particulada de la composición ya no es aparente. A pesar de esto, la composición sigue siendo inyectable.

[0019] Un "agente de control de la coalescencia" se refiere a un compuesto o extracto que reduce, inhibe o controla de otro modo la agregación, aglutinación o coalescencia de partículas o glóbulos formados a partir de tropoelastina, para permitir que la composición de la invención se transmita, generalmente por presión positiva a través de una aguja o cánula que tiene un orificio o calibre generalmente utilizada en aplicaciones clínicas o cosméticas. El agente de control de la coalescencia generalmente aumenta la viscosidad de la fase líquida en la que se produce la coacervación o polimerización de la tropoelastina para formar elastina o un material elástico. En determinadas formas de realización, el agente de control de la coalescencia limita los glóbulos formados a partir de tropoelastina para que no coalezcan entre sí. En determinadas formas de realización, el agente de control de la coalescencia evita o inhibe que un material que contiene tropoelastina que está sustancialmente desprovisto de estructura particulada forme un sólido no inyectable.

[0020] La expresión "una cantidad eficaz para reducir la coalescencia" se refiere a una cantidad de agente de control de la coalescencia que es suficiente para inhibir, ralentizar, retardar o prevenir sustancialmente la coalescencia de los glóbulos formados a partir de tropoelastina. No es necesario evitar que todos los glóbulos se agreguen o coalezcan con otros glóbulos. En determinadas formas de realización, es preferible que pueda producirse una mayor coalescencia de los glóbulos, siempre que esto no impida sustancialmente que se inyecte la composición. En particular, en determinadas formas de realización, la cantidad eficaz para prevenir la coalescencia proporciona una composición inyectable que está sustancialmente desprovista de estructura particulada o globular.

[0021] Una "composición inyectable" se refiere a una composición que tiene propiedades que le permiten fluir a través de una aguja o cánula. Normalmente, la aguja o cánula tendrá un orificio o calibre que se usa generalmente en aplicaciones clínicas o cosméticas. En determinadas formas de realización, la composición pasará sin obstáculos significativos a través de una aguja o cánula con un diámetro interno de aproximadamente 1,194 mm, correspondiente a una aguja de calibre 16 (G). Más preferiblemente, la composición pasará fácilmente a través de una aguja de 21G. Aún más preferiblemente, la composición pasará fácilmente a través de una aguja de 27G.

[0022] El término "defecto tisular" se refiere a una anomalía, malformación o imperfección que culmina en una estructura y/o función anormal del tejido. Un defecto tisular puede provenir, o estar generalmente asociado, con una afección congénita, un procedimiento quirúrgico, traumatismo, enfermedad u otra lesión. Alternativamente, un defecto tisular puede estar asociado con el envejecimiento. Los ejemplos incluyen pérdida de elasticidad del tejido, pérdida de volumen del tejido, arrugamiento del tejido y flacidez. El término "defecto tisular" también puede referirse al tejido que se encuentra dentro del rango anatómica y fisiológicamente normal de estructura y función que un paciente considera inadecuado y desea aumentar.

[0023] "Corregir un defecto tisular" se refiere a restaurar y/o aumentar al menos parcialmente la estructura y/o función del tejido, incluyendo el soporte, mejora, volumen o elasticidad del tejido, o facilitar el crecimiento del tejido en un defecto tisular.

[0024] El término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad de composición inyectable necesaria para alterar o corregir el defecto tisular. La cantidad eficaz puede variar dependiendo de la capacidad del paciente para absorber o descomponer los componentes de la composición inyectable, la naturaleza de la afección que se está tratando, el sitio del tratamiento, la composición de la composición inyectable, la concentración y las propiedades de los glóbulos formados a partir de tropoelastina, o alternativamente la cantidad y naturaleza de la masa que contiene tropoelastina que carece sustancialmente de estructura particulada.

II COMPOSICIONES Y FORMULACIONES

[0025] En determinadas formas de realización, se proporciona una composición inyectable para corregir un defecto tisular, incluyendo la composición una fase líquida que contiene una pluralidad de partículas o glóbulos formados a partir de tropoelastina, presentando la fase líquida un agente de control de la coalescencia disuelto en la misma en una cantidad eficaz para reducir la coalescencia de los glóbulos.

[0026] Normalmente, el tamaño medio de los glóbulos formados a partir de tropoelastina oscilará entre 0,1 micrómetros y 100 micrómetros. Los glóbulos se pueden proporcionar en forma de esfera o microesfera. El intervalo de diámetro de microesferas preferido es generalmente de aproximadamente 0,05 |_im a 50 |_im, preferiblemente de 0,1 |_im a 25 |_im. En ciertas formas de realización, los glóbulos están sustancialmente coalescidos, proporcionando a la composición un aspecto no particulado.

[0027] La tropoelastina se incluye en la composición en una cantidad de aproximadamente 1,5 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml. Preferiblemente, la tropoelastina se incluye en una cantidad de aproximadamente 5 mg/ml a aproximadamente 300 mg/ml. Más preferiblemente, la tropoelastina se incluye en una cantidad de aproximadamente 10 mg/ml a aproximadamente 200 mg/ml.

[0028] Como se analiza en el presente documento, cada glóbulo se forma a partir de tropoelastina, lo que significa que el propio glóbulo puede incluir elastina, un material elástico o ambos. Por consiguiente, los glóbulos pueden estar formados por tropoelastina reticulada covalentemente o no reticulada, o ambas.

[0029] La composición inyectable normalmente poseerá un aspecto más particulado, donde la composición posee glóbulos discretos o, más típicamente, parcialmente agregados o coalescidos cuando la concentración de tropoelastina es de aproximadamente 50 mg/ml e inferior. Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que el aspecto particulado se deriva de un nivel reducido de coalescencia o agregación de glóbulos a concentraciones más bajas de tropoelastina.

[0030] En otras formas de realización, se proporciona una composición inyectable para corregir un defecto tisular, incluyendo la composición glóbulos agregados formados a partir de tropoelastina y un agente de control de la coalescencia en una cantidad eficaz para reducir la coalescencia de los glóbulos.

[0031] La composición inyectable tendrá normalmente un aspecto menos particulado cuando la concentración de tropoelastina es de aproximadamente 50 mg/ml y superior. De nuevo, sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que el aumento de la concentración de tropoelastina deriva en un aumento de la coalescencia o agregación de los glóbulos, lo que da como resultado una composición inyectable con una estructura particulada o globular reducida.

[0032] La composición según la invención incluye habitualmente un agente de control de la coalescencia, especialmente un agente para dotar a la sustancia que contiene tropoelastina de propiedades de flujo. Los agentes de control de la coalescencia son generalmente biocompatibles; por ejemplo, pueden presentar baja toxicidad y no ser inmunogénicos. Los agentes de control de la coalescencia pueden ser moléculas sintéticas, semisintéticas o de origen natural.

[0033] En una forma de realización, el agente de control de la coalescencia posee una carga neta negativa cuando se disuelve en la fase líquida. En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia incluye grupos funcionales que poseen una carga neta negativa cuando se disuelven en la fase líquida.

[0034] En una forma de realización, el agente de control de la coalescencia incluye grupos funcionales fuertemente ácidos, por ejemplo, carboxilatos, sulfatos, fosfatos, etc. En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia incluye grupos funcionales hidroxilo. El agente de control de la coalescencia puede ser un poliol que posea múltiples grupos funcionales hidroxilo.

[0035] En determinadas formas de realización, el agente de control de la coalescencia es un polisacárido. Los polisacáridos son estructuras de carbohidratos poliméricos, formadas por unidades de repetición (típicamente monosacáridos o disacáridos) unidas por enlaces glicosídicos. Estas estructuras suelen ser lineales, pero pueden contener varios grados de ramificación. Los polisacáridos suelen ser bastante heterogéneos, conteniendo ligeras modificaciones de la unidad de repetición. Dependiendo de la estructura, estas macromoléculas pueden tener propiedades distintas de sus bloques de construcción de oligosacáridos.

[0036] Preferiblemente, el polisacárido contiene grupos funcionales cargados negativamente. En otra forma de realización preferida, el agente de control de la coalescencia es un polisacárido que contiene residuos de ácido idurónico, ácido glucurónico o N-acetilglucosamina. Los polisacáridos adecuados incluyen, por ejemplo, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, ácido hialurónico, goma xantana, goma guar, P-glucano, alginatos, carboximetil dextrano y sus sales farmacéuticamente aceptables. Alternativamente, el polisacárido puede ser una pectina o un derivado de la misma, incluidos polisacáridos lineales y ramificados.

[0037] En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia es un monosacárido u oligosacárido, por ejemplo, 3'-N-acetilneuraminil-N-acetil-lactosamina, 3'-sialil-N-acetil-lactosamina, 3'-N-acetilneuraminil-3-fucosil-lactosa, 6'-sialil-N-acetil-lactosamina, N-acetilglucosamina, glucosa, lactosa, maltotritol, sacarosa, LS-tetrasacárido b y sus sales farmacéuticamente aceptables. Otros agentes de control de la coalescencia incluyen dextrinas, tales como succinil-p-ciclodextrina, carboximetil-p-ciclodextrina, p-ciclodextrina, Y-ciclodextrina y sus sales farmacéuticamente aceptables.

[0038] Un derivado de polisacárido puede incluir, aunque sin carácter limitativo, un polisacárido reticulado o no reticulado que normalmente tiene una sustitución o una cadena lateral adicional que comprende uno o más grupos que consisten en hidrógeno; alquilo; arilo; alquilarilo; arilalquilo; alquilarilo sustituido que contiene un átomo o átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo; arilalquilo sustituido que contiene un átomo o átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre, fósforo, halógeno o ión metálico; heterociclo sustituido que contiene un átomo o átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre; ion fósforo, halógeno o metálico; y, donde dichos grupos sustituidos pueden estar unidos directamente entre sí o separados por un miembro seleccionado del grupo que consiste en éter, ceto, amino, oxicarbonilo, sulfato, sulfóxido, carboxamida, alquino y alqueno; incluyendo, donde dichas sustituciones o cadenas laterales adicionales terminan con grupos que incluyen, pero sin carácter limitativo, hidrógeno, péptido, aldehido, amina, arilazida, hidrazida, maleimida, sulfhidrilo, éster activo, éster, carboxilato, imidoéster, halógeno o hidroxilo. En ciertas formas de realización, un derivado de polisacárido incluye un polisacárido que se ha reticulado usando un reticulante químico que incluye, entre otros, divinil sulfona (DVS), 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE), 1,2,7,8 -diepoxioctano (DEO) u otros reticulantes generalmente conocidos por los expertos en la materia.

[0039] El agente de control de la coalescencia puede ser una glicoproteína como la mucina.

[0040] En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia es un aminoácido. Preferiblemente, el aminoácido presenta una cadena lateral ácida. Los aminoácidos adecuados incluyen ácido aspártico, ácido glutámico y sus sales farmacéuticamente aceptables.

[0041] En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia es un éster de lípidos o ácidos grasos. Los ésteres de ácidos grasos adecuados incluyen, por ejemplo, fosfolípidos, dipalmitoil fosfatidilcoluro y monooleato de glicerilo. Los ésteres de ácidos grasos se pueden usar junto con otros agentes o más. Por ejemplo, se pueden usar propilenglicol y fosfolípidos juntos entre sí.

[0042] En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia es un polímero sintético. Dichos polímeros incluyen, por ejemplo, polimetacrilatos, polietilenglicoles y copolímeros (en bloque) con subunidades de polietilenglicol. Por ejemplo, los copolímeros Poloxamer 188 y Poloxamer 407 pueden ser adecuados para su uso como agentes de control de la coalescencia.

[0043] En otra forma de realización, el agente de control de la coalescencia es un tensioactivo. Ejemplos de tensioactivos adecuados incluyen laurilsulfato de sodio y polisorbatos.

[0044] Los agentes de control de la coalescencia preferidos incluyen pantotenol, polietilenglicoles, goma xantana, goma guar, polisorbato 80, N-acetilglucosamina y sus sales farmacéuticamente aceptables. Los agentes de control de la coalescencia particularmente preferidos son carboximetilcelulosa, ácido hialurónico, goma xantana, hidroxipropilmetilcelulosa e hidroxipropilcelulosa y sus sales farmacéuticamente aceptables. Normalmente, cuando el agente de control de la coalescencia es un polisacárido, el agente se proporciona en la composición en una cantidad de aproximadamente un 0,01 a aproximadamente un 10 por ciento (p/v). Preferiblemente, cuando el agente de control de la coalescencia es un polisacárido, el agente se proporciona en una cantidad de aproximadamente un 0,5 a aproximadamente un 3,5 por ciento (p/v).

[0045] Cuando el agente de control de la coalescencia es carboximetilcelulosa o goma xantana, el agente puede proporcionarse en una cantidad de aproximadamente un 0,01 a un 10 por ciento (p/v). En una forma de realización preferida, cuando el agente de control de la coalescencia es carboximetilcelulosa o goma xantana, el agente se proporciona en una cantidad de un 0,5 a un 3,5 por ciento (p/v).

[0046] Cuando el agente de control de la coalescencia es ácido hialurónico, el agente puede proporcionarse en una cantidad de aproximadamente un 0,01 a un 10 por ciento (p/v). En una forma de realización preferida, cuando el agente de control de la coalescencia es ácido hialurónico, el agente se proporciona en una cantidad de un 0,5 a un 3,5 por ciento (p/v).

[0047] Cuando el agente de control de la coalescencia es un PEG, el agente se puede proporcionar en una cantidad de aproximadamente un 10 a aproximadamente un 90 por ciento (p/v).

[0048] Se entenderá que la cantidad eficaz de agente de control de la coalescencia proporcionada depende de varios factores, por ejemplo, las propiedades del agente de control de la coalescencia, la naturaleza de los otros componentes de la composición y el método utilizado para formar la composición. En particular, la cantidad eficaz de agente de control de la coalescencia dependerá de la concentración de tropoelastina en la composición. Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que la cantidad de agente de control de la coalescencia necesaria para prevenir la coalescencia aumenta a medida que aumenta también la concentración de tropoelastina en la composición. Además, la naturaleza del agente de control de la coalescencia afectará a su capacidad para controlar la coalescencia.

[0049] Por consiguiente, la invención proporciona una composición que incluye tropoelastina y un agente de control de la coalescencia de polisacárido, en el que la relación de masa entre tropoelastina y polisacárido es de aproximadamente entre 0,05:1 y 3000:1. Preferiblemente, la relación entre tropoelastina y polisacárido es de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 500:1. Más preferiblemente, la relación entre tropoelastina y polisacárido es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

[0050] En algunas formas de realización, la invención proporciona una composición que incluye tropoelastina y carboximetilcelulosa, en la que la relación de masa entre tropoelastina y carboximetilcelulosa es de 0,1:1 a aproximadamente 500:1. En determinadas formas de realización, la relación de masa entre tropoelastina y carboximetilcelulosa es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

[0051] En formas de realización adicionales, la invención proporciona una composición que incluye tropoelastina y goma xantana, en la que la relación de masa entre tropoelastina y goma xantana es de 0,1:1 a aproximadamente 500:1. En determinadas formas de realización, la relación de masa entre tropoelastina y goma xantana es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

[0052] En formas de realización adicionales, la invención proporciona una composición que incluye tropoelastina y ácido hialurónico, en la que la relación en masa de tropoelastina a ácido hialurónico es de 0,1: 1 a aproximadamente 500: 1. En determinadas formas de realización, la relación de masa de tropoelastina a ácido hialurónico es de aproximadamente 0,2: 1 a aproximadamente 100: 1.

[0053] En una forma de realización, el agente para proporcionar una sustancia que contiene tropoelastina con propiedades de flujo excluye, o no es, PEG o DMSO.

[0054] En otras formas de realización, la composición según la presente invención también puede incluir una fase líquida. Se entenderá que "fase líquida" hace referencia generalmente a un vehículo líquido biológicamente aceptable que es adecuado para inyección. Normalmente, el disolvente de la fase líquida será agua. Las fases líquidas preferidas incluyen soluciones acuosas tales como solución salina tamponada con fosfato (PBS). La fase líquida puede incluir tampones como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos. En otra forma de realización, la fase líquida incluye al menos un agente destinado a alterar la fuerza iónica de la fase líquida.

[0055] La composición según la presente invención puede incluir uno o varios agentes, principios activos o ingredientes adicionales. Los agentes adicionales pueden proporcionar un efecto terapéutico, como la estimulación de la reparación del tejido. Alternativamente, los agentes adicionales pueden prevenir o limitar una respuesta tisular adversa. Además, los agentes adicionales pueden colaborar en la estabilidad o viabilidad de la composición inyectable. En determinadas formas de realización, se proporcionan otros compuestos como diluyentes, vehículos, excipientes o compuestos similares.

[0056] Los agentes adicionales pueden estar presentes (disueltos o suspendidos) en la fase líquida de la composición. Alternativamente, los agentes adicionales pueden estar presentes en los glóbulos de la composición.

[0057] En una forma de realización, se pueden incluir en la composición agentes farmacéuticos, incluidos antibióticos, promotores del crecimiento, antiinfecciosos, antisépticos, compuestos angiogénicos, agentes anticancerosos, agentes antiinflamatorios, inhibidores de proteasa y similares.

[0058] En otra forma de realización, se pueden incluir en la composición factores biológicos tales como factores tisulares, citocinas, factores de crecimiento y similares. Particularmente preferidos son los factores implicados en la cicatrización de heridas, fibrosis y granulación.

[0059] En otra forma de realización, se pueden incluir en la composición células, en particular, células que están implicadas en la cicatrización de heridas. Entre los ejemplos se incluyen células epiteliales, fibrocitos, fibroblastos, precursores de queratinocitos, queratinocitos, miofibroblastos, fagocitos y similares.

[0060] La composición se puede envasar de diversas formas, incluido un recipiente en el que se haya depositado la composición en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la materia e incluyen materiales tales como botellas (plástico y vidrio), jeringas, bolsitas, ampollas, bolsas de plástico, cilindros metálicos y similares. El recipiente también puede incluir un conjunto a prueba de manipulaciones para evitar el acceso indiscreto al contenido del paquete. Además, en el recipiente puede haber depositada sobre él una etiqueta que describa el contenido del recipiente. La etiqueta también puede incluir advertencias apropiadas.

III MÉTODOS DE FABRICACIÓN

[0061] En otra forma de realización, la invención proporciona un proceso para producir una composición formada a partir de tropoelastina que incluye la etapa de coacervar o polimerizar tropoelastina en una fase líquida que tiene un agente de control de la coalescencia disuelto en esta.

[0062] Una ventaja importante del proceso es que la composición producida por este puede inyectarse sin etapas adicionales de manipulación o procesamiento. Este es un aspecto distintivo de la invención, ya que muchas de las composiciones de biomateriales inyectables actualmente conocidas en la técnica requieren etapas de procesamiento adicionales (por ejemplo, de lavado para eliminar los agentes de reticulación) antes de que puedan inyectarse.

[0063] Otra ventaja importante del proceso es que la composición producida a partir del proceso contiene un alto contenido de sólidos de tropoelastina, al tiempo que aún mantiene la propiedad inyectable de la composición. Este es también un aspecto distintivo de la invención en comparación con otras composiciones que contienen biomateriales conocidas en la técnica.

[0064] Generalmente, una solución de tropoelastina que tiene una concentración superior a aproximadamente 1,5 mg/ml es capaz de formar una composición inyectable de integridad deseable, aunque también son útiles concentraciones menores. En la mayoría de las aplicaciones, la concentración de la solución es inferior a aproximadamente 400 mg/ml. Por lo tanto, es preferible una solución de tropoelastina que tenga una concentración de aproximadamente 1,5 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml. Más preferiblemente, se usa una solución de tropoelastina que tiene una concentración de entre aproximadamente 5 mg/ml y aproximadamente 300 mg/ml. Más preferiblemente, se usa una solución de tropoelastina que tiene una concentración de entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 200 mg/ml.

[0065] La concentración de sal de la fase líquida puede controlarse añadiendo sal, incluido cualquier compuesto iónico, o especies de bajo peso molecular capaces de afectar la osmolalidad de la solución. Por ejemplo, se puede usar NaCl, KCl, MgSO4, Na2CO3 o glucosa. Una sal preferida es NaCl.

[0066] Cuando la intención es formar una composición formada a partir de tropoelastina que consiste en elastina (o tropoelastina reticulada), la temperatura de la solución puede elevarse a rangos fisiológicos de aproximadamente 37 °C, de modo que se forme una fase viscoelástica. Puede añadirse un agente de reticulación tal como glutaraldehído antes de esta etapa de coacervación, o puede añadirse después.

[0067] Cuando la intención es formar una composición formada a partir de tropoelastina que incluye material elástico, un pH de aproximadamente 7,5 o más es suficiente para hacer que se forme un material elástico a partir de la tropoelastina en la solución. En general, se evita que el pH supere aproximadamente el pH 13, ya que por encima de este el material elástico está peor formado. Más preferiblemente, es deseable un pH de entre aproximadamente pH 9 y pH 13. Sin embargo, de la manera más preferible se usa un pH de entre aproximadamente pH 10 y pH 11. Otras medidas de pH que podrían usarse incluyen 8.0, 8.5, 9.5, 10, 10.5 y 11.5. Puede añadirse un agente de reticulación como glutaraldehído antes del cambio de pH, o puede añadirse después.

[0068] La alcalinidad se puede ajustar mediante una serie de enfoques que incluyen 1) añadir directamente una sustancia que aumenta el pH a una solución de tropoelastina, 2) mezclar una solución que contiene cantidades suficientes de una sustancia que aumenta el pH para hacerla alcalina con una solución de tropoelastina. La sustancia que aumenta el pH podría ser una base, un tampón o un material adsorbente de protones. Se ha descubierto que los ejemplos que incluyen Tris base, NH4OH y NaOH son útiles como sustancias de aumento o control del pH.

[0069] Cuando el pH es alcalino y menor de aproximadamente 9,5, se puede necesitar sal para formar el material elástico de la invención. Cuando se usa sal, la concentración es generalmente superior a 25 mM y puede ser de hasta 200 mM. Preferiblemente, la concentración de sal está entre aproximadamente 100 mM y 150 mM. Más preferiblemente, la concentración de sal es de aproximadamente 150 mM. A medida que el pH disminuye (y aún permanece alcalino) por debajo de pH 10, se requiere sal para provocar la formación del material elástico y la cantidad de sal requerida aumenta a medida que disminuye el pH. Así, por ejemplo, a un pH de aproximadamente 9 a 10, se requiere sal, por ejemplo, debe proporcionarse a la solución una concentración de sal equivalente a aproximadamente 60 mM. En algunas formas de realización, la solución debe tener una osmolaridad equivalente a la de la solución salina isotónica de mamífero (150 mM) o menor. En otras formas de realización, la solución es tener una osmolaridad superior a 150 mM. La concentración de sal también puede ser de 0 mM.

[0070] La concentración de sal de la solución puede controlarse añadiendo sal, incluido cualquier compuesto iónico, iones monovalentes o divalentes, o especies de bajo peso molecular capaces de afectar la osmolalidad de la solución. Por ejemplo, se puede utilizar NaCl, KCI, MgSO4, Na2CO3 o glucosa. Una sal preferida es NaCl.

[0071] Opcionalmente, la fase líquida se puede agitar durante la coacervación. La fase líquida se puede agitar por medios mecánicos, por ejemplo, mediante el uso de un aparato de agitación magnético, mezclado manual o colocación en un agitador orbital.

[0072] El proceso de acuerdo con la presente invención puede llevarse a cabo en condiciones estériles para asegurar que las composiciones producidas por el proceso sean adecuadas para su uso in vivo.

[0073] En otra forma de realización, el pH de la composición se puede ajustar a un valor dentro de un intervalo fisiológicamente aceptable. En otra forma de realización, la fuerza iónica de la composición se ajusta dentro de un intervalo fisiológicamente aceptable.

IV DISPOSITIVOS Y KITS

[0074] En determinadas formas de realización, la composición puede proporcionarse en forma de un dispositivo, desechable o reutilizable, que incluye un receptáculo para contener la composición. En una forma de realización, el dispositivo es una jeringa. El dispositivo puede contener entre 0,1 y 10 ml de la composición. Más preferiblemente, el dispositivo puede contener de 0,5 a 5 ml de la composición. La composición se puede proporcionar en el dispositivo en un estado que esté listo para su uso, por ejemplo, en forma reticulada, o en un estado que requiera mezcla o adición de componentes adicionales, como un reticulante (si se requiere reticulación).

[0075] En otras formas de realización, se proporciona un kit para su uso en una de las formas de realización descritas anteriormente, incluyendo el kit:

- un recipiente que contiene una composición según la invención;

- una etiqueta o prospecto con instrucciones de uso.

[0076] En determinadas formas de realización, el kit puede contener uno o más principios activos o ingredientes además de los glóbulos. Estos ingredientes activos se describen anteriormente.

[0077] El kit puede comprender un recipiente y una etiqueta o prospecto en el recipiente o asociado al recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, blíster, etc. Los recipientes pueden formarse a partir de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente contiene la composición o formulación de la misma y puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica). La etiqueta o el prospecto indica que la composición se usa para tratar la afección elegida, como el aumento de volumen del tejido. En una forma de realización, la etiqueta o prospecto incluye instrucciones de uso e indica que la composición puede usarse para tratar un trastorno o una complicación que surja de un defecto tisular.

[0078] El kit puede comprender (a) un primer recipiente con la composición de la invención; y (b) un segundo recipiente con un principio o ingrediente activo contenido en el mismo. El kit en esta forma de realización de la invención puede comprender, además, un prospecto que indique que la composición y otro principio activo pueden usarse para tratar un trastorno. Alternativa o adicionalmente, el kit puede comprender, además, un segundo (o tercer) recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir, además, otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y de usuario, incluidos otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y jeringas.

V MÉTODOS DE TRATAMIENTO

[0079] En determinadas formas de realización, se proporciona un uso de la composición según la invención en la fabricación de una formulación o prótesis para corregir un defecto tisular, especialmente un defecto que requiere un aumento dérmico de tejido blando.

[0080] En otras formas de realización, se proporciona un método de aumento dérmico de tejido blando, incluyendo el método la administración de una cantidad eficaz de una composición de acuerdo con la invención a un individuo que necesite tal tratamiento.

[0081] Un individuo apto para el tratamiento con este método puede presentar síntomas menores del proceso de envejecimiento, por ejemplo, pequeñas arrugas alrededor de los ojos y la boca, pequeñas arrugas en los labios y una pequeña disminución en el volumen de los labios. Alternativamente, los signos del envejecimiento pueden ser más pronunciados. Por ejemplo, un individuo puede mostrar signos de envejecimiento más pronunciados, con arrugas profundas y una profundización del pliegue nasolabial. Además, puede haber atrofia o estructuras faciales flácidas, como las almohadillas de grasa malar. Además, un individuo puede querer aumentar su apariencia en ausencia de cualquier signo de envejecimiento; por ejemplo, el individuo puede querer aumentar el volumen de sus labios. En determinadas formas de realización, la composición se puede inyectar por vía intradérmica, intracutánea y/o subcutánea. La inyección de la composición proporciona un efecto de volumen o relleno, reduciendo la apariencia de las arrugas o pliegues, o alternativamente proporcionando un efecto estéticamente agradable.

[0082] Otros defectos tisulares a los que se puede aplicar la composición incluyen cicatrices dérmicas que surgen de, por ejemplo, enfermedades de la piel (como acné, paperas, varicela o sarampión), cicatrices de traumatismos (heridas o quemaduras) o de procedimientos quirúrgicos.

[0083] Otros defectos tisulares adicionales a los que se puede aplicar la composición incluyen pérdida o atrofia importante de tejido, tal como lipoatrofia en la región facial de pacientes con VIH como efecto secundario de terapias retrovirales.

[0084] En una forma de realización, se proporciona un uso de la composición según la invención para el tratamiento de una afección asociada con un esfínter incompetente. Un individuo apto para este tratamiento puede sufrir una afección o una enfermedad como, por ejemplo, deficiencia intrínseca del esfínter, incontinencia urinaria, enfermedad por reflujo gastrointestinal o reflujo vesicoureteral. Además, un individuo apto para esta forma de tratamiento puede padecer incontinencia fecal.

[0085] Normalmente, la composición se administra en el sitio del defecto tisular mediante inyección, aunque pueden ser apropiadas otras vías de administración dependiendo de la naturaleza del defecto tisular. Cuando la composición se va a administrar mediante inyección, se puede usar un intervalo de calibres de aguja. El calibre utilizado depende, entre otras cosas, de la naturaleza del material que contiene tropoelastina (por ejemplo, su viscosidad) y la naturaleza del defecto (por ejemplo, la profundidad del lugar de inyección). Por ejemplo, cuando la composición está destinada para su uso en el aumento de tejido, el calibre de la aguja estará generalmente en el intervalo de entre aproximadamente 16G y 31G. Normalmente, para los rellenos dérmicos, el calibre de la aguja estará en el rango de entre aproximadamente 25G y 31G. Las inyecciones superficiales de la dermis para las arrugas finas pueden usar, por ejemplo, agujas con un calibre en el intervalo de 27-31G, mientras que una aguja de calibre más grande, como una aguja de 25G o 27G, puede ser necesaria para inyecciones profundas debajo de la dermis. Para aplicaciones de incontinencia, el calibre de la aguja será generalmente de entre aproximadamente 16G y aproximadamente 21G.

[0086] La composición se puede administrar durante varios tratamientos para corregir el defecto tisular y/o para lograr o mantener el resultado deseado.

[0087] Se entenderá que la invención descrita y definida en esta memoria se extiende a todas las combinaciones alternativas de dos o más de las características individuales mencionadas o que resultan evidentes a partir del texto o los dibujos. Todas estas diferentes combinaciones constituyen varios aspectos alternativos de la invención.

Ejemplos

[0088] Los siguientes ejemplos están destinados a ilustrar, pero de ningún modo a limitar, la presente invención.

Ejemplo 1: Producción de glóbulos formados a partir de tropoelastina a concentraciones bajas de tropoelastina utilizando un proceso de polimerización alcalina.

Materiales y métodos

[0089] Se disolvieron 20 mg de tropoelastina en 10 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a 4 °C durante la noche (16 horas estimadas) para proporcionar una concentración final de tropoelastina de 2 mg/ml. Manteniendo la solución en hielo durante todo el proceso, se midió el pH inicial de la solución (pH 7.2) y se añadieron 39 |_il de NaOH 1 M para llevar el pH de la solución a un valor de 10.7. Luego, la solución resultante se incubó a 37 °C durante 4 h en un tubo de 15 ml antes de sacarla de la incubadora y colocarla a temperatura ambiente.

Resultados

[0090] Las micropartículas producidas tienden a cubrir el lado del tubo. Una imagen SEM de una muestra de la solución (Figura 1A) muestra la presencia de micropartículas con un diámetro estimado de 1 |_im. Las esferas tienden a agregarse juntas debido a la naturaleza "pegajosa" del material de elastina.

Ejemplo 2: polimerización alcalina de tropoelastina en ausencia de un agente de control de la coalescencia a una concentración de 10 mg/ml.

Materiales y métodos

[0091] Se disolvieron 50 mg de tropoelastina en 4,9 ml de PBS a 4°C durante la noche (16 horas estimadas). Manteniendo la solución en hielo durante todo el proceso, se midió el pH inicial de la solución (pH 7.22) y se añadieron 47 |_il de NaOH 1 M para llevar el pH de la solución a un valor de 10.7. Se agregaron 53 |_il adicionales de PBS para preparar una solución de tropoelastina con una concentración final de 10 mg/ml. Después, la solución se incubó a 37 °C durante la noche (16 horas) en un tubo de fondo plano de 5 ml antes de sacarla de la incubadora y colocarla a temperatura ambiente.

Resultados

[0092] Como se puede observar en la Figura 1B, el material producido era un material elástico sólido que conservaba la forma del tubo en el que se preparó. Más de 4,5 ml de fluido se separaron del sólido resultante, lo que sugiere que la mayoría de los 50 mg de tropoelastina (>40 mg) estaba presente en aproximadamente 0,5 ml de líquido en la construcción producida. Dicho de otro modo, la tropoelastina está significativamente más concentrada en el sólido en comparación con el material de partida (10 mg/ml) debido a la densa agregación de tropoelastina a esta concentración en ausencia de un agente de control de la coalescencia.

Ejemplo 3: Producción de glóbulos en presencia de CMC como agente de control de la coalescencia utilizando reticulación química.

Materiales y métodos

[0093] Se produjo una solución madre de 200 mg/ml de tropoelastina disolviendo 300 mg de tropoelastina en 1,5 ml de PBS durante la noche a 4 °C. Se produjo una solución madre de carboximetilcelulosa de alta viscosidad al 2 % (p/v) (CMC; Sigma Cat No. C5013) disolviendo 2 g de CMC en 100 ml de PBS con agitación durante la noche a temperatura ambiente.

[0094] Manteniendo las soluciones en hielo durante todo el proceso, se mezclaron 250 |_il de la solución madre de tropoelastina con 200 |_il de PBS y 500 |_il de CMC al 2 % (p/v). Se abrió un vial nuevo de solución de glutaraldehído (GA) al 25 % (v/v) en hielo y se mezclaron 2 |_il de Ga al 25 % (v/v) con 48 |_il de PBS antes de añadirlo inmediatamente a la solución de tropoelastina. La mezcla resultante de 50 mg/ml de tropoelastina, CMC al 1 % (p/v), GA al 0,05 % (v/v) se agitó usando una punta de pipeta enfriada (las puntas de pipeta se preenfriaron colocándolas a -20 °C durante la noche) antes de incubarla a 37 °C durante 24 horas en un tubo de fondo plano de 5 ml.

Resultados

[0095] El material producido apareció rosado y viscoso después de 3 horas de incubación y permaneció igual después del resto del período de incubación de 24 horas. El material se podía pasar a través de una aguja de 29G y luego de una aguja de 31G y parecía volverse menos viscoso después del paso de la aguja. Una imagen SEM de una muestra del material ilustra una mezcla homogénea de glóbulos con un rango de diámetros de aproximadamente 0,5 a 1 |_im (Figura 2). En esta formulación es evidente un bajo nivel de coalescencia entre los glóbulos.

Ejemplo 4: Producción de glóbulos en presencia de HA como agente de control de la coalescencia usando reticulación química.

Materiales y métodos

Solución madre de tropoelastina

[0096] Se añadió H2O (1 ml) PBS (0,5 ml) a 200 mg de tropoelastina liofilizada y se mantuvo a entre 2 y 8 °C para disolver; la concentración resultante, determinada midiendo la absorbancia UV a 280 nm de una dilución 1/250 en H2O, fue de 150 mg/ml. La concentración se determinó usando un coeficiente de extinción de 0,3125 ml/mg.cm.

Solución madre de ácido hialurónico (HA)

[0097] Se preparó una solución de HA al 2 % en PBS añadiendo PBS esterilizado en autoclave a 1 g de HA (volumen final de 50 ml) y agitando con un agitador magnético. La muestra se almacenó entre 2 y 8 °C.

Solución madre de glutaraldehído

[0098] Se preparó una solución al 1 % de glutaraldehído añadiendo 2 |_il de GA al 25 % a 48 |_il de PBS y mezclando en un tubo Eppendorf. Todas las puntas se enfriaron a <10 °C antes de su uso.

Preparación y composición de la muestra de prueba

[0099] Todos los componentes se mantuvieron en hielo hasta que se necesitaron. La cantidad requerida de HA, PBS y soluciones madre tropoelastina se combinaron en un tubo de 5 ml en hielo usando una pipeta. La composición resultante se mezcló usando un agitador magnético a 2-8 °C durante 2 minutos y se centrifugó brevemente en una centrífuga para eliminar cualquier burbuja de aire. Se añadió glutaraldehído y la composición resultante se mezcló usando un agitador magnético a 2-8°C durante 2 minutos más. Se retiró la barra de agitación; la muestra se centrifugó brevemente en una centrífuga para eliminar las burbujas de aire y luego se incubó a 37 °C durante 16 horas. Composición final: 50 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 %, glutaraldehído al 0,05 %.

Resultados

[0100] El material producido apareció como un gel viscoso rosa. El material podía pasar directamente a través de una aguja 31G y no cambiaba de apariencia después de pasar a través de la aguja. Una imagen SEM de una muestra del material (figura 3) representa una mezcla homogénea de glóbulos con un diámetro aproximado de 1 l_im. Resulta evidente una clara conectividad entre los glóbulos. El análisis SEM del material después de la extrusión a través de una aguja 31G y después de un lavado con exceso de agua o PBS no reveló cambios en la estructura del material.

Ejemplo 5: Efecto de la valoración de la concentración de tropoelastina frente al agente de control de la coalescencia en la formación de glóbulos formados a partir de tropoelastina usando catálisis alcalina.

Materiales y métodos

[0101] Se produjo una solución madre de 200 mg/ml de tropoelastina disolviendo 300 mg de tropoelastina en 1,5 ml de PBS durante la noche a 4°C. Se produjo una solución madre de ácido hialurónico al 2 % (p/v) (sal sódica de HA del cordón umbilical humano; Sigma Cat No. H1876) disolviendo 100 mg de HA en 5 ml de PBS durante la noche a 4 °C.

[0102] Para producir una valoración de la concentración de tropoelastina frente a la de1HA, se prepararon las siguientes muestras mezclando las soluciones apropiadas en hielo:

Muestra A: 50 |_il de solución de tropoelastina 450 |_il de PBS 500 |_il de solución de HA. pH inicial de 6.8 ajustado mediante la adición de 4 |_il de NaOH 1 M para proporcionar un pH de 10.7. La solución final producida es 10 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 % (p/v).

Muestra B: 125 |_il de solución de tropoelastina 375 |_il de PBS 500 |_il de solución de HA. pH inicial de 6.8 ajustado mediante la adición de 7 |_il de NaOH 1 M para proporcionar un pH de 10.3. La solución final producida es de 25 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 % (p/v).

Muestra C: 250 |_il de solución de tropoelastina 250 |_il de PBS 500 |_il de solución de HA. pH inicial de 6.8 ajustado mediante la adición de 10,5 |_il de NaOH 1 M para proporcionar un pH de 10.4. La solución final producida es 50 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 % (p/v).

Muestra D: 375 |_il de solución de tropoelastina 125 |_il de PBS 500 |_il de solución de HA. Se ajustó el pH inicial de 6 mediante la adición de 16 |_il de NaOH 1 M para proporcionar un pH de 10.3. La solución final producida es 75 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 % (p/v).

[0103] A continuación, todas las muestras se incubaron a 37 °C durante la noche (16 horas) en un tubo de fondo plano de 5 ml.

Resultados

Muestra A: 10 mg/ml de tropoelastina. HA al 1 % (p/v). pH 10.7

[0104] El material producido era un líquido blanco homogéneo que podía pasar a través de una aguja 30G después de extrusiones secuenciales a través de una aguja 18G, 21G, 25G y 30G. Una imagen SEM (Figura 4A) de la solución resultante revela una mezcla relativamente homogénea de glóbulos coalescidos formados a partir de tropoelastina con un intervalo de diámetros de aproximadamente 1 a 4 |_im.

Muestra B: 25 mg/ml de tropoelastina. HA al 1 % (p/v). pH 10.3

[0105] El material producido fue una pasta blanca espesa formada en el fondo del tubo y cubierta por un líquido blanco. La pasta se puede mezclar con el resto de la solución; sin embargo, la solución permaneció bastante heterogénea y obstruyó una aguja 29G; es probable que el material pudiera extruirse a través de una aguja de calibre más ancho, como 18G [N.B. la extrusión se intentó directamente en solo una aguja fija 29G; aquí no se intentó ningún método de extrusión secuencial]. Una imagen SEM (Figura 4B) de la solución resultante después de mezclar demuestra la presencia de glóbulos coalescidos con un rango de diámetros de aproximadamente 1 a 4 |_im.

Muestra C: 50 mg/ml de tropoelastina. HA al 1 % (p/v). pH 10.4

[0106] El material producido fue una pasta/sólido blanco espeso formado en el fondo del tubo. Esta pasta se pudo mezclar parcialmente con el líquido anterior; sin embargo, esto dio lugar a una suspensión heterogénea que contenía trozos de material sólido. No podría pasar a través de una aguja 29G, aunque es probable que el material pueda extruirse a través de una aguja de calibre más ancho, como 18G [N.B. la extrusión se intentó directamente en solo una aguja fija 29G; aquí no se intentó ningún método de extrusión secuencial]. Una imagen SEM (Figura 4C) de la solución resultante después del mezclado demuestra la presencia de glóbulos coalescidos con un rango de diámetros de aproximadamente 1-10 |_im.

Muestra D. 75 mg/ml de tropoelastina, HA al 1 % (p/v). pH 10.3

[0107] El material producido fue una pasta/sólido blanco espeso formado en el fondo del tubo. Esta pasta se pudo mezclar parcialmente con el líquido anterior; sin embargo, esto dio lugar a una suspensión heterogénea que contenía trozos de material sólido. No se podría pasar a través de una aguja 29G, aunque es probable que el material se pueda extruir a través de una aguja de calibre más ancho, como 18G [N.B. la extrusión se intentó directamente en solo una aguja fija 29G; aquí no se intentó ningún método de extrusión secuencial]. Una imagen SEM (Figura 4D) de la solución resultante después del mezclado demuestra la presencia de glóbulos coalescidos con un rango de diámetros de aproximadamente 0,5-20 |_im.

[0108] Usando las imágenes SEM anteriores, la distribución de tamaño de los diámetros de los glóbulos se muestra en la Figura 5. A medida que aumenta la concentración de tropoelastina, aumenta el tamaño de los glóbulos y el nivel de coalescencia.

Ejemplo 6: Efecto de la agitación en la formación de glóbulos en presencia de un agente de control de la coalescencia.

Materiales y métodos

[0109] Se produjo una solución de 222 mg/ml de tropoelastina disolviendo 100 mg de tropoelastina en 450 |_il de PBS durante la noche a 4 °C. Se produjo una solución madre de carboximetilcelulosa de alta viscosidad al 2 % (p/v) (CMC; Sigma Cat No. C5013) disolviendo 2 g de CMC en 100 ml de PBS durante la noche con agitación a temperatura ambiente.

[0110] Manteniendo las soluciones en hielo en todo momento, se mezclaron 450 |_il de solución de tropoelastina con 500 |_il de CMC al 2 % (p/v). Se abrió un vial nuevo de solución de glutaraldehído al 25 % (v/v) en hielo y se mezclaron 2 |_il de GA al 25 % (v/v) con 48 |_il de PBS antes de añadirlo inmediatamente a la solución de tropoelastina. La mezcla resultante de 100 mg/ml de tropoelastina, CMC al 1 % (p/v), GA al 0,05 % (v/v) se agitó usando una punta de pipeta enfriada (las puntas de pipeta se preenfriaron colocándolas a -20 °C durante la noche). La mezcla se colocó en una incubadora a 37 °C y se agitó usando un agitador magnético durante 4 horas. A continuación, la solución se refrigeró durante la noche (16 horas) sin agitar.

Resultados

[0111] El material producido era rosado, opaco y viscoso después de la incubación inicial de 4 horas a 37 °C. Después de la refrigeración, el material se volvió ligeramente translúcido (aunque permaneció rosado y viscoso); sin embargo, al calentarse a temperatura ambiente, rápidamente se volvió opaco una vez más. El material podría pasar a través de una aguja 31G. Después de pasar a través de una aguja, la solución permaneció sin cambios.

[0112] Cuando se observa en el SEM, la muestra (Figura 6A y 6B) mostraron glóbulos coalescidos de diferentes tamaños.

Ejemplo 7: Producción de glóbulos en presencia de un agente de control de la coalescencia utilizando un proceso de polimerización alcalina.

Materiales y métodos

[0113] Se añadieron 450 |_il de tropoelastina (222 mg/ml) a 500 |_il de CMC al 2 % en hielo. Tras un mezclado a fondo, el pH de la solución se ajustó de 7.1 a 10.2 con 19 |_il de NaOH 1 M y luego se añadieron 31 |_il de PBS mientras la muestra permanecía en hielo. Luego, la muestra se incubó a 37 °C durante 4 h con agitación y después se almacenó a 4 °C. Para una muestra neutra, el pH se ajustó luego a temperatura ambiente de 9.7 a 7.4 con 11 l_il de HCl 1 M. Las soluciones resultantes contenían 100 mg/ml de tropoelastina, CMC al 1 % (p/v).

Resultados

[0114] El material producido era un líquido blanco homogéneo que podía pasar a través de una aguja 26G - 29G. Una imagen SEM de la solución alcalina (Figura 7A y 7B) y la solución alcalina neutralizada (Figura 7C y 7D) revela material compuesto por glóbulos coalescidos. Ambos materiales son un líquido viscoso marrón claro translúcido a 4 °C que se convierte en un líquido viscoso blanco/marrón opaco con el calentamiento.

Ejemplo 8: Estabilidad de las m icropartículas formadas a partir de tropoelastina en presencia de un agente de control de la coalescencia.

[0115] Las muestras producidas de acuerdo con el Ejemplo 4A y el Ejemplo 6 se almacenaron a 4 °C durante más de 60 días. Después de más de 60 días, el material todavía era susceptible de inyección y su apariencia no había cambiado según lo observado en SEM.

Ejemplo 9: Formación de material inyectable que comprende tropoelastina reticulada y goma xantana (XG) Materiales y métodos

[0116] Se añadieron 450 |_il de tropoelastina (222 mg/ml) a 500 |_il de XG al 3 % en hielo y se mezclaron minuciosamente. Se abrió un vial nuevo de solución de glutaraldehído al 25 % (v/v) en hielo y se mezclaron 2 |_il de GA al 25 % (v/v) con 48 |_il de PBS antes de añadirlo inmediatamente a la solución de tropoelastina. Luego, la muestra se incubó a 37 °C durante 4 h con agitación y luego se almacenó a 4 °C. La mezcla resultante contenía 100 mg/ml de tropoelastina, XG al 1,5 % (p/v), GA al 0,05 % (v/v).

Resultados

[0117] El material producido era un gel viscoso de color rosa translúcido a 4 °C que se convirtió en un gel de color rosa opaco con el calentamiento. Las imágenes SEM (Figura 8A y 8B) muestran que el material está compuesto de acumulaciones. El material podría pasar a través de una aguja 31G. Después de pasar a través de una aguja, la solución permaneció sin cambios.

Ejemplo 10: Formación de material para su administración a través de una aguja o cánula de calibre ancho que comprende tropoelastina reticulada y HPC

Materiales y métodos

[0118] Se añadieron 450 |_il de tropoelastina (222 mg/ml) a 500 |_il de hidroxipropilcelulosa (HPC) al 4 % en hielo y se mezclaron minuciosamente. Se abrió un vial nuevo de solución de glutaraldehído al 25 % (v/v) en hielo y se mezclaron 2 |_il de GA al 25 % (v/v) con 48 |_il de PBS antes de añadirlo inmediatamente a la solución de tropoelastina. Luego, la muestra se incubó a 37 °C durante 4 h con agitación y después se almacenó a 4 °C. La mezcla resultante contenía 100 mg/ml de tropoelastina, HPC al 2 % (p/v), GA al 0,05 % (v/v).

Resultados

[0119] Se produjo un material voluminoso, suave y teñido de rosa (Figura 9A). Las imágenes SEM (Figura 9B) muestran que el material es fibroso con alguna evidencia de acumulaciones. El material se puede pasar a través de un orificio de 2 mm utilizando una jeringa.

Ejemplo 11 - Optimización de una form ulación para administración a través de una aguja de calibre fino [0120] Se realizaron estudios de optimización para determinar los posibles límites de la relación de masa entre tropoelastina y agente de control de la coalescencia para una formulación de tropoelastina que se puede inyectar a través de agujas de calibre en el rango de 29G - 31G. Las muestras en negrita en la siguiente tabla no pudieron pasar a través de una aguja 29/31G.

Ejemplo 12: Método de uso de la composición inyectable en el aumento de tejidos.

Descripción

[0121] La composición es un gel producido a partir de una tropoelastina humana sintética generada por la especie bacteriana Escherichia coli, químicamente reticulada con glutaraldehído en presencia de una solución al 1 % de un derivado de celulosa a pH = 7 y con una concentración final de tropoelastina de 100 mg/ml.

Indicación

[0122] La composición está indicada para la implantación dérmica media a profunda para la corrección de arrugas y pliegues faciales de moderados a severos, como los pliegues nasolabiales.

Método de suministro

[0123] La composición se suministra en una jeringa desechable con una aguja 31G x 1/2".

Procedimiento de tratamiento

[0124]

1. Es fundamental consultar con el paciente y que esté informado de las indicaciones, contraindicaciones, advertencias, precauciones, respuestas al tratamiento, reacciones adversas y forma de administración con el tratamiento. Se debe tener un historial médico completo del paciente antes del tratamiento.

2. Evaluar la necesidad del paciente del tratamiento del dolor.

3. Limpiar la zona que se va a tratar con alcohol u otra solución antiséptica adecuada.

4. Antes de la inyección, presionar el émbolo para que una pequeña cantidad de la composición sea visible en la punta de la aguja.

5. La composición debe administrarse utilizando una aguja de calibre fino (31G x 14"). La aguja se inserta en un ángulo aproximado de 30° paralelo a la longitud de la arruga o pliegue. La técnica de inyección en relación con el ángulo y la orientación del bisel, la profundidad de la inyección y la cantidad administrada pueden diferir.

Si la composición se inyecta con demasiada profundidad o intramuscularmente, la duración del efecto será menor.

6. Inyectar la composición aplicando una presión uniforme sobre el émbolo mientras se tira lentamente de la aguja hacia atrás. La arruga debe levantarse y eliminarse al final de la inyección. Es importante que la inyección se detenga justo antes de sacar la aguja de la piel para evitar que el material se filtre o termine demasiado superficialmente en la piel.

7. Cuando se completa la inyección, el sitio tratado debe masajearse suavemente para que se adapte al contorno de los tejidos circundantes.

8. El uso típico de cada sesión de tratamiento es de 1 ml por sitio de tratamiento.

[0125] La técnica de inyección correcta es fundamental para el resultado final del tratamiento.

[0126] La siguiente parte de la descripción consta de párrafos numerados:

Párrafo 1. Una composición inyectable formada a partir de tropoelastina, incluyendo la composición una sustancia que contiene tropoelastina, en la que la sustancia incluye, además, un agente en forma de polisacárido o derivado de polisacárido, en una cantidad eficaz para dotar a la sustancia de propiedades de flujo que permitan la inyección de la composición.

Párrafo 2. La composición del párrafo 1 en la que la sustancia se encuentra en forma de masa no particulada.

Párrafo 3. La composición de cualquiera de los párrafos anteriores en la que el agente es uno o más de ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y goma xantana. Párrafo 4. La composición del párrafo 3 en la que el agente es ácido hialurónico y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 5. La composición del párrafo 3 en la que el agente es carboximetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 6. La composición del párrafo 3 en la que el agente es goma xantana y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 7. La composición del párrafo 3 en la que el agente es hidroxipropilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 8. La composición del párrafo 3 en la que el agente es hidroxipropilmetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 9. La composición del párrafo 1 en la que la sustancia está en forma de masa particulada.

Párrafo 10. La composición del párrafo 9 en la que el agente es uno o más de ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y goma xantana.

Párrafo 11. La composición del párrafo 10 en la que el agente es ácido hialurónico y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 12. La composición del párrafo 10 en la que el agente es carboximetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 13. La composición del párrafo 10 en la que el agente es goma xantana y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 14. La composición del párrafo 10 en la que el agente es hidroxipropilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 15. La composición del párrafo 10 en la que el agente es hidroxipropilmetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 16. La composición del párrafo 1 en la que la sustancia está en forma de glóbulos.

Párrafo 17. La composición del párrafo 16 en la que el agente es uno o más de ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y goma xantana.

Párrafo 18. La composición del párrafo 16 en la que el agente es ácido hialurónico y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 19. La composición del párrafo 16 en la que el agente es carboximetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 20. La composición del párrafo 16 en la que el agente es goma xantana y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 21. La composición del párrafo 16 en la que el agente es hidroxipropilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 22. La composición del párrafo 16 en la que el agente es hidroxipropilmetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 23. Un proceso para producir glóbulos formados a partir de tropoelastina que incluye la etapa de coacervar la tropoelastina en una fase líquida que tiene un agente de control de la coalescencia en forma de polisacárido o derivado de polisacárido disuelto en el mismo.

Párrafo 24. El proceso del párrafo 23 en el que la fase líquida tiene un pH de 7 a 13.

Párrafo 25. El proceso del párrafo 23 en el que la temperatura de la fase líquida es de aproximadamente 37 °C.

Párrafo 26. El proceso del párrafo 23 en el que la fase líquida incluye, además, sal.

Párrafo 27. El proceso del párrafo 23 en el que la fase líquida incluye, además, un agente de reticulación para reticular la tropoelastina coacervada.

Párrafo 28. El proceso del párrafo 27 en el que el agente de reticulación se añade a la fase líquida después de la coacervación.

Párrafo 29. El proceso del párrafo 23, incluida la agitación de la fase líquida durante la coacervación. Párrafo 30. El proceso del párrafo 23 incluye la extrusión de la tropoelastina coacervada a través de una aguja de calibre fino para dispersar los glóbulos formados en la fase líquida.

Párrafo 31. Un proceso para producir glóbulos formados a partir de tropoelastina que incluye la etapa de calentar una tropoelastina en una fase líquida que tiene un pH alcalino y un agente de control de la coalescencia en forma de polisacárido o derivado de polisacárido disuelto en el mismo para formar glóbulos formados por un material elástico.

Párrafo 32. El proceso del párrafo 31 en el que la fase líquida incluye, además, sal.

Párrafo 33. El proceso del párrafo 31 que incluye, además, la reticulación del material elástico con un agente de reticulación.

Párrafo 34. Una composición inyectable para alterar o corregir un defecto tisular, incluyendo la composición una fase líquida que contiene una pluralidad de glóbulos formados a partir de tropoelastina, presentando la fase líquida un agente de control de la coalescencia en forma de polisacárido o derivado de polisacárido disuelto en el mismo en una cantidad eficaz para reducir la coalescencia de los glóbulos. Párrafo 35. La composición del párrafo 34 en la que el agente es uno o más de ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y goma xantana.

Párrafo 36. La composición del párrafo 35 en la que el agente es ácido hialurónico y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 37. La composición del párrafo 35 en la que el agente es carboximetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 38. La composición del párrafo 35 en la que el agente es goma xantana y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 39. La composición del párrafo 35 en la que el agente es hidroxipropilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 40. La composición del párrafo 35 en la que el agente es hidroxipropilmetilcelulosa y la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

Párrafo 41. La composición de cualquiera de los párrafos anteriores en la que la sustancia se forma a partir de tropoelastina no reticulada.

Párrafo 42. La composición de cualquiera de los párrafos anteriores en la que la tropoelastina es un fragmento de tropoelastina.

Párrafo 43. La composición de cualquiera de los párrafos anteriores en la que los glóbulos se encuentran en forma de microesferas.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Composición inyectable formada a partir de tropoelastina, para su uso en el tratamiento o corrección de un defecto tisular en un individuo que lo necesita, donde la composición comprende:

(a) una sustancia que contiene tropoelastina con una concentración de tropoelastina de 5 mg/ml a 300 mg/ml y

(b) un agente seleccionado de entre ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa, en una cantidad de un 0,5 % a un 3,5 % p/v, preferiblemente en una cantidad de 0,5 % a 2,0 % p/v, en el que la cantidad de agente es eficaz para dotar a la sustancia de propiedades de flujo que permitan la inyección de la composición.

2. Composición inyectable para el uso de la reivindicación 1, en la que el defecto tisular es una anomalía, malformación o imperfección que da como resultado una estructura tisular anómala o una pérdida de volumen tisular, en la que opcionalmente el defecto da como resultado una afección congénita, un procedimiento quirúrgico, traumatismo, enfermedad o lesión.

3. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde la composición proporciona un efecto de volumen, soporte o relleno para tratar o corregir el defecto, opcionalmente en el que el tratamiento o la corrección del defecto incluye un aumento de tejido blando o un aumento dérmico.

4. Composición inyectable para el uso de la reivindicación 3, en la que el defecto tisular comprende pérdida o atrofia importante de tejido, preferiblemente lipoatrofia, o en la que el defecto tisular es una cicatriz dérmica como resultado de una enfermedad de la piel, lesión, quemadura o un procedimiento quirúrgico.

5. Composición inyectable para el uso de la reivindicación 3, en la que el defecto tisular comprende un esfínter incompetente, donde opcionalmente el individuo que requiere tratamiento padece deficiencia intrínseca del esfínter, incontinencia urinaria, enfermedad por reflujo gastrointestinal, reflujo vesicoureteral o incontinencia fecal.

6. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la composición se administra en el sitio del defecto tisular mediante inyección.

7. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que la sustancia está en forma de masa no particulada, masa particulada o en forma de glóbulos.

8. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

9. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que la sustancia que contiene tropoelastina se obtiene a partir de tropoelastina reticulada químicamente.

10. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que la tropoelastina es un fragmento de tropoelastina.

11. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la composición comprende:

una fase líquida que comprende una pluralidad de glóbulos formados a partir de tropoelastina, que tiene una concentración de tropoelastina de 5 mg/ml a 300 mg/ml,

presentando la fase líquida un agente de control de la coalescencia seleccionado entre ácido hialurónico, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa disuelto en esta en una cantidad de 0,5 % a 3,5 % p/v, preferiblemente en una cantidad de 0,5 % a 2,0 % p/v,

donde la cantidad de agente de control de la coalescencia es eficaz para reducir la coalescencia de los glóbulos.

12. Composición inyectable para el uso de la reivindicación 11, en la que la relación de masa entre tropoelastina y agente es de aproximadamente 0,2:1 a aproximadamente 100:1.

13. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 o 12, en la que los glóbulos están en forma de microesferas.

14. Composición inyectable para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que la composición comprende, además, uno o más agentes adicionales como principios activos.

15. Composición inyectable para el uso de cualquiera de la reivindicación 14, en la que los agentes adicionales se seleccionan de entre: agentes farmacéuticos, factores biológicos o células, donde opcionalmente:

i) el agente farmacéutico se selecciona de entre: antibióticos, promotores del crecimiento, agentes antiinfecciosos, antisépticos, compuestos angiogénicos, agentes anticancerígenos, agentes antiinflamatorios o inhibidores de proteasa;

ii) el factor biológico se selecciona de entre: un factor tisular, citoquina, factor de crecimiento, preferiblemente, donde el factor biológico está implicado en la cicatrización de heridas, fibrosis y granulación;

iii) la célula se selecciona de entre células epiteliales, fibrocitos, fibroblastos, precursores de queratinocitos, queratinocitos, miofibroblastos, fagocitos, preferiblemente donde la célula está implicada en la promoción de la cicatrización de heridas.