ES2867965T3 - Compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para utilizar en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para utilizar en el tratamiento del cáncer Download PDF

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Abstract

Compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7, un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto, en el que las células cancerosas de dicho sujeto: - tienen un nivel elevado de H2O2 de al menos un 200% en comparación con el nivel basal de H2O2 en las células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y - tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, y en el que dicho sujeto se identifica mediante la medición del nivel de H2O2 y el nivel de GSH en células cancerosas de dicho sujeto.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para utilizar en el tratamiento del cáncer
La presente invención se refiere al tratamiento de cáncer en un sujeto, en el que las células cancerosas de dicho sujeto sobreproducen H2O2 y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25 000 células; con compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en particular con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, más particularmente con éster fumarato S-metílico de ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentiotioico. También se refiere a un procedimiento para seleccionar un sujeto que padece cáncer y que probablemente se beneficiará de un tratamiento con compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en particular con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inetioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, más particularmente con éster fumarato S-metílico del ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentinotioico.
Antecedentes
El equilibrio redox de las células es clave para la fisiología celular normal. Es mantenido por 3 sistemas: GSH/GSSG, NADPH/NADP; Tiorredoxina (red)/Tiorredoxina (oxd). De estos 3 sistemas, GSH/GSSG es el más ampliamente estudiado por su implicación en estados patológicos y para el desarrollo de enfoques terapéuticos racionales (Townsend, AJ, Leone-Kabler, S., Hainos, r L, Wu, Y., Szweda, L., y Bunting, KD (2001). Selective protection by stably transfected human ALDH3A1 (but not human ALDH1A1) against toxicity of aliphatic aldehydes in V79 cells. 130-132, 261-273). Los estados patológicos asociados con un desequilibrio en GSH/GSSG incluyen patologías importantes como cánceres (Estrela, J.M., Ortega, A. y Obrador, E. (2006). Glutathione in cancer biology and therapy. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 43, 143-181; O'Brien, M.L., y Tew, K.D. (1996). Glutathione and related enzymes in multidrug resistance. Eur. J. Cancer Oxf. Engl. 199032A, 967-978). Su única etiología común es el estrés oxidativo provocado por ROS y/o especies de nitrógeno reactivo (RNS) que primero causan una disminución del glutatión (GSH) debido a la desintoxicación directa de ROS y RNS. Esta disminución inicial de GSH es seguida posteriormente por un aumento compensatorio en la síntesis de GSH que las células ponen en juego para continuar la desintoxicación de ROS/RNS y de productos electrofílicos recién formados, tales como 4-hidroxinonenal (HNE) y malondialdehído (MDA)) producidos por el ataque de ROS sobre lípidos celulares (Esterbauer, H., Schaur, RJ y Zollner, H. (1991). Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aldehydes. 11, 81-128).
Los aumentos en ROS se han descrito en diferentes cánceres humanos (Reuter, S., Gupta, S.C., Chaturvedi, M.M., y Aggarwal, B.B. (2010) Oxidative stress, inflammation, and cáncer: how are they linked? Free Radic. Biol. Med. 49, 1603-1616).
La paradoja del GSH paradoja en células de cáncer es que en lugar del déficit de GSH intracelular que se habría esperado, es precisamente lo opuesto que se encontró experimentalmente en muchas células cancerosas diferentes (Estrela, JM, Ortega, A., y Obrador, E. (2006). Glutathione in canceer biology and therapy. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 43, 143-181). Pero este aumento de GSH tiene repercusiones terapéuticas negativas ya que protege a las células cancerosas de las quimioterapias y radioterapias (Carretero, J., Obrador, E., Esteve, JM, Ortega, A., Pellicer, JA, Sempere, FV y Estrela, JM (2001). Tumoricidal activity of endothelial cells. Inhibition of endothelial nitric oxide production abrogates tumor cytotoxicity induced by hepatic sinusoidal endothelium in response to B16 melanoma adhesion in vitro. J. Biol. Chem. 276, 25775-25782).
Además, si se deben obtener bajos niveles de GSH en las células cancerosas para que la quimioterapia sea eficaz, este no es el caso para las células normales para no inducir daños colaterales a las mismas.
Los enfoques terapéuticos que en la actualidad están siendo utilizados para disminuir el GSH celular con el fin de combatir la quimiorresistencia de las células cancerosas, reconocen el propio GSH o las enzimas implicadas en la síntesis de GSH, la degradación de GSH y el eflujo de GSH. Ya existen 10 compuestos que disminuyen GSH que se encuentran en las fases I, II y III de ensayos clínicos como agentes anticancerosos (Tew, K. y Townsend D (2011) Redox platforms in cancer drug discovery and development. Curr.Opin. Chem.Biol. 15, 156-161).
Sin embargo todos ellos tienen que ser administrados en combinación con fármacos contra el cáncer estándar, por ejemplo, ciclofosfamida, taxol, vincristina, melfalán, etc.
Además, las enzimas reconocidas por estos fármacos reductores de GSH son las que participan en la síntesis de GSH (gamma glutamil cisteína ligasa), la degradación de GSH (gamma - glutamil transpeptidasa) y eflujo de GSH (GSH-S-transferasa). Sin embargo, estas mismas enzimas son esenciales para proteger a las células normales del ataque de ROS. Por lo tanto, existe una gran posibilidad de daño colateral a las células normales, ya que los medicamentos no pueden administrarse selectivamente a las células cancerosas y solo a las células cancerosas.
En vista de esto, hay una necesidad de encontrar otras soluciones terapéuticas que reconozcan específicamente y selectivamente células cancerosas.
Descripción de la invención
Los inventores de la presente invención han encontrado inesperadamente que los compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en particular el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inetioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, son capaces de tratar el cáncer en un sujeto, en el que las células cancerosas de dicho sujeto sobreproducen H2O2. En particular, encontraron que los compuestos de aminotioléster o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en particular el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, son capaces de tratar el cáncer en un sujeto, donde las células cancerosas de dicho sujeto tienen un nivel aumentado de H2O2 de al menos 200 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células.
Sin desear quedar ligado por ninguna teoría, estos compuestos y, en particular, el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, aumentaría los niveles de metabolitos intracelulares que son producidos por ataque deH 2O2 y, al mismo tiempo, se consumiría así el GSH en la desintoxicación de estos metabolitos electrofílicos. Como resultado, se dispondría de GSH insuficiente para actuar como captador de H2O2. Por lo tanto, los niveles de H2O2 deberían aumentar y deberían activar los mecanismos dependentes de H2O2 de la vía mitocondrial (intrínseca) de la apoptosis. Así, además de los altos niveles de H2O2 presentes en las células cancerosas debido a la disfunción de la ETC (Cadena de Transporte de Electrones) mitocondrial, estos compuestos y en particular el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, induciría una expresión adicional de H2O2 , llevando a las células cancerosas por encima de su umbral apoptogénico. Por el contrario, en células normales que no han sufrido el ataque de H2O2 , los niveles intracelulares de GSH ya son altos (debido a la ausencia de H2O2), de manera que no hay electrófilos inducidos por H2O2 que sean reconocidos por la terapia utilizada para aumentarlos específicamente en homólogos en cáncer.
Esta nueva terapia presenta la ventaja de que las células normales se libran porque han sufrido menos el ataque de H2O2 y que en comparación con los pertubatores de homeostasis de GSH ya conocidos, tales como piperlongumina (PLM) y partenolide (PTL) (Pei, S et al J. Biol.Chem. (2013) Targeting aberrant glutathione metabolism to eradicate human acute myelogenous leukemic cells; 288, 33542-33548), que se encuentran en ensayos clínicos y se utilizan en combinación con agentes quimioterapéuticos estándar, los compuestos de acuerdo con la invención y, en particular, el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, son eficaces como régimen de un solo fármaco.
La presente invención se refiere por tanto a un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7 , un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto, en el que las células cancerosas de dicho sujeto:
- tienen un nivel elevado de H2O2 de al menos un 200% en comparación con el nivel basal de H2O2 en las células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
- tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células.
En particular, las células cancerosas de dicho sujeto tienen también un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |ig de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 |ig por |ig de proteína total, después de tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En particular, dicho sujeto se identifica midiendo el nivel de H2O2 y el nivel de GSH en células cancerosas de dicho sujeto.
La presente invención se refiere además a un procedimiento para la selección de un sujeto que sufre de un cáncer y que probablemente se beneficiará de un tratamiento con un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7 , un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
en el que dicho procedimiento comprende:
a. medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
b. comparar el nivel resultante de la etapa a. con un valor de control; y/o
c. medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
en el que:
- un nivel aumentado de H2O2 de al menos 200 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
- un nivel de GSH de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, dicho procedimiento comprende:
a) medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
b) comparar el nivel resultante de la etapa a. con un valor de control; y
c) medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto; y/o
d) medir el nivel de aductos de MDA y/o aductos de HNE después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
en el que:
- un nivel aumentado de H2O2 de al menos 200 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
- un nivel de GSH de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, y/o
- un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |jg de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 jg por jg de proteína,
indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Tal como se describe en el presente documento, "H2O2" significa "peróxido de hidrógeno" y es un bien conocido por el experto en la materia. Representa moléculas químicamente reactivas que contienen oxígeno. Se forma como un subproducto natural del metabolismo normal del oxígeno y tiene funciones importantes en la señalización celular y la homeostasis. Sin embargo, durante los momentos de estrés ambiental (por ejemplo, exposición a los rayos UV o al calor), los niveles pueden aumentar drásticamente. Esto puede dar lugar a un daño significativo a las estructuras celulares. En conjunto, esto se conoce como estrés oxidativo. El peróxido de hidrógeno también es generado por fuentes exógenas, tal como la radiación ionizante.
En particular, un nivel de H2O2 más alto que un valor comprendido entre 2.000 y 400.000 de intensidad de fluorescencia relativa, por ejemplo, entre 10.000 y 100.000 de intensidad de fluorescencia relativa o 15.000 y 100.000 de intensidad de fluorescencia relativa, y más particularmente un nivel de H2O2 superior a 20.000 de Intensidad de fluorescencia relativa, incluso más particularmente superior a 21.598 de intensidad de fluorescencia relativa, indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En particular, el nivel más alto que un valor comprendido entre 2.000 y 400.000 de intensidad de fluorescencia relativa, por ejemplo, entre 10.000 y 100.000 de Intensidad de fluorescencia relativa o 15.000 y 100.000 de intensidad de fluorescencia relativa, y más particularmente un nivel de H2O2 superior a 20.000 de intensidad de fluorescencia relativa, incluso más particularmente superior a 21.598 de intensidad de fluorescencia relativa, se mide con el kit de detección de ROS total/superóxido (Enzo life science), más particularmente en un lector de microplacas de fluorescencia Appliskan (Thermo Scientific) (Ex/Em = 488/520 nm y Ex/Em = 550/610 nm).
Si el nivel de corte de H2O2 se proporciona aquí y en otros lugares en la descripción mediante la medición de la intensidad de fluorescencia, este procedimiento es no exclusivo y el nivel de corte de H2O2 se puede determinar mediante cualquier otro procedimiento disponible para el experto en la materia, siendo el parámetro de determinación de dónde colocar el corte la correlación entre la IC50 del producto de acuerdo con la invención y el nivel de H2O2. La IC50 es una medida bien conocido para el experto en la materia.
Tal como se describe en el presente documento, "GSH" significa "glutatión" y es bien conocido por el experto en la materia. Es un tripéptido con un enlace peptídico gamma entre el grupo carboxilo de la cadena lateral del glutamato y el grupo amina de la cisteína, y el grupo carboxilo de la cisteína está unido por un enlace peptídico normal a una glicina.
En particular, en el alcance de la presente invención, el nivel de GSH es inferior a 0,5 nmol para 25.000 células, en particular por debajo de 0,45 nmol para 25.000 células y más particularmente por debajo de 0,4 nmol para 25.000 células.
El nivel de GSH se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de GSH se determina mediante luminiscencia, por ejemplo, con el kit Promega GSH-Glo (Promega).
Si se proporciona el nivel de corte de GSH aquí y en otros lugares en la descripción mediante luminiscencia, este procedimiento es no exclusivo y el nivel de corte de GSH se puede determinar mediante cualquier otro procedimiento disponible para el experto en la materia
Tal como se describe en el presente documento, "MDA" se utiliza para "malondialdehído", un compuesto orgánico con la fórmula CH2(CHO)2. Esta especie reactiva es bien conocida por el experto en la materia y se produce de forma natural y es un marcador de peroxidación de lípidos en las células. Además, un "aducto de MDA" según la invención es un aducto formado entre MDA y las proteínas de las células cancerosas, así como con el ADN de las células cancerosas.
En particular, en el alcance de la presente invención, el nivel de aductos de MDA después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está por encima de 75 ng por |ig de proteína total, en particular por encima de 90 ng por |jg de proteína total y más particularmente por encima de 100 ng por jg de proteína total. El nivel de aductos de MDA se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de aductos de MDA se determina mediante inmunomonitorización, por ejemplo con el kit de ELISA competitivo de aductos de MDA OxiSelect ™ (CELL BIOLABS).
Tal como se describe en el presente documento, "HNE" se utiliza para "4-hidroxi-2-nonenal", un compuesto orgánico de fórmula C9H16O2. Esta especie reactiva es bien conocida por el experto en la materia y se produce de forma natural y es un marcador de peroxidación de lípidos en las células.
Además, un "aducto de HNE", de acuerdo con la invención, es un aducto formado entre HNE y las proteínas de las células cancerosas, así como un aducto formado con el GSH de las células cancerosas.
En particular, en el alcance de la presente invención, el nivel de aductos de HNE después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está por encima de 750 ng por |ig de proteína total, en particular por encima de 900 ng por jg de proteína total y más particularmente por encima de 1 jg por jg de proteína total.
El nivel de aductos de HNE se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de aductos de HNE se determina mediante inmunomonitorización, por ejemplo con el kit de ELISA competitivo de aductos de HNE OxiSelect ™ (CELL BIOLABS).
Por "proteína total" se entiende el contenido de proteína total de la célula cancerosa.
Por "tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo" se entiende que el nivel de aductos de MDA y/o aductos de HNE se mide después de una etapa de tratamiento , in vitro, en una muestra de células cancerosas del sujeto, por ejemplo en las condiciones descritas en la sección experimental, teniendo en cuenta que las dosis de un compuesto de fórmula (I) según la invención o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que pueden administrarse son de hasta 60 jM .
Por un "grupo alquilo C1-C7" se entiende un grupo hidrocarburo alifático que puede ser lineal o ramificado que tiene de 1 a 7 átomos de carbono en la cadena, a menos que se especifique lo contrario. En particular, los grupos alquilo tienen de 1 a 3 átomos de carbono en la cadena (alquilo C1-C3). Ramificado significa que uno o más grupos alquilo, tales como metilo, etilo o propilo están unidos a una cadena de alquilo lineal. Los grupos alquilo de ejemplo incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, 2,2-dimetilbutilo, n-pentilo, n-hexilo, octilo, en particular metilo.
En particular, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto como se ha mencionado anteriormente en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo metilo, un grupo fenilo, un grupo bencilo, al menos uno de X1 o X2 es un metilo, o en el que X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman una piperidina o una morfolina.
Más en particular, dicho compuesto se elige entre:
- 4-metil-4-(piperidin-1-il)pent-2-inotioato de S-metilo;
- 4-[bencil(metil)amino]-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo;
- 4-metil-4-[metil(fenil)amino]pent-2-inotioato de S-metilo;
- 4-metN-4-(morfolin-4-N)pent-2-inotioato de S-metilo; y
- 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo.
En una realización preferida, dicho compuesto es el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo.
Estos compuestos pueden prepararse de acuerdo con procedimientos bien conocidos por el experto en la materia. En particular, estos compuestos se pueden preparar a partir de la correspondiente amina acetilénica tratada sucesivamente por BuLi, COS y Mel. Un proceso detallado de preparación se puede encontrar, por ejemplo, en G. Quash et al., European Journal of Medicinal Chemistry 43 (2008) 906-916, del cual se incorpora el contenido como referencia, en particular en la parte 2 de la sección de Material y procedimientos.
El 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (número CAS 350229-29-7, peso de la fórmula: 185,29 g.mot 1, fórmula: C9H15NOS), también conocido como DIMATE es un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000006_0001
Este compuesto y su proceso de preparación se describen por ejemplo en la patente EP1296946 (en particular en el ejemplo 1), de la cual el contenido se incorpora por referencia.
Por una "sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto de fórmula (I), se entiende que el compuesto se modifica produciendo sales ácidas o básicas del mismo. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto, por ejemplo, de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos. Por ejemplo, tales sales no tóxicas convencionales incluyen aquellas, tales como fumarato, fosfato, citrato, cloridrato y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de fórmula (I) se pueden sintetizar a partir del compuesto original mediante procedimientos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas de ácido o base libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiados en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, pág. 1418.
En particular, el compuesto de fórmula (I) es el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo y su sal farmacéuticamente aceptable es su sal de fumarato es decir, el éster fumarato S-metílico de ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentinotioico (peso de fórmula: 301,4 g.mol-1, fórmula: C13H19NO5S). Tal sal de fumarato se puede preparar a partir de 4-(dimetilamino) -4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en éter anhidro con la adición de una solución de ácido fumárico en etanol anhidro. La sal monofumarato se recoge por filtración, se lava con éter y se seca.
En el alcance de la invención, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéutica aceptable del mismo, en particular éster fumarato metílico de ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentinotioico, se usarán indistintamente con el término "compuesto según la invención".
Los términos "tratar", "que trata", "tratado" o "tratamiento", tal como se usan en este documento, se refieren a un tratamiento terapéutico en el que el objetivo es eliminar o disminuir los síntomas. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, la eliminación de los síntomas, el alivio de los síntomas, la disminución del alcance de la afección, el estado estabilizado (es decir, que no empeora) de la afección, el retraso o la desaceleración de la progresión de la afección, hasta la prevención de la aparición, recurrencia o propagación de una enfermedad o trastorno, o de uno o más de sus síntomas. En determinadas realizaciones, los términos se refieren al tratamiento con o la administración de un compuesto proporcionado en el presente documento antes de la aparición de los síntomas. Los términos abarcan la inhibición o reducción de un síntoma de la enfermedad en particular. Los sujetos con antecedentes familiares de una enfermedad en particular son candidatos para regímenes de tratamiento en determinadas realizaciones. Además, los sujetos en los que se ha mostrado una predisposición genética para la enfermedad particular son candidatos para regímenes de tratamiento en determinadas realizaciones. Además, los sujetos que tienen un historial de síntomas recurrentes también son candidatos potenciales para el tratamiento. A este respecto, el término "tratamiento" se puede usar de manera intercambiable con el término "tratamiento profiláctico".
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se defina lo contrario, "cáncer" se refiere al crecimiento, la división o la proliferación de células anormales en el cuerpo. Los cánceres según la invención son cánceres en los que se observa una sobreproducción de H2O2 en comparación con un valor de control, en particular cánceres, tal como se definen en las reivindicaciones, en los que hay una sobreproducción de H2O2 observada en comparación con un valor de control y un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células. Dichos cánceres incluyen, pero sin limitación, cáncer de vejiga, tumores cerebrales, cáncer de mama, melanoma, mieloma múltiple, leucemia, linfoma, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de lengua, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer renal, pleuramesotelomia, osteosarcoma, cáncer de músculo, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de colon, cáncer de sangre, cánceres del sistema nervioso central y sarcoma; más particularmente se elige entre cáncer de vejiga, tumores cerebrales, mieloma múltiple, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de lengua, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, pleuramesotelomia, osteosarcoma, cáncer de músculo, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de colon, cáncer de sangre, leucemia, cánceres del sistema nervioso central y sarcoma.
Por tanto, la presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en particular 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso de acuerdo con la invención o a un procedimiento de acuerdo con la invención, en el que el cáncer a tratar se elige entre cáncer de vejiga, tumores cerebrales, cáncer de mama, melanoma, mieloma múltiple, leucemia, linfoma, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de lengua, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, pleuramesotelomia, osteosarcoma, cáncer de músculo, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de colon, cáncer de sangre, cánceres del sistema nervioso central y sarcoma; en particular de cáncer de vejiga, tumores cerebrales, mieloma múltiple, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de lengua, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, pleuramesotelomia, osteosarcoma, cáncer de músculo, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de colon, cáncer de sangre, leucemia, cánceres del sistema nervioso central y sarcoma.
Todavía en particular, dicho cáncer es un cáncer quimiorresistente y/o radioresistente.
Por "quimiorresistente" se entiende un cáncer, tal como se describe en el presente documento, contra el cual la quimioterapia no funciona o deja de funcionar.
Por "radioresistente" se entiende un cáncer, tal como se describe en el presente documento, contra el cual la radioterapia no funciona o deja de funcionar.
En particular, dicho cáncer es un cáncer en el que se observa un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |ig de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 |ig por |ig de proteína total, después del tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Tal como se usa en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a un animal de sangre caliente, tal como un mamífero, animal o humano, en particular, un ser humano que está afectado con, o tiene el potencial de ser afectado con una o más enfermedades y afecciones descritas en el presente documento, y más particularmente, en los que las células cancerosas sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control, tal como se define en la reivindicación 1, y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células. Más particularmente, dichas células cancerosas son células cancerosas humanas. Aún particularmente, las células cancerosas de dicho sujeto que sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control, más particularmente que sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células son células cancerosas quimiorresistentes y/o radiorresistentes. Aún más particularmente, las células cancerosas de dicho sujeto que sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control, más particularmente que sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, tienen también un nivel de aductos de MDA superior a 75 ng por |jg de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE superior a 1 jg por jg de proteína total después del tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o un fármaco aceptable sal del mismo.
Los términos "sobreproducen", "sobreproducción", tal como se usa en el presente documento, describen una situación, donde en una célula o tejido enfermo, se produce un compuesto en exceso en comparación con una célula o tejido de control correspondiente llamado valor de control.
En particular, la presente invención se refiere así al compuesto para su uso, según la invención, en el que dicho sujeto es identificado mediante la medición del nivel de H2O2 y el nivel de GSH en células cancerosas de dicho sujeto. En una realización, dicho sujeto también se identifica midiendo el nivel de aductos de MDA y/o el nivel de aductos de HNE después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I), según la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El nivel de H2O2 se puede medir, por ejemplo, mediante cualquier procedimiento conocido por la persona experta, tal como, por ejemplo, determinando el nivel de intensidad de fluorescencia relativa, que puede realizarse, por ejemplo gracias al Kit de detección de ROS Total/superóxido (Enzo life science), en particular medido en un lector de microplacas de fluorescencia Appliskan (Thermo Scientific) (Ex/Em = 488/520 nm y Ex/Em = 550/610 nm).
En particular, la presente invención se refiere por tanto a un compuesto para su uso, según la invención, en el que dicho nivel de H2O2 se determina mediante la cuantificación del nivel de intensidad de fluorescencia.
Más particularmente, se refiere a un compuesto para su uso según la invención, en el que dicho nivel de H2O2 es más alto que un valor comprendido entre 2.000 y 400.000 de intensidad de fluorescencia relativa, por ejemplo, entre 10.000 y 100.000 de intensidad de fluorescencia relativa o 15.000 y 100.000 de Intensidad de fluorescencia relativa, y más particularmente un nivel de H2O2 superior a 20.000 de Intensidad de fluorescencia relativa, incluso más particularmente superior a 21.598 de Intensidad de fluorescencia relativa.
El experto en la materia entenderá fácilmente que cualquier otro parámetro adecuado para determinar el nivel de H2O2 de las células puede usarse junto con la presente invención.
Por consiguiente, cualquier otro procedimiento conocido por la persona experta en la materia para detectar el nivel de H2O2 se puede utilizar sin apartarse del alcance de la invención.
En particular, la presente invención se refiere así al compuesto para su uso según la invención, en el que dicho nivel de H2O2 se determina mediante la cuantificación del nivel de intensidad de fluorescencia gracias al kit de detección de ROS Total/superóxido (Enzo life science), más particularmente medido en un lector de microplacas de fluorescencia Appliskan (Thermo Scientific) (Ex/Em = 488/520 nm y Ex/Em = 550/610 nm).
Si el procedimiento utilizado en la parte experimental es una determinación del nivel de H2O2 mediante la intensidad media de fluorescencia, se indica de nuevo que este procedimiento es no exclusivo y que el nivel de H2O2 se puede determinar mediante cualquier otro procedimiento disponible para el experto en la materia.
El nivel de GSH se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de GSH se determina mediante luminiscencia, por ejemplo, con el kit Promega GSH-Glo (Promega).
El experto en la materia entenderá fácilmente que cualquier otro parámetro adecuado para determinar el nivel de GSH de las células puede ser utilizado conjuntamente con la presente invención.
Por consiguiente, se puede utilizar cualquier otro procedimiento conocido por el experto en la materia para detectar el nivel de GSH sin apartarse del alcance de la invención.
En particular, la presente invención se refiere así al compuesto para su uso según la invención, en el que dicho nivel de GSH se determina mediante luminiscencia, más particularmente con el kit Promega GSH-Glo (Promega).
El nivel de aductos de MDA se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de aductos de MDA se determina mediante inmunomonitorización, por ejemplo con el kit de ELISA competitivo de aductos de MDA OxiSelect ™ (CELL BIOLABS).
El experto en la materia entenderá fácilmente que se puede utilizar cualquier otro parámetro adecuado para determinar el nivel de aductos de MDA de las células conjuntamente con la presente invención.
Por consiguiente, se puede utilizar cualquier otro procedimiento conocido por el experto en la materia para detectar el nivel de aductos de MDA sin apartarse del alcance de la invención.
En una realización, el nivel de aductos de MDA de este modo se mide después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El nivel de aductos de HNE se determina mediante cualquier procedimiento disponible para el experto en la materia. Por ejemplo, el nivel de aductos de HNE se determina mediante inmunomonitorización, por ejemplo con el kit de ELISA competitivo de aductos de HNE OxiSelect ™ (CELL BIOLABS).
El experto en la materia entenderá fácilmente que se puede utilizar cualquier otro parámetro adecuado para determinar el nivel de aductos de HNE de las células conjuntamente con la presente invención.
Por consiguiente, se puede utilizar cualquier otro procedimiento conocido por el experto en la materia para detectar el nivel de aductos de HNE sin apartarse del alcance de la invención.
En una realización, el nivel de aductos de HNE de este modo se mide después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Tal como se usa en el presente documento, el término "muestra" significa una sustancia de origen biológico. Los ejemplos de muestras biológicas incluyen, pero no se limitan a, muestras de fluidos corporales y biopsia. Los fluidos corporales incluyen sangre, orina, saliva o cualquier otra secreción corporal o derivado de la misma. Tal como se usa en este documento, "sangre" incluye sangre completa, plasma, suero, células epiteliales circulantes, constituyentes o cualquier derivado de la sangre. La muestra biológica según la invención puede obtenerse del sujeto mediante cualquier medio apropiado de muestreo conocido por el experto en la materia.
Para determinar el nivel de H2O2, el nivel de GSH y/o el nivel de aductos de MDA y/o aductos de HNE en células de cáncer, la muestra está en, en particular, una biopsia de tumor, por ejemplo, de un tumor de vejiga , tumor cerebral, tumor de mama, tumor de melanoma, tumor de mieloma múltiple, tumor de leucemia, tumor de linfoma, tumor de próstata, tumor de cuello uterino, tumor de estómago, tumor de hígado, tumor de lengua, tumor de ovario, tumor pancreático, tumor renal, tumor de pleuramesotelomia, tumor de osteosarcoma, tumor muscular, tumor de pulmón, tumor de riñón, tumor de cáncer de cabeza y cuello, tumor de colon, tumor de sangre, tumores del sistema nervioso central y tumor de sarcoma.
Por lo que respecta a la comparación del nivel de H2O2 , preferiblemente el valor de control se mide en una muestra del mismo origen de tejido que la muestra de las células cancerosas o la muestra de cáncer, y más preferiblemente, en una muestra del mismo origen de tejido que la muestra de células cancerosas o la muestra de cáncer del mismo sujeto.
Preferiblemente, el "valor de control" corresponde al nivel normal de H2O2.
Tal como se pretende en el presente documento un "nivel normal" de H2O2 significa que el nivel de H2O2 en la muestra está dentro de los valores de corte de norma para H2O2. La norma depende del tipo de muestra y del procedimiento utilizado para medir el nivel de H2O2 en la muestra. En particular, el valor de referencia de H2O2 puede corresponder así a la ausencia o al nivel basal de H2O2 en células normales, preferiblemente del mismo tejido, y más preferiblemente del mismo tejido del mismo sujeto o al valor de H2O2 en células cancerosas incubadas con NAC, preferiblemente del mismo tejido, y más preferiblemente, del mismo tejido del mismo sujeto.
El NAC es un atrapador ávido de radicales hidroxilo (constante de velocidad: 1,36x1010 M-1 s-1) pero que reacciona lentamente con el peróxido de hidrógeno (constante de velocidad: 0,38 M-1 s-1) y no muestra reacción con anión superóxido (Aruoma et al; Free Radic Biol Med, (1989). The antioxidant activity of N-acetyl cysteine: its reaction with hydrogen peroxide, hydroxy radical, superoxide anion, and hypochlorous acid: 6, 593-597).
Un nivel se considera que es estadísticamente más alto si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del sujeto aumenta por encima del nivel normal de H2O2. En particular, se considera que el nivel de H2O2 es estadísticamente más alto si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del paciente aumenta en un orden de al menos 200 o 300 o 400 o 500 o 600 % en comparación con el valor de control del nivel de H2O2.
De la misma manera, se considera que un nivel está sobreproducido si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del sujeto aumenta por encima del nivel normal de H2O2, más particularmente del orden de al menos 200 o 300 o 400 o 500 o 600%, en particular del orden de alrededor del 300 % en comparación con el valor de control del nivel de H2O2.
Un nivel se considera que es estadísticamente más alto si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del sujeto aumenta por encima del nivel de H2O2 en las células cancerosas incubadas con NAC. En particular, se considera que el nivel de H2O2 es estadísticamente más alto si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del paciente aumenta del orden de al menos 200 o 300 o 400 o 500 o 600% en comparación con el valor del nivel de H2O2 de la muestra de cáncer incubada con NAC, preferiblemente del mismo tejido, y más preferiblemente, del mismo tejido de la misma materia.
De la misma manera, se considera que un nivel está sobreproducido si el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del sujeto aumenta por encima del nivel de H2O2 en las células cancerosas incubadas con NAC, más particularmente del orden de al menos 200 o 300 o 400 o 500 o 600% en comparación con el valor de control del nivel de H2O2.
El valor o valores de control se pueden determinar como un único valor o un rango de valores que se determina basándose en el nivel de H2O2 medido en una población de células de control, es decir, células normales, en particular en una población de células normales del mismo origen tisular que las células cancerosas, y más particularmente del mismo sujeto, o es decir, de células cancerosas incubadas con NAC, en particular en una población de células cancerosas incubadas con NAC, del mismo origen tisular, y más particularmente del mismo sujeto.
La identificación de un sujeto a tratar de acuerdo con la invención se basa en la comparación del nivel de H2O2 de una muestra de células de cáncer con un valor de control, tal como se mencionó anteriormente. El valor de control puede ser un valor predeterminado o un valor que se determina junto con el valor de medición.
Típicamente, la población analizada podría dividirse en cuantiles basados en el nivel medido de H2O2. El valor de control podría definirse como la mediana, o el segundo tercil, o el segundo o tercer cuartil, o el tercer o cuarto quintil, etc.
El valor de control de H2O2 puede variar en función del procedimiento utilizado para la medición.
En una realización, cuando el cáncer a tratar es una leucemia, el valor de referencia se determina usando el nivel de H2O2 en las células HL60. La línea celular HL60 es una línea celular de leucemia promielocítica humana establecida bien conocida por los expertos en la materia.
En particular, en dicha realización, el nivel de H2O2 se considera que es estadísticamente mayor o es producido en exceso si "y" es mayor que 2x/3, siendo "x" el nivel de H2O2 en las células HL60, y siendo "y" el nivel de H2O2 en la muestra de cáncer del sujeto.
El valor o valores de control se pueden determinar como un único valor o un rango de valores que se determina basándose en el nivel de H2O2 medido en una población de células de control, es decir, las células HL60.
Típicamente, la población analizada podría dividirse en cuantiles basados en el nivel medido de H2O2. El valor de control podría definirse como la mediana, o el segundo tercil, o el segundo o tercer cuartil, o el tercer o cuarto quintil, etc. El valor de control de H2O2 puede variar dependiendo del procedimiento utilizado para la medición.
El mismo procedimiento de comparación que el descrito para las células HL60 cuando el cáncer para tratar es una leucemia se aplica para el tipo de los cánceres mencionados en la tabla 1 a continuación con las siguientes líneas celulares correspondientes como valores de referencia.
Tabla 1
Figure imgf000010_0002
La presente invención se refiere además a un procedimiento de tratamiento del cáncer en un sujeto, en el que las células cancerosas de dicho sujeto sobreproducen H2O2 en comparación con un valor de control, y en particular sobreproducen H2O2 en comparación con un control y tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, comprendiendo dicho procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en particular 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, más particularmente éster fumarato S-metílico del ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentinotioico.
En una realización, dichas células cancerosas de dicho sujeto también tienen un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |ig de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 |ig por |ig de proteína total, después del tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, la presente invención también se refiere a un procedimiento para la selección de un sujeto que sufre de un cáncer y que probablemente se beneficiará de un tratamiento con un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000010_0001
en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7 , un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
en el que dicho procedimiento comprende:
a) medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
b) comparar el nivel resultante de la etapa a. con un valor de control; y/o
c) medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
en el que, si:
- el nivel de H2O2 de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto es mayor que el 200 % del valor de control, y
- el nivel de GSH de dicha muestra células cancerosas de dicho sujeto es inferior a 0,5 nmol para 25.000 células, dicho procedimiento comprende además:
d) tratar dicho sujeto con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en particular el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, dicho procedimiento comprende:
a) medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
b) comparar el nivel resultante de la etapa a. con un valor de control; y
c) medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto; y/o
c') medir el nivel de aductos de MDA y/o aductos de HNE después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) según la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
en el que, si:
- el nivel de H2O2 de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto es mayor que 200% del valor de control, y/o
- el nivel de GSH de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto es inferior a 0,5 nmol para 25.000 células, y/o
- el nivel de aductos de MDA está por encima de 75 ng por |jg de proteína total y/o el nivel de aductos de HNE está por encima de 1 jg por jg de proteína
dicho procedimiento comprende además:
d) tratar dicho sujeto con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en particular el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los compuestos según la invención se pueden preparar mediante una variedad de rutas sintéticas. Los reactivos y materiales de partida están disponibles comercialmente o se sintetizan fácilmente mediante técnicas bien conocidas por un experto en la materia.
La identificación de los sujetos que están en necesidad de tratamiento de enfermedades y afecciones descritas en el presente documento se lleva a cabo como se mencionó anteriormente y está dentro de la capacidad y conocimiento de un experto en la materia. Un médico experto en la materia puede identificar fácilmente, mediante las técnicas mencionadas anteriormente, aquellos sujetos que necesitan dicho tratamiento.
Una cantidad terapéuticamente eficaz se puede determinar fácilmente por el médico que realiza el diagnóstico, como experto en la materia, mediante el uso de técnicas convencionales y observando los resultados obtenidos en circunstancias análogas. Al determinar la cantidad terapéuticamente eficaz, el médico que realiza el diagnóstico considera una serie de factores, que incluyen, pero no se limitan a: la especie del sujeto; su tamaño, edad y salud general; la enfermedad específica involucrada; el grado de afectación o la gravedad de la enfermedad; la respuesta del sujeto individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración; la biodisponibilidad característica del preparado administrado; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes.
Tal como se usa en el presente documento, una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que es efectiva en reducir, eliminar, tratar o controlar los síntomas de las enfermedades y afecciones descritas en este documento. El término "control" pretende referirse a todos los procesos en los que puede haber una ralentización, interrupción, detención o parada de la progresión de las enfermedades y afecciones descritas en este documento, pero no necesariamente indica una eliminación total de todas las enfermedades y síntomas de afecciones y pretende incluir el tratamiento profiláctico y el uso crónico.
La cantidad del compuesto según la invención, que se requiere para conseguir el efecto biológico deseado, variará dependiendo de un número de factores, incluyendo la dosificación del fármaco a administrar, las características químicas (por ejemplo hidrofobicidad) de los compuestos empleados, la potencia de los compuestos, el tipo de enfermedad, el estado de enfermedad del paciente y la vía de administración.
El compuesto de acuerdo con la invención se pueden formular en composiciones farmacéuticas mediante mezcla con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Tal como se usa en este documento, un "excipiente farmacéuticamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y composiciones que no producen una reacción adversa, alérgica u otra reacción desfavorable cuando se administra a un mamífero, especialmente un ser humano, según sea apropiado. Un excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a una carga, diluyente, material encapsulante o auxiliar de formulación sólido, semisólido o líquido no tóxico de cualquier tipo.
Tales composiciones pueden prepararse para su uso en la administración oral, particularmente en forma de comprimidos o cápsulas, en particular comprimidos bucodispersables (lyoc); o administración parenteral, particularmente en forma de soluciones, suspensiones o emulsiones líquidas.
Se puede preparar mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, tal como se describe en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a ed.; Gennaro, A.R., Ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2000. Pueden incluirse agentes aglutinantes y/o materiales adyuvantes farmacéuticamente compatibles como parte de la composición. Las composiciones orales generalmente incluirán un portador diluyente inerte o un portador comestible. Se pueden administrar en formas de dosis unitarias, en las que el término "dosis unitaria" significa una dosis única que se puede administrar a un paciente y que se puede manipular y envasar fácilmente, permaneciendo como una dosis unitaria física y químicamente estable que comprende el propio compuesto activo o como una composición farmacéuticamente aceptable, tal como se describe a continuación.
Los comprimidos, píldoras, polvos, cápsulas, trociscos y similares pueden contener uno o más de cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante, tal como celulosa microcristalina o goma de tragacanto; un diluyente, tal como almidón o lactosa; un disgregante, tal como almidón y derivados de celulosa; un lubricante, tal como estearato de magnesio; un deslizante, tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante, tal como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante, tal como menta o salicilato de metilo. Las cápsulas pueden tener la forma de una cápsula dura o una cápsula blanda, que generalmente están hechas de mezclas de gelatina opcionalmente mezcladas con plastificantes, así como una cápsula de almidón. Además, las formas unitarias de dosificación pueden contener varios otros materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar, goma laca o agentes entéricos. Otras formas de dosificación oral, jarabe o elixir, pueden contener agentes edulcorantes, conservantes, tintes, colorantes y aromatizantes. Además, los compuestos activos se pueden incorporar en preparaciones y formulaciones de disolución rápida, liberación modificada o liberación sostenida, y en las que dichas formulaciones de liberación sostenida son preferiblemente bimodales.
Las preparaciones líquidas, en particular para la administración intravenosa u oral, incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones acuosas o no acuosas estériles. Las composiciones líquidas también pueden incluir aglutinantes, tampones, conservantes, agentes quelantes, agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes, y similares. Los disolventes no acuosos incluyen alcoholes, propilenglicol, polietilenglicol, copolímeros de acrilato, aceites vegetales, tales como el aceite de oliva y ésteres orgánicos, tales como el oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen mezclas de alcoholes y agua, hidrogeles, medios tamponados y solución salina. En particular, el polímero de lactida, el copolímero de lactida/glicólido o los copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno biocompatibles y biodegradables pueden ser excipientes útiles para controlar la liberación de los compuestos activos. Los vehículos intravenosos pueden incluir reponedores de líquidos y nutrientes, reponedores de electrolitos, tales como los basados en dextrosa de Ringer, y similares.
Los ejemplos de modos de administración incluyen administración parenteral, por ejemplo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, así como administración oral. Incluye en particular una formulación como comprimido para administración oral o como polvo para solución inyectable para administración intravenosa.
En el alcance de la presente invención, debe entenderse que "un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso" es equivalente a "el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo" y en particular que "un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de" es equivalente al "uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de" y a "el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de".
La presente invención se ilustrará adicionalmente mediante las siguientes figuras y ejemplos.
Figuras
Figura 1: eficacia del 4-(dimetilamino) -4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (ensayo de viabilidad (resazurina, XTT o MTT) en varias líneas de células cancerosas
Figura 2 : Correlación de H2O2/IC50 de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo: relación entre la IC50 de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en |iM y los niveles de actividad de H2O2 endógeno en células cancerosas
Figura 3 : Correlación de H2O2/IC50 de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo: Determinación de un punto de corte
Figura 4: Correlación de H2O2/IC50 de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo: estudios mediante origen tisular
Figura 5 : Comparación del nivel de H2O2 de células de melanoma (células cancerosas) y de células de melanocitos (correspondiente a células normales)
Figura 6: Efecto de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en células cancerosas HL60 que producen en exceso H2O2 y tienen o no un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células
Figura 7: inhibición de la eficacia de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo mediante el aumento del nivel de GSH en células que tienen una sobreproducción de H2O2
Figura 8: Eficacia de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en células Colo357 que tienen una sobreproducción de H2O2 y un nivel de GSH por encima de 5 nmol para 25.000 células
Figura 9: Nivel total de g Sh en nmol para 25.000 células observadas en células sensibles y resistentes Figura 10: Cuantificación de aductos de MDA y HNE en células sensibles al 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (HL-60, NT2/D1) (A) y células resistentes al 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (MSC) tratadas con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo 5 o 10 |jmol. L'1 durante 24 horas (B)
Nota: En todas las figuras que se han mencionado anteriormente: se indica DIMATE 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo.
Ejemplos
Ejemplo 1
Material y procedimientos
Líneas celulares
Se ha seleccionado un panel de 52 células tumorales humanas que representan 10 tipos de tejidos para cubrir un amplio conjunto de diferentes oncogenes y de acuerdo con su respuesta a diferentes agentes quimioterapéuticos estándar. Las células se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC), la European Collection of Cell Cultures (ECACC) y de cultivos primarios de células cancerosas derivadas de tumores de pacientes (Instituto de Investigación de Vall d'Hebron (VHIR), Barcelona, España; Instituto de Oncología Vall d'Hebron (VHIO), Barcelona, España; Oncotest, Friburgo, Alemania; Oncodesign, Dijon, Francia; Universitá Degli Studi di Palermo, Oncología y Ciencias Quirúrgicas, Palermo, Italia; e Instituto de Medicina Predictiva y Personalizada de Cancer (IMPPC), Barcelona, España (ver la descripción del panel de células tumorales en la Tabla 2).
Tabla 2
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Todas las células se cultivaron en medios apropiados de acuerdo con las recomendaciones del proveedor.
Tratamiento con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo
Las células se sembraron en placas de cultivo celular de 96 pocillos a concentraciones requeridas para asegurar aproximadamente el 80% de confluencia en el control (células sin tratar) al final del experimento (0,5 x 104 - 5 x 104 células/pocillo). La sensibilidad hacia el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo se determinó usando diferentes concentraciones del fármaco (de 0,01 a 100 |jM). Después de 48 horas, se analizó el efecto inhibidor del crecimiento del fármaco utilizando azul Alamar, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se utilizó el ensayo de azul Alamar basado en observaciones anteriores: se encontraron resultados similares con azul Alamar, reducción de tetrazolio (ensayo XTT). Para garantizar una buena calidad de los datos y minimizar el impacto de los errores de pipeteo, se evaluó cada concentración de fármaco particular en función de la intensidad de fluorescencia media de 8 pocillos separados. La respuesta al fármaco se cuantificó por la mitad de la concentración inhibitoria máxima (IC50) para cada línea celular particular, y se determinó mediante un análisis de regresión no lineal de las curvas logarítmicas de dosis/respuesta. El valor de corte para la resistencia a 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo se determinó estadísticamente (> 2 SD por encima de la IC50 media geométrica). El valor umbral in vitro de hipersensibilidad al fármaco se ha definido como < media geométrica de IC50.
Ensayo clonogénico 3D, formato de 96 pocilios
[0114] La prueba del ensayo clonogénico se llevó a cabo en formato de placa de 96 pocilios. Para cada prueba, se descongeló una alícuota congelada de células tumorales preparada a partir de xenoinjertos tumorales y se prepararon placas de ensayo de la siguiente manera: cada pocillo de prueba contiene 3 capas de igual volumen, 2 capas de medio semisólido (capa inferior y superior) y una capa de sobrenadante de medio, con o sin compuesto de prueba. La capa inferior consiste en 0,05 ml/pocillo de medio de Dulbecco modificado por Iscove (Invitrogen), complementado con suero fetal bovino (Sigma) al 20% (v/v), gentamicina al 0,01% (p/v) (Invitrogen) y agar al 0,75% (p/v) (BD Biosciences). Se añadieron células tumorales a 0,05 ml del mismo medio de cultivo suplementado con agar al 0,4% (p/v) y se sembraron en placa sobre la capa inferior. Después de 24 h, se agregaron los compuestos de prueba después de una dilución en serie en DMSO y se transfirieron en medio de cultivo celular, y se dejaron sobre las células durante la duración del experimento (exposición continua, 0,05 ml de superposición de fármaco). Cada placa incluye seis pocillos de control sin tratar y grupos tratados con fármaco por duplicado a 10 concentraciones. Los cultivos se incubaron a 37 °C y 7,5% de CO2 en una atmósfera humidificada durante 8 a 13 días y se monitorizó de cerca el crecimiento de la colonia utilizando un microscopio invertido. Dentro de este período, el crecimiento tumoral ex vivo conduce a la formación de colonias con un diámetro superior a 50 pm. En el momento de máxima formación de colonias, los recuentos se realizaron con un sistema automático de análisis de imágenes. 24 h antes de la evaluación, las colonias vitales se tiñeron con una solución acuosa estéril de cloruro de 2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-feniltetrazolio (1 mg/ml, 100 pl/pocillo). Las curvas sigmoidales de concentración-respuesta se ajustaron a los puntos de datos obtenidos para cada modelo de tumor utilizando un ajuste de curva no lineal de 4 parámetros (Oncotest Warehouse Software). Los valores de IC50 se describieron como valores de IC50 relativos, siendo la concentración de compuesto de prueba que dan una respuesta (inhibición de la formación de colonias/viabilidad) a mitad de camino entre la parte superior y la meseta inferior de la curva sigmoidal de concentración-respuesta (punto de inflexión de la curva), o como valores absolutos de IC50, estando la concentración del compuesto de prueba en la intersección de las curvas de concentración-respuesta con T/C = 50%. Para el cálculo de los valores medios de IC50 se utilizó la media geométrica. Los resultados se presentan como el gráfico que representa la media o mapas de calor (valores de IC50 individuales relativos al valor de la media geométrica de IC50) sobre todos los modelos de tumores probados.
Medición de la producción de H2O2
La producción de H2O2 intracelular en células vivas se midió usando el kit de detección de ROS total/superóxido (Enzo life sciences), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ensayo utiliza sondas específicas de H2O2/RNS que tras la reacción con H2O2 y especies de RNS se oxidaron rápidamente a compuestos altamente fluorescentes. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a los niveles totales de H2O2/RNS dentro de la muestra. Las pruebas experimentales se realizaron utilizando células no tratadas o células tratadas con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (1-5 uM), vehículo HEPES, N-acetil-L-cisteína (NAC) (10 mM). El día antes del análisis, las células se sembraron en placas de base negra/clara de 96 pocillos a una densidad de 2 x 104 en medios de cultivo de acuerdo con instrucciones de los proveedores de células, suplementados con FBS (10% v/v), 10 unidades de penicilina/ml y 100 mg de estreptomicina. Las células se mantuvieron a 37 °C en una atmósfera húmeda de 95% de aire:5% de CO2 durante la noche. El día del análisis, el medio celular se reemplazó por 100 pL de medio libre de fenol suplementado como antes, sin ningún tratamiento, con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo durante 6 horas, vehículo HEPES durante 6 horas, o con NAC durante 20 min. Después del período de incubación, los pocillos se cargaron con 100 pl de solución de detección de H2O2 , que contiene el agente de tratamiento respectivo o los controles y se incubaron durante 60 min a 37 °C en la oscuridad. Se dejaron varios pocillos sin células para las medidas de control de la fluorescencia de base. Las placas se leyeron usando un lector de microplacas de fluorescencia (ex = 560 nm, Em = 600). Los datos se expresaron como el cambio en unidades de fluorescencia arbitrarias producidas a partir de cantidades iguales de células y normalizadas a la entrada total de proteínas.
Medición de la producción de GSH
Las células se sembraron en placas de 96 pocillos de paredes negras (5 * 104 células/ml) y se incubaron durante la noche para la fijación. Las células se trataron con vehículo, DMSO, BCNU 100 pM, 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo 20 pM, durante 24 horas. El glutatión total se midió de acuerdo con las instrucciones del kit (GSH-Glo™, Promega) y se obtuvieron resultados para 25.000 células.
Determinación cuantitativa de aductos de proteína-HNE y proteína-MDA mediante ELISA
La formación de aductos de HNE y aductos de MDA se cuantificó con el kit de ELISA de aductos de HNE Oxiselect (Cell Biolabs, San Diego, CA) y el kit de ELISA de aductos de MDA OxiSelect (Cell Biolabs), respectivamente. Brevemente, después de un tratamiento con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo durante 24 horas, las células se lisaron mediante sonicación en tampón de muestra de SDS reductor. Los homogeneizados se diluyeron hasta 10 pg de proteína/ml y se adsorbieron en placas de unión a proteínas de 96 pocillos mediante incubación a 37°C durante al menos 2 horas. Los pocillos se lavaron dos veces con PBS y se incubaron durante 2 horas más a temperatura ambiente en un agitador orbital. Después de tres lavados en PBS, se añadieron 100 pl de anticuerpo anti-HNE o anticuerpo anti-MDA a los pocillos y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Posteriormente, se añadió conjugado de anticuerpo secundario anti-conejo de cabra-HRP (diluido 1/1000 con el diluyente de ensayo) y se continuó la incubación durante 1 hora. Los pocillos se lavaron cinco veces en PBS y se añadió sustrato de HRP. La reacción se detuvo con una solución ácida y se leyó la absorbancia en un lector de microplacas a 450 nm. El nivel de aductos de HNE y de aductos de MDA se determinó por comparación con una curva estándar preparada a partir de patrones de HNE-BSa y MDA-BSA suministrados por el fabricante.
Inducción de resistencia a células tratadas con 4-(d¡metilam¡no)-4-met¡lpent-2-¡not¡oato de S-metilo.
Para invertir la muerte celular inducida por 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, las células sensibles a fármacos HL-60 fueron expuestas a 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (10 |jM) en presencia del análogo de glutatión reducido éster monoetílico de glutatión (GSH-MEE) a concentraciones de 10 mM o 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en combinación. Se sembraron HL-60, en placa de 96 pocillos, a una concentración de 5 x 104 células/pocillo en 100 |il de medio complementado suplementado con éster monoetílico de glutatión (GSH-MEE) 10 mM. Después de 90 minutos de incubación, las células se lavaron con PBS y las células se incubaron usando diferentes concentraciones del fármaco (de 0,01 a 100 j M). Después de 24 horas y 48 horas, se midió la viabilidad celular usando el ensayo de Rezasurina como se describió anteriormente.
Análisis estadístico
Los valores se expresan como media ± SD o frecuencias y proporciones. Las diferencias entre los grupos se determinaron mediante la prueba t para datos no apareados, Chi-cuadrado, prueba exacta de Fisher o ANOVA, en su caso. Se consideró P <0,05 estadísticamente significativo. El análisis se realizó utilizando GraphPad prism versión 5.0 (software GraphPad, San Diego California EE.UU.) y el software JMP versión 12.01 (SAS Institute Inc. Carolina del Norte EE.UU.).
Resultados
Los resultados obtenidos se muestran en las Figuras 1 a 10.
Eficacia del 4-(d¡metilam¡no)-4-met¡lpent-2-¡not¡oato de S-metilo in vitro
Tal como se muestra en la Figura 1, el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo es eficaz en una amplia variedad de líneas celulares de cáncer que sobreproducen H2O2 (ensayo de viabilidad-resazurina, XTT o MTT como se explicó anteriormente).
Correlación de H?O?/IC5n de 4-(dimet¡lam¡no)-4-met¡lpent-2-¡t¡oato de S-metilo
La Figura 2 muestra que se observa una correlación entre la actividad elevada de H2O2 y la baja IC50 (monitorización mediante el kit de detección de ROS Total/superóxido, tal como se mencionó anteriormente).
Además, la Figura 3 muestra que mediante la separación de las células en dos partes con un corte (20.000 de intensidad de fluorescencia relativa), se revela una distinción de la senbilidad de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo a H2O2 elevada y a H2O2 baja (valor de P < 0,05).
En la figura 4, la correlación entre la actividad elevada de H2O2 y baja IC50 se ilustra por origen de tejido.
Además, para controlar la selectividad del 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo hacia células cancerosas, el compuesto de acuerdo con la invención también se probó en células normales usando el mismo procedimiento que el descrito anteriormente. Los resultados muestran que el compuesto de acuerdo con la invención no tiene ningún efecto sobre las células normales, tal como se muestra en la Tabla 3 a continuación.
Tabla 3
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Además, se esnayaron otros compuestos de acuerdo con la invención siguiendo el material u procedimiento mencionado anteriormente en la línea celular DY145 (línea de cáncer de próstata) y la línea celular HL60 (leucemia) mencionados en la Tabla 2.
Los resultados respecto a la eficacia de estos compuestos se proporcionan en la Tabla 4 a continuación.
Tabla 4
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Correlación entre el nivel de H2O2 y el nivel de GSH
La Figura 6 muestra el efecto de 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo en las células cancerosas HL60 que sobreproducen H2O2 y tienen o no un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células.
En particular, la figura 6(A) muestra (A) que el nivel de actividad de H2O2 en unidad de fluorescencia relativa (UFR) aumentó después del tratamiento con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo 5 |iM durante 24 horas. Sin embargo, no se observó aumento de H2O2 usando un tratamiento con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo adicionalmente con N-acetilcisteína (NAC) 2,5 mM. En la Figura 6(B), la cantidad de nivel de GSH aumentó significativamente en las células HL-60 tratadas con NAC 2,5 mM y, de este modo, las células producían un exceso de H2O2 y tenían un nivel de GSH por encima de 0,5 nmol para 25.000 células.
La Figura 6(C) muestra la viabilidad de las células HL-60 tratadas con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (5,10 pmol.L-1) y/o NAC 2,5 mM, y que la inhibición de la eficacia del 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo se observó significativamente en células HL-60 tratadas con NAC.
Además, la Figura 7 muestra que después de un pre-tratamiento con 10 mM de GSH-MEE, siendo éster etílico reducido de glutatión (GSH-MEE) un derivado permeable a membrana/lípido de GSH que puede usarse para complementar parcialmente el suministro de GSH , el tratamiento de las células HL-60 con GSH-MEE inhibe el efecto citotóxico del 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo. Al añadir más GSH en las células, el estado de las células pasó a ser: sobreproducción de H2O2 y nivel de GSH por encima de 0,5 nmol para 25.000 células, y el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo ya no es eficaz.
Además, para confirmar estos resultados, la Figura 8 muestra que (A) el tratamiento de células Colo357 con 100 |iM de carmustina (BCNU) permite una disminución del 50% del nivel de GSH y para cambiar el estado de las células en: sobreproducción H2O2 y el nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células y que, como consecuencia, (B) el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo fue eficaz en estas células, disminuyendo la viabilidad en un 50%.
En la Figura 9, el nivel total de GSH en nmol para 25.000 células se observa en las células sensibles y resistentes. Se observó una diferencia significativa (***, valor de p < 0,001). Utilizando un umbral de 0,5 nmol para 25.000 células para distinguir entre las células altas en GSH altas y bajas en GSH, el 100% de las células sensibles tienen GSH bajo y el 100% de las células resistentes tienen GSH alto.
La Figura 10 muestra la cuantificación de aductos de MDA y HNE en células sensibles a 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-itioato de S-metilo (HL-60, NT2/D1) (A) y células resistentes a 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo (MSC) tratadas con 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo 5 o 10 |jm o l. L'1 durante 24 horas (B). Para los aductos de MDA, en células sensibles a 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo, el umbral está por encima de 100 ng por jg de proteína total, y en las células resistentes, el umbral está por debajo de este umbral. Para los aductos de HNE, se puede hacer la misma observación con un umbral de 1 jg por jg de proteína total.
Ejemplo 2:
El nivel de H2O2 de una muestra de células de melanoma se compara con un valor de control para determinar si estas células serían elegibles para un tratamiento con los compuestos de acuerdo con la invención.
De este modo, se mide el nivel de H2O2 de células de melanoma humano (obtenido tal como se ha mencionado en el ejemplo 1), así como el nivel de H2O2 de las células normales correspondientes, aquí melanocitos (melanocitos epiteliales humanos normales de prepucio juvenil, Promocell (NHEM, grupo) cultivados con medio de crecimiento de melanocitos M2 de Promocell).
Las dos muestras se someten a la determinación del nivel de H2O2 utilizando el kit de detección de ROS total/superóxido (Enzo life science). Las intensidades de fluorescencia relativas de ambas muestras se miden en un lector de microplacas de fluorescencia Appliskan (Thermo Scientific) (Ex/Em = 488/520 nm y Ex/Em = 550/610 nm). Tal como puede observarse en la Figura 5, el nivel de H2O2 de la muestra de células cancerosas excede el nivel de H2O2 de la muestra de control (es decir, células normales) en un 280%.
Estas células cancerosas son por lo tanto elegibles para el tratamiento con los compuestos de acuerdo con la invención y, en particular, con éster fumarato S-metílico de ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentiotioico, si el nivel de GSH está al mismo tiempo por debajo de 5 nmol para 25.000 células.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuesto de fórmula (I):
    Figure imgf000021_0001
    en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7 , un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
    para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto,
    en el que las células cancerosas de dicho sujeto:
    - tienen un nivel elevado de H2O2 de al menos un 2 0 0 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en las células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
    - tienen un nivel de GSH por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, y en el que dicho sujeto se identifica mediante la medición del nivel de H2O2 y el nivel de GSH en células cancerosas de dicho sujeto.
    2. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso, según la reivindicación 1, en el que dicho nivel de H2O2 se determina mediante la cuantificación del nivel de intensidad de fluorescencia.
    3. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según la reivindicación 2, en el que dicho nivel de H2O2 es más alto que 2 0 . 0 0 0 de intensidad de fluorescencia relativa.
    4. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que las células cancerosas de dicho sujeto también tienen un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |jg de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 |jg por |jg de proteína total, después del tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    5. Procedimiento para seleccionar un sujeto que padece cáncer y que probablemente se beneficiará de un tratamiento con un compuesto de fórmula (I):
    Figure imgf000021_0002
    en el que X1 y X2, idénticos o diferentes, son seleccionados entre un grupo alquilo C1-C7 , un fenilo, un bencilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo, en particular una piperidina o una morfolina; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
    en el que dicho procedimiento comprende:
    a. medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
    b. comparar el nivel resultante de la etapa a. con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
    medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
    en el que:
    - un nivel aumentado de H2O2 de al menos 2 0 0 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas, y
    - un nivel de GSH de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    6. Procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho procedimiento comprende:
    a) medir el nivel de H2O2 en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto;
    b) comparar el nivel resultante de la etapa a. con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas
    c) medir el nivel de GSH en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto; y
    d) medir el nivel de aductos de MDA y/o aductos de HNE después de un tratamiento in vitro con un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una muestra de células cancerosas de dicho sujeto; en el que:
    - un nivel aumentado de H2O2 de al menos 200 % en comparación con el nivel basal de H2O2 en células normales que se originan en el mismo tejido que las células cancerosas,
    - un nivel de GSH de dicha muestra de células cancerosas de dicho sujeto por debajo de 0,5 nmol para 25.000 células, y
    - un nivel de aductos de MDA por encima de 75 ng por |jg de proteína total y/o un nivel de aductos de HNE por encima de 1 jg por jg de proteína,
    indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    7. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6, en el que un nivel de H2O2 más alto que 20.000 de intensidad de fluorescencia relativa, indica que es probable que el sujeto se beneficie de un tratamiento con un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente sal aceptable del mismo.
    8. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que el nivel de GSH se determina mediante luminiscencia.
    9. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso, según la reivindicación 4, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que el nivel de aductos de MDA y/o el nivel de aductos de HNE se determina mediante inmunomonitorización.
    10. Compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 9, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que el cáncer se elige de cáncer de vejiga, tumores cerebrales, cáncer de mama, melanoma, mieloma múltiple, leucemia, linfoma, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de lengua, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer renal, pleuramesotelomia, osteosarcoma, cáncer muscular, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de colon, cáncer de sangre, cánceres del sistema nervioso central y sarcoma.
    11. Compuesto para su uso, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 10, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, en el que en dicho compuesto de fórmula (I), X1 y X2, idénticos o diferentes, se eligen entre un metilo, un fenilo, un bencilo, siendo al menos uno de X1 o X2 un metilo, o X1 y X2 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman una piperidina o una morfolina.
    12. Compuesto para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 11, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, en el que el compuesto de fórmula (I) se elige entre:
    - 4-metil-4-(piperidin-1-il)pent-2-inotioato de S-metilo;
    - 4-[bencil(metil)amino]-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo;
    - 4-metil-4-[metil(fenil)amino]pent-2-inotioato de S-metilo;
    - 4-metil-4-(morfolin-4-il)pent-2-inotioato de S-metilo; y
    - 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo.
    13. Compuesto para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 12, o un procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, en el que dicho compuesto de fórmula (I) es el 4-(dimetilamino)-4-metilpent-2-inotioato de S-metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    14. Compuesto para su uso, según la reivindicación 13, o un procedimiento, según la reivindicación 13, en el que dicha sal farmacéuticamente aceptable es éster fumarato S-metílico del ácido 4-(dimetilamino)-4-metil-2-pentinotioico.
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