ES2841310T3 - Nucleósidos, nucleótidos y análogos sustituidos para su uso en el tratamiento de infecciones virales - Google Patents

Nucleósidos, nucleótidos y análogos sustituidos para su uso en el tratamiento de infecciones virales Download PDF

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Abstract

Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en la mejora o tratamiento de una infección viral, donde el compuesto de Fórmula (I) tiene la estructura: **(Ver fórmula)** donde: B1A es **(Ver fórmula)** donde RG2 es un alquilo C1-6 no sustituido; R3A se selecciona del grupo constituido por halo, OH, -OC(=O)R"A y un α-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido; R4A se selecciona del grupo constituido por OH o halo; Ra1 y Ra2 son independientemente hidrógeno o deuterio; RA es hidrógeno o deuterio; R1A se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, **(Ver fórmula)** R2A es halo o -(CH2)1-6 halógeno; R5A se selecciona del grupo constituido por un alquilo C1-6 no sustituido, un alquenilo C2-6 no sustituido y un alquinilo C2-6 no sustituido; R6A y R7A se seleccionan independientemente del grupo constituido por ausente, hidrógeno, **(Ver fórmula)** o R6A es **(Ver fórmula)** y R7A es ausente o es hidrógeno; R8A es ausente, hidrógeno, un fenilo opcionalmente sustituido o un naftilo opcionalmente sustituido; R9A es un α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido que se selecciona del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un α-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N; R10A y R11A son independientemente un α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de α-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un α-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, N-unida a triptófano y valina unida a N; R12A y R13A son independientemente ausente o hidrógeno; R14A es O-, OH o metilo; R22A y R23A son cada uno hidrógeno; R24A se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, un alquilo C1-24 no sustituido y un alquilo -O-C1-24 no sustituido; R"A es un alquilo C1-24 no sustituido; m es 0 o 1; s es 0; y Z1A, Z2A, Z3A y Z4A son cada uno O; donde la infección viral es causada por un virus que se selecciona del grupo que consiste en un virus Coronaviridae, un virus Togaviridae, un virus Hepeviridae y un virus Bunyaviridae; y cuando un grupo es descrito como siendo opcionalmente sustituido, ese grupo puede ser no sustituido o sustituido con uno o más grupos seleccionados independientemente de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aril(alquilo), heteroaril(alquilo), heterociclil(alquilo), hidroxi, alcoxi, acilo, ciano, halógeno, tiocarbonilo, O-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, N-tiocarbamilo, C-amido, N-amido, S-sulfonamido, Nsulfonamido, C-carboxi, O-carboxi, isocianato, tiocianato, isotiocianato, azido, nitro, sililo, sulfenilo, sulfinilo, sulfonilo, haloalquilo, haloalcoxi, trihalometanosulfonilo, trihalometanosulfonamido, un amino, un grupo amino monosustituido y un grupo amino disustituido.

Description

DESCRIPCIÓN
Nucleósidos, nucleótidos y análogos sustituidos para su uso en el tratamiento de infecciones virales
ANTECEDENTES
Campo
La presente solicitud se refiere a los campos de la química, bioquímica y medicina. Más particularmente, en esta invención se describen nucleósidos, nucleótidos y análogos de estos, composiciones farmacéuticas que incluyen uno o más nucleósidos, nucleótidos y/o análogos de nucleótidos, y procedimientos para sintetizarlos. También se describen en esta invención procedimientos para tratar enfermedades y/o afecciones con un nucleósido, un nucleótido y/o un análogo de nucleótido, solos o en terapia combinada con uno o más agentes adicionales.
Descripción
Los análogos de nucleósidos son una clase de compuestos que se ha demostrado que ejercen actividad antiviral y anticáncer tanto in vivo como in vitro y, por lo tanto, han sido objeto de una investigación generalizada para el tratamiento de infecciones virales. Normalmente, los análogos de nucleósidos son compuestos terapéuticamente inactivos que se convierten por acción de enzimas virales o del huésped en sus anti-metabolitos activos respectivos, los cuales, a su vez, pueden inhibir polimerasas que participan en la proliferación celular o viral. La activación se produce mediante varios mecanismos tales como la adición de uno o más grupos fosfato y, o de forma combinada con, otros procesos metabólicos.
WO2014/169280 se refiere a análogos de nucleósidos deuterados para tratar infecciones virales, que incluyen infecciones por VHC.
WO2012/158811 se refiere a compuestos, composiciones y procedimientos para tratar o prevenir infecciones virales usando profármacos monofosfato análogos de nucleósidos de purina 2,6-diamino 2'-C-Me.
US 2004/259934 se refiere a compuestos de nucleósidos y derivados de estos para tratar la infección provocada por un virus Coronaviridae (por ejemplo, un coronavirus) y/o enfermedad debida a un virus Coronaviridae.
WO2005/020884 se refiere a procedimientos y composiciones farmacéuticas para tratar a un huésped infectado por un coronavirus, togavirus o picornavirus.
WO2005/020885 se refiere a composiciones y procedimientos para tratar una infección provocada por coronavirus, mediante administración pulmonar o nasal.
WO2010/108135 se refiere a análogos de nucleótidos con fosfatos protegidos, procedimientos para sintetizar análogos de nucleótidos con fosfatos protegidos y procedimientos para tratar enfermedades y/o afecciones tales como infecciones virales, cáncer y/o enfermedades parasitarias con los análogos de nucleótidos con fosfatos protegidos.
WO2012/040127 se refiere a análogos de nucleótidos de fosforotioato, procedimientos para sintetizar análogos de nucleótidos de fosforotioato y procedimientos para tratar enfermedades y/o afecciones tales como infecciones virales, cáncer y/o enfermedades parasitarias con los análogos de nucleótidos de fosforotioato.
WO2013/096680 se refiere a análogos de nucleótidos de fosforotioato, procedimientos para sintetizar análogos de nucleótidos de fosforotioato y procedimientos para tratar enfermedades y/o afecciones tales como infecciones virales, cáncer y/o enfermedades parasitarias con los análogos de nucleótidos de fosforotioato.
WO2012/088155 se refiere a análogos de nucleótidos cíclicos, procedimientos para sintetizar análogos de nucleótidos cíclicos y procedimientos para tratar enfermedades y/o afecciones tales como infecciones virales, cáncer y/o enfermedades parasitarias con análogos de nucleótidos cíclicos.
COMPENDIO
En esta invención se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Coronaviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección provocada por el virus Coronaviridae una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En esta invención también se describe el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la elaboración de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por virus Coronaviridae. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, y/o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para tratar y/o mejorar una infección provocada por el virus Coronaviridae.
En esta invención también se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Coronaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Coronaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Las realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Coronaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención también se describe un procedimiento para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con él por virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, el virus Coronaviridae puede ser MERS-CoV y/o SARS-CoV.
En esta invención se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Togaviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección provocada por el virus Togaviridae una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En esta invención también se describe el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la elaboración de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por virus Togaviridae. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, y/o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para tratar y/o mejorar una infección provocada por el virus Togaviridae.
En esta invención también se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Togaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Togaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Togaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención también se describe un procedimiento para inhibir la replicación de un virus Togaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con él por virus Togaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Togaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Togaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, el virus Togaviridae puede ser un virus VEE, virus Chikungunya y/o un alfavirus.
En esta invención se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Hepeviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección provocada por el virus Hepeviridae una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En esta invención también se describe el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la elaboración de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por virus Hepeviridae. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, y/o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para tratar y/o mejorar una infección provocada por el virus Hepeviridae.
En esta invención también se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Hepeviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Hepeviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Hepeviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención también se describe un procedimiento para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con él por virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, el virus Hepeviridae puede ser el virus de la Hepatitis E.
En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae que pueden incluir administrar a un sujeto que padece la infección provocada por el virus Bunyaviridae una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. En esta invención también se describe el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la elaboración de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para tratar y/o mejorar una infección provocada por el virus Bunyaviridae.
En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención también se describe un procedimiento para inhibir la replicación del virus Bunyaviridae, que incluyen poner en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Bunyaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Bunyaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un virus de la fiebre del Valle del Rift.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La Figura 1 muestra la estructura de K22.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Los virus Coronaviridae son una familia de virus de ARN esféricos con envoltura, de cadena positiva y de cadena simple. Los coronavirus llevan ese nombre por los picos en forma de corona en su superficie. La familia Coronaviridae incluye dos subfamilias, Coronavirus y Torovirus. El género Coronavirus tiene una nucleocápside helicoidal, y el género Torovirus tiene una nucleocápside tubular. Dentro de la subfamilia Coronavirus se encuentran los siguientes géneros: Alfacoronavirus, Betacoronavirus, Gammacoronavirus y Deltacoronavirus. Los géneros dentro de la subfamilia Torovirus son Bafinivirus y Torovirus.
El coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS-CoV) es un miembro del género Betacoronavirus y causa el síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS). El MERS es una enfermedad respiratoria aguda. Alrededor de la mitad de los individuos que se confirmó que habían sido infectados con MERS murieron. No hay ningún tratamiento o vacuna actual para el MERS.
Otro miembro del género Betacornavirus es el coronavirus del SARS (SARS-CoV). El SARS-Co-V es el virus que causa el síndrome respiratorio agudo severo (SARS). El SARS se notificó por primera vez en Asia en febrero de 2003. El SARS es un virus transmitido por el aire, y puede propagarse por la inhalación de pequeñas gotículas de agua que un individuo infectado libera al aire (por ejemplo, tosiendo y/o estornudando), tocando una superficie contaminada y/o estando cerca de un individuo infectado (por ejemplo, cuidando o viviendo con una persona que se sabe que tiene SARS o teniendo una alta probabilidad de contacto directo con secreciones respiratorias y/o fluidos corporales de un paciente que se sabe que tiene SARS, incluyendo besar o abrazar, compartir utensilios para comer o beber, conversación cercana (dentro de 3 pies), examen físico y cualquier otro contacto físico directo entre las personas).
Los dos géneros con la familia Togaviridae son Alfavirus y Rubivirus. Los virus dentro de esta familia son virus de ARN lineales con envoltura, de cadena simple, de sentido positivo. Hasta la fecha, Rubivirus tiene una especie, el virus de la rubéola. Los virus clasificados en el género Alfavirus incluyen virus de la encefalitis equina venezolana (VEE). Los virus de la VEE son transmitidos principalmente por mosquitos, y causan encefalitis equina venezolana y encefalomielitis. El complejo VEE de virus incluye seis subtipos antigénicos (I-VI) divididos por variantes antigénicas. Además, los virus de la VEE se dividen en dos grupos, epizoóticos (o epidémicos) y enzoóticos (o endémicos). Dentro del subtipo I, el virus de la encefalomielitis equina venezolana (VEEV), se divide en cinco variantes antigénicas (variantes AB-F). El subtipo II se conoce como virus Everglades, el subtipo III como virus Mucambo y el subtipo IV como virus Pixuna. Las especies equinas, junto con los seres humanos, pueden infectarse con virus VEE. Actualmente, no hay vacunas disponibles para caballos o seres humanos.
Otro miembro del género Alfavirus es Chikungunya (CHIKV). Chikungunya es un virus transmitido por artrópodos y puede ser transmitido a los seres humanos por mosquitos (como los mosquitos Aedes). Actualmente, no hay tratamientos específicos para Chikungunya, y actualmente no hay vacunas disponibles.
Otros Alfavirus son el virus del bosque Barmah, el virus Mayaro (MAYV), el virus O'nyong'nyong, el virus del río Ross (RRV), el virus del bosque Semliki, el virus Sindbis (SINV), el virus Una, el virus de la encefalitis equina oriental (EEE) y la encefalomielitis equina occidental (WEE). Estos Alfavirus son transmitidos principalmente por artrópodos y se transmiten a través de mosquitos.
La familia Hepeviridae incluye virus de ARN esféricos de cadena simple, sin envoltura, de sentido positivo e incluye el género Hepevirus. Un miembro del género hepevirus es el virus de la Hepatitis E (HEV). La Hepatitis E tiene 4 genotipos. El genotipo 1 se ha clasificado en cinco subtipos. El genotipo 2 se ha clasificado en dos subtipos. El genotipo 3 se ha clasificado en 10 subtipos, y los genotipos 4 se han clasificado en siete subtipos. El virus de la Hepatitis E se transmite a través de la vía fecal-oral (por ejemplo, al beber agua contaminada con heces), pero también puede ser transmitido por los alimentos, transmitido por transfusión y/o transmitido verticalmente. La Hepatitis fulminante (insuficiencia hepática aguda) puede ser causada por una infección provocada por el virus de la Hepatitis E. Se han notificado casos crónicos y reactivación de una infección provocada por Hepatitis E en individuos inmunodeprimidos.
Además, la fibrosis hepática y la cirrosis hepática pueden ser el resultado de una infección provocada por Hepatitis E. Actualmente no hay ninguna vacuna aprobada por la FDA para la Hepatitis E.
La familia Bunyaviridae tiene más de 300 miembros que se agrupan en cinco géneros: Bunyavirus, Hantavirus, Nairovirus, Phlebovirus y Tospovirus. La familia Bunyaviridae es una familia de virus de ARN esféricos de cadena simple, encadenados negativamente y con envoltura.
El virus de la fiebre del Valle del Rift es un miembro del género Phlebovirus. Los seres humanos pueden infectarse por contacto directo o indirecto con la sangre u órganos de animales infectados y/o insertos infectados (por ejemplo, moscas y mosquitos). Las formas graves del virus de la fiebre del Valle del Rift son la forma ocular, la forma de meningoencefalitis y la forma de fiebre hemorrágica. Aunque se ha desarrollado una vacuna inactiva para uso humano, la vacuna no está autorizada ni disponible comercialmente. Existen vacunas para animales; sin embargo, los usos de estas vacunas son limitados debido a efectos nocivos y/o protección incompleta. El tratamiento actual para una infección provocada por el virus de la Fiebre del Valle del Rift es de apoyo.
El virus del síndrome de trombocitopenia es otro miembro del género Phlebovirus. En humanos, el virus del síndrome de trombocitopenia causa fiebre grave con el síndrome de trombocitopenia (SFTS). La SFTS se ha reportado en varias provincias de China y se han confirmado en las regiones occidentales del Japón.
El virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo (CCHF) es un miembro del género Nairovirus y causa brotes graves de fiebre hemorrágica viral. El CCHF se transmite principalmente a personas de garrapatas y animales de ganado, y la transmisión de persona a persona puede ocurrir a través del contacto cercano con la sangre, secreciones, órganos u otros fluidos corporales de una persona infectada. El virus de la encefalitis de California causa encefalitis en humanos y es un virus transmitido por artrópodos. Aunque la mayoría de los sujetos se recuperan, aproximadamente el 20% desarrollan problemas de comportamiento y/o tienen convulsiones recurrentes.
Los hantavirus son la causa de la fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS) (también conocido como fiebre hemorrágica coreana, fiebre hemorrágica epidémica y nefropatía epidémica) y síndrome pulmonar por hantavirus (HPS), que son enfermedades potencialmente mortales en humanos. Los hantavirus son transportados por roedores y la infección puede ocurrir a través del contacto directo con heces, saliva u orina de los roedores infectados y/o por inhalación del virus en excrementos de roedores. El tratamiento de1HFRS y e1HPS es de apoyo, ya que actualmente no existe una cura o vacuna específica.
Definiciones
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en esta invención tienen el mismo significado que interpreta habitualmente un experto en la técnica. En el caso de que existan una pluralidad de definiciones para un término de la presente, prevalecerán las de esta sección a menos que se indique de otro modo.
Tal como se utiliza(n) en esta invención, cual(es)quiera grupo(s) "R" tal(es) como, sin carácter limitante, R1, R2 , R3 , R4 , R5A r5B R6A r6B R6C R6D R6E R6F R6G R6H R7A R7B R8 R9 R10 R11 R12 R13 R14 R15 R16 R17 R18 rA1 rA2 rA3 y RA4 representan sustituyentes que se pueden unir al átomo indicado. Un grupo R puede estar sustituido o no sustituido. Si se describe que dos grupos «R» se consideran «conjuntamente», los grupos R y los átomos a los cuales están unidos pueden formar un cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heterociclo. Por ejemplo, sin carácter limitante, si se indica que Ra y Rb de un grupo NRa Rb se consideran «conjuntamente», esto significa que están enlazados covalentemente entre sí para formar un anillo:
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Además, si se describe que dos grupos «R» se consideran «conjuntamente» con el o los átomos a los cuales están unidos para formar un anillo como alternativa, los grupos R no se limitan a las variables o sustituyentes que se han definido previamente.
Siempre que se describa que un grupo está «opcionalmente sustituido», ese grupo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más de los sustituyentes indicados. Del mismo modo, cuando se describe que un grupo está «no sustituido o sustituido», si está sustituido, el o los sustituyentes se pueden seleccionar entre uno o más de los sustituyentes indicados. Si no se indican sustituyentes, esto significa que el grupo «opcionalmente sustituido» o «sustituido» indicado puede estar sustituido con uno o más grupos seleccionados individual e independientemente entre alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aril(alquilo), heteroaril(alquilo), heterociclil(alquilo), hidroxi, alcoxi, acilo, ciano, halógeno, tiocarbonilo, O-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, N-tiocarbamilo, C-amido, N-amido, S-sulfonamido, N-sulfonamido, C-carboxi, O-carboxi, isocianato, tiocianato, isotiocianato, azido, nitro, sililo, sulfenilo, sulfinilo, sulfonilo, haloalquilo, haloalcoxi, trihalometanosulfonilo, trihalometanosulfonamido, un amino, un grupo amino monosustituido y un grupo amino disustituido.
La expresión «Ca a Cb», tal como se utiliza en esta invención, donde «a» y «b» son números enteros, se refiere al número de átomos de carbono en un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo, o el número de átomos de carbono en el anillo de un grupo cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heteroaliciclilo. Es decir, el alquilo, alquenilo, alquinilo, anillo del cicloalquilo, anillo del cicloalquenilo, anillo del arilo, anillo del heteroarilo o anillo del heterociclilo pueden contener de «a» a «b», inclusive, átomos de carbono. Así, por ejemplo, un grupo «alquilo C1 a C4» se refiere a todos los grupos alquilo que tienen de 1 a 4 carbonos, es decir, CH3-, CH3CH2-, CH3CH2CH2-, (CH3)2CH-, CH3CH2CH2CH2-, CH3CH2CH(CH3)- y (CH3)3C-. Si no se designan «a» ni «b» con respecto a un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo, se debe asumir el intervalo más amplio descrito en estas definiciones.
El término «alquilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada que comprende un grupo hidrocarbonado totalmente saturado (sin dobles ni triples enlaces). El grupo alquilo puede tener de 1 a 20 átomos de carbono (siempre que aparezca en esta invención, un intervalo numérico tal como «de 1 a 20» se refiere a cada número entero en el intervalo dado, por ejemplo, «de 1 a 20 átomos de carbono» significa que el grupo alquilo puede estar constituido por 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc., hasta 20 átomos de carbono inclusive, aunque la presente definición también cubre el caso del término «alquilo» donde no se designa ningún intervalo). El grupo alquilo también puede ser un alquilo de tamaño medio que tenga de 1 a 10 átomos de carbono. El grupo alquilo también podría ser un alquilo inferior que tenga de 1 a 6 átomos de carbono. El grupo alquilo de los compuestos se puede designar como «alquilo C1-C4» o con designaciones similares. A modo de ejemplo únicamente, «C1-C4 alquilo» indica que hay de uno a cuatro átomos de carbono en la cadena de alquilo, es decir, la cadena de alquilo se selecciona entre metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y t-butilo. Los grupos alquilo habituales incluyen, sin carácter limitante, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo terciario, pentilo y hexilo. El grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «alquenilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo alquilo que contiene en la cadena hidrocarbonada lineal o ramificada uno o más dobles enlaces. Un grupo alquenilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «alquinilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo alquilo que contiene en la cadena hidrocarbonada lineal o ramificada uno o más triples enlaces. Un grupo alquinilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «cicloalquilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un sistema anular hidrocarbonado mono- o multicíclico completamente saturado (sin dobles ni triples enlaces). Cuando se compone de dos o más anillos, los anillos pueden estar unidos entre sí de manera fusionada. Los grupos cicloalquilo pueden contener de 3 a 10 átomos en el o los anillos o de 3 a 8 átomos en el o los anillos. Un grupo cicloalquilo puede estar sustituido o no sustituido. Los grupos cicloalquilo habituales incluyen, sin carácter limitante, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
El término «cicloalquenilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un sistema anular hidrocarbonado monoo multicíclico que contiene uno o más dobles enlaces en al menos un anillo; aunque, si hay más de uno, los dobles enlaces no pueden formar un sistema de electrones pi completamente deslocalizado en todos los anillos (de lo contrario, el grupo sería un «arilo», tal como se define en esta invención). Cuando se compone de dos o más anillos, los anillos pueden estar conectados entre sí de manera fusionada. Un cicloalquenilo puede contener de 3 a 10 átomos en el o los anillos o de 3 a 8 átomos en el o los anillos. Un grupo cicloalquenilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «arilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un sistema anular aromático monocíclico o multicíclico carbocíclico (todo carbono) (que incluye sistemas anulares fusionados donde dos anillos carbocíclicos comparten un enlace químico) que tiene un sistema de electrones pi completamente deslocalizado en todos los anillos. El número de átomos de carbono en un grupo arilo puede variar. Por ejemplo, el grupo arilo puede ser un grupo arilo C6-C14, un grupo arilo C6-C10 o un grupo arilo C6. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, sin carácter limitante, benceno, naftaleno y azuleno. Un grupo alilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «heteroarilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un sistema anular aromático monocíclico o multicíclico (un sistema anular con sistema de electrones pi completamente deslocalizado) que contiene uno o más heteroátomos (por ejemplo, de 1 a 5 heteroátomos), es decir, un elemento distinto de carbono, que incluye, sin carácter limitante, nitrógeno, oxígeno y azufre. El número de átomos en el o los anillos de un grupo heteroarilo puede variar. Por ejemplo, el grupo heteroarilo puede contener de 4 a 14 átomos en el o los anillos, de 5 a 10 átomos en el o los anillos o de 5 a 6 átomos en el o los anillos. Además, el término «heteroarilo» incluye sistemas anulares fusionados en los que dos anillos, tales como al menos un anillo de arilo y al menos un anillo de heteroarilo, o al menos dos anillos de heteroarilo, comparten al menos un enlace químico. Los ejemplos de anillos de heteroarilo incluyen, sin carácter limitante, furano, furazano, tiofeno, benzotiofeno, ftalazina, pirrol, oxazol, benzoxazol, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxadiazol, tiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, benzotiazol, imidazol, bencimidazol, indol, indazol, pirazol, benzopirazol, isoxazol, benzoisoxazol, isotiazol, triazol, benzotriazol, tiadiazol, tetrazol, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina, purina, pteridina, quinolina, isoquinolina, quinazolina, quinoxalina, cinolina y triazina. Un grupo heteroarilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «heterociclilo» o «heteroaliciclilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un sistema anular monocíclico, bicíclico y tricíclico de tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez y hasta 18 miembros donde los átomos de carbono junto con de 1 a 5 heteroátomos constituyen dicho sistema anular. Un heterociclo puede contener opcionalmente uno o más enlaces insaturados situados de tal manera, sin embargo, que no se produzca un sistema de electrones pi completamente deslocalizado en todos los anillos. El o los heteroátomos son un elemento distinto de carbono que incluye, sin carácter limitante, oxígeno, azufre y nitrógeno. Un heterociclo puede contener además una o más funcionalidades de carbonilo o tiocarbonilo, para hacer que la definición incluya sistemas oxo y tio sistemas tales como lactamas, lactonas, imidas cíclicas, tioimidas cíclicas y carbamatos cíclicos. Cuando se compone de dos o más anillos, los anillos pueden estar unidos entre sí de manera fusionada. Además, cualesquiera nitrógenos en un heterociclilo o un heteroaliciclilo se pueden cuaternizar. Los grupos heterociclilo o heteroalicíclicos pueden estar sustituidos o no sustituidos. Los ejemplos de tales grupos «heterociclilo» o «heteroaliciclilo» incluyen, sin carácter limitante, 1,3-dioxina, 1,3-dioxano, 1,4-dioxano, 1,2-dioxolano, 1,3-dioxolano, 1 ,4-dioxolano, 1,3-oxatiano, 1,4-oxatiino, 1,3-oxatiolano, 1,3-ditiol, 1,3-ditiolano, 1,4-oxatiano, tetrahidro-1,4-tiazina, 2H-1,2-oxazina, maleimida, succinimida, ácido barbitúrico, ácido tiobarbitúrico, dioxopiperazina, hidantoína, dihidrouracilo, trioxano, hexahidro-1,3,5-triazina, imidazolina, imidazolidina, isoxazolina, isoxazolidina, oxazolina, oxazolidina, oxazolidinona, tiazolidina, morfolina, oxirano, W-óxido de piperidina, piperidina, piperazina, pirrolidina, pirrolidona, pirrolidiona, 4-piperidona, pirazolina, pirazolidina, 2-oxopirrolidina, tetrahidropirano, 4H-pirano, tetrahidrotiopirano, tiamorfolina, sulfóxido de tiamorfolina, tiamorfolinosulfona y sus análogos benzofusionados (por ejemplo, bencimidazolidinona, tetrahidroquinolina y 3,4-metilenodioxifenilo).
Los términos «aralquilo» y «aril(alquilo)», tal como se utilizan en esta invención, se refieren a un grupo arilo conectado, como sustituyente, a través de un grupo alquileno inferior. El grupo arilo y el alquileno inferior de un aril(alquilo) puede estar sustituido o no sustituido. Los ejemplos incluyen, sin carácter limitante, bencilo, 2-fenil(alquilo), 3-fenil(alquilo) y naftil(alquilo).
Los términos «heteroaralquilo» y «heteroaril(alquilo)», tal como se utilizan en esta invención, se refieren a un grupo heteroarilo conectado, como sustituyente, a través de un grupo alquileno inferior. El grupo heteroarilo y el alquileno inferior de un heteroaril(alquilo) puede estar sustituido o no sustituido. Los ejemplos incluyen, sin carácter limitante, 2-tienil(alquilo), 3-tienil(alquilo), furil(alquilo), tienil(alquilo), pirrolil(alquilo), piridil(alquilo), isoxazolil(alquilo), imidazolil(alquilo) y sus análogos benzofusionados.
Un «(heteroaliciclil)alquilo» y «(heterociclil)alquilo» se refieren a un grupo heterocíclico o heteroaliciclílico conectado, como sustituyente, a través de un grupo alquileno inferior. El grupo heterociclilo y alquileno inferior de un (heteroaliciclil)alquilo puede estar sustituido o no sustituido. Los ejemplos incluyen, sin carácter limitante, tetrahidro-2H-piran-4-il(metilo), piperidin-4-il(etilo), piperidin-4-il(propilo), tetrahidro-2H-tiopiran-4-il(metilo) y 1,3-tiazinan-4-il(metilo).
Los «grupos alquileno inferior» son grupos conectores -CH 2 - de cadena lineal, que forman enlaces para conectar fragmentos moleculares a través de sus átomos de carbono terminales. Los ejemplos incluyen, sin carácter limitante, metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-) y butileno (-CH2CH2CH2CH2-). Se puede sustituir un grupo alquileno inferior reemplazando uno o más hidrógenos del grupo alquileno inferior por uno o más sustituyentes enumerados en la definición de «sustituido».
El término «alcoxi» se refiere a la fórmula -OR donde R es un alquilo, un alquenilo, un alquinilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo como se define en esta invención. Una lista no limitante de alcoxis son metoxi, etoxi, n-propoxi, 1-metiletoxi (isopropoxi), n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, fenoxi y benzoxi. Un alcoxi puede estar sustituido o no sustituido.
El término «acilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo, un alquinilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, heteroaril(alquilo) o heterociclil(alquilo) conectados, como sustituyentes, a través de un grupo carbonilo. Los ejemplos incluyen formilo, acetilo, propanoílo, benzoílo y acrilo. Un acilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «hidroxialquilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo alquilo en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se han reemplazado por un grupo hidroxi. Los ejemplos de grupos hidroxialquilo incluyen, sin carácter limitante, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo y 2,2-dihidroxietilo. Un hidroxialquilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «haloalquilo», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo alquilo en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se ha reemplazado por un halógeno (por ejemplo, mono-haloalquilo, di-haloalquilo y trihaloalquilo). Tales grupos incluyen, sin carácter limitante, clorometilo, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 1-cloro-2-fluorometilo y 2-fluoroisobutilo. Un haloalquilo puede estar sustituido o no sustituido.
El término «haloalcoxi» se refiere a un grupo -O-alquilo en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se ha reemplazado por un halógeno (por ejemplo, mono-haloalcoxi, di-haloalcoxi y tri-haloalcoxi). Tales grupos incluyen, sin carácter limitante, clorometoxi, fluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, 1-cloro-2-fluorometoxi y 2-fluoroisobutoxi. Un haloalcoxi puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «sulfenilo» se refiere a un grupo «-SR» en el que R puede ser hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un sulfenilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «sulfinilo» se refiere a un grupo «-S(=O)-R» en el que R puede ser el mismo que se ha definido respecto a sulfenilo. Un sulfinilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «sulfonilo» se refiere a un grupo «SO2 R» en el que R puede ser el mismo que se ha definido respecto a sulfenilo. Un sulfonilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «O-carboxi» se refiere a un grupo «RC(=O)O-» en el que R puede ser hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo, tal como se define en esta invención. Un O-carboxi puede estar sustituido o no sustituido.
Los términos «éster» y «C-carboxi» se refieren a un grupo «-C(=O)OR» en el que R puede ser el mismo que se ha definido respecto a O-carboxi. Un éster y un C-carboxi pueden estar sustituidos o no sustituidos.
Un grupo «tiocarbonilo» se refiere a un grupo «-C(=S)R» en el que R puede ser el mismo que se ha definido respecto a O-carboxi. Un tiocarbonilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «trihalometanosulfonilo» se refiere a un grupo «X3CSO2-» en el que cada X es un halógeno.
Un grupo «trihalometanosulfonamido» se refiere a un grupo «X3CS(O)2N(Ra )-» donde cada X es un halógeno, y Ra es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo.
El término «amino», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo -NH2 .
El término «hidroxi», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo -OH.
Un grupo «ciano» se refiere a un grupo «-CN».
El término «azido», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un grupo -N3 .
Un grupo «isocianato» se refiere a un grupo «-NCO».
Un grupo «tiocianato» se refiere a un grupo «-CNS».
Un grupo «isotiocianato» se refiere a un grupo «-NCS».
Un grupo «mercapto» se refiere a un grupo «-SH».
Un grupo «carbonilo» se refiere a un grupo C=O.
Un grupo «S-sulfonamido» se refiere a un grupo «-SO2N(Ra Rb )» en el que Ra y Rb pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un S-sulfonamido puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «N-sulfonamido» se refiere a un grupo «RSO2N(Ra )-» en el que R y Ra pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un N-sulfonamido puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «O-carbamilo» se refiere a un grupo «-OC(=O)N(Ra Rb )» en el que Ra y Rb pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aralquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un O-carbamilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «N-carbamilo» se refiere a un grupo «ROC(=O)N(Ra )-» en el que R y Ra pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un N-carbamilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «O-tiocarbamilo» se refiere a un grupo «-OC(=S)N(Ra Rb )» en el que Ra y Rb pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un O-tiocarbamilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «N-tiocarbamilo» se refiere a un grupo «ROC(=S)N(Ra )-» en el que R y Ra pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un N-tiocarbamilo puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «O-carbamilo» se refiere a un grupo «-OC(=O)N(Ra Rb )» en el que Ra y Rb pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un C-amido puede estar sustituido o no sustituido.
Un grupo «N-amido» se refiere a un grupo «ROC(=O)N(Ra )-» en el que R y Ra pueden ser independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, arialquilo, (heteroaril)alquilo o (heterociclil)alquilo. Un N-amido puede estar sustituido o no sustituido.
La expresión «átomo de halógeno» o «halógeno», tal como se utiliza en esta invención, significa cualquiera de los átomos radioestables de la columna 7 de la Tabla periódica de los elementos tal como flúor cloro, bromo y yodo.
Cuando no se especifica el número de sustituyentes (por ejemplo, haloalquilo), puede haber uno o más sustituyentes presentes. Por ejemplo, «haloalquilo» puede incluir uno o más halógenos iguales o diferentes. A modo de otro ejemplo, «(alcoxi C1-C3)fenilo» puede incluir uno o más grupos alcoxi iguales o diferentes que contienen uno, dos o tres átomos.
Tal como se utilizan en esta invención, las abreviaturas para cualesquiera grupos protectores, aminoácidos y otros compuestos, a menos que se indique lo contrario, están según su uso común, abreviaturas reconocidas o la Comisión de Nomenclatura Bioquímica de la IUPAC-IUB (remítase a Biochem. 11: 942 -944 (1972)).
El término «nucleósido» se utiliza en esta invención en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica y se refiere a un compuesto constituido por un resto de pentosa opcionalmente sustituido o un resto de pentosa modificado unido a una base heterocíclica o tautómero de esta a través de un enlace N-glicosídico, tal como unido mediante la posición 9 de una base de purina o la posición 1 de una base de pirimidina. Los ejemplos incluyen, sin carácter limitante, un ribonucleósido que comprende un resto de ribosa y un desoxirribonucleósido que comprende un resto de desoxirribosa. Un resto de pentosa modificado es un resto de pentosa en el que un átomo de oxígeno ha sido reemplazado por un carbono y/o un carbono ha sido reemplazado por un átomo de azufre o de oxígeno. Un «nucleósido» es un monómero que puede tener una base sustituida y/o un resto de azúcar. Además, un nucleósido se puede incorporar en polímeros y oligómeros de ADN y/o ARN más grandes. En algunos casos, el nucleósido puede ser un fármaco análogo a un nucleósido.
El término «nucleótido» se utiliza en esta invención en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica y se refiere a un nucleósido que tiene un éster de tipo fosfato unido al resto de pentosa, por ejemplo, en la posición 5'.
La expresión «base heterocíclica», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un heterociclilo que contiene nitrógeno opcionalmente sustituido que se puede unir a un resto de pentosa opcionalmente sustituido o resto de pentosa modificado. Las bases heterocíclicas incluyen una base purina opcionalmente sustituida, una base pirimidina opcionalmente sustituida y una base triazol opcionalmente sustituida (por ejemplo, un 1,2,4-triazol). La expresión «base de purina» se utiliza en esta invención en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica e incluye sus tautómeros. La expresión «base de pirimidina» se utiliza en esta invención en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica e incluye sus tautómeros. Una lista no limitante de bases de purina opcionalmente sustituidas incluye purina, adenina, guanina, hipoxantina, xantina, aloxantina, 7-alquilguanina (por ejemplo, 7-metilguanina), teobromina, cafeína, ácido úrico e isoguanina. Los ejemplos de bases de pirimidina incluyen, sin carácter limitante, citosina, timina, uracilo, 5,6-dihidrouracilo y 5-alquilcitosina (por ejemplo, 5-metilcitosina). Un ejemplo de una base de triazol opcionalmente sustituida es 1,2,4-triazol-3-carboxamida. Otros ejemplos no limitantes de bases heterocíclicas incluyen diaminopurina, 8-oxo-N6-alquiladenina (por ejemplo, 8-oxo-N6-metiladenina), 7-desazaxantina, 7-desazaguanina, 7-desazaadenina, N4,N4-etanocitosina, N6,N6-etano-2,6-diaminopurina, 5-halouracilo (por ejemplo, 5-fluorouracilo y 5-bromouracilo), pseudoisocitosina, isocitosina, isoguanina y otras bases heterocíclicas descritas en las Patentes de EE. UU. No. 5.432.272 y 7.125.855. En algunas realizaciones, una base heterocíclica puede estar opcionalmente sustituida con una amina o un grupo o grupos protectores de enol.
La expresión «aminoácido conectado a través de N» se refiere a un aminoácido que está unido al resto indicado a través de un grupo amino de la cadena principal o un grupo amino monosustituido. Cuando el aminoácido está unido en un aminoácido conectado a través de N, uno de los hidrógenos que forma parte del grupo amino de la cadena principal o el grupo amino monosustituido no está presente y el aminoácido está unido a través del nitrógeno. Los aminoácidos conectados a través de N pueden estar sustituidos o no sustituidos.
La expresión «derivado de éster de un aminoácido conectado a través de N» se refiere a un aminoácido en el que un grupo ácido carboxílico de la cadena principal se ha convertido en un grupo éster. En algunas realizaciones, el grupo éster tiene una fórmula seleccionada entre alquil-0-C(=0)-, cicloalquil-0-C(=0)-, aril-0-C(=0)- y aril(alquil)-0-C(=0)-. Una lista no limitante de grupos éster incluye versiones sustituidas o no sustituidas de los siguientes: metil-0-C(=0)-, etil-0-C(=0)-, n-propil-0-C(=0)-, isopropil-0-C(=0)-, n-butil-0-C(=0)-, isobutil-0-C(=0)-, terc-butil-0-C(=o)-, neopentil-O-C(=O)-, ciclopropil-O-C(=O)-, ciclobutil-O-C(=O)-, ciclopentil-O-C(=O)-, ciclohexil-O-C(=O)-, fenil-O-C(=O)-, bencil-O-C(=O)- y naftil-O-C(=O)-. Los derivados de tipo éster de aminoácidos conectados a través de N pueden estar sustituidos o no sustituidos.
La expresión «aminoácido conectado a través de O» se refiere a un aminoácido que está unido al resto indicado mediante el hidroxi de su grupo ácido carboxílico de la cadena principal. Cuando el aminoácido está unido en un aminoácido conectado a través de O, el hidrógeno que forma parte del hidroxi de su grupo ácido carboxílico de la cadena principal no está presente y el aminoácido está unido a través del oxígeno. Los aminoácidos conectados a través de O pueden estar sustituidos o no sustituidos.
El término «aminoácido», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a cualquier aminoácido (aminoácidos tanto estándar como no estándar), que incluye, sin carácter limitante, a-aminoácidos, p-aminoácidos, Y-aminoácidos y 5-aminoácidos. Los ejemplos de aminoácidos adecuados incluyen, sin carácter limitante, alanina, asparagina, aspartato, cisteína, glutamato, glutamina, glicina, prolina, serina, tirosina, arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano y valina. Ejemplos adicionales de aminoácidos adecuados incluyen, sin carácter limitante, ornitina, hipusina, ácido 2-aminoisobutírico, deshidroalanina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, betaalanina, alfa-etilglicina, alfa-propilglicina y norleucina.
Los términos «fosforotioato» y «fosfotioato» se refieren a un compuesto de fórmula general
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sus formas protonadas (por ejemplo,
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) y sus tautómeros (tales como
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El término «fosfato», tal como se utiliza en esta invención, se utiliza en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica e incluye sus formas protonadas (por ejemplo,
OH
0 = P — O—
O-y
OH
o = p — o — ^
OH
). Los términos «monofosfato», «difosfato» y «trifosfato», tal como se utilizan en esta invención, se utilizan en su sentido ordinario tal como lo interpretan los expertos en la técnica e incluyen las formas protonadas.
Las expresiones «grupo protector» y «grupos protectores», tal como se utilizan en esta invención, se refieren a cualquier átomo o grupo de átomos que se añade a una molécula para evitar que los grupos existentes en la molécula experimenten reacciones químicas no deseadas. Se describen ejemplos de restos de grupos protectores en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a Ed. John Wiley & Sons, 1999, y en J.F.W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry Plenum Press, 1973. El resto del grupo protector se puede seleccionar de tal manera que sea estable en ciertas condiciones de reacción y se elimine fácilmente en una etapa conveniente utilizando una metodología conocida en la técnica. Una lista no limitante de grupos protectores incluye bencilo; bencilo sustituido; alquilcarbonilos y alcoxicarbonilos (por ejemplo, t-butoxicarbonilo (BOC), acetilo o isobutirilo); arilalquilcarbonilos y arilalcoxicarbonilos (por ejemplo, benciloxicarbonilo); éter metílico sustituido (por ejemplo, éter metoximetílico); éter etílico sustituido; un éter bencílico sustituido; éter tetrahidropiranílico; sililos (por ejemplo, trimetilsililo, trietilsililo, triisopropilsililo, t-butildimetilsililo, tri-/'so-propilsililoximetilo, [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo o t-butildifeniisililo); ésteres (por ejemplo, éster de tipo benzoato); carbonatos (por ejemplo, metoximetilcarbonato); sulfonatos (por ejemplo, tosilato o mesilato); cetal acíclico (por ejemplo, acetal dimetílico); cetales cíclicos (por ejemplo, 1,3-dioxano, 1,3-dioxolanos y los descritos en la presente); acetal acíclico; acetal cíclico (por ejemplo, los descritos en la presente); hemiacetal acíclico; hemiacetal cíclico; ditiocetales cíclicos (por ejemplo, 1,3-ditiano o 1,3-ditiolano); ortoésteres (por ejemplo, los descritos en la presente) y grupos triarilmetilo (por ejemplo, tritilo; monometoxitritilo (MMTr); 4,4'-dimetoxitritilo (DMTr); 4,4',4"-trimetoxitritilo (TMTr); y los descritos en esta invención).
La expresión «sal farmacéuticamente aceptable» se refiere a una sal de un compuesto que no provoca irritación significativa a un organismo al que se administra y no anula la actividad biológica ni las propiedades del compuesto. En algunas realizaciones, la sal es una sal de adición de ácido del compuesto. Las sales farmacéuticas se pueden obtener haciendo reaccionar un compuesto con ácidos inorgánicos tales como un ácido halhídrico (por ejemplo, ácido clorhídrico o ácido bromhídrico), ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico. Las sales farmacéuticas también se pueden obtener haciendo reaccionar un compuesto con un ácido orgánico tal como ácidos carboxílicos o sulfónicos alifáticos o aromáticos, por ejemplo, ácido fórmico, acético, succínico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, nicotínico, metanosulfónico, etanosulfónico, p-toluensulfónico, salicílico o naftalenosulfónico. Las sales farmacéuticas también se pueden obtener haciendo reaccionar un compuesto con una base para formar una sal tal como una sal de amonio, una sal de un metal alcalino, tal como una sal de sodio o potasio, una sal de un metal alcalinotérreo, tal como una sal de calcio o magnesio, una sal de bases orgánicas tales como diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, tris(hidroximetil)metilamina, alquilamina C1-C7, ciclohexilamina, trietanolamina, etilendiamina, y sales con aminoácidos tales como arginina y lisina.
Los términos y expresiones que se utilizan en esta solicitud, y variaciones de estos, especialmente en las reivindicaciones adjuntas, a menos que se indique expresamente lo contrario, se deben interpretar como abiertos y no como limitantes. A modo de ejemplo de lo anterior, se debe interpretar que la expresión «que incluye» significa «que incluye, sin limitación», «que incluye, pero no se limita a» o similares; la expresión «que comprende», tal como se utiliza en esta invención, es sinónima de «que incluye», «que contiene» o «que se caracteriza por» y es inclusiva o abierta y no excluye elementos o etapas del procedimiento adicionales no mencionadas; la expresión «que tiene» se debe interpretar como «que tiene al menos»; la expresión «incluye» se debe interpretar como «incluye pero no se limita a»; el término «ejemplo» se utiliza para proporcionar casos ilustrativos del artículo en discusión, y no una lista exhaustiva ni limitante de este; y el uso de términos tales como «preferentemente», «preferido», «deseado» o «deseable» y términos de significado similar no se debe interpretar como que implique que ciertas características sean críticas, esenciales o incluso importantes para la estructura o función sino que en su lugar se debe interpretar como que pretende únicamente resaltar características alternativas adicionales que pueden utilizarse o no en una realización particular. Además, la expresión «que comprende» se debe interpretar de forma sinónima a las expresiones «que tiene al menos» o «que incluye al menos». Cuando se utiliza en el contexto de un proceso, la expresión «que comprende» significa que el proceso incluye al menos los pasos mencionados, pero puede incluir pasos adicionales. Cuando se utiliza en el contexto de un compuesto, composición o dispositivo, la expresión «que comprende» significa que el compuesto, composición o dispositivo incluye al menos las características o componentes mencionados, pero puede incluir también características o componentes adicionales. Del mismo modo, un grupo de artículos enlazados con la conjunción «y» no se debe interpretar como que requiera que cada uno de esos artículos esté presente en la agrupación, sino que en su lugar se debe interpretar como «y/o» a menos que se indique expresamente lo contrario. De forma similar, un grupo de artículos enlazados con la conjunción «o» no se debe interpretar como que requiera exclusividad mutua entre ese grupo, sino que en su lugar se debe interpretar como «y/o» a menos que se indique expresamente lo contrario.
Con respecto al uso de sustancialmente cualesquiera términos en singular y/o plural en esta invención, los expertos en la técnica pueden traducir del plural al singular y/o del singular al plural según sea apropiado para el contexto y/o la aplicación. Las diferentes permutaciones de singular/plural se pueden exponer expresamente en esta invención con fines de claridad. El artículo indefinido «un» o «una» no excluye una pluralidad. Un único procesador u otra unidad puede cumplir las funciones de varios artículos mencionados en las reivindicaciones. El mero hecho de que ciertas medidas se mencionen en reivindicaciones dependientes mutuamente diferentes no indica que una combinación de estas medidas no se pueda utilizar para obtener ventajas. Cualesquiera signos de referencia en las reivindicaciones no se deben interpretar como limitantes del alcance.
Se debe sobreentender que, en cualquier compuesto descrito en esta invención que tenga uno o más centros quirales, si no se indica expresamente una estereoquímica absoluta, entonces cada centro puede tener independientemente una configuración R o una configuración S o una mezcla de estas. De este modo, los compuestos proporcionados en esta invención pueden ser enantioméricamente puros, enantioméricamente enriquecidos, una mezcla racémica, diastereoméricamente puros, diastereoméricamente enriquecidos o una mezcla estereoisomérica. Además, se sobreentiende que, en cualquier compuesto descrito en esta invención que tenga uno o más dobles enlaces que generen isómeros geométricos que se pueden definir como E o Z, cada doble enlace puede ser independientemente E o Z o una mezcla de estos.
Del mismo modo, se sobreentiende que, en cualquier compuesto descrito, también se pretende que todas las formas tautoméricas estén incluidas. Por ejemplo, se pretende que todos los tautómeros de un grupo fosfato y un grupo fosforotioato estén incluidos. Los ejemplos de tautómeros de un fosforotioato incluyen los siguientes:
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Además, se pretende que queden incluidos todos los tautómeros de bases heterocíclicas que se conocen en la técnica, incluidos los tautómeros de bases de purina y bases de pirimidina naturales y no naturales.
Se debe sobreentender que, cuando los compuestos divulgados en esta invención tienen valencias sin completar, entonces las valencias deben completarse con hidrógenos o sus isótopos, por ejemplo, hidrógeno-1 (protio) e hidrógeno-2 (deuterio).
Se debe sobreentender que los compuestos descritos en esta invención se pueden marcar isotópicamente. La sustitución con isótopos tales como deuterio pueden proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que den como resultado una mayor estabilidad metabólica, como, por ejemplo, una semivida in vivo mayor o unos requisitos de dosis reducidos. Cada elemento químico tal como se representa en la estructura de un compuesto puede incluir cualquier isótopo de dicho elemento. Por ejemplo, en la estructura de un compuesto, un átomo de hidrógeno puede estar descrito explícitamente o se puede sobreentender que está presente en el compuesto. En cualquier posición del compuesto en la que esté presente un átomo de hidrógeno, el átomo de hidrógeno puede ser cualquier isótopo de hidrógeno, que incluye, sin carácter limitante, hidrógeno-1 (protio) e hidrógeno-2 (deuterio). De este modo, la referencia en esta invención a un compuesto engloba todas las formas isotópicas potenciales a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.
Se sobreentiende que los métodos y las combinaciones que se describen en esta invención incluyen formas cristalinas (también conocidas como polimorfos, que incluyen las diferentes disposiciones de empaquetamiento cristalino de la misma composición elemental de un compuesto), fases amorfas, sales, solvatos e hidratos. En algunas realizaciones, los compuestos descritos en esta invención existen en formas solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol o similares. En otras realizaciones, los compuestos descritos en esta invención existen en una forma no solvatada. Los solvatos contienen cantidades estequiométricas o no estequiométricas de un disolvente y se pueden formar durante el proceso de cristalización con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol o similares. Se forman hidratos cuando el disolvente es agua o se forman alcoholatos cuando el disolvente es un alcohol. Además, los compuestos proporcionados en esta invención pueden existir en formas no solvatadas, así como solvatadas. En general, se considera que las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas a los efectos de los compuestos y procedimientos proporcionados en esta invención.
Cuando se proporciona un intervalo de valores, se sobreentiende que el límite superior e inferior, y cada valor intermedio entre el límite superior inferior del intervalo está englobado dentro de las realizaciones.
Procedimientos de uso:
En esta invención se describe un procedimiento para tratar y/o mejorar una infección causada por un virus Coronaviridae que puede incluir administrarle a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto descrito en esta invención (tal como un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este). En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por un virus Coronaviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección viral una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Coronaviridae que puede incluir administrar a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Coronaviridae mediante la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos.
En esta invención se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Coronaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Coronaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Coronaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención se describen procedimientos para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Coronaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir una ARN polimerasa dependiente de ARN de un virus Coronaviridae y, por lo tanto, inhibir la replicación del ARN. En algunas realizaciones, una polimerasa de un virus Coronaviridae puede inhibirse poniendo en contacto una célula infectada con el virus Coronaviridae con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En algunas realizaciones, el virus Coronaviridae puede ser un Coronavirus. En otras realizaciones, el virus Coronaviridae puede ser un Torovirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por Coronavirus. Por ejemplo, administrando una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un sujeto infectado con el Coronavirus y/o poniendo en contacto una célula infectada con el Coronavirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir la replicación de un Coronavirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra un Coronavirus y, por lo tanto, mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por Coronavirus.
Hay varias especies dentro del género Coronavirus que incluyen,sin carácter limitante, el coronavirus del síndrome respiratorio del Oriente Medio (MERS-CoV) y el coronavirus del SARS (SARS-CoV). En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por MERS-CoV. Por ejemplo, administrando una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un sujeto infectado con MERS-CoV y/o poniendo en contacto una célula infectada con MERS-CoV. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir la replicación del MERS-CoV. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra el MERS-CoV y, por lo tanto, mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por MERS-CoV. Los síntomas de MERS-CoV incluyen, sin carácter limitante, fiebre (por ejemplo, >100,4 °F), tos, dificultad para respirar, insuficiencia renal, diarrea, dificultades respiratorias y neumonía.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por SARS-CoV. Se puede administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un sujeto infectado con SARS-CoV y/o poniendo en contacto una célula infectada con SARS-CoV con una cantidad eficaz de un compuesto de la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir la replicación del SARS-CoV. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra el SARS-CoV y, por lo tanto, mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por SARS-CoV. Los síntomas del SARS-CoV incluyen, sin carácter limitante, fatiga extrema, malestar, dolor de cabeza, fiebre alta (por ejemplo, >100,4 °F), letargo, confusión, erupción cutánea, pérdida de apetito, mialgia, escalofríos, diarrea, tos seca, secreción nasal, dolor de garganta, dificultad para respirar, problemas respiratorios, caída gradual en los niveles de oxígeno en sangre (tal como, hipoxia) y neumonía.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por torovirus. En algunas realizaciones, una infección provocada por torovirus puede mejorarse y/o tratarse administrando una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un sujeto infectado con el torovirus y/o poniendo en contacto una célula infectada con el torovirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir la replicación de un Torovirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por torovirus.
En esta invención se describe un procedimiento para tratar y/o mejorar una infección causada por un virus Togaviridae que puede incluir administrarle a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por un virus Togaviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección viral una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Togaviridae que puede incluir administrar a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Togaviridae mediante la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos.
En esta invención se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Togaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Togaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Togaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención se describen procedimientos para inhibir la replicación de un virus Togaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Togaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Togaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir una ARN polimerasa dependiente de ARN de un virus Togaviridae y, por lo tanto, inhibir la replicación del ARN. En algunas realizaciones, una polimerasa de un virus Togaviridae puede inhibirse poniendo en contacto una célula infectada con el virus Togaviridae con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En algunas realizaciones, el virus Togaviridae puede ser un Alfavirus. Una especie de Alfavirus es un virus de la encefalitis equina venezolana (VEEV). En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por VEEV. En otras realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, pueden fabricarse en un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un VEEV que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En aun otras realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un VEEV que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En alguna realización, el VEEV puede ser un subtipo epizoótico. En alguna realización, el VEEV puede ser un subtipo enzoótico. Como se describe en esta invención, el complejo del virus de la encefalitis equina venezolana incluye múltiples subtipos que se dividen adicionalmente por variantes antigénicas. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra más de un subtipo de un VEEV, tal como 2, 3, 4, 5 o 6 subtipos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede usarse para tratar, mejorar y/o prevenir el subtipo VEEV I. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra más de una variante antigénica de un VEEV. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por VEEV. Los ejemplos de síntomas manifestados por un sujeto infectado con VEEV incluyen síntomas similares a la gripe, tales como fiebre alta, dolor de cabeza, mialgia, fatiga, vómitos, náuseas, diarrea y faringitis. Los sujetos con encefalitis muestran uno o más de los siguientes síntomas: somnolencia, convulsiones, confusión, fotofobia, coma y sangrado del cerebro, pulmón(es) y/o tracto gastrointestinal. En algunas realizaciones, el sujeto puede ser humano. En otras realizaciones, el sujeto puede ser un caballo.
Chikungunya (CHIKV) es otra especie de Alfavirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por CHIKV. Uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden fabricar en un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un CHIKV que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En aun otras realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un CHIKV que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, uno o más síntomas de una infección provocada por CHIKV pueden mejorarse administrando una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a un sujeto infectado con CHIKV y/o poniendo en contacto una célula infectada con CHIKV con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Los síntomas clínicos de una infección provocada por CHIKV incluyen fiebre, erupción cutánea (como erupción petequial y/o maculopapular), dolor muscular, dolor articular, fatiga, dolor de cabeza, náuseas, vómitos, conjuntivitis, pérdida del gusto, fotofobia, insomnio, dolor articular incapacitante y artritis.
Otras especies de Alfavirus incluyen el virus del bosque de Barmah, el virus Mayaro (MAYV), el virus O'nyong'nyong, el virus del río Ross (RRV), el virus del bosque de Semliki, el virus Sindbis (SINV), el virus Una, el virus de la encefalitis equina oriental (EEE) y la encefalomielitis equina occidental (WEE). En algunas realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un Alfavirus que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más de dichos compuestos y/o administrar a un sujeto (tal como, un sujeto infectado con el virus) una cantidad eficaz de uno o más de dichos compuestos, donde el Alfavirus se puede seleccionar de virus del Bosque de Barmah, virus Mayaro (MAYV), virus O'nyong'nyong, virus del Río Ross (RRV), virus del Bosque Semliki, virus Sindbis (SINV), virus Una, virus de la encefalitis equina oriental (EEE) y encefalomielitis equina occidental (WEE).
Otro género de virus Coronaviridae es un Rubivirus. En esta invención se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por un Rubivirus que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un Rubivirus que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un Rubivirus al poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención se describe un procedimiento para tratar y/o mejorar una infección causada por un virus Hepeviridae que puede incluir administrarle a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por un virus Hepeviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección viral una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Hepeviridae que puede incluir administrar a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Hepeviridae mediante la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos.
En esta invención se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Hepeviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Hepeviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Hepeviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención se describen procedimientos para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Hepeviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir una ARN polimerasa dependiente de ARN de un virus Hepeviridae y, por lo tanto, inhibir la replicación del ARN. En algunas realizaciones, una polimerasa de un virus Hepeviridae puede inhibirse poniendo en contacto una célula infectada con el virus Hepeviridae con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En algunas realizaciones, el virus Hepeviridae puede ser un Hepevirus, tal como un virus de la Hepatitis E. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus de la Hepatitis E. Uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden fabricar en un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus de la Hepatitis E que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus de la Hepatitis E que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. La Hepatitis E incluye varios genotipos, como se describe en esta invención, y cada genotipo incluye varios subtipos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra uno o más genotipos del virus de la Hepatitis E, tales como 1, 2, 3 o 4 genotipos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra uno o más subtipos de Hepatitis E. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra 2 o más, 3 o más, o más de 4 subtipos de Hepatitis E. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra un virus de Hepatitis E y, por lo tanto, mejorar uno o más síntomas de una infección provocada por Hepatitis E. Los síntomas de una infección provocada por el virus de la Hepatitis E incluyen, sin carácter limitante, Hepatitis esporádica aguda, Hepatitis viral epidémica, ictericia, anorexia, hepatomegalia, dolor abdominal y/o sensibilidad, náuseas, vómitos, fiebre, fatiga, diarrea y orina oscura.
Una infección provocada por Hepatitis E también puede afectar el hígado. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede usarse para tratar y/o mejorar una afección hepática asociada con una infección provocada por el virus de la Hepatitis E. En esta invención se describe un procedimiento para tratar una afección seleccionada de fibrosis hepática, cirrosis hepática y cáncer del hígado en un sujeto que padece una o más de las afecciones hepáticas mencionadas anteriormente que pueden incluir administrarle al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o una composición farmacéutica de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde la afección hepática es causada por una infección provocada por el virus de la Hepatitis E. En esta invención se describe un procedimiento para aumentar la función hepática en un sujeto que tiene una infección provocada por el virus de la Hepatitis E que puede incluir administrarle al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. También se describe un procedimiento para reducir o eliminar más daño hepático causado por virus en un sujeto que tiene una infección provocada por el virus de la Hepatitis E mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Este procedimiento puede incluir ralentizar o detener la progresión de la enfermedad hepática. El curso de la enfermedad se puede revertir y se contempla la estasis o la mejora en la función hepática. La fibrosis hepática, la cirrosis hepática y/o el cáncer del hígado se pueden tratar; la función hepática se puede aumentar; el daño hepático causado por virus se puede reducir o eliminar; la progresión de la enfermedad hepática se puede ralentizar o detener; el curso de la enfermedad hepática se puede revertir y/o la función hepática se puede mejorar o mantener poniendo en contacto una célula infectada con un virus de Hepatitis E con una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior.
En esta invención se describe un procedimiento para tratar y/o mejorar una infección causada por un virus Bunyaviridae que puede incluir administrarle a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En esta invención también se describe un procedimiento para mejorar y/o tratar una infección provocada por un virus Bunyaviridae que puede incluir administrar a un sujeto identificado que padece la infección viral una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En esta invención se describe el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Bunyaviridae que puede incluir administrar a un sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden usar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Bunyaviridae mediante la administración a un sujeto de una cantidad eficaz de uno o más compuestos descritos en esta invención.
En esta invención se describen procedimientos para mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus Bunyaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Bunyaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, que se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus Bunyaviridae poniendo en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos.
En esta invención se describen procedimientos para inhibir la replicación de un virus Bunyaviridae que pueden incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos. También se describe en esta invención el uso de uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de un virus Bunyaviridae que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. Otras realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede utilizar para inhibir la replicación de un virus Bunyaviridae al poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir una ARN polimerasa dependiente de ARN de un virus Bunyaviridae y, por lo tanto, inhibir la replicación del ARN. En algunas realizaciones, una polimerasa de un virus Bunyaviridae puede inhibirse poniendo en contacto una célula infectada con el virus Bunyaviridae con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
En algunas realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Bunyavirus. En otras realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Hantavirus. En aun otras realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Nairovirus. En aun otras realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Phlebovirus. En algunas realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Orthobunyavirus. En otras realizaciones, el virus Bunyaviridae puede ser un Tospovirus.
Una especie del género Phlebovirus es el virus de la fiebre del Valle del Rift. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar una infección provocada por el virus de la Fiebre del Valle del Rift. Uno o más compuestos de la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden fabricar en un medicamento para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus de la Fiebre del Valle del Rift que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, uno o más compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, se pueden utilizar para mejorar y/o tratar una infección causada por un virus de la Fiebre del Valle del Rift que puede incluir poner en contacto una célula infectada con el virus con una cantidad eficaz de dicho compuesto o compuestos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede inhibir la replicación del virus de la Fiebre del Valle del Rift, donde dicho compuesto se administra a un sujeto infectado con el virus de la Fiebre del Valle del Rift y/o donde dicho compuesto entra en contacto con una célula infectada con la Fiebre del Valle del Rift.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir la replicación de la forma ocular del virus de la Fiebre del Valle del Rift. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir la replicación de la forma de meningoencefalitis del virus de la fiebre del Valle del Rift. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir la replicación de la forma de fiebre hemorrágica del virus de la fiebre del Valle del Rift. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser eficaz contra una o más formas del virus de la Fiebre del Valle del Rift. En algunas realizaciones, uno o más síntomas de una infección provocada por el virus de la Fiebre del Valle del Rift pueden mejorarse mediante un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, donde una cantidad eficaz de dicho compuesto se administra a un sujeto infectado y/o una cantidad eficaz de dicho compuesto entra en contacto con una célula infectada. Los ejemplos de síntomas de una infección viral por Fiebre del Valle del Rift incluyen dolor de cabeza, dolor muscular, dolor articular, rigidez del cuello, sensibilidad a la luz, pérdida de apetito, vómitos, mialgia, fiebre, fatiga, dolor de espalda, mareos, pérdida de peso, síntomas de forma ocular (por ejemplo, lesiones retinianas, visión borrosa, visión disminuida y/o pérdida permanente de visión), síntomas de forma de meningoencefalitis (tales como, dolor de cabeza intenso, pérdida de memoria, alucinaciones, confusión, desorientación, vértigo, convulsiones, letargo y coma) y síntomas de forma de fiebre hemorrágica (por ejemplo, ictericia, vómitos sanguíneos, sangre que pasa por las heces, erupción purpúrica, equimosis, sangrado de la nariz y/o las encías, menorragia y sangrado de un sitio de punción venosa).
Otra especie del género Phlebovirus es el virus del síndrome de trombocitopenia. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir el virus del síndrome de trombocitopenia de replicación. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar la fiebre grave con síndrome de trombocitopenia (SFTS). En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de SFTS. Los síntomas clínicos de incluyen los siguientes: fiebre, vómitos, diarrea, insuficiencia multiorgánica, trombocitopenia, leucopenia y niveles elevados de enzimas hepáticas.
El virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo (CCHF) es una especie del género Nairovirus. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir la replicación del virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo. Los sujetos infectados con CCHF tienen uno o más de los siguientes síntomas: síntomas gripales (como fiebre alta, dolor de cabeza, mialgia, fatiga, vómitos, náuseas, diarrea y/o faringitis), hemorragia, inestabilidad del estado de ánimo, agitación, confusión mental, petequias de garganta, hemorragias nasales, orina sangrante, vómitos, heces negras, hígado hinchado y/o doloroso, coagulación intravascular diseminada, insuficiencia renal aguda, shock y síndrome de dificultad respiratoria aguda. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de CCHF.
El virus de la encefalitis de California es otro virus de la familia Bunyaviridae y es miembro del género Orthobunavirus. Los síntomas de una infección provocada por el virus de la encefalitis de California incluyen, sin carácter limitante, fiebre, escalofríos, náuseas, vómitos, dolor de cabeza, dolor abdominal, letargo, hallazgos neurológicos focales, anomalías motoras focales, parálisis, somnolencia, falta de alerta mental y orientación y convulsiones. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar, tratar y/o inhibir la replicación del virus de la encefalitis de California. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de una infección viral por encefalitis de California.
Los virus dentro del género Hantavirus pueden causar fiebre hemorrágica por hantavirus con síndrome renal (HFRS) (causado por virus como el virus del río Hantaan, el virus de Dobrava-Belgrado, el virus Saaremaa, el virus de Seúl y el virus Puumala) y síndrome pulmonar por hantavirus (HPS). Los virus que pueden causar HPS incluyen, sin carácter limitante, el virus del Canal de Black Creek (BCCV), el virus de Nueva York (NYV), el virus Sin Nombre (SNV). En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar HFRS. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar y/o tratar HPS. Los síntomas clínicos del HFRS incluyen enrojecimiento de mejillas y/o nariz, fiebre, escalofríos, palmas sudorosas, diarrea, malestar, dolores de cabeza, náuseas, dolor abdominal y de espalda, problemas respiratorios, problemas gastrointestinales, taquicardia, hipoxemia, insuficiencia renal, proteinuria y diuresis. Los síntomas clínicos de HPS incluyen síntomas similares a los de la gripe (por ejemplo, tos, mialgia, dolor de cabeza, letargo y falta de aliento que pueden deteriorarse hasta convertirse en insuficiencia respiratoria aguda). En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de HFRS. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede mejorar uno o más síntomas de HPS.
Los expertos en la técnica conocen varios indicadores para determinar la eficacia de un procedimiento para tratar y/o mejorar una infección viral provocada por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o Bunyaviridae. Los ejemplos de indicadores adecuados incluyen, sin carácter limitante, una reducción de la carga viral, una reducción de la replicación viral, una reducción del tiempo de seroconversión (virus indetectable en el suero del paciente), una reducción de la morbilidad o mortalidad en los resultados clínicos y/u otro indicador de la respuesta de la enfermedad. Otros indicadores incluyen uno o más indicadores generales de calidad de vida, tales como reducción de la duración de la enfermedad, reducción de la gravedad de la enfermedad, reducción del tiempo para regresar a la salud normal y la actividad normal y reducción del tiempo para aliviar uno o más síntomas. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede dar como resultado la reducción, alivio o indicación positiva de uno o más de los indicadores mencionados anteriormente en comparación con un sujeto que no es tratado.
Como la Hepatitis E puede afectar el hígado, los expertos en la materia conocen una variedad de indicadores para determinar la eficacia de un compuesto para tratar y/o mejorar una afección hepática asociada con una infección provocada por HEV. Los ejemplos de indicadores adecuados incluyen una reducción en la tasa de disminución de la función hepática; estasis en la función hepática; mejora en la función hepática; reducción en uno o más marcadores de disfunción hepática, que incluyen alanina transaminasa, aspartato transaminasa, bilirrubina total, bilirrubina conjugada, gamma glutamil transpeptidasa. De manera similar, una terapia exitosa con una cantidad eficaz de un compuesto o una composición farmacéutica descrita en esta invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este) puede reducir la incidencia de cáncer del hígado en sujetos infectados con HEV.
En algunas realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede reducir un nivel de un marcador de fibrosis hepática en al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 35%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 45%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 55%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, o al menos aproximadamente 80%, o más, en comparación con el nivel del marcador en un sujeto no tratado, o a un sujeto tratado con placebo. Los procedimientos para medir marcadores séricos son conocidos por los expertos en la materia e incluyen procedimientos basados en inmunología, por ejemplo, ensayos inmunoabsorbentes vinculados a enzimas (ELISA), radioinmunoensayos y similares, usando anticuerpos específicos para un marcador sérico dado. Una lista no taxativa de ejemplos de marcadores incluye medir los niveles de alanina aminotransferasa (ALT) sérica, aspartato aminotransferasa (AST), fosfatasa alcalina (ALP), gamma-glutamil transpeptidasa (GGT) y bilirrubina total (TBIL) usando procedimientos conocidos. En general, se considera normal un nivel de ALT inferior a aproximadamente 45 UI/L (unidades internacionales/litro), un AST en el intervalo de 10-34 UI/L, ALP en el intervalo de 44-147 UI/L, GGT en el intervalo de 0-51 UI/L, TBIL en el intervalo de 0,3-1,9 mg/dL. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser una cantidad eficaz para reducir los niveles de ALT, AST, ALP, GGT y/o TBIL a lo que se considera un nivel normal.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede dar como resultado una reducción en la longitud y/o gravedad de uno o más síntomas asociados con una infección provocada por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o virus Bunyaviridae en comparación con un sujeto que es un sujeto no tratado. La Tabla 1 proporciona algunas realizaciones del porcentaje de mejoras obtenidas usando un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en comparación con un sujeto no tratado. Los ejemplos incluyen los siguientes: en algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede dar como resultado una duración de la enfermedad que está en el intervalo de alrededor de 10% a alrededor de 30% menos que en comparación con la duración de la enfermedad experimentada por un sujeto que no recibe tratamiento para una infección provocada por el virus Bunyaviridae (tal como el virus de la Fiebre del Valle del Rift); y en algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, da como resultado una gravedad de un síntoma (tal como uno de los descritos en esta invención) que es 25% menos que en comparación con la gravedad del mismo síntoma experimentado por un sujeto que no recibe tratamiento para una infección VEEV. Los procedimientos para cuantificar la gravedad de un efecto secundario y/o síntoma son conocidos por los expertos en la materia.
Tabla 1
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En algunas realizaciones, R1A es hidrógeno en el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. En otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (I) es un mono, di o trifosfato, o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior. En aun otras realizaciones, el compuesto de Fórmula (I) es un tioaminofosfato, alfa-tiodifosfato o alfa-tiotrifosfato, o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior. En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que se puede usar para mejorar y/o tratar una infección provocada por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o Bunyaviridae y/o inhibir la replicación de un virus Coronaviridae, un virus Togaviridae, un virus Hepeviridae y/o un virus Bunyaviridae puede ser cualquiera de las realizaciones proporcionadas en cualquiera de las realizaciones descritas en la discusión entre el párrafo inmediatamente después del encabezado "Compuestos" y el párrafo inmediatamente anterior al encabezado "Composiciones farmacéuticas".
Tal como se usa en esta invención, un "sujeto" se refiere a un animal que es objeto de tratamiento, observación o experimento. "Animal" incluye vertebrados e invertebrados de sangre fría y caliente, como peces, mariscos, reptiles y, en particular, mamíferos. "Mamífero" incluye sin carácter limitante, ratones, ratas, conejos, cobayas, perros, gatos, ovejas, cabras, vacas, caballos, primates, tales como monos, chimpancés y simios y, en particular, seres humanos. En algunas realizaciones, el sujeto es humano.
Los términos y expresiones «tratar», «que trata», «tratamiento», «terapéutico» y «terapia», tal como se utilizan en esta invención, no se refieren necesariamente a la anulación o cura total de la enfermedad o afección. Cualquier alivio de cualesquiera signos o síntomas no deseados de una enfermedad o afección, en cualquier medida se puede considerar como tratamiento y/o terapia. Además, el tratamiento puede incluir actos que pueden empeorar la sensación de bienestar o apariencia general del sujeto.
Las expresiones «cantidad terapéuticamente eficaz» y «cantidad eficaz» se utilizan para indicar una cantidad de un compuesto, o agente farmacéutico, activo, que suscita la respuesta biológica o médica indicada. Por ejemplo, una cantidad eficaz de compuesto puede ser la cantidad necesaria para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de la enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto que se está tratando. Esta respuesta puede ocurrir en un tejido, sistema, animal o humano e incluye el alivio de los signos o síntomas de la enfermedad que se está tratando. La determinación de una cantidad eficaz se encuentra totalmente dentro de las competencias de los expertos en la técnica, teniendo en cuenta la descripción proporcionada en esta invención. La cantidad eficaz de los compuestos descritos en esta invención requerida como dosis dependerá de la vía de administración, el tipo de animal, incluido el ser humano, que se esté tratando, y las características físicas del animal específico en consideración. La dosis se puede adaptar para conseguir el efecto deseado, pero dependerá de factores tales como el peso, dieta, medicación concurrente y otros factores que los expertos en la técnica médica reconocerán.
Como será muy evidente para un experto en la técnica, la dosis in vivo útil que se ha de administrar y el modo particular de administración variarán dependiendo de la edad, el peso, la gravedad de la aflicción y la especie de mamífero que se esté tratando, los compuestos particulares empleados y el uso específico para el que se empleen estos compuestos. Un experto en la técnica puede lograr la determinación de los niveles de dosis eficaces, es decir, los niveles de dosis necesarios para conseguir el resultado deseado, utilizando procedimientos rutinarios, por ejemplo, ensayos clínicos con seres humanos y estudios in vitro.
La dosis puede variar ampliamente, dependiendo de los efectos deseados y la indicación terapéutica. Como alternativa, las dosis se pueden basar en el área superficial del paciente y se pueden calcular en función de esta, según interpretan los expertos en la técnica. Aunque la dosis exacta se determinará en función de cada fármaco, en la mayoría de los casos se pueden realizar ciertas generalizaciones respecto a la dosis. La pauta posológica diaria para un paciente humano adulto puede ser, por ejemplo, una dosis oral comprendida entre 0,01 mg y 3000 mg de cada principio activo, preferentemente entre 1 mg y 700 mg, por ejemplo, entre 5 y 200 mg. La dosis puede ser solo una o una serie de dos o más administradas en el transcurso de uno o más días, según necesite el sujeto. En algunas realizaciones, los compuestos se utilizarán mediante administración durante un período de terapia continua, por ejemplo, durante una semana o más, o durante meses o años. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede usarse mediante administración con menos frecuencia en comparación con la frecuencia de administración de otro agente. En algunas realizaciones, el tiempo total del régimen de tratamiento con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser menor en comparación con el tiempo total del régimen de tratamiento con otro agente.
En los casos en los que se han establecido dosis para seres humanos de los compuestos para al menos alguna afección, se pueden utilizar estas mismas dosis, o dosis que estén comprendidas entre aproximadamente un 0,1% y un 500%, más preferentemente entre aproximadamente un 25% y un 250% de la dosis establecida para seres humanos. Cuando no se han establecido dosis para seres humanos, como será el caso para composiciones farmacéuticas recientemente descubiertas, se puede inferir una dosis adecuada para seres humanos a partir de los valores de DE50 o DI50, u otros valores adecuados derivados de estudios in vivo o in vitro, que se cualifican mediante estudios de toxicidad y estudios de eficacia en animales.
En casos de administración de una sal farmacéuticamente aceptable, las dosis se pueden calcular como la base libre. Como sobreentenderán los expertos en la técnica, en ciertas situaciones puede ser necesario administrar los compuestos divulgados en esta invención en cantidades que excedan, o incluso que excedan en gran medida, el intervalo de dosis preferido mencionado anteriormente con el fin de tratar de forma eficaz y agresiva infecciones o enfermedades particularmente agresivas.
La cantidad y el intervalo de la dosis se pueden ajustar de forma individual para proporcionar unos niveles en plasma del resto activo que sean suficientes para mantener los efectos moduladores o una concentración mínima eficaz (MEC). La MEC variará para cada compuesto, pero se puede estimar a partir de datos in vitro. Las dosis necesarias para conseguir la MEC dependerán de las características del individuo y la vía de administración. A pesar de ello, se pueden utilizar ensayos de HPLC o bioensayos para determinar las concentraciones en plasma. Los intervalos de la dosis también se pueden determinar utilizando el valor de MEC. Las composiciones se deben administrar utilizando un régimen que mantenga los niveles en plasma por encima de la MEC durante un 10-90% del tiempo, preferentemente entre un 30-90% y de la forma más preferida entre un 50-90%. En casos de administración local o captación selectiva, puede ser que la concentración local eficaz del fármaco no esté relacionada con la concentración en plasma.
Cabe destacar que el médico responsable sabrá cómo y cuándo terminar, interrumpir o ajustar la administración debido a toxicidad o disfunciones de los órganos. A la inversa, el médico responsable también sabrá ajustar el tratamiento a niveles más elevados si la respuesta clínica no fuera adecuada (excluyendo la toxicidad). La magnitud de una dosis administrada en la gestión del trastorno de interés variará según la gravedad de la afección que se ha de tratar y la vía de administración. La gravedad de la afección se puede evaluar, por ejemplo, en parte, mediante procedimientos de evaluación de pronóstico estándar. Además, la dosis y quizás la frecuencia de la dosis también variarán según la edad, el peso corporal y la respuesta del paciente individual. En medicina veterinaria, se puede utilizar un programa comparable al expuesto anteriormente.
Los compuestos divulgados en esta invención se pueden evaluar para determinar su eficacia y toxicidad utilizando procedimientos conocidos. Por ejemplo, la toxicología de un compuesto particular, o de un subconjunto de los compuestos, que comparten ciertos restos químicos, se puede establecer determinando la toxicidad in vitro respecto a una línea celular, tal como una línea celular de mamífero y preferentemente de ser humano. Los resultados de tales estudios son a menudo predictivos de la toxicidad en animales tales como mamíferos o, más específicamente, seres humanos. Como alternativa, la toxicidad de compuestos particulares en un modelo animal tal como con ratones, ratas, conejos o monos, se puede determinar utilizando procedimientos conocidos. La eficacia de un compuesto particular se puede establecer utilizando varios procedimientos reconocidos tales como procedimientos in vitro, modelos animales o ensayos clínicos con seres humanos. A la hora de seleccionar un modelo para determinar la eficacia, el experto se puede guiar por el estado de la técnica para elegir un modelo, dosis, vía de administración y/o régimen que sean adecuados.
Tal como se describe en esta invención, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener uno o más restos que neutralizan la carga del fosfato o tiofosfato. Al neutralizar la carga en el fosfato o tiofosfato, se puede facilitar la penetración de la membrana celular como resultado del aumento de lipofilicidad del compuesto. Una vez absorbidos y tomados dentro de la célula, los grupos unidos al fósforo pueden eliminarse fácilmente mediante esterasas, proteasas y/u otras enzimas. En algunas realizaciones, los grupos unidos al fósforo pueden eliminarse mediante hidrólisis simple. Dentro de la célula, el fosfato así liberado puede entonces ser metabolizado por enzimas celulares al difosfato o al trifosfato activo. Del mismo modo, el tiofosfato puede metabolizarse al alfa-tiodifosfato o al alfa-tiotrifosfato. Además, en algunas realizaciones, variar los sustituyentes en un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ayudar a mantener la eficacia de dicho compuesto al reducir los efectos no deseados, tal como la isomerización.
En algunas realizaciones, la fosforilación de un tiomonofosfato de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser estereoselectiva. Por ejemplo, un tiomonofosfato de un compuesto de Fórmula (I) puede fosforilarse para proporcionar un alfa-tiodifosfato y/o un compuesto de alfa-tiotrifosfato que puede enriquecerse en el diastereómero (R) o (S) con respecto al átomo 5'-O-fosforo. Por ejemplo, una de las configuraciones (R) y (S) con respecto al átomo 5'-O-fosforo del compuesto alfa-tiodifosfato y/o alfa-tiotrifosfato puede estar presente en una cantidad > 50%, > 75%, > 90%, > 95% o > 99% en comparación con la cantidad del otro de las configuraciones (R) o (S) con respecto al átomo 5'-O-fosforo. En algunas realizaciones, la fosforilación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede dar como resultado la formación de un compuesto que tiene la configuración (R) en el átomo 5'-O-fosforo. En algunas realizaciones, la fosforilación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede dar como resultado la formación de un compuesto que tiene la configuración (S) en el átomo 5'-O-fosforo.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede actuar como un terminador de cadena de la síntesis de ARN. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula (I) pueden contener un resto en la posición 2'-carbono de modo que una vez que el compuesto se incorpora a una cadena de ARN, no se observa que se produzca ningún alargamiento adicional. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede contener una modificación de 2’-carbono no hidrogenada tal como un alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, un alquenilo C2-6 opcionalmente sustituido o un alquinilo C2-6 opcionalmente sustituido.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener una mayor estabilidad metabólica y/o plasmática. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede ser más resistente a la hidrólisis y/o más resistente a las transformaciones enzimáticas. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener una mayor estabilidad metabólica, una mayor estabilidad plasmática, puede ser más resistente a la hidrólisis y/o puede ser más resistente a las transformaciones enzimáticas en comparación con un compuesto que es idéntico en estructura, pero por tener O1 como OH, RA, R2A, R5A, Ra1 y Ra2 son cada uno hidrógeno y R3A y R4A son cada uno OH. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener propiedades no probadas. Una lista no taxativa de ejemplos de propiedades incluyen, sin carácter limitante, mayor semivida biológica, mayor biodisponibilidad, aumento de potencia, una respuesta in vivo sostenida, mayores intervalos de dosificación, menores cantidades de dosificación, menor citotoxicidad, reducción en las cantidades requeridas para tratar afecciones de la enfermedad, reducción en la carga viral, reducción en el tiempo hasta la seroconversión (es decir, el virus se vuelve indetectable en el suero del paciente), mayor respuesta viral sostenida, reducción de la morbilidad o mortalidad en los resultados clínicos, mayor cumplimiento por parte del sujeto, disminución de las afecciones hepáticas (tal como fibrosis hepática, cirrosis hepática y/o cáncer hepático) y compatibilidad con otros medicamentos. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener una semivida biológica de más de 24 horas. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener una semivida biológica mayor que un compuesto que es idéntico en estructura, pero para tener O1 como OH, RA, R2A, R5A, Ra1 y Ra2 son cada uno hidrógeno y R3A y R4A son cada uno OH. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede tener una actividad antiviral más potente en comparación con un compuesto que es idéntico en estructura, pero para tener O1 como OH, RA, R2A, R5A, Ra1 y Ra2 son cada uno hidrógeno y R3A y R4A son cada uno OH.
Además, en algunas realizaciones, la presencia de uno o más restos que neutralizan la carga del fosfato o tiofosfato puede aumentar la estabilidad del compuesto al inhibir su degradación. Además, en algunas realizaciones, la presencia de uno o más restos que neutralizan la carga del fosfato o tiofosfato puede hacer que el compuesto sea más resistente a la escisión in vivo y proporcionar una eficacia prolongada y sostenida. En algunas realizaciones, un resto o restos que neutralizan la carga del fosfato o tiofosfato pueden facilitar la penetración de la membrana celular por un compuesto de Fórmula (I) al hacer que el compuesto sea más lipofílico. En algunas realizaciones, un resto o restos que neutralizan la carga del fosfato o tiofosfato pueden tener biodisponibilidad oral mejorada, estabilidad acuosa mejorada y/o riesgo reducido de toxicidad relacionada con el subproducto. En algunas realizaciones, para fines de comparación, un compuesto de Fórmula (I) se puede comparar con un compuesto que es idéntico en estructura, pero para tener O1 como OH, RA, R2A, R5A, Ra1 y Ra2 son cada uno hidrógeno y R3A y R4A son cada uno OH.
Terapias de combinación
En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se pueden usar en combinación con uno o más agentes adicionales para tratar, mejorar y/o inhibir una infección viral por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o Bunyaviridae.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede usar por administración con uno o más agentes adicionales conjuntamente en una única composición farmacéutica. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar con uno o más agentes adicionales como dos o más composiciones farmacéuticas separadas. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar en una composición farmacéutica y al menos uno de los agentes adicionales se puede administrar en una segunda composición farmacéutica. Si hay al menos dos agentes adicionales, uno o más de los agentes adicionales pueden estar en una primera composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y al menos uno de los demás agentes adicionales puede estar en una segunda composición farmacéutica.
La(s) cantidad(es) de dosificación y programa(s) de dosificación cuando se usa un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes adicionales están dentro del conocimiento de los expertos en la materia. El orden de administración de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, con uno o más agentes adicionales puede variar. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar antes de todos los agentes adicionales. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar antes de al menos un agente adicional. En aun otras realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar de forma concomitante con uno o más agentes adicionales. En aun otras realizaciones más, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar de forma posterior a la administración de al menos un agente adicional. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, se puede administrar después de la administración de al menos un agente adicional.
En algunas realizaciones, la combinación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en combinación con uno o más agentes adicionales puede dar como resultado un efecto aditivo. En algunas realizaciones, la combinación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, utilizado en combinación con uno o más agentes adicionales puede dar como resultado un efecto sinérgico. En algunas realizaciones, la combinación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, utilizado en combinación con uno o más agentes adicionales puede dar como resultado un efecto fuertemente sinérgico. En algunas realizaciones, la combinación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en combinación con uno o más agentes adicionales no es antagonista.
Tal como se usa en esta invención, el término "antagonista" significa que la actividad de la combinación de compuestos es menor en comparación con la suma de las actividades de los compuestos en combinación cuando la actividad de cada compuesto se determina individualmente (es decir, como un único compuesto). Tal como se usa en esta invención, el término "efecto sinérgico" significa que la actividad de la combinación de compuestos es mayor que la suma de las actividades individuales de los compuestos en la combinación cuando la actividad de cada compuesto se determina individualmente. Tal como se usa en esta invención, el término "efecto aditivo" significa que la actividad de la combinación de compuestos es aproximadamente igual a la suma de las actividades individuales del compuesto en la combinación cuando la actividad de cada compuesto se determina individualmente.
Una ventaja potencial de utilizar un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en combinación con uno o más agentes adicionales puede ser una reducción en la cantidad requerida de uno o más agentes adicionales que son eficaces para tratar una afección de enfermedad descrita en esta invención (por ejemplo, una infección provocada por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o virus Bunyaviridae), en comparación con la cantidad requerida para lograr el mismo resultado terapéutico cuando se administran uno o más agentes adicionales sin un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Por ejemplo, para tratar MERS-CoV, la cantidad del agente adicional (incluida una sal farmacéuticamente aceptable de este) utilizado en combinación puede ser menor en comparación con la cantidad del agente adicional (incluida una sal farmacéuticamente aceptable de este) necesaria para lograr la misma reducción de carga viral cuando se administra como monoterapia. Otra ventaja potencial de utilizar un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en combinación con uno o más agentes adicionales es que el uso de dos o más compuestos que tienen un mecanismo de acción diferente puede crear una barrera más alta para el desarrollo de cepas virales resistentes en comparación con la barrera cuando un compuesto se administra como monoterapia.
Las ventajas adicionales de utilizar un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, en combinación con uno o más agentes adicionales pueden incluir poca o ninguna resistencia cruzada entre un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes adicionales de este; diferentes vías para la eliminación de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes adicionales; poca o ninguna toxicidades superpuestas entre un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes adicionales; poco o ningún efecto significativo sobre el citocromo P450; pocas o ninguna interacción farmacocinética entre un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes adicionales; mayor porcentaje de sujetos que logran una respuesta viral sostenida en comparación con cuando se administra un compuesto en monoterapia y/o una disminución en el tiempo de tratamiento para lograr una respuesta viral sostenida en comparación con cuando un compuesto se administra en monoterapia.
Para tratar una infección provocada por Coronaviridae, Togaviridae, Hepeviridae y/o Bunyaviridae, se describen en esta invención ejemplos de agentes adicionales que se pueden usar en combinación con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Un ejemplo de un compuesto que se puede usar en combinación con un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica que incluye un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para tratar un coronavirus (tal como MERS-CoV) es K22 ((Z)-N- (3-(4-(4-bromofenil)-4-hidroxipiperidin-1-il)-3-oxo-1-fenilprop-1-en-2-il)benzamida). Los compuestos que se pueden usar en combinación para el tratamiento de MERS-CoV incluyen un interferón (por ejemplo, tratamiento con interferón alfa 2b y/o IFNp), ribavirina y SB203580 (InvivoGen, 4-(4'Fluorofenil)-2-(4'-metilsulfinilfenil)-5-(4'-piridil)-imidazol). Un candidato para tratar el CHIKV que se puede usar en combinación es la cloroquina.
Compuestos
Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en la mejora o tratamiento de una infección viral, donde el compuesto de Fórmula (I) tiene la estructura: donde: B1A
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( I )
donde RG2 es un alquilo C1-6 no sustituido; R3A puede seleccionarse de halo, OH, -OC(=O)R"A y un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido, R4A puede seleccionarse de OH o halo; Ra1 y Ra2 pueden ser independientemente hidrógeno o deuterio; RA puede ser hidrógeno o deuterio; R1A puede seleccionarse de hidrógeno,,
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R2A puede ser halo o halógeno -(CH2)1-6; R5A puede seleccionarse de un alquilo C1-6 no sustituido, un alquenilo C2-6 no sustituido y un alquinilo C2-6 no sustituido; R6A y R7A y R8A pueden seleccionarse independientemente de ausente, hidró eno
Figure imgf000025_0003
y R7A puede estar ausente o ser hidrógeno; R8A está ausente, hidrógeno, un fenilo opcionalmente sustituido o un naftilo opcionalmente sustituido; R9A puede ser un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido que se selecciona del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N; R10A y R11A pueden ser independientemente un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, unida a N treonina, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N; R12A y R13A pueden estar independientemente ausentes o ser hidrógeno; R14A puede ser O-, OH o metilo; R22A y R23A son cada uno hidrógeno; R24A se selecciona de hidrógeno, un alquilo C1-24 no sustituido y un alquilo -O-C1-24 no sustituido; R"A es un alquilo C1-24 no sustituido; m es 0 o 1; s es 0; y Z1A, Z2A, Z3A y Z4A son cada uno oxígeno (O); donde la infección viral es causada por un virus que se selecciona del grupo que consiste en un virus Coronaviridae, un virus Togaviridae, un virus Hepeviridae y un virus Bunyaviridae; y
cuando un grupo es descrito como siendo opcionalmente sustituido, ese grupo puede ser no sustituido o sustituido con uno o más grupos seleccionados independientemente de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aril(alquilo), heteroaril(alquilo), heterociclil(alquilo), hidroxi, alcoxi, acilo, ciano, halógeno, tiocarbonilo, O-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, N-tiocarbamilo, C-amido, N-amido, S-sulfonamido, N-sulfonamido, C-carboxi, O-carboxi, isocianato, tiocianato, isotiocianato, azido, nitro, sililo, sulfenilo, sulfinilo, sulfonilo, haloalquilo, haloalcoxi, trihalometanosulfonilo, trihalometanosulfonamido, un amino, un grupo amino monosustituido y un grupo amino disustituido.
Un compuesto de Fórmula (I) puede ser un nucleósido, un nucleótido (que incluye un monofosfato, un difosfato, un trifosfato, tioaminofosfato, alfa-tiodifosfato y/o alfa-tiotrifosfato) o un profármaco de nucleótido. En algunas realizaciones,......... pueden estar ausentes, Z1 puede estar ausente, O1 puede ser OR1A, R3A puede seleccionarse de halo, OH,-OC(=O)R "A y un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido, R4A puede seleccionarse de OH y halo.
Se pueden unir varios sustituyentes a la posición 5‘ de la Fórmula (I). En algunas realizaciones, R1A puede ser hidrógeno. En algunas realizaciones, tanto Ra1 como R32 pueden ser hidrógeno. En otras realizaciones, Ra1 puede ser hidrógeno y Ra2 puede ser deuterio. En otras realizaciones más, tanto Ra1 como Ra2 pueden ser deuterio.
En algunas realizaciones, R1A puede ser
Figure imgf000026_0001
En algunas realizaciones, R6A y R7A pueden ser ambos hidrógenos. En otras realizaciones, R6A y R7A pueden estar ambos ausentes. En otras realizaciones más, al menos uno de entre R6A y R7A puede estar ausente. En todavía otras realizaciones más, al menos uno de entre R6A y R7A puede ser hidrógeno. Los expertos en la técnica sobreentienden que, cuando R6A y/o R7A están ausentes, el o los oxígenos asociados tendrán una carga negativa. Por ejemplo, cuando R6A está ausente, el oxígeno asociado a R6A tendrá una carga negativa. En algunas realizaciones, R1A puede ser un monofosfato.
En algunas realizaciones, R1A puede ser
R6A0 —
OR7A ;
R6A puede ser
Figure imgf000027_0001
R7A puede estar ausente o ser hidrógeno; R12A y R13A pueden independientemente estar ausentes o ser hidrógeno; R14A puede ser O-, OH o metilo; y m puede ser 0 o 1. En algunas realizaciones, m puede ser 0, y R7A, R12A y R13A pueden independientemente estar ausentes o ser hidrógeno. En algunas realizaciones, m puede ser 1, y R7A, R12A y R13A pueden independientemente estar ausentes o ser hidrógeno; y R14A puede ser O-, OH o metilo. En algunas realizaciones, m puede ser 1, y R7A, R12A y R13A pueden independientemente estar ausentes o ser hidrógeno; y R14A puede ser O- u Oh . En otras realizaciones, m puede ser 1, y R7A, R12A y R13A pueden independientemente estar ausentes o ser hidrógeno; y R14A puede ser metilo. Los expertos en la materia entienden que cuando m es 0, R6A es un difosfato. Del mismo modo, los expertos en la materia entienden que cuando m es 1, R6A es un trifosfato.
En algunas realizaciones, cuando R1A es
Figure imgf000027_0005
y el otro de R6A y R7A se puede seleccionar de entre ausente e hidrógeno.
En algunas realizaciones, tanto R6A como R7A pueden ser
Figure imgf000027_0002
En algunas realizaciones, R24A puede ser un alquilo C1-24 no sustituido. En algunas realizaciones, R24A puede ser un alquilo C1-4 no sustituido. En algunas realizaciones, R24A puede ser un alquilo -O-C1-4 no sustituido. En algunas realizaciones, R6A y R7A pueden ser ambos un grupo isopropiloxicarboniloximetilo (POC) y formar un profármaco bis(isopropiloxicarboniloximetilo) (bis(POC)) no sustituido.
En algunas realizaciones, R6A y R7A pueden ser iguales. En algunas realizaciones, R6A y R7A pueden ser diferentes. En algunas realizaciones, R1A puede ser
Figure imgf000027_0003
En algunas realizaciones, R8A puede estar ausente o ser hidrógeno; y R9A puede ser un a-aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido o un derivado de éster de un a-aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido. En otras realizaciones, R8A puede ser un fenil opcionalmente sustituido o un naftnil opcionalmente sustituido; y R9A puede ser un a-aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido o un derivado de éster de un a-aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido. En algunas realizaciones, R9A se puede seleccionar entre alanina, asparagina, aspartato, cisteína, glutamato, glutamina, glicina, prolina, serina, tirosina, arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano, valina y derivados de tipo éster de estos. Los ejemplos de un derivado de éster de aaminoácido unido a N opcionalmente sustituido incluyen versiones opcionalmente sustituidas de las siguientes: Éster isopropílico de N-alanina, éster ciclohexílico de N-alanina, éster neopentílico de N-alanina, éster isopropílico de N-valina y éster isopropílico de N-leucina.
En algunas realizaciones, cuando R1A es
R8A0 —
Figure imgf000027_0004
un compuesto de Fórmula (I) puede ser un profármaco de fosforoamidato tal como un profármaco de tipo arilfosforamidato opcionalmente sustituido.
En algunas realizaciones, R1A puede ser
Figure imgf000028_0001
En algunas realizaciones, R10A y R11A pueden ser ambos un aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido o un derivado de éster de un aminoácido conectado a N opcionalmente sustituido. En algunas realizaciones, R10A y R11A se pueden seleccionar independientemente entre alanina, asparagina, aspartato, cisteína, glutamato, glutamina, glicina, prolina, serina, tirosina, arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano, valina y derivados de tipo éster de estos. En algunas realizaciones, R10A y R11A pueden ser una versión opcionalmente sustituida de lo siguiente: Éster isopropílico de N-alanina, éster ciclohexílico de N-alanina, éster neopentílico de N-alanina, éster isopropílico de N-valina y éster isopropílico de N-leucina. Los ejemplos de grupos R9A, R10A y R11A adecuados incluyen los siguientes:
Figure imgf000028_0002
En algunas realizaciones, R10A y R11A pueden ser iguales. En algunas realizaciones, R10A y R11A pueden ser diferentes. En algunas realizaciones, cuando R1A es
y3 A
R 10 A _ p ------1
I ?
R11a
un compuesto de Fórmula (I) puede ser un profármaco de diamida fosfónica opcionalmente sustituido.
En la posición 4’ del anillo de pentosa puede haber varios sustituyentes presentes. En otras realizaciones más, R2A puede ser un haloalquilo. Ejemplos de haloalquilos son -(CH2)1-6 halógeno, -(CH2)0-5(CH)(halógeno)2 y -(CH2)0-5-C(halógeno)3, -CHF2 y CF3. En algunas realizaciones, el haloalquilo puede ser -(CH2)1-6F o -(CH2)1-6Cl. En algunas realizaciones, el haloalquilo puede ser fluorometilo. En otras realizaciones, R2A puede ser CHF2. En otras realizaciones, R2A puede ser -CF3. En otras realizaciones, R2A puede ser halo. Por ejemplo, R2A puede ser fluoro (F) o cloro (Cl). En la posición 2’ del anillo de pentosa también puede haber varios sustituyentes presentes. En algunas realizaciones, R4A puede ser OH. En otras realizaciones, R4A puede ser halo. En algunas realizaciones, R4A puede ser F. En otras realizaciones, R4A puede ser Cl.
En algunas realizaciones, R5A puede ser un alquilo C1-6 no sustituido. Por ejemplo, R5A puede ser una versión no sustituida de lo siguiente: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, terc-butilo, pentilo (ramificado o recto) y hexilo (ramificado o recto). En otras realizaciones más, R5A puede ser un alquenilo C2-6 no sustituido. En algunas realizaciones, R5A puede ser un alquinilo C2-6 no sustituido. Por ejemplo, R5A puede ser etinilo.
La posición 3’ puede tener varios grupos presentes. En otras realizaciones, R3A puede ser halo. Por ejemplo, R3A puede ser fluoro (F) o cloro (Cl). En otras realizaciones, R3A puede ser OH. En otras realizaciones más, R3A puede ser -OC(=O)R”A donde R”A puede ser un alquilo C1-24 no sustituido. En otras realizaciones más, R3A puede ser -OC(=O)R”A donde R”A puede ser un alquilo C1-4 no sustituido. En otras realizaciones, R3A puede ser un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido, tal como un alfa-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido. El a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido puede tener la estructura:
Figure imgf000028_0003
donde R44A se puede seleccionar de entre hidrógeno, un alquilo Ci-6 opcionalmente sustituido, un haloalquilo Ci-6 opcionalmente sustituido, un cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un arilo C6 opcionalmente sustituido, un arilo C10 opcionalmente sustituido y un aril(alquilo C1-6) opcionalmente sustituido; y R45A puede ser hidrógeno o un alquilo C1-4 opcionalmente sustituido; o R44A y R45A se pueden considerar conjuntamente para formar un cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido.
Cuando R44A está sustituido, R44A puede estar sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre N-amido, mercapto, alquiltio, un arilo opcionalmente sustituido, hidroxi, un heteroarilo opcionalmente sustituido, O-carboxi y amino. En algunas realizaciones, R44A puede ser un alquilo C1-6 no sustituido tal como los que se describen en esta invención. En algunas realizaciones, R44A puede ser hidrógeno. En otras realizaciones, R44A puede ser metilo. En algunas realizaciones, R45A puede ser hidrógeno. En otras realizaciones, R45A puede ser un alquilo C1-4 opcionalmente sustituido tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo y terc-butilo. En otras realizaciones, R45A puede ser metilo. Dependiendo de los grupos que se seleccionan para R44A y R45A, el carbono al cual están unidos R44A y R45A puede ser un centro quiral. En algunas realizaciones, el carbono al cual están unidos R44A y R45A puede ser un centro quiral (R). En otras realizaciones, el carbono al cual están unidos R44A y R45A puede ser un centro quiral (S).
Los ejemplos de grupos
Figure imgf000029_0001
adecuados inclu en los si uientes:
Figure imgf000029_0002
En otras realizaciones, R2A puede ser fluoro y R3A puede ser flouro. En otras realizaciones, R2A puede ser fluoro y R4A puede ser flouro. En algunas realizaciones, R2A puede ser fluoro, R3A puede ser fluoro y R5A puede ser un alquilo C1-6 no sustituido, un alquenilo C2-6 no sustituido y un alquinilo C2-6 no sustituido. En algunas realizaciones, R2A puede ser fluoro, R4A puede ser fluoro y R5A puede ser un alquilo C1-6 no sustituido, un alquenilo C2-6 no sustituido y un alquinilo C2-6 no sustituido. En algunas realizaciones, R2A puede ser fluoro, R3A puede ser OH u -OC(=O)R”A y R4A puede ser fluoro. En algunas realizaciones, R2A puede ser *-(CH2)1-6halógeno (por ejemplo, -CH2F), R3A puede ser OH, -OC(=O)R”A o un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido y R4A puede ser OH. En algunas realizaciones, R2A puede ser -(CH2)1-6halógeno (por ejemplo, -CH2F), R3A puede ser OH, -OC(=O)R ”A o un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido, R4A puede ser OH y R5A puede ser un alquilo C1-6 no sustituido.
En la posición 1 ’ del anillo de pentosa puede haber varios sustituyentes presentes. En algunas realizaciones, RA puede ser hidrógeno. En algunas realizaciones, RA puede ser deuterio.
En algunas realizaciones, B1A puede ser una base de purina opcionalmente sustituido. En algunas realizaciones, B1A puede ser
Figure imgf000029_0003
En algunas realizaciones, B1A puede ser
Figure imgf000030_0001
En algunas realizaciones, R1A no es hidrógeno (H), por ejemplo, cuando R3A es halo (tal como fluoro) y R4A es OH. En al unas realizaciones, R1A no es
Figure imgf000030_0002
por ejemplo, cuando R4A es halo (tal como fluoro) y R3A es OH. En algunas realizaciones, R2A no es halógeno. En algunas realizaciones, R2A no es fluoro (F). En algunas realizaciones, R2A no es -CHF2. En algunas realizaciones, R2A no es -CF3. En algunas realizaciones, R4A no es halo. En algunas realizaciones, R4A no es fluoro (F). En algunas realizaciones, R4A no es cloro (Cl). En algunas realizaciones, R2A no es -(CH2)1-6 halógeno. En algunas realizaciones, R9A no es éster isopropílico de N-alanina. En algunas realizaciones, R5A no es un alquilo C1-6 no sustituido. Por ejemplo, R5A no es un alquilo C1-6 no sustituido, tal como metilo. En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmulas (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior, no es un compuesto en WO 2013/092481 (presentada el 17 de diciembre de 2012), U.S. 2014/0178338 (presentada el 17 de diciembre de 2013), U.S. 2013/0164261 (presentada el 20 de diciembre de 2012), WO 2014/100505 (presentada el 19 de diciembre de 2013), WO 2013/096679 (presentada el 20 de diciembre de 2012), WO 2013/142525 (presentada el 19 de marzo de 2013) y/o WO 2014/209983 (presentada el 24 de junio de 2014), WO 2014/209979 (presentada el 24 de junio de 2014) y/o U.S. 2015/0105341 (presentada el 9 de octubre de 2014), o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior.
Los ejemplos de compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, incluyen,sin carácter limitante:
Figure imgf000030_0003
Figure imgf000031_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior.
Ejemplos adicionales de compuestos de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, incluyen,sin carácter limitante:
Figure imgf000031_0002
Figure imgf000032_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de lo anterior.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede seleccionarse de entre:
Figure imgf000032_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede seleccionarse de entre:
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
los anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.
En algunas realizaciones, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, puede seleccionarse de entre:
Figure imgf000036_0001
Composiciones farmacéuticas
Algunas realizaciones descritas en esta invención se refieren a una composición farmacéutica, que puede incluir una cantidad eficaz de uno o más compuestos de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de esos, y un portador, diluyente, excipiente farmacéuticamente aceptable o una combinación de estos. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica puede incluir un único diastereómero de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, (por ejemplo, un único diastereómero está presente en la composición farmacéutica a una concentración mayor que 99% en comparación con la concentración total de los otros diastereómeros). En otras realizaciones, la composición farmacéutica puede incluir una mezcla de diastereómeros de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede incluir una concentración de un diastereómero de > 50%, > 60%, > 70%, > 80%, > 90%, > 95% o > 98%, en comparación con la concentración total de los otros diastereómeros. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica incluye una mezcla 1:1 de dos diastereómeros de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
La expresión «composición farmacéutica» se refiere a una mezcla de uno o más compuestos divulgados en esta invención con otros componentes químicos tales como diluyentes o portadores. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. Las composiciones farmacéuticas también se pueden obtener haciendo reaccionar los compuestos con ácidos orgánicos o inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido ptoluenosulfónico y ácido salicílico. Por lo general, las composiciones farmacéuticas se adaptarán a la vía de administración deseada específica. Una composición farmacéutica es adecuada para aplicaciones humanas y/o veterinarias.
La expresión «fisiológicamente aceptable» define un portador, diluyente o excipiente que no cancela la actividad biológica ni las propiedades del compuesto.
Un «portador», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un compuesto que facilita la incorporación de un compuesto en células o tejidos. Por ejemplo, sin limitación, el sulfóxido de dimetilo (DMSO) es un portador utilizado habitualmente que facilita la captación de muchos compuestos orgánicos en las células o tejidos de un sujeto.
Un «diluyente», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a un ingrediente en una composición farmacéutica que carece de actividad farmacológica pero que puede ser necesario o deseable desde un punto de vista farmacéutico. Por ejemplo, se puede utilizar un diluyente para incrementar el volumen de un fármaco potente cuya masa sea demasiado pequeña para su elaboración y/o administración. También podría ser un líquido para la disolución de un fármaco que se ha de administrar mediante inyección, ingesta o inhalación. Una forma habitual de diluyente en la técnica es una solución acuosa tamponada tal como, sin limitación, solución salina tamponada con fosfato que imita la composición de la sangre humana.
Un «excipiente», tal como se utiliza en esta invención, se refiere a una sustancia inerte que se añade a una composición farmacéutica para proporcionar, sin limitación, volumen, consistencia, estabilidad, capacidad de unión, lubricación, capacidad de desintegración, etc. a la composición. Un «diluyente» es un tipo de excipiente.
Las composiciones farmacéuticas descritas en esta invención se pueden administrar a un paciente humano per se o en composiciones farmacéuticas en las que se mezclan con otros principios activos, como en una terapia combinada, o portadores, diluyentes, excipientes o combinaciones de estos. Una formulación adecuada depende de la vía de administración seleccionada. Las técnicas para la formulación y administración de los compuestos descritos en esta invención son conocidas por los expertos en la técnica.
Las composiciones farmacéuticas divulgadas en la presente se pueden elaborar de un modo que es conocido de por sí, por ejemplo, mediante procesos convencionales de mezcla, disolución, granulación, elaboración de grageas, levigación, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o formación de comprimidos. Además, los principios activos están contenidos en una cantidad eficaz para conseguir su fin deseado. Muchos de los compuestos utilizados en las combinaciones farmacéuticas divulgadas en esta invención se pueden proporcionar como sales con contraiones farmacéuticamente compatibles.
En la técnica existen múltiples técnicas para administrar un compuesto que incluyen, sin carácter limitante, la vía oral, rectal, tópica, aerosol, inyección y suministro parenteral, que incluye inyecciones intramusculares, subcutáneas, intravenosas, intramedulares, intratecales, intraventriculares directas, intraperitoneales, intranasales e intraoculares.
También se puede administrar el compuesto de forma local en lugar de sistémica, por ejemplo, mediante la inyección del compuesto directamente en el área afectada, a menudo en una formulación de liberación sostenida o prolongada (depot). Además, se puede administrar el compuesto en un sistema de suministro farmacológico dirigido, por ejemplo, en un liposoma recubierto con un anticuerpo específico para un tejido. Los liposomas se dirigirán selectivamente al órgano y serán captados selectivamente por este.
Si se desea, las composiciones se pueden presentar en un envase o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas farmacológicas unitarias que contienen el principio activo. El envase puede comprender, por ejemplo, una lámina metálica o de plástico tal como un envase de tipo blíster. El envase o dispositivo dispensador puede venir acompañado de instrucciones de administración. El envase o dispensador también puede venir acompañado de una nota asociada con el paquete en una forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la elaboración, el uso o la venta de productos farmacéuticos, donde dicha nota refleja la autorización por parte de la agencia de la forma del fármaco para administración humana o veterinaria. Tal nota puede ser, por ejemplo, la etiqueta aprobada por la Administración de Fármacos y Alimentos de los Estados Unidos para fármacos recetados o el prospecto del producto aprobado. También se pueden preparar composiciones que pueden incluir un compuesto descrito en esta invención formulado en un portador farmacéutico compatible, se pueden colocar en un envase adecuado y se pueden etiquetar para el tratamiento de una afección indicada.
Síntesis
Los compuestos de Fórmula (I) y los que se describen en esta invención se pueden preparar de varias maneras. En esta invención, en los Esquemas 1, 2, 3 y 4 se muestran y describen rutas sintéticas generales para obtener los compuestos de Fórmula (I) y algunos ejemplos de materiales de partida utilizados para sintetizar los compuestos de Fórmula (I). Las rutas mostradas y descritas en esta invención son únicamente ilustrativas y no se pretende, ni se debe interpretar, que limiten el alcance de las reivindicaciones de ningún modo en absoluto. Los expertos en la técnica serán capaces de reconocer modificaciones de las síntesis divulgadas y diseñar rutas alternativas basándose en las divulgaciones de la presente; todas estas modificaciones y rutas alternativas se encuentran dentro del alcance de las reivindicaciones.
Los compuestos de Fórmula (I) se pueden preparar usando diversos procedimientos conocidos por los expertos en la materia. En los Esquemas 1, 2, 3 y 4 se muestran ejemplos de los procedimientos. Los precursores que contienen fósforo adecuados se pueden obtener de proveedores comerciales o se pueden preparar mediante procedimientos sintéticos conocidos por los expertos en la técnica. En los Esquemas 1, 2, 3 y 4 se muestran ejemplos de estructuras generales de precursores que contienen fósforo, e incluyen fosforocloridatos y tiofosforocloridatos. Los fosforocloridos y tiofosforocloruros adecuados están disponibles comercialmente y/o pueden prepararse sintéticamente.
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Tal como se muestra en el Esquema 1, los compuestos de la Fórmula (I), donde la posición 4'es un haloalquilo, se pueden preparar a partir de un nucleósido, por ejemplo, un nucleósido de la Fórmula (A). En el Esquema 1, Ra, R3A, R4A, R5A y B1A pueden ser los mismos que RA, R3A, R4A, R5A y B1A tal como se han descrito en esta invención para la Fórmula (I), y PG1 puede ser un grupo protector adecuado. Se puede formar un grupo hidroxialquilo en la posición 4’ del anillo de pentosa usando condiciones adecuadas conocidas por los expertos en la materia. Ejemplos de condiciones adecuadas para formar un hidroxialquilo incluyen el uso de formaldehído acuoso de ácido 2 yodoxibenzoico (IBX) y borohidruro de sodio. Un compuesto de la Fórmula (B) se puede transformar en un haloalquilo usando uno o más agentes adecuados, por ejemplo, en un yoduro usando imidazol, trifenilfosfina y yodo; en un fluoro usando trifluoruro de dietilaminosulfuro (DAST); o en un cloro usando trifenilfosfina y tetracloruro de carbono en dicloroetileno (DCE).
Figure imgf000038_0001
Los compuestos de Fórmula (I), donde R2A es un azidoalquilo C1-6, se pueden preparar a partir de un nucleósido, por ejemplo, un nucleósido de Fórmula (A). En el Esquema 2, Ra, R3A, R4A, R5A y B1A pueden ser los mismos que RA, R3A, R4A, R5A y B1A tal como se han descrito en esta invención para la Fórmula (I), PG2 puede ser un grupo protector adecuado y LG2 puede ser un grupo saliente adecuado. La posición 5’ del nucleósido se puede oxidar para obtener un aldehido utilizando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Las condiciones de oxidación adecuadas incluyen, sin carácter limitante, una oxidación de Moffatt, oxidación de Swern y oxidación de Corey-Kim; y los agentes oxidantes adecuados incluyen, sin carácter limitante, el peryodinano de Dess-Martin, IBX (ácido 2-yodoxibenzoico), TPAP/NMO (perrutenato de tetrapropilamonio/N-óxido de N-metilmorfolina), reactivo de la oxidación de Swern, PCC (clorocromato de piridinio), PDC (dicromato de piridinio), peryodato de sodio, reactivo de Collin, nitrato de amonio cérico CAN, Na2Cr2O7 en agua, Ag2CO3 en celite, HNO3 caliente en dimetoxietano acuoso, O2-piridina CuCl, Pb(OAc)4-piridina y peróxido de benzoílo-NiBr2. Se puede añadir un grupo hidroximetilo a la posición 4’ del anillo de pentosa junto con la reducción del aldehido hasta obtener un alcohol. El grupo hidroximetilo se puede añadir mediante una reacción de condensación utilizando formaldehído y una base tal como hidróxido de sodio. Después de la adición del grupo hidroximetilo, se puede llevar a cabo una reducción del compuesto intermedio con un grupo 4’-hidroximetilo utilizando un agente reductor. Los ejemplos de agentes reductores adecuados incluyen, sin carácter limitante, NaBH4 y LiAlH4. Se puede formar un grupo saliente adecuado, tal como un triflato, reemplazando el hidrógeno del grupo hidroximetilo unido a la posición 4’, y se puede proteger el oxigeno unido a la posición 5’ con un grupo protector adecuado (por ejemplo, mediante una ciclación con la base, B1A, o con un grupo protector diferente). El grupo saliente se puede reemplazar por un grupo azido utilizando un reactivo que sea una ácida de un metal, por ejemplo, azida sódica. Un azidoalquilo C1-6 en la posición 4’ se puede reducir para obtener un aminoalquilo C1-6. Se pueden utilizar varios agentes de reducción/condiciones que son conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el grupo azido se puede reducir para obtener un grupo amino mediante una hidrogenación (por ejemplo, H2-Pd/C o HCO2NH4-Pd/C), reacción de Staudinger, NaBH4/CoC^6 H2O, Fe/NH4Cl o Zn/NH4Cl.
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Los compuestos de Fórmula (I) que tienen un grupo que contiene fósforo unido a la posición 5’ del anillo de pentosa se pueden preparar utilizando varios procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. En los Esquemas 3 y 4 se muestran ejemplos de los procedimientos. En los Esquemas 3 y 4, Ra, R2A, R3A, R4A, R5A y B1A pueden ser los mismos que RA, R2A, R3A, R4A, R5A y B1A tal como se han descrito en la presente para la Fórmula (I). Se puede acoplar un precursor que contenga fósforo al nucleósido, por ejemplo, un compuesto de Fórmula (B). Tras el acoplamiento del precursor que contiene fósforo, cualesquiera grupos salientes se pueden escindir en condiciones adecuadas tales como una hidrólisis. Se pueden añadir otros grupos que contengan fósforo utilizando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, utilizando un pirofosfato. Si se desea, se pueden usar una o más bases durante la adición de cada grupo que contiene fósforo. En esta invención se describen ejemplos de bases adecuadas.
En algunas realizaciones, se puede generar un alcóxido a partir de un compuesto de Fórmula (C) utilizando un reactivo organometálico tal como un reactivo de Grignard. El alcóxido se puede acoplar al precursor que contiene fósforo. Los reactivos de Grignard adecuados son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen, sin carácter limitante, cloruros de alquilmagnesio y bromuros de alquilmagnesio. En algunas realizaciones, se puede utilizar una base adecuada. Los ejemplos de bases adecuadas incluyen, sin carácter limitante, una base de tipo amina tal como una alquilamina (incluidas las mono-, di- y trialquilaminas (por ejemplo, trietilamina)), opcionalmente piridinas sustituidas (por ejemplo, colidina) e imidazoles opcionalmente sustituidos (por ejemplo, N-metilimidazol)). Como alternativa, se puede añadir un precursor que contenga fósforo al nucleósido y formar un fosfito. El fosfito se puede oxidar para obtener un fosfato utilizando condiciones conocidas por los expertos en la técnica. Las condiciones adecuadas incluyen, sin carácter limitante, ácido meta-cloroperoxibenzoico (MCPBA) y yodo como agente oxidante y agua como dador de oxígeno.
Cuando en los compuestos de Fórmula (I) Z1A, Z2A o Z3A es azufre, el azufre se puede añadir de varias maneras conocidas por los expertos en la técnica. En algunas realizaciones, el azufre puede formar parte del precursor que contiene fósforo, por eemplo,
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Como alternativa, el azufre se puede añadir utilizando un reactivo de sulfurización. Los agentes de sulfurización adecuados son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen, sin carácter limitante, azufre elemental, reactivo de Lawesson, ciclooctaazufre, 1,1 -dióxido de 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (reactivo de Beaucage), 3-((N,N-dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazol-5-tiona (DDTT) y tetrasulfuro de bis(3-trietoxisilil)propilo (TEST).
Tal como se describe en esta invención, R3A y R4A pueden ser cada uno un átomo de oxígeno, donde los átomos de oxígeno están unidos entre sí por un grupo carbonilo. El grupo -O-C(=O)-O- se puede formar usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I), donde R3A y R4A son ambos grupos hidroxi, se puede tratar con 1,1'-carbonildiimidazol (CDI).
En algunas realizaciones, la posición 2’ y/o la posición 3' del anillo de pentosa pueden tener un grupo -O-acilo opcionalmente sustituido unido, por ejemplo, -OC(=O)R”A. El grupo -O-acilo opcionalmente sustituido puede formarse en la posición 2’ y/o 3' usando diversos procedimientos conocidos por los expertos en la materia. A modo de ejemplo, un compuesto de Fórmulas (I), donde la posición 2’ y la posición 3' tienen cada una un grupo hidroxi unido, se puede tratar con un anhídrido alquilo (por ejemplo, anhídrido acético y anhídrido propiónico) o un cloruro de ácido alquilo (por ejemplo, cloruro de acetilo). Si se desea, se puede usar un catalizador para facilitar la reacción. Un ejemplo de catalizador adecuado es 4-dimetilaminopiridina (DMAP). De manera alternativa, los grupos -O-acilo opcionalmente sustituidos se pueden formar en las posiciones 2'- y 3' haciendo reaccionar un ácido alquilo (por ejemplo, ácido acético y ácido propiónico) en presencia de una carbodiimida o un reactivo de acoplamiento. Los ejemplos de carbodiimidas incluyen, sin carácter limitante, N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC) y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC).
Para reducir la formación de productos secundarios, uno o más grupos unidos al anillo de pentosa pueden protegerse con uno o más grupos protectores adecuados y/o cualquier grupo -NH y/o NH 2 presente en el B1A, pueden protegerse con uno o más grupos protectores adecuados. Como ejemplo, si la posición 2’ y/o la posición 3' es/son grupos hidroxilo, los grupos hidroxilo pueden protegerse con grupos protectores adecuados, tales como grupos triarilmetilo y/o sililo. Los ejemplos de grupos triarilmetilo incluyen, sin carácter limitante, tritilo, monometoxitritilo (MMTr), 4,4'-dimetoxitritilo (DMTr), 4,4',4”-trimetoxitritilo (TMTr), 4,4',4”-tris(benzoiloxi)tritilo (TBTr), 4,4',4”-tris(4,5-dicloroftalimido)tritilo (CPTr), 4,4',4”-tris(levuliniloxi)tritilo (TLTr), p-anisil-1-naftilfenilmetilo, di-o-anisil-1 -naftilmetilo, p-tolildifenilmetilo, 3-(imidazolilmetil)-4,4'-dimetoxitritilo, 9-fenilxanten-9-ilo(Pixilo), 9-(p-metoxifenil) xanten-9-ilo(Mox), 4-deciloxitritilo, 4-hexadeciloxitritilo, 4,4'-dioctadeciltritilo, 9-(4-octadeciloxifenil)xanten-9-ilo, 1,1'-bis-(4-metoxifenil)-1 '-pirenilmetilo, 4,4',4”-tris(terc-butilfenil)metilo (TTTr) y 4,4'-di-3,5-hexadienoxitritilo. Ejemplos de grupos sililo adecuados son descritos en esta invención e incluyen trimetilsililo (TMS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsililo (TIPS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), tri-iso-propilsililoximetilo y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo. De manera alternativa, R3A y/o R4A pueden protegerse mediante un único grupo protector quiral o aquiral, por ejemplo, mediante la formación de un ortoéster, un acetal cíclico o un cetal cíclico. Ortoésteres adecuados incluyen acetal de metoximetileno, acetal de etoximetileno, ortoéster de 2-oxaciclopentilida, ortoéster de dimetoximetileno, ortoéster de 1 -metoxietilideno, ortoéster de 1-etoxietilideno, ortoéster de metilideno, ortoéster de ftálido 1,2-dimetoxietilideno y ortoéster de alfametoxibencilideno; los acetales cíclicos adecuados incluyen acetal de metileno, acetal de etilideno, acetal de tbutilmetilideno, acetal de 3-(benciloxi)propilo, acetal de bencilideno, acetal de 3,4-dimetoxibencilideno y acetal de pacetoxibencilideno; y los cetales cíclicos adecuados incluyen cetal de 1 -t-butiletilideno, cetal de 1 -feniletilideno, cetal de isopropilideno, cetal de ciclopentilideno, cetal de ciclohexilideno, cetal de cicloheptilidina y cetal de 1-(4-metoxifenil)etilideno.
EJEMPLOS
En los siguientes ejemplos, se describen realizaciones adicionales con más detalle, las cuales no pretenden limitar de ningún modo el alcance de las reivindicaciones.
EJEMPLO DE REFERENCIA 1
COMPUESTO 1
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A una solución de 1-1 (100,0 g, 378,7 mmol) en piridina (750 mL), se añadió DMTrCI (164,9 g, 487,8 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. Se añadió MeOH (300 mL) y la mezcla se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se disolvió en EA y se lavó con agua. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró. El residuo se disolvió en DCM (500 mL). A esta solución se le añadió imidazol (44,3 g, 650,4 mmol y TBSCl (91,9 g, 609,8 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 14 h. La solución se lavó con NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a para obtener el producto bruto como un sólido amarillo. El producto bruto (236,4 g, 347,6 mmol) se disolvió en solución acuosa de HOAc al 80% (500 mL). La mezcla se agitó durante 15 h a TA. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con una solución de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1-2% MeOH en DCM) para proporcionar 1-2 (131,2 g, 91,9%) como un sólido amarillo claro. ESI-MS: m/z 802 [M+H]+.
A una solución de 1-2 (131,2 g, 346,9 mmol) en CH3CN anhidro (1200 mL), se añadió IBX (121,2 mL, 432,8 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 3 h y a continuación se enfrió a 0 °C. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar el aldehido bruto (121,3 g) como un sólido amarillo. El aldehido se disolvió en 1,4-dioxano (1000 mL). Se añadieron CH2O al 37% (81,1 mL, 1,35 mmol) y solución acuosa de NaOH 2M (253,8 mL, 507,6 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 2 h y a continuación se neutralizó con AcOH a pH = 7. A la solución se añadieron EtOH (400 mL) y NaBH4 (51,2 g, 1,35 mol). La mezcla se agitó a TA durante 30 minutos, la reacción se inactivó con solución acuosa saturada NH4CL La mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1-3% de MeOH en DCM) para obtener 1-3 (51,4 g, 38,9%) como un sólido blanco.
A una solución de 1-3 (51,4 g, 125,9 mmol) en DCM anhidro (400 mL), se añadió piridina (80 mL) y DMTrCl (49,1 g, 144,7 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 14 h, y a continuación se trató con MeOH (30 mL). El solvente se retiró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 1-3% en DCM) para proporcionar el intermedio protegido de mono-DMTr como una espuma amarilla (57,4 g, 62,9%). El intermedio (57,4 g, 82,8 mmol) se disolvió en CH2CL (400 mL) y se añadió imidazol (8,4 g, 124,2 mmol), TBDPSCl (34,1 g, 124,2 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 14 h. El precipitado se filtró y el filtrado se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4. El disolvente se eliminó para obtener un residuo (72,45 g) como un sólido blanco. El residuo se disolvió en solución acuosa de HOAc al 80% (400 mL). La mezcla se agitó durante 15 h a TA. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con una solución de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1-2% MeOH en DCM) para proporcionar 1-4 (37,6 g, 84,2%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 1-4 (700mg, 1,09 mmol) en diclorometano anhidro se añadió reactivo de Dess-Martin (919mg, 2,16 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 30 min. La reacción se inactivó con carbonato de hidrógeno de sodio saturado y solución de tiosulfato de sodio, y se extrajo con EA. Las capas orgánicas se concentraron para proporcionar el aldehído bruto, que se utilizó para la siguiente etapa sin purificación. Se trató una solución de MePPh3Br (3,88 g, 10,87 mmol) en THF anhidro con una solución de t-BuOK (9,81 mL, 9,81 mmol) en THF a 0 °C. La mezcla se calentó a TA durante 1 h. Después de enfriar a 0 °C durante 1 h, se añadió una solución del aldehído (700 mg, 1,09 mmol) en THF. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con solución de cloruro de amonio sat. y se extrajo con EA. Las capas orgánicas se purificaron mediante cromatografía en columna para proporcionar 1-5 (167 mg, 30%).
A una solución de 1-5 (450mg, 0,69 mmol) en MeOH (10 mL), se añadió Pd/C (200 mg) a TA. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h y bajo H2 (balón). Luego, la mezcla se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar el 1­ 6 bruto (440 mg, 97,1%) como un sólido blanco.
Se agitó una solución de 1-6 (317 mg, 0,49 mmol), TPSCl (373 mg, 1,23 mmol), DMAP (150 mg, 1,23 mmol) y TEA (124 mg, 1,23 mmol) en MeCN anhidro a TA durante la noche. La reacción se inactivó con NH3^H2O y a continuación se agitó a TA durante 3 h. El solvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 1-7 (200 mg, 63%).
A una solución de 1-7 (280mg, 0,44 mmol) en MeOH (10 mL), se añadió NH4F (1,0 g, 27,0 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 12 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de MeOH en DCM) para obtener el compuesto 1 (81 mg, 63,3%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 291,8 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 2
COMPUESTO 2
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A una solución de 2-1 (2,5 g, 4,04 mmol) en DMF se añadió NaH (170 mg, 4,24 mmol, 60% de pureza) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 3 h a TA. Se agregó NaI (6,1 g, 40,4 mmol) a TA y se agitó durante 3 h. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 2-2 (1,7 g, 94%) como un sólido amarillo.
A una solución de 2-2 (1,7 g, 3,81 mmol) en THF (5 mL) se añadió solución de NaH 2M (4,5 mL) a 0 °C. La solución se agitó durante 2 h a TA. La mezcla se ajustó a pH = 7 y se concentró a presión reducida. La mezcla se repartió entre DCM y agua. La capa de DCM se secó con alto vacío para proporcionar 2-3 (1,2 g, 68%) como un sólido blanco, que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 2-3 (1,2 g, 2,58 mmol) en EtOH (20 mL), se añadió NH4COOH (650 g, 7,75 mmol) y Pd/C (120 mg). La mezcla se agitó bajo H2 (30 psi) durante 1,5 h a TA. La suspensión se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (0,5% TEA y 1% MeOH en DCM) para obtener 2-4 (545 mg, 62%). ESI-MS: m/z 361,2 [M 23]+.
El compuesto 2-4 se disolvió en 80% HCOOH ac. (20 mL) y se mantuvo a 20 °C durante 18 h. Después de enfriarse a TA, el solvente se retiró al vacío y el residuo se co-evaporó con tolueno (3 x 25 mL). El residuo se disolvió en agua (3 mL) y se añadió NH4OH acuoso concentrado (1 mL). Después de 2 h a 20 °C, el solvente se retiró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de 5 a 50% de metanol en DCM para proporcionar el compuesto purificado 2 (14 mg) como un sólido blanco.
EJEMPLO 3
COMPUESTO 4
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El compuesto 4-1 (5,0 g, 8,5 mmol) y 2-amino-6-cloropurina (3,0 g, 17,7 mmol) se concentraron conjuntamente con tolueno anhidro por 3 veces. A una suspensión agitada de la mezcla en MeCN anhidro (50 mL) se añadió DBU (7,5 g, 49 mmol) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 15 minutos y se añadió TMSOTf (15 g, 67,6 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 15 minutos y a continuación se calentó a 70 °C durante la noche. La mezcla se enfrió a TA y se diluyó con EA (100 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna en gel de sílice (PE/EA: de 15/1 a 3/1) para obtener 4-2 (2,5 g, 46,3 %) como una espuma blanca.
A una solución de 4-2 (10 g, 15,7 mmol), AgNO3 (8,0 g, 47 mmol) y colidina (10 mL) en DCM anhidro (20 mL) se agregó MMTrCl (14,5 g, 47 mmol) en pequeñas porciones bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con NaHCO3 acuoso sat. y salmuera La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/EA = 20/1 a 8/1) para obtener 4-3 (10 g, 70%) como un sólido amarillo.
A una solución de 3-hidroxipropionitrilo (3,51 g, 49,4 mmol) en THF anhidro (100 mL) se le añadió NaH (2,8 g, 70 mmol) a 0°C y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. A la mezcla se añadió una solución de 4-3 (8,5 g, 9,35 mmol) en THF anhidro (100 mL) a 0 °C, y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1 a 20/1) para obtener 4-4 (4,5 g, 83%) como un sólido blanco.
El compuesto 4-4 (1,5 g, 2,6 mmol) se co-concentró con piridina anhidra 3 veces. A una solución enfriada con hielo de 4-4 en piridina anhidra (30 mL) se agregó TsCl (1,086 g, 5,7 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (80 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1 a 15/1) para obtener 4-5 (1,4 g, 73%) como un sólido blanco.
A una solución de 4-5 (4,22 g, 5,7 mmol) en acetona (60 mL) se le añadió Nal (3,45 g, 23 mmol) y la mezcla se agitó a reflujo durante la noche. La reacción se inactivó por Na2S2O3 sat. acuoso, y a continuación se extrajo con EA (100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1 a 15/1) para obtener 4-6 (4 g, 73%) como un sólido blanco.
A una solución de 4-6 (4,0 g, 5,8 mmol) en THF anhidro (60 mL) se le añadió DBU (3,67 g, 24 mmol), y la mezcla se agitó a 60 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con EA (80 mL). La solución se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1 a 20/1) para obtener 4-7 (2 g, 61%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 4-7 (500 mg, 0,89 mmol) en DCM anhidro (20 mL) se agregó AgF (618 mg, 4,9 mmol) y una solución de I2 (500 mg, 1,97 mmol) en DCM anhidro (20 mL). La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La reacción se inactivó con Na2S2O3 saturado y NaHCO3 acuoso, y la mezcla se extrajo con DCM (50 mL). La capa orgánica se separó, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró para obtener 4-8 bruto (250 mg, bruto) como un sólido amarillo.
A una solución de 4-8 bruto (900 mg, 1,28mmol) en DCM anhidro (50 mL), se añadió DMAP (1,0 g, 8,2 mmol) y BzCl (795 g, 5,66 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se lavó con NaHCO3 sat. ac y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en prep-TLC (DCM/MeOH = 15:1) para obtener 4-9 (300 mg, 26%) como un sólido blanco.
A una solución de 4-9 bruto (750 mg, 0,82 mmol) en HMPA anhidro (20 mL), se añadió NaOBz (1,2 g, 8,3 mmol) y 15-corona-5 (1,8 g, 8,3 mmol). La mezcla se agitó a 60 °C durante 2 d. La mezcla se diluyó con EA y la solución se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en prep-TLC (PE/EA = 1:1) para obtener 4-10 bruto (550 mg, 73%) como un sólido blanco.
Se disolvió 4-10 bruto (550 mg, 0,6 mmol) en NH3/MeOH (7N, 50 mL). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se concentró y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH de 100/1 a 20/1) para obtener 4-11 (62 g, 17%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 598,0 [M+H]+.
Una solución de 4-11 (12 mg) en ácido fórmico al 80% (0,5 mL) se mantuvo a TA durante 3,5 h y a continuación se concentró. El residuo se evaporó conjuntamente con MeOH/tolueno 4 veces en un vial, a continuación, se trituró con EtOAc a 40 °C. La solución de EtOAc se retiró con pipeta, y la etapa de trituración se repitió varias veces. El sólido restante se disolvió en MeOH. La solución se concentró y se secó para proporcionar el compuesto 4 (4,7 mg) como un sólido blanquecino. ESI-MS: m/z 326,6 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 4
COMPUESTO 5
Figure imgf000045_0001
A una solución de 5-1 (1,2 g; 4,3 mmol) en dioxano (30 mL) se añadieron monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (820 mg; 1 eq.) y ortoformiato de trimetilo (14 mL; 30 eq.). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se neutralizó a continuación con amoníaco metanólico y el solvente se evaporó. La purificación en columna de gel de sílice con sistema solvente CH2Cl 2-MeOH (gradiente 4-10%) produjo 5-2 (1,18 g, 87%).
A una solución enfriada con hielo de 5-2 (0,91 g; 2,9 mmol) en THF anhidro (20 mL) se agregó cloruro de isopropilmagnesio (2,1 mL; 2 M en THF). La mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. Se añadió gota a gota una solución de reactivo de fosforocloridato (2,2 g; 2,5 eq.) en THF (2 ml). La mezcla se agitó durante la noche a TA. La reacción se inactivó con solución ac. de NH4Cl y se agitó a TA durante 10 minutos. La mezcla se diluyó a continuación con agua y CH2Cl2, y las dos capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, NaHCO3 ac. semi-saturado y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de gel de sílice con sistema solvente CH2Cl2-iPrOH (gradiente 4-10%) para proporcionar una mezcla Rp/Sp de 5-3 (1,59 g; 93%).
Una mezcla de 5-3 (1,45 g; 2,45 mmol) y 80% HCOOH ac. (7 mL) se agitó a TA durante 1,5 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con tolueno. El residuo obtenido se disolvió en MeOH, se trató con Et3N (3 gotas) y el solvente se evaporó. La purificación en columna de gel de sílice con sistema de solvente CH2Cl2-MeOH (gradiente 4-10%) produjo mezcla Rp/Sp del compuesto 5 (950 mg; 70%). 31P-RMN (DMSO-d6): ó 3,52, 3,37. MS: m/z = 544 [M-1].
EJEMPLO 5
COMPUESTO 6
Figure imgf000046_0001
El compuesto 32-1 (5 g, 8,79 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra. A una solución enfriada con hielo de 32-1 en piridina anhidra (15 mL) se añadió TsCl (3,43 g, 17,58 mmol) y se agitó durante 1 h a 0 °C. La reacción se verificó mediante LCMS y TLC. La reacción se inactivó con H2O, y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. Se utilizó el compuesto 6-1 (6,35 g, 100%) para la siguiente etapa directamente.
A una solución de 6-1 (31,77 g, 43,94 mmol) en acetona (300 mL) se le añadió Nal (65,86 g, 439,4 mmol) y se calentó a reflujo durante la noche. La reacción se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con sol. sat. de Na2S2O3 y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 6%) para obtener 6-2 (11,5 g, 38%) como un sólido blanco.
A una solución de 6-2 (11,5 g, 16,94 mmol) en THF seco (120 mL) se añadió DBU (12,87 g, 84,68 mmol) y se calentó hasta 60 °C. La reacción se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 6-3 (5,5 g, 54%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 6-3 (500 mg, 0,90 mmol) en DCM seco (20 mL) se agregó AgF (618 mg, 4,9 mmol) y una solución de I2 (500 mg, 1,97 mmol) en DCM seco (20 mL). La reacción se agitó durante 3 h., y se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución saturada de Na 2S2O3 y solución saturada de NaHCO3, y la mezcla se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión para obtener 6-4 bruto (420 g, 66%).
A una solución de 6-4 bruto (250 mg, 0,36 mmol) en DCM seco (8 mL) se agregó DMAP (0,28 g, 2,33 mmol), TEA (145 mg, 1,44 mmol) y BzCl (230 mg, 1,62 mmol) en una solución de DCM (2 mL). La reacción se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La mezcla se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-TLC para proporcionar 6-5 bruto (150 mg, 46%).
A una solución de 6-5 bruto (650 mg, 0,72 mmol) en HMPA seco (20 mL), se añadió NaOBz (1,03 g, 7,2 mmol) y 15-corona-5 (1,59 g, 7,2 mmol). La reacción se agitó durante 2 d a 60 °C. La mezcla se diluyó con H2O y se extrajo con EA. La capa orgánica se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-TLC para proporcionar 6-6 (210 mg, 32,4%). ESI-MS: m/z: 900,4 [M+H]+.
Se agitó una mezcla de 6-6 (25 mg) y BuNH2 (0,8 mL) durante la noche a TA. La mezcla se evaporó y purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-15%) para obtener 6-7 (15 mg, 91 %).
Una mezcla de 6-7 (15 mg, 0,02 mmol) en ACN (0,25 mL) y HCl 4 N/dioxano (19uL) se agitó a TA durante 45 min. La mezcla se diluyó con MeOH y se evaporó. El residuo bruto se trató con MeCN y el sólido se filtró para proporcionar el compuesto 6 (7 mg). MS: m/z = 314 [M-1].
EJEMPLO 6
COMPUESTO 7
Figure imgf000047_0001
Se agitó una mezcla de 7-1 (170 mg, 0,19 mmol) y amoníaco metanólico (7 N; 3 mL) a TA durante 8 h, se concentró y purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-11 %) para proporcionar 7-2 (100 mg, 90%).
El compuesto 7-2 se volvió anhidro al co-evaporarse con piridina, seguido de tolueno. A una solución de 7-2 (24 mg, 0,04 mmol) y N-metilimidazol (17 gL, 5 eq.) en acetonitrilo (1 mL) se agregó el fosforocloridato (50 mg, 3,5 eq.) en 2 porciones en intervalos de 6 h. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y se evaporó. La purificación en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-12%) produjo 7-3 (10 mg, 28%).
Una solución de 7-3 (9 mg, 0,01 mmol) en ácido fórmico al 80 % se agitó durante 3 h a TA. La mezcla se evaporó y purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 5-15%) para obtener el compuesto 7 (3 mg, 50%). MS: m/z = 624 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 7
COMPUESTO 8
Figure imgf000048_0001
A una solución enfriada con hielo de 8-1 (80 mg; 015 mmol) en THF anhidro (2 mL) se agregó cloruro de isopropilmagnesio (0,22 mL; 2 M en THF). La mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. Se agregó gota a gota una solución del reactivo fosforocloridato (0,16 g; 0,45 mmol) en THF (0,5 mL). La mezcla se agitó durante la noche a TA. La reacción se inactivó con solución ac. de NH4Cl y se agitó a TA durante 10 minutos. La mezcla se diluyó con agua y CH2Cl 2, y las dos capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua, NaHCO3 ac. semi-saturado y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de gel de sílice con sistema solvente CH2CI2-MeOH (gradiente 2-10%) para proporcionar una mezcla Rp/Sp de 8-2 (102 mg; 80%).
Se agitó una mezcla de 8-2 (100 mg; 0,12 mmol) en EtOH (3 mL) y Pd/C al 10% (10 mg) bajo la atmósfera de H2 durante 1,5 h. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, se evaporó y se purificó en columna de gel de sílice con sistema solvente ch 2 ci 2-MeOH (gradiente 4-10%) para proporcionar mezcla Rp/Sp del compuesto 8 (52 mg, 74%). MS: m/z = 584 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 8
COMPUESTO 9
Figure imgf000048_0002
Se agitó una mezcla de 9-1 (1,2 g, 4,3 mmol), monohidrato de PTSA (0,82 g, 1 eq.) y ortoformiato de trimetilo (14 mL, 30 eq.) en dioxano (30 mL) durante la noche a TA. La reacción se neutralizó con NH3/MeOH 7 N y un sólido blanco se retiró por filtración. El residuo se disolvió en THF (10 mL) y se trató con AcOH ac. al 80% (5 mL). La mezcla se mantuvo a TA durante 45 minutos y a continuación se evaporó. La mezcla se evaporó y purificó en gel de sílice (columna de 25 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener 9-2 (1,18 mg, 87%).
El compuesto 9-3 (137 mg, 75%) se preparó a partir de 9-2 (93 mg, 0,29 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,44 mmol) con DIPEA (0,2 ml), BopCl (147 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (66 mg) en THF (3 ml). La purificación se realizó con el sistema solvente CH2Cl 2/i-PrOH (gradiente 3-10%).
Una solución de 9-3 (137 mg) XHCOOH ac. al 80% se agitó a TA durante 2 h y a continuación se concentró. El residuo se evaporó conjuntamente con tolueno y a continuación MeOH que contenía una pequeña cantidad de Et3N (2 gotas). La purificación en sílice (columna de 25 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) dio el compuesto 9 (100 mg, 77%). MS: m/z = 1175 (2M-1).
EJEMPLO 9
COMPUESTO 10
Figure imgf000049_0001
El compuesto 10-1 (50 g, 86,0 mmol) y 6-Cl-guanina (16,1 g, 98,2 mmol) se co-evaporaron con tolueno anhidro 3 veces. A una solución de 10-1 en MeCN (200 mL) se agregó DBU (39,5 g, 258,0 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos y a continuación se añadió TMSOTf (95,5 g, 430,0 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla se calentó a 70°C y se agitó durante la noche. La solución se enfrió a TA y se diluyó con EA (100 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna en gel de sílice (EA en PE de 10% a 40%) para obtener 10-2 (48,0 g, rendimiento: 88,7%) como una espuma amarilla. ESI-MS: m/z 628 [M+H]+.
A una solución de 10-2 (48,0 g, 76,4 mol), AgNO3 (50,0 g, 294,1 mmol) y colidina (40 mL) en DCM anhidro (200 mL) se agregó MMTrCl (46,0 g, 149,2 mmol) en porciones pequeñas bajo N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 h y bajo N2. La reacción se monitoreó mediante TLC. La mezcla se filtró y el filtro se lavó con saturación. sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 5% a 50%) para obtener 10-3 bruto (68 g, 98%). ESI-MS: m/z 900,1 [M+H]+.
Se disolvió sodio (8,7 g, 378,0 mmol) en EtOH seco (100 mL) a 0 °C y se calentó lentamente hasta TA. El compuesto 10-3 (68,0 g, 75,6 mmol) se trató con solución de NaOEt recién preparada y se agitó durante la noche a TA. La reacción se monitoreó mediante TLC y la mezcla se concentró a baja presión. La mezcla se diluyó con H2O (100 mL) y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 10-4 (34,0 g, 75,2%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 598 [M+H]+.
El compuesto 10-4 (32,0 g, 53,5 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra 3 veces. A una solución enfriada con hielo de 10-4 en piridina anhidra (100 mL) se añadió TsCl (11,2 g, 58,9 mmol) en piridina (50 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó durante 18 h a 0 °C. La reacción se verificó mediante LCMS (aproximadamente el 70% fue el producto deseado). La reacción se inactivó con H2O y la solución se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (100 mL) y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 10-5 bruto (25,0 g, 62,2%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 752 [M+H]+.
A una solución de 10-5 (23,0 g, 30,6 mmol) en acetona (150 mL) se le añadió Nal (45,9 g, 306,0 mmol) y TBAI (2,0 g) y se sometió a reflujo durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (100 mL), se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro. La solución orgánica se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH=100:1 a 20:1) para proporcionar el producto bruto. A una solución del producto bruto en THF seco (200 mL) se añadió DBU (14,0 g, 91,8 mmol) y se calentó hasta 60 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat., y la solución se extrajo con EA (100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 10-6 (12,0 g, 67,4%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 580 [M+H]+.
A una solución enfriada con hielo de 10-6 (8,0 g, 13,8 mmol) en MeCN seco (100 mL) se añadió NIS (3,9 g, 17,2 mmol) y TEA^3HF (3,3 g, 20,7 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 18 h y se verificó mediante LCMS. Después de que la reacción se completó, la reacción se inactivó con Na2SO3 saturado y solución saturada de NaHCO3. La solución se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (Ea en PE de 10% a 50%) para obtener 10-7 (7,2 g, 72,0%) como un sólido. ESI-MS: m/z 726 [M+H]+.
A una solución de 10-7 bruto (7,2 g, 9,9 mmol) en DCM seco (100 mL) se añadió DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) y BzCl (2,8 g, 19,8 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La mezcla se lavó con solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 10% a 30%) para obtener 10-8 (8,0 g, 86,4%) como un sólido. ESI-MS: m/z 934 [M+H]+.
A una solución de 10-8 bruto (7,5 mg, 8,0 mmol) en DMF seco (100 mL), se añadió NaOBz (11,5 g, 80,0 mmol) y 15-corona-5 (15,6 mL). La mezcla se agitó durante 36 h a 90 °C. La mezcla se diluyó con H2O (100 mL) y se extrajo con EA (3x150 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 10% a 30%) para obtener 10-9 (6,0 g, 80,0%) como un sólido. ESI-MS: m/z 928 [M+H]+.
El compuesto 10-9 (4,0 g, 4,3 mmol) se co-evaporó con tolueno anhidro 3 veces y se trató con NH3/MeOH (50 mL, 4N) a TA. La mezcla se agitó durante 18 h a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS y la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 30% a 50%) para obtener 10-10 (1,9 g, 71,7%) como un sólido. ESI-MS: m/z 616 [M+H]+.
El compuesto 10-10 (300,0 mg, 0,49 mmol) se evaporó conjuntamente con tolueno anhidro 3 veces y se disolvió en MeCN (2 mL). La mezcla se trató con NMI (120,5 mg, 1,47 mmol) y el reactivo de fosforocloridato (338,1 mg, 0,98 mmol) en MeCN (1 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 18 h a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se diluyó con solución de NaHCO3 al 10% y se extrajo con EA. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 30% a 50%) para obtener 10-11 (240 mg, 53,3%) como un sólido. ESI-MS: m/z 925 [M+H]+.
El compuesto 10-11 (240,0 mg, 0,26 mmol) se trató con AcOH al 80% (10 mL) y la mezcla se agitó durante 18 h a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 3%) para obtener el compuesto 10 (87,6 g, 51,7%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 653 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 10
COMPUESTO 12
Figure imgf000051_0001
A una suspensión agitada de 12-1 (20,0 g, 81,3 mmol), imidazol (15,9 g, 234,0 mmol), PPh3 (53,5 g, 203,3 mmol) y piridina (90 mL) en THF anhidro (100 mL) se agregó una solución de I2 (41,3 g, 162,6 mmol) en THF (150 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó lentamente a TA y se agitó durante 14 h. La reacción se inactivó con Na2S2Ü3 sat. ac.(150 mL) y se extrajo con THF/EA (1/1) (100 mL x 3). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró a baja presión. El residuo se recristalizó a partir de EtÜH para obtener 12-2 puro (23 g, 79 %) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 12-2 (23 g, 65 mmol) en MeÜH anhidro (200 mL), se añadió NaOCH3 (10,5 g, 195 mmol) en MeÜH (50 mL) a TA. La mezcla se agitó a 60 °C durante 3 h y se inactivó con hielo seco. Un sólido fue precipitado y retirado por filtración. El filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (MeÜH en DCM de 1% a 10%) para obtener 12-3 (13,1 mg, 92,5%) como un sólido de espuma blanca.
A una solución agitada de 12-3 (12,0 g, 53 mmol) en CH3CN anhidro se añadió TEA^3HF (8,5 g, 53 mmol) y NIS (10,2 g, 63,6 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 minutos y se calentó lentamente hasta TA. La mezcla se agitó durante otros 30 min. El sólido se retiró mediante filtración y se lavó con DCM para proporcionar 12-4 (14 g, 73%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 373,0 [M+H]+.
A una solución agitada de 12-4 (12,0 g, 32 mmol) y DMAP (1,2 g, 9,6 mmol) en piridina (100 mL) se añadió Bz2Ü (21,7 g, 96 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 50 °C durante 16 h. La reacción resultante se inactivó con agua, y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 12-5 (15 g, 81 %) como un sólido blanco. ESI-TÜF-MS: m/z 581,0 [M+H]+.
Se ajustó hidróxido de tetrabrutilamonio (288 mL como solución acuosa al 54-56%, 576 mmol) a pH~4 mediante la adición de TFA (48 mL). La solución resultante se trató con una solución de 12-5 (14 g, 24 mmol) en DCM (200 mL). Se agregó ácido m-cloroperbenzoico (30 g, 60-70%, 120 mmol) en porciones con agitación vigorosa y la mezcla se agitó durante la noche. La fase orgánica se separó y se lavó con salmuera. La solución resultante se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 12-6 (7,5 mg, 68%).
El compuesto 12-6 (5,0 g, 10,6 mmol) se trató con NH37N^MeOH (100 mL) y la mezcla se agitó durante 5 h. Luego, la mezcla se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se lavó con d Cm y el sólido se filtró para proporcionar 12-7 (2,1 g, 75%) como una espuma blanca. ESI-MS: m/z 263,0 [M+H]+.
A una solución de 12-7 (2,1 g, 8,0 mmol) en piridina se añadió TIDPSCl (2,5 g, 8,0 mmol) gota a gota a 0 °C y se agitó durante 12 h a TA. La solución se inactivó con agua, y se concentró a sequedad a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (EA en PE de 10% a 50%) para obtener 12-8 (1,6 g, 40 %) como una espuma blanca.
Se agitó una solución de 12-8 (1,5 g, 3,0 mmol) e IBX (1,69 g, 6,0 mmol) en CH3CN anhidro (10 mL) a 80 °C durante 3 h. La mezcla se enfrió hasta TA y se filtró. El filtrado se concentró a sequedad a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (EA en PE de 2% a 50%) para obtener 12-9 puro (1,2 g, 80 %) como una espuma blanca. ESI-MS: m/z 503,0 [M+H]+
El compuesto intermedio 12-9 (500 g, 1 mmol) se disolvió en THF seco (8 mL). Se añadió bromuro de etilmagnesio (8 mL de solución 0,5M en ciclohexano) a TA. Después de 30 minutos, se añadió bromuro de etinilmagnesio adicional (8 mL). La mezcla se dejó durante 30 minutos y a continuación se inactivó con solución saturada de cloruro de amonio. El producto se extrajo con EA. Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice en EA para eliminar el color oscuro. El compuesto amarillo se disolvió en THF (3 mL) y se trató con TBAF (1 mL, solución 2M en THF) durante 30 minutos. El solvente se evaporó y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice en un cartucho Biotage (25 g). EA saturado con agua se utilizó para la elución isocrática. Cada fracción se analizó mediante TLC en DCM:MeOH (9:1 v:v). Las fracciones que contenían solo el isómero con una Rf alta se concentraron para proporcionar el compuesto 12 puro (110 mg). MS: 285,1 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 11
COMPUESTO 13
Figure imgf000052_0001
El compuesto 12 (57 mg, 0,2 mmol) se disolvió en CH3CN (2 mL), que contenía N-metilimidazol (40 uL). Se añadió el reactivo fosforocloridato (207 mg, 0,6 mmol) y la mezcla se mantuvo durante la noche a 400C. La mezcla se repartió entre agua y EA. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se evaporó. El producto se aisló mediante cromatografía en gel de sílice en gradiente de metanol en DCM de 0% a 15%. Se obtuvo el compuesto 13 (46 mg, 39%). MS: m/z 593,9 [M-1].
EJEMPLO 12
COMPUESTO 14
Figure imgf000053_0001
A una solución de 14-1 (5,0 g, 19,53 mmol) en MeCN anhidro se añadió IBX (7,66 mL, 27,34 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 80 °C durante 12 h y a continuación se enfrió lentamente a TA. Después de la filtración, el filtrado se concentró para proporcionar 14-2 bruto (4,87 g, 98%).
A una solución de 14-2 (4,96 g, 19,53 mmol) en THF anhidro a -78 °C bajo N2 se añadió bromuro de metilmagnesio (19,53 mL, 58,59 mmol) por goteo. La mezcla se calentó lentamente a TA y se agitó durante 12 h. La mezcla se inactivó con solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-3 (4,37 g, 83%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-3 (4,37 g, 16,19 mmol) en DCM anhidro (20 mL) se añadió DMAP (3,95 g, 32,38 mmol), TEA (4,91 g, 48,56 mmol) y BzCl (6,80 g, 48,56 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCÜ3 (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-4 bruto (5,3 g, 87%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-4 (3,0 g, 8,02 mmol) y Ac2Ü (4,91 g, 48,13 mmol) en ácido acético (10 mL) se le agregó H2SO4 concentrado (98%, 2,41 g, 24,06 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La solución se vertió en agua helada (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-5 (2,3 g, 81%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 6-Cl-guanina (560 mg, 3,31 mmol) y 14-5 (1,11 g, 2,76 mmol) en MeCN anhidro (5 ml) se añadió DBU (1,27 g, 8,28 mmol) bajo N2 a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 30 min. La solución se enfrió hasta 0 °C y se añadió TMSÜTf (2,45 g, 11,04 mmol) lentamente durante 15 min. La mezcla se calentó a TA en 30 minutos. La mezcla se calentó a 60 °C durante 4 h. La solución se vertió en agua helada (30 mL), y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-6 (800 g, 70%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-6 (839 mg, 1,64 mmol), MMTrCl (1,46 g, 4,75 mmol) y AgNÜ3 (697 mg, 4,1 mmol) en DCM (10 ml) se le añadió colidina (794 mg, 6,56 mmol). La mezcla se agitó durante 12 h a TA. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCÜ3 (20 mL). Después de la filtración, el filtrado se extrajo con DCM (3 x 20 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-7 (1,3 g, 72,5%) como un sólido blanco.
Se disolvió nitrilo acrílico de 3-hidroxilo (4,13 g, 5,82 mmol) en THF anhidro (10 mL). La solución se trató con NaH (464 mg, 11,6 mmol) a 0 °C, y se calentó lentamente hasta TA, y se agitó durante 30 minutos. Una solución de 14-7 (912 g, 1,16 mmol) en THF anhidro (5 mL), se añadió lentamente La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua (40 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-8 (600 g, 85%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-8 (6,20 g, 10,86 mmol) en piridina anhidra (10 ml) a 0°C se añadió gota a gota una solución de TsCl (4,54 g, 23,89 mmol) en piridina anhidra (10 mL). La mezcla se agitó a TA durante 30 min. La reacción se inactivó con agua (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-9 (6,0 g, 76%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-9 (6,0 g, 8,28 mmol) en acetona (30 mL) se le añadió Nal (4,97 g, 33,12 mmol) y se sometió a reflujo durante la noche. La mezcla se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en EA (50 mL) y se lavó con solución saturada de NaHCÜ3 (30 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-10 (5,43 g, 96,4%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-10 (5,0 g, 7,34 mmol) en THF anhidro (20 mL) se le añadió DBU (4,49 g, 29,37 mmol), y se agitó a 60 °C durante la noche. La mezcla se enfrió lentamente a TA. La reacción se inactivó con agua (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-11 (3,5 g, 85%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-11 (3,5 g, 6,33 mmol) y AgF (4,42 g, 34,81 mmol) en DCM anhidro (20 mL) se agregó una solución de yodo (3,54 g, 13,93 mmol) en DCM anhidro (5 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se lavó con solución saturada de NaHCÜ3 (40 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 14-12 bruto (1,37 g, 31%) como un sólido blanco.
A una solución de 14-12 (1,37 g, 1,96 mmol) en DMF anhidro (15 ml) se le añadió benzoato de sodio (2,82 g, 19,60 mmol) y 15-corona-5 (4,31 g, 19,60 mmol) y se agitó a 90 °C durante 3 d. La mezcla se inactivó con agua (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante separación de HPLC para proporcionar 14-13 (250 mg, 20%). ESI-MS: m/z: 694 [M+H]+
Se mantuvo una mezcla de 14-13 (250 mg, 0,36 mmol) en amoníaco líquido durante la noche a TA en recipiente de vidrio de alta presión. La mezcla se evaporó y el residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener 14-14 (180 mg, 85%).
El compuesto 14 (85 mg, 56%) se preparó a partir de 14-14 (99 mg) con i-PrMgCl (0,11 mL) y el reactivo de fosforocloridato (94 mg) en THF (2 mL) seguido de desprotección. MS: m/z = 627 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 13
COMPUESTO 15
Figure imgf000055_0001
A una solución de 15-1 (260 mg, 1 mmol), se añadieron PPh3 (780 mg, 3 mmol) y piridina (0,5 mL) en THF anhidro (8 mL) I2 (504 mg, 2 mmol) a TA, y la mezcla se agitó a TA durante 12 h. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con solución de HCl 1M. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (5% MeOH en d Cm ) para obtener 15-2 (190 g, 85%) como un sólido blanco.
A una solución de 15-2 (190 g, 0,52 mmol) en THF (4 mL) se le añadió DBU (760 g, 5 mmol) a TA, y la mezcla se calentó a 50 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 15-3 (75 g, 52%) como un sólido blanco.
A una solución de 15-3 (200 mg, 0,82 mmol) en MeCN (anhidro, 4 mL) se añadió NIS (337 mg, 1,5 mmol) y TEA^3HF (213 mg, 1,25 mmol) a TA, y la mezcla se agitó a TA durante 7 h. La reacción se inactivó con una solución saturada de Na2SO3 y una solución saturada ac. de NaHCO3. La mezcla se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 15-4 (300 g, 62%) como un sólido blanco.
A una solución de 15-4 (194 mg, 0,5 mmol) en piridina (5 mL) se añadió BzCl (92 mg, 0,55 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 5 h. La reacción se inactivó con agua. La mezcla se concentró a baja presión, y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 15-5 (397 g, 81%) como un sólido blanco. A una solución de 15-5 (1,05 g, 2,13 mmol) en DCM (12 mL) se agregó una mezcla de TFA (0,5 mL) y Bu4NOH (1 mL), seguido de la adición de m-CPBA (1,3 g, 6 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 5 h. La solución se lavó con solución saturada de Na2SO3 y solución acuosa de NaHCO3. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 15-6 (450 g, 63%) como un sólido blanco.
Se disolvió el compuesto 15-6 bruto (250 mg, 0,65 mmol) en NH3/MeOH (5 mL). La mezcla se agitó a TA durante 5 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener el compuesto 15 (120 mg, 66%) como un polvo blanco. ESI-MS: m/z 279,0 [M+H]+.
EJEMPLO 14
COMPUESTO 16
Figure imgf000056_0001
Se disolvió sodio (6,0 g, 261,2 mmol) en EtOH seco (400 mL) a 0 °C y se calentó lentamente hasta TA. El compuesto 14-7 (32,0 g, 43,5 mmol) se trató con una solución de NaOEt recién preparada a 0 °C, y la mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se monitoreó mediante TLC y LCMS. Después de completar la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. La mezcla se inactivó con H2O (40 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 0,5% a 2%) para obtener 16-1 (20,0 g, 76,6%) como un sólido blanco.
El compuesto 16-1 (20,0 g, 33,3 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra 3 veces. A una solución enfriada con hielo de 16-1 en piridina anhidra (100 mL) se añadió TsCl (9,5 g, 49,9 mmol) a 0 °C. Después de la adición, la reacción se agitó durante 12 h a 20 °C y se monitoreó mediante LCMS. La reacción se inactivó con H2O y se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 0,5% a 2%) para obtener 16-2 (20,0 g, 80%) como un sólido amarillo.
A una solución de 16-2 (20,0 g, 26,5 mmol) en acetona (100 mL) se le añadió Nal (31,8 g, 212 mmol) y se calentó a reflujo durante la noche. La reacción se verificó mediante LCMS. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (MeOH en DCM de 0,5% a 2%) para obtener un producto bruto. A una solución del producto bruto en THF seco (60 mL) se añadió DBU (16,2 g, 106 mmol) y se calentó a 60 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 0,5% a 2%) para obtener 16-3 (12,0 g, 77,9%) como un sólido amarillo.
A una solución recubierta de hielo de 16-3 (11,0 g, 18,9 mmol) en MeCN seco (100 mL) se añadió NIS (5,4 g, 23,7 mmol) y NEt3^3HF (3,0 g, 18,9 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 4 h y se verificó mediante LCMS. Después de que la reacción se completó, la reacción se inactivó con solución saturada de Na2SO3 y solución saturada de NaHCO3. La solución se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 12% a 50%) para obtener 16-4 (11,0 g, 79,9%).
A una solución de 16-4 (10,0 mg, 13,7 mmol) en DMF seco (100 mL), se añadió NaOBz (19,8 g, 137 mmol) y 15-corona-5 (30,2 g, 137 mmol). La reacción se agitó durante 48 h a 90 °C y se diluyó con EA. La solución se lavó con agua y salmuera, y se secó sobre MgSO4. La capa orgánica se evaporó a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA en PE de 12% a 50%) para proporcionar 16-5 (8,0 g, 80,0%).
El compuesto 16-5 (6,0 g, 8,3 mmol) se co-evaporó con tolueno anhidro 3 veces y se trató con NH3 en MeOH (4N, 50 mL) a TA. La reacción se agitó durante 18 h a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 20% a 50%) para obtener 16-6 (4,5 g, 87,8%). ESI-MS: m/z 617,9 [M+H]+.
A una mezcla enfriada con hielo de 16-6 (25 mg, 0,07 mmol) y NMI (46 gL, 8 eq.) en acetonitrilo (0,7 mL) se le agregó el reactivo de fosforocloridato (73 mg, 3 eq.) y se agitó durante la noche a TA. Se añadieron cantidades adicionales de NMI (46 uL) y el reactivo de fosforocloridato (73 mg) y la agitación continuó durante 1 d. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. ac., diluido con EtOAc y agua. La capa orgánica se separó y se lavó con NaHCÜ3, agua y salmuera, y a continuación se secó (Na2SÜ4). El residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeÜH (gradiente de 4-10%) para obtener 16-2 (18 mg, 40%). m S: m/z = 655 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 15
COMPUESTO 18
Figure imgf000057_0001
A una solución del compuesto 15 (139 mg, 0,5 mmol) en piridina (5 mL) se añadió BzCl (92 mg, 0,55 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 5 h, se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución de HCl. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 18-1 (274 g, 79%) como un sólido blanco.
A una solución de 18-1 (490 mg, 1 mmol), DMAP (244 mg, 2 mmol) y TEA (205 mg, 2,1 mmol) en MeCN (10 mL) se le añadió TPSCl (604 mg, 2 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 2 h y a continuación se añadió NH4OH ac. a TA. La mezcla se agitó durante 0,5 h, se diluyó con EtOAc y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 18-2 (250 g, 41%) como un sólido blanco.
Se disolvió el compuesto 18-2 bruto (250 mg, 0,51 mmol) en NH3/MeOH (15 mL). La mezcla se agitó a TA durante 5 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% DCM en DCM) para obtener el compuesto 18 (95 mg, 66%) como un polvo blanco. ESI-MS: m/z 278,1 [M+H]+.
EJEMPLO 16
COMPUESTO 20
Figure imgf000057_0002
A una solución del compuesto 20-1 (30 g, 0,08 mol) en THF anhidro (300 mL) se le agregó una solución de tri-tercbutoxialuminohidruro de litio (120 mL, 0,12 mol) gota a gota a -78 °C bajo N2. La mezcla se agitó a -20 °C durante 1 h.
La reacción se inactivó con NH4CI sat. ac. y a continuación se filtró. El filtrado se extrajo con EA (3 x 300 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 20-2 (26 g, 86%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de PPh3 (37,7 g, 0,144 mol) en DCM (100 mL) se añadió el compuesto 20-2 (27 g, 0,072 mol) a -20 °C bajo N2. Después de que la mezcla se agitó a TA durante 15 minutos, se añadió CBr4 (42 g, 0,129 mol) mientras se mantenía la temperatura de reacción entre -25 y -20 °C bajo N2. La mezcla se agitó a continuación por debajo de -17°C durante 20 mins. Se añadió gel de sílice a la solución y a continuación se purificó mediante separación en columna de gel de sílice ultrarrápida para proporcionar el producto como aceite bruto. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 2% a 20%) para obtener 20-3 (a-isómero, 17 g, 55%) como un aceite incoloro.
Se agitó una mezcla de 6-Cl-guanina (11,6 g, 68,8 mmol) y t-BuOK (8,2 g, 73 mmol) en t-BuOH (200 mL) y MeCN (150 mL) a 35 °C durante 30 minutos, y a continuación se agregó 20-3 (10 g, 22,9 mmol) en MeCN 100 mL) a TA. La mezcla se calentó a 50 °C durante la noche. La reacción se inactivó con una solución de NH4Cl (5 g) en agua (40 mL) y la mezcla se filtró. El filtrado se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 20-4 (6 g, 42%) como un sólido amarillo.
A una solución de 20-4 (12,5 g, 23,8 mmol) en DCM (50 mL), se añadió AgNO3 (8,1 g, 47,6 mmol), colidina (5,77 g, 47,6 mmol) y MMTrCl (11 g, 35,7 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con MeOH (5 mL), se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener el producto intermedio (16 g, 86%) como un sólido amarillo. A una solución de HOCH2CH2CN (4,7 g, 66 mmol) en THF (200 mL) se añadió NaH (3,7 g, 92 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 30 min. Se agregó una solución del producto intermedio (10,5 g, 13 mmol) en THF (50 mL) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con MeOH (2 mL), se diluyó con EA (100 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener 20-5 (5,8 g, 77%) como un sólido amarillo.
A una solución de PPh3 (7,0 g, 26,6 mmol) en piridina anhidra (100 mL) se añadió I2 (6,3 g, 24,9 mmol), y se agitó a TA durante 30 mins. La mezcla se trató con una solución de 20-5 (9,5 g, 16,6 mmol) en piridina (40 mL). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con solución saturada de Na2S2O3, y la mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 20-6 (7 g, 66%) como un sólido amarillo.
A una solución de 20-6 (7,5 g, 11 mmol) en THF seco (50 mL) se agregó DBU (5,4 g, 33 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 4 h. La mezcla se diluyó con EA (3 x 100 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 20-7 (4,0 g, 67%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 20-7 (3,0 g, 5,4 mmol) en MeCN anhidro (20 mL) se añadió TEA^3HF (0,65 g, 4,1 mmol) y NIS (1,53 g, 6,78 mmol) a TA, y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se diluyó con EA (50 mL) y se lavó con solución saturada de Na2S2O3 y NaHCO3 ac. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (HCOOH al 0,1% en agua y MeCN) para separar los dos isómeros (alrededor de 1:1). NOE mostró que el polar era 20-8 (0,6 g, 16%) como un sólido blanco.
A una solución de 20-8 (0,7 g, 1 mmol) en piridina seca (10 mL) se agregó BzCl (147 g, 1,05 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se diluyó a continuación con EA , y se lavó con NaHCO3 sat. ac. y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 20-9 (0,65 g, 81%) como un sólido blanco.
A una solución de 20-9 (0,65 mg, 0,8 mmol) en DMF seco (40 mL), se añadió NaOBz (1,15 g, 8 mmol) y 15-corona-5 (1,77 g, 8 mmol). La mezcla se agitó a 100 °C durante 48 h. El solvente se evaporó a baja presión y el residuo se disolvió en EA (30 mL) y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 20-10 (500 g, 78%) como un sólido blanco.
El compuesto 20-10 (400 mg, 0,5 mmol) en NH3/MeOH (7N, 100 mL) se agitó a TA durante 18 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (MeOH al 5% en DCM) para proporcionar 20-11 (220 mg, 63%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 590,3 [M+H]+.
El compuesto 20-11 (59 mg, 0,1 mmol) se disolvió en TFA al 50% en metanol (10 mL) y la mezcla se mantuvo a TA durante 2 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con una mezcla de metanol/tolueno para eliminar restos del ácido. El residuo se suspendió en CH3CN (1 mL) y se centrifugó. El precipitado se lavó con CH3CN (1 mL) y se secó. El compuesto 20 se obtuvo como un sólido incoloro (21 mg, 65%. MS: m/z 316,2 [M-1].
EJEMPLO 17
COMPUESTO 21
Figure imgf000059_0001
El compuesto 21 (15 mg, 16%) se preparó a partir de 21-1 (50 mg) en acetonitrilo (2 mL) con el reactivo fosforocloridato (0,14 g) y NMI (0,1 mL) de la misma manera que el compuesto 7. MS: m/z = 643 [M+1].
EJEMPLO 18
COMPUESTO 22
Figure imgf000059_0002
El compuesto 22 (30 mg, 32%) se preparó a partir de 22-1 (50 mg) en acetonitrilo (2 mL) con el reactivo fosforocloridato (0,14 g) y NMI (0,1 mL) de la misma manera que el compuesto 7. MS: m/z = 615 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 19
COMPUESTO 23
Figure imgf000059_0003
A una solución agitada del compuesto 15 (60 mg, 0,22 mmol) en THF anhidro (2,0 mL) se agregó N-metilimidazol (0,142 mL, 1,73 mmol) a 0 °C (baño de hielo seco/acetona) seguido de una solución de (ciclohexanoxi-L-alaninil) fosforocloridato de fenilo (235 mg, 0,68 mmol, disuelto en THF (2 mL). La solución resultante se agitó a 0 °C durante 1 h y la temperatura se elevó hasta 10 °C durante la siguiente 1 h. La reacción se dejó a 10 °C durante 3 h. La mezcla se enfrió hasta 0 a 5 °C, se diluyó con EA y se añadió agua (5 mL). La solución se lavó con H2O y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se disolvió en 25% de CH3CN/H2O. El compuesto se purificó en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización que proporcionó una espuma blanca. El producto se volvió a disolver en EtOAc, se lavó con solución acuosa de ácido cítrico al 50 %, se secó sobre MgSO4anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío y se liofilizó para proporcionar dos isómeros (Rp/Sp) del compuesto 23 (6,3 mg). MS m/z 586,05 (M-H).
EJEMPLO DE REFERENCIA 20
COMPUESTO 24
A una solución agitada del compuesto 15 (100 mg, 0,36 mmol) en THF anhidro (3,0 mL) se añadió N-metilimidazol (236 pL, 2,87 mmol) a 0 °C (baño de hielo seco/acetona) seguido de una solución del fosforocloridato (329 mg, 1,08 mmol, disuelto en 2 mL de THF). La solución se agitó a 0 °C durante 1 h, la temperatura de reacción se elevó hasta 10 °C durante las siguientes 1 h y la solución se dejó a 10 °C durante las siguientes 4 h. La mezcla se enfrió hasta 0 a 5 °C, se diluyó con EA y se añadió agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se disolvió en 25% de CH3CN/H2O. El residuo se purificó en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización para proporcionar una mezcla de dos isómeros del compuesto 24 (17,5 mg). MS m/z 546,05 (M-H).
EJEMPLO 21
COMPUESTOS 25 Y 26
Figure imgf000060_0001
A una solución de 25-1 (0,47 g, 0,65 mmol) en DCM (3 mL) se añadió AgNO3 (0,22 g, 1,29 mmol), colidina (0,15 g, 1,29 mmol) y MMTrCl (0,3 g, 0,974 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La mezcla se filtró y el filtro se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 25-2 (0,55 g, 85%) como un sólido blanco.
A una solución de 25-2 bruto (0,5 mg, 0,5 mmol) en DMF seco (10 mL), se añadió NaOBz (0,72 g, 5 mmol) y 15-corona-5 (0,9 mL). La mezcla se agitó a 95 °C durante 72 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 25-3 (0,3 g, 60%) como un sólido blanco.
El compuesto 25-3 (0,3 g, 0,3 mmol) en NH3/MeOH (30 mL) se agitó a TA durante 18 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (EA al 20% en PE) para proporcionar 25-4 (145 mg, 56%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 890,5 [M+H]+.
A una solución agitada de 25-4 (161 mg, 0,16 mmol) en CH3CN anhidro (2,0 mL) se añadió N-metilimidazol (118 pL, 2,87 mmol) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) seguido de una solución de 25-5 (186 mg, 0,54 mmol, disuelto en 2 mL de CH3CN). La solución se agitó a 0 a 5 °C durante 4 h. La mezcla se diluyó con EA y se añadió agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con 0 a 40% de EA/hexanos para proporcionar como 25-6 (82,6 mg) como el isómero de elución más rápida y 25-7 (106 mg) como el isómero de elución más lenta.
Se disolvió el compuesto 25-6 (82,6 mg, 0,07 mmol) en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4N en dioxano (35 pL) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y se añadió EtOH anhidro (100 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en 50% de CH3CN/H2O y se purificó en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización para proporcionar el compuesto 25 (19,4 mg).
1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 67,9 (s, 1H), 7,32-7,28 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,2-7,12 (m, 3H), 6,43 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 4,70-4,63 (m, 2H), 4,55-4,4 (m, 3H), 3,94-3,9 (m, 1H), 1,79-1,67 (m, 4H), 1,53-1,49 (m, 1H), 1,45-1,22 (m, 15H);31P RMN (CD3OD-d4) 64,06 (s); ESI-LCMS: m/z = 655,2 [M+H]+, 653,15 [M-H]-.
Se disolvió el compuesto 25-7 (100 mg, 0,083 mmol) en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (50 pL) a 0 a 5 °C. Siguiendo el procedimiento para obtener el compuesto 25, se obtuvo el compuesto 26 (31,8 mg). 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 67,93 (s, 1H), 7,33-7,29 (m, 2H), 7,24-7,14 (m, 3H), 6,41 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 4,70-4,60 (m, 2H), 4,54-4,49 (m, 2H), 4,44-4,39 (m, 1H), 3,92-3,89 (m, 1H), 1,77-1,66 (m, 4H), 1,54-1,24 (m, 16H);31P RMN (CD3OD-d4) 63,91 (s); ESI-LCMS: m/z = 655,2 [M+H]+, 653,1 [M-H]-.
EJEMPLO 22
COMPUESTOS 27 Y 28
A una suspensión agitada de 4-1 (50 g, 84,8 mmol) y 2-amino-6-cloropurina (28,6 g, 169,2 mmol) en MeCN anhidro (500 mL) se le agregó DBU (77,8 g, 508 mmol) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 minutos y se añadió TMSOTf (150,5 g, 678 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 20 minutos hasta que se formó una solución transparente. La mezcla se agitó a 90-110 °C durante la noche. La mezcla se enfrió hasta TA y se diluyó con EA. La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (PE/PA = 2/1) para obtener 27-1 (30 g, 55,5%) como un sólido blanco.
A una solución de 27-1 (30 g, 47,1 mmol) en DCM anhidro (300 mL), se añadió colidina (30 mL), AgNO3 (24 g, 141,4 mmol) y MMTrCl (43,6 g, 141,4 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (PE/PA = 4/1) para obtener 27-2 (35 g, 82%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 27-2 (35 g, 38,5 mmol) en EtOH anhidro (150 mL), se añadió una solución de EtONa en EtOH (2N, 150 mL). La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL) y la solución se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/2) para obtener 27-3 (19 g, 81%) como un sólido blanco.
El compuesto 27-3 (19 g, 31,3 mmol) se co-concentró con piridina anhidra por 3 veces. A una solución enfriada con hielo de 27-3 en piridina anhidra (120 mL) se agregó una solución de TsCl (6,6 g, 34,6 mmol) en piridina (40 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 16 h. La mezcla se inactivó con agua y la mezcla de reacción se concentró. El residuo se re-disolvió en EA (200 mL). La solución se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1) para obtener 27-4 (16 g, 67%) como un sólido blanco.
A una solución de 27-4 (15 g, 19,7 mmol) en acetona (100 mL), se añadió Nal (30 g, 197 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante la noche y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/1) para obtener 27-5 (9 g, 63,7%) como un sólido blanco.
A una solución de 27-5 (8 g, 11,2 mmol) en THF anhidro (60 mL) se le añadió DBU (5,12 g, 33,5 mmol), y la mezcla se agitó a 60 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (PE/acetona = 4/1) para proporcionar 27-6 (5,7 g, 86%) como un sólido blanco. 1H-RMN (CD3OH, 400MHz) 5 = 8,18 (s, 1H), 7,17-7,33 (m, 12H), 6,80 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,98 (s, 1H), 5,40 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 3,87 (m, 5H), 3,75 (s, 3H), 2,69 (s, 1H), 1,05 (s, 3H).
A una solución enfriada con hielo de 27-6 (4,44 g, 7,5 mmol) en MeCN anhidro (45 mL) se le agregó TEA^3HF (1,23 g, 7,6 mmol) y NIS (2,16 g, 9,5 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 2-3 h. La reacción se inactivó con Na2SO3 sat. y solución de NaHCO3. La mezcla se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100/2) para obtener 27-7 (4,4 g, 79,8%) como un sólido blanco.
A una solución de 27-7 (5,36 g, 7,3 mmol) en DCM anhidro (50 mL) se añadió DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) y BzCl (3,1 g, 22,1 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La mezcla se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 5/1) para obtener 27-8 (5,6 g, 81,3%) como un sólido blanco.
A una solución de 27-8 (5,0 g, 5,3 mmol) en DMF anhidro (150 mL), se añadió NaOBz (7,64 g, 53 mmol) y 15-corona-5 (14 g, 68 mmol). La mezcla se agitó a 90-100 °C durante 48 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 5/1) para obtener 27-9 (3,9 g, 78,5%) como un sólido blanco.
El compuesto 27-9 en NH3 en MeOH (7N, 60 mL) se agitó a TA durante 18 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 50/1) para obtener 27-10 (500 g, 74,7%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 626,3 [M+H]+.
A una solución de 27-10 (350 mg, 0,56 mmol) en piridina anhidra (4 mL) se añadió imidazol (50 mg, 0,72 mmol) y TBSCl (108 mg, 0,72 mmol) a 0 a 5 °C, y se agitó a TA durante 15 h. La reacción se inactivó con uEtOH absoluto (0,5 mL). La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EA (150 mL) y se lavó con agua, solución saturada de NaHCO3 y salmuera. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10-30% EA en hexanos) para obtener 27-11 (338 g, 81,8%) como un sólido blanco.
A una solución del compuesto 27-11 (328 g, 0,44 mol), AgNO3 (226 g, 1,33 mmol) y colidina (0,59 mL, 4,84 mmol) en DCM anhidro (4 mL) se agregó MMTrCl (410 g, 1,33 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche en N2 y se monitoreó mediante TLC hasta su finalización. La mezcla se filtró a través de filtro de Celite pre-empaquetado y el filtrado se lavó con agua, una solución ac. de ácido cítrico al 50% y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en hexanos de 0% a 30%) para obtener 27-12 (337 g).
A una solución de 27-12 (337 mg, 0,33 mmol) en THF anhidro (4 mL) se agregó solución 1,0 M de TBAF (0,66 ML, 0,66 mmol) a 0 a 5 °C. La reacción se calentó lentamente a TA y se agitó durante 1 h. La mezcla se inactivó con gel de sílice y se filtró. Los solventes se evaporaron para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante columna de gel de sílice (EA en hexanos de 0% a 50%) para proporcionar 27-13 (188 mg).
A una solución agitada de 27-13 (180 mg, 0,16 mmol) en CH3CN anhidro (2,5 mL) se agregó N-metilimidazol (132 pL, 1,6 mmol) a 0-5 °C (baño de hielo/agua) seguido de solución de (ciclohexanoxi-L-alaninil) fosforocloridato de fenilo (207 mg, 0,6 mmol, disuelto en 2 mL de CH3CN). La solución se agitó a TA durante 2,5 h y la mezcla se diluyó con EA y a continuación se añadió agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con 0 a 40% de EA/hexanos para proporcionar 27-14 (75,8 mg) y 27-15 (108 mg) como un isómero de elución más lenta.
El compuesto 27-14 (76 mg, 0,063 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (47 pL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua). La mezcla se agitó a TA durante 40 min, y se añadió EtOH anhidro (200 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en un 50% de CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando acetonitrilo y agua, y se liofilizó para obtener el compuesto 27 (26,6 mg). ESI-LCMS: m/z = 663,3 [M+H]+.
El compuesto 27-15 (108 mg, 0,089 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,7 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (67 pL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua). La mezcla se agitó a TA durante 60 min, y se añadió EtOH anhidro (200 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en un 50% de CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando acetonitrilo y agua, y se liofilizó para obtener el compuesto 28 (40,3 mg). ESI-LCMS: m/z = 663,2 [M+H]+.
EJEMPLO 23
COMPUESTOS 30 Y 31
Figure imgf000064_0001
A una mezcla de 6-Cl-guanina pre-sililada (usando HMDS y (NH4)2SÜ4) (25,2 g, 150 mmol) en DCE (300 mL) se agregó 30-1 (50 g, 100 mmol) y TMSOTf (33,3 g, 150 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 70 °C durante 16 h y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se volvió a disolver en EA y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 2/1) para obtener 30-2 (45 g, 73%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-2 (45 g, 73,4 mmol) en EtÜH (73 mL), se añadió una solución de EtONa (1N en EtÜH, 360 mL). La mezcla se agitó a TA durante 16 h. Luego, la mezcla se concentró para proporcionar un residuo, que se purificó mediante columna de gel de sílice (DCM/MeÜH = 10/1) para proporcionar 30-3 puro (19 g, 83%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-3 (19 g, 61,1 mmol) en piridina (120 mL) se añadió por goteo TIPDSCl2 (19,2 g, 61 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se volvió a disolver en EA y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCÜ3. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeÜH = 20/1) para obtener 30­ 4 (22 g, 65%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-4 (22 g, 39,8 mmol) en DMF/piridina (5/1, 100 mL) se agregó TMSCl (12,9 g, 119 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y a continuación se trató con cloruro de isobutirilo (5,4 g, 50 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 3 h y a continuación se inactivó mediante NH4ÜH. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL). La solución se lavó con solución acuosa saturada de NaHCÜ3, y a continuación la capa orgánica se secó y concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeÜH = 50/1) para obtener 30-5 (15 g, 60%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-5 (15 g, 24,1 mmol) en DCM (100 mL), se añadió PDC (13,5 g, 26 mmol) y Ac2Ü (9,8 g, 96 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La reacción se inactivó con NaHCÜ3 ac. sat. y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en THF anhidro (100 mL). A una solución de TMSCCH (12 g, 112 mmol) en THF (200 mL) se añadió n-BuLi (2,5 N, 44 mL) a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 15 mins y 0 °C durante 15 mins. La mezcla se trató con una solución de cetona bruta en THF a -78 °C y se agitó a -30 °C durante 2 h. La reacción se inactivó por NH4G sat. Ac. y a continuación se extrajo mediante EA. La capa orgánica combinada se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 10/1) para obtener 30-6 (3,1 g, 18%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-6 (7 g, 7,5 mmol) y pipedina (1,4 g, 17 mmol) en DCM (35 mL) se añadió DAST (5,6 g, 35 mmol) a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 3 h. La reacción se inactivó con NaHCÜ3 ac. sat. y se extrajo con EA. La capa orgánica combinada se secó sobre anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 10/1) para obtener 30-7 (3,1 g, 18%) como un sólido blanco.
Compuesto 30-7 (4,1 g, 5,7 mmol) en Nhh/MeOH (100 mL) se agitó a TA durante 16 h y se concentró a baja presión. El residuo se volvió a disolver en DCM anhidro (300 mL) y se trató con AgNO3 (27,0 g, 160 mmol), colidina (22 mL) y MMTrCl (23,0 g, 75,9 mmol) en porciones pequeñas bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La solución se filtró, y el filtrado se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (PE/EA = 10/1) para proporcionar el producto intermedio puro. El producto intermedio se disolvió en una solución de TBAF/THF (1N, 20 mL). La mezcla se agitó a TA durante 2 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 50/1) para obtener 30-8 (3,0 g, 86%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-8 (3,0 g, 4,9 mmol) en THF (50 mL) se añadió imidazol (840 mg, 12 mmol), PPh3 (3,2 g, 12 mmol) e I2 (2,4 g, 9,2 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La reacción se inactivó por Na2S2O3 sat. ac. y a continuación se extrajo con EA. La capa orgánica combinada se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 2/1) para obtener 30-9 bruto (4,2 g, >100%, conteniendo TPPO) como un sólido blanco.
A una solución de 30-9 bruto en THF anhidro (30 mL) se añadió DBU (2,7 g, 18 mmol) y se calentó hasta 80 °C. La mezcla se agitó durante 1 h y se verificó mediante LCMS. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 2/1) para obtener 30-10 (2,0 g, 69%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada en hielo de 30-10 (2,0 g, 3,38 mmol) en MeCN anhidro (15 mL) se añadió NIS (777 g, 3,5 mmol) y NEt3^3HF (536 g, 3,3 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h y se verificó mediante LCMS. Después de completarse, la mezcla se inactivó mediante solución saturada de Na2SO3 y solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 10/1 a 3/1) para obtener 30-11 (2,1 g, 84,0%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-11 bruto (2,1 g, 2,85 mmol) en DCM anhidro (100 mL) se añadió DMAP (490 g, 4 mmol) y BzCl (580 g, 4 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La reacción se lavó con solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 8/1 a 3/1) para obtener 30-12 (2,0 g, 83,4%) como un sólido blanco.
A una solución de 30-12 (2,0 g, 2,4 mmol) en DMF anhidro (60 mL), se añadió NaOBz (3,3 g, 23,0 mmol) y 15-corona-5 (5,11 g, 23 mmol). La mezcla se agitó a 110 °C durante 36 h. La reacción se inactivó con agua, y la mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE/PA = 5/1 a 3/1) para obtener 30-13 (830 g, 42,0%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 836,11 [M+H]+.
Se agitó una solución de 30-13 (831 mg, 1,0 mmol) en n-butilamina anhidra (4 mL) a TA durante 3 h en atmósfera de N2. La reacción se monitoreó mediante TLC. El solvente se evaporó al vacío y el residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (MeOH en DCM de 0% a 10%) para proporcionar el producto bruto, que como se volvió a purificar usando columna de gel de sílice para proporcionar 30-14 como un sólido rosa claro (563 mg).
A una solución de 30-14 (560 mg, 0,89 mmol) en piridina anhidra (5 mL) se añadió imidazol (78,6 mg, 1,16 mmol) y TBSCl (202 mg, 1,34 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 15 h. La reacción se inactivó añadiendo EtOH absoluto (0,3 mL). La solución se concentró a sequedad a presión reducida y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en EA (150 mL) y se lavó con agua, solución saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (0-20% EA en hexanos) para obtener 30-15 (303 g) como un sólido blanco.
A una solución del compuesto 30-15 (303 g, 0,41 mol), AgNO3 (208 g, 1,23 mmol) y colidina (0,55 mL, 4,51 mmol) en DCM anhidro (4 mL) se agregó MMTrCl (378 g, 1,3 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche bajo N2 y se monitoreó mediante TLC. La mezcla se filtró a través de filtro de Celite pre-empaquetado y el filtrado se lavó con agua, una solución ac. de ácido cítrico al 50% y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en hexanos de 0% a 30%) para obtener 30-16 (374 mg, 90%).
A una solución de 30-16 (374 mg, 0,37 mmol) en THF anhidro (4 mL) se agregó solución 1,0 M de TBAF (0,74 ML, 0,74 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA y se agitó durante 1 h. La mezcla se inactivó con gel de sílice y se filtró. Los solventes se evaporaron para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante columna de gel de sílice (EA en hexanos de 0% a 50%) para proporcionar 30-17 (265 mg).
A una solución agitada de 30-17 (187,5 mg, 0,16 mmol) en CH3CN anhidro (2,5 mL) se agregó N-metilimidazol (136 pL, 1,66 mmol) a 0-5 °C (baño de hielo/agua) seguido de solución de (ciclohexanoxi-L-alaninil) fosforocloridato de fenilo (214 mg, 0,62 mmol, disuelto en 0,5 mL de CH3CN). La solución se agitó a TA durante 3 h y a continuación se diluyó con EA seguido de la adición de agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con 0 a 40% de EA/hexanos para proporcionar (isómeros individuales) de 30-18 (108 mg) La elución de esta última fracción dio (isómeros individuales) de 30-19 (120 mg) como un sólido vidrioso.
Se disolvió el compuesto 30-18 (108 mg, 0,089 mmol) en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (67 pL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua). La mezcla se agitó a TA durante 40 min, y se añadió EtOH anhidro (200 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en 50% de CH3CN/H2O, se purificó en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización para proporcionar el compuesto 30 (26,6 mg) como una espuma blanca. 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 57,89 (s, 1H), 7,33-7,29 (m, 2H), 7,20-7,13 (m, 3H), 7,17 (m, 1H), 6,62 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 5,39 (t, J = 25,2 Hz, 1H), 4,75-4,42 (m, 6H), 3,92 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,24 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 1,76-1,51 (m, 5H), 1,45-1,25 (m, 12H);31P RMN (CD3OD-d4) 54,04 (s); ESI-LCMS: m/z = 665,2 [M+H]+.
El compuesto 31 (44,4 mg, isómero único) se obtuvo según el procedimiento descrito para el compuesto 30 usando 30-19. 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 57,93 (s, 1H), ), 7,32 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,68-4,60 (m, 2H), 4,54-4,39 (m, 3H), 3,93-3,89 (m, 1H), 3,24 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 1,75-1,5 (m, 5H), 1,48-1,23 (m, 12H); 19F RMN (CD3OD-d4) 5-122,95 (s), -155,84-155,99 (m); 31P RMN (CD3OD-d4) 53,94 (s); ESI-LCMS: m/z = 665,15 [M+H]+.
EJEMPLO 24
COMPUESTO 32
Figure imgf000066_0001
A una solución de 3-hidroxipropanonitrilo (27 g, 0,15 mmol) en THF anhidro (150 mL) se le añadió NaH (8,4 g, 0,21 mmol) a 0°C y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. El compuesto 10-3 (27 g, 0,03 mol) en THF (100 mL) se trató con esta mezcla a 0 °C. La mezcla combinada se agitó durante 6 h a TA. La reacción se inactivó con H2O, y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 32-1 (9,38 mg, 55%).
A una solución de 32-1 (1 g, 1,76 mmol) y TsOH (1 g, 5,28 mmol) en DMF (4 mL) y acetona (8 mL) se le agregó 2,2-dimetoxipropano (1,8 g, 17,6 mmol) a TA. La mezcla se calentó a 50 °C durante 3 h. La reacción se inactivó con H2O (50 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 32-2 (520 mg, 87%).
A una solución agitada de 32-2 (10,0 g, 29,6 mmol) en piridina (100 mL), se añadió TBSCl (53,4 g, 35,6 mmol) a TA, y la mezcla se agitó durante 5 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en EA (100 mL). La solución se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El producto bruto se co-evaporó con tolueno 3 veces. A una solución de producto anhidro bruto (2,0 g, 4,43 mmol) en DCM (30 mL) se añadió DMTrCI (2,24 g, 6,65 mmol), 2,4,6-trimetilpiridina (1,07 g, 8,86 mmol) y AgNÜ3 (1,5 g, 8,86 mmol). La mezcla se agitó durante 1,5 h. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con solución de HCI 0,5 N. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión para proporcionar un sólido amarillo bruto. El sólido amarillo bruto (7,2 g, 10 mmol) se trató con una solución de NH4F (7,2 g, 200 mmol) en MeÜH (50 mL) y la mezcla se calentó hasta 50 °C durante 8 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 32-3 (4,8 g, 80%).
A una solución de 32-3 (200 mg, 0,33 mmol) en DCM (5 mL), se añadió TFA^Py (40 gL, 0,328 mmol), DMSÜ (0,15 mg) y DCC (191 mg, 0,99 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante 6 h, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice para proporcionar el producto. A una solución del producto (0,2 g, 0,328 mmol) y HCHÜ (0,2 mL) en 1,4-dioxano (2 mL) se añadió NaÜH (0,4 mL, 2 M) a TA. La mezcla se agitó durante 5 h. Luego, la mezcla se trató con NaBH4 (24 mg, 0,66 mmol) y se agitó durante 3 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 32-4 (125 g, 60%).
A una solución de 32-4 (4 g, 6,25 mmol) en DCM (40 mL) se añadió piridina (10 mL) y BzCl (920 g, 15,6 mmol) a -78 °C. La mezcla se calentó lerntamente a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se inactivó con H2Ü (40 mL) y se extrajo con DCM (3 x 50 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 32-5 (3,25 g, 70%).
A una solución de 32-5 (5,75 g, 7,7 mmol) en DCM (20 mL) se agregó DMTrCl (3,58 g, 11,1 mmol), 2,4,6-trimetil­ piridina (1,87 g, 15,4 mmol) y AgNÜ3 (2,63 g, 15,4 mmol), y se agitó durante 3 h. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con solución de HCl 0,5 N. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 32-6 (6,25 g, 80%).
A una solución de 32-6 (4,3 g, 4,23 mmol) en MeÜH (40 mL), se añadió NaÜMe (0,82 g, 12,6 mmol) a TA, y se agitó durante 3 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (30 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 32-7 (2,89 g, 75%).
A una solución de 32-7 (0,5 g, 0,54 mmol) y piridina (0,478 g, 5,4 mmol) en DCM (4 mL) se agregó lentamente una solución de Tf2Ü (0,201 g, 0,713 mmol) en DCM (3 mL) a -35 °C. La mezcla se calentó hasta -5 °C lentamente. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCÜ3 y se extrajo con DCM (3 x 20 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice para proporcionar el producto. A una solución del producto se añadió TBAF en THF (25 mL, IN) y la mezcla se agitó durante 5 h a TA. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar 32-8 (221 mg, 45%). ESI-MS: m/z 914,4 [M+H]+.
El compuesto 32-8 (2,14 g) se disolvió en HCÜÜH al 80% (10 mL) y se mantuvo a TA durante la noche. El solvente se evaporó a sequedad y el residuo se cristalizó a partir de metanol dos veces. Los cristales se disolvieron en una mezcla de THF y HCl al 36% 4:1 v/v y se dejaron durante la noche. El disolvente se evaporó, y el nucleósido se aisló mediante RP HpLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 60% con HCÜÜH al 0,1% para la elución. Se obtuvo el compuesto 32 (370 mg, 48%). MS: m/z 316,2 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 25
COMPUESTO 17
Una solución de 17-1 (25 mg, 0,04 mmol) en HCOOH ac. Al 80% se mantuvo a TA durante 3 h. La mezcla se concentró y se co-evaporó con tolueno. El producto bruto se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2CL/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener 17-2 (8 mg, 54%).
Se agitó una mezcla de 17-2 (8 mg, 0,02 mmol) en acetonitrilo (0,4 mL) con NMI (15 mL, 8 eq.) y el reactivo de fosforocloridato durante la noche a TA. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. Diluido con EtOAc y agua. La capa orgánica se separó y se lavó con NaHCO3, agua y salmuera, y a continuación se secó (Na2SO4). El residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2CL/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener 17 (9 mg, 66%). MS: m/z = 683 [M+1].
EJEMPLO 26
COMPUESTO 35
Figure imgf000068_0001
A una solución agitada de 32-2 (5,0 mg, 14,83 mmol) en piridina anhidra (50 mL), se añadió TBSCl (3,33 mg, 22,24 mmol) a TA bajo N2. La mezcla se agitó durante a TA 12 h, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 35-1 (5,69 g, 85,1%).
A una solución de PPh3 (2,76 g, 10,6 mmol) y DIAD (2,15 g, 10,6 mmol) en dioxano (20 mL) se añadió EtOH (0,49 g, 10,6 mmol) a TA. Después de agitar por 30 mins, se añadió una solución de 35-1 (2,4 g, 5,3 mmol) en dioxano (10 mL). La solución se agitó a TA durante la noche. Después de que la reacción se completó, la reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3. La solución se extrajo con EA (3 x 40 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 35-2 (2 g, 78,4%) como un sólido blanco.
A una solución de 35-2 (8 g, 16,9 mmol) en diclorometano (60 mL) se añadió AgNO3 (5,67 g, 33,4 mmol), colidina (4,03 g, 33,4 mmol) y MMTrCl (7,7 g, 25 mmol) bajo N2 a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La reacción se monitoreó mediante TLC. Después de completarse, la mezcla se filtró. El filtrado se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 35-3 (10 g, 80%) como un sólido blanco.
A una solución de 35-3 (10 g, 13,3 mmol) en metanol (100 mL) se le añadió NH4F (10 g, 270 mmol) y se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice para obtener (50% PE en EA) para obtener 35-4 como un sólido blanco (5 g, 59%).
A una solución de 35-4 (4 g, 6,27 mmol) y DCC (3,65 g, 18,8 mmol) en DMSO anhidro (40 mL) se añadió TFA^Py (1,21 g, 6,27 mmol) a TA bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua (100 mL) y se diluyó con EA (200 mL). Después de la filtración, el filtro se lavó con solución saturada de NaHCO3. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo (4 g, 6,27 mmol) se disolvió en dioxano (40 mL) y formaldehído al 37% (4 mL) seguido de la adición de solución de NaOH 2N (8 mL) a TA. La mezcla se agitó a 30 °C durante la noche. Luego se añadió NaBH4 (0,7 mg, 18,9 mmol) en porciones a 5 °C y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. La reacción se inactivó con agua y la mezcla se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 35-5 (2,5 g, 60%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 35-5 (2,29 g, 3,43 mmol) en piridina (5 mL) y DCM (20 mL), se añadió BzCl (0,53 g, 3,77 mmol) a -78 °C durante la noche a TA. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con DCM (3 x 40 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 35-6 (1,62 mg, 62%).
A una solución de 35-6 (1,62 g, 2,1 mmol) en diclorometano (20 mL) se añadió AgNO3 (714 mg, 4,2 mmol), colidina (508 mg, 4,2 mmol) y MMTrCl (970 mg, 3,2 mmol) en pequeñas porciones bajo N2 a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La reacción se monitoreó mediante TLC. Después de la filtración, el filtro se lavó con solución acuosa saturada. NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica combinada se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 35-7 (2 g, 91,3%) como un sólido blanco.
A una solución de 35-7 (2,1 g, 2 mmol) en MeOH (30 mL) se agregó NaOMe (220 mg, 4 mmol) a TA y se agitó durante 1 h. Después de que todo el material de partida desapareciera según lo indicado por TLC, la reacción se inactivó con hielo seco y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 35-8 (1,3 g, 69%) como un sólido blanco.
A una solución de 35-8 (1,3 g, 1,38 mmol) en DCM anhidro (15 mL), se añadió piridina (1 mL) se añadió gota a gota Tf2O (585 g, 2,07 mmol) a -20 °C. La reacción se agitó a TA durante 3 h, y se diluyó con DCM (150 mL). La solución se lavó sucesivamente con agua y salmuera. La solución orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo (1,48 g) se disolvió en THF anhidro (15 mL) y se trató con TBAF (3 mL, 1M en THF) a TA. La mezcla se agitó durante la noche. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con EA (3 x 60 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, y se evaporaron a baja presión. El residuo se puríficó en columna de gel de sílice (30% EA en PE) para proporcionar 35-9 (1,25 g, 96%) como un sólido blanco. ESl-LCMS: m/z 942,4 [M+H]+.
Se agregó el compuesto 35-9 (0,55 g, 0,58 mmol) en TFA al 80% ac enfriado con hielo (5 mL) y se mantuvo durante la noche a 5 °C. La mezcla se concentró a presión reducida a 5 °C. El residuo oleoso espeso se co-evaporó varias veces con tolueno y se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-15%) para proporcionar el compuesto 35 (75 mg, 36%). MS: m/z = 358 [M+1].
EJEMPLO 27
COMPUESTO 36
Figure imgf000069_0001
El compuesto 36 (8 mg, 10%) se preparó a partir del compuesto 15 (48 mg) en acetonitrilo (1,5 mL) con el reactivo fosforocloridato (0,14 g) y NMI (0,17 mL) de la misma manera que el compuesto 7. La purificación se realizó mediante RP-HPLC (30-100% B, A: TEAA 50 mM en agua, B: TEAA 50 mM en MeCN). MS: m/z = 665 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 28
COMPUESTO 38
Figure imgf000070_0001
A una solución de 38-1 (17 g, 65,9 mmol) y 2,2-dimetoxipropano (34,27 g, 329,5 mmol, 5 eq.) en acetona (200 mL) se agregó monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (11,89 g, 62,6 mmol, 0,95 eq.). La = mezcla se dejó agitar durante la noche a TA. La reacción se inactivó con. NaHCO3 ac. sat. La mezcla se filtró, y se secó sobre Na2SO4 anhidro. El filtrado se concentró para proporcionar 38-2 (19 g, 97%).
A una solución de 38-2 (6 g, 20,1 mmol) en CH3CN anhidro (80 mL), se añadió IBX (7,05 g, 25,2 mmol, 1,25 eq.) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 1 h y se enfrió hasta 0 °C. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar 38-3 bruto (6 g 100%) como un sólido amarillo.
El compuesto 38-3 (6 g, 20,1 mmol) se disolvió en 1,4-dioxano (60 mL). Se añadieron HCHO al 37% (6 mL, 69 mol) y solución acuosa de NaOH 2M (12 mL, 24 mmol, 1,2 eq.) a 10 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y se neutralizó con AcOH a pH = 7. La mezcla se trató con NaBH4 (1,53 g, 40,2 mmol, 2 eq.) a 10 °C. La mezcla se agitó a TA durante 30 minutos y a continuación se inactivó con NH4Cl ac. sat. La mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (1 -3% MeOH en DCM) para obtener 38-4 (3,5 g, 53%) como un sólido blanco.
A una solución de 38-4 (3,5 g, 10,7 mmol) en piridina anhidra (60 mL) se añadió DMTrCl (3,6 g, 10,7 mmol, 1 eq.) en DCM anhidro (8 mL) a -30 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La solución se trató con MeOH, y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (0,5-2% MeOH en DCM) para obtener 38-5 (3 g, 45%) como un sólido blanco.
A una solución de 38-5 (2,5 g, 4 mmol) en CH2Cl2 anhidro (30 mL) se añadió AgNO3 (0,816 g, 4,8 mmol, 1,2 eq.), imidazol (0,54 g, 8 mmol, 2 eq.) y TBDPSCl (1,18 g, 4,8 mmol, 1,2 eq.) bajo atmósfera de N2. La mezcla se agitó a TA durante 14 h. El precipitado se retiró mediante filtración, y el filtrado se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a baja presión para obtener 38-6 crudo (3,4 g, 100%) como un sólido amarillo.
Se disolvió el compuesto 38-6 (4 g, 4,6 mmol) en solución acuosa de HOAc al 80% (50 mL). La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La solución se trató con MeOH y se concentró a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1 -2% MeOH en DCM) para obtener 38-7 (1,2 g, 45%) como un sólido blanco.
A una solución de 38-7 (1 g, 1,77 mmol) en DMF anhidro (15 mL), se añadió reactivo periodinato de Dess-Martin (1,12 mg, 2,65 mmol, 1,5 eq.) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a TA durante 2,5 h. La solución se inactivó mediante la adición de Na2S2O3 al 4% y se lavó con solución acuosa de bicarbonato de sodio al 4% (50 mL). La mezcla se agitó durante otros 15 min. La fase orgánica se lavó con salmuera diluida y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (20% EtOAc en hexano) para obtener 38-8 (0,7 g, 70%) como un sólido blanco.
A una solución de cloruro de metiltrifenilfosfonio (2,95 g, 8,51 mmol, 4 eq.) en THF anhidro (20 mL) se añadió n-BuLi (3,2 mL, 8,1 mmol, 3,8 eq.) gota a gota a -70 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Una solución de 38-8 (1,2 g, 2,13 mmol) en THF anhidro (3 mL) se añadió gota a gota a 0 °C en atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a 0 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (20% EtOAc en hexano) para obtener 38-9 (0,9 g, 75%) como un sólido blanco.
A una solución de 38-9 (0,85 g, 1,43 mmol) en THF anhidro (50 mL) se añadió n-BuLi (5,7 mL, 14,3 mmol, 10 eq.) -70 °C en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a -70 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (20% EtOAc en hexano) para obtener 38-10 (0,4 g, 50%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 38-10 (0,4 g, 0,714 mmol) en CH3CN anhidro (30 mL), se añadió TPSCl (0,433 g, 1,43 mmol, 2 eq.), DMAP (0,174 mg, 1,43 mmol, 2 eq.) y TEA (1,5 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. Se agregó NH4OH (3 mL) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA (150 mL) y se lavó con agua, HCl 0,1 M y NaHCO3 acuoso saturado. La capa orgánica se lavó con salmuera y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (2% MOH en DCM) para obtener 38-11 (0,2 g, 50%) como un sólido amarillo.
Se disolvió el compuesto 38-11 (1,35 g, 1,5 mmol) en solución acuosa de HOAc al 80% (40 mL). La mezcla se agitó a 60 °C durante 2 h y a se concentró a sequedad. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener el compuesto 38 (180 mg, 35%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 282,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 29
COMPUESTO 39
Figure imgf000071_0001
A una solución de ciclopentanona (6,0 g, 71 mmol) en MeOH (60 mL) se le añadió T s O H ^ O (1,35 g, 7,1 mmol) y trimetoximetano (8 mL) a TA. La solución se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con NaOMe, y la mezcla se extrajo con hexano (30 mL). La capa orgánica se secó y concentró para proporcionar 1,1-dimetoxiciclopentano bruto (9,2 g), que se disolvió en 1,2-dicloroetano (50 mL). A la solución anterior se añadió 38-1 (5,0 g, 19,38 mmol) y T s O H ^ O (0,36 g, 1,9 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 60 °C durante 4 h. La reacción se inactivó con TEA y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (1 % MeOH en DCM) para obtener 39­ 1 (4,77 g, 76%) como un sólido blanco.
A una solución de 39-1 (4,77 g, 14,73 mmol) en DCM anhidro (50 mL) se le añadió DPM (6,56 g, 15,6 mmol) a 0°C. La solución se agitó a TA durante 10 h y se concentró a sequedad. El residuo se suspendió en PE (30 mL) y DCM (5 mL), y el sólido se precipitó. Después de la filtración, el filtrado se concentró para proporcionar el 39-2 bruto (4,78 g, 100%) como una espuma.
El compuesto 39-2 bruto (4,77 g, 14,73 mmol) se re-disolvió en 1,4-dioxano anhidro (50 mL). A la solución se añadió CH2O ac. (37%, 3,6 mL) y NaOH ac. (2M, 11,3 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La mezcla se trató con NaBH4 (1,48 g, 40 mmol) a 0 °C y se agitó durante 0,5 h. La reacción se inactivó con agua y la mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (40% de EA en PE) para obtener 39-3 (2,6 g, 49,9%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 39-3 (5,0 g, 14,1 mmol) en piridina (5,6 g, 71 mmol) y DCM (100 mL) se añadió Tf2O (8,7 g, 31,2 mmol) gota a gota a -35 °C. La mezcla se dejó calentar a 0 °C lentamente y se agitó durante 2 h. La mezcla se inactivó con HCl 0,5M ac. y se separó la capa de DCM. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 39-4 (4,5 g, 52%).
Se disolvió 39-4 (4,5 g, 7,28 mmol) en THF anhidro (50 mL) a 0 °C. La solución se trató con NaH (60% en aceite mineral, 0,32 g, 8 mmol, 1,1 eq.) en porciones, y la mezcla se agitó a TA durante 8 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para proporcionar el producto bruto usado directamente para la próxima etapa. A una solución del producto bruto (2,0 g, 3,6 mmol) en MeCN (10 mL) se añadió LiCl (4,0 mL, 13 M). Se dejó que la reacción procediera durante la noche. Se agregó NaOH acuoso (1N, ~ 2 eq.) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se dividió entre solución de NH4Cl sat. y EA. La capa orgánica se concentró a presión reducida y el producto bruto se purificó en columna de gel de sílice (EA al 20% en PE) para proporcionar 39-6 (0,6 g, 46 %) como un sólido blanco. ESl-MS: m/z 395,0 [M+Na]+.
El compuesto 39-6 (3,0 g, 8,06 mmol) se co-evaporó con tolueno (30 mL). A una solución de 39-6 (3,0 g, 8,06 mmol), DMAP (98 mg, 0,80 mmol) y TEA (2,3 mL, 2 eq.) en DCM (30 mL) se añadió Bz2O (1,82 g, 8,06 mmol) a 0 °C y se agitó durante 3 h. La reacción se inactivó con HCl 1,0M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó en una bomba de alto vacío para proporcionar 39-7 bruto (3,3 g, 80,9%).
A una solución de 39-7 (400 mg, 0,84 mmol) en CH3CN anhidro (3 mL) se añadió TPSCl (507 mg, 1,68 mmol), TEA (169 mg, 1,68 mmol) y DMAP (207 mg, 1,68 mmol), y la mezcla se agitó durante 2 h a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. Se agregó solución de amonio (3,0 mL) a TA y la solución se agitó durante 2 h. La mezcla se lavó con solución de HCl 1,0 M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó con Na2SO4 y se concentró a sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 39-8 (250 mg, 63%).
El compuesto 39-8 (250 mg, 0,53 mmol) en ácido fórmico al 80% (3 mL) se agitó a TA durante 3 h. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. La mezcla se concentró a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 39-9 (130 mg, 66%).
El compuesto 39-9 (270 mg, 0,73 mmol) se disolvió en MeOH/NH3 (10 mL) y la solución se agitó durante 6 h. La mezcla se concentró a baja presión. El producto bruto se lavó con DCM y la solución se liofilizó para proporcionar el compuesto 39 (118 mg, 52%). ESl-MS: m/z 328,3 [M+H Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 30
COMPUESTO 40
El compuesto 40-1 (3,0 g, 8,42 mmol) se co-evaporó con tolueno (30 mL). A una solución de 40-1 (3,0 g, 8,42 mmol), DMAP (103 mg, 0,84 mmol) y TEA (2,5 mL, 2 eq.) en DCM (30 mL) se agregó Bz2O (2,01 g, 8,42 mmol) a 0 °C y se agitó durante 3 h. La solución se inactivó con HCl 1,0 M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó en una bomba de alto vacío para proporcionar 40-2 bruto (3,3 g, 85%).
A una solución de 40-2 (200 mg, 0,43 mmol) en CH3CN anhidro (2 mL) se añadió TPSCl (260 mg, 0,86 mmol), TEA (95 mg, 0,94 mmol) y DMAP (106,4 mg, 0,86 mmol), y la mezcla se agitó durante 2 h a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. Se agregó solución de amonio (1,33 mL) a TA y se dejó agitar durante 2 h. La mezcla se lavó con solución de HCl 1,0 M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 40-3 (150 mg, 75%).
El compuesto 40-3 (100 mg, 0,21 mmol) en ácido fórmico al 80% (2 mL) se agitó a TA durante 3 h. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 40-4 (50 mg, 58%).
El compuesto 40-4 (270 mg, 0,68 mmol) se disolvió en MeOH/NH3 (10 mL) y la solución resultante se agitó durante 6 h. La mezcla se concentró a baja presión. El producto bruto se lavó con DCM y la solución se liofilizó para proporcionar el compuesto 40 (105 mg, 53,8%). ESI-MS: m/z 290,4 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 31
COMPUESTO 41
Figure imgf000073_0001
El compuesto 41-1 (3,0 g, 8,87 mmol) se co-evaporó con tolueno (30 mL). A una solución de 41-1 (3,0 g, 8,87 mmol), DMAP (108 mg, 0,88 mmol) y TEA (2,5 mL, 2 eq.) en DCM (30 mL) se añadió Bz2O (2,01 g, 8,87 mmol) a 0 °C. La solución se agitó durante 3 h. La reacción se inactivó con solución de HCl 1,0 M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó en una bomba de alto vacío para proporcionar 41-2 crudo (3,5 g, 85%) como un sólido.
A una solución de 41-2 (200 mg, 0,45 mmol) en CH3CN anhidro (2 mL) se añadió TPSCl (260 mg, 0,90 mmol), TEA (99 mg, 0,99 mmol) y DMAP (106,4 mg, 0,90 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. Se agregó una solución de amonio (1,33 mL) a TA y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se lavó con solución de HCl 1,0 M y se extrajo con DCM. La capa de DCM se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 41-3 (150 mg, 75%).
El compuesto 41-3 (100 mg, 0,23 mmol) en ácido fórmico al 80% (2 mL) se agitó a TA durante 3 h. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. La mezcla se concentró a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 41-4 (50 mg, 58%).
El compuesto 41-4 (270 mg, 0,72 mmol) se disolvió en MeOH/NH3 (10 mL) y la solución se agitó durante 6 h. La mezcla se concentró a baja presión. El producto bruto se lavó con DCM y la solución se liofilizó para proporcionar el compuesto 41 (105 mg, 53,8%). ESI-m S: m/z 675,4 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 32
COMPUESTO 42
Figure imgf000074_0001
A una solución de 42-1 (600 mg, 1,29 mmol) en CH3CN anhidro (4 mL) se añadió DMAP (315 mg, 2,59 mmol), TEA (391 mg, 3,87 mmol) y TPSCl (782 mg, 2,58 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h bajo N2. Se agregó una solución de NH3 en THF (2 mL) y se agitó durante 1 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 42-2 (370 g, 62%) como un sólido de espuma blanca.
El compuesto 42-2 (370 mg, 1,48 mmol) en amonio metanólico se agitó a TA durante 4 h. La solución se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto 42 (200 mg, 91%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 275,9 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 33
COMPUESTO 43
Figure imgf000074_0002
A una solución de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,6 mmol, preparada a partir de fosfato de bis(POC) (0,2 g) y Et3N (83 gL)) en THF se le añadió 43-1 (74 mg, 0,2 mmol). La mezcla se evaporó y se volvió anhidra por co-evaporación con piridina seguida de tolueno. El residuo se disolvió en THF anhidro (2 mL). Se añadió diisopropiletilamina (0,35 mg, 10 eq.) seguida de BOP-Cl (0,25 mg, 5 eq.) y 3-nitro-1,2,4-triazol (0,11 mg, 5 eq.). La mezcla se agitó a TA durante 90 min, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente de 4-10%) para dar 50 mg (37%) para obtener 43-2.
Una solución de 43-2 (40 mg; 0,06 mmol) en HCOOH al 80% ac. se calentó a 45 °C durante 8 h. La mezcla se evaporó, se co-evaporó con tolueno y se purificó en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) para proporcionar el compuesto 43(35 mg, 91%). MS: m/z = 619 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 34
COMPUESTO 44
Figure imgf000074_0003
El compuesto 44-2 se preparó a partir de 40-1 siguiendo un procedimiento similar para la preparación de 43-2. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con hexanos/EtOAc (gradiente de 35-100%) para obtener 44-2 (0,45 mg, 75%).
Una solución de 44-2 (0,40 g; 0,6 mmol) en HCOOH (15 mL) al 80% ac. se calentó a 45 °C durante 8 h. La mezcla se evaporó, se co-evaporó con tolueno y se purificó en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente 4-10%) para proporcionar el compuesto 44 (0,27 g, 75%). MS: m/z = 603 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 35
COMPUESTO 45
Figure imgf000075_0001
A una solución de 45-1 (3,0 g, 4,7 mmol) en CH3CNpiridina (15 mL/20 mL), se añadió BzCl (0,67 g, 4,7 mmol) a 0 °C lentamente. La mezcla se agitó a 10 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 2% a 50%) para obtener 45-2 (2,6 g, 72%) como un sólido. A una solución de 45-2 (1,0 g, 1,35 mmol) en piridina (8 mL), se añadió DMTrCl (0,64 g, 1,9 mmol). La mezcla se agitó a 20-35 °C durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS y TLC. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice para proporcionar 45-3 (1,5 g), que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 45-3 (1,5 g, 1,35 mmol) en MeOH/THF (1/1, 10 mL), se añadió NaOMe (0,11 g, 2,0 mmol) y se agitó a 40 °C durante 3 h. La reacción se monitoreó mediante TLC. La reacción se inactivó con hielo seco y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se disolvió en DCM (100 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 2% a 50%) para obtener 45-4 (1,0 g, 79%).
A una solución de 45-4 (950 mg, 1,02 mmol) en DCM (5 mL), se añadió piridina (241 gL, 3,05 mmol), y Tf2O (344 mg, 1,22 mmol) a 0°C lentamente. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC y LCMS. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM (3 x 60 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 45-5 crudo (1,08 g, 1,02 mmol), que se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.
A una solución de 45-5 (1,08 g, 1,02 mmol) en THF (6 mL), se añadió TBAF (0,8 g, 3 mmol) y se agitó a 30-40 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La solución se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 2% a 50%) para obtener 45-6 (0,62 g, 65%).
Se agitó una mezcla de 45-6 (0,55 g, 0,59 mmol) en TFA (90%, 5 mL) a 50-60 °C durante 16 h. La mezcla se trató con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar el compuesto 45 (60 mg, 31%). ESI-MS: m/z 324,0 [M+H]+.
EJEMPLO 36
COMPUESTO 46
Figure imgf000076_0001
A una solución de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,33 mmol, preparada a partir de 110 mg de fosfato de bis(POC) y 46 pL de Et3N) en THF se le añadió 46-1 (91 mg, 0,11 mmol). La mezcla se evaporó y se volvió anhidra por co-evaporación con piridina seguida de tolueno. El residuo se disolvió en THF anhidro (1,5 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió diisopropiletilamina (0,19 mg, 10 eq.) seguida de BOP-Cl (0,14 mg, 5 eq.) y 3-nitro-1,2,4-triazol (63 mg, 5 eq.). La mezcla se agitó a 0 °C durante 90 min, se diluyó con EtOAc (30 mL), se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con sistema disolvente CH2Cl2/i-PrOH (gradiente de 2-10%) para obtener 46-2 (13 mg, 10%) y 46-3 (95 mg, 58%)
Una solución de 46-2 y 46-3 (13 mg y 95 mg, respectivamente) en HCOOH al 80% ac. (3 mL) se agitó a TA durante 3 h, a continuación se evaporó y se co-evaporó con tolueno. El residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener el compuesto 46 en rendimiento (42 mg, 94%). MS: m/z=628 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 37
COMPUESTO 47
Figure imgf000076_0002
El compuesto 47-1 (320 mg, 0,51 mmol) se disolvió en una mezcla de CH3COOH/THF/H2O (4/2/1) (7 mL), y la mezcla se agitó a 50 °C durante 2 h. La solución se concentró a sequedad y el residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar el compuesto 47 (38 mg, 31 %) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 296,9 [M+H+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 38
COMPUESTO 48
Figure imgf000077_0001
A una solución agitada de 48-1 (30,0 g, 116 mmol) en piridina anhidra (240 mL) se añadió TIPDSCI (54,98 g, 174 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La reacción se inactivó con agua, y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% de EA en PE) para obtener 48-2 (58 g, 99%).
A una solución agitada de 48-2 (20,0 g, 40 mmol) en DCM anhidro (200 mL) a 0 °C se añadió DHP (33,6 g, 400 mmol) y TFA (6,84 g, 60 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La solución se ajustó a pH = 8 mediante la adición de solución de NaOH 2 N. La mezcla se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y se extrajo con DCM (100 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 48-3 (16 g, 68%).
A una solución de 48-3 (41 g, 70 mmol) en MeOH anhidro (400 mL), se añadió NH4F (51,88 mg, 140 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de MeOH en DCM) para obtener 48-4 (23,1 g, 96%).
A una solución agitada de 48-4 (23,1 g, 67,54 mmol) en piridina anhidra (200 mL) se añadió imidazol (6,89g, 101,32 mmol) y TBSCl (10,92 g, 74,29 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La solución se inactivó con agua, y se concentró a sequedad. El residuo se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 48-5 (23 g, 74%).
A una solución de 48-5 (27,56 g, 60,44 mmol) en MeCN anhidro (560 mL), se añadió DMAP (18,43 g, 151,1 mmol) y PhOCSCl (14,55 g, 84,61 mmol) a 0 °C en N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche y la reacción se inactivó con agua. La mezcla se extrajo con EA. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener 48-6 (23 g, 64%).
A una solución de 48-6 (14,5 g, 24,5 mmol) en tolueno anhidro (700 mL), se añadió AlBN (1,21 g, 7,3 mmol) y Bu3SnH (10,73 g, 36,74 mmol) en tolueno (10 mL). Se burbujeó N2 en la solución durante 30 minutos. La mezcla se calentó hasta 135 °C durante 2 h. Se añadió CsF acuoso saturado y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA (150 mL) y se lavó sucesivamente con agua, solución acuosa saturada NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se eliminó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener 48-7 (10,5 g, 97%).
A una solución de 48-7 (21 g, 47,73 mmol) en MeOH anhidro (200 mL), se añadió NH4F (35,32 mg, 950 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 1 h y a continuación se concentró al vacío. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de MeOH en DCM) para obtener 48-8 (14 g, 90%).
Se agregó TFA^Py (2,37 g, 12,27 mmol) a una mezcla de 48-8 (4 g, 12,27 mmol) y DCC (7,58 g, 36,81 mmol) en DMSO anhidro (40 mL) a TA en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. Se agregó formaldehído al 37% (10 mL, 115 mmol) a TA y se agitó durante 15 minutos, seguido de tratamiento con NaOH 2N (20 mL, 40 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante la noche y se neutralizó con AcOH hasta pH = 7. Luego se añadió NaBH4 (1,87 mg, 49,08 mmol) en porciones a 5 °C y la mezcla se agitó a TA durante 30 min. La mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 48-9 (2 g, 46%) como un sólido blanco.
A una solución de 48-9 (2 g, 5,62 mmol) en CH3CN anhidro (8 mL) se añadió piridina (10 mL) y BzCl (0,79 g, 5,62 mmol) en una solución de DCM (2 mL) a 0°C bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se concentró a baja presión. El residuo se diluyó con EA (50 mL) y se lavó sucesivamente con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (3% de MeOH en DCM) para obtener 48-10 (1,6 g, 62%).
A una solución agitada de 48-10 (1,6 mg, 3,48 mmol) en piridina anhidra (16 mL), se añadió MMTRCl (1,61 mg, 5,22 mmol) a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se concentró al vacío. El residuo se diluyó con EA (50 mL) y se lavó sucesivamente con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión para obtener 48-11 bruto (2,55 g, 100 mmol), que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 48-11 (2,55 g, 3,48 mmol) en MeOH anhidro (50 mL), se añadió NaOCH3 (0,28 mg, 5,23 mmol). La mezcla se agitó a 45 °C durante 2 h, se burbujeó hasta pH = 7 usando hielo seco y se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% de MeOH en DCM) para obtener 48-12 (0,93 g, 42%).
A una solución de 48-12 (0,93 mg, 1,48 mmol) en DCM (10 mL), se añadió piridina (1,17 pL, 14,8 mmol) a -30 °C. Se añadió Tf2O (0,63 g, 2,22 mmol) en Dc M (3 mL) gota a gota lentamente. La mezcla se agitó a -30 °C-0 °C durante 20 mins y a 0 °C durante 10 mins . La reacción se inactivó con agua y la mezcla se extrajo con DCM (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 48-13 crudo (1,13 g, 100%), que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 48-13 (1,13 g, 1,48 mmol) en THF anhidro (10 mL), se añadió TBAF (3,86 g, 14,8 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con agua, y la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (3% de MeOH en DCM) para obtener 47-1 (0,42 g, 45%).
A una solución de 47-1 (50 mg, 0,079 mmol) en CH3CN anhidro (1 mL) se añadió TPSCl (48,07 mg, 0,16 mmol), DMAP (19,36 mg, 0,16 mmol) y NEt3 (0,2 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. Se agregó amoníaco acuoso al 28% (0,4 mL) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA (150 mL) y se lavó sucesivamente con agua, NaHCO3 sat. Ac. y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener 48-14 (40 mg, 80%).
El compuesto 48-14 (320 mg, 0,51 mmol) se disolvió en HCOOH al 80% (6 mL) y la mezcla se agitó a 10 °C durante 1 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar el compuesto 48 (43 mg, 31 %) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 273,9 [M+H]+, 547,1 [2M+H]+.
EJEMPLO 39
COMPUESTO 49
Figure imgf000079_0001
A una solución de 49-1 (20,0 g, 70,2 mmol) en piridina anhidra (200 mL), se añadió imidazol (19,1 g, 280 mmol) y TBSCI (42,1 g, 281 mmol) a 25 °C. La solución se agitó a 25 °C durante 15 h y a continuación se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y a continuación se filtró. El filtrado se concentró a sequedad para proporcionar el derivado protegido de TBS (36,4 g, 99%). El derivado protegido de TBS (36,5 g, 71,1 mmol) se disolvió en THF (150 mL). Se añadieron H2O (100 mL) y a continuación AcOH (300 mL). La solución se agitó a 80 °C durante 13 h. La reacción se enfrió hasta TA y a continuación se concentró a sequedad a presión reducida para proporcionar 49-2 (31,2 g, 61%) como un sólido blanco.
A una solución de 49-2 (31,2 g, 78,2 mmol) en piridina anhidra (300 mL), se añadió Ac2O (11,9 g, 117,3 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 18 h. Se añadieron MMTrCl (72,3 g, 234,6 mmol) y AgNO3 (39,9 g, 234,6 mmol) y la solución se agitó a 25 °C durante 15 h. Se añadió H2O para inactivar la reacción y la solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con agua. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó mediante gel de sílice (DCM:MeOH = 200:1 a 50:1) para proporcionar el derivado de amina protegido de MMTr (35,2 g, 63%). El derivado de amina protegido de MMTr (35,2 g, 49,3 mmol) se disolvió en NH3/MeOH (300 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 h. La solución se evaporó a sequedad y se purificó mediante una columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1 a 50:1) para proporcionar 49-3 como un sólido amarillo (28,6 g, 87%).
A una solución de 49-3 (12,0 g, 17,9 mmol) en DCM anhidro (200 mL), se añadió periodinano de Dess-Martin (11,3 g, 26,8 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h y a continuación se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con una solución de Na2S2O3 y NaHCO3 saturado. La fase orgánica se lavó con salmuera (2X) y se secó con Na2SO4 anhidro. El solvente se evaporó para proporcionar el aldehido (12,6 g), que se utilizó directamente en la siguiente etapa. A una solución de aldehido (12,6 g, 18,0 mmol) en 1,4-dioxano (120 mL), se añadió HCHO al 37% (11,6 g, 144 mmol) y una solución acuosa de NaOH 2N (13,5 mL, 27 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante la noche. Se añadieron EtOH (60 mL) y NaBH4 (10,9 g, 288 mmol) y la reacción se agitó durante 30 minutos. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. y se extrajo a continuación con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 200:1 a 50:1) para dar 49-4 (7,5g, 59%) como un sólido amarillo.
A una solución de 49-4 (3,8 g, 5,4 mmol) en DCM (40 mL), se añadió piridina (10 mL) y DMTrCl (1,8 g, 5,4 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a 25 °C durante 1 h. Se añadió MeOH (15 mL) y la solución se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH = 200:1 a 50:1) para proporcionar el derivado protegido de MMTr (3,6 g, 66%) como un sólido amarillo. A una solución de derivado protegido de MMTr (3,6 g, 3,6 mmol) en piridina anhidra (30 mL), se añadió TBDPSCl (2,96 g, 10,8 mmol) y AgNO3 (1,84 g, 10,8 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 15 h. La mezcla se filtró y se concentró. La mezcla se disolvió en EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y a continuación se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 200:1 a 50:1) para proporcionar el derivado protegido de TBDPS (3,8 g, 85,1%) como un sólido. A una solución del derivado protegido de TBDPS (3,6 g, 2,9 mmol) en DCM anhidro (50 mL) se añadió G2CHCOOH (1,8 mL) en DCM anhidro (18 mL). La mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. Se añadió G2CHCOOH (3,6 mL) a -78 °C. La mezcla se agitó a -10 °C durante 30 minutos. La mezcla se inactivó con. NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y a continuación se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH = 200:1 a 50:1) para proporcionar 49-5 (2,2 g, 80%).
A una solución enfriada con hielo de 49-5 (800 g, 0,85 mmol) en DCN anhidro (20 mL) se le agregó piridina (336 mg, 4,25 mmol) y Tf2O (360 g, 1,28 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 15 minutos. La reacción se inactivó con agua helada y se agitó durante 30 min. La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera (50 mL) y se secó sobre MgSO4. El solvente se evaporó para proporcionar el derivado de bis(triflato) bruto. Al derivado de bis(triflato) (790 mg, 0,73 mmol) en DMF anhidro (35 mL) se le agregó LiCl (302 mg, 7,19 mmol). La mezcla se calentó a 40°C y se agitó durante la noche. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La solución se lavó con salmuera y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1) para proporcionar 49-6 (430 mg, 61%).
A 49-6 (470 mg, 0,49 mmol) en MeOH (85 mL) se agregó NH4F (8,1 g, 5,92 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM/MeOH = 20:1) para obtener el diol (250 g, 84%) como un sólido blanco. El diol (130 mg, 0,21 mmol) en ácido fórmico (5 mL) se agitó a 25 °C durante la noche. La solución se concentró a sequedad y el residuo en MeOH (30 mL) se agitó a 70 °C durante la noche. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS y HPLC. El solvente se retiró y el producto bruto se lavó con EtOAc para proporcionar el compuesto 49 (58 mg, 81%) como un sólido blanco. 1H RMN (DMSO-ate, 400 MHz) 510,73 (a, 1H), 7,98 (s, 1H), 6,58 (a, 2H), 6,08 (c, J = 4,8, 9,2 Hz, 2H), 5,64 (dt, J = 5,6, 52,8 Hz, 1H), 5,40 (m, 1H), 4,52 (m, 1H), 3,80-3,82 (m, 2H), 3,64 (c, 2H). ESI-MS: m/z 333,8 [M+H]+, 666,6 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 40
COMPUESTO 50
El compuesto 50-1 (5,0 g, 8,5 mmol) y 6-cloropurina (3,0 g, 17,7 mmol) se co-evaporaron con tolueno anhidro 3 veces. A una suspensión agitada de 50-1 y 6-cloropurina en MeCN anhidro (50 mL) se añadió DBU (7,5 g, 49 mmol) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 15 minutos y se añadió TMSOTf (15 g, 67,6 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 15 minutos hasta que se formó una solución transparente. La mezcla se calentó a 70°C y se agitó durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se enfrió a TA y se diluyó con EA (100 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 6% a 50%) para obtener 50-2 (2,5 g, 46,3%) como una espuma blanca.
El compuesto 50-2 (3,0 g, 4,8 mmol) se trató con NH3 en MeOH (8 N, 20 mL) en autoclave a 40-60 °C durante 12 h. La mezcla se evaporó a baja presión y el residuo se purificó en columna de gel de sílice (MeOH en EA de 0 a 10%) para proporcionar 50-3 (1,0 g, 71%) como una espuma blanca.
A una solución de 50-3 (4,3 g, 14,8 mmol) en acetona/DMF (4/1, 40 mL) se agregó T s O H ^ O (8,4 g, 0,044 mol) y 2,2-dimetoxipropano (30 g, 0,296 mol), y la mezcla se agitó a 60-70 °C durante 12 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó en columna de gel de sílice (EA en PE de 50% a 100%) para proporcionar 50-4 (5,0 g, 83%).
A una solución de 50-4 (10,5 g, 31,7 mmol) en piridina (50 mL), se añadió TBSCl (5,3 g, 34,9 mmol), y la mezcla se agitó a TA durante 12 h. El solvente se eliminó a baja presión y el residuo se disolvió en DCM (100 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice para proporcionar 50-5 (8,4 g, 60%), que se utilizó sin purificación adicional.
El compuesto 50-5 (8,4 g, 18,8 mmol) se co-evaporó con piridina. A una solución agitada de 50-5 (8,4 g, 18,8 mmol) en piridina (35 mL), se añadió DMTrCl (8,1 g, 26,4 mmol). La mezcla se agitó a 30-40 °C durante 12 h y bajo H2. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en DCM (150 mL). La solución se lavó con solución saturada de NaHCO3, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 10% a 20%) para obtener 50-6 (10,8 g, 80%) como un sólido.
A una solución de 50-6 (11,5 g, 0,016 mol) en THF (100 mL) se agregó TBAF (4,62 g, 0,018 mol) a TA y la mezcla se agitó durante 4 h. El solvente se evaporó a baja presión y la mezcla se disolvió en DCM (150 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (Ea en PE de 50% a 100%) para obtener 50-7 (8,8 g, 91%). ESI-MS: m/z 604,4 [M+H]+.
A una solución de 50-7 (4,4 g, 7,3 mmol) en dioxano (50 mL) se agregó DCC (4,5 g, 21,9 mmol), DMSO (2,5 mL), TFA^Py (1,48 g, 7,65 mmol) a 0 °C. La mezcla se calentó lentamente a TA y se agitó durante 4 h. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en columna de gel de sílice para proporcionar 50-8 (4,4 g, 7,3 mmol), que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 50-8 en dioxano (40 mL) se le agregó agua (20 mL), HCHO (37 %, 7 mL) y NaOH (1N, 15 mL). La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla se trató con NaBH4 (1,1 g, 29,2 mmol) lentamente y se agitó durante 30 minutos. La mezcla se ajustó a pH = 7-8 mediante adición lenta de solución de HCl (1M) y se extrajo con EA (150 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 45-1 (3,0 g, 65%). ESI-MS: m/z 633,9 [M+H]+.
A una solución de 45-1 (1,5 g, 2,37 mmol) en piridina anhidra (30 mL) se añadió DMT rCl (3,6 g, 10,7 mmol) a -30 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La solución se inactivó con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 50-9 (3 g, 45%) como un sólido amarillo.
A una solución de 50-9 (1,1 g, 1,18 mmol) en piridina (10 mL), se añadió imidazol (0,24 g, 3,53 mmol) y TBSCl (0,35 g, 2,35 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 12 h. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 50-10 (0,83 g, 67%).
A una solución de 50-10 (1,1 g, 1,05 mmol) en DCM (12 mL) se añadió CbCHCOOH (0,5 mL) a -70 °C, y se agitó durante 1 h. La solución se trató con CbCHCOOH (1 mL) en DCM (10 mL) a -70 °C, y la mezcla se agitó a -70— 10 °C durante 20 mins. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM (3 x 40 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 15% a 30%) para obtener 50-11 (0,58 g, 74%).
A una solución de 50-11 (200 mg, 0,268 mmol) y piridina (53 mg, 0,67 mmol) en DCM anhidro (5 mL) se agregó Tf2Ü (90 mg, 0,32 mmol) a -30 °C. La mezcla se agitó durante 1 h y se calentó lentamente hasta TA. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCCfe y se extrajo con DCM (3 x 30 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. Se utilizó 50-12 bruto (200 mg, 0,27 mmol) sin purificación adicional.
A una solución de 50-12 (200 mg, 0,27 mmol) en DMF (5 mL) se agregó LiCl (45 mg, 1,07 mmol) y se agitó a 30-40 °C durante 12 h. El solvente se evaporó a baja presión y el residuo se disolvió en DCM (10 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. Se utilizó 50-13 bruto sin purificación adicional.
Se agitó una mezcla de 50-13 (245 mg, 0,32 mmol) y TBAF (200 mg, 0,7 mmol) en THF a 30 °C durante 1 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en DCM (15 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 2% a 50%) para obtener 50-14 (150 g, 72%). ESI-MS: m/z 652,3 [M+H]+.
El compuesto 50-14 (0,2 mmol) se disolvió en TFA al 50% (10 mL) en metanol, y la mezcla se mantuvo a TA durante la noche. El solvente se evaporó y se co-evaporó con mezcla de metanol/tolueno para eliminar restos de ácido. El residuo se disolvió en trietilamina al 20% en metanol, se mantuvo durante 15 minutos y se evaporó. El producto se aisló mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 60% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. Se obtuvo el compuesto 50 (45 mg, 67%). MS: m/z 338,0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 41
COMPUESTO 51
Figure imgf000082_0001
A una solución de 51-1 (12,3 g, 19,9 mmol) en DMF (50 mL) se añadió NaH (800 mg, 20 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se trató con CsF (30,4 g, 200 mmol) y a continuación se agitó a TA durante 3 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 51­ 2 (4,1 g, 61%) como un sólido blanco.
A una solución de 51-2 (4,1 mg, 12,1 mmol) en THF (120 mL) se agregó solución de NaCH (1N, 13 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA y se agitó durante 3 h. La solución se neutralizó con 0,5 M HCl aq. a pH ~7. La mezcla se repartió entre EA y agua. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener 51-3 (3,1 g, 72%) como un sólido blanco. ESI-MS:m/z 379,1 [M+Na]+.
El compuesto 51-3 (0,2 mmol) se disolvió en HCCCH al 80% (10 mL) y la mezcla se calentó a 45 °C durante 24 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con mezcla de metanol/tolueno para eliminar restos de ácido. El residuo se disolvió en trietilamina al 20% en metanol, se mantuvo durante 15 minutos y se evaporó. El compuesto 51 (68%) se aisló mediante cromatografía en gel de sílice en gradiente de metanol en DCM del 5% al 20%. MS: m/z 289,0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 42
COMPUESTO 52
Figure imgf000083_0001
Se agitó una mezcla de 52-2 (1,2 g; 4 mmol) y Nal (0,6 g; 4 mmol) en acetona (13 mL) a TA durante 1 h. Se añadieron el compuesto 52-1 (1 g; 3 mmol) y K2CO3 (2,07 g; 45 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 24 h. El precipitado se filtró, y el filtrado se evaporó. La purificación del residuo en sílice (columna de 25 g) con hexanos/EtOAc (gradiente del 30-100%) produjo 52-3 como una espuma incolora (1,14 g; 64%).
A una solución de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (2,3 mmol, preparado a partir de fosfato de bis(POC) (0,75 g) y Et3N (0,32 mL)) en THF se le añadió 52-3 (1,14 g; 1,9 mmol). La mezcla se evaporó y se volvió anhidra por co-evaporación con piridina seguida de tolueno. El residuo se disolvió en THF anhidro (20 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió diisopropiletilamina (1,0 mg, 2 eq.) seguida de BOP-Cl (0,72 mg, 1,5 eq.) y 3-nitrol , 2,4-triazol (0,32 mg, 1,5 eq.). La mezcla n se agitó a 0 °C durante 90 min, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 25 g) con CH2Cl2/i-PrOH (gradiente de 3-10%) para dar 1,2 mg (70%) de 52-4.
Una solución de 52-4 (1,2 g; 1,3 mmol) en HCOOH al 80% ac. se agitó a TA durante 2 h y a continuación se concentró. El residuo se evaporó conjuntamente con tolueno y a continuación con MeOH que contenía una pequeña cantidad de Et3N (2 gotas). La purificación en sílice (columna de 25 g) con CH2Cl2/i-PrOH (gradiente de 4-10%) produjo 52-5 (0,96 g, 85%).
A una solución de 52-5 (0,52 g; 0,57 mmol) en EtOH (25 mL) se añadió HCl (4 N/dioxano; 0,29 mL, 2 eq.) y Pd/C al 10% (25 mg). La mezcla se agitó bajo H2 (presión normal) durante 1 h. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de Celite y el filtrado se evaporó para proporcionar el compuesto 52 como su sal de HCl (4,2 g; 96%). MS: m/z = 732 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 43
COMPUESTO 53
Figure imgf000084_0001
El compuesto 53-2 (0,20 g, 64%) se preparó de la misma manera a partir de 53-1 (0,16 g; 0,49 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,74 mmol) con DIp Ea (0,34 mL), BopCl (250 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (112 mg) en THF (5 mL) siguiendo el procedimiento para la preparación de 52-4.
Una solución de 53-2 (0,20 g; 0,31 mmol) en HCOOH al 80% ac. se agitó a TA durante 2 h y a continuación se concentró. El residuo se evaporó conjuntamente con tolueno y a continuación con MeOH que contenía una pequeña cantidad de Et3N (2 gotas). La purificación en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-10%) fue seguida por purificación con RP-HPLC en 5 corridas en una columna Synergi Hydro RP 250 x 30 mm (Phenomenex P/N 00G-4375-U0-AX) usando H2O y ACN ambos TEAA 50 mM. El gradiente fue 25-75% ACN en 20 minutos a 24 mL/min, detección de 254 nM. El producto fue eluido a los 16,0 minutos. Las fracciones puras se agruparon y liofilizaron. TEAA se retiró disolviendo el producto en DMSO (2 mL) e inyectando el producto en la misma columna usando solo H2O y ACN. Las fracciones puras se agruparon y liofilizaron para producir el compuesto 53 (18 mg). MS: m/z = 1197 (2M+1).
EJEMPLO DE REFERENCIA 44
COMPUESTO 54
Figure imgf000084_0002
Se agregó cloroformiato de clorometilo (112 mmol; 10,0 mL) a una solución enfriada con hielo de 2-metoxietanol (97 mmol; 7,7 mL) en diclorometano (DMC) (100 mL) seguido de piridina (9,96 mL) a 0 °C. Después de agitar durante la noche a TA, la mezcla se lavó dos veces con HCl 0,5 M, seguido de agua y bicarbonato de sodio acuoso. La mezcla se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, se evaporó al vacío y se destiló al vacío para proporcionar 54-2 como un aceite incoloro (13,0 g).
El compuesto 54-2 (5,7 g) fue añadido a una solución de yoduro de sodio (21,07 g) en acetona (45 mL). Después de agitar 20 a 40 °C durante 2,5 h, la mezcla se enfrió en hielo, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se absorbió en diclorometano, se lavó con bicarbonato de sodio acuoso y tiosulfato de sodio, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar 54-3 como un aceite amarillo claro de 54-3 (8,5 g), que se utilizó sin purificación adicional.
Se agitó una mezcla de ácido fosfórico (cristal, 2,4 g) y trietilamina (6,6 mL) en alcohol bencílico (13 g; 12,5 mL) a TA hasta que el ácido fosfórico se disolvió completamente. Se agregó tricloroacetonitrilo (17,2 g; 11,94 mL) y la mezcla se agitó a TA durante 18 h. El disolvente y el exceso de tricloroacetonitrilo se retiraron a presión reducida. El residuo se disolvió en agua (alrededor de 200 mL) y la solución acuosa se lavó con éter (3 x 50 mL). Se obtuvo ácido bencilfosfórico (sal de trietilamina) después de la liofilización como un semisólido amarillento (7,15 g). Se trató una solución de ácido bencilfosfórico (sal de TEA, 1,6 g) en MeOH (90 mL) y agua (30 mL) con Dowex 50WX2-400 ("153 mL" de resina sedimentada) a TA durante 18 h. La resina se retiró mediante filtración y se añadió polvo de carbonato de plata (1,25 g) al filtrado. Después de que la suspensión se calentó a 80 °C durante 1 h, todo el solvente se retiró a presión reducida a sequedad. El sólido se utilizó sin purificación adicional.
Se agregó acetonitrilo seco (25 mL) al ácido bencilfosfórico (sal de plata) seguido de la adición de 54-3 (3,12 g; 12 mmol). La suspensión se agitó a TA durante la noche. Después de retirar el sólido por filtración, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando hexano/acetato de etilo (3:1 v/v) como el eluyente para proporcionar 54-4 como un líquido incoloro (860 mg, 50%).
El compuesto 54-4 (750 g, 1,65 mmol) se disolvió en metanol (10 mL). Se añadieron Pd-sobre-carbono (85 mg) y TEA (1 eq.). El matraz se cargó con gas hidrógeno durante 1 h. El catalizador se filtró y el solvente se eliminó al vacío para proporcionar 54-5 (sal de trietilamonio) (510 mg) que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional.
El compuesto 54-6 (320 mg; 0,9 mmol) y 54-5 (510 mg, 1,35 mmol; 1,5x) se co-evaporaron dos veces con piridina y dos veces con tolueno. Los compuestos 54-5 y 54-6 se disolvieron en THF (8 mL) a 0 °C. Se añadieron diisopropiletilamina (DIPEA) (0,62 mL; 4 eq.), cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil) fosfínico (Bop-Cl) (0,45 g; 2 eq.), nitrotriazol (0,2 g, 2 eq.). La mezcla se mantuvo a 0 °C durante 2 h y a continuación se diluyó con EA (50 mL). La mezcla se extrajo a continuación con bicarbonato de sodio saturado (2 x 50 mL) y se secó sobre sulfato de sodio. Los solventes se retiraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de EA de 10 a 100% en hexano para proporcionar 54-7 purificado (430 mg, 0,6 mmol).
Se disolvió 54-7 purificado en HCOOH ac. al 80% (20 mL) y se mantuvo a 45°C durante 18 h. Después de enfriar a TA, el solvente se retiró al vacío. El residuo se co-evaporó con tolueno (3 x 25 mL). El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de 0 a 20% de metanol en DCM para proporcionar el compuesto purificado 54 (200 mg , 0,3 mmol). 1H-RMN (CDCh): ó 9,28 (s, 1H), 7,54 (d, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,65-5,81 (m, 5H), (d, 2H), 4,76 (dd, 2H), 4,44-4,46 (m, 1H), 4,35-4,40 (m, 5H), 4,22 (2H), 4,04 (1H), 3,65 (t, 4H), 3,39 (6H), 1,8 (s, 1 H), 1,24 (s, 3H). 31P-RMN (CDCh): 5 - 4,09 ppm.
EJEMPLO 45
COMPUESTO 55
El compuesto 55-2 (158 mg, 50%) se preparó a partir de 55-1 (0,21 g, 0,35 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,54 mmol) con DIPEA (0,18 ml), BopCl (178 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (80 mg) en THF (4 mL).
Una solución de 55-2 (158 mg) en acetonitrilo (1 mL) y HCl (4 N/dioxano; 85 pL) se agitó a TA durante 30 min. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró. El residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 3-10%) para obtener 55 (85 mg, 76%). MS: m/z = 656 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 46
COMPUESTO 56
Figure imgf000086_0001
A una solución de 49-3 (300 g, 0,4 mmol) y piridina (80 g, 1,0 mmol) en DCM (5 mL) se agregó Tf2O (136 g, 0,48 mmol) en una solución de DCM (1 mL) gota a gota a -30 °C. La mezcla se agitó a -30 °C a 0 °C durante 20 mins. La mezcla se inactivó con agua y se extrajo con DCM (20 mL). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó para proporcionar 56-1 bruto (352,8 mg, 0,4 mmol), que se utilizó sin purificación adicional.
A una solución de 56-1 (352,8 g, 0,4 mmol) en DMF (5 mL), se añadió Nal (480 g, 3,2 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 10 h. La solución se inactivó con agua y se extrajo con DCM (20 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-TLC (30% EA en PE) para proporcionar 56-2 (270 mg, 31%).
A una solución de 56-2 (600 g, 0,7 mmol) en tolueno anhidro (30 mL), se añadió AlBN (34 g, 0,21 mmol) y Bu3SnH (307,7 g, 1,05 mmol) en tolueno (10 mL). La mezcla se burbujeó con N2 durante 30 minutos y se calentó a 135 °C durante 2 h. La mezcla se trató con solución acuosa saturada CsF, y a continuación se agitó durante 2 h. La mezcla se diluyó con EA (100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de EA en PE) para obtener 56-3 y un subproducto (400 g, 72%).
Una mezcla de 56-3 (400 mg, 0,55 mmol) y en TFA al 90% (10 mL) se agitó a 50 °C durante 4 h. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se trató con MeOH (5 mL) y se concentró a presión reductora. El residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar el compuesto 56 (46 mg, 27%). ESI-MS: m/z 306,1 [M+H]+.
EJEMPLO 47
COMPUESTO 57
Figure imgf000087_0001
El compuesto 57-2 (120 g, 72%) se preparó de la misma manera a partir de 57-1 (0,11 g; 0,18 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,35 mmol) con DIp Ea (0,15 mL), BopCl (114 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (51 mg) en THF (2,5 mL) siguiendo el procedimiento según descrito para 52-4 a partir de 52-3.
El compuesto 57 (14 mg, 77%) se preparó a partir de 57-2 (25 mg) en acetonitrilo (0,1 mL) y HCl/dioxano 4 N (8 pL) usando el procedimiento descrito para el compuesto 55. MS: m/z = 658 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 48
COMPUESTO 60
Figure imgf000087_0002
A una solución agitada de uracilo (21 g, 188 mmol) en MeCN anhidro (200 mL) se agregó BSA (110 g, 541 mmol) y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 h. Se enfrió la mezcla a TA y se trató con 60-1 (55 g, 93,2 mmol) y TMSOTf (145 g, 653 mmol). La mezcla se mantuvo a reflujo durante la noche. Después de que el material de partida desapareció, la reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 60-2 (38 g, 70%) como un sólido blanco.
El compuesto 60-2 (35 g, 0,06 mol) se trató con NH3 en MeOH (7N, 200 mL) a TA. La mezcla se agitó durante 24 h a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante LCm S. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se lavó con DCM para proporcionar 60-3 (13 g, 81%) como un sólido blanco.
A una solución de ciclopentanona (6 g, 8,33 mmol) y trimetoximetano (8 mL) en MeOH (60 mL) se agregó TsOH (1,35 g, 7,1 mmol) a TA y la mezcla se agitó 2 h. El resultado se inactivó con NaOMe (0,385 g, 7,12 mmol) y se extrajo con n-hexano (30 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 1,1-dimetoxiciclopentano. A una solución de 60-3 (30 g, 0,11 mol) y 1,1-dimetoxiciclopentano (57 g, 0,44 mol) en 1,2-dicloroetano (200 mL) se agregó TsOH (2,1 g, 0,011 mol) y la mezcla se calentó a 60 °C durante la noche. La reacción se inactivó con trietilamina y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se lavó con MeOH para proporcionar 60-4 (30 g, 82%).
A una solución de 60-4 (10 g, 30 mmol) en CH3CN anhidro (100 mL), se añadió IBX (8,4 g, 30 mmol, 1,05 eq.) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 12 h y a continuación se enfrió a 0 °C. El precipitado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró para proporcionar 60-5 bruto (10 g, 100%) como un sólido amarillo.
El 60-5 bruto (10 g, 30 mmol) se disolvió en 1,4-dioxano (100 mL). Se añadieron HCHO al 37% (10 mL) y solución acuosa de NaOH 2N (20 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante la noche y se ajustó a pH = 7. La mezcla se trató con NaBH4 (4,44 g, 120 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a TA durante 30 minutos y a continuación se inactivó con solución acuosa saturada de NH4CL La mezcla se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4, y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1 -3% de MeOH en DCM) para obtener 60-6 (5,5 g, 50%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 60-6 (5,0 g, 13,8 mmol) y piridina (5 mL) en DCM (20 mL) se añadió Tf2O (8,5 g, 30,3 mmol) gota a gota a -70 °C. La solución se calentó a 0 °C lentamente, se agitó a 0 °C durante 0,5 h y se lavó con HCl (0,5 M). La capa de DCM se concentró a sequedad a baja presión, y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 60-7 (4,5 g, 52%) como un sólido blanco.
A una solución de 60-7 (3,0 g, 4,8 mmol) en MeCN (10 mL), se añadió TBAF (5,0 g, 19,2 mmol). Se dejó que la reacción procediera durante la noche. La reacción se monitoreó mediante HPLC y LCMS. Se agregó hidróxido de sodio acuoso (1N ~2eq.) y la solución se agitó durante 1 h. La mezcla se dividió entre solución saturada de cloruro de amonio y EA. La capa orgánica se separó, y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 60-8 (0,8 g, 46%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 367,0 [M+H]+, 389,0 [M Na]+.
El compuesto 60-8 (0,2 mmol) se disolvió en HCOOH al 80% (10 mL) y la mezcla se calentó a 45 °C durante 24 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con mezcla de metanol/tolueno para eliminar restos de ácido. El residuo se disolvió en trietilamina al 20% en metanol, se mantuvo durante 15 minutos y se evaporó. El compuesto 60 (65-68%) se aisló mediante cromatografía en gel de sílice en gradiente de metanol en DCM del 5% al 20%. MS: m/z 321,0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 49
COMPUESTO 63
Figure imgf000088_0001
Se agitó una mezcla del compuesto 45 (30 mg, 0,09 mmol), monohidrato de PTSA (18 mg, 1 eq.) y ortoformiato de trimetilo (0,3 mL; 30 eq.) en dioxano (1 mL) 1 d a TA. La reacción se neutralizó con NH3/MeOH y a continuación se filtró. El filtrado se disolvió en una mezcla de THF (0,5 mL) y AcOH ac. al 80% (0,25 mL). La solución se mantuvo durante 1 h a TA y a continuación se evaporó. El residuo se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-15%) para obtener 63-1 (30 mg, 91%).
El compuesto 63-2 (28 g, 52%) se preparó de la misma manera a partir de 63-1 (30 g; 0,08 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,12 mmol) con DIPEA (56 ^L), BopCl (40 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (18 mg) en THF (1 mL) siguiendo el procedimiento para preparar 52-4 a partir de 52-3. La purificación se realizó con CH2Cl2/MeOH (4-10% de gradiente).
El compuesto 63 (15 mg, 67%) se preparó a partir de 63-2 (24 mg) usando el procedimiento para preparar 52-5. La purificación se realizó con CH2Cl2/MeOH (gradiente 4-10%). MS: m/z = 636 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 50
COMPUESTO 64
Figure imgf000089_0001
El compuesto 64-1 (8 mg, 40%) se preparó a partir del compuesto 50 (17 mg) y trimetiloroformiato (0,15 mL) con PTSA monohidrato (9 mg) en dioxano (0,5 mL) de la misma manera que 63-1.
El compuesto 64-2 (10 g, 72%) se preparó de la misma manera a partir de 64-1 (8 g; 0,02 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,036 mmol) con DIPEA (14 |jL), BopCl (10 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (5 mg) en THF (0,4 mL) de la misma manera que 63-2.
El compuesto 64 (15 mg, 67%) se preparó a partir de 64-2 (24 mg) de la misma manera que 63. MS: m/z = 652 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 51
COMPUESTO 65
Figure imgf000089_0002
Se trató carbonato de clorometil metilo comercialmente disponible (5,0 g) con NaI para proporcionar 65a (5,38 g). Se hizo reaccionar bencilfosfato (sal de plata) y 65a para proporcionar 65b purificado (1,5 g) como se describió para el compuesto 54. 1H-RMN (CD3CN): 57,39-7,42 (m, 5H), 5,60 (d, 4H), 5,11 (d, 2H), 3,8 (s, 6H). 31P-RMN (CD3CN): 5 -4,47 ppm. El compuesto 65b (415 mg; 1,7 mmol) se desprotegió para proporcionar 65-1 (sal de trietilamonio) (510 mg), que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. El compuesto 54-6 (320 mg; 0,9 mmol) y 65-1 (510 mg) se hicieron reaccionar a 65-2 purificado (400 mg). El compuesto 65-2 (230 mg) se desprotegió para proporcionar el compuesto 65 purificado (250 mg). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 54. 1H-RMN (CDCh): 59,00 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,66-5,75 (m, 4H), 4,76 (dd, 2H), 4,37-4,46 (m, 2H), 4,15 (d, 2H), 3,86 (t, 6H), 3,70 (d, 6H), 1,65 (s, 6H), 1,25 (s, 3H). 31P-RMN (CDCb): 5 - 4,13 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 52
COMPUESTO 66
Figure imgf000090_0001
El compuesto 66a se preparó a partir de 1,3-dimetoxipropan-2-ol. 1H-RMN (CDCI3) 5 5,73 (s,2H), 5,03-5,06 (m,1H), 3,59 (d,4H), 3,38 (s,6H). Se agregó ACN seco (25 mL) a bencilfosfato (sal de plata) (5 mmol) seguido de la adición de 66a (3,12 g; 12 mmol). La suspensión se calentó a 60 °C durante 18 h. Después de retirar el sólido por filtración, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando hexano/EA (3: 1) como el eluyente para proporcionar 66b como un líquido incoloro (540 mg, 50%). 1H-RMN (CD3CN): 57,39-7,42 (m, 5H), 5,61 (d, 4H), 5,10 (d, 2H), 4,97-5,01 (m, 2H), 3,50-3,52 (m, 8H), 3,30 (s, 6H), 3,28 (s, 6H).31P-RMN (CD3CN): 5 - 4,42 ppm. El compuesto 66b (540 mg; 1,0 mmol) se desprotegió para proporcionar 66-1 (sal de trietilamonio), que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. El compuesto 54-6 (285 mg; 0,8 mmol) y 66-1 se hicieron reaccionar para proporcionar 66­ 2 purificado (300 mg). El compuesto 66-2 (300 mg) se desprotegió para proporcionar el compuesto 66 purificado (290 mg). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 54. 1H-RMN (CDCla): 59,35 (s, 1H), 7,56 (d, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,66-5,82 (m, 5H), 5,04 (s, 1H), 4,76 (dd, 2H), 4,60 (d, 1/2H), 4,37-4,48 (m, 2H), 4,22 (d, 2H), 4,06 (s, 1H), 3,58 (s, 8H), 3,57 (s, 12H), 1,93 (s, 1H), 1,23 (s, 3H). 31P-RMN (CDCla): 5 - 4,08 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 53
COMPUESTO 67
Figure imgf000090_0002
El compuesto 67-1 (180 g, 62%) se preparó de la misma manera a partir de 54-6 (0,18 g; 0,5 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (1,0 mmol) con DIPEA (0,35 mL), BopCl (0,25 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (0,11 mg) en THF (1 mL) usando un procedimiento según descrito para el compuesto 44. La purificación se realizó con CH2Cl2/i-PrOH (gradiente 4-10%).
El compuesto 67 (60 mg, 78%) se preparó a partir de 67-1 (85 mg) usando un procedimiento como se describe para el compuesto 44. MS: m/z = 1027 (2M-1).
EJEMPLO DE REFERENCIA 54
COMPUESTO 68
Figure imgf000091_0001
A una solución de 68-1 (15 mg, 50,2 mmol) en piridina anhidra (180 mL), se añadió BzCl (23,3 mg, 165,5 mmol) a 0 °C bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con una solución ac. de NaHCO3 . La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad. La capa orgánica se secó, y se concentró para obtener un residuo, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (15% EtOAc en PE) para obtener 68-2 (27 g, 93,5%) como un sólido blanco.
El compuesto 68-2 (27 g, 47 mmol) se disolvió en HOAc al 90% (250 mL) y se calentó a 110 °C. La mezcla se agitó durante la noche a 110 °C. El solvente se retiró y se diluyó con EA. La mezcla se lavó con una solución ac. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó y concentró para proporcionar el producto bruto 68-3.
El compuesto 68-3 se disolvió en NH3/MeOH (600 mL) y se agitó durante la noche. El solvente se concentró para obtener un residuo, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 68-4 (12 g, 99%) como un sólido blanco.
A una solución de 68-4 (15 g, 56,8 mmol) en piridina (200 mL), se añadió imidazol (7,7 g, 113,6 mmol) y TBSCl (9,4 g, 62,5 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante la noche. Y el disolvente se retiró y se diluyó con EA. La mezcla se lavó con una solución ac. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó y concentró para proporcionar el producto bruto 68-5.
A una solución de 68-5 en DCM anhidro (200 mL), se añadió colidina (6,8 g, 56,8 mmol), MMT rCl (17,8 g, 56,8 mmol) y AgNO3 (9,6 g, 56,8 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró a baja presión para proporcionar el residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA al 5% en PE) para proporcionar 68-6 (32 g, 87%).
El compuesto 68-6 (32 g, 49,2 mmol) se disolvió en una solución de TBAF en THF (1M, 4 eq.) a TA. La mezcla se agitó durante la noche y el solvente se retiró. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua. La capa orgánica se secó y se concentró para obtener el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (33% EA en PE) para obtener 68-7 (21 g, 79%).
A una solución de 68-7 (21 g, 38,8 mmol) en DCM (200 mL), se añadió piridina (9,2 mL, 116,4 mmol). La solución se enfrió hasta 0 °C y se añadió peryodinano de Dess-Martin (49 g, 116,4 mmol) en una porción única. La mezcla se agitó durante 4 h a TA. La reacción se inactivó con solución de Na2S2O3 y solución acuosa de bicarbonato de sodio. La mezcla se agitó durante 15 min. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera diluida y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en dioxano (200 mL) y la solución se trató con formaldehído acuoso al 37% (20 mL, 194 eq.) e hidróxido sodio acuoso 2 N (37,5 mL, 77,6 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche y se añadió NaBH4 (8,8 g 232,8 mmol). Después de agitar durante 0,5 h a TA, el exceso de hidróxido de sodio acuoso se eliminó con agua helada. La mezcla se diluyó con EA. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (4% de MeOH en DCM) para obtener 68-8 (10 g, 50,5%) como una espuma blanca.
El compuesto 68-8 (4,8 g, 8,5 mmol) se co-evaporó con tolueno dos veces. El residuo se disolvió en DCM anhidro (45 mL) y piridina (6,7 g, 85 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió anhídrido tríflico (4,8 g, 18,7 mmol) gota a gota durante 10 min. A esta temperatura, la reacción se agitó durante 40 min. TLC (50% EA en PE) mostró que la reacción estaba completa. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (EA en PE de 0% a 20%) para obtener 68-9 (6,1 g, 86,4 %) como una espuma marrón.
El compuesto 68-9 (6,1 g, 7,3 mmol) se disolvió en MeCN (25 mL). La mezcla se trató con una solución de TBAF en THF (1M, 25 mL) a TA. La mezcla se agitó durante la noche. Se añadió TBAF en THF (1M, 15 mL) y se agitó durante 4 h. La mezcla se trató con hidróxido de sodio acuoso (1N, 14,6 mmol) y se agitó durante 1 h. La reacción se inactivó con agua (50 mL) a 0 °C y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó y se concentró para obtener el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 68-10 (2,1 g, 50,6%).
A una solución de 68-10 (1,5 g, 2,6 mmol) en piridina anhidra (15 mL), se añadió imidazol (530 mg, 7,8 mmol) y TBSCl (585 mg, 3,9 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante 2 h. El solvente se eliminó y se diluyó con EA. La mezcla se lavó con una solución ac. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró para obtener el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 68-11 (1,5 g, 84,5%).
A una solución de 68-11 (1,5 g, 2,2 mmol) en CH3CN anhidro (11 mL) se añadió DMAP (671 mg, 5,5 mmol), TEA (555 mg, 5,5 mmol) y TPSCl (1,66 mg, 5,5 mmol) a TA. La reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió NH4OH (10 mL) y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con solución de NaHCO3. La capa orgánica se secó y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 2% en DCM) para proporcionar 68-12 bruto, que se purificó mediante prep-TLC para proporcionar 68-12 (1,2 g, 80%) como un sólido blanco.
Se agitó una solución de 68-12 (1,2 g, 1,76 mmol) en HCOOH al 80% (60 mL) durante 4 h. El solvente se retiró a baja presión. El producto bruto se disolvió en MeOH (40 mL) y se agitó durante la noche. El solvente se concentró para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (MeOH en DCM 10%) para proporcionar el compuesto 68 (480 mg, 92%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 591 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 55
COMPUESTO 69
Figure imgf000092_0001
A una solución de 68-8 (2,63 g, 4,64 mmol) en piridina anhidra/DCM a 0 °C se le añadió Tf2O (3,27 g, 11,59 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 40 min. El solvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 69-1 (2,60 g, 67%).
A una solución de 69-1 (2,65 g, 3,19 mmol) en DMF anhidro se agregó hidruro de sodio (153 mg, 3,82 mmol) a 0 °C durante 1 h. La solución se utilizó para la siguiente etapa sin purificación. La solución se trató con LiCl (402 mg, 9,57 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con solución de cloruro de amonio saturada y se extrajo con EA. Las capas orgánicas se secaron con Na2SO4, y se concentraron a baja presión para obtener un producto bruto 69-2.
A una solución de 69-2 (1,81 g, 3,19 mmol) en THF anhidro (20 mL), se añadió NaOH 1N (4 mL, 3,83 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con solución de bicarbonato de sodio saturada y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 69-3. (1,34 g, 72%).
A una solución de 69-3 (925 mg, 1,58 mmol) en diclorometano (10 mL), se añadió TBSCl (713 mg, 4,75 mmol) e imidazol (323 mg, 4,74 mmol) y se agitó a TA durante la noche. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con salmuera . La fase orgánica se concentró a baja presión para proporcionar el producto bruto. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 69-4 (1,0 mg, 90%).
A una solución de 69-4 (1,24 g, 1,78 mmol) en acetonitrilo anhidro (10 mL), se añadió TPSCl (1,34 g, 4,45 mmol), DMAP (543 g, 4,45 mmol), y TEA (450 mg, 4,45 mmol), y la mezcla se agitó a TA durante 3 h. El solvente se eliminó a baja presión y el residuo se disolvió en Ea (30 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 69-5 (1,0 g, 81%) como un sólido blanco.
El compuesto 69-5 (1,0 g, 1,43 mmol) se trató con HCOOH al 80% (10 mL) y se agitó a TA durante la noche. Se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando 5% MeOH en CH2Cl2 para obtener el compuesto 69 (264 mg, 60%). ESI-MS: m/z 311,9 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 56
COMPUESTO 70
Figure imgf000093_0001
Bencilfosfato (sal de plata) y e isobutilato de clorometilo comercialmente disponibles (5,0 g) produjeron 70a purificado (3,84 g). 1H-RMN (CD3CN): ó 7,39-7,42 (m, 5H), 5,60 (d, 4H), 5,09 (d, 2H), 1,94-1,96 (m, 2H), 1,12-1,17 (m, 12H). 31P-RMN (CD3CN): 6-4,03 ppm. El compuesto 70a (780 mg; 2,0 mmol) se desprotegió para proporcionar 70-1 (sal de trietilamonio), que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. El compuesto 54-6 (356 mg; 1,0 mmol) y 70-1 se hicieron reaccionar para proporcionar 70-2 purificado (230 mg). El compuesto 70-2 (230 mg) se desprotegió para proporcionar el compuesto purificado 70 (80 mg, 0,14 mmol). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación de los compuestos 54 y 66. 1H-RMN (CDCh): 68,25 (s, 1H), 7,55 (d, 1H), 5,93 (s, 1H), 5,81 (d, 1H), 5,66-5,75 (m, 4H), 4,76 (dd, 2H), 4,37-4,46 (m, 2H), 4,15 (d, 2H), 3,86 (t, 6H), 3,70 (d, 6H), 1,65 (s, 6H), 1,25 (s, 3H). 31P-RMN (CDCh): 6 - 4,41 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 57
COMPUESTO 71
Figure imgf000094_0001
El compuesto 71-2 (0,34 g, 60%) se preparó a partir de 52-1 (0,33 g) y 71-1 (0,34 g) en acetona (6 mL) con Nal (0,19 g) y K2CO3 (0,69 g).
El compuesto 71-3 (0,28 mg, 74%) se preparó de la misma manera a partir de 71-2 (0,25 g, 0,45 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,9 mmol) con DIPEA (0,35 ml), BopCl (0,25 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (0,11 mg) en THF (5 mL). La purificación se realizó con hexanos/EtOAc (gradiente 30-100%).
Una solución de 71-3 (0,28 g, 0,33 mmol) en AcOH ac. al 80% se calentó a 45 °C durante 4 h y a continuación se concentró. El residuo se co-evaporó con tolueno y a continuación con MeOH que contenía una pequeña cantidad de Et3N (2 gotas). La purificación en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/i-PrOH (gradiente de 4-10%) produjo 71­ 4 (0,22 g, 84%).
A una solución de 71-4 (148 mg, 0,18 mmol) en EtOAc (0,6 mL) a 0 °C se agregó HCl/dioxano 4 N (0,5 mL) y la mezcla se mantuvo a TA durante 1 h. Se añadió éter y se precipitó el compuesto 71 . La mezcla se filtró y se lavó con éter para proporcionar el compuesto 71 (100 mg, 75%). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 52. MS: m/z=704 [M+1].
EJEMPLO 58
COMPUESTO 33
Figure imgf000095_0001
El compuesto 33-1 (50 g, 86,0 mmol) y 6-Cl-guanina (16,1 g, 98,2 mmol) se co-evaporaron con tolueno anhidro 3 veces. A una solución de 33-1 (50 g, 86,0 mmol) y 6-Cl-guanina (16,1 g, 98,2 mmol) en MeCN (200 mL) se agregó DBU (39,5 g, 258,0 mmol) a 0 °C. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 minutos y se añadió TMSOTf (95,5 g, 430,0 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos hasta que se observó una solución transparente. La mezcla se calentó a 70°C y se agitó durante la noche. La solución se enfrió hasta TA y se diluyó con EA (100 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna en gel de sílice (PE/EA: de 10 % a 40 %) para obtener 33-2 (48,0 g, 88,7 %) como una espuma blanca. ESI-MS: m/z 628 [M+H]+.
A una solución de 33-2 (48,0 g, 76,4 mol), AgNO3 (50,0 g, 294,1 mmol) y colidina (40 mL) en DCM anhidro (200 mL) se agregó MMTrCl (46,0 g, 149,2 mmol) en porciones pequeñas bajo N2. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 h y bajo N2. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC. Después de la filtración, el filtrado se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 5% a 50%) para obtener 33-3 bruto (68 g, 98%). ESI-MS: m/z 900,1 [M+H]+.
Se disolvió sodio (8,7 g, 378,0 mmol) en EtOH seco (100 mL) a 0 °C y se calentó lentamente hasta TA. El compuesto 33-3 (68,0 g, 75,6 mmol) se trató con solución de NaOEt recién preparada y se agitó durante la noche a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante TLC y LCMS. La mezcla se concentró a baja presión, se diluyó con H2O (100 mL) y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 33-4 (34,0 g, 75,2%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 598 [M+H]+.
El compuesto 33-4 (32,0 g, 53,5 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra 3 veces. A una solución enfriada con hielo de 33-4 (32,0 g, 53,5 mmol) en piridina anhidra (100 mL) se agregó una solución de TsCl (11,2 g, 58,9 mmol) en piridina (50 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó durante 18 h a 0 °C. La reacción se monitoreó mediante LCMS y se inactivó con H2O. La solución se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en EA (100 mL) y se lavó con solución saturada de NaHCO3 . La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 33-5 bruto (25,0 g, 62,2%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 752 [M+H]+.
A una solución de 33-5 (23,0 g, 30,6 mmol) en acetona (150 mL) se agregó Nal (45,9 g, 306,0 mmol) y TBAI (2,0 g), y la mezcla se sometió a reflujo durante la noche. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en EA (100 mL). La solución se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4 anhidro. La solución orgánica se evaporó a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM: MeOH=100:1 a 20:1) para proporcionar un producto bruto. A una solución del producto bruto en THF seco (200 mL) se agregó DBU (14,0 g, 91,8 mmol) y la mezcla se calentó a 60 °C y se agitó durante la noche. La reacción se monitoreó mediante lCm S. La reacción se inactivó con solución sat. de NaHCO3 y la solución se extrajo con EA (100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (MeOH en DCM de 1% a 5%) para obtener 33-6 (12,0 g, 67,4%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 580 [M+H]+.
A una solución enfriada con hielo de 33-6 (8,0 g, 13,8 mmol) en MeCN anhidro (100 mL) se añadió NIS (3,9 g, 17,2 mmol) y TEA^3HF (3,3 g, 20,7 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 18 h y se verificó mediante LCMS. Una vez completada la reacción, la reacción se inactivó con. solución saturada de Na2SO3 y solución saturada de NaHCO3 . La solución se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 10% a 50%) para obtener 33-7 (7,2 g, 72,0%) como un sólido. ESI-MS: m/z 726 [M+H]+.
A una solución de 33-7 bruto (7,2 g, 9,9 mmol) en DCM seco (100 mL) se añadió DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) y BzCl (2,8 g, 19,8 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se verificó mediante LCMS. La mezcla se lavó con solución saturada de NaHCO3 . La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 10% a 30%) para obtener 33-8 (8,0 g, 86,4%) como un sólido. ESI-MS: m/z 934 [M+H]+.
A una solución de 33-8 bruto (7,5 mg, 8,0 mmol) en DMF seco (100 mL), se añadió NaOBz (11,5 g, 80,0 mmol) y 15-corona-5 (15,6 mL). La mezcla se agitó durante 36 h a 90 °C. La mezcla se diluyó con H2O (100 mL) y se extrajo con EA (3x150 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 10% a 30%) para obtener 33-9 (6,0 g, 80,0%) como un sólido. ESI-MS: m/z 928 [M+H]+.
El compuesto 33-9 (4,0 g, 4,3 mmol) se co-evaporó con tolueno anhidro 3 veces y se trató con NH3/MeOH (50 mL, 4N) a TA. La mezcla se agitó durante 18 h a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA en PE de 30% a 50%) para proporcionar 33-10 (1,9 g, 71,7%) como un sólido. ESI-MS: m/z 616 [M+H]+.
El compuesto 33-10 (300,0 mg, 0,49 mmol) se evaporó conjuntamente con tolueno anhidro 3 veces y se disolvió en MeCN (2 mL). La mezcla se trató con NMI (120,5 mg, 1,47 mmol) y el reactivo de fosforocloridato (326,3 mg, 0,98 mmol) en MeCN (1 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 18 h a TA y se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se diluyó con solución de NaHCO3 al 10% y se extrajo con EA (3 x 30 mL). El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (EA en PE de 30% a 50%) para obtener 33-11 (210 g, 47,5%) como un sólido. ESI-MS: m/z 913,0 [M+H]+.
El compuesto 33-11 (210 mg, 0,26 mmol) se trató con 80% de AcOH (15 mL) y la mezcla se agitó durante 18 h a TA. La finalización de la reacción se determinó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH en DCM del 1% al 3%) para proporcionar el compuesto 33 (71,8 mg, 48,7%) como un sólido. ESI-MS: m/z 641,3 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 59
COMPUESTO 75
Figure imgf000096_0001
Se agitó una solución de mezcla de 1 -5 (317 mg, 0,49 mmol), TPSCl (373 mg, 1,23 mmol), DMAP (150 mg, 1,23 mmol) y TEA (124 mg, 1,23 mmol) en MeCN anhidro a TA durante la noche. La mezcla se trató con solución de amonio y a continuación se agitó a TA durante 3 h. El solvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 75-1 (200 mg, 63%).
Una solución 75-1 (286 mg; 0,45 mmol) y fluoruro de amonio (500 mg; 13,5 mmol) en metanol (10 mL) se sometió a reflujo durante la noche. El solvente se retiró a presión reducida y el residuo se purificó en gel de sílice para proporcionar el compuesto 75 (75 mg, 57%). ESI-MS: m/z 289,9 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 60
COMPUESTO 76
Figure imgf000097_0001
Se preparó el compuesto 76-1 (0,44 g, 34%) a partir de 52-3 (0,88 g, 1,48 mmol) y bis(isobutiriloximetil)fosfato de trietilamonio (3 mmol) con DIPEA (1,05 mL), BopCl (0,76 g) y 3-nitro-1,2,4-triazol (0,34 g) en THF (10 mL). La purificación se realizó con hexanos/EtOAc (gradiente 5-100 %). El compuesto 76-2 (0,43 g, 85%) se preparó a partir de 76-1 (0,44 g); y el compuesto 76 (0,19 g, 98%) se preparó a partir de 76-2 (0,22 g) en EtOH (10 mL) con Pd/C al 10% (10 mg), HCl/dioxano 4 N (132 pL) y bajo atmósfera de H2 . Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 52. MS: m/z = 700 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 61
COMPUESTO 77
A una solución agitada de 77-1 (2,0 mg, 7,12 mmol) en piridina (20 mL), se añadió TMSCI (3,86 mg, 35,58 mmol) a 0 °C bajo N2. La mezcla se calentó lentamente hasta TA y se agitó durante 2 h. Se agregó PivCl (1,71 g, 14,23 mmol) y la mezcla se agitó durante 24 h. El solvente se evaporó a baja presión y el residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para proporcionar el producto bruto. El producto bruto se disolvió en MeOH (20 mL) y se agregó NH4F (1,4 g, 37,86 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 2 h. El solvente se retiró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-2 (2,2 g, 85%).
A una solución de 77-2 (8,5 g, 23,28 mmol) y 1,1-dimetoxiciclopentano (2 mL) en una mezcla de DMF (15 mL) y ciclopentanona (6 mL) se agregó TsOH (6,63 g, 34,93 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con trietilamina y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-3 (6,5 mg, 65%).
A una solución de 77-3 (6,0 g, 13,92 mmol) en MeOH anhidro (60 mL) se añadió MeONa (2,25 mL, 41,76 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante 12 h y a continuación se neutralizó con AcOH. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-4 (4,4 g, 92%).
A una solución agitada de 77-4 (5,0 g, 14,40 mmol) en piridina anhidra (50 mL), se añadió TBSCl (3,24 mg, 21,61 mmol) a TA bajo N2, y la mezcla se agitó durante la noche La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-5 (5,44 g, 82%).
A una solución agitada de 77-5 (5,0 g, 10,84 mmol) en DCM anhidro (50 mL) se agregó MMTrCl (5,01 g, 16,26 mmol), colidina (5 mL) y AgNO3 (2,76 g, 16,26 mmol) a TA en N2, y la mezcla se agitó durante 2 h. El precipitado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-6 (7,1 mg, 89%).
A una solución agitada de 77-6 (7,1 g, 9,68 mmol) en THF anhidro (70 mL) se añadió TBAF (5,05 g, 19,37 mmol) a TA en N2, y la mezcla se agitó durante 4 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-7 (5,1 g, 87%).
A una solución de 77-7 (3,2 g, 5,17 mmol) y piridina (2,04 g, 25,85 mmol) en DCM (30 mL) se añadió DMP (3,28 g, 7,75 mmol) a TA bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La reacción se inactivó con solución saturada de Na2S2O3 y se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar el aldehído (1,8 g). A una solución agitada del aldehído (1,8 g, 2,92 mmol) en dioxano (29,2 mL) se añadió Hc HO al 37% (2,36 g, 29,17 mmol) e IN LiOH (1,6 mL, 2,34 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. La solución se neutralizó con HOAc. La mezcla se trató con EtOH (15 mL) y NaBH4 (1,66 g, 43,8 mmol) y se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se inactivó con agua y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-8 (2,01 mg, 61%).
A una solución agitada de 77-8 (200 g, 0,31 mmol) en DCM anhidro (2 mL), se añadió TBDPSCl (170 mg, 0,62 mmol) e imidazol (42 mg, 0,62 mmol) a TA en N2. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se diluyó con DCM (10 mL), y se lavó con salmuera. La fase orgánica se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-9 (175 mg, 64%).
A una solución agitada de 77-9 (270 g, 0,304 mmol) en DCM anhidro (2 mL), se añadió BzCl (63 mg, 0,61 mmol), DMAP (74 mg, 0,61 mmol) y TEA (61 mg, 0,61 mmol) a TA en N2. La mezcla se agitó a TA hasta que desapareció el material de partida. La = mezcla se evaporó a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-10 (250 mg, 83,3%).
El compuesto 77-10 (300 mg, 0,302 mmol) en THF (5 mL) se trató con una solución de TBAF (0,61 mL, 0,61 mmol, 1M en THF) y HOAc (0,2 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77-11 (170 mg, 75%).
A una solución agitada de 77-11 (400 g, 0,531 mmol) en DCM anhidro (4 mL), se añadió Tf2O (299 mg, 1,06 mmol) y piridina (84 mg, 1,06 mmol) a TA en N2. La mezcla se agitó a TA hasta que desapareció el material de partida. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 77­ 12 (401 mg, 85%).
El compuesto 77-12 (500 mg, 0,564 mmol) se trató con TBAF en THF (1,0 M, 2 mL) a TA bajo N2. La mezcla se diluyó con agua (20 mL) y se extrajo con DCM. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 77-13 (150 g, 40,8%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 652,1 [M+H]+.
El compuesto 77-13 (50 mg) se disolvió en HCOOH al 80% (10 mL) y la mezcla se calentó a 45 °C durante 24 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con metanol/tolueno para eliminar restos de ácido. El residuo se disolvió en trietilamina al 20% en metanol, se mantuvo durante 15 minutos y a continuación se evaporó. El compuesto 77 (18 mg, 75%) se aisló mediante cromatografía en gel de sílice en un gradiente de metanol en DCM de 0% a 15%. MS: m/z 312,5 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 62
COMPUESTO 78
Figure imgf000099_0001
El compuesto 78a se preparó a partir de 3-hidroxioxetano disponible comercialmente (5,0 g). 1H-RMN (CDCh) ó 5,73 (s,2H), 5,48-5,51 (m,1H), 4,90 (d,2H), 4,72 (d, 2H). El compuesto 78b (8,0 g) se preparó a partir de 78a. 1H-NMR (CDCl3) ó 5,95 (s,2H), 5,48-5,51 (m,1 H), 4,90 (d,2H), 4,72 (d, 2H). Se hizo reaccionar bencilfosfato (sal de plata) y 78b (8,0 g) para proporcionar 78c purificado (1,92 g). 1H-RMN (CD3CN): ó 7,39-7,42 (m, 5H), 5,62 (d, 4H), 5,39-5,42 (m, 2H), 5,15 (d, 2H), 4,80-4,83 (m, 4H), 4,56-4,60 (m, 4H). 31P-RMN (CD3CN): ó - 4,55 ppm. El compuesto 78c se desprotegió para proporcionar 78-1 (sal de trietilamonio), que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. El compuesto 54-6 (356 mg; 1,0 mmol) y 78-1 se hicieron reaccionar para proporcionar 78-2 purificado (230 mg). El compuesto 78-2 (230 mg) se desprotegió para proporcionar el compuesto purificado 78 (12,5 mg, 0,02 mmol). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 54. 1H-RMN (CDCh): ó 8,25 (s, 1 H), 7,54 (d, 1H), 5,90 (s, 1 H), 5,81 (d, 1H), 5,66-5,75 (m, 4H), 5,44-5,49 (m, 2H), 4,88-4,92 (m, 5H), 4,61-4,78 (m, 5H), 4,37-4,46 (m, 2H), 4,21 (s, 1H), 3,49 (s, 1H), 1,25 (s, 3H). 31P-RMN (CDCh): ó - 4,28 ppm.
EJEMPLO 63
COMPUESTO 83
Figure imgf000099_0002
El compuesto 83-2 (70 g, 58%) se preparó de la misma manera a partir de 83-1 (90 g; 0,1 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,2 mmol) con DIPEA (87 pL), BopCl (44 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (29 mg) en THF (2 mL) como descrito en la preparación del compuesto 44. La purificación se realizó con hexanos/EtOAc con un gradiente de 20-80%.
El compuesto 83 (25 mg, 64%) se preparó a partir de 83-2 (70 mg) en acetonitrilo (0,6 mL) y HCl/dioxano 4 N (50 pL) como se describe en la preparación del compuesto 55. MS: m/z = 658 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 64
COMPUESTO 84
Figure imgf000100_0001
El compuesto 84-2 (69 g, 90%) se preparó de la misma manera a partir de 84-1 (52 g; 0,08 mmol) y bis(¡soprop¡lox¡carbon¡lox¡metil)fosfato de trietilamonio (0,16 mmol) con DIPEA (74 pL), BopCl (51 mg) y 3-nitro-1,2,4-triazol (23 mg) en THF (1 mL) como descrito en la preparación del compuesto 44. La purificación se realizó con hexanos/EtOAc con un gradiente de 20-100%.
El compuesto 84 (27 mg, 62%) se preparó a partir de 84-2 (65 mg) tal como se describió en la preparación del compuesto 44. MS: m/z = 626 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 65
COMPUESTO 85
Figure imgf000100_0002
Se agitó una mezcla de 76-2 y anhídrido acético en piridina durante la noche a TA, a continuación se concentró y purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/i-PrOH (gradiente de 4-10%) para proporcionar 85-1 (12 mg, 69%).
El compuesto 85 (10 mg, 92%) se preparó a partir de 85-1 (12 mg) en EtOH (0,5 mL) con Pd/C al 10% (1 mg), HCl/dioxano 4 N (7 pL) y bajo la atmósfera de H2 de la misma manera que el compuesto 52 . MS: m/z=742 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 66
COMPUESTOS 86 Y 87
Figure imgf000101_0001
Se agregó EtONa recién preparado en EtOH seco (2N, 150 mL) a una solución de 20-4 (13,67 g, 17,15 mmol) en EtOH (50 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener 86-1 (10 g, 98%) como un sólido amarillo. A una solución de PPh3 (2,73 g, 10,4 mol) en piridina anhidra (60 mL) se añadió I2 (2,48 g, 9,76 mmol) a TA, y la mezcla de reacción se agitó TA durante 30 minutos. Una solución de 86-1 (3,9 g, 6,51 mmol) en piridina (10 mL) fue añadida. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con sol. sat de Na2S2O3 y solución acuosa de NaHCO3 y a continuación se extrajo con EA (100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% de MeOH en DCM) para obtener 86-2 (3,0 g, 75%) como un sólido amarillo.
A una solución de 86-2 en THF seco (300 mL) se agregó DBU (14,0 g, 91,8 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (100 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 86-3 (0,6 g, 37,5%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 86-3 (2,0 g, 3,44 mmol) en MeCN anhidro (20 mL) se agregó NIS (0,975 g, 4,3 mmol) y TEA^3HF (0,82 g, 5,16 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con solución sat. acuosa de Na2SO3 y NaHCO3 y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (50 mL), se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro, y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 86-4 (1,5 g, 60%) como un sólido blanco.
A una solución de 86-4 (1 g, 1,37 mmol) en piridina seca (100 mL) se añadió BzCl (0,23 g, 1,65 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó durante 30 mins y se verificó mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 86-5 (0,9 g, 78%) como un sólido blanco.
A una solución de 86-5 bruto (2 mg, 2,4 mmol) en DMF seco (40 mL), se añadió NaOBz (3,46 g, 24 mmol) y 15-corona-5 (4,5 mL). La mezcla se agitó a 95 °C durante 72 h. La mezcla se diluyó con EA (100 mL) y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (15% EA en PE) para obtener 86-6 (1,5 g, 75%) como un sólido blanco.
El compuesto 86-6 (1,35 g, 1,64 mmol) en NH3/MeOH (150 mL) se agitó a TA durante 18 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (MeOH al 5% en DCM) para proporcionar 86-7 (0,9 g, 90%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 618,3 [M+H]+.
A una solución de 86-7 (99 mg, 0,16 mmol) en DCM (1,0 mL), se agregó trietilamina (92,7 gL, 0,64 mmol) a TA. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua) y fosforodicloruro de isopropilo recién preparado y destilado (36,6 gL, 0,2 mmol, preparado según un procedimiento, Reddy y col., J. Org. Chem. (2011) 76 (10):3782-3790) se añadió a la mezcla. La mezcla se agitó de 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua) durante 15 minutos, seguido de la adición de N-metilimidazol (26,3 gL, 0,32 mmol). Se agitó la mezcla durante 1 h a 0 a 5 °C. TLC mostró ausencia de 86-7. Se añadió EA (100 mL), seguido de agua. La capa orgánica se lavó con H2O, solución acuosa saturada de NH4Cl y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con iPrOH/ d Cm de 0 a 10% para proporcionar una mezcla de 86-a y 86-b (61,5 mg).
Se disolvió una mezcla de 86-a y 86-b (61,5 mg, 0,085 mmol) en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (64 gL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/ agua). La mezcla se agitó a TA durante 40 min, y se añadió EtOH anhidro (200 gL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en un 50% de CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando acetonitrilo y agua, y se liofilizó para obtener el compuesto 86 (1,8 mg) y el compuesto 87 (14,5 mg).
Compuesto 86: 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 58,0 (s, 1H), 6,69 (d, J = 16,0 Hz, 1 H),5,9-5,6 (s a, 1H), 4,94-4,85 (m, 1H), 4,68-4,52 (m, 3H), 1,49-1,3 (m, 12H); 19F RMN (CD3OD-d4) 5 -122,8 (s), -160,06 (s);; 31P RMN (CD3OD-d4) 5 -7,97 (s). ESI-LCMS: m/z = 450,1 [M+H]+; Compuesto 87:1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 57,96 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,69 (d, J= 16,8 Hz, 1H), 6,28-6,1 (s a, 1H), 4,81-4,5 (m, 4H), 1,45-1,39 (m, 12H); 31P RMN (CD3OD-d4) 5 -5,84 (s). ESI-LCMS: m/z = 450. [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 67
COMPUESTOS 88 Y 89
Figure imgf000102_0001
A una solución de 88-1 (150 mg, 0,24 mmol) en DCM (2,0 mL), se agregó trietilamina (141 gL, 2,0 mmol) a TA. La mezcla se enfrió hasta 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) y se añadió fosforodicloruro de isopropilo recién preparado y destilado (45 gL, 0,26 mmol, preparado según un procedimiento , Reddy y col., J. Org. Chem. (2011) 76 (10):3782-3790). Se agitó la mezcla a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) durante 15 minutos, seguido de N-metilimidazol (40 gL, 0,49 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h a 0 a 5 °C. TLC mostró la ausencia de material de partida 88-1. Se añadió EA (100 mL), seguido de agua. La capa orgánica se lavó con H2O,solución ac. sat. de NH4Cl y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con iPrOH/ d Cm de 0 a 10% para proporcionar 88-2a (16,9 mg, isómero de elución más rápida) y 88-2b (72,7 mg, isómero de elución más lenta).
Los compuestos 88-2a y 88-2b se desprotegieron usando un procedimiento descrito en esta invención. Se obtuvieron el compuesto 88 (7,3 mg, isómeros individuales de 88-2a (16,5 mg, 0,0235 mmol)) y el compuesto 89 (29,0 mg. isómeros individuales de 88-2b (72,7 mg, 0,1 mmol)).
Compuesto 88: 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 57,94 (s, 1H), 6,32 (s, 1H), 6,00-5,9 (s a, 1H), 4,9-4,487 (m, 1H), 4,83­ 4,77 (m, 1H), 4,65-4,50 (m, 3H), 1,45-1,39 (s, 9H), 1,2 (s, 3H),; 19F RMN (CD3OD-d4) 5 -120,3 (s); 31P RMN (CD3OD-d4) 5 -5,19 (s); ESI-LCMS: m/z = 448,05 [M+H]+. Compuesto 89: 1H RMN (CD3OD-d4, 400 MHz) 57,98 (s, 1H), 6,34 (s, 1 H), 5,78-5,64 (s a, 1H), 4,95-4,48 (m, 2H), 4,62-4,52 (m, 3H), 1,48-1,42 (s, 9H), 1,1 (s, 3H),; 19F RMN (CD3OD-d4) 5 -121,3 (s); 31P RMN (CD3OD-d4) 5 -7,38 (s); ESI-LCMS: m/z = 448,05 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 68
COMPUESTO 90
Figure imgf000103_0001
A una solución agitada de 90-1 (532 mg, 1,84 mmol) en CH3CN anhidro (8,0 mL) se añadió N-metilimidazol (2,0 gL, 24,36 mmol) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) seguido de una solución de fosforodiclorhidato de isopropilo recién prepara y destilada (0,5 mL, 2,84 mmol). La solución se agitó a TA durante 15 h y la mezcla se diluyó con EA y a continuación se añadió agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con MeOH/ DCM de 0 a 8% para proporcionar un producto bruto (72 mg). El producto bruto se purificó nuevamente en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización para proporcionar el compuesto 90 (43,6 mg). MS: m/z = 395,05 [M+H]+, 393,0 [M-H]-, 787,05,0 [2M - H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 69
COMPUESTO 96
Figure imgf000103_0002
Se disolvió 51 seco el nucleósido anhidro (0,05 mmol) en una mezcla de PO(OMe)3 (0,7 mL) y piridina (0,3 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min con una temperatura del baño de 42 °C y a continuación se enfrió hasta T.A. Se añadió N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de POCh (9 gL, 0,11 mmol) y la mezcla se mantuvo a TA durante 20-40 min. La reacción se controló mediante LCMS y se monitoreó mediante la aparición del compuesto 96. El aislamiento se realizó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 30% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón para dar el compuesto 96. MS: m/z 369,0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 70
COMPUESTOS 97 Y 98
Se disolvió 51 seco el nucleósido anhidro (0,05 mmol) en una mezcla de PO(OMe)3 (0,7 mL) y piridina (0,3 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min con una temperatura del baño de 42 °C y a continuación se enfrió hasta T.A. Se añadió N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de PSCl3 (9 pL, 0,11 mmol) y la mezcla se mantuvo a TA durante 20-40 min. La reacción se controló mediante LCMS y se monitoreó mediante la aparición del 5 ’-tiofosfato del nucleósido. Después de completarse la reacción, se añadió sal de pirofosfato de tetrabutilamonio (150 mg) y a continuación DMF (0,5 mL) para obtener una solución homogénea. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, la reacción se inactivó con agua (10 mL). El 5'-trifosfato como mezcla de diastereómeros se aisló mediante cromatografía IE en AKTA Explorer usando la columna HiLoad 16/10 con Q Sepharose High Performance. La separación se llevó a cabo con un gradiente lineal de NaCl desde 0 a 1N en tampón de TRIS 50 mM (pH 7,5). Las fracciones que contenían tiotrifosfato se combinaron, concentraron y desalaron mediante RP HPLC en columna Synergy Hydro-Rp de 4 micras (Phenominex). Se utilizó gradiente lineal de metanol de 0 a 30% en tampón de trietilamonio 50 mM para elución durante 20 minutos, flujo 10 mL/min. Se recogieron los compuestos 97 y 98 . RP HPLC analítica se realizó en tampón de acetato de trietilamonio 50 mM, pH 7,5 que contenía gradiente lineal de acetonitrilo de 0% a 25% en 7 minutos en columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Compuesto 97: RT 5,50 min. 31P RMN: 5 42,45(1 P, d), -6,80 (1P, d), -23,36 (1P, c). MS: m/z 544,9 [M-1 ]. Compuesto 98: RT 6,01 min. 31P RMN: 5 41,80(1P, d), -6,57 (1P, d), -23,45 (1 P, c). MS: m/z 544,9 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 71
COMPUESTO 99
Figure imgf000104_0001
A una solución de 99a (0,31 g, 0,8 mmol) en metanol anhidro (2 mL), se añadió Pd/C al 10% (30 mg) y la mezcla se agitó en atmósfera de H2 durante 1 h. Después de completarse, la mezcla se filtró y la torta de catalizador se lavó con metanol. El lavado y el filtrado se combinaron. El solvente se retiró al vacío para proporcionar 99b como un semisólido (252 mg), que se utilizó sin purificación adicional. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) 55,57 (d, J = 13,6 Hz, 4H), 4,23 (c, J = 7,2 Hz, 4H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 6H), 31P RMN (CDCh) 5- 4,64 (s).
A una solución de bis (EOC) fosfato de trietilamonio (0,7 mmol, preparada a partir de 213 mg de 99b y 0,2 mL de TEA) en THF (3 mL) se añadió 99-1 (160 mg, 0,45 mmol) seguido de diisopropiletilamina (0,33 mL, 1,8 mmol), BOP-Cl (229 mg, 0,9 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (103 mg, 0,9 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 90 min. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío a un sólido blanco, que se purificó en columna de gel de sílice (CH3OH:DCM; 9,5:0,5) para proporcionar 99-2 (189 mg, 66 %).
A una solución de 99-2 (180 mg, 0,28 mmol) en HCOOH al 80% (7 mL), se calentó durante 6 h a 45 °C. Los disolventes se evaporaron y a continuación se co-evaporaron con tolueno 3 veces. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice usando 0 a 10% MeOH en DCM para obtener el compuesto 99 (97,3 mg) como un sólido blanco. MS: m/z = 575,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 72
COMPUESTO 100
Figure imgf000105_0001
El compuesto 100a se preparó a partir de 2-(2-metoxietoxi)-etanol comercialmente disponible (11,56 mL). El compuesto 100a (13,5 g) se obtuvo como un aceite incoloro transparente. 1H-RMN (CDCh) ó 5,73 (s, 2H), 4,38-4,40 (m, 2H), 3,74-3,77 (m, 2H), 3,64-3,67 (m, 2H), 3,54-3,57 (m, 2H), 3,39 (s, 3H). El compuesto 100b (9,6 g) se preparó a partir de 100a y se obtuvo como un aceite transparente, ligeramente coloreado. 1H-RMN (CDCh) ó 5,96 (s, 2H), 4,38-4,40 (m, 2H), 3,74-3,77 (m, 2H), 3,64-3,67 (m, 2H), 3,54-3,57 (m, 2H), 3,39 (s, 3H). Se hicieron reaccionar bencilfosfato (sal de plata) y 100b (2,4 g) y se produjo 100c purificados (1,02 g). 1H-RMN (CD3CN): ó 7,39-7,42 (m, 5H), 5,60 (d, 4H), 5,11 (d, 2H), 4,27-4,29 (m, 4H), 3,65-3,67 (m, 4H), 3,56 (t, 4H), 3,46 (t, 4H), 3,30 (s, 6H). 31P-RMN (CD3CN): ó - 4,55 ppm. El compuesto 100c (620 mg; 1,15 mmol) se desprotegió para proporcionar 100-1 (sal de trietilamonio), que se utilizó inmediatamente sin purificación adicional. El compuesto 54-6 (356 mg; 1,0 mmol) y 100-1 se hicieron reaccionar para proporcionar 100-2 purificado (250 mg). El compuesto 100-2 (250 mg) se desprotegió para proporcionar el compuesto purificado 100 (110 mg , 0,14 mmol). Las reacciones mencionadas anteriormente se llevaron a cabo utilizando un procedimiento descrito en la preparación del compuesto 54. 1H-RMN (CDCh): ó 8,62 (s, 1H), 7,54 (d, 1H), 5,96 (s, 1 H), 5,64-5,79 (m, 5H), 4,76 (dd, 2H), 4,37-4,46 (m, 6H), 4,25 (d, 2H), 3,86 (s, 1 H), 3,75 (t, 4H), 3,70 (t, 4H), 3,58 (t, 4H), 3,38 (s, 6H), 1,65 (s, 6H), 1,25 (s, 3H). 31P-RMN (CDCta): ó - 3,90 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 73
COMPUESTO 104
Figure imgf000105_0002
El compuesto 44 (0,010 g, 0,016 mmol) se agregó a solución salina normal (3 mL, pH 7,3) y se almacenó en un bloque de calor a 37 °C durante 6 días. La mezcla se purificó mediante prep-HPLC usando una columna Synergi 4u Hydro-RP (Phenomenex, 00G-4375-U0-AX), con H2O (ácido fórmico al 0,1%) y ACN (ácido fórmico al 0,1%) solventes (gradiente 0-65% en 20 minutos). El compuesto eluyó a 13,0 minutos. Las fracciones puras se agruparon y liofilizaron para proporcionar el compuesto 104 (0,005 g, 63%). MS: m/z = 487 [M+1].
EJEMPLO 74
COMPUESTO 102
Figure imgf000105_0003
Una mezcla de 102-1 (45 mg, 0,06 mmol) y butilamina (0,4 mL) se mantuvo durante la noche a TA y a continuación se evaporó. El producto bruto se purificó en gel de sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 4-12%) para obtener 102-2 como un vidrio incoloro (20 mg, 56%).
A una solución de 102-2 (20 mg, 0,03 mmol) en ACN (0,5 mL) se añadió HCl 4N en dioxano (35 gL). La mezcla se agitó a TA durante 4 h y a continuación se inactivó mediante MeOH. El residuo se trató con ACN para proporcionar el compuesto 102 como un sólido blanquecino (9 mg, 80%). MS m/z = 328 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 75
COMPUESTO 105
Figure imgf000106_0001
A una solución de 105-1 (50 g, 203 mmol) en piridina anhidra (200 mL), se añadió TBDPS-Cl (83,7 g, 304 mmol). Se dejó que la reacción procediera durante toda la noche a TA. La solución se concentró a baja presión para obtener un residuo, el cual se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida para obtener un éter de tipo 5'-OTBDPS como una espuma blanca (94 g).
A una solución del éter de tipo 5'-OTBDPS (94,0 g, 194,2 mmol) en DCM anhidro (300 mL), se añadió nitrato de plata (66,03 g, 388,4 mmol) y colidina (235 mL, 1,94 mol). La mezcla se agitó a TA. Después de 15 min, la mezcla se enfrió hasta 0 °C y se añadió cloruro de monometoxitritilo (239,3 g, 776,8 mmol) en una única porción. Después de agitar durante toda la noche a T.A., la mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se diluyó con TBME. La solución se lavó sucesivamente con ácido cítrico 1M, salmuera diluida y bicarbonato de sodio al 5%. La solución orgánica se secó con sulfato de sodio y se concentró al vacío para obtener el intermedio totalmente protegido como una espuma amarilla.
Este intermedio totalmente protegido se disolvió en tolueno (100 mL) y la solución se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en THF anhidro (250 mL) y se trató con TBAF (60 g, 233 mmol). La mezcla se agitó durante 2 h a TA y se eliminó el disolvente a presión reducida. El residuo se arrastró con acetato de etilo y la solución se lavó en primer lugar con bicarbonato de sodio saturado y a continuación con salmuera. Después de secar con sulfato de magnesio, se eliminó el disolvente al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (50% de EA en PE) para obtener 105-2 (91 g, 86,4%) como una espuma blanca.
A una solución de 105-2 (13,5 g, 26 mmol) en DCM (100 mL), se añadió piridina (6,17 mL, 78 mmol). La solución se enfrió hasta 0 °C y se añadió peryodinano de Dess-Martin (33,8 g, 78 mmol) en una única porción. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h a TA y se desactivó mediante la adición de una solución de Na2S2O3 (al 4%) y una solución acuosa de bicarbonato de sodio (al 4%) (la solución se ajustó a un pH de 6, ~150 mL). La mezcla se agitó durante 15 min. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera diluida y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en dioxano (100 mL) y la solución se trató con formaldehído acuoso al 37% (21,2 g, 10 eq.) e hidróxido sodio acuoso 2N (10 eq.). La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Después de agitar durante 0,5 h a TA, el exceso de hidróxido de sodio acuoso se eliminó con NH4Cl saturado (~150 mL). La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se repartió entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio al 5%. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó con sulfato de sodio y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (2% de MeOH en DCM) para obtener 105-3 (9,2 g, 83,6%) como una espuma blanca.
El compuesto 105-3 (23 g, 42,0 mmol) se co-evaporó con tolueno dos veces. El residuo se disolvió en DCM anhidro (250 mL) y piridina (20 mL). La solución se enfrió hasta 0 °C y se añadió anhídrido tríflico (24,9 g, 88,1 mmol) gota a gota durante 10 min. A esta temperatura, la reacción se agitó durante 40 min. La reacción se monitoreó mediante TLC (PE: EA= 2:1 y DCM: MeOH= 15:1). Una vez finalizada, la mezcla de reacción se inactivó con agua (50 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 min y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró a través de un lecho de gel de sílice. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (50% de EA en PE) para obtener 105-4 (30,0 g, 88,3%) como una espuma marrón.
A una solución agitada de 105-4 (4,4 g, 5,42 mmol) en DMF anhidro (50 mL), se añadió NaH (260 mg, 6,5 mmol) a 0 °C en atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a TA durante 1,5 h. La solución se utilizó para el siguiente paso sin ningún tratamiento adicional.
Se añadió NaN3 (1,5 g, 21,68 mmol) a la solución agitada a 0 °C en atmósfera de nitrógeno y la solución resultante se agitó a TA durante 1,5 h. La reacción se desactivó con agua, se extrajo con EA, se lavó con salmuera y se secó con MgSO4. La fase orgánica concentrada se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.
A una solución de 105-6 (3,0 g, 5,4 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (18 mL), se añadió NaOH (5,4 mL, 2M en agua) a TA. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 3 h. La reacción se diluyó con EA, se lavó con salmuera y se secó con MgSO4. La fase orgánica concentrada se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener 105-7 (2,9 g, 93%) como una espuma blanca.
Se disolvió el compuesto 105-7 (520 mg, 0,90 mmol) en HCOOH al 80% (20 mL) a TA. La mezcla se agitó durante 3 h y se monitoreó mediante TLC. Se eliminó el disolvente y el residuo se trató con MeOH y tolueno 3 veces. Se añadió NH3/MeOH y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 min. Se concentró el disolvente a sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para obtener el compuesto 105 (120 mg, 44,4%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 302,0 [M+H]+, 324,0[M Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 76
COMPUESTO 106
Figure imgf000107_0001
A una solución agitada de 105-7 (1,1 g, 2,88 mmol) en DCM anhidro (10 mL), se añadió MMTrCl (1,77 g, 5,76 mmol), AgNO3 (1,47 g, 8,64 mmol) y colidina (1,05 g, 8,64 mmol) a 25 °C en atmósfera de N2. La reacción se calentó a reflujo durante 12 h. Se añadió MeOH (20 mL) y se eliminó el disolvente a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 106-1 (1,6 g, 85,1%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 106-1 (800 mg, 0,947 mmol) en MeCN anhidro (10 mL), se añadió TPSCl (570 mg, 1,89 mmol), DMAP (230 mg, 1,89 mmol) y TEA (190 mg, 1,89 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante 12 h. Se añadió NH4OH (25 mL) y la mezcla se agitó durante 2 h. Se eliminó el disolvente y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice como una espuma amarilla. Una purificación adicional mediante prep-TLC proporcionó 106-2 (700 mg, 87,1%) como un sólido blanco.
Se disolvió el compuesto 106-2 (300 mg, 0,355 mmol) en HCOOH al 80% (5 mL) a TA. La mezcla se agitó durante 3 h y se monitoreó mediante TLC. A continuación, se eliminó el disolvente y el residuo se trató con MeOH y tolueno (3 veces). Se añadió NH3/MeOH y la mezcla se agitó a TA durante 5 min. El disolvente se retiró y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna para obtener el compuesto 106 (124 mg, 82,6%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 301,0 [M+H]+, 601,0[2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 77
COMPUESTO 108
Figure imgf000108_0001
A una suspensión agitada de 108-1 (20 g, 77,5 mmol), PPh3 (30 g, 114,5 mmol), imidazol (10 g, 147 mmol) y piridina (90 mL) en THF anhidro (300 mL) se agregó una solución de I 2 (25 g, 98,4 mmol) en THF (100 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó a temperatura ambiente (TA) y se agitó a TA durante 10 h. La reacción se inactivó mediante MeOH (100 mL). El solvente se retiró y el residuo se volvió a disolver en una mezcla de acetato de etilo (EA) y THF (2 L, 10:1). La fase orgánica se lavó con Na2S2O3 ac. saturado, y la fase acuosa se extrajo con una mezcla de EA y THF (2 L, 10:1). La capa orgánica se combinó y concentró para proporcionar un residuo, que se purificó en una columna de gel de sílice (0-10% de MeOH en DCM) para proporcionar 108-2 (22,5 g, 78,9%) como un sólido blanco. 1H RMN: (DMSO-de, 400 MHz) 511,42 (s, 1H), 7,59 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 5,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,23 (s, 1H), 3,77-3,79 (m, 1H), 3,40-3,62 (m, 3H), 0,97 (s, 3H).
A una solución agitada de 108-2 (24,3 mg, 66,03 mmol) en MeOH anhidro (240 mL), se añadió NaOMe (10,69 mg, 198,09 mmol) a TA bajo N2. La mezcla se sometió a reflujo durante 3 h. El solvente se retiró y el residuo se re-disolvió en piridina anhidra (200 mL). A la mezcla se añadió Ac2O (84,9 g, 833,3 mmol) a 0 °C. La mezcla se calentó hasta 60 °C y se agitó durante 10 h. El solvente se retiró y el residuo se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO3 saturado y salmuera. La capa orgánica se concentró y purificó en una columna de gel de sílice (10-50% EA en PE) para proporcionar 108-3 (15 g, 70,1%) como un sólido blanco. 1H RMN: (CDCls, 400 MHz) 58,82 (s, 1H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 5,77 (dd, J = 8,0, 2,0 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 2,8Hz, 1H), 2,07 (d, J = 5,2Hz, 6H), 1,45 (s, 3H).
A una solución enfriada con hielo de 108-3 (15 g, 46,29 mmol) en DCM anhidro (300 mL) se le añadió AgF (29,39 g, 231,4 mmol). Se añadió I2 (23,51 g, 92,58 mmol) en DCM anhidro (1,0 L) gota a gota a la solución. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 h. La reacción se inactivó con Na2S2O3 y NaHCO3, saturados, y se extrajo con DCM. La capa orgánica se separó, se secó y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10-30% EA en PE) para proporcionar 108-4 (9,5 g, 43,6%) como un sólido blanco. 1H RMN: (Metanol-d4, 400 MHz) 5 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,80 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,73 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,58 (s, 1H), 3,54 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,58 (s, 3H).
A una solución de 108-4 (7,0 g, 14,89 mmol) en DMF anhidro (400 mL), se añadió NaOBz (21,44 g, 148,9 mmol) y 15-corona-5 (32,75 g, 148,9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 130 °C durante 6 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se evaporó y purificó en una columna de gel de sílice (10-30% EA en PE) para proporcionar 108-5 (2,8 g, 40,5%). ESI-MS: m/z 444,9 [M - F H]+.
Se mantuvo una mezcla de 108-5 (4,0 g; 8,6 mmol) y amoníaco líquido durante la noche a TA en un recipiente de acero inoxidable de alta presión. Luego se evaporó el amoníaco y el residuo se purificó en sílice (columna de 50 g) con una mezcla de solvente CH2Cl2/MeOH (gradiente 4-12%) para proporcionar el compuesto 108 como una espuma incolora (2,0 g; 84% de rendimiento). ESI-MS: m/z 275,1 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 78
COMPUESTOS 109 Y 110
Figure imgf000108_0002
Se disolvió 108 (14 mg, 0,05 mmol) seco en la mezcla de PO(OMe)3 (0,750 mL) y piridina (0,5 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min con una temperatura del baño de 42 °C y a continuación se enfrió hasta TA. Se agregó N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de POCL (0,009 mL, 0,1 mmol). La mezcla se mantuvo a TA durante 45 min. Se añadió tributilamina (0,065 mL, 0,3 mmol) y sal de pirofosfato de N-tetrabutilamonio (100 mg). Se agregó DMF seco (alrededor de 1 mL) para obtener una solución homogénea. En 1 h, la reacción se inactivó con tampón de acetato de amonio 2M (1 mL, pH = 7,5), agua diluida (10 mL) y se cargó en una columna HiLoad 16/10 con Q Sepharose High Performance. La separación se llevó a cabo con un gradiente lineal de NaCl de 0 a 1N en tampón de TRIS 50 mM (pH 7,5). Las fracciones eluidas al 60% del tampón B contenían el Compuesto 109 y al 80% del tampón B contenían el Compuesto 110. Las fracciones correspondientes se concentraron y el residuo se purificó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 30% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. Compuesto 109: P31-RMN (D20): -3,76 (s); MS: 378,2 [M-1]. Compuesto 110: P31-RMN (D20): -9,28(d, 1H, Pa), -12,31 (d, 1H, Py), -22,95(t, 1H, Pp); MS 515,0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 79
COMPUESTO 112
Figure imgf000109_0001
El compuesto 112 (36 mg, 63%) se sintetizó como se describió para el compuesto 2 usando un reactivo de fosforocloridato de éster neopentílico. MS: 572,6 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 80
COMPUESTOS 116 Y 117
Figure imgf000109_0002
Se disolvió 108 (14 mg, 0,05 mmol) seco en la mezcla de PO(OMe)3 (0,750 mL) y piridina (0,5 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min con una temperatura del baño de 42 °C y a continuación se enfrió hasta TA. Se agregó N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de PSCl3 (0,01 mL, 0,1 mmol). La mezcla se mantuvo a TA durante 1 h. Se añadieron tributilamina (0,065 mL, 0,3 mmol) y sal de N-tetrabutilamonio de pirofosfato (200 mg). Se agregó DMF seco (alrededor de 1 mL) para obtener una solución homogénea. En 2 h, la reacción se inactivó con tampón de acetato de amonio 2M (1 mL, pH = 7,5), se diluyó con agua (10 mL) y se cargó en una columna HiLoad 16/10 con Q Sepharose High Performance. La separación se llevó a cabo con un gradiente lineal de NaCl de 0 a 1N en tampón de TRIS 50 mM (pH 7,5). Las fracciones eluidas al 80% del tampón B contenían los compuestos 116 y 117.
Las fracciones correspondientes se concentraron y el residuo se purificó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 20% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Se recogieron dos picos. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. Pico 1 (más polar): 31P-RMN (D2O): 42,68(d, 1 H, Pa), -9,05(d, 1H, Py), -22,95(t, 1H, Pp); MS 530,9.0 [M-1]. Pico 2 (menos polar): 31P-RMN (D2O): 42,78(d, 1 H, Pa), -10,12(s a, 1H, Py), -23,94(t, 1H, Pp); y MS 530,9.0 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 81
COMPUESTOS 118 Y 121
Figure imgf000110_0001
Los diastereómeros del compuesto 5 se separaron mediante RP-HPLC. Un gradiente de 10-43% ACN en H2O durante 26 minutos en una columna de partículas Synergi Hydro RP 30 x 250 m 4u (Phenomenex PN 00G-4375-U0-AX) eluyó el compuesto 121 (29,5 minutos) y el compuesto 118 (30,1 minutos). Las fracciones puras se liofilizaron para producir un polvo blanco. Compuesto 121: 31P-n Mr (DMSO-d6) 3,448 ppm; MS: m/z: 544 M-1; Compuesto 118: 31P-RMN (DMSO-d6) 3,538 ppm; MS: m/z: 544 M-1.
EJEMPLO DE REFERENCIA 82
COMPUESTOS 120 Y 119
Figure imgf000110_0002
Los diastereómeros del compuesto 8 se separaron mediante RP-HPLC. Un gradiente de 25-52% ACN en H2O durante 26 minutos en una columna de partículas Synergi Hydro RP 30x250 m 4u (Phenomenex PN 00G-4375-U0-AX) eluyó el compuesto 119 (24,8 minutos) y el compuesto 120 (25,3 minutos). Las fracciones puras se liofilizaron para producir un polvo blanco. Compuesto 119: 31P-r Mn (DMSO-d6) 3,492 ppm; MS: m/z: 584 M-1. Compuesto 120: 31P-RMN (DMSO-d6) 3,528 ppm; MS: m/z: 584 M-1.
EJEMPLO DE REFERENCIA 83
COMPUESTO 122, sal de bis-litio
Figure imgf000110_0003
El compuesto 122-1 se sintetizó usando un procedimiento similar para preparar el compuesto 2 usando clorhidrato de éster bencílico de alanina. LCMS: m/z 592 [M-1]-.
A una solución de 122-1 (1,1 g, 1,85 mmol) en dioxano (15 mL) y agua (3 mL) se agregó acetato de trietilamonio acuoso (2M, 2 mL, 4 mmol) seguido de Pd-C (10%, 100 mg). La mezcla se hidrogenó (balón) durante 2 h y se monitoreó mediante HPLC. El catalizador se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se suspendió en solución al 3% de perclorato de litio en acetona (25 mL). El sólido se aisló mediante filtración, se enjuagó con acetona y se secó al vacío para proporcionar el compuesto 122 (sal de bis-litio) (731 mg, 90%). LCMS: m/z 426 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 84
COMPUESTO 151
Figure imgf000111_0001
El compuesto 108 (40 mg, 0,14 mmol) y bis(pivaloiloximetil)fosfato de trietilamonio (0,21 mmol, preparado a partir de 80 mg de bis(pivaloiloximetil)fosfato y 30 pL de Et3N) se volvieron anhidros mediante co-evaporación con piridina, seguido de tolueno. El residuo evaporado se disolvió en THF anhidro (2 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadieron diisopropiletilamina (73 pL, 3 eq.), BopCl (71 mg, 2 eq.) y 3-nitro-1,2,4-triazol (32 mg, 2 eq.). La mezcla se agitó a 0°C durante 90 min. La mezcla se diluyó a continuación con EtOAc, se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SÜ4. Purificación en columna de gel de sílice con CH2G2 /i-PrOH (gradiente 4-10%) seguido de purificación RP-HPLC (A: agua, B: MeCN) produjo el compuesto 151 (13 mg, 16%). MS: m/z = 1167 (2M-1).
EJEMPLO DE REFERENCIA 85
COMPUESTO 159
Figure imgf000111_0002
A una solución de bis(isopropiloxicarboniloxietil-1 )fosfato de trietilamonio (0,28 mmol, preparada a partir de 100 mg de bis(isopropiloxicarboniloxietil-1)fosfato y 40 pL de Et3N) en THF se le añadió 159-1 (60 mg, 0,18 mmol). La mezcla se evaporó y se volvió anhidra mediante co-evaporación con piridina seguida de tolueno. El residuo evaporado se disolvió en THF anhidro (2,5 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió diisopropiletilamina (94 pL, 3 eq.) seguida de BOP-Cl (92 mg, 2 eq.) y 3-nitro-1,2,4-triazol (41 mg, 2 eq.). La mezcla se agitó a 0 °C durante 90 min, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en columna de gel de sílice con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 3-10%) para obtener 159-2 (19 mg, 17%).
Una solución de 159-2 (19 mg, 0,03 mmol) en HCOOH ac. al 80% se agitó a TA durante 90 minutos y a continuación se concentró. El residuo se co-evaporó con tolueno y a continuación con MeOH que contenía una pequeña cantidad de Et3N (1 gota). La purificación en una columna de gel de sílice con C^C^/M eO H (gradiente de 4-10%) produjo el compuesto 159 (5 mg, 26%). MS: m/z = 629 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 86
COMPUESTO 160
Figure imgf000111_0003
Se agitó una mezcla de benciloxicarbonil-L-valina (55 mg, 0,22 mmol) en THF (1 mL) y CDI (36 mg, 0,22 mmol) a TA durante 1,5 h y a continuación a 40 °C durante 20 minutos. La solución se agregó a una mezcla del compuesto 44 (122 mg, 0,2 mmol) y DMAP (3 mg, 0,03 mmol) en DMF (1,5 mL) y TEA (0,75 mL) a 80 °C. La mezcla se agitó a 80 °C durante 1 h. Después del enfriamiento, la mezcla se concentró y el residuo se dividió entre terc-butil metil éter y agua. La capa orgánica se lavó con ácido cítrico 0,1 M, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SÜ4. El residuo se purificó en columna de gel de sílice con CH2CL/MeOH (gradiente de 4-10%) para obtener 160-1 (83 mg, 50%) como una espuma incolora.
A una solución de 160-1 (83 mg, 0,1 mmol) en EtOH se añadieron HCl (4 N en dioxano; 50 pL, 2 eq.) y Pd/C al 10% (5 mg). La mezcla se agitó en atmósfera de H2 (presión normal) durante 1 h. El catalizador se retiró mediante filtración a través de una almohadilla de Celite y el filtrado se evaporó para proporcionar el compuesto 160 (50 mg) como un sólido blanco. MS: m/z = 702 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 87
COMPUESTO 113
Figure imgf000112_0001
El compuesto 5-2 (32 mg, 0,1 mmol) se disolvió en THF seco (3 mL) y se agregó solución 2M de bromuro de isopropilmagnesio en THF (0,1 mL) a 0 °C. La reacción se dejó durante 1 h a TA, y se añadió fenil (isopropi/-L-alaninil) tiofosforoclorhidrato (0,3 mmol). La mezcla se dejó durante la noche a TA. El análisis de LSMS mostró alrededor del 20% del material de partida sin reaccionar. Se añadió la misma cantidad de reactivo de Grignard y tiofosforocloruro, y la mezcla se calentó a 37 °C durante 4 h. La reacción se inactivó con NH4CL El producto se disolvió en EA, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4, y se evaporó. El aceite resultante se disolvió en ácido fórmico al 80% (4 mL) y se evaporó en 1 h. El compuesto 113 se purificó mediante HPLC RP en gradiente de metanol en agua de 30% a 95% en columna Synergy 4u Hydro-RP (Phenominex) proporcionando un sólido incoloro. Compuesto 113 (7 mg, rendimiento 12,5%). MS 560,0 (M-H).
EJEMPLO DE REFERENCIA 88
COMPUESTO 125
Figure imgf000112_0002
El compuesto 125-1 (109 mg) se disolvió en HCOOH al 80% (15 mL) y se mantuvo durante 3 h a TA, a continuación se evaporó. El residuo se trató con NH3/MeOH durante 1 h a TA para eliminar los productos secundarios que contenían formilo. Después de la evaporación, el compuesto 125 se purificó mediante cristalización usando metanol para proporcionar el compuesto 125 (52 mg, 86%). MS: 339,6 [M-1], 679,7 (2M-1).
EJEMPLO DE REFERENCIA 89
COMPUESTO 148
Figure imgf000113_0001
El compuesto 148-1 (15,0 g, 25,55 mmol) se trató con HOAc al 90% (150 mL) a TA. La mezcla se agitó a 110 °C durante 12 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en DCM y la solución se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (5-2% MeOH en DCM) para obtener 148-2 (11,0 g, 88,9%) como un sólido blanco.
El compuesto 148-2 (12,0 g, 24,79 mmol) se trató con NH3 en MeOH (200 mL, 7 M) a TA. La solución se agitó a TA durante 12 h y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (10-3% MeOH en DCM) para obtener 148-3 (6,5 g, 95,0%) como un sólido blanco.
A una suspensión agitada de 148-3 (4,3 g, 15,58 mmol), se agregó PPh3 (8,16 g, 31,15 mmol), imidazol (2,11 g, 31,15 mmol) y piridina (15 mL) en THF anhidro (45 mL) una solución de I2 (7,91 g, 31,15 mmol) en THF (100 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó lentamente a TA y se agitó durante la noche. La mezcla se inactivó con MeOH (100 mL). El solvente se retiró a baja presión y el residuo se volvió a disolver en una mezcla de EA y THF (0,2 L, 10:1). La fase orgánica se lavó con Na2S2O3 ac. sat. (2x). La fase acuosa se extrajo con una mezcla de EA y THF (0,2 L, 10:1,2x). La fase orgánica concentrada se secó con Na2SO4 anhidro. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (0-10% MeOH en DCM) para obtener 148-4 (5,1 g, 85,0%) como un sólido blanco.
El compuesto 148-4 (800 mg, 2,07 mmol) se disolvió en una mezcla de DBU (4 mL) y THF (4 mL) a TA en N2. La solución se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se neutralizó con HOAc y se extrajo con una mezcla de EA y THF (10:1, 40 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4 anhidro. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (0-10% MeOH en DCM) para obtener 148-5 (240 g, 44,9%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 148-5 (1,20 g, 4,65 mmol) en MeCN anhidro (12 mL) se le agregó NIS (1,57 g, 6,97 mmol) y TEA^3HF (1,12 g, 6,97 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 5 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (0-5% MeOH en DCM) para obtener 148-6 (0,91 g, 48,6%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 148-6 (1,2 mg, 2,97 mmol) en DCM anhidro (12 mL), se añadió BzCl (0,83 mg, 5,94 mmol), TEA (0,6 mg, 5,94 mmol) y DMAP (0,72 mg, 5,94 mmol) sucesivamente a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La solución se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (0-5% MeOH en DCM) para obtener 148-7 (1,2 g, 66,2%) como un sólido blanco.
Se neutralizó hidróxido de tetrabrutilamonio (25,78 mL, 51,78 mmol) con TFA (4,3 mL) a pH=4 y la solución se agregó a una solución de 148-7 (1,09 g, 2,14 mmol) en DCM (30 mL). m-CPBA (1,85 g, 10,74 mmol) se agregó en porciones bajo agitación vigorosa y la mezcla se agitó durante 12 h. La mezcla se diluyó con EA (100 mL) y se lavó con bicarbonato de sodio saturado. La fase orgánica se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 148-8 (350 g, 41,1%) como un sólido blanco.
El compuesto 148-8 (280 mg, 0,704 mmol) se trató con NH3 en MeOH (10 mL, 7 M) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (0-10% MeOH en DCM) para obtener el compuesto 148 (110 g, 53,1%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 295,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 90
COMPUESTO 150
Figure imgf000114_0001
A una solución enfriada por hielo de 150-1 (10 g, 42 mmol) en MeCN anhidro (200 mL) se le añadió TEA^3HF (10 g, 62,5 mmol) y NIS (28 g, 126 mmol). La mezcla se agitó durante 1,5 h y se monitoreó mediante TLC. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (15% de MeOH en DCM) para obtener 150-2 (12 g, 74%) como un sólido amarillo.
A una solución de 150-2 bruto (22 mg, 57 mmol) en DCM anhidro (200 mL), se añadió DMAP (21 g, 171 mmol) y BzCl (17,6 g, 125 mol). La mezcla se agitó durante 5 h y se monitoreó mediante LCMS. La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera, y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 150-3 (30 g, 88%) como una espuma blanca.
A una solución de 150-3 (6,5 g, 11 mmol) en DMF anhidro (270 mL), se añadió NaOBz (15,8 g, 110 mmol) y 15-corona-5 (29 g, 132 mmol). La mezcla se agitó a 95 °C durante 48 h.El precipitado se retiró mediante filtración y el solvente orgánico se retiró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL) y la solución se lavó con solución saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 150-4 (3 g bruto, 46,1%) como un aceite.
El compuesto 150-4 (3 g, bruto) se trató con NH3 en MeOH (120 mL, 7 M). La mezcla se agitó durante 3 h y se monitoreó mediante TLC. La solución se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (10% de isopropanol en DCM) para proporcionar 150-5 (1,0 g, 67%) como un sólido blanco.
1H-RMN (CD3OD, 400MHz) 5 = 1,19(s, 3H), 3,76-3,82 (m, 2H), 4,02 (d, J = 19,8 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 6,27 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,07 Hz, 1 H).
El compuesto 150-5 (100 g, 0,36 mmol) se co-evaporó con tolueno (3 mL). A una solución agitada de 150-5 (100 mg, 0,36 mmol) en una mezcla de MeCN (1,0 mL) y NMI (295 mg, 3,6 mmol) se agregó una solución de 150-C (255,6 mg, 0,72 mmol, preparación descrita más adelante) en MeCN (0,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se diluyó con EA (20 mL). La capa orgánica se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro. La fase orgánica se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% /-PrOH en DCM) para obtener el producto crudo. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (0,1% HCOOH en agua y MeCN) para obtener el compuesto 150 (46,7 mg, 23,3%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 618 [M Na]+.
A una solución agitada de 150-A (2,0 g, 13,16 mmol) y naftalen-1-ol (1,89 g, 13,16 mmol) en DCM anhidro (100 mL) se agregó una solución de TEA (1,33 g, 13,16 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota a -78 °C. Después de la adición, la mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. La solución se enfrió a -78 °C y se agregó clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo (2,20 g, 13,16 mmol) en DCM (20 mL), seguido de TEA (2,66 g, 26,29 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota. La mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. El solvente orgánico se retiró a baja presión. El residuo se disolvió en metil-butil éter. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM anhidro) para obtener 150-C (1,0 mg, 24,8%) como un aceite incoloro.
EJEMPLO DE REFERENCIA 91
COMPUESTOS 152 Y 153
Figure imgf000115_0001
A una solución de 150-5 (300 mg, 1,08 mmol) y NMI (892 mg, 10 mmol) en MeCN anhidro (4 mL) se agregó una solución de 152-C (736 mg, 2,17 mmol, preparación descrita a continuación) en MeCN anhidro (1 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se diluyó con EA (30 mL). La capa orgánica se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (iPrÜH en DCM de 1% a 5%) para obtener el compuesto 152 bruto (276 g, bruto). El compuesto bruto 152 (96 mg) se purificó mediante prep-HPLC (HCÜÜH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar el compuesto puro 152 (46 mg, 47,9%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 560 [M - F]+.
A una solución de 152 (180 g, 0,31 mmol) en piridina anhidra (6 mL) se añadió anhídrido acético (158 g, 1,54 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La solución se inactivó con agua y se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (10 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro. La fase orgánica se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (/-PrÜH en DCM de 1% a 3%) para obtener el compuesto 153 bruto (172 mg). El compuesto bruto 153 se purificó mediante prep-HPLC (HCÜÜH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar el compuesto puro 153 (46 mg, 23,8%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 602,3 [M - F]+.
El compuesto 152-C (1,02 g, 23%, un aceite incoloro) se preparó usando un procedimiento similar a la preparación de 150-C usando 150-A (2,00 g, 13,16 mmol) y 4-clorofenol (1,68 g, 13,16 mmol).
EJEMPLO DE REFERENCIA 92
COMPUESTO 165
Figure imgf000115_0002
A una solución de 165-1 (5 g, 0,02 mol), ciclopentanona (5,25 g, 0,06 mol, 4,5 eq.) y trimetoximetano (6,52 g, 0,06 mol, 3 eq.) en MeCN (80 mL) se le agregó T S Ü H ^ Ü (1,95 g, 0,01 mol). La mezcla se calentó a 80 °C durante la noche. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 165-2 (3,8 g, 60%) como un aceite blanco.
A una solución de 165-2 (5 g, 0,16 mol) en MeCN (50 mL anhidro) se agregó IBX (5,33 g, 0,019 mol, 1,11 eq.) a TA. La mezcla se calentó a 80 °C durante 5 h. La mezcla se enfrió a TA y se filtró. El filtrado se concentró para proporcionar 165-3 (4,5 g, pureza: 90 %).
A una solución de 165-3 (5 g, 0,016 mol) y CH2O (3,6 mL) en 1,4-dioxano (50 mL) se agregó solución de NaOH (11,3 mL, 2 N) a TA. La mezcla se agitó durante 5 h a TA. Se añadió NaBH4 (1,48 g, 0,038 mol) a 0 °C y se agitó durante 1 h. La reacción se inactivó con H2O (30 mL) y se extrajo con EA (3 x 30 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 165-4 (2,1 g, 38%) como un aceite blanco.
A una solución agitada de 165-4 (3 g, 0,0088 mol) y piridina (3,51 mL, 5 eq.) en DCM (27 mL) se agregó Tf2O (3,27 mL, 0,019 mol) a -35 °C. La mezcla se calentó lentamente hasta 0°C y se agitó durante 2 h a 0°C. La mezcla se lavó con solución sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM (3 x 30 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% EA en PE) para obtener 165-5 (2,65 g, 39%) como un aceite blanco.
A una solución de 165-5 (12,3 g, 0,02 mmol) en DMF (20 mL) se le añadió NaH (0,977 g, 0,024 mmol) a 0°C y la mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se trató con LiCl (2,6 g, 0,062 mol) y a continuación se agitó durante 2 h. La reacción se inactivó con H2O (20 mL) y se extrajo con EA (3 x 30 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 165-6 (3,11 g, 45%) como un aceite blanco.
A una solución de 165-6 (12 g, 0,035 mol) en THF (120 mL) se agregó solución de NaOH (38,8 mL, 0,038 mol) a 0 °C y se agitó durante 3 h a TA. La mezcla se ajustó a pH=7 con solución de HCl (1,0 N) y se extrajo con EA (3 x 80 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 165-7 (7,58 g, 60%) como un sólido blanco.
165-7 (3 g, 8,0 mmol) se co-evaporó con tolueno (30 mL). A una solución de 165-7 (3 g), se agregó DMAP (100 mg) y TEA (2,5 mL, 2 eq.) en DCM (30 mL) Bz2O (2,01 g, 1 eq.) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 3 h a TA. La reacción se inactivó con H2O y se extrajo con DCM (3 x 30 mL). La capa de DCM se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% EA en PE) para obtener 165-8 (3,1 g, 80%) como un sólido blanco.
A una solución de 165-8 (200 mg, 0,43 mmol) en CH3CN anhidro (2 mL) se añadió TPSCl (260 mg, 2 eq.), TEA (0,13 mL) y DMAP (106,4 mg, 2 eq.). La mezcla se agitó durante 2 h a TA.
La mezcla se trató con NH3 ^ H2O (33%, 1,33 mL) y se agitó durante 2 h a TA. La reacción se inactivó con HCl 1N (30 mL) y se extrajo con DCM (3 x 30 mL). La capa de DCM se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 165-9 (85 g, 50%) como un sólido blanco.
165-9 (100 mg, 0,216 mmol) se trató con HCOOH (7 mL, 80%) y se agitó durante 3 h a TA. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (90% EA en PE) para obtener 165-10 (51 g, 60%) como un sólido blanco.
165-10 (270 mg, 0,68 mmol) se trató con NH3 en MeOH (10 mL) a - 60 °C. La mezcla se calentó a TA. La mezcla se agitó durante 6 h a TA. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó por HPLC inversa para obtener 165 (60 mg, 30%) como un sólido blanco.
EJEMPLO DE REFERENCIA 93
COMPUESTO 169
A una solución de 106 (200 mg, 0,67 mmol) en piridina anhidra (5 mL), se añadió TBSCI (120 mg, 0,8 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante toda la noche y la mezcla de reacción se diluyó con EA. La mezcla se lavó con una solución ac. de NaHCO3 y salmuera. La fase orgánica se secó, se filtró y se concentró para obtener un residuo, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM a 25% MeOH en DCM) para obtener 169-1 (153 mg, 55%) como un sólido blanco.
A una solución de 169-1 (54 mg, 0,13 mmol) en DCM anhidro (2 mL), se añadió colidina (95 pL, 0,78 mmol), DMTrCl (262 mg, 0,78 mmol) y AgNO3 (66 mg, 0,39 mmol) a TA. La mezcla se agitó durante toda la noche y a continuación se diluyó con DCM (5 mL). La mezcla se filtró a través de un embudo empaquetado previamente con celite y el filtrado se lavó con una solución ac. de NaHCO3, una solución de ácido cítrico 1,0 M y a continuación salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión para obtener un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (25% EA en PE a 100% EA) para obtener 169-2 (83,5 mg, 63,6%).
A una solución de 169-2 (83 mg, 0,081 mmol) en THF (1 mL), se añadió una solución 1M de TBAF en THF (0,122 mL, 0,122 mmol) a la temperatura de un baño de hielo. La mezcla se agitó durante 1,5 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó y se concentró para obtener el producto crudo, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (desde DCM hasta un 5% de MeOH en DCM) para obtener 169­ 3 (66,6 mg, 91%) como una espuma blanca.
169-3 (66,6 mg, 0,074 mmol) se co-evaporó con tolueno y THF (3x). Se añadió Bis(POC)fosfato (33 mg, 0,96 mmol) y a continuación se co-evaporó con tolueno (3x). La mezcla se disolvió en THF anhidro (1,5 mL) y se enfrió en un baño de hielo (de 0 a 5 °C). Se añadió sucesivamente 3-nitro-1,2,4-triazol (13 mg, 0,11 mmol), diisopropiletilamina (54 pL, 0,3 mmol) y BOP-Cl (28 mg, 0,11 mmol). La mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C, se diluyó con EtOAc, se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCO3 ac. sat. y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente de 4-10%) para obtener 169-4 (68 mg, 76%) como un sólido blanco.
Se disolvió 169-4 (68 mg, 0,07 mmol) en HCOOH al 80%. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo se disolvió en un 50% de CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando CH3CN y H2O. El producto se sometió a liofilización para obtener 169 (4,8 mg, 14%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 613,1 [M+H]+, 1225,2[2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 94
COMPUESTO 145
Figure imgf000117_0001
Se disolvió AA-1 (2,20 g, 3,84 mmol) en HCOOH al 80% (40 mL) a T.A. (18 °C). La mezcla se agitó a T.A. durante 12 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna utilizando un 50% de EA en hexano para obtener AA-2 (1,05 g, 91,3%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de AA-2 (1 g, 3,32 mmol) en piridina anhidra (20 mL), se añadió TBSCl (747 mg, 4,98 mmol) e imidazol (451 mg, 6,64 mmol) a T.A. (16 °C) en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. La solución resultante se concentró a sequedad a presión reducida y el residuo se disolvió en EA (100 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCÜ3 y salmuera, y se secó con MgSÜ4 anhidro. La solución se concentró a sequedad y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice utilizando un 20% de EA en hexano para obtener AA-3 (1,4 g, 79,5%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de AA-3 (1,50 g, 2,83 mmol, 1,00 eq.) en CH3CN anhidro (28 mL), se añadió TPSCl (1,71 g, 5,80 mmol, 2,05 eq.), DMAP (691,70 mg, 5,66 mmol, 2,00 eq.) y TEA (573,00 mg, 5,66 mmol, 2,00 eq.) a TA (15 °C). La mezcla se agitó durante 2 h. Se añadió NH3.H2O (20 mL) y la mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener AA-4 (2,3 g, crudo) como una espuma amarilla.
A una solución agitada de AA-4 (1,90 g, 2,34 mmol) en DCM anhidro (20 mL), se añadió DMTrCl (1,82 g, 3,49 mmol) y 2,4,6-trimetilpiridina (1,00 g, 8,25 mmol) a TA (15 °C) en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. Se añadió MeÜH (20 mL). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en EA (80 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (5% de MeÜH en DCM) para obtener AA-5 (1,4 g, crudo) como un sólido blanco.
Se disolvió AA-5 (2,40 g, 2,60 mmol) en TBAF (10 mL, 1M en THF). La mezcla se agitó a TA (15°C) durante 30 min. La mezcla se concentró a sequedad y el residuo se disolvió en EA (60 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con MgSÜ4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (5% MeÜH en DCM) para obtener AA (1,50 g, 95,8%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 625,3 [M Na]+.
A una solución de AA (60,0 mg, 99,57 pmol, 1,00 eq.) en piridina (1 mL), se añadió anhídrido isobutírico (31,50 mg, 199,13 pmol, 2,00 eq.) en 1 porción a TA (15 °C) en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La mezcla se concentró y el residuo se repartió entre EA y agua. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron con Na2SÜ4 anhidro. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (30% de EA en PE) para proporcionar 145-1 (59,00 mg, 79,77%) como un sólido blanco.
Se disolvió 145-1 (57,00 mg, 76,74 pmol, 1,00 eq.) en CH3CÜÜH al 80% (8 mL). La solución se agitó a TA (15 °C) durante 12 h. La mezcla se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2,5% MeÜH en DCM) para obtener 145 (23,00 mg, 68,05%) como una espuma blanca. ESI-MS: m/z 441,2 [M+H]+, 463,2[M+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 95
COMPUESTO 170
Figure imgf000118_0001
171-1 se preparó de un modo similar a 145-1 utilizando AA (62,00 mg, 102,89 pmol, 1,00 eq.) en piridina (1 mL) y anhídrido pentanoico (38,32 mg, 205,77 pmol, 2,00 eq.). 171-1 (sólido blanco, 60,00 mg, 75,65%).
171 se preparó de un modo similar a 145 utilizando 171-1 (75,00 mg, 97,30 pmol, 1,00 eq.) 171 (espuma blanca, 28,00 mg, 61,43%). ESI-MS: m/z 469,2 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 97
COMPUESTO 146
Figure imgf000119_0001
146-2 (40,7 mg, 53%) se preparó del mismo modo a partir de 146-1 (50 mg, 0,087 mmol) y fosfato de bis(isopropiloxicarboniloximetilo) (58 mg, 0,175 mmol) con DIPEA (75 pL, 0,52 mmol), BOP-Cl (66,2 mg, 0,26 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (30 mg, 0,26 mmol) en THF (0,4 mL) de un modo similar a 169-4.
146-2 (40 mg, 0,045 mmol) fue disuelto en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4N en dioxano (34 pL, 0,135 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. Se añadió EtOH anhidro (200 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 5-7%) y se liofilizó para obtener 146 (15,4 mg, 76%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 614,15 [M+H]+, 1227,2 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 98
COMPUESTO 172
Figure imgf000119_0002
172-1 (100 mg, 0,174 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra (3x), tolueno (3x) y CH3CN (3x), y se secó con un vació elevado durante la noche. Se disolvió 172-1 en CH3CN (2 mL). Se añadió Proton-sponge (112 mg, 0,52 mmol) y POCl3 (49 uL, 0,52 mmol) a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C. La mezcla se agitó durante 3 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C para obtener el intermedio 172-2. Se añadió a esta solución el clorhidrato del éter isopropílico de la L-alanina (146 mg, 0,87 mmol) y TEA (114 uL, 1,74 mmol). La mezcla se agitó durante 4 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C, a continuación se diluyó con EtOAc. La mezcla se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con CH2Cl2/MeOH (gradiente de 0-7%) para obtener 172-3 (67 mg, 43,7%) como un sólido blanco.
172-3 (65 mg, 0,074 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (55 pL, 0,22 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. Se añadió una segunda porción de HCl 4N en dioxano (15 pL) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. Se añadió EtOH anhidro (300 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co­ evaporó con tolueno (3x). El residuo se disolvió en 50% CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) con CH3CN y agua, y se liofilizó para obtener 172 (9 mg, 20%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 608,15 [M+H]+, 1215,3 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 99
COMPUESTO 173
Figure imgf000120_0001
Una solución de 173-1 (4,7 g, 11,2 mmol; que se preparó según el procedimiento de Villard y col., Bioorg. Med. Chem. (2008) 16:7321-7329) y Et3N (3,4 mL, 24,2 mmol) en THF (25 mL) se añadió gota a gota durante 1 h a una solución agitada de NN-fosforodicloridito de diisopropilo (1,0 mL, 5,5 mmol) en THF (35 mL) a -75 °C. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. La mezcla se filtró y se concentró el filtrado. El residuo oleoso se purificó en una columna de gel de sílice con EtOAc/hexanos (gradiente de 2-20%) para obtener 173-3 (1,4 g, 26%).
A una solución de 173-2 (50 mg, 0,08 mmol) y 173-3 (110 mg, 0,11 mmol) en CH3CN (1,0 mL), se añadió 5-(etiltio)tetrazol (0,75 mL, 0,16 mmol; 0,25 M en CH3CN). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se enfrió hasta -40 °C y se añadió una solución de ácido 3-cloroperoxibenzoico (37 mg, 0,16 mmol) en CH2Cl2 (0,3 mL). La mezcla se calentó a T.A. durante 1 h. La reacción se desactivó con una solución de Na2S2O3 al 7% en NaHCO3, ac. sat. La mezcla se diluyó con EtOAc y se separaron las fases. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4. Se evaporó el disolvente y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice con EtOAc/hexanos (gradiente de 30-100%) para obtener 173-4 (52 mg, 45%).
Una solución de 173-4 (52 mg, 0,036 mmol) en MeCN (0,5 mL) y HCl (45 pL; 4 N en dioxano) se agitó durante 20 h a T.A. La reacción se inactivó con MeOH y se evaporaron los disolventes. El residuo se co-evaporó con tolueno y se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 4-10%) para obtener 173 (14 mg, 51%). ESI-LCMS: m/z = 702 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 100
COMPUESTO 174
Figure imgf000120_0002
Una mezcla de 174-1 (0,14 g, 0,24 mmol; que se preparó según el procedimiento descrito en el documento WO 2008/082601, presentado el 28 de diciembre de 2007) y 173-2 (120 mg, 0,2 mmol) se anhidrizó evaporándola con piridina y a continuación se disolvió en piridina (3 mL). Se añadió cloruro de pivaloílo (48 pL) gota a gota a -15 °C. La mezcla se agitó a -15 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con una solución ac. sat. de NH4Cl y se diluyó con CH2Cl2. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4. Se evaporaron los disolventes y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice con EtOAc/hexanos (gradiente de 30-100%) para obtener 174-2 (50 mg, 24%). Una mezcla de 174-2 (43 mg; 0,04 mmol) en CCl4 (0,8 mL), clorhidrato del éster isopropílico de la L-valina (20 mg, 0,12 mmol) y Et3N (33 pL, 0,24 mmol) se agitó a T.A. durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc. La mezcla se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. Se evaporaron los disolventes y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice con i-PrOH/CH2Cl2 (gradiente de 2-10%) para obtener 174-3 (35 mg, 75%).
Una solución de 174-3 (35 mg, 0,03 mmol) en MeCN (0,4 mL) y HCl (40 pL; 4 N en dioxano) se agitó durante 4 h a T.A. La reacción se inactivó con la adición de MeOH y se evaporaron los disolventes. El residuo se co-evaporó con tolueno y se purificó en una columna de gel de sílice con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 4-10%) para obtener 174 (11 mg, 56%). ESI-LCMS: m/z = 655 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 101
COMPUESTO 175
Figure imgf000121_0001
A una solución agitada de AA (300,0 mg, 497,83 mmol) en piridina anhidra (0,5 mL), se añadió DMTrCl (337,36 mg, 995,66 mmol) a TA (17 °C) en atmósfera de N2. La solución se agitó a 50 °C~60 °C durante 12 h. La mezcla se concentró a sequedad a presión reducida y el residuo se disolvió en EA (40 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con MgSO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice utilizando un 20% de EA en PE para obtener 175-1 (300 mg, 66,59%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 175-1 (100,00 mg, 110,50 pmol) en piridina anhidra (0,5 mL), se añadió DMAP (6,75 mg, 55,25 pmol), DCC (22,80 mg, 110,50 pmol) y ácido n-actanoico (31,87 mg, 221,00 pmol) a TA (18 °C) en atmósfera de N2. La solución se agitó a T.A. durante 12 h. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice utilizando un 15% de EA en PE para obtener 175-2 (98,00 mg, 86,0%) como una espuma blanca.
175-2 (90,00 mg, 87,28 pmol) se disolvió en CH3COOH al 80% (20 mL) a TA (16 °C). La mezcla se agitó a T.A. durante 12 h. La reacción se desactivó con MeOH y la mezcla se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 175 (33,00 g, 88,7%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 427,2 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 102
COMPUESTO 176
Figure imgf000122_0001
A una solución agitada de BB-1 (500,00 mg, 0,87 mmol) en piridina anhidra (1 mL), se añadió TBSCI (236,5 mg, 1,57 mmol) a 20 °C en atmósfera de N2. La solución se agitó a 50 °C~60 °C durante 12 h. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera, y se secó con MgSO4 anhidro. La solución se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener BB-2 (510,00 mg, 85,06%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de BB-2 (430,00 mg, 625,15 mmol) en MeCN anhidro (6 mL), se añadió TPSCl (368,65 mg, 1,25 mmol), DMAP (152,75 mg, 1,25 mmol) y TEA (126,52 mg, 1,25 mmol) a t A. La mezcla se agitó durante 2 h. Se añadió NH4OH (8 mL) y la mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla se extrajo con EA (3 x 40 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (25% de EA en PE) para obtener BB-3 (500 mg de crudo) como una espuma amarilla.
A una solución agitada de BB-3 (500 mg de producto bruto, 0,72 mmol) en DCM anhidro (7 mL), se añadió DMTrCl (365 mg, 1,0 mmol) y colidina (305 mg, 2,5 mmol) y AgNO3 (184 mg, 1,08 mmol) a TA (15 °C) en atmósfera de N2.. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. Se añadió MeOH (5 mL). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener BB-4 (500 mg, 70,3%) como un sólido blanco.
BB-4 (1,00 g, 1,01 mmol) se disolvió en TBAF (5 mL, 1M en THF) y se agitó a TA durante 30 min. La mezcla se diluyó con EA (100 mL). La mezcla se lavó con agua y salmuera, y se secó con MgSO4 anhidro. La fase orgánica se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener BB (0,80 g, 91,5%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 873,7 [M+1]+.
A una solución agitada de BB (100,00 mg, 114,29 pmol) en piridina anhidra (1,5 mL), se añadió DMAP (2,79 mg, 22,86 pmol), DCC (70,75 mg, 342,88 pmol) y ácido n-actanoico (49,45 mg, 342,88 pmol) a TA (18 °C) en atmósfera de N2. La solución se agitó a T.A. durante 12 h. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice utilizando un 15% de EA en PE para obtener 176-1 (95,00 mg, 83,03%) como una espuma blanca.
176-1 (110,00 mg, 109,87 pmol) se disolvió en CH3COOH al 80% (25 mL) a TA (15 °C). La mezcla se agitó durante 12 h. La reacción se inactivó con MeOH y la solución se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 176 (30,00 g, 64,03%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 427,2 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 103
COMPUESTO 177
Figure imgf000123_0001
177-1 se preparó de un modo similar a 143-1 utilizando BB (250,0 mg, 276,25 pmol), ácido (2S)-2-(tertbutoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (360,11 mg, 1,66 mmol) y TEA (83,86 mg, 828,75 pmol). 177-1 (espuma blanca, 220,0 mg, 72,12%).
177-2 se preparó de un modo similar a 143-2 utilizando 177-1 (230,00 mg, 208,29 pmol, 1,00 eq.). 177-2 (espuma blanca, 80,00 mg, 77,66%).
177 se preparó de un modo similar a 143 utilizando 177-2 (100,00 mg, 200,20 pmol, 1,00 eq.). 177 (sólido blanco, 56 mg, 59,57 %). ESI-MS: m/z 400,0 [M+H]+, 422,1[M+Na]+; 799,1 [2M+H]+, 821,2[2M+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 104
COMPUESTO 178
Figure imgf000123_0002
A una solución agitada de 178-1 (100 mg, 0,175 mmol) en CH3CN anhidro (2,0 mL), se añadió N-metilimidazol (0,14 mL, 1,4 mmol) a 0 °C (baño de hielo/agua). Se añadió una solución de 178-2 (220 mg, 0,53 mmol, disuelto en 0,5 mL de CH3CN) (que se preparó según un procedimiento general descrito en Bondada, L. y col., ACS Medicinal Chemistry Letters,(2013) 4(8):747-751). La solución se agitó a 0 a 5 °C durante 1 h y a continuación se agitó a T.A. durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C, se diluyó con EA y a continuación se añadió agua (5 mL). La solución se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con MgSÜ4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con EA/hexanos (gradiente de 25-100%) para obtener 178-3 (56,4 mg, 33,7%) como una espuma blanca.
178-3 (56 mg, 0,0585 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,7 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (44 gL, 0,176 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a T.A. durante 2 h. Se añadió HCl 4N en dioxano (20 gL). La mezcla se agitó a T.A. durante 2 h. Se añadió EtOH anhidro (100 gL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 1 -7%) y se liofilizó para obtener 178 (27,6 mg, 69%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 685,2[M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 105
COMPUESTO 179
Figure imgf000124_0001
A una solución agitada de 179-1 (1,92 g, 27,3 mmol), PPh3 (1,43 g, 54,7 mmol), EtOH (0,25 g, 54,7 mmol) en dioxano anhidro (20 mL), se añadió DIAD (1,11 g, 54,7 mmol) gota a gota a 0 °C. La solución se agitó a 25 °C durante 15 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA. La mezcla se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró al vacío a sequedad y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (de un 2% a 5% de MeOH en DCM) para obtener 179-2 (1,43 g, 71%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 179-2 (1,43 g, 19,6 mmol) en DMF (15 mL), se añadió TEA (0,59 g, 58,8 mmol) y DMTrCl (0,99 g, 29,4 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a 25 °C durante 12 h. La mezcla se trató con MeOH (1 mL) y se diluyó con EA. La solución se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con NaSO4 anhidro y se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% de MeOH en DCM) para obtener 179-3 (1,13 g, 56%) como un sólido amarillo.
A una solución agitada de 179-3 (1,13 g, 1,1mmol) en piridina anhidra (10 mL), se añadió TBDPSCl (0,91 g, 3,3 mmol) y AgNO3 (0,61 g, 3,3 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 15 h. El sólido se eliminó por filtración y el filtrado se diluyó con EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% de MeOH en DCM) para obtener 179-4 (1,22 g, 88%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 179-4 (1,22 g, 1,0 mmol) en DCM anhidro (15 mL), se añadió G 2CHCOOH (0,6 mL) a -78 °C. La mezcla se agitó a -20 °C durante 1 h. La reacción se desactivó con NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (2% de MeOH en DCM) para obtener 179-5 (0,52 g, 56%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 179-5 (0,52 g, 0,5 mmol) en DCM anhidro (15 mL) y piridina (0,21 g, 2,5 mmol), se añadió Tf2O (0,30 g, 1,0 mmol) en DCM (1 mL) gota a gota a 0°C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 15 min. La reacción se inactivó con agua-hielo. La fase orgánica se separó y se lavó con agua. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 179-6 (442 mg, crudo) como una espuma amarilla.
A una solución agitada de 179-6 (442 mg, 0,4 mmol) en DMF anhidro (5 mL), se añadió NaN3 (131 mg, 2,0 mmol). La mezcla se agitó a T.A. durante 12 h. La reacción se desactivó con agua y se extrajo con EA (20 mL, 2x). La fase orgánica se lavó con agua y se secó con Na2SO4. La fase orgánica se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (1% de MeOH en DCM) para obtener 179-7 (352 mg, 88%) como una espuma blanca.
Una mezcla de 179-7 (352 mg, 0,35 mmol) y NH4F (392 mg, 10,6 mmol) en MeOH (10 mL) se agitó a 80 °C durante 12 h. La mezcla se enfrió a T.A. El sólido se eliminó por filtración. Se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (de 2% a 5% de MeOH en DCM) para obtener 179-8 bruto (151 mg). El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (0,1% de NH4HCO3 en agua y CH3CN) para obtener 179-8 (71,5 mg, 32%) como un sólido blanco. MS: m/z 641 [M+H]+.
Una mezcla de 179-8 (64 mg, 0,1 mmol) y bis(pivaloiloximetil)fosfato, después de anhidrizarla evaporándola con tolueno, se disolvió en CH3CN (1 mL) y se enfrió hasta 0 °C. Se añadió BopCl (40 mg, 0,15 mmol) y NMI (40 pL, 0,5 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se añadió EtOAc y la mezcla se lavó con ácido cítrico ac. 0,5 N, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y a continuación se secó con Na2SO4. Se eliminaron los disolventes y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice con un 3% de /-PrOH en CH2Cl2 para obtener 179-9 (38 mg, 40%).
Una solución de 179-9 (30 mg, 0,03 mmol) en CH3CN (0,3 mL) y HCl (30 pL; 4 N en dioxano) se agitó a T.A. durante 100 min. La reacción se inactivó con EtOH y se evaporó la mezcla. El residuo bruto se purificó en una columna de gel de sílice con /-PrOH/CH2Cl2 (gradiente de 3-10%) para proporcionar 179 (10 mg, 50%). ESI-LCMS: m/z = 681 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 106
COMPUESTO 180
Figure imgf000125_0001
A una solución de BB (100 mg, 0,114 mmol) en CH3CN anhidro (2 mL), se añadió una solución de bis-SATE-fosforamidato (62,2 mg, 0,14 mmol) en CH3CN (1 mL) y a continuación 5-etiltio-1 H-tetrazol en CH3CN (0,25 M; 0,56 mL, 0,14 mmol) a 0 a 5 °C gota a gota. La mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C en atmósfera de Ar. Se añadió una solución de m-CPBA (49 mg, 0,22 mmol) al 77% en DCM (1 mL) y la mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C en atmósfera de Ar. La mezcla se diluyó con EtOAc (50 mL), se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCO3 sat. y salmuera, y se secó con MgSO4. La mezcla se filtró y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con EA/hexanos (gradiente de 10-100%) para obtener 180-1 (72 mg, 50,8%) como un sólido blanco.
180-1 (72 mg, 0,056 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (1,0 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (87 pL, 0,35 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a T.A. durante 2 h. Se observó el producto intermedio 180-2 mediante LCMS. Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo obtenido se disolvió de nuevo en HCOOH al 80% (2 mL). La mezcla se agitó a TA durante 4,5 h. Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). Se añadió EtOH anhidro (3 x 5 mL). El residuo se disolvió en 50% CH3CN/H2O, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) con CH3CN y H2O, y se liofilizó para obtener 180 (19,2 mg) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 669,2 [M+H]+, 1337,25 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 107
COMPUESTO 181
Figure imgf000126_0001
181-1 (98 mg, 72,6%) se preparó del mismo modo a partir de BB (100 mg, 0,114 mmol) y fosfato de bis(tertbutoxicarboniloximetilo) (83 mg, 0,35 mmol) con DIPEA (126 pL, 0,69 mmol), BOP-Cl (87 mg, 0,34 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (39 mg, 0,34 mmol) en THF (1,5 mL) del mismo modo que 169-4.
181 (30,2 mg, 60%) se preparó a partir de 181-1 (98 mg, 0,083 mmol) de la misma forma que 146. ESI-LCMS: m/z = 609,15 [M+H]+, 1217,3 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 108
COMPUESTOS 182 y 183
Figure imgf000126_0002
Los compuestos 182, 182aa, 182ab y 183 se prepararon como se describe en la publicación PCT No. WO 2014/96680, publicada el 27 de junio de 2014. 182: ESI-LCMS: m/z 554,0 [M+H]+; 182aa y 182ab: Diastereómero de elución más rápida - 31P NMR 67,1, LC/MS 552 [M-1]- Diastereómero de elución más lenta - 31P RMN 67,9, LC/MS 552 [M-1]. 183:
ESI-MS: m/z 576,9 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 109 COMPUESTOS 186-201
Figure imgf000128_0001
Los compuestos 186-201 se prepararon como se describe en la publicación PCT No. WO 2014/96680, publicada el 27 de junio de 2014. 186: ESI-LCMS: m/z 593,0 [M+H]+. 187: ESI-LCMS: m/z 614,1 [M+H]+. 188: ESI-LCMS: m/z 582,1 [M+H]+. 189: ESI-LCMS: m/z 596,1 [M+H]+. 190: ESI-LCMS: m/z 672,0 [M+H]+. 191: ESI-LCMS: m/z 589,0 [M+H]+. 192: ESI-LCMS: m/z 606,0 [M+H]+. 193: ESI-LCMS: m/z 604,1 [M+H]+. 194: ESI-LCMS: m/z 568 [M+H]+, 590 [M+Na]+. 195: ESI-LCMS: m/z 680 [M+H]+. 196: ESI-LCMS: m/z 578,0 [M+Na]+. 197: ESI-MS: m/z 633,1 [M+H]+. 198:
ESI-LCMS: m/z 604 [M+Na]+, 582 [M+H]+. 199: ESI-LCMS: m/z 582,0 [M+H]+. 200: ESI-LCMS: m/z 618 [M+Na]+. 201:
ESI-LCMS: m/z 568,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 110
COMPUESTO 204
Figure imgf000128_0002
Un procedimiento para preparar el compuesto 204 se proporciona en WO 2010/015643, presentado el 4 de agosto de 2009.
EJEMPLO DE REFERENCIA 111
COMPUESTO 206
206-1 (1,0 g, 3,53 mmol) se co-evaporó con piridina anhidra 3 veces para eliminar e1H2O. A una solución helada de 206-1 en piridina anhidra (9 mL) se agregó TsCl (808 mg, 4,24 mmol) en piridina (3 mL) gota a gota a 0 °C, y la mezcla se agitó durante 18 h a 0 °C. La reacción se monitoreó mediante LCMS y a continuación se inactivó con H2O. Después de la concentración a baja presión, el residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con sol. sat. de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (1 % MeOH en DCM) para obtener 206-2 (980 g, 63%) como un sólido blanco.
A una solución de 206-2 (980 mg, 2,24 mmol) en acetona (10 mL) se le añadió Nal (1,01 g, 6,73 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4 anhidro. El filtrado se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (1% MeOH en DCM) para obtener 206-3 (700 g, 79%) como un sólido.
A una solución de 206-3 (700 mg, 1,78 mmol) en THF seco (9 mL) se agregó DBU (817 mg, 5,34 mmol) y la mezcla se calentó hasta 60 °C. La mezcla se agitó durante la noche y se monitoreó mediante LCMS. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (1% MeOH en DCM) para obtener 206-4 (250 g, 53%) como un sólido blanco.
A una solución cubierta de hielo de 206-4 (250 mg, 0,94 mmol) en MeCN seco (5 mL) se añadió NEt3-3HF (151 mg, 0,94 mmol) y NIS (255 mg, 1,13 mmol). La mezcla se agitó a TA, durante 3 h, y se verificó mediante LCMS. La reacción se inactivó con Na2S2O3 sat. y solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (2% acetona en DCM) para obtener 206-5 (170 mg, 44%).
A una solución de 206-5 bruto (270 mg, 0,65 mmol) en DCM seco (4 mL), se añadió DMAP (158,6 mg, 1,3 mmol) y BzCl (137 mg, 0,98 mmol). La mezcla se agitó durante 4-5 h a TA y se verificó mediante LCMS. La mezcla se diluyó con CH2Cl2, y se lavó con sol. sat.de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 206-6 (290 g, 86%) como un sólido.
A una solución de 206-6 (900 mg, 1,74 mmol) en DMF seco (45 mL), se añadió NaOBz (2,5 g, 17,4 mmol) y 15-corona-5 (4,5 g, 20,9 mmol). La mezcla se agitó durante 48 h a 90-100 °C. La mezcla se diluyó con EA (100 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 206-7 (500 g, 56%) como un sólido.
A una solución de 206-7 (500 mg, 0,98 mmol) en CH3CN anhidro (5 mL) se añadió TPSCl (741 mg, 2,45 mmol), DMAP (299,6 mg, 2,45 mmol) y NEt3 (248 mg, 2,45 mmol) a TA, y la mezcla se agitó durante la noche. Luego, la mezcla se trató con NH3 en THF (5 mL) y a continuación se agitó durante otros 30 minutos. La mezcla se diluyó con EA (100 mL). La solución se lavó con solución de AcOH al 0,5%. El solvente orgánico se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El producto bruto se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (2% Acetona en DCM) para obtener 206-8 (257 g, 51,6%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 509 [M+H]+.
206-8 (80 g, 0,16 mmol) se disolvió en n-butilamina (3 mL). La mezcla se mantuvo durante la noche a TA y se evaporó. El residuo se cristalizó a partir de metanol para proporcionar 206 (30 mg). El licor madre se purificó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 30% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón para dar el compuesto adicional 206 (13 mg). 206 (rendimiento total 43 mg, 73%). MS: m/z 299,7 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 112
COMPUESTO 207
Figure imgf000129_0001
207-1 (30 mg, 0,1 mmol) se disolvió en una mezcla de CH3CN (2 mL) y N-metilimidazol (200 uL). Se añadió fosforocloridato (100 mg, 0,3 mmol) y la mezcla se mantuvo durante 5 d a TA. La mezcla se repartió entre agua y EA.
La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se evaporó. El fosforamidato se aisló mediante cromatografía en gel de sílice en un gradiente de metanol en DCM del 3 al 10%. Las fracciones correspondientes se concentraron y re-purificaron mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Para la elución se utilizó un gradiente lineal de metanol en DCM del 3% al 95% que contenía ácido fórmico al 0,1%. 207 se obtuvo como una mezcla de isómeros Rp y Rs (9 mg, 16%). MS: m/z 562,1 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 113
COMPUESTO 211
Figure imgf000130_0001
A una solución de 211-1 (23,0 g, 39,5 mmol) en THF (200 mL), se añadió TBAF (31,9 g, 198 mmol) gota a gota a -78 °C y se agitó la solución a -78 °C durante 3 h. La mezcla se inactivó con NaHCÜ3, sat. se extrajo con EA (2 x 200 mL) y se secó con Na2SÜ4 anhidro. La solución se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 211-2 (16,5 g, 71%) como una espuma amarilla.
Una mezcla de 211-2 (16,0 mg, 27,4 mmol) y NH4F (3,0 mg, 82,2 mmol) en metanol (100 mL) se agitó a 70 °C durante 12 h. La mezcla se enfrió, y la sal se eliminó mediante filtración. El filtrado se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (3% de MeÜH en DCM) para obtener 211-3 (5,1 g, 69,0%) como una espuma blanca.
A una suspensión agitada de 211-3 (4,1 g, 15,2 mmol), PPh3 (8,0 g, 30,4 mmol), imidazol (2,1 g, 30,4 mmol) y piridina (18,2 mL) en THF anhidro (40 mL) se agregó gota a gota una solución de I2 (5,8 g, 22,8 mmol) en THF (20 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con MeÜH (100 mL) y el solvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (4% MeÜH en DCM) para obtener 211-4 (4,4 g, 77%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 381,1 [M+1]+.
A una solución agitada de 211-4 (2,5 g, 0,7 mmol) en THF anhidro (3 mL) se añadió DBU (2,1 g, 14 mmol) a TA y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. La reacción se inactivó con HÜAc, y se diluyó con 2-tetrahidrofurano. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% MeÜH en DCM) para obtener 211-5 (1,1 mg, 68,9%) como una espuma blanca. A una solución agitada de 211-5 (800 mg, 3,17 mmol) en CH3CN anhidro (10 mL) se añadió TEA^3HF (510 mg, 3,17 mmol) y NIS (785 mg, 3,49 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 30 minutos, se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 1 h. La mezcla se inactivó con solución sat. de NaHCÜ3 y solución de Na2S2Ü3 y se extrajo con EA (2 x 20 mL). La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para obtener 211-6 (695 mg, 57,9%) como un sólido amarillo.
A una solución agitada de 211-6 (650 g, 1,63 mmol) en piridina (3 mL) se añadió BzCl (507 g, 3,59 mmol) a 0 °C, y se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con agua, y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 211-7 (550 mg, 67%) como una espuma blanca. Se neutralizó hidróxido de tetra-butilamonio (9 mL como solución acuosa al 54-56%, 72 mmol) con TFA a pH~4 (1,5 mL), y la mezcla se agregó a una solución de 211-7 (375 mg, 0,75 mmol) en DCM (9 mL). Se agregó ácido mclorperbenzoico (924 mg, 60-70%, 3,75 mmol) en porciones con agitación vigorosa, y la mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 211-8 (230 g, 78,8%) como una espuma blanca. ESI-MS: m/z 393,1 [M+1]+.
211-8 (120 mg, 0,24 mmol) se trató con 7N NH3^MeOH (20 mL) y se agitó durante 5 h. La mezcla se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (propano-2-ol 15% en DCM) para obtener 211 (53 g, 60,2%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 288,8 [M+1]+.
EJEMPLO 114
COMPUESTOS 212a Y 212b
Figure imgf000131_0001
A una solución de 212-1 (0,47 g, 0,65 mmol) en DCM (3 mL) se añadió AgNO3 (0,22 g, 1,29 mmol), colidina (0,15 g, 1,29 mmol) y MMTrCl (0,3 g, 0,974 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó durante la noche a TA. La mezcla se filtró y el filtro se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice para obtener 212-2 (0,55 g, 85%) como un sólido blanco.
A una solución de 212-2 bruto (0,5 mg, 0,5 mmol) en DMF seco (10 mL), se añadió NaOBz (0,72 g, 5 mmol) y 15-corona-5 (0,9 mL). La mezcla se agitó a 95 °C durante 72 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 212-3 (0,3 g, 60%) como un sólido blanco.
212-3 (0,3 g, 0,3 mmol) en NH3/MeOH (30 mL) se agitó a TA durante 18 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (20% EA en PE) para proporcionar 212-4 (145 mg, 56%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 890,5 [M+H]+.
A una solución agitada de 212-4 (161 mg, 0,16 mmol) en CH3CN anhidro (2,0 mL) se añadió N-metilimidazol (118 pL, 2,87 mmol) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) seguido de una solución de 212-5 (186 mg, 0,54 mmol, disuelto en 2 mL de CH3CN). La solución se agitó a 0 a 5 °C durante 4 h. La mezcla se diluyó con EA y se añadió agua (15 mL). La solución se lavó con H2O, solución acuosa de ácido cítrico al 50 % y salmuera. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó en gel de sílice con 0 a 40% de EA/hexanos para proporcionar como 212-6 (82,6 mg) como el isómero de elución más rápida y 212-7 (106 mg) como el isómero de elución más lenta.
212-6 (82,6 mg, 0,07 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (35 pL) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y se añadió EtOH anhidro (100 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co­ evaporó con tolueno 3 veces. El residuo se disolvió en 50% de CH3CN/H2O, y se purificó en una HPLC de fase inversa (C18) usando acetonitrilo y agua, seguido de liofilización para proporcionar 212a (19,4 mg). ESI-LCMS: m/z = 655,2 [M+H]+, 653,15 [M-H]-.
212-7 (100 mg, 0,083 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se agregó HCl 4N en dioxano (50 pL) a 0 a 5 °C. Siguiendo el procedimiento para obtener 212a, 212b (31,8 mg) fue obtenido. ESI-LCMS: m/z = 655,2 [M+H]+, 653,1 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 115
COMPUESTO 213
Figure imgf000132_0001
A una solución del nucleósido (300 mg, 1,09 mmol) y esponja de protones (467 mg, 2,18 mmol) en CH3CN anhidro (5 mL) a 0 °C bajo N2 se agregó gota a gota una solución de oxicloruro de fósforo (330 mg, 2,18 mmol) en CH3CN anhidro (1 mL). Se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 minutos y se añadió la sal de cloruro de hidrógeno de 2-aminopropanoato de (S)-etilo (998 mg, 6,52 mmol) y trietilamina (1,5 mL, 10,87 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 30 °C durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 20 mL). La capa orgánica se concentró a sequedad a baja presión, y el residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa para obtener 213 (20 g, 3%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 535 [M-F]+.
EJEMPLO 116
COMPUESTO 214
Figure imgf000132_0002
El nucleósido (140 mg, 0,42 mmol) se disolvió en n-butilamina (0,5 mL). La mezcla se mantuvo durante 2 h a TA, y la amina a continuación se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc y la capa orgánica se lavó dos veces con ácido cítrico al 10%, se secó sobre Na2SO4, y se evaporó. El residuo fue purificado mediante cromatografía en columna en gel de sílice en gradiente lineal de metanol en DCM de 0% a 12% en 10 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el producto se concentraron y trataron con HCOOH al 80% durante 1 h a TA. La mezcla se evaporó a sequedad y se suspendió en CH3CN. El precipitado se separó, se lavó con CH3CN (1 mL) y se secó para proporcionar 214 (27 mg, 50%). MS: m/z 326,5 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 117
COMPUESTO 216
Figure imgf000132_0003
A una solución de 216-1 (3,0 g, 18,0 mmol) y POCl3 (1,35 g, 9,0 mmol) en DCM (80 mL) se agregó TEA (3,6 g, 36,0 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 2 h. Se agregó gota a gota una solución de pentafluorofenol (1,65 g, 9,0 mmol) y TEA (0,9 g, 9,0 mmol) en DCM (20 mL) a 0 °C y la mezcla se agitó a 0 °C durante 15 h. Después de que se completó la reacción, la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se lavó mediante TBME y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (20% EA en PE) para proporcionar 216-2 (2,7 g, 62,7 %) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 491,1 [M+1]+.
A una solución agitada de 1-((3aR,4R,6S,6aS)-6-fluoro-6- (hidroximetil)-2-metoxi-3a-metiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona (150 mg, 0,47 mmol) en THF anhidro (2 mL) se le agregó una solución de t-BuMgCl (0,46 mL, 1M en THF) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 40 minutos y se volvió a enfriar a 0 °C. Se agregó una solución de 216-2 (462 mg, 0,94 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 4 h. La mezcla se inactivó con H2O y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 216-3 (230 mg, 78%) como una espuma blanca.
216-3 (230 mg, 0,37 mmol) se disolvió en solución acuosa de HCOOH (20 mL) al 80 % y la mezcla se agitó a TA durante 24 h. El solvente se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante RP HPLC (sistema HCOOH) para proporcionar 216 como una mezcla de dos isómeros P (75 mg, 33%). ESI-TOF-MS: m/z 583,0 [M+H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 118
COMPUESTO 218
Figure imgf000133_0001
218-1 (30 mg, 0,1 mmol) se disolvió en una mezcla de CH3CN (2 mL) y N-metilimidazol (200 uL). Se agregó fosforocloridato (100 mg, 0,3 mmol) y la mezcla se mantuvo durante la noche a 40 °C. La temperatura se aumentó a 65 °C y se calentó durante 1 h. La mezcla se distribuyó entre agua y EA. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se evaporó. El azido-fosforoamidato se purificó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 30% a 100% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. El azido-fosforoamidato (8 mg) se disolvió en piridina/Et3N (3 mL, 8:1 v/v) y se enfrió a 0 °C. Gas H2S se burbujeó a través de la solución durante 10 minutos y la reacción se mantuvo durante 1 h a TA. Los solventes se evaporaron y el residuo se aisló mediante RP HPLC. Las fracciones correspondientes se combinaron, concentraron y liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón, para proporcionar 218 (1,2 mg) como la mezcla de isómeros Rp y Rs. MS: m/z 544,1 [M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 119
COMPUESTO 219
A una solución de IBX (133,33 g, 476 mmol) en CH3CN seco (2 L) se añadió 219-1 (100,0 g, 216 mol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo y se agitó durante 12 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a baja presión para proporcionar 219-2 como un aceite amarillo (90,0 g, 90,4%).
219-2 (50,0 g, 108,70 mmol) se co-evaporó con tolueno anhidro dos veces para retirar H2O. Se agregó por goteo bromuro de etinil magnesio (800 mL, 400,0 mmol) en una solución de 73-2 en THF (500 mL) durante 20 minutos a -78 °C. La mezcla se agitó durante aproximadamente 10 minutos a -78 °C. Cuando se consumió el material de partida, se retiró el baño de enfriamiento de hielo-acetona. La mezcla se inactivó con una sol. sat de NH4Cl con agitación y a continuación se calentó a TA. La mezcla se extrajo con EA, se filtró a través de Celite y se lavó con salmuera. La fase orgánica combinada se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 219-3 bruto como un aceite amarillo oscuro (48,0 g, rendimiento: 90,8%).
219-3 (200,0 g, 411,52 mmol) se disolvió en CH2CL anhidro (2000 mL) y a continuación se añadió DMAP (100,41 g, 823,05 mmol) y Et3N (124,94 g, 1,23 mol) a TA. La mezcla se trató con cloruro de benzoilo (173,46 g, 1,23 mol) a 0 °C. Después de agitar durante 12 h a TA, la reacción se inactivó con H2O. La fase acuosa combinada se extrajo con DCM. La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad bajo presión reducida para proporcionar un aceite negro. El aceite se purificó mediante cromatografía en columna usando EA al 7% -20% en PE como el eluyente para proporcionar un aceite amarillo. El residuo se trituró con CH3OH y se filtró. La torta del filtro se concentró al vacío para proporcionar 219-4 como un sólido blanco (30,0 g, 36,4%).
Se co-evaporó uracilo (34,17 g, 305,08 mmol) con tolueno anhidro dos veces para eliminar H2O. A una suspensión agitada de uracilo en MeCN anhidro (150 mL) se añadió N,O-BSA (123,86 g, 610,17 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 1,5 h y a continuación se enfrió a TA. Se añadieron 219-4 (90 g, 152,54 mmol, que se co-evaporaron con tolueno anhidro dos veces para eliminar H2O. Se añadió TMSOTf (237,05 g, 1,07 mol) a TA. La mezcla se calentó a 70 °C, y a continuación se agitó durante la noche y a continuación se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se enfrió a TA y se inactivó con una solución saturada de NaHCO3 . La solución se extrajo con EA. La capa orgánica se secó con Na2SO4, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó usando una columna de gel de sílice eluida con 10%-50% EA en PE para proporcionar 219-5 como un sólido blanco (45 g, 50,9%).
219-5 (50 g, 86,21 mmol) se trató con NH3 en MeOH (1 L) a TA, y a continuación se agitó durante 48 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (MeOH al 10% en DCM) para proporcionar 219-6 (12,6 g, 54,55%) como un sólido blanco.
A una solución de ciclopentanona (100 g, 1,189 mmol) y ortoformiato de trimetilo (150 mL) en MeOH (600 mL) se agregó TsOHH2O (1,13 g, 5,9 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 30 minutos. La reacción se inactivó con NaOMe (0,32 g, 5,9 mmol) y H2O, y la solución se extrajo mediante n-hexano. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y a continuación se concentró a baja presión. Se disolvió el ciclopentil dimetoxi acetal y 219-6 (20 g, 74,63 mmol) en DCE (200 mL) y a continuación se trató con T s O H ^ O (0,71 g, 3,73 mmol). La mezcla se agitó a 50 °C durante 12 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1 -10% de MeOH en DCM) para obtener 219-7 (15,4 g, 61,8%) como un sólido blanco.
219-7 (20,0 g, 0,06 mol) se co-evaporó con piridina anhidra tres veces para eliminar H2O. A una solución helada de 219-7 en piridina anhidra (100 mL) se añadió TsCl (22,8 g, 0,12 mol) a 0 °C, y la mezcla se agitó durante la noche y se monitoreó mediante LCMS y TLC. La reacción se inactivó con H2O, y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre NaSO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1 a 15:1) para dar 219-8 (20,0g, 69,0%) como un sólido blanco.
A una solución de 219-8 (20,0 g, 0,04 mol) en acetona (200 mL) se agregó Nal (31,0 g, 0,2 mol) y se calentó a reflujo durante la noche y se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se inactivó con una sol. sat. de Na2S2O3 y se extrajo con EA. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1 a 15:1) para dar 219-9 (15,0g, 83,3%) como un sólido blanco.
A 219-9 (30,0 g, 0,068 mol) en dioxano (60 mL) en tubo sellado se le agregó CuBr (4,9 g, 0,034 mol), /-Pr2NH(13,6 g, 0,135 mol) y (CH2O)n(5,1 g, 0,17 mol) bajo N2. La mezcla se calentó a reflujo durante 16 h. La mezcla se diluyó con EtOAc y se lavó con sol. sat. de NH4Cl y salmuera. La solución se secó con MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (DCM: MeOH = 100:1 a 15:1) para dar 219-10 (10,0g, 32,3%) como un sólido blanco.
219-10 (10 g, 21,83 mmol) fue tratado con HCOOH (80%) en H2O a TA. La solución se agitó a 60 °C durante 2 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1%-10% MeOH en DCM) para obtener 219-11 (5,1 g, 58,55%) como un sólido blanco.
219-11 (5 g, 12,79 mmol) fue disuelto en MeOH anhidro (100 mL) y tratado con NaOMe (4,83 g, 89,5 mmol) a RT.. La solución se agitó a 60 °C durante 36 h. La mezcla se inactivó con CO2 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (0-10% MeOH en DCM) para proporcionar 219-12 (2,3 g, 68,05%) como un sólido amarillo. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 5 = 7,29 (d, J = 8 Hz 1H), 6,10 (s, 1H), 5,71 (d, J = 8,0 Hz 1H), 5,18 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,79-4,84 (m, 1H), 4,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,39 (s, 1H), 3,45 (s, 1H).
A una solución helada de 219-12 (1,5 g, 5,68 mmol) en MeCN anhidro (15 mL) se añadió NIS (1,66 g, 7,39 mmol) y TEA • 3HF (0,73 g, 4,55 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. y solución de Na2SO3 y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (0-5% MeOH en DCM) para obtener 219-13 (1,08 g, 46,2%) como un sólido amarillo.
A una solución agitada de 219-13 (1 g, 2,44 mmol) en DCM anhidro (10 mL), se añadió DMAP (0,60 mg, 4,88 mmol) y Et3N (0,74 mg, 7,32 mmol) a TA. La mezcla se trató con cloruro de benzoilo (0,79 g, 5,61 mmol) a 0 °C y a continuación se agitó a TA durante 3 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se concentró a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna (0-10% MeOH en DCM) para obtener 219-14 (0,9 g, 59,6%) como un sólido blanco.
Se trató Bu4NOH (55% en H2O, 13,74 mL) con TFA (para ajustar el pH=3-4). La mezcla se enfrió a TA. A una solución de 219-14 (0,9 g, 1,46 mmol) en DCM (9 mL), se añadió m-CPBA (80%, 1,57 g, 7,28 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 25°C durante 48 h. La solución se lavó con NaHCO3, sat. ac. La capa orgánica se pasó a través de una columna de Al2O3 anhidra y la solución se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 219-15 (0,26 g, 35,1%) como un sólido amarillo.
219-15 (0,25 g, 0,49 mmol) fue disuelto en NH3/MeOH (5 mL, 7 M), y la mezcla se agitó a RT durante 24 h bajo N2. La mezcla se concentró a baja presión a TA y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para proporcionar 219-16 (100 g, 67,75%) como un sólido blanco. 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 5 = 7,83 (d, J = 8 Hz 1H), 6,29 (s, 1H), 5,67 (d, J = 6 .0 Hz 1H), 5,12 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,99-5,01 (m, 1H), 4,38 (d, J= 19,6 Hz 1H), 3,74-3,81 (m, 2H), 3,35 (s, 1H).
219-16 (100 mg, 0,33 mmol) se co-evaporó con tolueno tres veces para eliminar H2O. A una solución agitada de 219­ 16 (100 mg, 0,33 mmol) en una mezcla de MeCN (1,0 mL) y NMI (271 mg, 3,3 mmol) se agregó una solución de 219-C (216,5 mg, 0,66 mmol) en MeCN (0,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación la reacción se inactivó con agua. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y la capa orgánica se lavó con agua y salmuera y se secó sobre Na2SO4 anhidro. La fase orgánica se concentró a baja presión y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% /-PrOH en DCM) para proporcionar el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (0,1% HCOOH en agua y MeCN) para obtener el compuesto 219 (35,6 mg, 19,0%) como un sólido blanco. ESl-LCMS: m/z 592 [M+Na]+.
A una solución agitada de 219-A (2,0 g, 13,16 mmol) y fenol (1,22 g, 13,16 mmol) en DCM anhidro (100 mL) se agregó una solución de TEA (1,33 g, 13,16 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota a -78 °C. La mezcla se calentó gradualmente hasta TA y a continuación se agitó durante 2 h. La solución se volvió a enfriar a -78 °C y se agregó clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo (2,20 g, 13,16 mmol) en DCM (20 mL), seguido de la adición gota a gota de TEA (2,66 g, 26,29 mmol) en DCM (20 mL). La mezcla se calentó gradualmente a TA y a continuación se agitó durante 2 h. El solvente orgánico se retiró a baja presión y el residuo se disolvió en metil-butil éter. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM anhidro) para obtener 219-C (0,9 mg, 22,3%) como un aceite incoloro.
EJEMPLO 120
COMPUESTO 220
Figure imgf000135_0001
Se disolvió el nucleósido anhidro (0,05 mmol) en una mezcla de PO(OMe)3 (0,7 mL) y piridina (0,3 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min a 42 °C y a continuación se enfrió a T.A. Se agregó N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de POCh (0,009 mL, 0,11 mmol). La mezcla se mantuvo a TA durante 20-40 minutos y se monitoreó la formación de 220 mediante LCMS. La reacción se inactivó y aisló mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 30% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. MS: m/z 396,5 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 121
COMPUESTO 223
Figure imgf000136_0001
Se agregó gota a gota una solución de 223-1 (16,70 g, 0,363 mol) y TEA (36,66 g, 0,363 mol) en CH2CI2 (150 mL) a una solución agitada de POCh (55,65 g, 0,363 mol) en DCM (100 mL) durante 25 minutos a -78 °C. Después de agitar la mezcla durante 2 h a TA, se filtró la sal de clorhidrato de trietilamina y se lavó con CH2G2 (100 mL). El filtrado se concentró a baja presión y el residuo se destiló a alto vacío (~10 mm Hg) con un colector de fracción de tipo cowhead. 223-2 se recogió entre 45 °C (temperatura del cabezal de destilación) como un líquido incoloro (30,5 g, 50% de rendimiento). 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 5 = 4,44 (dq, J=10,85, 7,17 Hz, 2 H), 1,44 - 1,57 (m, 3 H); 31P-RMN (162 MHz, CDCl3) 5 = 6,75 (s a., 1 P).
A una suspensión agitada de 227-A (93 mg, 0,15 mmol) en CH2G2 (1 mL) se añadió TEA (61 mg, 0,15 mmol) a RT. La mezcla se enfrió a -20 °C y a continuación se trató con una solución de 223-2 (35 mg, 0,21 mmol) gota a gota durante un período de 10 minutos. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 15 minutos y a continuación se trató con NMI (27 mg, 0,33 mmol). La mezcla se agitó a -20 °C y a continuación se enfrió lentamente a TA. La mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se suspendió en EA (15 mL), se lavó con salmuera (10 mL) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La solución se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía (DCM: MeOH=100:1) para proporcionar 223-3 (60 mg, rendimiento: 56%) como un sólido.
Se agitó una solución de 223-3 (60 mg, 0,085 mmol) en AcOH acuoso al 80% (2 mL) a TA durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice eluyendo DCM/MeOH = 50/1 y prep-HPLC para proporcionar 223 (23 mg, 62%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 436,3 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 122
COMPUESTO 224
Figure imgf000136_0002
224-2 fue preparado usando un procedimiento similar al de la preparación de 223-2 usando una solución de isobutanol (23,9 g, 322,98 mmol) y POCl3 (49,5 g, 322,98 mmol). 224-2 (26 g, 42% de rendimiento) se obtuvo como un líquido incoloro. 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 5 = 4,10 (dd, J=9,04, 6,39 Hz, 2 H), 2,09 (dq, J=13,24, 6,67, 6,67, 6,67, 6,67 Hz, 1 H), 1,01 (d, J=6,62 Hz, 6 H); 31P-RMN (162 MHz, CDCh) 5 = 7,06 (s a., 1 P).
A una suspensión agitada de 227-A (310 mg, 0,5 mmol) en CH2G2 (3 mL) se añadió TEA (202 mg, 2 mmol) a RT. La mezcla se enfrió hasta -20 °C y a continuación se trató con 224-2 (134 mg, 0,7 mmol). La mezcla se agitó a esta temperatura durante 15 minutos y a continuación se trató con NMI (90 mg, 1,1 mmol). La mezcla se agitó a -20 °C durante 1 h y a continuación se calentó lentamente hasta TA durante la noche. La mezcla se suspendió en EA (15 mL), se lavó con salmuera (10 mL) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. La fase orgánica se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante gel de columna de sílice (DCM: MeOH=100:1) para proporcionar 224-3 (310 mg, rendimiento: 84%) como un sólido.
Se agitó una solución de 224-3 (310 mg, 0,43 mmol) en AcOH acuoso al 80% (4 mL) a TA durante 2 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice eluyendo DCM/MeOH = 50/1 y prep-HPLC para proporcionar 224 (79 mg, 50%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 464,0 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 123
COMPUESTO 225
Figure imgf000137_0001
225-2 fue preparado usando un procedimiento similar al de la preparación de 223-2 usando una solución de alcohol isopropílico (21 g, 350 mmol) y POCh (53,6 g, 350 mmol). Se obtuvo 225-2 (40,5 g, 65% de rendimiento) como un líquido incoloro. 1H-RMN (400 MHz, CDCh) ó = 4,94 - 5,10 (m, 1 H), 1,48 (d, J=6,17 Hz, 6 H); 31P- RMN (162 MHz, CDCl3) ó = 5,58 (s a., 1 P).
225-3 fue preparado usando un procedimiento similar al de la preparación de 224-3 usando 225-2 (124 mg, 0,7 mmol) y 227-A (310 mg, 0,5 mmol). 225-3 (300 mg, 83%) fue obtenido como un sólido.
225 fue preparado usando un procedimiento similar al de la preparación de 224 usando 225-3 (300 mg, 0,41 mmol) en AcOH acuoso al 80% (4 mL). 225 (80 mg, 43%) fue obtenido como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 450,0 [M+H]+.
EJEMPLO 124
COMPUESTO 227
Figure imgf000137_0002
A una solución agitada de POCh (2,0 g, 13 mmol) en DCM anhidro (10 mL) ase añadió 1-nafthol (1,88 g, 13 mmol) a -70°C, y TEA (1,31 g, 13 mmol) en DCM (3 mL) gota a gota a -70°C. La mezcla se calentó gradualmente a RT y se agitó durante 1 h. Se obtuvo 227-1 bruto.
A una solución agitada de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo (2,17 g, 13 mmol) en DCM (10 mL) se le agregó 227-1 bruto a -70 °C. Se añadió TEA (2,63 g, 26 mmol) a la solución agitada gota a gota a -70 °C. La mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. La reacción se monitoreó mediante LCMS y se inactivó con npropilamina. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice (PE:MTBE = 5:1 ~1:1) para proporcionar 227-2 puro (1,6 g, 35%).
A una solución de 227-A (300 mg, 0,337 mmol) y NMI (276 mg, 3,37 mmol) en CH3CN anhidro (4 mL) se agregó 227­ 2 (240 mg, 0,674 mol, en DCM (5 mL)) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 10 h. La reacción se controló mediante LCMS. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en gel de sílice (PE:EA = 5:1 ~2:1) para obtener 227-3 (380 mg, 93%).
227-3 (380 mg, 0,314 mmol) fue disuelto en CH3COOH (80%, 8 mL) y se agitó a 40-50 °C durante 2,5 h. La reacción se controló mediante LCMS. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía (PE:EA = 1:1 ~EA) para proporcionar el producto bruto 227. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (sistema neutro, NH4HCO3) para obtener el compuesto 227 (70 mg, 80%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 665,1 [M+H]+.
EJEMPLO 125
COMPUESTO 228
Figure imgf000138_0001
A una solución agitada de POCI3 (2,0 g, 13 mmol) en DCM anhidro (10 mL) ase añadió 1-naftol (1,88 g, 13 mmol) a -70°C, y TEA (1,31 g, 13 mmol) en DCM (3 mL) gota a gota a -70°C. La mezcla se calentó gradualmente a RT y se agitó durante 1 h. Se obtuvo 228-1 bruto.
A una solución agitada de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isobutilo (2,35 g, 13 mmol) en DCM (20 mL) se le agregó TEA (2,63 g, 26 mmol) y una solución bruta de 228-1 a -70 °C. La mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. La reacción se monitoreó mediante LCMS y se inactivó con n-propilamina. El solvente se evaporó a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía (PE:MTBE = 5:1 ~1:1) para proporcionar 228-2 puro (1,8 g, 37%).
A una solución de 227-A (300 mg, 0,337 mmol) y NMI (276 mg, 3,37 mmol) en CH3CN anhidro (4 mL) se agregó 228­ 2 (249 mg, 0,674 mol, en DCM (5 mL)) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 10 h. La reacción se monitoreó mediante LCMS y a continuación se inactivó con H2O. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 x 20 mL). La fase orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía usando (PE:EA = 5:1 ~2:1 como eluyente para obtener 228-3 (360 mg, 87%).
228-3 (360 mg, 0,294 mmol) fue disuelto en CH3COOH (80%, 8 mL) y se agitó a 40-50 °C durante 2,5 h. La reacción se monitoreó mediante LCMS y a continuación se inactivó con MeO. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía usando PE:EA = 1:1 como el eluyente para generar el producto bruto 228. El producto se purificó mediante prep-HPLC (sistema neutro, NH4HCO3) para proporcionar 228 (70 mg, 75%) como un sólido blanco.ESI-MS: m/z 679,2 [M+H]+.
EJEMPLO 126
COMPUESTO 229
Figure imgf000138_0002
A una solución agitada de POCl3 (2,0 g, 13 mmol) en DCM anhidro (10 mL) ase añadió fenol (1,22 g, 13 mmol) a -70°C, y TEA (1,31 g, 13 mmol) en DCM (3 mL) gota a gota a -70°C. La mezcla se calentó gradualmente a RT y se agitó durante 1 h. Se obtuvo una solución bruta de 229-1 .
229 se preparó usando un procedimiento similar al de la preparación de 228 usando 229-2 (205 mg, 0,674 mol, en DCM (5 mL) obtenido de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo y 229-1) y 227-A (300 mg, 0,337 mmol).
229 (50 mg, 74%) fue obtenido como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 615,2 [M+H]+.
EJEMPLO 127
COMPUESTO 230
Figure imgf000139_0001
230 se preparó usando un procedimiento similar al de la preparación de 228 usando 230-2 (214 mg, 0,674 mol, en DCM (5 mL) obtenido de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-isobutilo y 230-1) y 227-A (300 mg, 0,337 mmol).
230 (70 mg, 87%) fue obtenido como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 629,2 [M+H]+.
EJEMPLO 128
COMPUESTO 231
Figure imgf000139_0002
231 se preparó usando un procedimiento similar al de la preparación de 228 usando 231-2 (223 mg, 0,674 mol, DCM (5 mL) obtenido de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-ciclopentil y 231-1) y 227-A (300 mg, 0,337 mmol). 231 (62 mg, 71%) fue obtenido como un sólido blanco. ESI-m S: m/z 641,2 [M+H]+.
EJEMPLO 129
COMPUESTO 232
Figure imgf000139_0003
232 se preparó usando un procedimiento similar al de la preparación de 228 usando 232-2 (223 mg, 0,674 mol, DCM (5 mL), obtenido de clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-3-pentilo y 232-1) y 227-A (300 mg, 0,337 mmol). 232 (42 mg, 60%) fue obtenido como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 643,2 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 130
COMPUESTO 233
Figure imgf000140_0001
Se trató una solución agitada de tricloruro de fosforilo (1,00 g, 6,58 mmol) y 5-quinolina (955 mg, 6,58 mmol) en DCM anhidro (50 mL) con una solución de TEA (665 mg, 6,58 mmol) en DCM (10 mL) a -78 °C. La mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. La solución se enfrió hasta -78 °C y a continuación se trató con clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-neopentilo (1,28 g, 6,58 mmol). Se añadió TEA (1,33 g, 13,16 mmol) gota a gota a -78 °C. La mezcla se calentó gradualmente a TA y se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en metil-butil éter. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice (AcOEt puro) para proporcionar 233-1 como aceite incoloro (500 mg, 20%). A una solución de 233-2 (300 mg, 0,337 mmol) y NMI (276,6 mg, 3,37 mmol) en CH3CN anhidro (0,9 mL) se agregó 233-1 (388 mg, 1,011 mmol) en , preparación descrita a continuación) en CH3CN (0,3 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con AcOEt. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con sulfato de sodio anhidro, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (33% EA en PE) para obtener 233-3 como un polvo amarillo (300 mg, 71,9%).
233-3 (300 mg, 0,243 mmol) se disolvió en CH3COOH al 80% (3 mL) y la mezcla se agitó a 60 °C durante 2,5 h. La mezcla se dividió entre AcOEt y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con sulfato de sodio, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (50% EA en PE) para proporcionar 233 como un polvo amarillo (81 mg, producto bruto). El producto bruto (81 mg) se purificó mediante RP HPLC para proporcionar 233 como un sólido blanco. (28,7 mg, 17,1%). ESI-LCMS: m/z 694,1 [M+H]+.
EJEMPLO 131
COMPUESTO 234
Figure imgf000140_0002
234-1 fue preparado usando un procedimiento similar al de la preparación de 233-1 usando tricloruro de fosforilo (2,00 g, 13,16 mmol), 1-naftol (1,882 g, 13,16 mmol) e clorhidrato de 2-aminopropanoato de (S)-neopentilo (2,549 g, 13,16 mmol). 234-1 (600 mg, 12%) fue obtenido como un aceite incoloro.
Se trató una solución de 234-2 (230 mg 0,26 mmol) y NMI (212 mg 2,60 mmol) en CH3CN anhidro (1 mL) con una solución de 234-1 (300 mg 0,78 mmol) en CH3CN anhidro (0,5 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante la noche.
La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 20 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con sulfato de sodio anhidro, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (CH3OH in CH2Cl2 de 1% a 5%) para dar 234-3 (300 mg, 93%) como un sólido blanco.
234-3 (300 mg, 0,24 mmol) se disolvió en CH3COOH (80%, 5 mL). La mezcla se agitó a 60°C durante 2,5 h. La mezcla se diluyó con EA (30 mL), y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (CH3OH in CH2Cl2 de 1% a 5%) para dar 234 (105 mg) bruto. El producto bruto se purificó mediante HPLC (0,1% NH4HCO3 en agua y CH3CN) para obtener 234 (45 mg, 26%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 693,2 [M+H]+.
EJEMPLO 132
COMPUESTO 235
Figure imgf000141_0001
Se trató una solución agitada de 235-1 (2,00 g, 13,99 mmol) y 235-2 (2,00 g, 13,99 mmol) en DCM anhidro (8 mL) con una solución de TEA (3,11 g, 30,8 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota a -78 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a -78 °C y a continuación se calentó gradualmente a TA. El solvente orgánico se retiró a baja presión y el residuo se disolvió en metil-butil éter. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM seco) para obtener 235-3 como un aceite incoloro (1 mg, 20,96%).
235-4 (260 mg, 0,29 mmol) se co-evaporó con tolueno 3 veces para retirar H2O. Se trató 235-4 seco con MeCN (0,8 mL) y NMI (240 mg, 2,9 mmol) y a continuación se agitó durante 10 minutos. La mezcla se trató con una solución de 235-3 (291 mg, 0,87 mmol) en MeCN (0,4 mL) y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (75% EA en PE) para obtener 235-5 (300 g, 86%) como un sólido blanco.
235-5 (300 mg, 0,25 mmol) se trató con CH3COOH (5 mL, 80%) y se agitó a 50 °C durante 3 h. La mezcla se diluyó con EA. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (67% EA en PE) para obtener 235 bruto, que se purificó mediante HPLC. El producto se secó mediante liofilización para obtener 235 (30 mg, 18,5%) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z 643 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 133
COMPUESTO 247
Figure imgf000141_0002
247-1 (50 mg, 0,13 mmol) fue disuelto en ácido fórmico al 80% (3 mL) y se calentó a 50 °C durante la noche. El solvente se evaporó, se co-evaporó con agua para eliminar el ácido. El residuo se disolvió en una mezcla de metanol y trietilamina (3 mL, 4:1 v:v). Después de 0,5 h, el solvente se evaporó. El nucleósido se liofilizó a partir de agua para proporcionar 247 (40 mg, 97%). MS: m/z 315,5 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 134
COMPUESTO 248
Figure imgf000142_0001
A una solución agitada de 248-1 (15,0 mg, 50,2 mmol) en piridina anhidra (180 mL), se añadió BzCl (23,3 mg, 165,5 mmol) a 0 °C bajo atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 12 h a TA. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con una solución ac. sat. de NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se filtró. La fase orgánica se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (15% EtOAc en PE) para obtener 248-2 (27 g, 93,5%) como un sólido blanco.
248-2 (27,0 g, 47 mmol) fue disuelto en HOAc al 90% (250 mL). La mezcla se agitó a 110 °C durante 12 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con EA y se lavó con sol. sat. ac. de NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se filtró. La fase orgánica se concentró a baja presión para obtener 248-3 bruto (21,7 g, bruto) como un sólido amarillo claro.
248-3 (21,7 g, 45,9 mmol) fue tratado con NH3/MeOH (600 mL) y se agitó a TA durante 12 h. El solvente se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (5% MeÜH en DCM) para obtener 248-4 (12 g, 99%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 248-4 (15,0 g, 56,8 mmol) en piridina anhidra (200 mL), se añadió imidazol (7,7 g, 113,6 mmol) y TBSCl (9,4 g, 62,5 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con EA y se lavó con sol. sat. ac. de NaHCÜ3 y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se filtró. La fase orgánica se concentró a baja presión para obtener 248-5 bruto (21,3 g, bruto) como un sólido amarillo claro.
A una solución de 248-5 (21,3 g, bruto) en DCM anhidro (200 mL), se añadió colidina (6,8 g, 56,8 mmol), MMTrCl (17,8 g, 56,8 mmol) y AgNÜ3 (9,6 g, 56,8 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. El sólido se eliminó por filtración y el filtrado se diluyó con solución ac. sat. de NaHCÜ3 y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (5% EA en PE) para obtener 248-6 (32 g, 87%) como un sólido amarillo claro.
248-6 (32 g, 49,2 mmol) fue disuelto en una solución de TBAF en THF (1M, 4,0 eq.) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con EA y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (33% EA en PE) para obtener 248-7 (21,0 g, 79%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 248-7 (21,0 g, 38,8 mmol) en DCM anhidro (200 mL) se añadió piridina (9,2 mL, 116,4 mmol) y periodinano de Dess-Martin (49 g, 116,4 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. La reacción fue inactivada con sol. sat. de Na2S2O3 y solución acuosa de NaHCO3. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para proporcionar el producto bruto (21,0 g).
El producto bruto (21,0 g, bruto) se disolvió en dioxano (200 mL) y se trató con 37% de formaldehído acuoso (20 mL, 194 mmol) e hidróxido de sodio acuoso 2,0 N (37,5 mL, 77,6 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 12 h. La solución se trató con NaBH4 (8,8 g, 232,8 mmol). Después de agitar durante 0,5 h a TA, la reacción se inactivó con agua helada. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (4% de MeOH en DCM) para obtener 248-8 (10,0 g, 50,5%) como una espuma blanca.
248-8 (4,8 g, 8,5 mmol) se co-evaporó con tolueno (2x). El residuo se disolvió en DCM anhidro (45 mL) y piridina (6,7 g, 85 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió anhídrido tríflico (4,8 g, 18,7 mmol) gota a gota durante 10 min. A 0 °C, la mezcla se agitó durante 40 minutos y se monitoreó mediante TLC (PE: EA= 1:1). La solución se diluyó con CH2Cl2 (50 mL). La solución se lavó con solución saturada de NaHCO3 . La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE: EA = 100:0-4:1) para proporcionar 248-9 (6,1 g, 86,4%) como una espuma marrón.
248-9 (6,1 g, 7,3 mmol) se disolvió en MeCN (25 mL). Se agregó una solución de TBAF en THF (1M, 25 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. Se agregó una solución de TBAF en THF (1M, 15 mL) y la mezcla se agitó durante 4 h. La mezcla se trató con NaOH ac. (1N, 14,6 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 248-10 (2,1 g, 50,6%) como un sólido blanco.
248-10 (700 mg, 1,23 mmol) se disolvió en HCOOH al 80% (40 mL) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con MeOH (40 mL) y se agitó durante 12 h. El solvente se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (5% MeOH en DCM) para proporcionar 248 (210 mg, 57,7%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 296,9 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 135
COMPUESTO 250
Se calentó una mezcla de 250-1 (120 g, 0,26 mol) e IBX (109 g, 0,39 mol) en CH3CN (2,0 L) a reflujo y se agitó durante 12 h. Después de enfriarse a TA, la mezcla se filtró. El filtrado se concentró a sequedad a baja presión.
250-2 (130 g, bruto, 0,26 mol) se co-evaporó con tolueno anhidro (3x). Se agregó bromuro de vinilo y magnesio (700 mL, 0,78 mol, 1,0 N en THF) gota a gota en una solución de 250-2 en THF (300 mL) durante 30 minutos a -78 °C, y la mezcla se agitó durante alrededor de 1 h a TA. Cuando el material de partida se consumió según lo determinado por TLC, la mezcla se vertió en una solución sat. de NH4CL La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión.
A una solución del residuo anterior (170 g, bruto, 0,346 mol) en CH2Cl2 anhidro se agregó TEA (105 g, 1,04 mol), DMAP (84 g, 0,69 mol) y cloruro de benzoilo (146 g, 1,04 mol) y se agitó durante 12 h a TA. La mezcla se diluyó con CH2Cl2 y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCÜ3. La fase acuosa combinada se extrajo con DCM (100 mL). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna usando EA en PE (10% a 50%) para obtener 250-3 (107 g, 52%).
Se agitó una mezcla de uracilo (co-evaporado con tolueno (2x)) y NOBSA (81,4 g, 0,4 mol) y CH3CN (150 mL) a reflujo durante 1,5 h. Después de enfriar a t A, la mezcla se trató con 250-3 (59 g, 0,1 mol) y TMSOTf (155 g, 0,7 mol). La mezcla se calentó a 60-70 °C y se agitó durante 12 h. Después de enfriar a TA, la mezcla se vertió en una solución sat. de NaHCO3 y un sólido precipitado. Después de la filtración, se obtuvo 250-4 puro como un sólido blanco (40 g, 69%).
A una solución de 250-4 (50 g, 0,086 mol), K2CO3 (17,8 g, 0,13 mol) en DMF (50 mL) se añadió PMBCl (16 g, 0,1 mol) a 0 °C, y se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con agua, y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para dar 250-5 (65 g).
Se agitó una mezcla de 250-5 (65 g, 0,086 mol) y NaOMe (16,8 g, 0,3 mol) en MeOH:DCM (500 mL, v:v = 4:1) a TA durante 2,5 h. La reacción se inactivó con CO2 (sólido) y se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (4% MeOH en DCM) para obtener 250-6 como una espuma amarilla (25 g, 75%).
A una mezcla de 250-6 (25,5 g, 0,065 mol) en DMF (60 mL) se agregó NaH (10,5 g, 0,26 mol, 60% en aceite de carbón) BnBr (36,3 g, 0,21 mol) en un baño de hielo y se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con NH4Cl (ac.) y la mezcla se diluyó con Ea (150 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (15% EA en PE) para obtener 250-7 (20 g, 46%).
A una solución de 250-7 (20 g, 0,03 mol) y NMMO (7 g, 0,06 mol) en THF:H2O (100 mL, v:v = 5:1) se agregó OsO4 (2,6 g, 0,01 mol) a TA y se agitó a TA durante 24 h. La reacción se inactivó con sol. sat. de Na2S2O3 , y se extrajo con EA (3 x 80 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión.
A una solución de producto diol (0,03 mol) en MeOH:H2O:THF (v:v:v = 170 mL:30 mL:50 mL) se agregó NaIO4 (9,6 g, 0,045 mol) a TA y se agitó a TA durante 2 h. Después de la filtración, el filtro se utilizó directamente para la siguiente etapa.
La solución anterior se trató con NaBH4 (1,8 g, 0,048 mol) a 0 °C y se agitó a TA durante 30 minutos. La reacción se inactivó con solución de HCl (1 N). La mezcla se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante gel de sílice (25 % EA en PE, TLC: PE:EA = 2:1, Rf = 0,6) para proporcionar 250-8 (12 g, 61% en 3 etapas).
A una solución de 250-8 (14 g, 21 mmol) y DMAP (5,1 g, 42 mmol) en DCM (60 mL) se añadió MsCl (3,1 g, 27 mmol) a 0 °C, y se agitó a TA durante 40 mins. La reacción se inactivó con solución saturada de NaHCO3 . La fase orgánica se lavó con solución de HCl (0,2N), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en gel de sílice (25% EA en PE) para obtener el producto Ms (14 g, 90%) como un sólido blanco.
El producto Ms (41 g, 55 mmol) se trató con TBAF (Alfa, 1 N en THF, 500 mL) y se agitó a 70-80 °C durante 3 días. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (25% EA en PE) para obtener 250-9 (9,9 g, 27%).
A una solución de 250-9 (6,3 g, 9,45 mmol) en CAN: H2O (v:v = 3:1,52 mL) se agregó CAN (15,5 g, 28,3 mmol) y se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 80 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (25% EA en PE) para obtener 250-10 (3,6 g, 71%) como un aceite amarillo.
A una solución de 250-10 (2,4 g, 4,4 mmol) en DCM anhidro (10 mL) se añadió BCh (1 N, 30 mL) a -70 °C y se agitó durante 2 h a -70 °C. La reacción se inactivó con MeOH a -70 °C. La mezcla se concentró directamente por debajo de 35 °C a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (50% EA en PE a 100% EA) para obtener 250-11 (1,2 mg, 86%). ESI-MS: m/z 277,1 [M+H]+.
A una solución de PPh3 (3,37 g, 12,8 mmol) en piridina (15 mL) se añadió I2 (3,06 g, 12 mmol) a 0 °C y se agitó a TA durante 30 minutos hasta que apareció el color naranja. La mezcla se enfrió a 0 °C y se trató con 250-11 (2,2 g, 8 mmol) en piridina (5 mL) y se agitó a TA bajo N2 durante 12 h. La reacción se inactivó con Na2S2Ü3 (sat., 30 mL) y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1% a 2% MeOH en DCM) para obtener 250-12 (1,8 g, 58%) como una espuma amarillo claro.
Se agitó una mezcla de 250-12 (1,35 g, 3,5 mmol) y DBU (1,06 g, 7 mmol) en THF:CH3CN (v:v = 10 mL:5 mL) a 60­ 70 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con EA (50 mL) y se ajustó a pH=7-8 con solución de HCl (0,2 N). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 250-13 (0,5 mg, 55%).
A una solución de 250-13 (670 mg, 2,6 mmol) en CH3CN (6 mL) se agregó NIS (730 mg, 3,25 mmol) y 3HFTEA (335 mg, 2,1 mmol) a 0 °C, y se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con solución de NaHCO3 (sat.) y solución de Na2S2O3 (sat.), y se extrajo con EA (3 x 30 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (50% EA en PE y 2% MeOH en DCM) para obtener 250-14 (1,2 g, 80%) como un aceite marrón.
A una solución de 250-14 (1,0 g, 2,47 mmol), DMAP (0,75 g, 6,2 mmol) y TEA (0,75 g, 7,42 mmol) en DCM (10 mL) se añadió BzCl (1,15 g, 8,16 mmol) en DCM (1 mL) a 0 °C, y se agitó a TA durante 12 h. La reacción se inactivó con solución de NaHCO3 (ac.). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (30% EA en PE) para obtener 250-15 (850 g, 85%). Se agitó una mezcla de 250-15 (600 mg, 1 mmol), BzONa (1,45 g, 10 mmol) y 15-corona-5 (2,2 g, 10 mmol) en DMF (25 mL) a 90-100 °C durante 24 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (30% EA en PE) para obtener 250-16 (275 g, 37%) como una espuma amarilla clara.
Una mezcla de 250-16 (250 mg, 0,41 mmol) en NH3-MeOH (7 N, 5 mL) fue agitada a TA durante 15 h. La mezcla fue concentrada a baja presión directamente. El residuo se purificó por cromatografía en columna (50% EA en PE) y se re-purificó mediante prep-HPLC para obtener 250 (33 g, 25%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 295,1 [M+H]+. EJEMPLO DE REFERENCIA 136
COMPUESTO 126
A una solución de 126-1 (3,0 g, 11,15 mmol) en piridina anhidra (90 mL), se añadió imidazol (3,03 g, 44,59 mmol) y TBSCI (6,69 g, 44,59 mmol) a 25 °C en atmósfera de N2. La solución se agitó a 25 °C durante 15 h. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EA. La solución se lavó con NaHCO3 sat. y salmuera, y se secó con MgSO4 anhidro. El disolvente se eliminó a baja presión para obtener 126-2 crudo (4,49 g, 90%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 126-2 (3,5 g, 7,04 mmol) en una mezcla de EA y EtOH (1:1,55 mL), se añadió TsOH (10,7 g, 56,34 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 30 °C durante 8 h. Se añadió agua (30 mL) y se eliminó la solución a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de MeOH en DCM) para obtener 126-3 (1,75 g, 65%) como una espuma blanca.
A una solución de 126-3 (3,4 g, 8,88 mmol) en piridina anhidra (17 mL), se añadió colidina (4,3 g, 35,51 mmol), AgNO3 (5,50 g, 35,51 mmol) y MMTrCl (8,02 g, 26,63 mmol) a 25 °C en atmósfera de N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. Se añadió MeOH (20 mL) y se eliminó el disolvente a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de EA en PE) para obtener 126-4 (5,76 g, 70%) como una espuma blanca.
A una solución de 126-4 (2,0 g, 2,16 mmol) en DCM anhidro (10 mL), se añadió ChCHCOOH (2,8 g, 21,57 mmol) gota a gota a -78 °C. La mezcla se calentó a 10 °C y se agitó a esta temperatura durante 20 min. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. a -10 °C. La mezcla se extrajo con DCM, se lavó con salmuera y se secó con MgSO4 anhidro. La solución se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de EA en PE) para obtener 126-5 (0,99 g, 70%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 126-5 (3,5 g, 5,34 mmol) en DMSO anhidro (35 mL), se añadió DCC (3,30 g, 16,03 mmol) y PyTFA (1,03 g, 5,34 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con agua fría a 0 °C y se extrajo con EA (3 x 60 mL). El precipitado se filtró. Las fases orgánicas se lavaron con salmuera (3x) y se secaron con MgSO4 anhidro. La fase orgánica se concentró a baja presión para obtener 126-6 crudo (3,5 g) como un aceite amarillo.
A una solución agitada de 126-6 (3,5 g, 5,34 mmol) en MeCN (35 mL), se añadió HCHO al 37% (11,1 mL) y TEA (4,33 g, 42,7 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La mezcla se trató con EtOH (26 mL) y NaBH4 (3,25 g, 85,5 mmol) y a continuación se agitó durante 30 min. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se secó con MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (de 10% EA en PE a 50% DCM en PE) para obtener 126-7 (1,46 g, 40%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 126-7 (1,85 g, 2,7 mmol) en piridina (24 mL) y DCM (9,6 mL), se añadió DMTrCl (1,3 g, 3,9 mmol) a -35 °C en atmósfera de N2. La solución se agitó a 25 °C durante 16 h. La mezcla se trató con MeOH (15 mL) y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (EA en PE de 10% a 30%) para obtener 126-8 (1,60 g, 60 %) como un sólido blanco.
A una solución de 126-8 (1,07 g, 1,08 mmol) en piridina anhidra (5 mL), se añadió AgNO3 (0,65 g, 3,79 mmol) y TBDPSCl (1,04 g, 3,79 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en EA (50 mL). La solución resultante se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% de EA en PE) para obtener 126-9 (0,93 g, 70%) como una espuma blanca.
A una solución agitada de 126-9 (1 g, 0,82 mmol) en DCM anhidro (13,43 mL), se añadió CbCHCOOH (2,69 mL) a -78 °C. La mezcla se agitó a -10 °C durante 20 min. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. La fase orgánica se purificó mediante cromatografía en columna (MeOH en DCM de 0,5% a 2%) para obtener 126-10 (0,48 g, 65%) como un sólido.
A una solución enfriada con hielo de 126-10 (0,4 g, 0,433 mmol) en DCM anhidro (2,7 mL), se añadió piridina (171 mg, 2,17 mmol) y Tf2O (183 mg , 0,65 mmol) gota a gota a -35 °C. La mezcla se agitó a -10 °C durante 20 min. La reacción se inactivó con agua helada y se agitó durante 30 min. La mezcla se extrajo con DCM (3 x 20 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (100 mL), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 126-11 crudo (0,46 g), que se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.
A una solución de 126-11 (0,46 g, 0,43 mmol) en DMF anhidro (2,5 mL), se añadió NaN3 (42 mg, 0,65 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 16 h. La solución se diluyó con agua y se extrajo con EA (3 x 30 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA en PE de 5% a 15%) para obtener 126-12 (0,31 g, 70%) como un sólido.
A una solución de 126-12 (0,31 g, 0,33 mmol) en MeOH (5 mL), se añadió NH4F (0,36 g, 9,81 mmol) a 70 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 24 h. La mezcla se evaporó a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (MeOH en DCM de 0,5% a 2,5%) para obtener 126-13 (117 mg, 60%) como un sólido blanco.
126-13 (300 g, 0,50 mmol) fue disuelto en HOAc al 80% (20 mL). La mezcla se agitó a 55 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC para obtener 126 (100 mg, 61,3 %) como un sólido blanco. eS i-Lc m S: m/z 325,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 137
COMPUESTO 137
Figure imgf000147_0001
A una solución agitada de 146-1 (80 mg, 0,14 mmol) en CH3CN anhidro (2,0 mL), se añadió N-metilimidazol (0,092 mL, 1,12 mmol) a 0 °C (baño de hielo/agua). A continuación, se añadió una solución de fosforocloridato de fenilo e (isopropoxi-L-alaninilo) (128 mg, 0,42 mmol, disuelto en CH3CN (0,5 mL)) (que se preparó según un procedimiento general tal como se describe en McGuigan y col., J. Med. Chem. (2008) 51:5807-5812). La solución se agitó a 0 y 5 °C durante h y a continuación se agitó a T.A. durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C, se diluyó con EA y a continuación se añadió agua (5 mL). La solución se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con MgSO4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con EA/hexanos (gradiente de 25-100%) para obtener 137-1 (57,3 mg, 49%) como una espuma.
137-1 (57,3 mg, 0,07 mmol) fue disuelto en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (68 gL, 0,27 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a T.A. durante 2 h y se añadió EtOH anhidro (100 gL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 1-7%) y se liofilizó para obtener 137 (27,8 mg, 72%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 571,1 [M+H]+, 1141,2 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 138
COMPUESTO 138
Figure imgf000147_0002
138-1 (68,4 mg, 44,7%) se preparó a partir de 146-1 (100 mg, 0,174 mmol) y fosfato de bis(tert-butoxicarboniloximetilo) (126 mg, 0,35 mmol) con DIp Ea (192 gL, 1,04 mmol), BOP-Cl (133 mg, 0,52 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (59 mg, 0,52 mmol) en THF (1,5 mL) del mismo modo que 169-4.
138 (31,4 mg, 67%) se preparó a partir de 138-1 (68 mg, 0,077 mmol) de la misma manera que 146. ESI-LCMS: m/z = 627,15 [M+Na]+, 1219,25 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 139
COMPUESTO 139
Figure imgf000147_0003
A una solución de 146-1 (100 mg, 0,175 mmol) en CH3CN anhidro (2 mL), se añadió 5-etiltio-1 H-tetrazol en CH3CN (0,25 M; 0,84 mL, 0,21 mmol). Se añadió gota a gota Bis-SATE-fosforamidato (95 mg, 0,21 mmol) en CH3CN (1 mL) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C en atmósfera de Ar. Se añadió una solución de m-CPBA (78 mg, 0,35 mmol) al 77% en DCM (1 mL) y la mezcla se agitó durante 2 h a una temperatura comprendida entre 0 y 5 °C en atmósfera de Ar. La mezcla se diluyó con EtOAc (50 mL), se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCO3 sat. y salmuera, y se secó con MgSO4. La mezcla se filtró y los disolventes se evaporaron al vacío. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con EA/hexanos (gradiente de 20-100%) para obtener 139­ 1 (105 mg, 63,6%) como una espuma blanca.
139-1 (105 mg, 0,112 mmol) fue disuelto en CH3CN anhidro (0,8 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (84 pL, 0,334 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a T.A. durante 2 h y se añadió EtOH anhidro (100 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporaron con tolueno (3x). El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con MeOH/CH2Cl2 (gradiente de 1 -7%) y se liofilizó para obtener 139 (42,7 mg, 57%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 692,15 [M+Na]+, 1339,30 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 140
COMPUESTO 143
Figure imgf000148_0001
A una solución de N-Boc-L-Valina (620,78 mg, 2,86 mmol) y TEA (144,57 mg, 1,43 mmol) en THF anhidro (2,5 mL), se añadió BB (250,00 mg, 285,73 pmol). La mezcla se co-evaporó con piridina y tolueno para eliminar el agua. El residuo se disolvió en THF (2,5 mL). Se añadió DIPEA (369,28 mg, 2,86 mmol) seguida de la adición de BOP-Cl (363,68 mg, 1,43 mmol) y 3-nitro-1 H-1,2,4-triazol (162,95 mg, 1,43 mmol) a TA (18 °C). La mezcla se agitó a T.A. durante 12 h y a continuación se diluyó con EA (40 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% de EA en PE) para obtener 143-1 (220 mg, crudo) como una espuma blanca.
Se disolvió 143-1 (250,0 mg, 232,73 pmol) en CH3COOH al 80% (30 mL). La solución se calentó a 50 °C y se agitó durante 12 h. La reacción se inactivó con MeOH y la solución se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% de MeOH en DCM) para obtener 143-2 (80,00 mg, 68,82%) como una espuma blanca.
143-2 (78,00 mg, 156,16 pmol) fue disuelto en HCl/dioxano (1,5 mL) y EA (1,5 mL) a TA (19 °C). La mezcla se agitó a TA durante 30 min. La solución se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC para obtener 143 (23 mg, 31,25 %) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 400,20 [M+H]+,799,36[2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 141
COMPUESTO 154
154-1 se preparó según el procedimiento descrito en Lefebre y col., J. Med. Chem. (1995) 38:3941-3950,
154-2 (0,33 g, 0,5 mmol) se preparó usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155-6 usando 155-5 y 154-1. 154-2 se obtuvo como un sólido blanco. Usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155, 154-2 se utilizó para preparar 154 (130 mg). 1H-RMN (CDCh): 7,40 (d, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,83 (d, 1H), 4,3 (t, 2H), 4,1-4,2 (m, 6H), 3,2 (t, 4H), 1,69 (s, 4H), 1,3 (s, 3H), 1,23 (s, 18H); 31P-RMN (CDCh): -2,4 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 142
COMPUESTO 155
Figure imgf000149_0001
A una solución de hidrosulfuro de sodio (4,26 g, 76,0 mmol) en EtOH (100 mL) se agregó cloruro de t-butirilo (76,2 mmol; 9,35 mL) gota a gota a 0 °C, y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. Se agregó una solución de 2-(2-cloroetoxi)etanol (57 mmol; 6,0 mL) y TEA (21 mL, 120 mmol), y la mezcla se calentó a reflujo durante 60 h. La mezcla se filtró y a continuación se concentró a un volumen pequeño. El residuo se disolvió en EA y a continuación se lavó con agua, NaHCO3 sat. ac. y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró en vacío. El producto bruto (10,0 g) se aisló y se purificaron 5 gramos mediante cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice usando un gradiente de 0 a 100% de EA en hexano para proporcionar 155-3 (4,5 g, 22 mmol) como un aceite transparente e incoloro. 1H-RMN ( CDCh): 3,70-3,74 (m, 2H), 3,5-3,65 (m, 4H), 3,1 (t, 2H), 1,25 (s, 9H).
Se agregó una solución 155-3 (4,5 g; 21,8 mmol) y trietilamina (6,7 mL, 87,2 mmol) en tetrahidrofurano (50 mL) gota a gota durante 1 h a una solución agitada de N,N-diisopropilfosforodiclorhidrato (2,0 mL, 10.9 mmol) en THF (50 mL) bajo argón a -78 °C. La mezcla se agitó a TA durante 2 h y a continuación se diluyó con EA (200 mL). La mezcla se lavó con NaCl ac. sat. y se secó con Na2SO4. Después de la filtración, el filtrado se evaporó a presión reducida para proporcionar un aceite amarillo pálido. La purificación mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando un gradiente de EA (0-5%) en hexano que contenía trietilamina al 5% proporcionó 155-4 (2,5 g, 4,25 mmol) como un aceite transparente e incoloro. 1H-RMN (CDCh): 3,70-3,82 (m, 4H), 3,57-3,65 (m, 10H), 3,1 (t, 4H), 1,25 (s, 18H), 1,17 (t, 12H); 31P-RMN (CDCh): 148,0 ppm.
155-5 (285 mg, 0,9 mmol) y DCI (175 mg, 1,5 mmol) se co-evaporaron dos veces con ACN y a continuación se disolvieron en ACN (5 mL). 155-4 (790 mg, 1,35 mmol) fue añadido en ACN (4 mL) y la reacción se monitoreó mediante TLC. Después de 15 minutos, se agregó terc-butilhidroperóxido (0,5 mL de solución 5,5 M en decano) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se diluyó con EA (25 mL), se lavó con solución acuosa saturada NaHCO3 y sol.
sat. ac. de NaCI, secada sobre Na2SÜ4, filtrada y concentrada. La purificación mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando un gradiente de EA (0-100%) en hexano proporcionó 155-6 (0,17 g, 0,22 mmol) como un sólido blanco. 155-6 se disolvió en HCÜÜH ac al 80% (5 mL). Después de 30 minutos a TA, el solvente se retiró y se co­ evaporó dos veces con tolueno. El residuo se recogió en metanol (10 mL) y se añadió lentamente TEA (0,2 mL). Después de 2 minutos a TA, el solvente se retiró al vacío. La purificación mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando un gradiente de metanol (0-15%) en DCM proporcionó 155 (90 mg). 1H-RMN (CDCh): 7,40 (d, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,83 (d, 1H), 4,3 (t, 2H), 4,1-4,2 (m, 6H), 3,70-3,82 (m, 4H), 3,57-3,65 (m, 4H), 3,1 (t, 4H) 1,61 (s, 8H), 1,3 (s, 3H), 1,23 (s, 18H). 31P-RMN (CDCh): -1,55 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 143
COMPUESTO 156
Figure imgf000150_0001
Se preparó 156-1 (6,0 g, 31,6 mmol) usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155-3 usando 4-clorobutanol. 156-1 se obtuvo como un aceite transparente e incoloro. 1H-RMN (CDCh): 3,67 (s, 2H), 2,86 (m, 2H), 1,65 (m, 4H), 1,25 (s, 9H).
156-2 (2,14 g, 4,0 mmol) se preparó usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155-4. 156-2 se obtuvo como un aceite transparente e incoloro. 1H-RMN (CDCh): 3,67 (m, 6H), 2,86 (t, 4H), 1,65 (m, 8H), 1,25 (s, 18H), 1,17 (t, 12H). 31P-RMN (CDCh): 143,7 ppm.
156-3 (0,23 g, 0,22 mmol) se preparó usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155-6 usando 155-5 y 156-2. 156-3 se obtuvo como un sólido blanco. Usando un procedimiento similar al utilizado para preparar 155, 156­ 3 se utilizó para preparar 156 (170 mg). 1H-RMN (CDCh): 7,40 (d, 1H), 6,1 (s, 1H), 5,83 (d, 1H), 4,3 (t, 2H), 4,1-4,2 (m, 6H), 2,8 (t, 4H), 1,78 (m, 4H), 1,69 (s, 8H), 1,3 (s, 3H), 1,23 (s, 18H). 31P-RMN (CDCh): -1,56 ppm.
EJEMPLO DE REFERENCIA 144
COMPUESTO 161
Figure imgf000150_0002
161-1 (109 mg, 0,39 mmol) y bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (0,6 mmol, preparado a partir de 195 mg de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato y 85 pL de Et3N) se volvieron anhidros mediante co-evaporación con piridina, seguido de tolueno. El residuo se disolvió en THF anhidro (3 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Diisopropiletilamina (0,2 mL, 3 eq.), BopCl (190 mg, 2 eq.) y 3-nitro-1,2,4-triazol (81 mg, 2 eq.) se añadieron y la mezcla se agitó a 0 °C durante 90 minutos. La mezcla se diluyó a continuación con EtOAc, se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SÜ4. Purificación en columna de gel de sílice con CH2Cl2/iPrOH (gradiente de 4-10%) seguido de purificación RP-HPLC (A: HCÜÜH al 0,1% en agua, B: HCÜÜH al 0,1% en MeCN) produjo 161 (28 mg, 12%). 1H-RMN (CDCl3): 57,24 (d, 1H), 6,6 (a, 1H), 5,84 (d, 1H), 5,65-5,73 (m, 4H), 4,94 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 4,1 (b, 1H), 2,88 (d, 1 H), 1,47 (d, 3H), 1,33 (m, 12H).
EJEMPLO DE REFERENCIA 145
COMPUESTO 266
Figure imgf000151_0001
A una solución helada de 271 (50 mg, 0,16 mmol) y N-metilimidazol (50 gL, 0,64 mmol) en acetonitrilo (1,5 mL) se agregó una solución de 266-1 (0,1 g, 0,28 mmol) en acetonitrilo (0,15 mL). La mezcla se agitó a 5 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con EtOH y la mezcla se concentró. El residuo evaporado se dividió entre EtOAc y ácido cítrico (0,5 N). La capa orgánica se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. Purificación mediante RP-HPLC (A: agua, B: MeCN) produjo 266 (30 mg, 30%) como un polvo blanco. MS: m/z 625 [M+1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 146
COMPUESTO 157
Figure imgf000151_0002
El compuesto 157-1 se preparó a partir de 3-hidroxioxetano disponible comercialmente (5,0 g) usando el procedimiento descrito para preparar 54-2 (5,6 g). 1H-RMN (CDCh) ó 5,73 (s,2H), 5,48-5,51 (m,1H), 4,90 (d,2H), 4,72 (d, 2H). El compuesto 157-2 se preparó a partir de 157-1 usando el procedimiento descrito para preparar 54-3 (8,0 g). 1H-RMN (CDCh) 55,95 (s,2H), 5,48-5,51 (m,1 H), 4,90 (d,2H), 4,72 (d, 2H).
Se hizo reaccionar bencilfosfato (sal de plata) y 157-2 (8,0 g) como se describió para preparar 54-4 para proporcionar 157-3 purificado (1,92 g). 1H-RMN (CD3CN): 57,39-7,42 (m, 5H), 5,62 (d, 4H), 5,39-5,42 (m, 2H), 5,15 (d, 2H), 4,80­ 4,83 (m, 4H), 4,56-4,60 (m, 4H). 31P-RMN (CD3CN): 5 - 4,55 ppm.
El compuesto 157-3 (970 g, 2,16 mmol) se disolvió en metanol conteniendo trietilamina (0,3 mL, 2,16 mmol). Después de 3 h a temperatura ambiente, los solventes se retiraron al vacío para proporcionar 157-4 bruto que se utilizó sin purificación adicional.
El compuesto 157-5 (400 mg; 1,2 mmol) y 157-4 (900 mg, 2,16 mmol; 1,5x) se co-evaporaron con piridina (2x) y tolueno (2x), y a continuación se disolvieron en THF (8 mL) a 0 °C. Se añadieron diisopropiletilamina (DIPEA) (0,82 mL; 4 eq.), cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil) fosfínico (Bop-Cl) (0,6 g; 2 eq.), nitrotriazol (0,266 g, 2 eq.). La mezcla se mantuvo a 0 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con EA (50 mL) y se extrajo con bicarbonato de sodio saturado (2 x 50 mL) y se secó sobre sulfato de sodio. Los solventes se retiraron al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de EA de 10 a 100% en hexano para proporcionar 157-6 purificado (175 mg, 0,6 mmol).
Se disolvió 157-6 purificado en HCOOH ac. al 80% (20 mL) y se mantuvo a 20 °C durante 1 h. Después de enfriarse a TA, el solvente se retiró al vacío y el residuo se co-evaporó con tolueno (3 x 25 mL). El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de 0 a 20% de MeOH en DCM para proporcionar 157 (26 mg) purificados. ESI-LCMS: m/z 589,6 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 147
COMPUESTO 158
Figure imgf000152_0001
Se disolvió nucleósido 158-1 (de Wuxi) (44 mg, 0,15 mmol) en una mezcla de fosfato de trimetilo (2 mL) y piridina seca (0,5 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min a 42 °C y a continuación se enfrió a T.A. Se agregó N-metilimidazol (0,027 mL, 0,33 mmol) seguido de POCh (0,027 mL, 0,3 mmol). La mezcla se mantuvo a TA. La reacción se monitoreó mediante LC/MS en gradiente 0-50%. Después de 4 h, la reacción se completó. La reacción se inactivó con tampón de acetato de trietilamonio 2 M (2 mL), pH7,5 (TEAA). 158-2 se aisló en prep-HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RP 250x21,2 mm) usando un gradiente de 0 - 30% ACN en TEAA 50 mM.
El compuesto 158-2 (sal de trietilamonio; 45 mg, 0,1 mmol) se secó mediante co-evaporación repetida con piridina seca (3x). 158-2 se disolvió en piridina seca (1 mL) y la solución se agregó gota a gota en una solución hirviendo de diisopropilcarbodiimida (63 mg, 0,5 mmol) en piridina (4 mL) durante 2,5 h. La mezcla se calentó a reflujo durante 1 h. Después de enfriarse a 25 °C, la reacción se inactivó con tampón TEAA 2 M (2 mL) y se mantuvo a 25 °C durante 1 h. La solución se concentró a sequedad y la piridina residual se retiró por co-evaporación con tolueno (3 x 2 mL). 158­ 3 se aisló en prep-HPLC (Phenomenex Synergi 4u Hydro-RP 250x21,2 mm) usando un gradiente de 0 - 30% ACN en TEAA 50 mM.
El compuesto 158-3 (sal de trietilamonio; 26 mg, 0,045 mmol) se disolvió en DMF seco (0,5 mL) a TA bajo argón. A la solución agitada se añadió N,N-diisopropiletilamina (40 uL, 0,22 mmol) seguido de carbonato de clorometil isopropilo (35 mg, 0,22 mmol). La mezcla se agitó a 65 °C durante 18 h. La mezcla se evaporó a sequedad y el residuo se purificó mediante columna de sílice usando un gradiente de MeOH de 0-15% en CH2Cl2. Las fracciones que tenían 158 se agruparon y la mezcla se concentró a sequedad para proporcionar 158 (2,3 mg). ESI-LCMS: m/z 467,5 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 148
COMPUESTO 267
A una solución agitada de 267-1 (180 mg, 0,16 mmol) en CH3CN anhidro (2,0 mL), se añadió N-metilimidazol (53,4 mL, 0,65 mmol) a 0 °C (baño de hielo/agua). Se añadió una solución de fosforocloridato de fenilo e (isopropoxi-L-alaninilo) (101 mg, 0,29 mmol, disuelto en CH3CN (0,5 mL) que se preparó según un procedimiento general tal como se describe en McGuigan y col., J. Med. Chem. (2008) 51:5807-5812). La solución se agitó a 0 a 5 °C durante 3 h. Se añadió N-metilimidazol (50 gL) a 0 °C (baño de hielo/agua) seguido de solución de (ciclohexiloxi-L-alaninil) fosforocloridato de fenilo (52 mg, disuelto en 0,5 mL de CH3CN). La mezcla se agitó a TA durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C y se diluyó con EA. Se añadió agua (5 mL). La solución se lavó con ácido cítrico 1,0 M, NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con MgSÜ4. El residuo se purificó en sílice (columna de 10 g) con DCM/MeOH (gradiente de 0-10%) para obtener 267-2 (96,8 mg, 64%) como una espuma.
El compuesto 267-2 (95 mg, 0,11 mmol) fue disuelto en CH3CN anhidro (0,5 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (77 gL, 0,3 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a T.A. durante 30 h y se añadió EtOH anhidro (100 gL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El residuo se purificó en RP-HPLC con MeOH/CH2Cl3 (gradiente de 50-100%) y se liofilizó para obtener 267 (37,7 mg, 52,5%) como una espuma blanca. ESI-LCMS: m/z = 653,2 [M+H]+, 1305,4 [2M+H]+.
A una solución de 267-A (56 g, 0,144 mol) en THF anhidro (600 mL) se le agregó una solución de tri-tercbutoxialuminohidruro de litio (216 mL, 1M, 0,216 mol) gota a gota a -78 °C bajo N2 durante 30 minutos. La solución se agitó entre -78 °C a 0 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con sol. sat. de NH4Cl y se extrajo con EA (3 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron para obtener 267-B (52 g, 92%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de PPh3 (45,7 g, 0,174 mol) en CH2Cl2 (200 mL) se añadió 267-B (34 g, 0,087 mol) a -20 °C bajo N2. La mezcla se agitó durante 15 min. Se agregó CBr4 (58 g, 0,174 mol) gota a gota mientras se mantenía la temperatura entre -25 °C y -20 °C bajo flujo de N2. La mezcla se agitó a continuación por debajo de -17°C durante 20 mins. La mezcla se trató con gel de sílice. La solución se filtró a través de gel de columna de sílice frío y se lavó con eluido frío (PE:EA=50:1 a 4:1). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida a TA para proporcionar el producto de aceite bruto. El residuo se purificó mediante gel de columna de sílice (PE:EA=50:1 a 4:1) para proporcionar 267-C (a-isómero, 24 g, 61%) como un aceite incoloro. 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz), 5 = 8,16 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,42-7,62 (m, 6H), 6,43 (s, 1H), 5,37 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,68-4,86 (m, 3H), 1,88 (s, 3H).
Se agitó una mezcla de 6-Cl-guanosina (80,8 g, 0,478 mol) y f-BuOK (57 g, 0,509 mol) en t-BuOH (1 L) a 30-35 °C durante 30 minutos. 267-C (72 g, 0,159 mol, en MeCN 500 mL) fue agregado a TA y la mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó durante 3 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EA (3 x 300 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (PE:EA = 4:1 a 2:1) para proporcionar 267-D (14 g, 16%). 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz) 57,93-8,04 (m, 4H), 7,90 (s, 1H), 7,30-7,50 (m, 6H), 6,53 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,06­ 5,10 (m, 1H), 4,81 -4,83 (m, 1H), 4,60-4,64 (m, 1H), 1,48 (s, 3H).
A una solución de 267-D (14 g, 25,9 mmol) en DCM (15 mL), se añadió AgNO3 (8,8 g, 51,8 mmol), colidina (6,3 g, 51,8 mmol) y MMTrCl (12,1 g, 38,9 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La reacción se inactivó con MeOH (5 mL). Después de filtración, el filtro se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (PE:EA = 10: 1 a 3:1) para proporcionar 267-E (16 g, 80%). 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz) 5 = 8,05-8,07 (m, 4H), 7,93 (s, 1H), 7,18-7,57 (m, 18H), 6,77 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,71 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,6 (s, 1H), 4,77 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,67-4,76 (m, 1H), 4,55-4,59 (m, 1H), 3,75 (s, 1H), 1,06 (s, 3H).
Se disolvió sodio (170 mg, 7,38 mmol) en EtOH seco (5 mL) a 70 °C y la solución se enfrió a 0 °C. Se agregó 267-E (1 g, 1,23 mmol) en porciones a 0 °C. La mezcla se agitó durante 8 h a TA. La mezcla se neutralizó con CO2 a pH 7,0 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC(CH3CN/H2O al 10%) para proporcionar 267­ 1 (0,4 g, 53%) como un sólido amarillo. ESI-MS: m/z 616 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 149
COMPUESTO 272
Figure imgf000154_0001
A una solución agitada de 272-1 (3,00 g, 5,23 mmol) en DCM anhidro (36 mL), se añadió PDC (3,94 g, 10,46 mmol), AC2O (5,34 g, 52,30 mmol) y 2=metilpropan-2-ol (7,75 g, 104,60 mmol) sucesivamente a TA. La mezcla se agitó a TA durante 15 h. La mezcla se cargó en una columna de gel de sílice muy corta y se eluyó con EA. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y concentraron a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 272-2 (2,40 g, 71,3%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 272-2 (2,00 g, 3,26 mmol) en DCM (30 mL), se añadió TFA (15 mL). La mezcla se agitó a TA durante 1,5 h. La mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar 272-3 (1,00 g, bruto), que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
El producto 272-3 bruto (1,00 g, bruto) se disolvió en una mezcla de tolueno (25 mL) y MeOH (20 mL). Se añadió TMS-diazometano (2 M, 3,17 mL). Después de agitar durante 2 h, la mezcla se concentró a presión reducida a TA. El residuo se diluyó con EA (25 mL), se lavó con agua (25 mL), se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (2-4% MeOH en DCM) para obtener 272­ 4 (451 g, 43,2%) como un sólido blanco. La fase acuosa se concentró para obtener 272-3 (500 g, 50,0%) como un sólido blanco.
A una solución de 272-4 (451 g, 1,37 mmol) en CD3OD anhidro (18 mL), se añadió NaBD4 (344 mL, 8,22 mmol) a TA. La mezcla se agitó a T.A. durante 1 h. La reacción se desactivó con CD3OD y se neutralizó con AcOH (0,2 mL). La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (4-5% MeOH en DCM) para obtener 272-4 (410 g, 98,7%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 272-5 (410 g, 1,35 mmol) en piridina (2,5 mL), se añadió imidazol (459 mg, 6,75 mmol) y TBSCl (610 mg, 4,05 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 60 °C durante 10 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con salmuera (20 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 272-6 (440 g, 61,3%) como un sólido blanco.
A una solución de 272-6 (440 mg, 827 gmol) en MeCN anhidro (4 mL) se añadieron DMAP (253 mg, 2,07 mmol), Et3N (209,32 mg, 2,07 mmol) y cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1 -sulfonilo (626,50 mg, 2,07 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. Se añadió NH3 • H2O (2 mL) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con solución acuosa saturada de NH4Cl (20 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (2% MeOH en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante TLC (10% MeOH en DCM) para obtener 272-7 (420 g, 95,63%) como un sólido blanco.
A una solución de 272-7 (420 mg, 791 gmol) en MeOH (4 mL), se añadió NH4F (586 g, 15,83 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 90-100 °C durante 10 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10% MeOH en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (condición neutra) para proporcionar 272 (201 mg, 61,8% de rendimiento, 100% de deuterio) como un sólido blanco. ESI-TOF-MS: m/z 303,1 [M+H]+, 605,2 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 150
COMPUESTO 221
Figure imgf000155_0001
A una solución de 1,1-dimetoxiciclopentano (19,3 g, 148,52 mmol) y 221-1 (10,0 g, 37,13 mmol) en DCE (100 mL) se le añadió T s O H ^ O (0,7 g, 3,71 mmol). La mezcla se agitó a 50 °C durante 12 h. La mezcla se neutralizó con EfeN, y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1 -10% de MeOH en DCM) para obtener 221-2 (8,7 g, 70,1%) como un sólido blanco.
El compuesto 221-2 (20,0 g, 0,06 mol) se co-evaporó con piridina anhidra 3 veces para eliminar H2O. A una solución helada de 221-2 en piridina anhidra (100 mL) se añadió TsCl (22,8 g, 0,12 mol) a 0 °C, y la mezcla se agitó durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS y TLC. La reacción se inactivó con H2O y la mezcla se extrajo con EA (3 x 200 mL). La solución se secó con Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1 a 15:1) para dar 221-3 (20,0g, 69,0%) como un sólido blanco. A una solución de 221-3 (20,0 mg, 0,04 mmol) en acetona (200 mL) se le añadió Nal (31,0 g, 0,2 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. La reacción se monitoreó mediante LCMS. La reacción se inactivó con solución sat. de Na2S2O3 . La solución se extrajo con EA (3 x 200 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se evaporó a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM: MeOH = 100:1 a 15:1) para dar 221-4 (15,0g, 83,3%) como un sólido blanco.
El compuesto 221-4 (13,4 g, 30,16 mmol) se trató con HCOOH (80%) en H2O a TA. La solución se agitó a 60 °C durante 2 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1%-10% MeOH en DCM) para obtener 221-5 (9,1 g, 80,0%) como un sólido blanco.
A una solución de 221-5 (5,0 g, 13,22 mmol) en CH3CN/THF anhidro (50 mL, 1:1, v:v) se agregó DBU (6,0 g, 39,66 mmol) a TA. La solución se agitó a 50 °C durante 1,5 h. La reacción se inactivó con HCOOH a 0°C y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (50%-70% EA en PE) para obtener 221-6 (3,3 g, 48,1%) como un sólido blanco.
A una solución enfriada con hielo de 221-6 (2,1 g, 8,39 mmol) en MeCN anhidro (21 mL) se le agregó NIS (2,4 g, 10,49 mmol) y TEA^3HF (1,0 g, 6,29 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. y solución de Na2SO3 y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30%-50% EA en PE) para obtener 221-7 (1,3 g, 39,3%) como un sólido amarillo.
A una solución agitada de 221-7 (3,2 g, 8,08 mmol) en DCM anhidro (32 mL), se añadió DMAP (2,5 mg, 20,20 mmol) y Et3N (2,5 g, 24,24 mmol) a TA. La mezcla se trató con BzCl (3,7 g, 26,66 mmol) a 0 °C y a continuación se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se concentró a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna (20-30% EA en PE) para obtener 221-8 (1,8 g, 31,6%) como un sólido blanco.
Se ajustó Bu4NOH (8,0 g, 13,74 mL, 55% en H2O) a pH=3-4 con TFA y a continuación se enfrió a TA. A una solución de 221-8 (600 g, 0,85 mmol) en DCM (10 mL), se añadió solución de BrnNOH y m-CPBA (917%, 4,25 g, 80 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 25 °C durante 48 h, y a continuación se lavó con solución saturada de NaHCO3 . La capa orgánica se pasó directamente a través de la columna básica de Al2O3 y el solvente se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20-30% EA en hexanos) para obtener 221-9 (123 g, 24,3%) como un sólido blanco.
A una solución de 221-9 (300 mg, 0,50 mmol) en EA/hexano (20 mL, 1:1, v:v) se agregó catalizador Lindlar (200 mg) bajo N2. La mezcla se agitó bajo H2 (40 Psi) a 2 °C durante 1,5 h. La suspensión se filtró y el filtrado se trató con catalizador Lindlar (200 mg) bajo N2, y se agitó bajo H2 (40 Psi) a 25 °C durante 1,5 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a baja presión para proporcionar 221-10 bruto (287 mg) como un sólido blanco.
Se disolvió el compuesto 221-10 (287 mg, 0,48 mmol) en NH3/MeOH (30 mL, 7 M). La mezcla se agitó a TA durante 24 h bajo N2 y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (HCOOH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar 221-11 (50 mg, 34,7% en dos etapas) como un sólido blanco. 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 5 = 7,86 (d, J = 8,0 Hz 1H), 6,26 (s, 1H), 5,62-5,86 (m, 1H), 5,49 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 19,3 Hz, 1 H), 3,71-3,86 (m, 1H).
El compuesto 221-11 (113 mg, 0,39 mmol) se evaporó conjuntamente con tolueno 3 veces para retirar H2O. A una solución agitada de 221-11 (113 mg, 0,39 mmol) en una mezcla de MeCN (0,5 mL) y NMI (320 mg, 3,90 mmol) se agregó una solución de 73-C (256 mg, 0,66 mmol) en MeCN (0,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para proporcionar el producto bruto 221, que se purificó mediante prep-HPLC (HCOOH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar 221 (45 mg, 20,1%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 538,2 [M-F]+ ESI-MS: m/z 580,2 [M+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 151
COMPUESTO 222
A una solución de 221-9 (300 mg, 0,50 mmol) en MeOH (30 mL), se añadió Pd/C (300 mg, 10%) bajo N2. La mezcla se agitó bajo H2 (1 atm) a 25 °C durante 1,5 h. La suspensión se filtró y a continuación se concentró a baja presión para proporcionar 222-1 bruto (307 mg) como un sólido blanco.
Se disolvió el compuesto 222-1 (307 mg, 0,48 mmol) en NH3/MeOH (30 mL, 7 M). La mezcla se agitó a TA durante 24 h bajo N2 y a continuación se concentró a baja presión. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (0,1% HCOOH en agua y MeCN) para obtener 222-2 (30 mg, 21% en dos etapas) como un sólido blanco.
El compuesto 222-2 (91 mg, 0,31 mmol) se evaporó conjuntamente con tolueno 3 veces para retirar H2O. A una solución agitada de 222-2 (91 mg, 0,31 mmol) en una mezcla de MeCN (0,5 mL) y NMI (254 mg, 3,90 mmol) se agregó una solución 222-C (203 mg, 0,66 mmol) en MeCN (0,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (MeOH al 5% en DCM) al producto bruto 222, que se purificó mediante prep-HPLC (HCOOH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar 222 (30 mg, 17%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 540,1 [M-F]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 152
COMPUESTO 226
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A una solución enfriada con hielo de 226-1 (50 g, 204,9 mmol) en piridina seca (400 mL) se le añadió TIPDSCl (70,78 g, 225,4 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó a TA durante 16 h, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía usando 20% EA en PE para generar 226-2 (111,5 g, 100%) como un sólido blanco.
A una solución de 226-2 (50 g, 103 mmol) en CH3CN anhidro (400 mL), se añadió IBX (43 mL, 153 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante la noche y se monitoreó mediante TLC (PE:EA=1:1). El precipitado se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar el producto bruto 226-3 (50 g, 99%) como un sólido blanco.
A una solución de trimetilsilil acetileno (20 g, 200 mmol) en THF anhidro (400 mL) se añadió gota a gota n-BuLi (80 mL, 200 mL) a -78°C. La mezcla se agitó a -78°C durante 30 mins, y a continuación se calentó a TA durante 10 mins. Se agregó el compuesto 226-3 (30 g, 60 mmol) en THF (100 mL) a la mezcla gota a gota a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h y a continuación se calentó lentamente a TA. La mezcla se agitó durante 20 minutos y a continuación la reacción se inactivó con una solución sat de NH4Cl a -78 °C. La mezcla se diluyó con EA. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (15% PE en EA) para obtener 226-4 como un sólido blanco (14 g, 50%).
El compuesto 226-4 (14 g, 24 mmol) se disolvió en tolueno anhidro (100 mL) bajo N2 y se enfrió hasta -78 °C. Se añadió DAST (19 g, 120 mmol) gota a gota a - 78 °C y se continuó agitando durante 1,5 h. La mezcla se diluyó con EA y se vertió en una solución saturada de NaHCÜ3 . La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (20% PE en EA) para obtener 226-5 como un sólido blanco (12 g, 81%).
Se sometió a reflujo una mezcla de 226-5 (12 g, 20 mmol) y NH4F (11 g, 30 mmol) en MeOH (150 mL) durante 2 h. Después de enfriarse a TA, la mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para proporcionar 226-6 (3,1 g, 58%) como un sólido blanco.
A una solución de 226-6 (3,1 g, 11,6 mmol) en Py seca (50 mL), se añadió imidazol (3,1 g, 46,4 mmol) y TBSCl (5,2 g, 34,8 mmol). La mezcla se agitó a 50-60°C durante 3 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en EA (100 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 226-7 como un sólido blanco (5 g, 86%).
A una solución de 226-7 (4,5 g, 9 mmol) en 1,4-dioxano (45 mL) se añadió CuBr (643 mg, 4,5 mmol), diciclohexilamina (3,3 g, 18 mmol) y paraformaldehido (675 mg, 22,5 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 24 h y a continuación se enfrió a TA. La reacción se inactivó con solución sat. de NH4CL La mezcla se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (15% EA en PE) para obtener 226-8 como un sólido blanco (2,0 g, 43%).
Una mezcla de 226-8 (2 g, 4 mmol) y NH4F (2,2 g, 60 mmol) en MeOH (20 mL) se sometió a reflujo durante la noche. Después de enfriarse a TA, la mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para proporcionar 226-9 (946 mg, 83%) como un sólido blanco.
A una suspensión agitada de 226-9 (946 g, 3,33 mmol), PPh3 (1,3 g, 5 mmol), imidazol (453 g, 6,66 mmol) y piridina (3 mL) en THF anhidro (12 mL) se agregó una solución de I2 (1 g, 4,33 mmol) en THF (4 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó a TA y se agitó durante 16 h. La reacción se inactivó con solución acuosa sat. de Na2S2O3 y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% MeOH en DCM a 5% MeOH en DCM) para obtener 226-10 (2,1 g, bruto) como un sólido blanco.
A una solución de 226-10 (2,1 g, 5,3 mmol) en THF (15 mL) se le añadió DBU (15 g, 100 mmol), y la mezcla se agitó a 30 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con EA y se neutralizó con ácido acético. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (1,5% MeOH en DCM) para proporcionar 226-11 como un sólido blanco (800 mg, 90%).
A una solución enfriada por hielo de 226-11 (800 mg, 3 mmol) en MeCN seco (1,5 mL) se añadió NEt3 ^3HF (484 mg, 3 mmol) y NIS (1,68 g, 7,5 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 30 min, y la reacción se monitoreó mediante LCMS. La reacción se inactivó con Na2S2O3 y solución saturada de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 x 50 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (25% EA en PE) para obtener 226-12 (850 g, 68%) como un sólido blanco.
A una solución de 226-12 bruto (850 mg, 2 mmol) en DCM seco (10 mL), se añadió DMAP (488 mg, 4 mmol) y BzCl (422 mg, 3 mmol). La mezcla se agitó durante 4-5 h a TA y la reacción se monitoreó mediante LCMS. La mezcla se diluyó con CH2Cl2 (40 mL) y se lavó con solución saturada de NaHCO3 . La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% MeOH en DCM) para obtener 226-13 (900 g, 87%) como un sólido blanco.
Se ajustó hidróxido de tetra-butilamonio (21 mL como solución acuosa al 54-56%, ~ 42 mmol, 24 eq.) con TFA a pH ~ 4 (~ 3,5 mL), y la solución se trató con una solución de 226-13 (900 mg, 1,7 mmol) en DCM (21 mL). Se agregó ácido m-cloroeperbenzoico (2,1 g, 60-70%, ~ 8,75 mmol, ~ 5 eq.) en partes bajo agitación vigorosa, y la mezcla se agitó durante la noche. La mezcla se diluyó con CH2G2 (30 mL) y se lavó con una solución saturada de NaHCO3 . La mezcla se lavó con salmuera, se secó con sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (40-70% EA en PE) para obtener 226-14 como un aceite. El residuo se purificó mediante TLC (50% EA en PE) para proporcionar 226-14 (350 mg, 50%).
El compuesto 226-14 (350 mg, 0,86 mg) se trató con NH37N en MeOH (15 mL). La mezcla se agitó durante 2-3 h y se monitoreó mediante TLC. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% isopropanol en DCM) para proporcionar 226-15 (250 mg, 96%) como un sólido blanco.
1H RMN (CD3OD, 400 M Hz) 5 = 7,75 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,60-6,35 (m, 1H), 5,72 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,37-5,25 (m, 1H), 5,17-5,06 (m, 1H), 5,04-4,94 (m, 1H), 4,59-4,29 (m, 1H), 3,87-3,70 (m, 2H).
A una solución agitada de 226-16 (3,79 g, 18 mmol) y 226-17 (3 g, 18 mmol) en DCM anhidro (60 mL) se agregó con una solución de TEA (4 g, 39 mmol) en DCM (40 mL) gota a gota a -78 °C, y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se disolvió en metil-butil éter. El precipitado se retiró mediante filtración y el filtrado se concentró para proporcionar el producto bruto. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna seca (DCM anhidro) para proporcionar 226-18 puro como un aceite incoloro (3 g, 54 %).
El compuesto 226-15 (200 mg, 0,66 mmol) se co-evaporó con tolueno 3 veces para retirar H2O. El compuesto 226-15 se trató con MeCN (1,5 mL) y NMI (541 mg, 6,6 mmol). La mezcla se agitó a TA, y continuación se añadió 226-18 (403 mg, 1,32 mmol) en MeCN (0,5 mL). El residuo se purificó mediante una columna de gel de sílice (5% iPrOH en DCM) para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante HPLC (HCOOH al 0,1% en agua y MeCN) para proporcionar 226 (33 mg, 9%). ESI-LCMS: m/z 594 [M+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 153
COMPUESTOS 265 y 266
En un matraz de fondo redondo de 2000 mL se colocó una solución de 269-1 (100 g, 384,20 mmol, 1,00 eq.) en N,N-dimetilformamida (1000 mL) a TA. Se agregó NaH (11,8 g, 491,67 mmol, 1,20 eq.) en varios lotes y la mezcla se agitó a 0 °C durante 0,5 h. Se agregó (bromometil)benceno (78,92 g, 461,44 mmol, 1,20 eq.) a 0 °C y la solución se agitó durante la noche a TA. La reacción se inactivó con agua. La solución se diluyó con eA (2000 mL), se lavó con NaCl (3 x 500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:10) para proporcionar 269-2 (105 g, 78%).
En un matraz de fondo redondo de 1000 mL se colocaron 269-2 (100 g, 285,38 mmol, 1,00 eq.), ácido acético (300 mL) y agua (100 mL). La solución se agitó a TA durante la noche. Luego, la mezcla se diluyó con EA (2000 mL), se lavó con NaCl (2 x 500 mL) y bicarbonato de sodio acuoso (3 x 500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró a presión reducida. El crudo 269-3 (64 g) se obtuvo como aceite amarillo claro. ESI MS m/z: 333 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 5000 mL se colocó una solución de 269-3 (140 g, 451,11 mmol, 1,00 eq.) en MeOH (500 mL). Se añadió una solución de periodato de sodio(135,2 g, 632,10 mmol, 1,40 eq.) en agua (1000 mL). La solución se agitó a T.A. durante 1 h y a continuación se diluyó con EA (2000 mL), se lavó con solución sat. de NaCl (3 x 500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El sólido se secó en un horno a presión reducida para proporcionar 269-4 bruto (97 g) como aceite amarillo
En un matraz de fondo redondo de 3000 mL, se colocó una solución de 269-4 (100 g, 359,32 mmol, 1,00 eq.) en tetrahidrofurano (500 mL) a TA. Se añadió agua (500 mL). A la mezcla se le agregó una solución de NaOH (600 mL, 2 N en agua) a 0°C seguido de formaldehído ac. (240 mL, 37%). La solución se agitó a TA durante la noche. La mezcla se diluyó con EA (1500 mL) y se lavó con solución sat. de NaCl (3 x 500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:1) para proporcionar 269-5 (52,5 g, 47%) como un sólido blanco. ESI MS m/z: 333 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 3000 mL se colocó una solución de 269-5 (76 g, 244,89 mmol, 1,00 eq.) en acetonitrilo (1500 mL) a TA. Se agregó NaH (6,76 g, 281,67 mmol, 1,15 eq.) en varios lotes a 0 °C. La solución se agitó a 0 °C durante 15 minutos, a continuación se añadió (bromometil)benceno (48,2 g, 281,82 mmol, 1,15 eq.). La solución se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua, se diluyó con EA (3000 mL), se lavó con NH4Cl ac. (3 x 500 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:5) para proporcionar 269-6 (50 g, 51%) como un aceite amarillo. ESI MS m/z: 423 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 250 mL, se colocó una solución de trifluoruro de dietilaminosulfuro (6,6 mL, 2,00 eq.) en tolueno (10 mL) a TA. 269-6 (10 g, 24,97 mmol, 1,00 eq.) en tolueno (120 mL) se añadió a 0 °C. La solución se agitó durante 3 h a 60 °C en un baño de aceite. La mezcla se enfrió hasta 0 °C, se diluyó con EA (300 mL), se lavó con solución sat. de NaCl (3 x 50 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:5) para proporcionar 269-7 (5000 mg, 50%) como un aceite amarillo. ESI MS m/z: 425 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 250 mL purgado y mantenido con una atmósfera inerte de N2, se colocó 269-7 (10 g, 23,61 mmol, 1,00 eq., 95%) en ácido acético (80 mL). Se añadieron anhídrido acético (6 mL) y ácido sulfúrico (0,05 mL). La solución se agitó durante 2 h a TA. A continuación, la mezcla se diluyó con EA (500 mL), se lavó con agua (3 x 200 mL) y bicarbonato de sodio acuoso (3 x 200 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:10~1:5) para proporcionar 269-8 (6 g, 54%) como un aceite amarillo. ESI MS m/z: 469 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 50 mL purgado, se colocó una solución de 269-8 (4 g, 8,96 mmol, 1,00 eq.), catalizador Pd-C al 10% (4 g) en MeOH/üCM (25 mL/25 mL). A esta mezcla se le introdujo H2 (gas) en presión atmosférica ~ 3. La solución se agitó durante 48 h a TA. Los sólidos se recogieron mediante filtración y la solución se concentró a presión reducida para proporcionar 269-9 (0,7 g, 29%) de como un aceite incoloro.
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocaron 269-9 (2000 mg, 7,51 mmol, 1,00 eq.), Ac2O (8 mL), 4-dimetilaminopiridina (183,2 mg, 0,20 eq.) en piridina (8 mL). La solución se agitó durante 3 h a TA. La reacción fue una solución saturada de bicarbonato de sodio. La solución se diluyó con EA (200 mL) y se lavó con solución sat. de NaCl (3 x 50 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con EA:PE (1:7) para proporcionar (1500 mg, 57%) de 269-10 como un sólido blanco. ESI MS m/z: 373 [M+Na]+.
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocó una solución de 269-10 (300 mg, 0,86 mmol, 1,00 eq.) en diclorometano (3 mL) a TA. Se agregó trimetilsilanocarbonitrilo (169 mg, 1,70 mmol, 2,00 eq.) a TA, seguido de tetraclorostano (223 mg, 0,86 mmol, 1,00 eq.) a 0 °C. La solución se agitó a 0 °C durante 3 h. La reacción se inactivó con solución saturada de bicarbonato de sodio. La solución se diluyó con DCM (50 mL), se lavó con Solución sat. de NaCl (2 x 10 mL), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con PE:EA (5:1) para proporcionar 269-11 (110 mg, 40%) como un aceite amarillo. 1H-RMN (400MHz, CDCta): 5 ppm 5,67~5,75(m, 2H), 4,25~4,78(m, 5H), 2,19(s, 3H), 2,14(s, 3H), 2,10(s, 3HI
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocaron 269-11 (200 mg, 0,63 mmol, 1,00 eq.), NBS (223 mg, 1,25 mmol, 2,00 eq.) en tetraclorometano (5 mL). La solución se calentó a reflujo durante 3 h sobre una lámpara de tungsteno de 250 W, y a continuación se enfrió a TA. La reacción se inactivó con solución saturada de bicarbonato de sodio. La solución fue EA (100 mL), se lavó con solución sat. de NaCl (3 x 20 mL), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con PE:EA (7:1) para proporcionar 269-12 (120 mg, 48%) como un aceite amarillo. 1H-RMN (400MHz, CDCta): 5 ppm 6,03(d, J=4,8Hz, 1H), 5,90(d, J=4,8Hz, 1H), 4,29-4,30(m, 4H), 2,25(s, 3H), 2,15(s, 3H), 2,25(s, 3H).
En un matraz de fondo redondo de 25 mL purgado y mantenido con una atmósfera inerte de argón, se colocó una solución de N-(2-oxo-1,2-dihidropirimidin-4-il)benzamida (54,3 mg, 2,00 eq.) y (NH4)2SO4 (5 mg) en HMDS (3 mL). La solución se agitó durante la noche a 120 °C en un baño de aceite. La solución se concentró al vacío y el residuo se disolvió DCE (1 mL) en Ar. Se agregó una solución de 269-12 (50 mg, 0,13 mmol, 1,00 eq.) en MeCN (1 mL) seguido de AgOTf (32,5 mg, 1,00 eq.). La solución se agitó durante 3 h a 80 °C en un tubo sellado de 10 mL. Después de enfriarse a TA, la solución se diluyó con EA (50 mL), se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio (3 x 10 mL) y solución sat. de NaCl (2 x 10 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice con DCM:MeOH (15:1) para proporcionar 269-13 (30 mg, 45%) como un aceite amarillo. ESI MS m/z: 428 [M+H]+.
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocó una solución de 269-13 (100 mg, 0,23 mmol, 1,00 eq.) en ACN (3 mL). Se añadieron 4-dimetilaminopiridina (28,5 mg, 0,23 mmol, 1,00 eq.) y TEA (71 mg, 0,70 mmol, 3,00 eq.) seguido de TPSCl (212,8 mg, 0,70 mmol, 3,00 eq.). La solución se agitó durante 3 h a TA y a continuación se concentró al vacío. El producto bruto 269-14 (200 mg) se obtuvo como un aceite amarillo.
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocó una solución de 269-14 (140 mg, 0,10 mmol, 1,00 eq.) en ACN (3 mL) y oxidanida de amonio (3 mL). La solución se agitó durante 4 h a 35 °C en un baño de aceite. La mezcla se concentró al vacío. El producto bruto se purificó mediante Prep-HPLC (Prep-HPLC-020): Columna, columna XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5um 13nm; fase móvil, AGUA CON TFA al 0,05% y ACN (ACN al 35,0% hasta 48,0% en 8 minutos); Detector, nm para proporcionar 269 (21,3 mg, 25%) como un sólido blanco. ESI MS m/z: 301,1 [M+1]+.
En un matraz de fondo redondo de 25 mL se colocó una solución de 269-13 (50 mg, 0,12 mmol, 1,00 eq.), NH4OH sat. (2 mL) y 1,4-dioxano (2 mL). La solución se agitó durante 2 h a TA. Después de concentrarse a presión reducida, el producto bruto se purificó mediante Prep-HPLC [(Prep-HPLC-020): Columna, columna XBridge Prep C18 OBD, 19*150 mm 5um 13nm; fase móvil, AGUA CON TFA al 0,05% y ACN (ACN al 35,0% hasta 48,0% en 8 minutos); Detector, nm] para proporcionar 268 (13,6 mg, 39%) como un sólido blanco ESI MS m/z: 299,9 [M-1]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 154
COMPUESTO 270
Figure imgf000161_0001
Se disolvió nucleósido 270-1 (100 mg, 0,26 mmol) en n-butilamina (2 mL) y se dejó durante 2 h a TA. El disolvente se evaporó, y el residuo se purificó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de MeOH 10% a 60% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron (3x) con el fin de eliminar el exceso de tampón para proporcionar 270 (20 mg, 25%). MS: m/z 308 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 155
COMPUESTO 271
Figure imgf000162_0001
A una solución agitada de 271-1 (43,6 % en diclorometano, 345,87 g, 1,16 mol) en DCM anhidro (1,0 L) se agregó etil-2-(trifenilfosforanilideno) propanoato (400 g, 1,100 mol) gota a gota durante un período de 30 minutos a -40 °C. La mezcla se dejó calentar hasta 25 °C y se agitó durante 12 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en TMBE (2,0 L). El sólido se eliminó por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en columna de gel de sílice (1,2% EA en PE) para proporcionar 271-2 (191,3 g, 80,26%) como una espuma blanca. 1H-RMN (400 Hz, CDCh), ó = 6,66 (dd, J = 6,8, 8,0 Hz, 1H), 4,81 -4,86 (m, 1H), 4,11 -4,21 (m, 3H), 3,60 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 1,87 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,27 (t, J = 6,8 Hz, 3H).
A una solución agitada de 271-2 (100 g, 0,47 mol) en acetona (2,0 L) se añadió KMnÜ4 (90 g, 0,57 mol) en porciones a 0-5 °C. La mezcla se agitó a 0-5 °C durante 2 h. La reacción se inactivó usando solución de sulfito de sodio sat. (600 mL). Después de 2 h, se formó una suspensión incolora. El sólido se eliminó por filtración. La torta del filtro se lavó con EA (300 mL). El filtrado se extrajo con EA (3 x 300 mL). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro. La fase orgánica se concentró a presión reducida para obtener 271-3 bruto (50 g, 43,4%) como un sólido.
A una solución agitada de 271-3 (50,0 g, 0,20 mol) y trietilamina (64,0 g, 0,63 mol) en DCM anhidro (1,0 L) se añadió cloruro de tionilo (36,0 g, 0,31 mol) a 0 °C. Después de 30 minutos, la mezcla se diluyó con diclorometano (500 mL) y se lavó con agua fría (1,0 L) y salmuera (600 mL). La fase orgánica se secó con Na2Sü4 anhidro. La fase orgánica se concentró a presión reducida para obtener el producto bruto como un aceite marrón. Al producto bruto en acetonitrilo anhidro se le añadieron catalizador TEMPÜ (500 mg) y NaHCÜ3 (33,87 g, 0,40 mol) a 0 °C. Se agregó gota a gota una solución de hipoclorito de sodio (10-13%, 500 mL) a 0 °C durante 20 minutos. La solución se agitó a 25 °C durante 1 h. La fase orgánica se concentró y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (3x). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro. El disolvente se eliminó a baja presión para obtener 271-4 bruto (53,0 g, 85,48%) como un aceite amarillo.
A una solución agitada de 271-4 (62,0 g, 0,20 mol) en dioxano anhidro (1,5 L) se añadió TBACl (155,4 g, 0,50 mol) a 25 °C. La solución se agitó a 100 °C durante 10 h. La mezcla se enfrió hasta 25 °C y se trató con 2, 2-dimetoxipropano (700 mL), seguido de HCl conc. (12 N, 42 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 3 h y a continuación se concentró a presión reducida para proporcionar 271 -5 bruto como un aceite marrón (45,5 g, bruto), que se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
Se disolvió 271-5 bruto (45,5 g, 171 mmol) en una mezcla de EtÜH (500 mL) y HCl conc. (12 N, 3,0 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se evaporó conjuntamente con tolueno (3x) para proporcionar 271-6 bruto (24,6 g, bruto) como un aceite marrón, que se utilizó para la siguiente etapa.
A una solución agitada de 271-6 bruto (24,6 g, bruto) y DMAP (4,8 g, 40,0 mmol) en piridina anhidra (800 mL) se añadió cloruro de benzoilo (84,0 g, 0,60 mol) gota a gota durante un período de 40 minutos a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (1,5 mL). La solución se lavó con solución de HCl 1,0 M (400 mL) y salmuera (800 mL). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 anhidro. El solvente se retiró a presión reducida para proporcionar un sólido marrón. El sólido se suspendió en MeÜH (600 mL).
Después de la filtración, la torta del filtro se lavó con MeOH. La torta del filtro se secó a presión reducida para obtener 271-7 (40,0 g, 75,0%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 271-7 (7,0 g, 18,04 mmol) en THF anhidro (70 mL) se agregó una solución de tri-tercbutoxialuminohidruro de litio (27 mL, 1,0 M, 27,06 mmol) por goteo durante un período de 30 minutos a -78 °C bajo N2. La mezcla se agitó a -20 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. Y se diluyó con EA. Después de la filtración, el filtrado se extrajo con EA. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (5% EA en PE) para obtener 271-8 (6,8 g, 96,7%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de PPh3 (1,34 g, 5,12 mol) en CH2CL (5 mL) se añadió 271-8 (1,0 g, 2,56 mol) a -20 °C bajo N2. Después de agitar la mezcla durante 15 minutos, se agregó CBr4 (1,96 g, 5,89 mmol) en porciones mientras se mantenía la temperatura de reacción entre -25 y -20 °C bajo flujo de N2 . Después de completar la adición, la mezcla se agitó por debajo de -17 °C durante 20 minutos. La reacción se trató con gel de sílice. Después de la filtración, la almohadilla de gel de sílice se lavó con CH2Cl2. Los filtrados combinados se purificaron mediante gel de columna de sílice (EA en PE de 2% a 25%) para proporcionar 271-9 (a-isómero, 0,5 g, 43,4%) como un aceite incoloro.
Se cargó un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 0,25 L con 6-cloro-9H-purin-2-amina (5,5 g, 34,75 mmol) seguido de t-BuOH anhidro (45 mL) con agitación. A esta solución se le agregó terc-butóxido de potasio (3,89 g, 32,58 mmol) en porciones a TA bajo flujo de N2 . Después de 30 minutos, se añadió una solución de 271-9 (4,92 g, 10,86 mmol) en acetonitrilo anhidro (30 mL) durante un período de 5 minutos a 25 °C. La mezcla se calentó lentamente hasta 50 °C y se agitó durante 12 h. La mezcla se trató con NH4Cl sólido y agua, y a continuación se filtró a través de una almohadilla corta de Celite. La almohadilla se lavó con EA y los filtrados se neutralizaron con HCl 1,0 M acuoso. Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 anhidro. La fase orgánica se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante gel de columna de sílice (EA en PE de 2% a 20%) para proporcionar 271-10 (1,7 g, 28,9%) como una espuma blanca. 1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) 5 = 8,37 (s, 1H), 8,07-8,01 (m, 2H), 7,93-7,87 (m, 2H), 7,75­ 7,69 (m, 1 H), 7,65-7,53 (m, 3H), 7,41 (t, J=7,8 Hz, 2H), 7,13 (s, 2H), 6,37(d, J=19,3 Hz, 1H), 6,26-6,13 (m, 1H), 4,86­ 4,77 (m, 1 H), 4,76-4,68 (m, 2H), 1,3 (d, J=20 Hz, 3 H).
El compuesto 271-10 (700 mg, 1,29 mmol) se disolvió en HCl al 4% en MeOH (25 mL) a 25 °C. La mezcla se agitó a 50 °C durante 12 h. El disolvente se retiró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 271-11 (401 g, 59,2%) como un sólido blanco.
El compuesto 271-11 (250 mg, 0,477 mmol) se trató con NH37,0 M en MeOH (25 mL) a 25 °C y se agitó durante 18 h. El solvente se retiró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (sistema NH4HCO3 ) para proporcionar 271 (85 mg, 56,4%) como un sólido blanco. MS: m/z 315,7 [M+H]+, 630,5 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 156
COMPUESTO 265
Figure imgf000163_0001
A una solución helada de bis(POM)fosfato de trietilamonio (7 mmol, preparada a partir de 2,3 g de bis(POM)fosfato y 1 mL de Et3N) y 265-1 (1,36 g; 4,2 mmol) se añadieron diisopropiletilamina (3,6 mL; 21 mmol), BOP-Cl (2,68 g; 10,5 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (1,20 g; 10,5 mmol). La mezcla se agitó durante 2 h a 0 °C. La mezcla a continuación se diluyó con EtOAc, se lavó con ácido cítrico 1 M, NaHCO3 ac. sat. y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de gel de sílice con sistema solvente i-PrOH/CH2Cl2 (gradiente 2-12%) para proporcionar una mezcla Rp/Sp de 265-2 (2,13 g; 80%).
Una solución de 265-2 (2,13 g) en HCOOH (10 mL) al 80% ac. se agitó a 45 °C durante 8 h. La mezcla se enfrió y concentró para obtener un residuo. El residuo se co-evaporó con tolueno y MeOH que contenía pocas gotas de Et3N. El residuo evaporado se purificó en columna de gel de sílice con MeOH:CH2Cl2 (gradiente 3-10%) para proporcionar 265 como una espuma blanca (1,1 g; 56%). MS: m/z = 565 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 157
COMPUESTO 273
Figure imgf000164_0001
40-1 (1,78 g, 5 mmol) y el Compuesto A (3,22 g, 5,5 mmol; preparado según el procedimiento proporcionado en WO 2008/82601 A2) se co-evaporaron con piridina y a continuación se disolvieron en piridina (70 mL). Se agregó cloruro de pivaloilo (1,22 mL; 10 mmol) gota a gota a -15 °C y la mezcla se agitó a -15 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con CH2Cl2, se lavó con NhUCl 0,5 M ac. y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente de 4-10%) para obtener 273-2 (2,1 mg, 50%).
A una solución de 273-2 (0,51 g, 0,62 mmol) en CCl4 (6 mL) se agregó bencilamina (0,34 mL, 3,1 mmol) gota a gota, y la mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con ácido cítrico ac. 0,5 M, NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente de 4-10%) para obtener 273-3 (0,46 mg, 80%).
Una mezcla de 273-3 (130 g; 0,14 mmol) y TFA ac. Al 80% (1,5 mL) se agitó a TA durante 2 h. El solvente se evaporó y se co-evaporó con tolueno. El residuo se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:MeOH (gradiente B de 4-12%) para obtener 273 (32 mg, 37%). MS: m/z = 620 [M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 158
COMPUESTO 274
Figure imgf000164_0002
Se trató una solución de Z-Ala-OH (111,6 mg, 0,5 mmol) en THF anhidro (2 mL) con carbonildiimidazol (81 mg, 0,5 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h a 40 °C en atmósfera de Ar. Esta solución se agregó a una solución de 44 (200 mg, 0,33 mmol), Et3N (72 pL, 0,5 mmol) y DMAP (4 mg) en DMF (2 mL). La mezcla se agitó a TA durante 2,5 h. La reacción se inactivó mediante la adición de ácido cítrico 1M (2 mL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) y se diluyó con EA. La capa orgánica se separó, se lavó con bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna en 40% a 90% Ea-hexano para obtener 274-1 (202 g, 76%) como una espuma blanca.
A una solución de 274-1 (50 mg, 0,062 mmol) en EtOH anhidro (2 mL), se agregó Pd/C al 10% (5 mg), seguido por la adición de HCl 4N (31 pL, 0,124 mmol), y la mezcla se agitó en atmósfera de H2 durante 1 h. Después de completar la reacción, la mezcla se filtró a través de celite. La torta de catalizador se lavó con EtOH anhidro. Los lavados y el filtrado se combinaron y el solvente se retiró al vacío para proporcionar 274 (33,3 mg, 79,7%) como una espuma blancuzca. MS:m/z = 674,1 [M+H]+, 1347,2[2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 159
COMPUESTO 275
Figure imgf000165_0001
Se trató una solución de Z-Gly-OH (105 mg, 0,5 mmol) en THF anhidro (2 mL) con carbonildiimidazol (81 mg, 0,5 mmol). La mezcla se agitó durante 2 h a 40 °C, seguida de 30 minutos a 80 °C en una atmósfera de Ar. Esta solución se agregó a una solución de 44 (200 mg, 0,33 mmol), Et3N (72 pL, 0,5 mmol) y DMAP (4 mg) en DMF (2 mL). La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La reacción se inactivó mediante la adición de ácido cítrico 1M (2 mL) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua) y se diluyó con EA. La capa orgánica se separó, se lavó con bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna en 40% a 90% Eahexano para obtener 275-1 (208,5 g, 79,6%) como una espuma blanca.
A una solución de 275-1 (75 mg, 0,094 mmol) en EtOH anhidro (3 mL), se agregó Pd/C al 10% (10 mg), seguido por la adición de HCl 4N (47 pL, 0,19 mmol). La mezcla se agitó en atmósfera de H2 durante 3 h. Después de completar la reacción, la mezcla se filtró a través de celite. La torta de catalizador se lavó con EtOH anhidro. Los lavados y el filtrado se combinaron y el solvente se retiró al vacío para proporcionar 275 (44,3 mg, 71,5%) como una espuma blancuzca. MS:m/z = 658,05[M+H]+, 1317,05[M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 160
COMPUESTO 276
Figure imgf000165_0002
A una solución de 273-2 (223 mg, 0,27 mmol) en CCU (3 mL) se agregó clorhidrato de éster isopropílico de L-alanina (135 mg, 0,8 mmol) y EtsN gota a gota (0,22 mL, 1,6 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se diluyó a continuación con CH2Cl2, se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente de 3-10%) para obtener 276-1 (0,16 mg, 62%).
Una mezcla de 276-1 (100 mg, 0,11 mmol) y TFA ac. al 80% (3 mL) se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se evaporó y se co-evaporó con tolueno. El residuo se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:MeOH (gradiente B de 4-10%) para obtener 276 (31 mg, 46%). MS:m/z = 644 [M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 161
COMPUESTOS 277 y 306
Figure imgf000166_0001
A una solución de 40-1 (1,08 g, 3,0 mmol) en N,N-dimetilacetamida (15 mL) se añadió CsCÜ3 (1,22 g, 3,7 mmol), y la mezcla se agitó a TA durante 15 mins. Se agregó clorometilfosfato de dibencilo (1 g, 3,0 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche a 40 °C. Después de enfriarse, la mezcla se diluyó con terc-butiléter de metilo y se lavó con agua (3X) y salmuera, y se secó con Na2SÜ4. El residuo bruto evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:i-PrÜH (gradiente B de 3-10%) para obtener 277-1 (580 mg, 30%).
A una solución de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato de trietilamonio (1,8 mmol, preparada a partir de 0,60 g de bis(isopropiloxicarboniloximetil)fosfato y Et3N) en THF se le añadió 277-1 (0,58 g, 0,9 mmol). La mezcla se evaporó y se volvió anhidra mediante co-evaporación con piridina seguida de tolueno. El residuo evaporado se disolvió en THF anhidro (9 mL) y se enfrió en un baño de hielo. Se añadió diisopropiletilamina (0,94 mg, 5,4 eq.) seguida de BOP-Cl (0,69 g, 2,7 mmol) y 3-nitro-1,2,4-triazol (0,31 g, 2,7 mmol). La mezcla se agitó a 0-5 °C durante 2 h, se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera y se secó con Na2SÜ4. El residuo evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:i-PrÜH (gradiente B de 3-10%) para obtener 277-2 (0,77 mg, 89%).
A una solución de 277-2 (50 mg; 0,05 mmol) en EtÜH (2,5 mL) se añadió 10% Pd/C (8 mg), y la mezcla se agitó bajo H2 (presión atmosférica) durante 1 h. La mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, y el filtrado se evaporó. El residuo se trató con HCÜÜH ac. al 80% (2,5 mL) durante 3 h, a continuación se evaporó y purificó mediante RP-HPLC (A: TEAA ac. 50 mM, B: TEAA 50 mM en MeCN) para proporcionar 277 (22 mg, 44%) como un sólido blanco. MS:m/z = 713 [M+1]+.
A una solución de 277 (14 mg, 0,02 mmol) en EtÜH (0,3 mL) a 0 °C se agregó gota a gota EtÜNa 0,1 M en EtÜH (0,4 mL; 0,04 mmol). La mezcla se dejó calentar hasta TA y el sólido blanco resultante se centrifugó. El sobrenadante fue desechado. El sólido se trató con EtÜH (0,3 mL) y se centrifugó para proporcionar 306 (8 mg). MS:m/z = 713 [M+1 ]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 162
COMPUESTO 278
Figure imgf000167_0001
A una suspensión agitada de 278-1 (300 g, 1,86 mol) en acetona (4 L) se añadió H2SO4 conc. (56 mL) gota a gota a TA. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. La mezcla se neutralizó con NaHCO3 sólido y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida para proporcionar 278-2 (381 g, bruto) como un aceite incoloro, que se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución agitada de 278-2 (380 g, bruto, 1,88 mol) en DCM anhidro (2 L) se añadió imidazol (191 g, 2,82 mol) y TBSCl (564 g, 3,76 mol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 12 h y a continuación se filtró. La mezcla se concentró a sequedad, y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (2% EA en PE) para obtener 278-3 (569 g, 97% en 2 etapas) como un sólido blanco.
A una solución de 278-3 (150 g, 0,47 mol) en THF anhidro (2 L) se agregó DIBAL-H (710 mL, 0,71 mol, 1,0 M en tolueno) a -78 °C durante 3 h. La reacción se inactivó con NH4G sat. Ac. y a continuación se filtró. El filtrado se extrajo con EA y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (11% EA en PE) para obtener 278-4 (121 g, 80,5%) como un sólido blanco.
Se suspendió yoduro de isopropiltrifenilfosfonio (422,8 g, 0,98 mol) en THF anhidro (1 L) y se enfrió a 0 °C. Se agregó una solución de BuLi (2,5 M en THF, 391 mL, 0,98 mol) gota a gota durante 0,5 h. La solución roja profunda se mantuvo a 0 °C durante 0,5 h y 278-4 (207,5 g, 0,65 mol) en THF (1 L) se añadió lentamente durante 2 h. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se inactivó con NaHCO3, sat. ac. El precipitado sólido se eliminó por filtración. El filtrado se diluyó con EA y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a baja presión, y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (10% a 30% EA en PE) para obtener 278-5 (104,7 g, 47%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de 278-5 (4,9 g, 14,2 mmol) en MeCN anhidro (70 mL) se añadió IBX (7,9 mL, 28,4 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 2 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en columna (1% EA en PE) para obtener 278-6 (4,6 g, 94,8%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de 278-6 (2,0 g, 5,8 mmol) y difluorometilfenilsulfona (2,24 g, 11,7 mmol) en DMF anhidro (50 mL) se añadió LiHMDS (1,0 M en THF, 11,7 mL) gota a gota a -78 °C. Después de agitar a -78 °C durante 2 h, la reacción se inactivó con solución acuosa saturada de NH4CL La mezcla se agitó a continuación a 0°C durante 30 mins. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con EA. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0,25% EA en PE) para proporcionar 278-7 (1,1 g, 32,1%) como un aceite incoloro. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 5 = 8,01 -7,97 (m, 2H), 7,74-7,70 (m, 1H), 7,61 -7,57 (m, 2H), 5,80 (d, J=1,6 Hz, 1H), 4,26 (d, J=11,2 Hz, 1 H), 4,08 (s, 1H), 4,03 (d, J=11,2 Hz, 1H), 3,86 (s, 1H), 1,82 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,41 (d, J=12,4 Hz, 6H), 0,89 (s, 9H), 0,09 (d, J=9,6 Hz, 6H).
A una solución agitada de 278-7 (4,0 g, 7,5 mmol) en DMF (80 mL) y H2O (16 mL) se añadió Mg (3,6 g, 149,8 mmol) seguido de la adición de HOAc (13,5 g, 224,7 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 6 h. La mezcla se vertió en agua helada y se filtró. El filtrado se extrajo con EA. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a sequedad y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (0,2% EA en PE) para proporcionar 278-8 (1,12 g, 38%) como un aceite incoloro. 1H-RMN (CDCh, 400 MHz) 5 = 5,88-5,74 (m, 2H), 3,98-3,78 (m, 3H), 3,30 (s, 1H), 3,08 (s, 1 H), 1,83 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,35 (d, J=23,2 Hz, 6H), 0,90 (d, J=4,4 Hz, 9H), 0,08 (d, J=7,6 Hz, 6H).
A una solución de 278-8 (1,12 g, 2,84 mmol) se agregó una solución (6 mL, 1,0 M) de TBAF en THF, y la mezcla se agitó a TA durante 30 minutos. La mezcla se concentró a sequedad, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (3% EA en PE) para obtener 278-9 (332 g, 41,7%) como un sólido incoloro.
A una solución de 278-9 (415 mg, 1,5 mmol) en DCM anhidro (7,5 mL) se añadió Et3N (224 mg, 2,2 mmol) y BzCl (248 mg, 1,7 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. Después de completarse la reacción, la reacción fue inactivada con NaHCO3 ac. sat. Y se extrajo con DCM. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (1% EA en PE) para obtener 278-10 (441 mg, 77,4%) como un aceite incoloro.
A una solución agitada de 278-10 (440 g, 1,2 mmol) en DCM anhidro (10 mL), se burbujeó O3 a -78 °C hasta que la solución se volvió azul. La reacción a continuación se burbujeó con O2 hasta que la solución se volvió incolora. La capa orgánica se evaporó para proporcionar 278-11(430 mg, bruto), que se utilizó para la siguiente etapa sin purificación adicional.
278-11 (441 mg, 1,2 mmol) en TFA al 90% (6 mL) se agitó a TA durante 12 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 278-12 (404 g, 97%) como un aceite incoloro.
A una solución de 278-12 (404 mg, 1,3 mmol) en DCM anhidro (6 mL) se añadió Et3N (1,0 g, 10,2 mmol), DMAP (44 mg, 0,4 mmol y BzCl (1,0 mg, 7,6 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. La reacción, la reacción fue inactivada con NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (1% EA en PE) para obtener 278-13 (530 mg, 66,2%) como una espuma amarilla.
A una solución agitada de uracilo (190 mg, 1,7 mmol) en clorobenceno (2,6 mL) se añadió N, O-bis (trimetilsilil) acetamida (680 mg, 3,3 mmol). La mezcla se agitó a 130 °C durante 30 mins y a continuación se enfrió a TA. A una solución de 278-13 (536 g, 0,8 mmol) en clorobenceno se añadió SnCl4 (770 mg, 3,5 mmol) lentamente gota a gota. La mezcla se calentó a reflujo durante 30 mins. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% EA en PE) para obtener 278-14 (336 mg, 64,6%) como un sólido blanco.
278-14 (80 mg, 0,1 mmol) se trató con NH37,0 M en MeOH. La mezcla se agitó a T.A. durante 12 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 278 (36 g, 90,6%) como un sólido blanco. ESI-LCMS:m/z 309,09 [M+H]+; 331,07 [M+Na]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 163
COMPUESTO 279
Figure imgf000168_0001
A una mezcla de 51 (240 mg, 0,8 mmol) en fosfato de trimetilo (4 mL) a 0 °C se añadió POCl3 (0,18 mL, 1,6 mmol), y la mezcla se agitó a 0 °C durante 90 mins. Se añadieron clorhidrato de L-alanina isopropil éster (0,24 g, 1,4 mmol) y Et3N (0,6 mL, 4,3 mmol). La mezcla se calentó a TA y la agitación continuó durante 1,5 h. La reacción se inactivó con TEAA ac. 0,5 M, y la mezcla purificada por RP-HPLC (A: TEAA ac. 50 mM, B: TEAA 50 mM en MeCN) para proporcionar 279-1 (75 mg).
Se agitó una mezcla de 279-1 (52 mg, 0,1 mmol), DIPEA (0,11 mL, 0,6 mmol) y yoduro de isopropiloxicarboniloximetilo (77 mg, 0,3 mmol) en NMP (1,1 mL) a TA durante 1 h. La mezcla se diluyó con metiléter de terc-butilo, se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. El residuo evaporado se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:MeOH (gradiente B de 4-10%) para obtener 279 (12 mg, 20%). MS:m/z = 600 [M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 164
COMPUESTO 280
Figure imgf000169_0001
A una solución de 44 (200 mg, 0,33 mmol) en DCM anhidro (6 mL) se agregó DMAP (4 mg, 0,033 mmol), N-Cbz-O-bencil-L-serina (164 mg, 0,5 mmol) y EDC (100 mg, 0,52 mmol) a 0 a 5 °C (baño de hielo/agua). La mezcla se agitó durante 40 h a TA. La mezcla se enfrió usando baño de hielo/agua, se diluyó con DCM (10 mL), se lavó con NH4Cl, se secó con MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna en 50% a 90% Eahexano para obtener 280-1 (187 g, 62%) como una espuma blanca.
A una solución de 280-1 (68,7 mg, 0,075 mmol) en EtOH anhidro (2,5 mL), se añadió Pd/C al 10% (11,4 mg), seguido de la adición de HCl 4N (38 pL, 0,15 mmol), y la mezcla se agitó en atmósfera de H2 durante 3 h. Después de completar la reacción, la mezcla se filtró a través de celite. La torta de catalizador se lavó con EtOH anhidro. Los lavados y el filtrado se combinaron y el solvente se retiró al vacío para proporcionar 280 (40,1 mg, 77,6%) como una espuma blancuzca. MS:m/z = 690,1[M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 165
COMPUESTO 281
Figure imgf000169_0002
A una mezcla del Compuesto B (0,84 g, 2 mmol; preparado según Villard y col. Bioorg. Med. Chem. (2008) 16:7321 -7329) y Et3N (0,61 mL, 4,4 mmol) en THF (5 mL) a -78 °C se agregó gota a gota una solución de W,W-diisopropil diclorofosforamidita (184 pL, 1 mmol) en THF (7 mL). La mezcla se dejó calentar y se agitó a TA durante 2 h. Los sólidos se filtraron. El filtrado se concentró y purificó en una columna de gel de sílice con hexanos Et3N:EtOAc al 1% (gradiente B 1-20%) para proporcionar el Compuesto C (0,38 g).
A una mezcla de 40-1 (53 mg, 0,15 mmol) y Compuesto C (0,17 g, 0,17 mmol) en MeCN (1 mL) se añadió 5-etiltio-1 H-tetrazol (0,25 M en MeCN; 1,2 mL, 0,3 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se enfrió a -40 °C y se añadió una solución de MCPBA (77%, 42 mg, 0,19 mmol) en CH2Cl2 (0,5 mL). La mezcla se dejó calentar y se agitó a TA durante 30 minutos. La reacción se inactivó con Na2S2O3 ac. al 4% en NaHCO3 ac. al 4% (1 mL) y se diluyó con CH2Cl2. La capa orgánica se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera, y se secó con Na2SO4. La purificación del residuo evaporado en una columna de gel de sílice con hexanos:EtOAc (gradiente B 30-100%) produjo 281-1 (150 mg, 81%).
Una solución de 281-1 (120 mg, 0,1 mmol) en TFA ac. al 80% (5 mL) se mantuvo a TA durante 3 h. La mezcla se concentró y el residuo se co-evaporó con tolueno. El material bruto se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:MeOH (gradiente B de 4-10%) para obtener 281 (25 mg, 36%). MS:m/z = 691 [M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 166
COMPUESTO 283
Figure imgf000170_0001
A una mezcla de DCC (412 mg, 1,98 mmol) en DMF (1 mL), se añadieron sucesivamente DMAP (244 mg, 1,98 mmol) y Z-Val-OH (502 mg, 1,98 mmol), seguido de la adición de 44 (200 mg, 0,183 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró con un evaporador giratorio hasta 1V de su volumen original. Se agregó EA y la mezcla se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para proporcionar un residuo. El residuo se purificó por gel de sílice con 35-95% Ea:hexanos para obtener 283-1 (107 mg, 31,2%) como una espuma blanca.
A una solución de 283-1 (68 mg, 0,064 mmol) en EtOH anhidro (2,0 mL) se añadió Pd/C al 10% (12 mg), seguido de la adición de HCl 4N (67 pl, 0,25 mmol). La mezcla se agitó en atmósfera de H2 durante 1,5 h. La mezcla se filtró a través de celite y la torta de catalizador se lavó con EtOH anhidro. Los lavados y el filtrado se combinaron. El solvente se retiró al vacío para proporcionar 283 (41,6 mg, 82%) como una espuma amarilla clara. MS:m/z = 801,25 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 167
COMPUESTO 284
Figure imgf000170_0002
A una solución de 284-1 (40 mg, 0,144 mmol) en DMF (2 mL) se añadieron DCC (65 mg, 0,32 mmol), ácido isobutírico (28 pL, 0,32 mmol) y DMAP (18 g, 0,144 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró con un evaporador giratorio a V de su volumen original. La mezcla a continuación se disolvió en DMF/H2O al 25%, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando CH3CN y agua. La liofilización dio 284 (17,5 mg, 29%) como un polvo blanco. MS:m/z 416,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 168
COMPUESTO 285
Figure imgf000171_0001
A una solución de 284-1 (50 mg, 0,18 mmol) en DMF (1,5 mL) se añadieron DCC (93 mg, 0,45 mmol), ácido propanoico (33,4 pL, 0,45 mmol) y DMAP (22 g, 0,18 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y a continuación se concentró el filtrado con un evaporador giratorio a 1V de su volumen original. La mezcla a continuación se disolvió en DMF/H2O al 25%, se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) utilizando CH3CN y agua. La liofilización dio 285 (30,2 mg, 43%) como un polvo blanco. MS:m/z 390,1 [M+H]+, 388,05 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 169
COMPUESTO 286
Figure imgf000171_0002
A una solución de 75 (20 mg, 0,073 mmol) en DMF (0,7 mL) se añadieron DCC (37,6 mg, 0,183 mmol), ácido isobutírico (16 pL, 0,183 mmol) y DMAP (9 mg, 0,073 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró con un evaporador giratorio a V de su volumen original. A continuación, la mezcla se diluyó con DMF/H2O al 25% y se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) usando 25-95% CH3CN:agua. La liofilización dio 286 (12,1 mg, 38,7%) como un polvo blanco. MS:m/z 430,15 [M+H]+, 428,10 [M-H]-.
EJEMPLO DE REFERENCIA 170
COMPUESTO 287
Figure imgf000171_0003
A una solución de 75 (20 mg, 0,073 mmol) en DMF (0,7 mL) se añadieron DCC (37,6 mg, 0,183 mmol), ácido propanoico (13,5 pL, 0,183 mmol) y DMAP (9 g, 0,073 mmol). La mezcla se agitó a TA durante la noche. La mezcla se filtró y a continuación se concentró el filtrado con un evaporador giratorio a 1V de su volumen original. A continuación, la mezcla se diluyó con 25% DMF/H2O y se purificó en un HPLC de fase inversa (C18) usando 25-95% CH3CN:agua. La liofilización dio 287 (14,1 mg, 48%) como un polvo blanco. MS:m/z 402,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 171
COMPUESTO 288
Figure imgf000172_0001
A una mezcla del Compuesto D (0,9 g, 6,0 mmol; preparada según Qing y col., Org. Lett. (2008) 10:545-548) y POCI3 (0,55 mL, 6,0 mmol) en éter dietílico (9 mL) a -78 °C se añadió Et3N (0,84 mL, 6,0 mmol). La mezcla se dejó calentar a TA en 2 h. A continuación, la mezcla se filtró y los sólidos se lavaron con Et2O. Los filtrados combinados se evaporaron y el Compuesto E bruto se utilizó sin purificación.
A una solución de Compuesto E bruto y clorhidrato de éster isopropílico de L-alanina (1,0 g, 6,0 mmol) en CH2Cl2 (15 mL) a -20 °C se le añadió Et3N (1,67 mL, 1,2 mmol). Se dejó que la mezcla se calentara y se agitara a TA durante 2 h. La mezcla se diluyó con hexanos y se filtró a través de una almohadilla de sílice que se lavó a fondo con CH2Cl2:hexanos 1:1. Los filtrados combinados se concentraron y purificaron en una columna de sílice con hexanos:EtOAc (gradiente B 5-50%) para proporcionar el Compuesto F (0,78 g, 38% durante 2 etapas).
A una solución de 40-1 (0,36 g, 1,0 mmol) en THF (7,5 mL) a 0 °C se le añadió cloruro de isopropil magnesio (2 M en THF; 0,65 mL, 1,3 mmol) y la mezcla se agitó a a 0°C durante 30 min. Se agregó una solución del Compuesto F (0,78 g, 2,2 mmol) en THF (2 mL) y la mezcla se agitó a TA durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. ac. y a continuación se diluyó con EtOAc. Las dos capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua y se secó con Na2SO4. La purificación del residuo evaporado en una columna de gel de sílice con CH2Cl2:i-PrOH (gradiente B 3-10%) produjo 288-1 (0,50 g, 74%).
Una solución de 288-1 (0,28 g, 0,4 mmol) en TFA ac. al 80% (4 mL) se agitó a TA durante 4 h. La mezcla se evaporó y se co-evaporó con tolueno. El residuo se purificó en columna de sílice con CH2Cl2:MeOH (gradiente B de 4-10%) para obtener 294-2 (0,17 mg, 68%).
A una solución de 288-2 (85 g; 0,14 mmol) en EtOH (3 mL) se añadió HCl (4 N en dioxano; 35 pL, 0,14 mmol) y Pd/C al 10% (8 mg). La mezcla se agitó bajo H2 (presión atmosférica) durante 105 minutos. A continuación, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite. El residuo evaporado se trató con Et2O para proporcionar 288 (55 mg, 63%) como un sólido blanco. MS:m/z = 589 [M+1 ]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 172
COMPUESTO 289
Figure imgf000173_0001
Se calentó una mezcla de 289-1 (120 g, 0,26 mol) e IBX (109 g, 0,39 mol) en CH3CN (2,0 L) a reflujo y se agitó durante 12 h. Después de enfriarse a TA, la mezcla se filtró. El filtrado se concentró a baja presión y se utilizó directamente para la siguiente etapa.
289-2 (130 g, bruto, 0,26 mol) se co-evaporó con tolueno anhidro (3X) para eliminar H2O. Se agregó bromuro de vinilo magnesio (700 mL, 0,78 mol, 1,0 N en THF) gota a gota en una solución de 289-2 en THF (300 mL) durante 30 minutos a -78 °C. La mezcla se agitó durante aproximadamente 1 h a 25 °C y se verificó mediante traza de LCMS. Cuando se consumió el material de partida, la mezcla se vertió en una solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EA (3 x 300 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a baja presión para proporcionar el producto intermedio bruto sin purificación adicional.
A una solución de este intermedio bruto (170 g, 0,346 mol) en CH2Cl2 anhidro se le agregó TEA (105 g, 1,04 mol) y DMAP (84 g, 0,69 mol), y la mezcla se agitó a TA. Se añadió cloruro de benzoilo (146 g, 1,04 mol) lentamente a TA. Después de agitar durante 12 h a TA, la mezcla se diluyó con CH2Cl2 y a continuación se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3. La fase acuosa combinada se extrajo con DCM (100 mL). La fase orgánica combinada se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA=10:1 a 5:1) para obtener 289-3 (107 g, 52%).
Se agitó una mezcla de uracilo (tratado con tolueno dos veces) y NOBSA (81,4 g, 0,4 mol) en CH3CN (200 mL) a reflujo durante 1,5 h. Después de enfriar la mezcla a TA, se añadió 289-3 (59 g, 0,1 mol, tratado con tolueno) en CH3CN (100 mL). La mezcla se trató con TMSOTf (155 g, 0,7 mol) y a continuación se calentó hasta 60-70 °C durante 12 h. LCMS mostró que no quedó material de partida. La mezcla se vertió en una solución de NaHCO3 (sat.). El producto deseado se precipitó. Después de la filtración, se obtuvo 289-4 puro (40 g, 69%) como un sólido blanco. A una solución de 289-4 (50 g, 0,086 mol), se agregó K2CO3 (17,8 g, 0,13 mol) en DMF (500 mL) PMBCl (16 g, 0,1 mol) a 0 °C y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 150 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. Se obtuvo el crudo 289-5 (65 g) y se utilizó directamente para la siguiente etapa.
Se agitó una mezcla de 289-5 (65 g, 0,086 mol) y NaOMe (16,8 g, 0,3 mol) en MeOH:DCM (4:1,200 mL) a TA durante 2,5 h. LCMS mostró que no quedó material de partida. La reacción se inactivó con hielo seco. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (DCM:MeOH=50:1 a 20:1) para proporcionar 289-6 como una espuma amarilla (25 g, 75%).
A una solución de 289-6 (25,5 g, 0,065 mol) en DMF se añadió NaH (10,5 g, 0,26 mol) lentamente en el baño de hielo, y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se añadió BnBr (36,3 g, 0,21 mol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. TLC mostró que el material de partida desapareció. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA=5:1 a 3:1 a 1:1) para obtener 289-7 (20 g, 46%).
A una solución de 289-7 (20 g, 0,03 mol), NMMO (7 g, 0,06 mol) en THF:H2O (5:1, 100 mL) se añadió OsO4 (2,6 g, 0,01 mol) a 25 °C, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 24 h. La reacción se inactivó con solución saturada de Na2S2O3 y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo de producto de diol se utilizó directamente para la siguiente etapa.
A una solución de producto de diol (0,03 mol) en MeOH:H2O:THF (170 mL:30 mL:50 mL) se agregó NaIÜ4 (9,6 g, 0,045 mol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. Después de filtrar el sólido blanco, el filtrado se utilizó directamente para la siguiente etapa.
La solución anterior se trató con NaBH4 (1,8 g, 0,048 mol) a 0 °C y se agitó a 25 °C durante 30 minutos. La reacción se inactivó con solución de HCl (1 N) y se ajustó el pH a 7-8. La solución se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA=6:1 a 4:1) para obtener 289-8 (12 g, 61 % en 3 etapas).
A una solución de 289-8 (14 g, 21 mmol) y DMAP (5,1 g, 42 mmol) en DCM (50 mL) se añadió MsCl (3,1 g, 27 mmol) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 40 mins. LCMS muestra que no quedó material de partida. La reacción se inactivó con NaHCÜ3 ac. sat. y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La solución se lavó con solución de HCl (0,2N), se secó con Na2SÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA=10:1 a 5:1) para obtener el producto Oms (14 g, 90%).
El producto OMs (6,1 g, 8,21 mmol) se disolvió en TBAF (Alfa, 1 N en THF, 120 mL) y la mezcla se agitó a 70-80 °C durante 3 días. l Cm S muestra que el 50% del material de partida se convirtió al producto deseado. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EtOAc (100 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA=10:1 a 5:1) para obtener 289-9 (1,3 g, 24%).
A una solución de 289-9 (6,3 g, 9,45 mmol) en CAN:H2O (v:v = 3:1,52 mL) se agregó CAN (15,5 g, 28,3 mmol) y se agitó a TA durante la noche. La reacción se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 80 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (25% EA en PE) para obtener 289-10 (3,6 g, 71%) como un aceite amarillo.
A una solución de 289-10 (566 mg, 1,04 mmol), DMAP (253 mg, 2,07 mmol) y TEA (209 mg, 2,07 mmol) en MeCN anhidro (6 mL) se añadió TPSCl (627 mg, 2,07 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se trató con NH3^H2O (10 mL) y se agitó a TA durante la noche. TLC mostró que la reacción se completó. La solución se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH=50:1 a 20:1) para obtener 289-11 (300 mg, 49%) como un sólido blanco.
A una solución de 289-11 (200 mg, 0,37 mmol) en DCM anhidro (0,5 mL) se añadió BCh (2,5 mL, 1 N en DCM) a -70 °C y la mezcla se agitó durante 2 h a -70 °C. TLC mostró que no quedaban materiales. La reacción se inactivó con MeOH a -70 °C y se concentró a baja presión directamente por debajo de 40 °C. El residuo se disolvió en H2O y se lavó con EtOAc durante 3 veces. La fase acuosa se liofilizó para proporcionar 289 (91 mg, 89%) como un sólido blanco. ESI-LCMS:m/z 276,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 173
COMPUESTO 290
A una solución agitada de 290-1 (8,2 mg, 15,3 mmol) en CH3CN anhidro (150 mL), se añadió IBX (4,7 mg, 16,8 mmol) a 20 °C bajo N2. La suspensión se calentó a 90 °C~100 °C y se agitó a esta temperatura durante 1 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo, 290-2, (8,2 g, bruto) se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 290-2 (8,2 g, 15,4 mmol) en 1,4-dioxano (150 mL) se le añadió NaOH ac. (15,4 mL, 2 M, 30,8 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 10 h. La solución se neutralizó con AcOH a pH=7, seguido de la adición de EtOH (50 mL) y NaBH4 (5,8 g, 154,3 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 1 h. La reacción se inactivó con agua (20 mL), se extrajo con EA (2 x 40 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con MgSO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 290-3 (5,5 g, 62,92%) como un sólido blanco.
290-3 (480 mg, 0,8 mmol) se co-evaporó con tolueno (2x). El residuo se disolvió en DCM anhidro (5 mL) y piridina (671 mg, 85 mmol). Se añadió Tf2O (481 mg, 187 mmol) gota a gota a 0 °C durante 10 minutos. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 40 min. El residuo se purificó por cromatografía en columna (20% EA en PE) para obtener 290-4 (602 g, 86,1%) como una espuma marrón.
A una solución de 290-4 (602,0 mg, 0,72 mmol) en DMF anhidro (8 mL), se añadió NaH (34,8 mg, 0,87 mmol) a 0 °C bajo atmósfera de N2. La reacción se agitó a 20 °C durante 1 h y a continuación se añadió NaN3 (1,59 g, 2,5 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2 . La mezcla se agitó a 20 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con agua a la misma temperatura y se extrajo con EA (2 x 20 mL). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo, 290-5, (431 mg, bruto) se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 290-5 (431 mg, bruto) en 1,4-dioxano (14 mL) se añadió NaOH ac. (114,4 mg, 2 M, 2,9 mmol) a 18 °C. La mezcla se agitó a la misma temperatura durante 3 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 290-6 (406,0 g, 47,9%) como una espuma blanca.
A una solución de 290-6 (406,0 g, 0,68 mmol) en DMF anhidro (8 mL), se añadió TBSCl (198,7 mg, 1,3 mmol) e imidazol (119,7 g, 1,8 mmol) a 30 °C en atmósfera de N2 . La solución se agitó a esta temperatura durante 3 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 290-7 (405,0 g, 65,28%) como un sólido blanco.
A una solución de 290-7 (405,0 mg, 0,57 mmol) en CH3CN anhidro (6 mL) se añadió cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1-sulfonilo (343,3 mg, 1,13 mmol), DMAP (138,5 mg, 1,1 mmol) y TEA (114,7 mg, 1,1 mmol) a 30 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 9 h. Se añadió NH3^H2O (4 mL) y la mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 290-8 (401,0 g, bruto) como una espuma amarilla.
290-8 (380,0 mg, 0,54 mmol) se disolvió en HCOOH al 80% (25 mL) y la mezcla se agitó a 30 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (10% MeOH en DCM) para obtener 290 (144,0 mg, 83,93%) como una espuma blanca. ESI-MS:m/z 319,1 [M+H]+; 637,2 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 174
COMPUESTO 291
Figure imgf000176_0001
A una solución de 291-1 (30 g, 122,85 mmol) y 1,1-dimetoxiciclopentano (86 g, 660,93 mmol) en DCE (200 mL) se le agregó T s O H ^ O (2,34 g, 12,29 mmol) en una porción a TA. La mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó durante 14 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a TA y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1-10% MeOH en DCM) para obtener 291-2 (25 g, 65,6%) como un sólido blanco.
A una solución de 291-2 (20 g, 64,45 mmol) en CH3CN anhidro (200 mL), se añadió IBX (19,85 mL, 70,9 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 18 h y a continuación se enfrió a 0 °C. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar 291-3 bruto (20 g, 100%) como un sólido amarillo.
A una solución de 291-3 (20 g, 64,87 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) se añadieron HCHO al 37% (20 mL) y solución acuosa de NaOH 2,0 M (40 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se neutralizó con AcOH a pH = 7. La solución se trató con NaBH4 (4,91 g, 129,74 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1,0 h y la reacción se inactivó con solución acuosa saturada de NH4CL La mezcla se extrajo con EA (3 x 200 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1 -3% de MeOH en DCM) para obtener 291-4 (9 g, 40,8%) como un sólido blanco. A una solución enfriada con hielo de 291-4 (4,5 g, 13,22 mmol) en DCM anhidro (50 mL), se añadió piridina (10,46 mg, 132,20 mmol) y Tf2O (8,21 mg , 29,08 mmol) gota a gota a -30 °C. La mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 h. La reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en columna de gel de sílice (PE:PA = 5:1) para obtener 291-5 (5 g, 62,57%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 291-5 (5 g, 8,27 mmol) en DMF anhidro (25 mL), se añadió NaH (396,96 mg, 9,92 mmol) a 0 °C bajo N2. La solución se agitó a TA durante 2 h. TLC mostró que la reacción se completó. La solución de 291-6 se utilizó en la siguiente etapa sin ningún preparativo adicional.
A una solución agitada de 291-6 (3,75 g, 8,25 mmol) se añadió NaN3 (1,5g, 2,50 g, 38,46 mmol) a 0 °C en atmósfera de N2. La solución se agitó a 30 °C durante 2 h. La solución se inactivó con agua y se extrajo con EA (3 x 60 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo, 291-7 se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 291-7 (2,87 g, 8,25 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (30 mL), se añadió NaOH (8,25 mL, 16,50 mmol, 2,0 M en agua) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se diluyó con EA. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en la columna de gel de sílice (PE:EA=10:1 a 2:1) para proporcionar 291-8 (2 g, 66,4%) como una espuma blanca. 1H-RMN (DMSO, 400 MHz), 5 = 9,02 (s, 1H), 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,75-5,77 (m, 1H), 5,57 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,13-5,16 (m, 1H), 4,90 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,79-3,85 (m, 2H), 5,51-5,56 (m, 2H), 3,06-3,09 (m, 1H), 2,05-2,09 (m, 2H), 1,65-1,75 (m, 6H).
291-8 (2 g, 5,47 mmol) se disolvió en solución acuosa de HCOOH al 80% (20 mL), y la mezcla se calentó a 60 °C durante 2 h. La mezcla se evaporó a baja presión. El residuo se disolvió en MeOH y el pH se ajustó a 7~8 con NH3^H2O. La mezcla se agitó durante 10 mins, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (DCM:MeOH = 20:1) para obtener 291-9 (1,4 g, 85,5%) como un sólido blanco.
A una solución de 291-9 (1,00 g, 3,34 mmol) en DMF (5 mL) se añadió carbonato de difenilo (157,49 mg, 735,20 gmol) y NaHCO3 (28,06 mg, 0,334 mmol) a 120 °C. La mezcla se agitó durante 16 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a TA y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH=15:1 a 10:1) para proporcionar 291-10 (600 mg, 63,9%) como un sólido amarillo. 1H-RMN (DMSO, 400 MHz), 5 = 8,49 (s, 1H), 7,83 (d, J= 7,2 Hz, 4H), 6,46 (s, 1H), 6,31 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,84 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,43 (s, 1H), 3,53 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,43 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,12 (d, J = 11,2 Hz, 1H).
A una solución de 291-10 (2 g, 7,11 mmol) y AgNO3 (1,81 g, 10,67 mmol) en Py (20 mL) se le agregó DMTrCl (3,61 g, 10,67 mmol) en una porción a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se concentró a baja presión y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH = 50:1) para proporcionar 291-11 (3 g, 72,3%) como un sólido blanco.
A una solución de 291-11 (1,5 g, 2,57 mmol) en EtOH (5 mL), se añadió NaOH (5 mL, 2,0 N) en una porción a TA. La mezcla se agitó a TA durante 0,5 h. TLC mostró que la reacción se completó. La fase acuosa se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 291-12 (1,50 g, 97%) como un sólido amarillo.
A una solución de 291-12 (1,50 g, 2,49 mmol) en Py (6 mL) se añadió AC2O (3 mL) en una porción a TA. La mezcla se agitó a TA durante 12 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se concentró a sequedad y el residuo se disolvió en agua. La fase acuosa se extrajo con EA (3 x 60 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera sat., se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA=1:1) para proporcionar 291-13 (1,5 g, 87,8%) como un sólido blanco. 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz), 5 = 8,10 (s, 1H), 7,29-7,34 (m, 10H), 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 4H), 6,36 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,44 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,80 (s, 6H), 3,58 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,44 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,29 (s, 2H), 2,10 (s, 3H), 1,82 (s, 3H).
A una solución de 291-13 (500 mg, 729,2 mmol) en MeCN (10 mL) se añadió DMAP (178,17 mg, 1,46 mmol) y TPSCl (430,01 mg, 1,46 mmol) en una porción a TA. La mezcla se agitó a TA durante 3 h. Se añadió NH3/THF (20 mL, saturado) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera sat., se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH= 50:1) y a continuación se purificó mediante pre-HPLC(CH3CN/H2O) para proporcionar 291-14 (260 mg, 49,5%) como un sólido amarillo. 1H-Rm N (MeOD, 400 MHz), 5 = 7,60 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,28-7,36 (m, 7H), 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 4H), 6,44 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,56-5,69 (m, 4H), 3,80 (s, 6H), 3,54 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,39-3,46 (m, 4H), 2,17 (s, 3H), 1,83 (s, 3H).
A una solución de 291-14 (440 mg, 642,6 gmol) en NH3:MeOH (5 mL, 7N) se agitó a TA durante 16 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se concentró a presión reducida a 40 °C. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM:MeOH=100:1-20:1) para proporcionar 291-15 (290 mg, 75,13%) como un sólido blanco. 1H-RMN (MeOD, 400 MHz), 5 = 7,62 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,23-7,33 (m, 7H), 6,86 (d, J = 8,4 Hz, 4H), 6,31 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,34 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 4,27 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,78 (s, 6H), 3,69 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,46 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,41 (s, 2H).
Se agitó una solución de 291-15 (150 mg, 249,74 gmol) en CH3COOH al 80% (5 mL) a 60 °C durante 2 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se trató con MeOH y se concentró a presión reducida a 60 °C. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (MeOH 1-10% en DCM) para proporcionar 291 (65 mg, 78,5%) como un sólido blanco. ESI-MS:m/z 299,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 175
COMPUESTO 293
Figure imgf000178_0001
A una solución agitada de 293-1 (12 g, 45,42 mmol) en piridina (100 mL), se añadió DMTrCl (16,16 mg, 47,69 mmol) en porciones a 0 °C durante 30 mins bajo N2. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 16 h. LCMS y TLC (DCM:MeOH=20:1) mostraron que se consumió el material de partida. La reacción se inactivó con MeOH (10 mL) y a continuación se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (malla 100-200 de gel de sílice, PE:EA=1:1) para obtener DMTr-293-1 (20 g, 77,7%) como un sólido blanco.
A una solución de DMTr-293-1 (30,00 g, 52,95 mmol) y TBSCl (19,95 g, 132,38 mmol, 2,50 eq.) en DCM (200 mL) se le agregó imidazol (9,00 g, 132,20 mmol, 2,50 eq.) en porciones a 0 °C. La temperatura se mantuvo por debajo de 5 °C. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 16 h. TLC (PE:EA=1:1) mostró que el material de partida se consumió. La reacción se inactivó con hielo y se extrajo con DCM (2 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía para obtener el producto puro (30,00 g, 83,2%) como un sólido blanco.
El producto de la etapa anterior (30,00 g, 44,07 mmol) se disolvió en AcOH acuoso al 80% (300 mL) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. TLC (DCM:MeOH=10:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. (100 mL) y a continuación se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 50:1 ~ 20:1) para obtener 293-2 (15,5 g, 92,9%) como un sólido blanco.
A una solución de 293-2 (8,00 g, 21,14 mmol) en MeCN (80 mL), se añadió IBX (6,51 g, 23,25 mmol, 1,10 eq.) a 25 °C bajo N2. La mezcla se calentó a 81 °C durante 1 h. LCMS mostró que se consumió el material de partida. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo aldehído (7,50 g, 19,92 mmol) se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución del aldehído de la etapa anterior (7,5 g, 19,9 mmol) y formaldehído ac. (7,85 mL) en dioxano (80 mL) se añadió NaOH 2,0 N ac. (19,5 mL) en una porción a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a 0 °C y a continuación se neutralizó con AcOH a pH = 7. La solución se trató con NaBH4 (4,52 g, 119,52 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos y la reacción se inactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (100 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 100 mL). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, DCM:MeOH=20:1 a 10:1) para obtener 293-3 (4,0 g, 49,2%) como un sólido blanco.
A una solución de 293-3 (4,00 g, 9,79 mmol) en piridina (20 mL) se agregó una solución de MMTrCl (3,48 g, 10,28 mmol) en DCM (20 mL) gota a gota a 0 °C durante un período de 15 minutos. La temperatura se mantuvo por debajo de 5 °C. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó a 25 °C durante 16 h. TLC (DCM:MeOH=10:1) mostró que el material de partida se consumió. La reacción se inactivó mediante MeOH (5 mL) y se concentró al vacío. El residuo se purificó en una columna (DCM:MeOH = 50:1) para obtener un intermedio puro (5,00 g, 71,85%) como un sólido blanco.
A una solución del intermedio anterior (5,00 g, 7,03 mmol) y AgNO3 (2,39 g, 14,06 mmol, 2,00 eq.) en piridina (40 mL) se añadió gota a gota TBDPSCl (2,90 g, 10,55 mmol) a 0 °C durante un período de 10 minutos. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 16 h. TLC (PE:EA=1:1) mostró que el material de partida se consumió. La reacción se inactivó con hielo y se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (2 x 50 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo (5,00 g, bruto) se disolvió en AcOH ac. al 80% (50 mL) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó con MeOH (5 mL) y a continuación se extrajo con DCM (3 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgSÜ4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE:EA = 5:1 a 2:1) para obtener 293-4 (2,50 g, 55%) como un sólido amarillo.
A una solución de 293-4 (400 mg, 618,36 pmol) en DCM (4 mL), se añadió DMP (393,4 g, 927,54 pmol, 1,50 eq.) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a 0 °C y se inactivó con solución acuosa saturada de Na2Sü3 (5 mL) y NaHCÜ3 ac. (5 mL). La fase acuosa se extrajo con d Cm (3 x 10 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=3:1) para obtener 293-5 (300,00 g, 75,24%) como un sólido blanco.
A una solución de 293-5 (500 mg, 775,37 pmol) en piridina (5 mL), se añadió clorhidrato de hidroxilamina (215,5 g, 3,10 pmol, 4,00 eq.) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos, y a continuación se calentó a 25 °C y se agitó durante 4 h. LCMS mostró que la reacción se completó. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=2:1) para obtener oxima (450 mg, 87,95% de rendimiento) como un sólido amarillo claro.
A una solución de esta oxima (450,00 mg, 681,95 pmol) en DCM (5 mL) se agregó TEA (208,0 mg, 2,06 mmol) y MsCl (156,0 mg, 1,36 mmol) en una porción a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 4 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó mediante NaHCÜ3 sat. Ac. (5 mL) y las fases acuosas se extrajeron con DCM (2 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó en prep-TLC (PE:EA = 2:1) para obtener 293-6 bruto (400 mg, 91,4%) como un sólido amarillo.
A una solución de 293-6 (450,0 mg, 701,10 pmol), DMAP (171,3 mg, 1,40 mmol) y TEA (212,8 mg, 2,10 mmol) en MeCN (5 mL) se agregó cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1 -sulfonilo (424,7 mg, 1,40 mmol) en una porción a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó con NaHCÜ3 ac. sat. (5 mL) y se extrajo con EA (2 x 15 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo (580,00 mg, 638,59 mmol) se disolvió en MeCN (5 mL). La solución se trató con NH3 ^H2Ü (10 mL) en una porción a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C 16 h. TLC (PE:EA=1:1) mostró que la reacción se completó. La mezcla se extrajo con EA (3 x 10 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, DCM:MeÜH=40:1 a 25:1) para obtener 293-7 (350,00 g, 85,5%) como un sólido amarillo claro.
A una solución de 293-7 (350,0 mg, 546,13 pmol) en MeÜH (10 mL) se agregó NH4F (405 mg, 10,9 mmol) en una porción a 25 °C. La mezcla se calentó a 65 °C y se agitó durante 2 h. TLC (EAMeÜH=8:1) mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida a 40 °C. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, EA:MeÜH=20:1 a 10:1) para proporcionar 293 como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSÜ-ofe), 5 = 7,59 (d, J=7,28 Hz, 1 H), 7,49 (s a., 2 H), 7,25 (s a., 1 H), 6,29 (s a., 1 H), 6,01 (s a., 1 H), 5,82 (d, J=7,53 Hz, 1 H), 4,60 (s a., 1 H), 3,88 (s a., 2 H); 19F RMN (376 MHz, DMSÜ-ofe) d ppm -116,61 (s a., 1 F) -115,98 (s a., 1 F).
EJEMPLO DE REFERENCIA 176
COMPUESTO 294
Figure imgf000179_0001
A una solución de K2CÜ3 (967,5 mg, 7,0 mmol) y TsN3 (552,2 mg, 2,80 mmol) en MeCN (10 mL) se agregó 1-dimetoxifosforilpropan-2-ona (465,1 mg, 2,80 mmol) en una porción a 25 °C bajo N2. Se agitó la mezcla a 25 °C durante 2 H. Se agregó una solución de 293-5 (900,0 mg, 1,40 mmol, 1,00 eq.) en MeÜH (10 mL) en una porción a 25 °C en N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó con agua (10 mL) y se extrajo con EA (2 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=5:1 a 2:1) para obtener 294-1 (800 mg, 98,2%) como un sólido blanco.
A una solución de 294-1 (500 mg, 780,20 pmol), DMAP (190,6 mg, 1,56 mmol) y TEA (236,9 mg, 2,34 mmol) en MeCN (5 mL), se agregó cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1-sulfonilo (472,8 mg, 1,56 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos, a continuación se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 h. TLC (PE:EA=2:1) mostró que la reacción se completó. La reacción se inactivó con agua (5 mL) y se extrajo con EA (2 x 10 mL). La fase orgánica combinada se lavó con HCl (1 mL, 0,5 M), se secó con Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo (650,0 mg, 91,83%) se obtuvo como una goma amarilla clara, que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución del residuo de la etapa anterior (650 mg, 716,4 pmol) en MeCN (5 mL) se agregó NH3 ^H2O (5 mL) en una porción a 25 °C, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. TLC (DCM:MeOH=20:1) mostró que la reacción se completó. La mezcla se extrajo con EA (2 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=1:1) para obtener 294-2 (350 mg, 76,35%) como un sólido blancuzco.
Se calentó una mezcla de 294-2 (350,0 mg, 546,98 pmol) y NH4F (405,0 mg, 10,93 mmol) en MeÜH (5 mL) a 65 °C y se agitó durante 2 h. LCMS y TLC (EA:MeOH=10:1) mostraron que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a 25 °C y se filtró, y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (malla 300-400 gel de sílice, EA:MeOH=20:1 a 10:1) para proporcionar 294 (102 mg, 64,93%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, METANOL-04), 5 = 7,73 (d, iJ=7,28 Hz, 1 H), 6,31 - 6,42 (m, 1 H), 5,95 (d, J=7,53 Hz, 1 H), 4,47 (t, J=13,55 Hz, 1 H), 3,92 (d, J=12,55 Hz, 1 H), 3,73 - 3,80 (m, 1 H) 3,25 (s, 1 H); 19F RMN (376 MHz, METANOL-04), 5 = -115,52 - -112,60 (m, 1 F).
EJEMPLO DE REFERENCIA 177
COMPUESTO 295
Figure imgf000180_0001
A una solución de 295-1 (20 mg, 66,8 mmol) en piridina anhidra (180 mL), se añadió BzCl (30,9 mg, 220,3 mmol) a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25°C durante 12 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con NaHCO3, sat. ac. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 295-2 (34,6 g, 90%) como un sólido blanco.
295-2 (33 g, 57,3 mmol) se disolvió en CH3COOH al 90% (360 mL) y se calentó a 115 °C. La mezcla se agitó a 115 °C durante 12 h. El solvente se retiró y el residuo se diluyó con EA. La mezcla se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para obtener 295-3 (26 g, bruto) como un sólido blanco.
295-3 (21 g, 44,5 mmol) se disolvió en una solución (400 mL, 10 M) de NH3 en MeOH. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La mezcla se concentró para proporcionar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH al 5% en DCM) para proporcionar 295-4 (9,4 g, 80,4%) como un sólido blanco. 1H-RMN (CD3OD, 400MHz) 5 = 7,90-7,80 (m, 1H), 6,18-6,09 (m, 1H), 5,71 (d, J=8,2 Hz, 1H), 4,26 (dt, J=8,2, 12,0 Hz, 1H), 3,98-3,84 (m, 2H), 3,76 (dd, J =2,8, 12,5 Hz, 1 H), 3,33 (s, 1H).
A una solución de 295-4 (9 g, 34,1 mmol) en piridina anhidra (60 mL), se añadió TBSCl (7,7 g, 51,1 mmol) a 25 °C bajo N2. La solución se agitó a 50 °C durante 12 h. La mezcla se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se disolvió en EA. La mezcla se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se secó con MgSO4 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (20% de EA en PE) para obtener 295-5 (11 g, 85,5%) como un sólido blanco.
A una solución de 295-5 (10,2 g, 27 mmol) en CH2Cl2 (100 mL) se añadió AgNO3 (9,2 g, 53,9 mmol), colidina (13,1 g, 107,8 mmol) y MMTrCl (10 g, 32,3 mmol) a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con MeOH, y la mezcla se filtró con celite. El filtrado se diluyó con CH2Cl2 y H2O. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (25% EA en PE) para obtener 295-6 (15 g, 85,6%) como un sólido blanco.
295-6 (10,5 g, 16,1 mmol) se disolvió en una solución de TBAF en THF (1M, 60 mL) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 4 h. La mezcla se extrajo con EA y la capa combinada se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró para obtener un producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 295-7 (8,1 g, 93,6%) como una espuma blanca.
A una solución de 295-7 (17,0 g, 31,7 mmol) en CH3CN (150 mL) se añadió IBX (9,7 g, 34,9 mmol) a 25 °C. La mezcla se calentó a 100 °C y la mezcla se agitó a 100 °C durante 1 h. La mezcla se enfrió a 25 °C. La mezcla se filtró y la torta del filtro se lavó con MeCN. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un residuo (16 g, bruto) como un sólido amarillo. El residuo (16 g, bruto) se disolvió en 1,4-dioxano (150 mL) y la solución se trató con formaldehído ac. al 37% (18,5 g, 227,5 mmol) y NaOH ac. (2 M, 30 mL) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. Se añadieron EtOH (30 mL) y NaBH4 (10 g, 265,7 mmol) a 0 °C. Después de agitar durante 1 h a 25 °C, la reacción se inactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl a 0 °C. La mezcla se diluyó con EA. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con EA. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó con Na2SO4 anhidro. La capa orgánica se concentró al vacío para proporcionar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (2% MeOH en DCM) para proporcionar 295-8 (8,1 g, 53,1%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400MHz, DMSO-ds) 5 =11,52 (s, 1H), 7,57 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7,46 - 7,22 (m, 13H), 6,90 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,30 (t, J =8,0 Hz, 1H), 5,61 (d, J =8,2 Hz, 1H), 5,06 (t, J =5,5 Hz, 1H), 4,92 - 4,86 (m, 1H), 4,61 - 4,51 (m, 1H), 3,83 (dd, J =5,1, 12,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H).
A una solución enfriada con hielo de 295-8 (2,5 g, 4,4 mmol) en CH2CL anhidro (35 mL) se le agregó piridina (3,5 mg, 44,1 mmol) y Tf2O (3,7 g, 13,2 mmol) gota a gota. La mezcla se agitó a 0°C durante 40 min. La reacción se inactivó con agua helada y se agitó durante 10 min. La mezcla se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4. La capa orgánica se secó, y se concentró para obtener un residuo, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (15% EtOAc en PE) para obtener 295-9 (2,6 g, 71%) como una espuma amarilla.
A una solución agitada de 295-9 (1,8 g, 2,2 mmol) en DMF anhidro (25 mL), se añadió NaH (107 mg, 2,7 mmol) a 0 °C bajo N2. La solución se agitó a 25 °C durante 1 h. TLC (PE: EA=1:1) mostró que la reacción estaba completa. A la solución se añadió Nal (3,1 g, 20,6 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 3 h. TLC (PE: EA=1:1) mostró que la reacción estaba completa. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EA. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a baja presión para obtener 295-10 (1,4 g, bruto) como un sólido amarillo.
295-10 (1,4 g, bruto) se disolvió en 1,4-dioxano (25 mL) y la mezcla se trató con NaOH (2 M, 2,7 mL) a 0 °C. La solución se agitó durante 4 h a 25 °C. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. Ac. y se extrajo con EA. La capa orgánica se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para obtener un producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (40% EA en PE) para obtener 295-11 (1,4 g, 94,9%).
A una solución de 295-11(1,45 g, 2,1 mmol) en EtOH (10 mL) se añadió Et3N (434 mg, 4,3 mmol) y Pd/C (101 mg, 88,7 gmol). La mezcla se agitó en H2 (15 psi) durante 12 h a 25 °C. La suspensión se filtró, y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (1% de MeOH en DCM) para obtener 295-12 (1,2 g, 97,6%) como un sólido amarillo.
A una solución de 295-12 (930 mg, 1,7 mmol) en DMF anhidro (10 mL), se añadió imidazol (287 mg, 4,2 mmol) y TBSCl (636 mg, 4,2 mmol) a 25 °C en N2. La solución se agitó a 25 °C durante 5 h. La mezcla se concentró a sequedad a presión reducida y el residuo se disolvió en EA. La mezcla se lavó con NH4CL ac. sat. y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y se filtró. La solución se concentró a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (15% EA en PE) para obtener 295-13 (968 mg, 86,2%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 295-13 (568 mg, 854,4 gmol) en CH3CN anhidro (8 mL) se añadió DMAP (209 mg, 1,7 mmol), TPSCl (504 mg, 1,7 mmol) y TEA (173 mg, 1,7 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. NH3^H2O (10 mL) fue añadido, y la mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla se extrajo con EA y se lavó con NH4Cl ac. sat y salmuera. La fase orgánica se secó con Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró para proporcionar un residuo, que se purificó en una columna de gel de sílice (3% MeOH en DCM) para proporcionar 295-14 (480 mg, 84,6%) como una espuma amarilla. 1H-RMN (400MHz, CDCh) 5 = 7,65 - 7,40 (m, 13H), 6,97 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,44 (dd, J =6,4, 9,5 Hz, 1H), 5,71 (d, J =7,3 Hz, 1H), 4,76 (dd, J =9,0, 14,4 Hz, 1H), 4,29 (c, J =7,1 Hz, 1H), 3,92 - 3,92 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,60 (d, J =11,2 Hz, 1H), 3,44 (d, J =11,0 Hz, 1H), 1,66 - 1,55 (m, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,08 (s, 3H), 0,00 (s, 3H).
295-14 (501 mg, 753,2 pmol) se disolvió en HCOOH al 80% (20 mL) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 4 h. El solvente se retiró a baja presión y el residuo se purificó en una columna de gel de sílice (6% MeOH en DCM) para proporcionar 295 (151 mg, 71,8%) como un sólido blanco. ESI-MS:m/z 278,11 [M+H]+,555,18 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 178
COMPUESTO 298
Figure imgf000182_0001
A una solución de 298-1 (120 g, 0,26 mol) en MeCN anhidro (2 mL) se añadió IBX (109 g, 0,39 mol). La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 18 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 298-2 (142 g) como un aceite marrón, que se utilizó sin purificación para la siguiente etapa.
A una solución de 298-2 (142 g) en THF anhidro (1,5 L) se agregó bromuro de vinilmagnesio (830 mL, 0,83 mol, 1 N) gota a gota a -78 °C, y la mezcla se agitó a -78 °C durante 2 h. La reacción se inactivó por NH4Cl sat. ac.(2 L) a 0 °C. El THF se retiró al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc. La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró para dar un aceite marrón claro.
Al aceite marrón claro en DCM anhidro (2,5 L) se le agregó DMAP (63,5 g, 0,52 mol), Et3N (79 g, 0,78 mol) y BzCl (110 g, 0,78 mol) a 0 °C, y la mezcla se agitó durante la noche a TA. La mezcla se diluyó con DCM (2 L) y se lavó con solución acuosa saturada NaHCO3 (3 L) y salmuera (1,5 L). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE:EA = 20:1 ~ 10:1) para obtener 298-3 (112,7 g, 72,3%) como un aceite amarillo.
Se calentó una mezcla en agitación de uracilo (36,25 g, 323,7 mmol) y N,O-bis(trimetilsilil) acetamida (131,69 g, 647,4 mmol) en MeCN anhidro (180 mL) a reflujo durante 2 h, a continuación se enfrió a TA. Una solución de 298-3 (95,9 g, 161,85 mmol) en MeCN anhidro (500 mL) fue añadida, seguido de tratamiento con SnCl4 (168,66 g, 647,4 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 2 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. ac. (3 L), y se extrajo con EtOAc (3 x 1 L). La fase orgánica se lavó con salmuera (500 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE:EA = 20:1 ~ 10:1) para obtener 298-4 (33 g, 35%) como un aceite amarillento.
298-4 (33 g, 56,65 mmol) fue disuelto en NH3:MeOH (800 mL, 7 N) y la mezcla se agitó a TA durante la noche. Se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó en una columna (1% MeOH en DCM) para obtener 298-5 (12,6 g, 82,4%) como una espuma amarillenta.
A una solución de 298-5 (2,57 g, 8,76 mmol) en DMF (20 mL) se añadió AgNO3 (8,93 g, 52,56 mmol), e imidazol (3,58 g, 52,56 mmol), a continuación se añadió TBSCl (5,28 g, 35,04 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. TLC mostró que la reacción se completó. El residuo se vertió en hielo:agua (w:w = 1:1) (30 mL). La fase acuosa se extrajo con EA (3 x 100 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (3 x 20 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (altura de la columna: 250 mm, diámetro: 100 mm, gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=3:1 a 2:1) para proporcionar 298-6 (3,68 g, 80,51%) como un sólido amarillo.
A una solución de 298-6 (3,48 g, 6,67 mmol) y AgNO3 (3,40 g, 20,01 mmol) en piridina (30 mL) se agregó (cloro(4-metoxifenil)metileno)dibenceno (4,12 g, 13,34 mmol) en una porción a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se diluyó con Ea y se filtró El filtrado se lavó con salmuera y se separó. La capa orgánica se concentró a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (altura de la columna: 250 mm, diámetro: 100 mm, gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=10:1 a 5:1) para proporcionar 298-7 (4,40 g, 83,07%) como una espuma amarilla.
A una solución de 298-7 (4,30 g, 5,41 mmol) en MeOH (100 mL) se agregó NH4F (801,55 mg, 21,64 mmol) en una porción a 25 °C. La mezcla se calentó a 68 °C y se agitó durante 4 h. La traza de LCMS mostró que la reacción se completó. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (altura de la columna: 250 mm, diámetro: 100 mm, gel de sílice de malla 100-200, DCM:MeOH:NH3-H2O=30:1:0,05 a 10:1:0,05) para proporcionar 298-8 (3,00 g, 98,04%) como un sólido blanco.
A una solución de 298-8 (3,00 g, 5,30 gmol) en DCM (30 mL), se añadió NaH (848 mg, 21,20 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0°C durante 30 min. Se agregó BnBr (3,63 g, 21,20 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó durante 16 h a 25 °C. TLC mostró que la reacción se completó. La mezcla se vertió en hielo:agua (w:w = 1:1) (30 mL). La fase acuosa se extrajo con EA (3 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (3 x 20 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (altura de la columna: 250 mm, diámetro: 100 mm, gel de sílice de malla 200-300, PE:EA=20:1 a 10:1) para proporcionar 298-9 (670 mg, 15,1%).
Se burbujeó ozono en una solución de 298-9 (500 mg, 598,10 gmol) en DCM (8 mL) y MeOH (8 mL) a -78 °C durante 20 minutos. Después de purgar el exceso de O3 mediante O2, se añadió NaBH4 (113,13 mg, 2,99 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 20 minutos. TLC mostró que el material de partida se consumió. El filtrado se concentró para obtener el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA=5:1) para obtener 298-10 (167,00 mg, 33,24%) como un sólido amarillo.
A una solución de 298-10 (216,70 mg, 257,99 gmol) y DMAP (63,04 mg, 515,98 gmol) en DCM (2 mL) se agregó MsCl (44,33 mg, 386,98 gmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h y a continuación se calentó hasta 25 °C y se agitó durante 1 h. LCMS mostró que la reacción se completó. El residuo se vertió en hieloagua (w:w = 1:1) (10 mL) y se extrajo con EA (3 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (3 x 10 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (altura de la columna: 250 mm, diámetro: 100 mm, gel de sílice de malla 100-200, PE:EA=10:1 a 5:1) para proporcionar un intermedio de mesilato (167,00 mg, 70,51%) como una espuma amarilla.
El intermedio mesilado (167 mg) se disolvió en TBAF:THF (10 mL, 1N) y la mezcla se calentó a reflujo durante 12 h. La mezcla se enfrió lentamente hasta 25 °C y se inactivó con solución sat. de NH4CL La solución se extrajo con EA. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en columna (EA:PE=5:1--2:1) para obtener 298-11 (80 mg, 43,8%).
298-11 (80,00 mg, 0,087 mmol) se disolvió en solución de AcOH al 80% (5 mL) y se agitó a 45 °C durante 1,0 h. La reacción se inactivó con Solución saturada de Na2HCO3 y se extrajo con EA (3 x 10 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2SO4 anhidro y se concentraron a sequedad. El residuo se purificó en una columna cromatográfica para obtener 298-12 (38 g, 60%) como un sólido de espuma blanca. ESI-MS:m/z 570,4 [M+H]+.
A una solución de 298-12 (113,8 mg, 0,2 mmol) en DCM (0,5 mL) se añadió BCh/DCM (1,0 N) (1 mL) a -78 °C, y la mezcla se agitó a -78 °C durante 30 mins. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró a sequedad a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC con tampón NH3^H2O para proporcionar 298 (26 mg, 44%) como un sólido blanco.
EJEMPLO DE REFERENCIA 179
COMPUESTO 302
Figure imgf000184_0001
A una mezcla de 302-1 (2,00 g, 3,5 mmol) en piridina (10 mL) y DCM (10 mL), se añadió BzCl (496 mg, 3,5 mmol) gota a gota a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos y a continuación se agitó a 25 °C durante 6,5 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. ac. (80 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (80 mL), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (30% EA en PE) para proporcionar 302-2 (1,28 mg, 54%) como un sólido blanco.
A una mezcla de 302-2 (680 mg, 1,0 mmol) en DMF (5 mL), se añadió imidazol (412 mg, 6,1 mmol), AgNO3 (514 mg, 3,0 mmol) y TBDPSCl (832 mg, 3,0 mmol) a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. (30 mL) y a continuación se extrajo con EA (2 x 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2 x 20 mL), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (25% EA en PE) para proporcionar 302-3 (750 mg, 82%) como un sólido blanco.
302-3 (660 g, 0,7 mmol) fue disuelto en NH3:MeOH (15 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 36 h en tubo sellado, y a continuación se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (30% EA en PE) para proporcionar 302-4 (430 mg, 73 %) como un sólido blanco. 1H-RMN (CDCh, 400MHz) 5 = 9,05 (s, 1H), 7,81-7,10 (m, 21 H), 6,81 (d, J=9,2 Hz, 2H), 6,42 (m, 1H), 6,20 (m, 1H), 4,13-4,07 (m, 2H), 3,78-3,60 (m, 5H), 2,55 (s, 1H), 0,90-0,74 (m, 9H).
A una mezcla de 302-4 (280 mg, 0,3 mmol) en DCM (3,5 mL), se añadió Dess-Martin (295 mg, 0,7 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 3,5 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 sat. ac. y Na2S2O3. sat. ac. (v:v=1:1,30 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 20 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 302-5 (260 mg, bruto) en forma de un sólido amarillo, que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución agitada de bromuro de metil-trifenil-fosfonio (359 mg, 1,0 mmol) en THF anhidro (1 mL) se le añadió KOBu-t (1 mL, 1,0 mmol, 1 M en THF) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Se agregó una solución de 302-5 (260 mg, 0,3 mmol) en THF anhidro (1 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. ac. (20 mL) y se extrajo con EA (30 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó para proporcionar un sólido blanco claro, que se purificó mediante cromatografía en columna (10% EA en PE) para proporcionar 302-6 (131 mg, 50 %) como un sólido amarillo. 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) 5 = 8,40 (s, 1H), 7,55-7,21 (m, 21 H), 7,10 (dd, J=1,8, 8,2 Hz, 1 H), 6,84 (d, J=8,8 Hz, 2H), 6,37 (dd, J=11,0, 17,4 Hz, 1H), 6,09 (dd, J=7,2, 8,9 Hz, 1H), 5,59-5,43 (m, 2H), 5,10-4,92 (m, 2H), 3,85-3,78 (s, 3H), 3,78-3,73 (m, 1H), 3,56 (d, J=11,5 Hz, 1H), 0,99 - 0,77 (s, 9H).
A una solución de 302-6 (1,50 g, 1,9 mmol) en THF (5 mL), se añadió 9-BBN (0,5 M, 22,5 mL) a 27 °C bajo N2. La mezcla se calentó a 70 °C mediante microondas y se agitó durante 0,5 h. Se añadieron NaHCO3 ac. sat. (15 mL) y H2O2 (7,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó vigorosamente a 27 °C durante 1,5 h. La reacción se inactivó con Na2S2O3 sat. ac.(60 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 50 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (80 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (30% EA en PE) para proporcionar 302-7 (930 mg, 61%) como un sólido blanco.
A una mezcla de 302-7 (1,24 g, 1,5 mmol) en DCM (15 mL), se añadió Dess-Martin (1,28 g, 3,0 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 27 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con NaHCO3 ac. sat. y Na2S2O3 ac. sat. (v:v=1:1, 60 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (80 mL), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 302-8 (1,21 g, bruto) como un sólido amarillo.
A una solución agitada de bromuro de metil-trifenil-fosfonio (1,64 g, 4,6 mmol) en THF anhidro (5,5 mL) se añadió t-BuOK (1 M, 4,4 mL) a 0 °C gota a gota. La mezcla se agitó a 27 °C durante 1 h. Una solución de 302-8 (1,21 g bruto, l , 5 mmol) en THF (5 mL) se añadió a 0 °C. La mezcla se agitó a 27 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. sat. (70 mL), se extrajo con EA (2 x 50 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (80 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a sequedad para proporcionar un sólido amarillo claro, que se purificó mediante cromatografía en columna (15 EA en PE) para proporcionar 302-9 (970 mg, 80 %) como un sólido blanco.
A una solución de 302-9 (970 mg, 1,2 mmol) en CH3CN (10 mL), se añadió TPSCl (877 mg, 3,0 mmol), DMAP (363 mg, 3,0 mmol) y TEA (301 mg, 3,0 mmol) a 27 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 27 °C durante 1,5 h. Se añadió NH3^H2O (5 mL) y la mezcla de reacción se agitó a 27 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. ac. (60 mL), y a continuación se extrajo con EA (2 x 40 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (60 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (2% MeOH en DCM) para proporcionar 302-10 (810 mg, 83%) como un sólido blanco.
A una solución de 302-10 (500 mg, 0,6 mmol) en MeOH (15 mL), se añadió NH4F (455 mg, 12,3 mmol) a 27 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 70 °C durante 12 h. La mezcla se enfrió a continuación a TA y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (5% MeOH en DCM) para obtener 302 (120 mg, bruto). El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición neutral) para obtener 302 (86 mg, 45 %) como un sólido blanco. MS:m/z =304 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 180
COMPUESTO 303
A una mezcla de 303-1 (30 g, 122,85 mmol) y 1,1-dimetoxiciclopentano (86 g, 660,93 mmol) en DCE (200 mL) se le añadió TsOHH2O (2,34 g, 12,29 mmol) en una porción a TA. La mezcla se calentó a 70 °C y se agitó durante 14 h. La mezcla se enfrió a TA y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1 -10% MeOH en DCM) para obtener 303-2 (25 g, 65,6%) como un sólido blanco.
A una solución de 303-2 (20 g, 64,45 mmol) en CH3CN anhidro (200 mL), se añadió IBX (19,85 mL, 70,9 mmol) a TA. La mezcla se sometió a reflujo durante 18 h y a continuación se enfrió a 0 °C. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró para proporcionar 303-3 bruto (20 g, 100%) como un sólido amarillo.
A una solución de 303-3 (20 g, 64,87 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) se añadieron HCHO al 37% (20 mL) y solución acuosa de NaOH 2,0 M (40 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a TA durante la noche y a continuación se neutralizó con AcOH a pH = 7. La solución se trató con NaBH4 (4,91 g, 129,74 mmol) a 20 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La reacción se inactivó con NH4Cl sat. ac. La mezcla se extrajo con EA (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna cromatográfica de gel de sílice (1 -3% de MeOH en DCM) para obtener 303-4 (9 g, 40,8%) como un sólido blanco.
A una solución de 303-4 (15,50 g, 45,54 mmol) en piridina anhidra (80,00 mL) se añadió DMTrCl (18,52 g, 54,65 mmol) en DCM anhidro (20,00 mL) gota a gota a -30 °C. La mezcla se agitó durante la noche a 25 °C. La solución se trató con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (50% EA en PE) para obtener 303-5 (10,59 g, 32,56% de rendimiento) como un sólido amarillo.
A una solución de 303-5 (2,90 g, 4,51 mmol) en CH2Cl2 (20,00 mL) se añadió AgNO3 (1,15 g, 6,77 mmol), imidazol (767,60 mg, 11,28 mmol) y TBDpsCl (1,86 g, 6,77 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante 14 h. El precipitado se filtró y el filtrado se lavó con agua y se secó sobre Na2SO4 anhidro. El solvente se eliminó a baja presión. El residuo bruto se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 5:1) para obtener 303-6 (2,79 g, 63,19%) como un sólido amarillo.
303-6 (2,79 g, 3,17 mmol) fue disuelto en solución acuosa de HOAc al 80% (50 mL). La mezcla se agitó a 25 °C durante 4 h. La reacción se inactivó con MeOH y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (PE:PA = 4/1) para obtener 303-7 (0,9 g, 44%) como un sólido amarillo.
A una solución de 303-7 (1,50 g, 2,59 mmol) en DCM anhidro (20 mL), se añadió periodinano de Dess-Martin (1,32 g, 3,11 mmol) a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a TA durante 4 h. La reacción se inactivó mediante la adición de Na2S2O3/solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La mezcla se agitó durante 15 min. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera diluida y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% EtOAc en PE) para obtener 303-8 (1,12 g, 67,48% de rendimiento) como un sólido blanco.
A una solución agitada de PPh3CH3Br (1,49 mg, 4,16 mmol) en THF anhidro (15 mL), se añadió n-BuLi (0,41 mL, 3,47 mmol) a -70 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 0°C durante 0,5 hora. Una solución de 303-8 (800,00 mg, 1,39 mmol) en THF anhidro (3 mL), fue añadida gota a gota a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EtOAc (3 x 60 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (20% EtOAc en PE) para obtener 303-9 (504 mg, 56,78%) como un sólido blanco.
A una solución de 303-9 (500 mg, 869,96 gmol) en CH3CN anhidro (10,00 mL) se añadió cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo (526,95 mg, 1,74 mmol), DMAP (212,57 mg, 1,74 mmol) y Et3N (1,83 g, 18,04 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Se añadió N H 3 ^O (5,00 mL) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se extrajo con EA y se lavó con salmuera, HCl 0,1 M y solución acuosa saturada. De NaHCO3. La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice para obtener 303-10 (307 g, 55,36%) como un sólido amarillo.
A una solución de 303-10 (307 mg, 535,08 mmol) en MeOH (4 mL), se añadió NH4F (814 mg, 20 mmol) a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 65 °C durante 16 h. La solución se filtró y se evaporó a sequedad. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (EA:MeOH=50:1) para obtener 303-11 (130 g, 65,2%) como un sólido blanco.
303-11 (108 mg, 322,05 gmol) se trató con HCl:MeOH (6 mL, 1N) a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. La solución se diluyó con agua y se extrajo con EA (3 x 10 mL). La solución acuosa residual se liofilizó para proporcionar 303 (80,00 mg, 87,65% de rendimiento) como un sólido amarillo. ESI-MS:m/z 270 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 181
COMPUESTO 304
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A una mezcla de K2CO3 (2,40 g, 17,35 mmol) y TsN3 (1,37 g, 6,94 mmol) en CH3CN (20 mL) se agregó 1-dimetoxifosforilpropan-2-ona (1,15 g, 6,94 mmol) en una porción a 25 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. Se agregó una solución de 304-1 (2,00 g, 3,47 mmol) en MeOH (20 mL) en una porción a 25 °C en N2, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con EtOAc (2 x 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (tampón de TFA) para obtener 304-2 (1,50 g, 75 %) como un sólido blanco.
A una solución de 304-2 (600 mg, 1,05 mmol) en CH3CN seco (60 mL) se añadió TEA (212 mg, 2,10 mmol), DMAP (256 mg, 2,10 mmol) y cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo (635 mg, 2,10 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó a 25°C durante 1 h. N H 3^O (10 mL) fue añadido a 25 °C. La mezcla se agitó a 25°C durante 1 h. La reacción fue inactivada con Solución saturada de NH4Cl y se extrajo con EtOAc (2 x 10 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA =3:1 a 0:1), y prep-TLC (DCM:MeOH = 10:1) para obtener 304-3 (380 mg, 63%) como un sólido blanco. Una solución de 304-3 (300 mg, 0,52 mmol) y NH4F (194 mg, 5,25 mmol) en MeOH seco (5 mL) se agitó a 65 °C durante 12 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH=50:1 a 10:1) para obtener 304-4 (140 mg, 80%) como un sólido blanco.
Se agitó una solución de 304-4 (100 mg, 0,30 mmol) en HCl:MeOH 1 N (5 mL) a 25 °C durante 2 h. La mezcla se concentró a menos de 40 °C. El residuo se lavó con CH3CN (5 x 2 mL) para proporcionar 304 (61 mg, 67%) como un sólido blanco. ESI-LCMS:m/z 268,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 182
COMPUESTO 305
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A una solución de W-(te/e-Butoxicarbonil)-L-valina (8,06 g, 37,1 mmol, 1,5 eq.) en ACN anhidro (60 mL) se le añadió carbonildiimidazol (6,01 g, 37,1 mmol, 1,5 eq.). La reacción se agitó durante 1 h a TA y a continuación se enfrió a 0 °C. Se agregó una solución de 44 (14,9 g, 24,7 mmol, 1 eq.) en ACN anhidro (50 mL) a la solución enfriada de imidazoluro de N-BOC-valina, y la solución resultante se trató con Et3N (6,4 mL, 49,4 mmol, 2 eq.). Se dejó que la reacción continuara durante 1 h a 0 °C. La reacción se inactivó con ácido cítrico 1M a pH 2-3 (150 mL), se agitó durante 15 minutos y se diluyó con IPAC (200 mL). La capa orgánica se separó, se lavó secuencialmente con agua y bicarbonato de sodio medio saturado y agua (2x). La capa orgánica se concentró a presión reducida y el residuo se disolvió en MTBE (125 mL) bajo calentamiento suave (40 °C) para proporcionar precipitación del compuesto diana. El sólido se envejeció durante la noche a 0 °C y se aisló mediante filtración para obtener 305-1 (18,0 g, 90,9%) como un sólido blanco. MS:m/z = 802 [M+1]+.
Se trató una suspensión agitada de 305-1 (2,4 g, 3 mmol) en IPAC (45 mL) con ácido metanosulfónico (0,39 mL, 6 mmol, 2 eq.) y se agitó la mezcla a 40 °C. Después de 1 h, se agregó ácido metanosulfónico (2 x 0,2 mL, 6 mmol, 2 eq.) y la temperatura se aumentó a 50 °C. Después de 5 h, la mezcla se enfrió a TA. El sólido se filtró, se lavó con IPAC y se secó al vacío para proporcionar 305 (2,0 g, 83%).
EJEMPLO 183
TRIFOSFATOS
Se disolvió nucleósido seco (0,05 mmol) en una mezcla de PO(OMe)3 (0,7 mL) y piridina (0,3 mL). La mezcla se evaporó al vacío durante 15 min con una temperatura del baño de 42 °C y a continuación se enfrió hasta TA. Se añadió N-metilimidazol (0,009 mL, 0,11 mmol) seguido de PSCh (9 pL, 0,11 mmol) y la mezcla se mantuvo a TA durante 20­ 40 min. La reacción se controló mediante LCMS y se monitoreó mediante la aparición del correspondiente 5’-monofosfato del nucleósido. Después de completarse, se añadió sal de pirofosfato de tetrabutilamonio (150 mg) y a continuación DMF (0,5 mL) para obtener una solución homogénea. Después de 1,5 horas a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con agua (10 mL) y se introdujo en una columna HiLoad 16/10 con Q Sepharose de alto rendimiento. La separación se llevó a cabo con un gradiente lineal de NaCl de 0 a 1N en tampón de TRIS 50 mM (pH 7,5). El trifosfato se eluyó a 75-80% B. Se concentraron las fracciones correspondientes. La eliminación de las sales se consiguió mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de metanol de 0% a 30% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se combinaron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. Ejemplos de compuesto elaborado según este procedimiento se proporcionan en la Tabla 2.
T l 2.
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(Donde los compuestos 19, 34, 101, 103, 111, 115, 123 y 162 son según las reivindicaciones.) EJEMPLO DE REFERENCIA 184
COMPUESTO 307
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A una solución de 307-1 (1,2 g, 2,09 mmol) en DCE (40 mL), se añadió TFA (2 mL). La mezcla se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (3% MeOH en DCM) para proporcionar 307-2 (600 mg, 95,3%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 307-2 (600 g, 1,99 mmol) en piridina (4 mL), se añadió imidazol (677 mg, 9,95 mmol) y TBSCl (900 mg, 5,97 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h, y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con EA (40 mL) y se lavó con salmuera (20 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (10% EA en PE) para obtener 307-3 (700 g, 65,7%) como un sólido blanco.
A una solución de 307-3 (700 mg, 1,32 mmol) en DCM (52 mL), se añadió NIS (356 mg, 1,58 mmol) y TFA (1,3 mL). La mezcla se agitó a 60 °C durante 3 h. Después de enfriarse a TA, la solución se extrajo con DCM (30 mL), se lavó con solución acuosa saturada NaHCO3 y salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (10% EA en PE) para obtener 307-4 (400 g, 46,2%) como un sólido blanco.
Se agitó una mezcla de 307-4 (327 mg, 498 gmol), Bu3SnH (174 mg, 598 gmol) y 2,2'-azobis(2,4-dimetilvaleronitrilo) (25 mg, 100 gmol) en THF-d8 (10 mL) a 90-100 °C durante 3 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (10% EA en PE) para proporcionar 307-5 (180 mg, 68,00%) como un sólido blanco.
A una solución de 307-5 (210 mg, 395 gmol) en MeCN anhidro (2 mL) se añadieron DMAP (121 mg, 989 gmol), Et3N (100 mg, 989 gmol) y cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1-sulfonilo (299 mg, 989 gmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante 16 h. Se añadió NH3 • H2O (1 mL) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA (15 mL) y se lavó con solución acuosa saturada de NH4Cl (15 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna (2% de MeOH en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-TLC (10% MeOH en DCM) para obtener 307-6 (200 g, 95,42%) como un sólido blanco.
A una solución de 307-6 (200 mg, 0,38 mmol) en MeOH (2 mL), se añadió NH4F (210 mg, 5,66 mmol) a TA. La mezcla se agitó a 90-100 °C durante 16 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10% MeOH en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (condición neutra) para proporcionar 307 (70 mg, 61,8% de rendimiento, 78,4% de deuterio) como un sólido blanco. ESI-TOF-MS: m/z = 302,1 [M+H]+, 603,2 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 185
COMPUESTO 321
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El difosfato, 321, se puede preparar usando un procedimiento similar al de preparar el trifosfato del Ejemplo 183 con el reemplazo de sal de tetrabutilamonio de pirofosfato con fosfato de tetrabutilamonio (75 mg) y usando 0,3 mL de DMF para obtener la solución homogénea.
EJEMPLO DE REFERENCIA 186
COMPUESTO 308
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A una solución de 308-1 (22,80 g, 99,91 mmol) en piridina anhidra (200 mL), se añadió DMTC1 (37,24 g, 109,90 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con solución saturada de NH4Cl (200 mL) y se extrajo con EA (3 X 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 100 mL), se secaron con Na2SÜ4 anhidro, y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (PE:EA = 2:1 a 0:1) para obtener el producto deseado (43,00 g, 72,94%) como una espuma amarilla.
A una solución de este producto (20,00 g, 37,70 mmol), se agregó AgNÜ3 (6,40 g, 37,70 mmol) e imidazol (5,13 g, 75,39 mmol) en DMF (200,00 mL), seguido de TBSC1 (8,52 g, 56,54 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h y a continuación la mezcla se concentró a presión reducida para retirar el DMF. El residuo se diluyó con agua helada (300 mL) y se extrajo con EA (3 X 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3 x 50 mL), se secaron con Na2SÜ4 anhidro, y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 3:1 a 1:1) para proporcionar 1-[(2R,4S,5R)-5-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetoxi]metil]-4-[terc-butil(dimetil)silil]oxi-tetrahidrofuran-2-il]pirimidin-2,4-diona (15,70 g, 24,35 mmol) como un sólido blanco.
Se agitó una solución de 1-[(2R,4S,5R)-5-[[bis(4-metoxifenil)-fenilmetoxi]metil]-4-[terc-butil(dimetil)silil]oxitetrahidrofuran-2-il]pirimidina-2,4-diona (20,00 g, 31,02 mmol) en AcÜH (105 g, 1,40 mol) a 25 °C durante 1 h. La reacción se inactivó con MeOH (100 mL) y la mezcla se concentró a presión reducida. La mezcla se diluyó con agua (100 mL). La solución se neutralizó con NaHCO3 sólido a pH= 7 y se extrajo con EA (3 X 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 mL), se secaron con Na2SO4 anhidro, y se concentraron a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:PA = 5:1 a 0:1) para obtener 308-2 (8,90 g, 20,79%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 308-2 (3,42 g, 9,99 mmol) en dioxano (15,00 mL) y DMSO (3,00 mL) se añadió DCC (6,18 g, 29,97 mmol) y Py • TFA (1,93 g, 9,99 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La solución se diluyó con EA (50 mL), y el s[olido se retiró mediante filtración. El filtrado se lavó con salmuera (30 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución del residuo de la etapa anterior (3,4 g) y formaldehído (ac., 3 mL) en dioxano (20 mL) se agregó NaOH 2,0 M (ac., 5 mL) en una porción a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 °C y se neutralizó con AcOH a pH = 7. La solución se trató con NaBH4 (452 mg, 11,952 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos y la reacción se inactivó a continuación con solución acuosa saturada de NH4Cl (100 mL). La mezcla se extrajo con EA (2 x 100 mL). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM:MeOH=20:1 a 10:1) para obtener 308-3 (1,43 mg, 38,4%) como un sólido blanco.
A una solución de 308-3 (1,43 g, 3,84 mmol) en DCM (10,00 mL) se añadió Tf2O (2,38 g, 8,45 mmol) y piridina (1,51 g, 19,2 mmol) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. La reacción se inactivó mediante agua helada (20 mL) a 0 °C y a continuación se extrajo con DCM (2 X 30 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM:MeOH = 40:1) para obtener 308-4 (1,60 g, 2,14%) como una espuma amarilla.
A una solución de 308-4 (1,60 g, 2,51 mmol) en DCM (10,00 mL), se añadió TEA (1,27 g, 12,57 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h. La reacción se desactivó con solución de HCl 1,0 M a pH = 7 y a continuación se extrajo con DCM (30 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM:MeOH = 40:1 a 30:1) para obtener 308-5 (1,10 g, 81,07%) como un sólido amarillo.
A una solución de 308-5 (1,10 g, 2,27 mmol) en DMF (10,00 ml) se le añadió NaN3 (441,84 mg, 6,80 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 d. La reacción se inactivó con H2O (3 mL) y se extrajo con EA (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a baja presión para obtener 308-6 (800,00 mg, 92,87%) como un sólido amarillo.
A una solución de 308-6 (800,00 g, 2,11 mmol) en THF (20,00 mL) se agregó una solución de NaOH (1,05 mL, 2,11 mmol, 2,0 M) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La mezcla se diluyó con EA (20 mL) y se lavó con salmuera (15 mL). La solución se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para obtener 308-7 (821,00 mg, 97,89%) como un sólido amarillo.
A una solución de 308-7 (596 g, 1,50 mmol) en DCM (10 mL), se añadió TBSCl (452,16 g, 3,00 mmol) e imidazol (306,36 mg, 4,50 mmol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 5 h. La mezcla se diluyó con DCM (20 mL). La solución se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (DCM:MeOH=40:1 a 30:1) para obtener 308-8 (750 mg, 87,93%) como un sólido blanco.
A una solución de 308-8 (600 mg, 1,17 mmol) y TEA (296 mg, 2,93 mmol) en CH3CN (10 mL), se añadió TPSCl (862 mg, 2,93 mmol). La mezcla se calentó a 40 °C durante 5 h. La reacción se inactivó con solución de HCl 0,5 M a pH = 6, La solución se extrajo con EA (3 x 20 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se trató con NH3/THF (20 mL, 10 M). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 h, y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (DCM:MeOH = 30:1 a 20:1) para proporcionar el producto bruto (500 mg). El producto bruto se purificó mediante prep-TLC (DCM:MeOH = 10:1) para obtener 308-9 (310 mg, 52%) como un sólido blanco.
A una solución de 308-9 (310 mg, 606,9 gmol) en THF (5 mL), se añadió TBAF en THF (2 mL, 1,0 M) a 25 °C. La solución se agitó a 25 °C durante 0,5 h. La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (sistema de HCl) para obtener 308 (86 mg, 50,2 %) como un sólido blanco. ESI-TOF-MS: m/z = 283,1 [M+H]+, 565,3 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 187 COMPUESTOS 309 y 310 A una solución de 309-1 (394 g, 2,62 mol) e imidazol (268 g, 3,93 mol) en DMF (3 L), se le añadió TBDPSCI (756,14 g, 2,75 mol) en una porción a 25 °C. La mezcla se calentó a 50 °C y se agitó durante 12 h. La mezcla se vertió en agua/salmuera (v:v = 1:1) (6 L) y se agitó durante 20 minutos. La mezcla se extrajo con EA (2 x 4 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (2 X 4 L), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para proporcionar 309-2 (800 g, bruto) como un sólido amarillo.
A una solución de 309-2 (1000 g, 2,57 mol) y 2,2-dimetoxipropano (450 g, 4,32 mol) en DCM (6 L), se agregó TsOHH2O (490 g, 2,57 mol) en una porción a 25 °C. La mezcla se agitó durante 0,5 h. La reacción se inactivó mediante agua (1L). La fase orgánica se lavó con salmuera (2 x 4 L), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 309-3 crudo (1,1 g), que se utilizó para el siguiente paso sin purificación adicional.
Se agitó una mezcla de 309-3 (1,0 kg, 2,33 mol) y NH4F (198 g, 5,36 mol) en MeOH (3 L) a reflujo durante 4 h. Después de evaporar el solvente, el producto bruto se purificó mediante gel de sílice (PE:EA = 1 :1 ) directamente para proporcionar 309-4 bruto, que se recristalizó (PE:Ea = 1:1) para proporcionar 309-4 puro (170 g, 38,4% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, CD3OD), 5 = 5,90 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4,52 (d, J = 4 Hz, 1 H), 4,15 (s, 1 H), 4,0-3,97 (m, 1 H), 3,75-3,65 (m, 2 H), 1,50 (s, 3 H), 1,31 (s, 3 H).
A una solución de 309-4 (300 g, 1,58 mol) en DMF (4 L) se agregó NaH (83,3 g, 3,47 mol) por porciones a 0 °C y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Se agregó BnBr (553 g, 3,23 mol) y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. La reacción se inactivó mediante NH4Cl(sat., 1 L) y agua (2 L). La solución se extrajo con EA:PE (2 X 3 L, v:v=1:1). La capa orgánica combinada se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 50:1) para obtener 309-5 (505 g, 79,4%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-5 (330 g, 891 mmol) en MeOH (1500 mL) se añadió H2SO4 (conc. 20 mL, 406 mmol) gota a gota a 25 °C. La mezcla se calentó a 60 °C durante 2 h. Después de enfriar la mezcla a 25 °C, la mezcla se ajustó a pH a 7-8 con HCl (2 N, ~160 mL). La solución se diluyó con EA (1,5 mL). La capa orgánica se lavó con H2O (2 X 1 L), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 5:1) para obtener 309-6 puro (280 g, 78,3%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-6 (150 g, 435,54 mmol) y DMAP (69,2 g, 566 mmol) en DCM (1,5 mL) se agregó lentamente Tf2O (135,2 g, 479 mmol) a -10 °C bajo N2. La mezcla se calentó a 25 °C y se agitó durante 1,5 h. La reacción se inactivó con agua (600 mL) y se ajustó el pH a 4-5 con HCl (1 N). La capa orgánica se separó, se lavó con NaHCO3 (sat., 1 L), salmuera (1 L) y se secó con Na2SO4 anhidro. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar 309-7 (207 g, bruto) como un aceite amarillo.
Se agitó una mezcla de 309-7 (207 g, 435,50 mmol) y TBAF (1 M en THF, 870 mL) a 60-70 °C durante 12 h. El solvente se evaporó a baja presión. El residuo se disolvió en Ea (800 mL). La solución se lavó con agua (3 X 500 mL), salmuera (500 mL) y se secó sobre Na2SO4 anhidro. La solución se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (PE:EA = 20:1) para proporcionar 309-8 (40 g, 25,46%) como un aceite amarillo claro.
1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 5 = 7,36-7,33 (m, 10H), 5,05 (d, J = 8 Hz, 1 H), 4,87 (m, 0,5 H), 4,80-4,70 (m, 1,5 H), 4,62­ 4,53 (m, 3 H), 4,36-4,30 (m, 1 H), 4,18-4,05 (m, 2 H), 3,70-3,53 (m, 2 H), 3,36 (s, 3 H). 19F RMN (376 MHz, CDCla) 5 = -209,48.
A una solución de 309-8 (50 g, 144,35 mmol) en MeOH (50 mL) se añadió Pd(OH)2/C (13 g, 50% H2O) bajo Ar. La suspensión se desgasificó al vacío y se purgó con H2 varias veces. La mezcla se agitó bajo H2 (40 psi) a 40 °C durante 8 h. Después de filtrar el catalizador, el filtrado se concentró al vacío para proporcionar 309-9 (23 g, 91%) como un sólido gris.
A una solución de 309-9 (55 g, 331 mmol) e imidazol (31,55 g, 463,4 mmol) en DCM (1 L) se añadió TBDPSCl (100 g, 364,13 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con agua (100 mL) y a continuación la mezcla se concentró. El residuo se disolvió en EA (500 mL). La solución se lavó con agua (2 x 500 mL), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 5:1) para obtener 309-10 (74 g, 55%) como un aceite incoloro.
A una solución de 309-10 (70 g, 173 mmol) en DMF (750 mL) se añadió NaH (7,61 g, 190 mmol) a 0 °C, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h. Se agregó BnBr (32,55 g, 190,33 mmol) lentamente a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h y la reacción se inactivó con agua (1000 mL). La solución se extrajo mediante EA:PE (v:v = 2:1,2 X 800 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera:agua (v:v = 1:1,2 X 500 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para obtener 309-11 (80 mg, crudo) como un aceite amarillo.
Una mezcla de 309-11 (100 g, 202,1 mmol) y NH4F (15 g, 404,3 mmol) en MeOH (2000 mL) se agitó a 65 °C durante 12 h. La mezcla se enfrió a 25 °C y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con EA (500 mL) y se lavó con agua (2 X 500 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada (500 mL), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 8:1) para obtener 309-12 (36 g, 69,5%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-12 (36 g, 148,4 mmol) y TEA (22,51 g, 222,4 mmol) en DCM (300 L) se añadió BzCl (23 g, 163,1 mmol) gota a gota a 25 °C bajo N2, y la mezcla se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con agua (500 mL). La capa orgánica se separó, lavó con agua (400 mL) y se secó con Na2SO4 anhidro. La capa orgánica se concentró a presión reducida para obtener 309-13 (55 g, bruto) como un aceite amarillo.
Se agitó una mezcla de 309-13 (55 g, 152,62 mmol) en TFAihhO (500 mL, v:v = 9:1) a 25 °C durante 30 h. La solución se evaporó al vacío. El residuo se diluyó con EA (200 mL) y se lavó con NaHCO3 (ac., 200 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por gel de sílice (PE:EA = 10:1) para obtener 309-14 (45 g, 80,8% de rendimiento) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-14 (45 g, 129,9 mmol) en EtOH (500 ml) se le añadió NaBH4 (5,41 mg, 142,9 mmol) a 25 °C y la mezcla se agitó a 25 °C durante 0,5 h. La reacción se inactivó con NH4Cl ac. (500 mL) y se extrajo con EA (2 x 300 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera (300 mL) y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 2:1) para proporcionar 309-15 (42 g, 94 % de rendimiento) como un sólido blanco.
1H-RMN (400 MHz, MeOD), 5 = 8,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,65-7,20 (m, 9 H), 4,95 (m, 0,5 H), 4,80-4,65 (m, 2 H), 4,53­ 4,47 (m, 2 H), 4,15-4,07 (m, 1 H), 4,00-3,85 (m, 3 H). 19F RMN (376 MHz, MeOD) 5 = -196,75.
Se agitó una mezcla de 309-15 (90 g, 258,4 mmol) en piridina (500 mL) con DMTrCl (92 g, 271 mmol) a 25 °C durante 16 h. La solución se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EA (500 mL). La solución se lavó con agua (2 X 300 L), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión para proporcionar 309-16 (145 g, bruto) como un sólido amarillo.
A una solución de 309-16 (145 g, 223 mmol) en MeOH:THF (2000 mL, v:v = 3:1) se le agregó NaOMe (12 g, 53,8 mmol) en una porción. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1 h y la reacción se inactivó con CO2 (sólido). La mezcla se concentró a baja presión. El residuo se disolvió en EA (200 mL). La solución se lavó con agua (300 mL) y salmuera (300 mL), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 5:1) para obtener 309-17 (85 g, 70%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-17 (35,0 g, 64 mmol) en piridina (200 mL), se añadió TrtCl (21,42 g, 76,84 mmol) en una porción a 20 °C. La mezcla se agitó a 20 °C durante 15 h. La mezcla se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EA (300 mL). La solución se lavó con agua (2 X 200 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice (PE:EA = 20:1) para obtener 309-18 (31 g, 89,5%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-18 (31 g, 41,8 mmol) en CH3CN (500 mL), se añadió IBX (11,7 g, 41,8 mmol) en una porción a 20 °C. La mezcla se agitó a 80 °C durante 2 h. La mezcla se enfrió, y a continuación se filtró. El filtrado se concentró a baja presión para obtener 309-19 (32 g, bruto) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-19 (32 g, 40,6 mmol) y CsF (18,53 g, 122 mmol) en THF (300 L) se añadió TMSCF3 (17,35 g, 122 mmol) a 15 °C y la mezcla se agitó a 15 °C durante 18 h. La reacción se inactivó con MeOH (5 mL). La solución se extrajo con EA (300 mL) y se lavó con agua (2 X 200 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 8:1) para proporcionar 309-20 (25 g, 71,7%) como un aceite amarillo. 19F RMN (376 MHz, CDCh) 5 = -74,93, -74,95, -186,74 , -186,83.
A una solución de 309-20 (50 g, 58,35 mmol) en THF (50 mL) se agregó AcOH (200 mL, 80%) y la mezcla se agitó a 15 °C durante 16 h. A continuación, la mezcla se calentó a 45 °C y se agitó durante 2 h. El solvente se evaporó al vacío (se añadió MeOH (5 X 5 mL) durante la evaporación). El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 20:1) para proporcionar 309-21 (punto descendente, isómero deseado) (7,4 g, 22,9%) como un sólido amarillo y el subproducto (17,1 g, 52,84%) (punto ascendente) como un sólido amarillo. Ponto descendente: 1H-RMN (400 MHz, CDCla), 5 = 7,50-7,25 (m, 20 H), 4,85-4,65 (t, 2 H), 4,48-4,40 (m, 1 H), 4,35 (m, 0,5 H), 4,25 (m, 0,5 H), 3,75-3,65 (m, 3 H), 3,20 (d, J = 12 Hz, 1 H). 19F-RMN (376 MHz, MeOD), 5 = -75,55, -190,067. Punto ascendente: 1H-RMN (400 MHz, CDCla), 5 = 7,50-7,25 (m, 20 H), 4,98-4,80 (m, 1 H), 4,67 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,42-4,39 (m, 1 H), 4,33­ 4,29 (m, 1 H), 3,85-3,71 (m, 2 H), 3,65-3,60 (m, 1 H), 3,54-5,52, (m, 2H). 19F-RMN (376 MHz, MeOD), 5 = -75,455 (s, 3 F), -189,53 (s, IF).
A una solución de 309-21 (8,50 g, 15,3 mmol) en THF:DMSO (60 mL) se agregó IBX (4,29 g, 15,3 mmol) y la mezcla se agitó a 35 °C durante 2 h. La solución se calentó lentamente a 40 °C y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con EA (100 mL) y se lavó con agua (100 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 25:1) para proporcionar 309-22 (8,0 g, 75%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-22 (4,50 g, 8,14 mmol) en piridina (50 mL), se añadió Ac2O (2,49 g, 24,4 mmol). La mezcla se agitó a 15 °C durante 3 h. La reacción se inactivó con MeOH (1 mL), y el solvente se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en EA (40 mL). La solución se lavó con agua (50 mL), se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 20:1) para proporcionar 309-23 (4,30 g, 88,8%) como un aceite incoloro. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3), 5 = 7,50-7,20 (m, 20 H), 6,45 (d, J = 12 Hz, 1 H), 4,90 (m, 0,5 H), 4,77 (m, 0,5 H), 4,70-4,55 (m, 3 H), 3,40 (dd, J = 40 Hz, 2 H), 1,79 (s, 3 H). 19F-RMN (376 MHz, MeOD), 5 = -73,92 (d, J = 18 Hz, 3F), -204,95 (t, 1F).
A una solución de 309-23 (900 mg, 1,51 mmol) en MeOH (20 mL) se añadió Pd(OH)2/C (50%, 0,6 g) bajo atmósfera de N2. La suspensión se desgasificó y purgó con H2 (3x). La mezcla se agitó bajo H2 (40 psi) a 40 °C durante 24 h y a continuación se filtró. El filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 10:1) para proporcionar 309-24 (300 g, 39,4%) como un aceite amarillo.
A una solución de 309-24 (200 mg, 396,5 pmol) en DCM (2 mL), se añadió TFA (153 mg, 1,34 mmol) y Et3SiH (365 mg, 3,14 mmol). La mezcla se agitó a 15°C durante 20 min. El solvente se evaporó directamente al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:PA = 1:1) para obtener 309-25 (100 mg, 96%) como un sólido blanco.
A una solución de 309-25 (100 mg, 381 pmol) en DCM (2 mL), se añadió DMAP (46,60 mg, 381 pmol) y TEA (115,8 mg, 1,14 mmol). Se agregó BzCl (117,96 mg, 839,19 pmol) y la mezcla se agitó a 15 °C durante 0,5 h. La reacción se inactivó con HCl (0,3 N, 10 mL). La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 X 10 mL) y se lavó con agua (10 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 20:1) para proporcionar 309-26 (144 mg, 81%) como un aceite amarillo. 1H-RMN (400 MHz, CDCh), 5 = 8,12 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,04 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,70-7,39 (m, 6 H), 6,57 (d, J = 11 Hz, 1 H), 6,02 (dd, Ji = 22,8 Hz, J2 = 4,8 Hz, 1 H), 5,28 (dd, Ji = 52 Hz, J2 = 4,4 Hz, 1 H), 4,74 (t, 2 H), 1,96 (s, 3 H). 19F-RMN, (376 MHz, MeOD), 5 = -74,18 (d, J = 18,8 Hz, 3 F), -204,08 (t, IF).
Se agitó una mezcla de uracilo (457,54 mg, 4,08 mmol) y HMDS (3,85 g, 23,86 mmol) a 120 °C durante 1 h, y el solvente se evaporó a baja presión.309-26 (480 mg, 1,02 mmol) fue disuelto en CH3CN (2 mL) y se trató con la mezcla anterior. La mezcla se absorbió en un tubo de microondas y se trató con TMSOTf (1,60 g, 7,19 mmol). La mezcla se calentó a 140 °C durante 4 h y bajo radiación de microondas. La reacción se inactivó con MeOH y la mezcla se concentró directamente a baja presión. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (PE:EA = 5:1) para proporcionar el producto bruto (2,5 g), que se purificó mediante prep-HPLC (TFA) para proporcionar dos isómeros (0,92 g). Después de purificar el residuo mediante SFC (AD-H_6_30-65 6MIN, OJ (250mm*50mm, 10um), Base-MeOH), se obtuvieron 309-27a (a-isómero, 470 mg, 22%) y 309-27b (isómero p, 320 mg, 15%) como un sólido blanco.
309-27a (a-isómero): 1H-RMN (400 MHz, CDCh), 5 = 8,63 (s, 1H), 8,20-8,00 (m, 4 H), 7,75-6,95 (m, 6 H), 6,63 (d, J = 20,8 Hz, 1 H), 6,10 (dd, Ji = 23,6 Hz, J2 = 4 Hz, 1 H), 5,86 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,47 (d, J = 54 Hz, 1 H), 4,80 (s, 2H).
19F-RMN (376 MHz, MeOD), 5 = -73,65 (d, J = 16,4 Hz, 3 F), -212,54 (t, IF). 309-27b (p-isómero): 1H-RMN (400 MHz, CDCl3), 5 = 8,48 (s, 1H), 8,15-8,00 (m, 4 H), 7,60-7,25 (m, 6 H), 6,22 (dd, Ji = 16 Hz, J2 = 6,4 Hz, 1 H), 5,95-5,20 (m, 3 H), 4,80 (s, 2H). 19F-RMN (376 MHz, MeOD), 5 = -73,31 (d, J = 11 Hz, 3 F), -192,56 (t, IF).
Se agitó una mezcla de 309-27b (180 mg, 344 pmol, 1,0 eq.) en NH3/MeOH (7 M, 5 mL) a 15 °C durante 16 h. El solvente se concentró directamente al vacío. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición neutra, NH4HCO3) para proporcionar 310 (86 mg, 79,4%) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 315,1 [M+H]+.
A una solución de 309-27b (200 mg, 383 pmol) en CH3CN (2 mL) se agregó DMAP (116 mg, 957 pmol), TEA (97 mg, 957 pmol) y cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo (290 mg, 957 pmol) y la mezcla se agitó a 15 °C durante 20 minutos. La mezcla se trató con NH3^2O (2 mL) y la mezcla se agitó a 15 °C durante 10 minutos. La mezcla se extrajo con EA (2 x 10 mL). La fase orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (PE:EA =2:1), y se re-purificó mediante prep-TLC (DCM:MeOH = 15:1) para obtener 309-28 (90 mg, 45%) como un sólido blanco.
Se agitó una mezcla de 309-28 (90 mg, 172,61 pmol) en NH3/MeOH (7 M, 3 mL) a 15 °C durante 16 h. El solvente se concentró directamente al vacío. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición de HCl) para obtener 309 (30 mg, 55 %) como un sólido blanco. ESI-MS: m/z 314,0 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 188
COMPUESTO 311
Figure imgf000206_0001
311-1 (2,3 g, 3,0 mmol) se trató con NH3 en MeOH (50 mL, 10 M) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 24 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10%-30% EtOAc en PE) para obtener 311-2 (1,5 g, 70,8%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 311-2 (1,5 g, 2,26 mmol) en DCM anhidro (15,00 mL), se añadió Dess-Martin (1,6 g, 3,84 mmol) en una porción a 0 °C bajo N2. La mezcla se agitó a 25 °C durante 1,5 h. La reacción fue inactivada con Na2S2O3 sat. y NaHCO3 sat. (v:v = 1:1, 20 mL) a 0 °C. La fase acuosa se extrajo con DCM (3 X 30 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera sat., se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar 311-3 (1,6 g, bruto), que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional alguna.
A una solución de metil (trifenil)fosfonio; bromuro (3,4 g, 9,4 mmol) en THF anhidro (12 mL) se añadió n-BuLi (2,5 M, 3,8 mL) gota a gota a 0 °C bajo N2. Se agitó la mezcla a 0 °C durante 1 h. 311-3 (1,55 g, 2,35 mmol) en THF (8 mL) se añadió a la mezcla gota a gota a 0 °C. La solución se calentó y se agitó a 25 °C durante 12 h. La reacción se inactivó con una solución saturada de NH4CL La mezcla se extrajo con EA (3 x 50 mL). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10%-20% EtOAc en PE) para obtener 311-4 (1,1 g, 71,05%) como un sólido blanco.
311-4 (501 mg, 758,9 gmol) se disolvió en 9-BBN (0,5 M, 15 mL) en una porción a 25 °C bajo N2. La mezcla se calentó a 80°C en microondas durante 30 min. Se añadieron NaHCO3 ac. (5 mL) y H2O2 (30%, 2,5 mL) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con . Na2S2O3 a 0°C. La mezcla se diluyó con EA y agua. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EA. La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10%-25% EtOAc en PE) para obtener 311-5 (395 g, 76,9%) como un sólido blanco.
A una solución de 311-5 (360 g, 531,8 mmol) en DCM anhidro (4 mL), se añadió TEA (215 mg, 2,13 mmol) y MsCl (73 mg, 638,26 gmol) en DCM (1 mL) gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 h. La reacción se inactivó con agua helada y se extrajo con CH2G2. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro La solución se filtró y se concentró a 311-6 (395 mg, bruto) como un sólido marrón, que se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una solución de 311-6 (380 g, 504 gmol) en DCM anhidro (4 mL), se añadió NaH3 (98 mg, 1,51 mmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a 70 °C durante 3 h. La reacción se desactivó con agua y se extrajo con EA. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 y se filtró. El filtrado se concentró a baja presión. El residuo se purificó por cromatografía en columna (10%-30% EtOAc en PE) para obtener 311-7 (295 g, 83,5%) como un sólido blanco. A una solución agitada de 311-7 (295 mg, 420,3 gmol) en CH3CN anhidro (3 mL) se agregó DMAP (102,7 mg, 840,6 gmol), TEA (85,1 mg, 840,6 gmol) y TPSCl (247,9 mg, 840,6 gmol) a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 3 h. Se agregó NH3 • H2O (10 mL, 28%) y la mezcla se agitó durante 1 h. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (1-8% MeOH en DCM) para obtener 311-2 (260 g, 88,3%) como un sólido blanco.
311-8 (240 mg, 342,4 pmol) se trató con HCÜÜH al 80% (10 mL) a 25 °C. La mezcla se agitó a 70 °C durante 2 h. La reacción se enfrió hasta 25 °C y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna gel de sílice (2%-6% MeOH en DCM) para obtener 311 (85 g, 79,1%) como un sólido blanco. ESI-TÜF-MS: m/z = 314,9 [M+H]+, 629,1 [2M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 189
COMPUESTO 312
Figure imgf000207_0001
Una solución de 312-1 (0,68 mg, 1,07 mmol) en AcÜH (10 mL) y TFA (0,25 mL) se agitó durante 1 h a TA. La mezcla se evaporó y el residuo se co-evaporó con MeCN y tolueno. La purificación en columna de sílice con el sistema solvente MeÜH:CH2Cl2 (gradiente 2-12%) proporcionó 312-1 (0,32 g, 82%).
Se agitó una mezcla de 312-1 (0,32 g, 0,9 mmol) en THF (9 mL) y LiBH4 (94 mg, 3,6 mmol) 2 d a TA. La reacción se inactivó con AcÜH:EtÜH y se evaporó la mezcla. La purificación en columna de sílice con el sistema solvente MeÜH:CH2Cl2 (gradiente 4-15%) proporcionó 312-2 (80 mg, 30%).
Se agitó una mezcla de 312-2 (80 mg, 0,27 mmol) en piridina (3 mL) y anhídrido isobutírico (90 pL, 0,55 mmol) durante la noche a TA. La mezcla se evaporó y el residuo se co-evaporó con tolueno. La purificación en columna de sílice con sistema solvente EtÜAc:hexanos (gradiente 30-100%) produjo 312-3 (72 mg, 61%) como un sólido blanco.
A una solución de 312-3 (72 mg, 0,17 mmol) en MeCN anhidro (2 mL) se añadió cloruro de triisopropilfenilsulfonilo (102 mg, 0,34 mmol), DMAP (41 mg, 0,34 mmol) y Et3N (47 pL, 0,34 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 90 minutos y a continuación el amoníaco se burbujeó rápidamente (<1 min) a través. La mezcla se agitó durante 10 min. La mezcla se diluyó con CH2CL, se lavó con HCl 0,1 N, NaHCÜ3,sat. ac., y salmuera, y se secó con Na2SÜ4. La purificación en columna de sílice con el sistema solvente MeÜH:CH2Cl2 (gradiente 4-12%) proporcionó 312 (46 mg, 60%). MS: m/z = 434,00 [M-1].
EJEMPLO DE REFERENCIA 190
COMPUESTO 313
Figure imgf000207_0002
A una solución de ácido isobutírico (278 pL, 3 mmol) en THF (5 mL) se añadió CDI (486 mg, 3 mmol). Después de 1 h, se agregó la solución de imidazolida de ácido isobutírico a una solución agitada de 106 (600 mg, 2 mmol), trietilamina (560 pL, 4 mmol) y DMAP (0,2 mmol) en DMF (5 mL). La solución se dejó durante la noche a TA. La reacción se dividió entre acetato de isopropilo y cloruro de amonio acuoso saturado. La fase orgánica se lavó con agua y se concentró a presión reducida. 313 (500 mg, 67%) se aisló mediante cromatografía en columna (10 a 15% MeOH en DCM) seguido de cristalización a partir de isopropanol:hexano (1:2) como un sólido blanco. MS: m/z 371 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 191
COMPUESTO 314
Figure imgf000208_0001
A una solución agitada de 314-1 (2,16 mg, 4,73 mmol) en ACN (20 mL), se añadió trietilamina (1,9 mg, 15 mmol), DMAP (60 mg, 0,5 mmol) y anhídrido isobutírico (1,08 mg, 6,5 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 1 h y a continuación se dividió entre acetato de isopropilo y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y se concentró. 314-2 (2,1 g, 84%) se aisló mediante cromatografía en columna usando 25 a 50% EA en hexano como una espuma blanca. MS: m/z 528 [M+H]+.
314-2 (2,1 g, 3,98 mmol) fue disuelto en ACN (15 mL) y la solución se enfrió a 0 °C. Se agregaron trietilamina (1,1 mL, 8 mmol) y DMAP (537 mg, 4,4 mmol) a la solución seguido de la adición de cloruro de triisopropilbencenosulfonilo (1,33 g, 4,4 mmol). La mezcla se calentó a TA y a continuación se agitó durante 1 h. La reacción se inactivó con hidróxido de amonio (1 mL). La mezcla se agitó durante 2 h a TA, se diluyó con acetato de isopropilo y se filtró a partir de sales de amonio. El filtrado se lavó con agua y bicarbonato de sodio acuoso y a continuación se concentró a presión reducida.314-3 (2,1 g, ~100%) se aisló mediante cromatografía en columna usando 4-10% de MeOH en CH2Cl2 como una espuma amarillenta. MS: m/z 527 [M+H]+.
314-3 (1,10 g, 2,09 mmol) se disolvió en THF (6 mL). La solución se enfrió a 0 °C y se trató con solución de TBAF 1 M en THF (2,1 mL, 2,1 mmol). Se dejó que la reacción continuara durante 1 h, y a continuación se inactivó mediante la adición de una solución saturada de cloruro de amonio ac. 314 (450 mg, 58%) se extrajo con acetato de isopropilo y se aisló mediante cromatografía en columna en 5-15% de MeOH en CH2G2 como una espuma blancuzca, MS: m/z 371 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 192
COMPUESTO 315
Figure imgf000208_0002
315-1 (400 mg) se disolvió en NH3/metanol (10 mL) y la mezcla se mantuvo a temperatura ambiente durante 2 d. El solvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice en gradiente de MeOH en CH2G2 de 3% a 20%. La mezcla de productos se separó mediante RP HPLC en una columna Synergy Hydro-RP de 4 micras (Phenominex). Se utilizó un gradiente lineal de MeOH 0% a 50% en un tampón de acetato de trietilamonio 50 mM (pH 7,5) para la elución. Las fracciones correspondientes se recogieron, se concentraron y se liofilizaron 3 veces para eliminar el exceso de tampón. La estereoquímica en la posición 1 ’ de ambos isómeros fue probada por experimentos NOE RMN. El compuesto con un tiempo de retención más corto fue 315. MS: m/z 319 [M+1]+, 637[2M+1]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 193
COMPUESTO 316
Figure imgf000209_0001
316-1 (6,0 g, 14,77 mmol) se trató con NH3 en MeOH (7,0 M, 150 mL) a TA. La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (5-2% MeOH en DCM) para obtener 316-2 (3,4 g, 90%) como un sólido blanco.
A una solución agitada de 316-2 (3,4 g, 13,1 mmol) en THF anhidro (60 mL), se añadió piridina (15 mL), imidazol (1,8 g, 26,5 mmol) y PPh3 (5,1 g, 19,5 mol). Una solución de I2 (4,3 g, 16,9 mol) en THF (20 mL) fue añadida gota a gota a 0 °C. La mezcla se calentó a TA y se agitó durante 16 h. La reacción se inactivó con solución sat. ac. de Na2S2O3 y se extrajo con EA (3 X 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (40% EA en PE) para obtener 316-3 (4,6 g, bruto%) como un sólido blanco.
A una solución de 316-3 (4,6 g, bruto) en THF (35 mL), se añadió DBU (37,8 g, 247 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 0,5 h. La mezcla se neutralizó con ácido acético a pH = 7 y se extrajo con EA (3 X 100 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (50% EA en PE) para obtener 316-4 (1,59 g, bruto, 84% de pureza) como un sólido blanco. A una solución helada de 316-4 (1,59 g, bruto) en MeCN anhidro (35 mL) se añadió NEt3^3HF (1,06 g, 6,56 mmol 1) y NIS (3,69 g, 16,40 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 0 °C durante 1 h. Después que la reacción se completó, la reacción se inactivó con sol. ac. sat de Na2S2O3 y sol. ac. sat. de NaHCO3 y se extrajo con EA (3 X 100 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (50% EA en PE) para obtener 316-5 (2,0 g, dos isómeros) como un sólido blanco.
A una solución de 316-5 (2,0 g, 5,15 mmol, dos isómeros) en DCM anhidro (30 mL) se añadió DMAP (1,57 g, 12,88 mmol) y BzCl (1,27 g, 9,01 mmol), y la mezcla fue agitada a TA durante 16 h. La reacción fue inactivada con solución sat. ac. de NH4C1 y se extrajo con DCM (3 X 60 mL). La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (25% EA en PE) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante separación de SFC (condiciones neutrales) para proporcionar 316-6 (1,60 g, 63,1%) como un sólido blanco.
A una solución de 316-6 (573 mg, 1,16 mmol) en DMF (30 mL) se le añadió NaOBz (1,68 g, 11,64 mmol) y 15-corona-5 (3,08 g, 13,97 mmol) y la mezcla se agitó a 90-110 °C durante 24 h. La mezcla se filtró y se extrajo con EA (3 x 20 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a baja presión. El residuo se purificó en una columna de gel de sílice (30% EA en PE) para obtener 316-7 (492 g, 87,20%) como un sólido blanco.
316-7 (293 mg, 0,6 mmol) se trató con NH3 en MeOH (30 mL, 7,0 M). La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h, y a continuación se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (3% isopropanol en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (condición de FA) para obtener 316 (108 mg, 53,41 %) como un sólido blanco. ESI-TOF-MS: m/z = 279,1 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 194
COMPUESTO 317
Figure imgf000209_0002
A una solución de 316-7 (492 mg, 1,01 mmol) en CH3CN anhidro (8 mL) se añadieron DMAP (308 mg, 2,53 mmol), Et3N (255 mg, 2,53 mmol) y cloruro de 2,4,6-triisopropilbenceno-1-sulfonilo (765 mg, 2,53 mmol) a TA. La mezcla se agitó a TA durante la noche. Se agregó una solución de NH3 en THF (4 mL, 7,0 M) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con EA. La solución se lavó con una solución ac. de AcOH al 0,5% y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (2% MeOH en DCM), y se purificó nuevamente mediante prep-TLC (10% MeOH en DCM) para obtener 317-1 (370 mg, 65,6%) como un sólido blanco.
317-1 (370 mg, 0,76 mmol) se trató con NH3 en MeOH (40 mL, 7,0 M). La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (8% isopropanol en DCM) para obtener el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante prep-HPLC (condición de FA) para obtener 317 (65,6 mg, 30,2 %) como un sólido blanco. ESI-TOF-MS: m/z = 278,1 [M+H]+, 555,2 [2M+H]+.
EJEMPLO 195
COMPUESTO 318
Figure imgf000210_0001
364-1 (50 mg, 0,081 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (1,0 mL), y HCl 4N en dioxano (81 gL, 0,32 mmol) se añadió a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h. Los solventes se evaporaron a TA y co-evaporaron con tolueno (3x). El residuo se purificó en una columna gel de sílice usando 15%-30% EA:DCM para obtener 364 (25,6 g, 92%) como un sólido blanco después de evaporación. ESI-LCMS: m/z = 346,05 [M+H]+
EJEMPLO DE REFERENCIA 196
COMPUESTO 319
Figure imgf000210_0002
A una solución agitada de 318-1 (300 mg, 0,49 mmol) en piridina anhidra (3,0 mL), se añadió TBDPSCl (0,27 mg, 0,97 mmol), y DMAP (119 mg, 0,97 mmol) a 0 °C (baño de hielo/agua). La solución se agitó a TA durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C. La reacción se inactivó con EtOH (0,3 mL), se diluyó con EA (100 mL). Se añadió agua (50 mL) a la mezcla. La solución se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con MgSÜ4. El residuo se purificó en sílice con Ea:hexanos (gradiente de 10-100%) para obtener 319-1 (386 mg, 93%) como una espuma blancuzca.
A una solución agitada de 319-1 (300 mg, 0,49 mmol) en CH3CN anhidro (4,0 mL) se añadieron 319-2 (331,0 mg, 0,94 mmol, se preparó según el procedimiento descrito en Katritzky y col., Synthesis (2004) 2004(16):2645-2652), DIPEA (0,17 mL, 0,94 mmol) y DMAP (115 mg, 0,94 mmol). La solución se agitó a 70 °C durante 16 h. La mezcla se enfrió a 0 a 5 °C, se diluyó con EA (100 mL) y a continuación se añadió agua (50 mL). La solución se lavó con NaHCÜ3 ac. sat. y salmuera, y se secó con MgSÜ4. El residuo se purificó en sílice con Ea:hexanos (gradiente de 10-100%) para obtener 319-3 (174 mg, 70%) como una espuma amarilla.
A una solución de 319-3 (166 mg, 0,153 mmol) en THF (2 mL), se añadió 3TEA^HF (98 pL, 0,61 mmol) y TEA (66 pl, 0,46 mmol) a temperatura de baño de hielo. La mezcla se agitó durante 18 h a TA. La mezcla se diluyó con EA y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró para obtener el producto bruto, el cual se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice Ea:hexanos (gradiente de 20-100%) para obtener 319-4 (106 mg, 81,5%) como una espuma blanca.
A una solución de bis (PÜC) fosfato de trietilamonio (0,36 mmol, preparada a partir de 118 mg de bis (PÜC) fosfato y 0,5 mL de TEA) en THF (3 mL) se añadió 319-4 (102 mg, 0,12 mmol) seguido de 3-nitro-1,2,4-triazol (48 mg, 0,42 mmol), diisopropiletilamina (0,11 mL, 0,6 mmol) y BÜP-Cl (107 mg, 0,42 mmol) a 0 a 5 °C (baño de agua helada). La mezcla se agitó durante 2 h, se diluyó con EtÜAc y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar un sólido blanco, que se purificó en columna de gel de sílice (EA:hexanos 5 a 60%) para proporcionar 319-5 como una espuma amarilla clara (106 mg, 78 %).
319-5 (102 mg, 0,088 mmol) se disolvió en CH3CN anhidro (0,7 mL) y se añadió HCl 4 N en dioxano (55 pL, 0,22 mmol) a 0 a 5 °C. La mezcla se agitó a TA durante 1 h y se añadió EtÜH anhidro (100 pL). Se evaporaron los disolventes a TA y se co-evaporó con tolueno (3x). El producto se purificó en columna de gel de sílice (EA:hexanos 15 a 100%) para proporcionar 319-6 como una espuma blanca (60,3 mg, 77 %)
319-6 (40 mg, 0,044 mmol) se disolvió en EtÜH anhidro (1,3 mL), se desgasificó (3x), se enjuagó H2, y a continuación se añadieron Pd/C al 10% (6 mg) y HCl 4N en dioxano (22 pL, 0,089 mmol). La mezcla se agitó en atmósfera de H2 a TA durante 2 h. La mezcla se filtró a través de celite y la celite se lavó con EtÜH anhidro (1,5 mL). Los solventes se evaporaron y trituraron con dietil éter anhidro (3 X 1,5 mL). La capa de éter se decantó y el sólido obtenido se secó a alto vacío para proporcionar 319 (26,8 mg, 79,7%, sal de clorhidrato) como un sólido blanco. ESI-LCMS: m/z = 757,2 [M+H]+.
EJEMPLO DE REFERENCIA 197
COMPUESTO 320
Figure imgf000211_0001
320 se preparó según el procedimiento descrito para 319-5 a partir de 316 (36,5 mg, 0,13 mmol) y una solución de bis (PÜC) fosfato de trietilamonio (0,26 mmol, preparado a partir de bis (PÜC) fosfato (85 mg) y TEA (0,5 mL) en THF (1 mL)). ESI-LCMS: m/z = 589,0 [M-H]-.
EJEMPLO 184
COMPUESTOS DE FÓRMULA (I)
Algunos compuestos de Fórmula (I) están comercialmente disponibles. Para algunos compuestos, las síntesis anteriores son ejemplares y se pueden utilizar como punto de partida para preparar compuestos adicionales de Fórmula (I). A continuación, se muestran ejemplos de compuestos adicionales de Fórmula (I). Estos compuestos se pueden preparar de varias maneras, incluidos los esquemas sintéticos que se muestran y describen en esta invención. Los expertos en la técnica serán capaces de reconocer modificaciones de las síntesis divulgadas y diseñar rutas alternativas basándose en las descripciones de esta invención; todas estas modificaciones y rutas alternativas se encuentran dentro del alcance de las reivindicaciones.
Figure imgf000212_0001
Figure imgf000213_0001
(Donde el compuesto 332 es según las reivindicaciones.)
EJEMPLO 185
ENSAYO MERS
Células y virus: Se utilizaron células de carcinoma de pulmón humano (A-549) para los ensayos antivirales primarios y se obtuvieron de American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, EE. UU.). Las células se pasaron rutinariamente en medio esencial mínimo (MEM con NaCHO3 al 0,15%, Hyclone Laboratories, Logan, UT, EE. UU.) complementado con suero fetal bovino al 10%. Cuando se evaluaron los compuestos para determinar su eficacia, el suero se redujo a una concentración final del 2% y el medio contenía gentamicina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) a 50 pg/mL. Dado que el virus MERS-Co no produjo efectos citopáticos detectables del virus, la replicación del virus en células A549 se detectó titulando los fluidos sobrenadantes del virus de células A549 infectadas tratadas con compuestos en células Vero 76. Las células Vero 76 se obtuvieron de ATCC y se pasaron rutinariamente en MEM con NaCHO3 al 0,15% complementado con suero fetal bovino al 5%. Al evaluar los compuestos, el suero se redujo a una concentración final del 2% y se complementó con 50 pg/mL de gentamicina.
La cepa de coronavirus del Oriente Medio EMC (MERS-CoV) fue un aislado original de humanos que fue amplificado en cultivo celular por Ron Fouchier (Erasmus Medical Center, Rotterdam, Países Bajos) y se obtuvo de los Centros para el Control de Enfermedades (Atlanta, GA).
Controles: Infergen® (interferón alfacon-1, un interferón recombinante no natural de tipo I (Blatt, L., y col., J. Interferon Cytokine Res. (1996) 16(7):489-499 y Alberti, A., BioDrugs (1999) 12(5):343-357) se utilizó como fármaco de control positivo en todos los ensayos antivirales. Infergen = 0,03 ng/mL.
Ensayo antiviral: El virus se diluyó en MEM a una multiplicidad de infección = 0,001 y cada compuesto se diluyó en MEM FBS al 2% usando una serie de dilución 8 semilogarítmica. El compuesto se agregó primero a placas de 96 pocillos de células A549 confluentes seguidas en 5 minutos por virus. Cada dilución del compuesto de prueba se evaluó para determinar la inhibición por triplicado. Después del recubrimiento, las placas se incubaron a 37 °C durante 4 d. Las placas se congelaron a -80 °C.
Ensayo de reducción del rendimiento del virus: Se determinaron los rendimientos de virus infecciosos de cada pocillo del ensayo antiviral. Cada placa de un ensayo antiviral se descongeló. Los pocillos de muestras en cada concentración de compuesto analizada se agruparon y titularon para virus infecciosos mediante ensayo de CPE en células Vero 76. Los pocillos se calificaron para CPE y se calcularon los títulos de virus. A continuación se calculó una reducción del 90% en el rendimiento del virus mediante análisis de regresión. Esto representó una inhibición de un log10 en el título en comparación con los controles de virus no tratados.
Los compuestos de Fórmula (I) son activos contra MERS. La actividad antiviral de compuestos ejemplares se muestra en la Tabla 3, donde "A" indica una EC90 < 10 pM, "B" indica una EC90 s 10 pM y < 50 pM, y "C" indica una EC90 s 50 pM y < 100 pM.
Tabla 3
Figure imgf000214_0001
(Donde los compuestos 265, 266 y 267 son compuestos de referencia).
EJEMPLO 186
ENSAYO VEEV
Se prepararon placas de 96 pocillos de células HeLa-Ohio y se incubaron durante la noche. Las placas se sembraron a 4 X 104 células por pocillo, lo que produjo 90-100% de monocapas confluentes en cada pocillo después de la incubación durante la noche. Los compuestos de prueba en DMSO se iniciaron a una concentración de 100 pM. Se prepararon diluciones en serie de 8 veces en medio MEM con DMSO al 0,1%, FBS al 0% y 50 pg/mL de gentamicina con las concentraciones del compuesto de prueba. A 5 pocillos de prueba en la placa de 96 pocillos se añadieron 100 pL de cada concentración y la placa se incubó a 37°C CO2 al 5% durante 2 h o 18 h. 3 pocillos de cada dilución con el virus de la encefalitis equina venezolana de la cepa TC-83 (ATCC, título madre: 1068 CCID50/mL) preparado en el medio como se describió anteriormente. Se añadieron 2 pocillos (controles de toxicidad no infectados) MEM sin virus. Se infectaron 6 pocillos con controles de virus no tratados. A 6 pocillos se añadieron medios solo como controles celulares. Un compuesto activo conocido y ciego se evaluó en paralelo como un control positivo. La placa se incubó a 37°C CO2 al 5% durante 3 d. La placa se leyó microscópicamente para CPE visual y también se leyó una placa de tinte rojo neutro usando BIO-TEK Instruments INC. EL800. Para los ensayos de reducción del rendimiento del virus, se recogió el fluido sobrenadante de cada concentración. La temperatura se mantuvo a -80 °y cada compuesto se probó por triplicado. El CC50 se determinó mediante análisis de regresión usando el CPE de pocillos de control de toxicidad en comparación con los controles celulares. Los títulos de virus se probaron por triplicado usando un ensayo CCID50 de dilución de criterio de valoración estándar y los cálculos del título se determinaron usando la ecuación de Reed-Muench (1948). Se calculó la concentración del compuesto necesaria para reducir el rendimiento del virus en 1 log10 (90%) utilizando el análisis de regresión (valor EC90). Se calculó la concentración del compuesto necesaria para reducir el rendimiento del virus en un 50% mediante el análisis de regresión (valor EC50).
Los compuestos de Fórmula (I) son activos contra VEEV. Los compuestos 9 (referencia), 25, 55 y 265 (referencia) tuvieron un valor EC50 < 10 pM con una preincubación de 2 h. Los compuestos 9 (referencia), 55 y 265 (referencia) tuvieron un valor EC50 < 10 pM con una preincubación de 18 h.
EJEMPLO 187
ENSAYO DE FIEBRE DEL VALLE DEL RIFT
Los compuestos de Fórmula (I) se analizaron para determinar la actividad contra el virus de la Fiebre del Valle del Rift usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, descritos en Panchal y col., Antiviral Res. (2012) 93(1):23-29).
EJEMPLO 188
ENSAYO CHIKUNGUNYA
Los compuestos de Fórmula (I) se analizaron para determinar la actividad contra el virus Chikungunya usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Los compuestos de Fórmula (I) son activos contra el virus Chikungunya. Los compuestos 9 (referencia), 25, 55 y 265 (referencia) tuvieron un valor EC50 < 10 pM con una preincubación de 2 h.
EJEMPLO 189
ENSAYO SARS
Los compuestos de Fórmula (I) se analizaron para determinar la actividad contra el virus SARS usando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, ensayo de polimerasa SARS. Los compuestos de Fórmula (I) son activos contra el virus SARS. Los compuestos 19, 34, 101, 103, 123, 162, 203 (referencia) y 246 (referencia) tuvieron un valor de IC50 < 10 pM.
EJEMPLO 190
ENSAYO DE CORONAVIRUS
La cepa de p-coronavirus humano OC43 y la cepa de a-coronavirus humano 229E se compraron de ATCC (Manassas, VA; números de artículo VR-1558 y VR-740, respectivamente). 24 horas antes de la dosificación, se colocaron células epiteliales de cuello uterino humano HeLa (ATCC, CCL-2) o fibroblasto pulmonar humano MRC-5 (ATCC, CCL-171) en placas de 96 pocillos a una densidad de 1,5 x 105/mL en medio DMEM complementado con suero fetal bovino al 10%, tampón HEPES al 1%, penicilina/estreptomicina al 1% y aminoácidos no esenciales al 1% (todos Mediatech, Manassas, VA). En el día de la infección, se añadieron compuestos diluidos en serie a las células y se incubaron durante 4 h. Después del final del período de preincubación de 4 h, las células se infectaron con la cepa de coronavirus OC43 o 229E. El inóculo del virus se seleccionó para causar un efecto citopático del 80-90%. Las células infectadas se incubaron durante 5 días a 37 °C con un 5% de CO2. Para desarrollar el ensayo, se reemplazaron 100 pL de medio con 100 pL de reactivo CellTiter-Glo® (Promega, Madison, WI) y se incubaron durante 10 minutos a TA. La luminiscencia se midió en un lector de placas multietiqueta Victor X3. La citotoxicidad potencial del compuesto se determinó usando cultivos paralelos no infectados.
Los compuestos de Fórmula (I) son activos contra el coronavirus. Los compuestos 14, 22, 55, 57, 83, 84, 212a, 212b, 225 y 234 inhibieron el coronavirus a > 50% (inhibición > 50%) en una o más de las siguientes concentraciones: 75 pM, 60 pM, 10 pM y 2 pM. Los compuestos 16, 55, 57, 83, 179 (referencia), 212a y 212b tuvieron un valor EC50 < 10 pM.
Aunque lo anterior se ha descrito con cierto detalle a modo de ilustraciones y ejemplos con fines de claridad y comprensión, los expertos en la técnica entenderán que se pueden realizar modificaciones numerosas y diversas sin alejarse de la presente divulgación. Por lo tanto, debe entenderse claramente que las formas descritas en esta invención son solo ilustrativas y no pretenden limitar el alcance de la presente descripción, sino que también cubren todas las modificaciones y alternativas que vienen con el alcance de la invención.

Claims (24)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en la mejora o tratamiento de una infección viral, donde el compuesto de Fórmula (I) tiene la estructura:
Figure imgf000216_0001
donde RG2 es un alquilo C1-6 no sustituido;
R3A se selecciona del grupo constituido por halo, OH, -OC(=O)R"A y un a-aminoácido unido a O opcionalmente sustituido;
R4A se selecciona del grupo constituido por OH o halo;
Ra1 y Ra2 son independientemente hidrógeno o deuterio;
RA es hidrógeno o deuterio;
R1A se selecciona del grupo constituido por hidrógeno,
Figure imgf000216_0002
R2A es halo o -(CH2)i -6 halógeno;
R5A se selecciona del grupo constituido por un alquilo C1-6 no sustituido, un alquenilo C2-6 no sustituido y un alquinilo C2-6 no sustituido;
R6A y R7A se seleccionan independientemente del grupo constituido por ausente, hidrógeno,
Figure imgf000216_0003
y R7A es ausente o es hidrógeno;
R8A es ausente, hidrógeno, un fenilo opcionalmente sustituido o un naftilo opcionalmente sustituido;
R9A es un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido que se selecciona del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N;
R10A y R11A son independientemente un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, N-unida a triptófano y valina unida a N;
R12A y R13A son independientemente ausente o hidrógeno;
R14A es O-, OH o metilo;
R22A y R23A son cada uno hidrógeno;
R24A se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, un alquilo C1-24 no sustituido y un alquilo -O-C1-24 no sustituido; R"A es un alquilo C1-24 no sustituido;
m es 0 o 1;
s es 0; y
Z1A, Z2A, Z3A y Z4A son cada uno O;
donde la infección viral es causada por un virus que se selecciona del grupo que consiste en un virus Coronaviridae, un virus Togaviridae, un virus Hepeviridae y un virus Bunyaviridae; y
cuando un grupo es descrito como siendo opcionalmente sustituido, ese grupo puede ser no sustituido o sustituido con uno o más grupos seleccionados independientemente de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, aril(alquilo), heteroaril(alquilo), heterociclil(alquilo), hidroxi, alcoxi, acilo, ciano, halógeno, tiocarbonilo, O-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, N-tiocarbamilo, C-amido, N-amido, S-sulfonamido, N-sulfonamido, C-carboxi, O-carboxi, isocianato, tiocianato, isotiocianato, azido, nitro, sililo, sulfenilo, sulfinilo, sulfonilo, haloalquilo, haloalcoxi, trihalometanosulfonilo, trihalometanosulfonamido, un amino, un grupo amino monosustituido y un grupo amino disustituido.
2. El compuesto para uso según la Reivindicación 1, donde el virus es un miembro de la familia del virus Coronaviridae; preferentemente el virus Coronaviridae es un Betacoronavirus; preferentemente el Betacoronavirus es MERS-CoV; o donde el virus es un miembro de la familia del virus Togaviridae; preferentemente el virus Togaviridae es un Alfavirus; preferentemente el Alfavirus es un virus de la encefalitis equina venezolana o virus de Chikungunya.
3. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -2, donde R2A es halo; preferentemente fluoro.
4. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-2, donde R2A es -(CH2)1-6 halógeno; preferentemente -(CH2)1-6F.
5. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-4, donde R4A es OH.
6. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-4, donde R4A es halo; preferentemente F o Cl.
7. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -6, donde R5A es un alquinilo C2-6 no sustituido, preferentemente etinilo.
8. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -6, donde R5A es un alquilo C1-6 no sustituido, preferentemente metilo.
9. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -8, donde R1A es hidrógeno.
10. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -8, donde R1A es
Figure imgf000218_0001
11. El compuesto para su uso según la Reivindicación 10, donde R6A y R7A son independientemente ausente o hidrógeno; o donde R6A es
Figure imgf000218_0002
m es 0; o donde R6A es hidrógeno y m es 1.
R7A es ausente o
12. El compuesto para su uso según la Reivindicación 10, donde R6A y R7A son cada uno
Figure imgf000218_0003
13. El compuesto para su uso según la reivindicación 10, donde R6A y R7A son cada uno isopropiloxicarboniloximetilo.
14. El compuesto para su uso
Figure imgf000218_0004
según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -8, donde R1A is R9A o
Figure imgf000218_0005
15. El compuesto para su uso según la reivindicación 14, donde R8A es un arilo opcionalmente sustituido; y donde R9A es un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N; preferentemente R8A es un fenilo no sustituido; y R9A se selecciona del grupo que consiste en
Figure imgf000219_0001
16. El compuesto para su uso según la reivindicación 14, donde R10A y R11A son independientemente un a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N, o un derivado de éster de a-aminoácido unido a N opcionalmente sustituido, donde el derivado de éster de aaminoácido unido a N opcionalmente sustituido es un éster alquilo C1-6 no sustituido, un éster cicloalquilo C3-6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C6 opcionalmente sustituido, un éster arilo C10 opcionalmente sustituido o un éster bencílico opcionalmente sustituido de un a-aminoácido unido a N seleccionado del grupo que consiste en alanina unida a N, asparagina unida a N, aspartato unido a N, cisteína unida a N, glutamato unido a N, glutamina unida a N, glicina unida a N, prolina unida a N, serina unida a N, tirosina unida a N, arginina unida a N, histidina unida a N, isoleucina unida a N, leucina unida a N, lisina unida a N, metionina unida a N, fenilalanina unida a N, treonina unida a N, triptófano unido a N y valina unida a N; preferentemente, donde R10A y R11A se seleccionan independientemente del grupo que consiste en
Figure imgf000219_0002
18. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-16, donde R3A es -OC(=O)R"A o un aaminoácido unido a O opcionalmente sustituido.
19. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-16, donde R3A es halo; preferentemente fluoro o cloro.
20. El compuesto para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde RA es hidrógeno.
21. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-20, donde Ra1 y Ra2 son ambos hidrógeno.
22. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -21, donde B1A es
Figure imgf000219_0003
23. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 -21, donde B1A es
Figure imgf000220_0001
donde RG2 es -CH2CH3.
24. El compuesto para su uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1-2, donde el compuesto de Fórmula (I) se selecciona del rupo que consiste en:
Figure imgf000220_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores; preferentemente, el compuesto se selecciona
Figure imgf000221_0001
Figure imgf000222_0001
Figure imgf000223_0001
ticamente aceptable de cualquiera de los anteriores.
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