ES2830381T3

ES2830381T3 - Composiciones que comprenden un conjugado de polímero-proteína y un polímero sensible al ambiente y sus usos

Info

Publication number: ES2830381T3
Application number: ES14741960T
Authority: ES
Inventors: Yonatan Shachaf; Aharon Wechsler
Original assignee: Regentis Biomaterials Ltd
Current assignee: Regentis Biomaterials Ltd
Priority date: 2013-06-27
Filing date: 2014-06-26
Publication date: 2021-06-03
Anticipated expiration: 2034-06-26
Also published as: CN105407933A; IL243286A0; US10434215B2; CA2913405A1; WO2014207749A1; CN107281545A; HK1244518A1; CN105407933B; EP3013377A1; EP3013377B1; US20160296666A1; HK1220411A1

Abstract

Una composición farmacéutica, cosmética o cosmecéutica que comprende: (a) un conjugado de polímero-polipéptido que comprende un polipéptido que tiene unido al mismo al menos dos restos poliméricos, comprendiendo dicho polipéptido una proteína de matriz extracelular o un fragmento del mismo, y comprendiendo cada uno de dichos restos poliméricos un polímero sintético seleccionado del grupo que consiste en un poli(etilenglicol) y un polóxamero (copolímero de poli(etilenglicol-propilenglicol)), en la que al menos uno de dichos restos poliméricos además comprende al menos un grupo polimerizable, en la que las moléculas de dicho conjugado no se unen covalentemente entre sí; (b) un polóxamero; (c) un polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable; y (d) un portador acuoso farmacéutica, cosmética o cosmecéuticamente aceptable, exhibiendo la composición una gelificación térmica inversa, en la que un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición es de al menos 100 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C, y menor que 100 Pa a una temperatura de 4 °C.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones que comprenden un conjugado de polímero-proteína y un polímero sensible al ambiente y sus usos

La presente invención, en algunas realizaciones de la misma, se refiere a composiciones sensibles al ambiente, y más en particular, pero no exclusivamente, a composiciones que comprenden un conjugado de proteína-polímero y un polímero sensibles al ambiente a los armazones formados a partir de estos y a los usos de los mismos en, por ejemplo, la manipulación genética de tejidos.

Los polímeros termosensibles son capaces de producir soluciones acuosas de baja viscosidad a baja temperatura y formar un gel a una temperatura más alta, una propiedad también denominada ''gelificación térmica inversa". Por lo tanto, estos polímeros también se denominan polímeros "termosensibles inversos”. Los polímeros termosensibles se han usado ampliamente en aplicaciones biomédicas, tal como el desarrollo de sistemas de administración de fármacos inyectables y controlados [Qiu & Park, Adv Drug Deliv Rev 2001, 53: 321-339]. Además, se han usado polímeros termosensibles en el desarrollo de implantes generados in situ. [Cohn et al. Biomacromolecules 2005. 6:1168-1175] o tapones [Bouchot et al., Ann Thorac Surg 2010. 89:1912-1917].

La Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos Núm. 2011/0052490 describe un uso de composiciones que comprenden un polímero termo-sensible purificado en un procedimiento endoscópico para resección de la mucosa gastrointestinal.

Se ha informado que los polímeros termosensibles que tienen una estructura de tres bloques de poli(óxido de etileno)(PEO)-poli(óxido de propileno) (PPO)-PEO, denominados "poloxámeros", exhiben gelificación térmica inversa. La transición sol-gel endotérmica se produce debido a un aumento de entropía causado por la liberación de moléculas de agua unidas a los segmentos de PPO a medida que aumenta la temperatura [Alexandridis, Colloid Surface A 1995.

96:1-46].

Polóxamero F127 Pluronic® es un copolímero tribloque sintético bien conocido (PE099-PP067-PE099) [Nagarajan and Ganesh, J Colloid Interface Sci 1996. 184: 489-499; Sharma and Bhatia, Int J Pharm 2004, 278: 361-377; Cohn et al. Biomaterials 2003. 24: 3707-3714], que exhibe una propiedad de gelificación térmica inversa (RTG) por encima de una temperatura crítica en soluciones acuosas. Polóxamero F127 Pluronic® está aprobado para su uso en seres humanos por la FDA US y ha sido investigado para aplicaciones biomédicas tal como portador de fármacos para una variedad de vías de administración, piel artificial y como barrera para el tratamiento de adherencias posoperatorias [Escobar-Chavez, J Pharm Pharmaceut Sci 2006, 9: 339-358].

Los polímeros termosensibles adicionales que exhiben gelificación térmica inversa incluyen poli (N-isopropilacrilamida) (PNIPAAm) y poli (N, N-dietilacrilamida) (PDEAAm) comercialmente disponibles.

La Solicitud de Patente Internacional PCT/112004/001136 (publicada como el documento WO 2005/061018) y la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.842.667 describen conjugados polímero-proteína tales como conjugados de PEG (polietilenglicol)-fibrinógeno, y armazones biodegradables generados por reticulación de los conjugados, por ejemplo, por luz UV. Los armazones se pueden usar para tratar trastornos que requieran regeneración de tejidos.

Los hidrogeles de PEG-fibrinógeno imitan la matriz extracelular (ECM) y contienen los dominios de señalización celular necesarios dentro de su secuencia de aminoácidos, que incluyen los sustratos de adhesión y degradación de proteasas, mientras que las propiedades estructurales de la red de hidrogel biosintética se controlan mediante el componente sintético [Dikovsky et al., Biomaterials 2006, 27: 1496-1506].

La solicitud de patente internacional PCT/IL2010/001072 (publicada como el documento WO 2011/073991) divulga conjugados polímero-proteína que comprenden una proteína unida a al menos dos restos poliméricos, al menos uno de los cuales exhibe gelificación térmica inversa.

Los conjugados son adecuados para reticularse mediante reticulación no covalente y/o covalente. Los conjugados y las composiciones de la materia formadas mediante la reticulación de los conjugados se pueden usar para el crecimiento celular, formación de tejido y el tratamiento de trastornos caracterizados por daño o pérdida de tejido.

La técnica adicional incluye Cohn et al. [Poiym Adv Tech 2007; 18: 731-736].

Sumario de la invención

Es en dicho contexto, y contra las limitaciones y problemas asociados con estos, que se ha desarrollado la presente invención.

Para lograr esto, la composición farmacéutica, cosmética o cosmecéutica de la invención comprende las características reivindicadas en la reivindicación 1.

Las realizaciones ventajosas de la invención se reivindican en las reivindicaciones dependientes.

De acuerdo con la invención, se proporciona una composición farmacéutica, cosmética o cosmecéutica que comprende:

(a) un conjugado de polímero-polipéptido que comprende un polipéptido que tiene unido al mismo al menos dos restos poliméricos, comprendiendo dicho polipéptido una proteína de matriz extracelular o un fragmento del mismo, y cada uno de dichos restos poliméricos que comprende un polímero sintético seleccionado del grupo que consiste en a poli(etilenglicol) y un polóxamero (copolímero de poli(etilenglicol-propilenglicol), en la que al menos uno de dichos restos poliméricos además comprende al menos un grupo polimerizable, en la que las moléculas de dicho conjugado no se unen covalentemente entre sí;

(b) un polóxamero;

(c) un polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable; y

(d) un portador acuoso farmacéutica, cosmética o cosmecéuticamente aceptable, exhibiendo la composición una gelificación térmica inversa,

en la que un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición es de al menos 100 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C, y menor que 100 Pa a una temperatura de 4 °C.

De acuerdo con un aspecto de algunas realizaciones de la invención, se proporciona un kit que comprende una composición descrita en la presente memoria.

De acuerdo con un aspecto de algunas realizaciones de la invención, se proporciona una composición de la materia que comprende una forma reticulada de una composición descrita en la presente memoria, la forma reticulada que comprende una pluralidad de moléculas del conjugado y el polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable reticulado de forma no covalente a otro después de la polimerización del grupo polimerizable.

De acuerdo con un aspecto de algunas realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento de producción de una composición de la materia descrita en la presente memoria, el procedimiento que comprende someter una composición descrita en la presente memoria a condiciones que efectúan la reticulación covalente por polimerización del grupo polimerizable, de este modo se produce la composición de la materia.

De acuerdo con un aspecto de algunas realizaciones de la invención, se proporciona un uso de una composición o una composición de la materia descrita en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para reparar el daño tisular.

De acuerdo con un aspecto de algunas realizaciones de la invención, se proporciona el uso de una composición o una composición de la materia descrita en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para tratar un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, la composición se caracteriza por una tasa de disolución menor que 50 mg/cm2 por hora en un ambiente acuoso.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, una concentración del conjugado en la composición está en un intervalo de 2 a 15 mg/ml.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, una concentración del polóxamero en la composición está en un intervalo de 13 a 25 por ciento en peso.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable en la composición está en un intervalo de 7,8 a 15 por ciento en peso.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, una concentración total del polóxamero y el polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable en la composición es al menos 21 por ciento en peso.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, el polipéptido comprende un fibrinógeno o un fragmento del mismo.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, la gelificación térmica inversa se caracteriza por una temperatura de transición en un intervalo de 10 °C a 20 °C.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, la composición de la materia es un armazón.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, la composición de la materia es un hidrogel.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, la composición de la materia se caracteriza por un módulo de almacenamiento a cizalla de al menos 30.000 Pa a una temperatura de 17 °C.

De acuerdo con algunas realizaciones de la invención, en la composición para usar o composición de la materia para usar como se describe en la presente memoria, el tejido comprende el cartílago.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y/o científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece la invención. Aunque se pueden usar procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria en la práctica o ensayo de realizaciones de la invención, a continuación se describen ejemplos de procedimientos y/o materiales. En caso de conflicto, prevalecerá la especificación de la patente, que incluye las definiciones. Además, los materiales, procedimientos y ejemplos son solo ilustrativos y no se pretende que sean necesariamente limitantes.

Breve descripción de los dibujos

Algunas realizaciones de la invención se describen en la presente memoria, solo a modo de ejemplo, con referencia a los dibujos adjuntos. A continuación con referencia específica a los dibujos en detalle, se destaca que los detalles que se muestran son a modo de ejemplo y con el propósito de una discusión ilustrativa de las realizaciones de la invención. A este respecto, la descripción tomada con los dibujos pone de manifiesto para los expertos en la técnica cómo se pueden poner en práctica las realizaciones de la invención.

En los dibujos:

La FIG. 1 es un gráfico que muestra el módulo de almacenamiento a cizalla (G') en función de temperatura para un ejemplo de composición que comprende 7,3 mg/ml de PEG-fibrinógeno, 15,4% de polóxamero F127, y 8,1% de polóxamero F127-diacrilato (gris oscuro) y una compositivo que comprende 7,4 mg/ml de PEG-fibrinógeno y 10% de polóxamero F127-diacrilato (gris claro);

Las FIGS. 2A-2B son imágenes que muestran un ejemplo de composición que exhibe fluidez a 4 °C (FIG. 2A) y rigidez a temperatura ambiente (FIG. 2B);

La FIG. 3 es una imagen que muestra la inyección de un ejemplo de composición por medio de una jeringa a temperatura ambiente;

La FIG.4 es una imagen que muestra adherencia de un ejemplo de composición a una superficie vertical a temperatura ambiente;

Las FIGS. 5A-5D son imágenes que muestran un ejemplo de composición (capa inferior gris) antes de la (FIG. 5A), inmediatamente después (FIG. 5B) es una incubación 1 horas después (FIG. 5C) y dos horas después (FIG. 5D) con una solución de colorante acuosa (capa superior oscura);

La FIG. 6 presenta una imagen que muestra un ejemplo de composición a la que se le añadió carmín índigo para su visualización (capa inferior oscura) incubada con una solución acuosa (capa superior transparente);

Las FIG. 7A-7D son imágenes que muestran la inyección de un ejemplo de composición en una lesión artificial (FIG.

7A), la composición que llena la lesión artificial (Figura 7B), irradiación UV para reticular la composición (Figura 7C), y un hidrogel formado por reticulación de la composición (Figura 7D);

Las FIGS. 8A-8D son imágenes que muestran la inyección bajo el agua de un ejemplo de composición en un molde cilíndrico a 21 °C (FIG. 8A), la retirada del molde después de la irradiación UV durante 5 minutos a 4 mW/cm2 (FIG.

8B), y el hidrogel formado mediante la reticulación de la composición bajo el agua (Figuras 8B-8D);

La FIG. 9 es un gráfico que muestra el módulo de almacenamiento a cizalla (G') en función de la temperatura para ejemplos de composiciones con 0, 4, 7 o 10 mg/ml de PEG-fibrinógeno;

La FIG. 10 es un gráfico que muestra el cambio en el módulo de almacenamiento a cizalla (G') después de la reticulación de ejemplos de composiciones con 0, 4, 7 o 10 mg/ml de PEG-fibrinógeno;

La FIG. 11 es un gráfico que muestra el módulo de almacenamiento a cizalla (G') en función de la temperatura para los ejemplos de composiciones con 7,3 mg/m1 de PEG-fibrinógeno o F127-fibrinógeno, 15,4% de polóxamero F127, y 8,1% de polóxamero F127-diacrilato;

La FIG. 12 es un gráfico que muestra el cambio en el módulo de almacenamiento a cizalla (G') después de la reticulación de los ejemplos de composiciones con 7,3 mg/ml de PEG-fibrinógeno o F127-fibrinógeno, 15,4% de polóxamero F127, y 8,1% polóxamero F127-diacrilato;

La FIG. 13 es un gráfico de barras que muestra el cambio en masa seca de un ejemplo de hidrogel después de 12 o 34 días de incubación en PBS (pH 7,4) a 50 °C; y

La FIG. 14 es un gráfico de barras que muestra el cambio en la concentración de fibrinógeno en un ejemplo de hidrogel después de 24 horas de incubación en PBS con y sin 0,1% de tripsina a 37 °C.

Descripción de realizaciones específicas de la invención

La presente invención, en algunas de sus realizaciones, se refiere a composiciones sensibles al ambiente, y más en particular, pero no exclusivamente, a composiciones que comprenden un conjugado de polímero-proteína y un polímero sensible al ambiente, a los armazones formados a partir del mismo, y sus usos en, por ejemplo, la manipulación genética de tejidos.

Antes de explicar al menos una realización de la invención en detalle, se debe entender que la invención no está necesariamente limitada en su aplicación a los detalles expuestos en la siguiente descripción o ejemplificados por los Ejemplos. La invención es susceptible de otras realizaciones o se puede practicar o llevarse a cabo de diversas formas.

Los inventores de la presente han diseñado y preparado y puesto en práctica con éxito una composición que puede exhibir propiedades que son muy adecuadas para formar un armazón a partir de la misma. Al idear tal composición, los inventores de la presente han considerado que tal composición debería exhibir las siguientes propiedades generales: fluidez relativamente alta a bajas temperaturas, viscosidad relativamente alta a temperatura ambiente y capacidad para reticularse en un medio fisiológico, tal como como in vivo. Los inventores de la presente han considerado además la incorporación ventajosa de un polipéptido (por ejemplo, una proteína) dentro de su estructura. Los inventores de la presente han considerado que tales propiedades pueden permitir una preparación y manipulación sencillas de un líquido que fluye libremente a bajas temperaturas (por ejemplo, después de la refrigeración), lo que produce una composición que es suficientemente viscosa a temperatura ambiente para permanecer en un lugar deseado sin derrame, mientras que es suficientemente líquida como para ser inyectable (por ejemplo, mediante una jeringa). La composición, una vez colocada, después se puede reticular para formar un material deseado (por ejemplo, un armazón), que puede comprender un polipéptido que proporcione propiedades de señalización biológica y/o biodegradabilidad ventajosas.

Los inventores de la presente han concebido que los polímeros que exhiben gelificación térmica inversa, tal como los poloxámeros, pueden ser útiles para obtener las viscosidades deseadas a diversas temperaturas. Se debe apreciar que en la composición diseñada y practicada por los inventores de la presente, la gelificación térmica inversa de dichos polímeros se efectúa antes de la inyección, en lugar de realizarse in situ.

Después de una laboriosa experimentación, los inventores de la presente han ideado una composición adecuada, que combina al menos los siguientes componentes: un conjugado polímero-polipéptido que comprende un grupo polimerizable que facilita la reticulación; un poloxámero, que proporciona alta viscosidad a temperatura ambiente debido a las propiedades de gelificación térmica inversa; y un poloxámero sustituido con al menos un grupo polimerizable, que además facilita tanto la reticulación como el aumento de la viscosidad a temperatura ambiente.

Como se demuestra en la sección de Ejemplos a continuación, se demostró que dicha composición exhibía las propiedades reológicas y el rendimiento farmacológico deseados.

Por tanto, de acuerdo con un aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona una composición de gelificación térmica inversa caracterizada por:

exhibir un módulo de almacenamiento a cizalla de al menos 100 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C, and un módulo de almacenamiento a cizalla menor que 100 Pa a una temperatura de 4 °C; y

ser curable en un medio fisiológico.

Como se usa en la presente memoria, el término "medio fisiológico" se refiere a agua o una solución acuosa, caracterizada por un pH en un intervalo de 5 a 9, ya una temperatura en un intervalo de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 37 °C. En algunas realizaciones, el medio fisiológico es una solución salina tampón fosfato (pH 7,4), a una temperatura de aproximadamente 20 °C.

Como se usa en la presente memoria, el término "curable" se refiere a la capacidad de someterse a curado en respuesta a un estímulo químico y/o físico (por ejemplo, iluminación). Cuando el término "curable" está asociado con las condiciones dadas (por ejemplo, "en un medio fisiológico"), el estímulo que efectúa el curado debe ser compatible con las condiciones dadas (por ejemplo, no implica un pH o temperatura incompatible con la definición de las condiciones), así como efectuar el curado en dichas condiciones.

En la presente memoria, los términos "curado" y "curar" y sus derivados se refieren al endurecimiento de una sustancia mediante la formación de reticulaciones en respuesta a un estímulo químico y/o físico (por ejemplo, iluminación). En algunas realizaciones, el endurecimiento de una sustancia da como resultado un módulo de almacenamiento a cizalla de la sustancia de al menos 30.000 Pa a una temperatura de 17 °C.

Se espera que durante la vigencia de una patente que madura a partir de esta solicitud se desarrollarán muchos polímeros relevantes que exhiban gelificación térmica inversa y el alcance de la frase "composición de gelificación térmica inversa" se considera que incluye las composiciones basada en todas estas nuevas tecnologías a priori .

Una composición como se describe en la presente memoria se puede considerar como una composición sensible al ambiente, ya que presenta cambios en sus propiedades (por ejemplo, propiedades reológicas, curabilidad) que responden a las condiciones ambientales (por ejemplo, temperatura, iluminación, etc.).

A lo largo de la presente memoria, las composiciones descritas se denominan indistintamente "composiciones termosensibles", "composiciones de gelificación térmica inversa" y "composiciones sensibles al ambiente".

De acuerdo con un aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona una composición farmacéutica, cosmética o cosmecéutica que comprende:

un conjugado de polímero-polipéptido que comprende un polipéptido que tiene unido al mismo al menos dos restos poliméricos, en el que al menos uno de los restos poliméricos también comprende al menos un grupo polimerizable, y en el que las moléculas del conjugado no están unidas covalentemente entre sí;

un polóxamero;

un polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable (también denominado en la presente memoria como un "polóxamero polimerizable", por propósitos de brevedad); y

un portador farmacéutica, cosmética o cosmecéuticamente aceptable,

exhibiendo la composición gelificación térmica inversa.

Como se ejemplifica en la presente memoria, tal composición es susceptible de curar al hacer que las moléculas de conjugado (que no están unidas covalentemente entre sí) se unan covalentemente por polimerización de grupos polimerizables en la composición.

Tal composición se puede considerar como una composición sensible al ambiente, como se define en la presente memoria.

En la presente memoria, el término "poloxámero" se refiere a un copolímero en bloque de poli(óxido de etileno) (PEO) -poli(óxido de propileno) (PPO) que tiene una estructura de PEO-PPO-PEO. Los poloxámeros adecuados están disponibles comercialmente, por ejemplo, como polímeros Pluronic®. Un bloque "PEO" es un resto en el que los residuos de óxido de etileno comprenden al menos el 90% de los átomos del resto (excepto los átomos de hidrógeno), y un bloque "PPO" es un resto en el que los residuos de óxido de propileno comprenden al menos el 90% de los átomos del resto (excepto los átomos de hidrógeno).

En la presente memoria, a condición de que no se indique que un poloxámero está sustituido con al menos un grupo polimerizable, se debe entender que los poloxámeros sustituidos con al menos un grupo polimerizable no están abarcados por el término "poloxámero".

Como se usa en la presente memoria y en la técnica, la frase "gelificación térmica inversa" describe una propiedad por la cual una sustancia (por ejemplo, una composición descrita en la presente memoria) aumenta la viscosidad después de un aumento de la temperatura. El aumento de viscosidad puede ser, por ejemplo, la conversión de un estado líquido a un estado semisólido (por ejemplo, gel), conversión de un estado líquido a un estado líquido más viscoso, o conversión de un estado semisólido a un estado semisólido más rígido. En la presente memoria, todas estas conversiones están abarcadas por el término "gelificación". El aumento de temperatura que afecta la gelificación puede estar entre dos temperaturas. Opcionalmente, la gelificación se efectúa a una temperatura dentro del intervalo de 0 °C a 55 °C.

Por propósitos de brevedad, el término "termosensible" se refiere en la presente memoria a la propiedad de exhibir gelificación térmica inversa (tanto para una composición como para una sustancia).

Como se usa en la presente memoria y en la técnica, un "módulo de cizalla" se define como la relación del esfuerzo de cizalla a la deformación por cizalla. El módulo de cizalla puede ser una variable compleja, en cuyo caso el "módulo de almacenamiento a cizalla" (indicado por G') es el componente real, y el "módulo de pérdida de cizalla" (indicado por G") es el componente imaginario. El módulo de almacenamiento y el módulo de pérdida en sólidos viscoelásticos miden la energía almacenada, que representa la porción elástica, y la energía disipada como calor, que representa la porción viscosa.

En algunas realizaciones, la gelificación térmica inversa de la composición es tal que la composición exhibe un módulo de almacenamiento a cizalla de al menos 100 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C (es decir, a todas las temperaturas dentro del intervalo mencionado anteriormente) y un módulo de almacenamiento a cizalla menor que 100 Pa a la temperatura más baja de 4 °C.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 1000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 2000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 5000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 10000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es aproximadamente 12000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C.

En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es no mayor que 20000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es no mayor que 15000 Pa a temperaturas en un intervalo de 17 °C a 21 °C.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, el módulo de almacenamiento a cizalla está en un intervalo de 9.000 Pa a 15.000 Pa a una temperatura de 17 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla está en un intervalo de 10.000 Pa a 13.000 Pa a una temperatura de 17 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es aproximadamente 12.000 Pa a una temperatura de 17 °C.

En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 10 Pa a una temperatura de 4 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 5 Pa a una temperatura de 4 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 2 Pa a una temperatura de 4 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 1 Pa a una temperatura de 4 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 0,5 Pa a una temperatura de 4 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es menor que 0,2 Pa a una temperatura de 4 °C.

Los líquidos de baja viscosidad son particularmente ventajosos en la etapa de fabricación de composiciones tales como las descritas en la presente memoria, ya que permiten fácilmente mezclar los ingredientes, así como etapas de purificación y esterilización tales como filtración.

Sin suscribir a ninguna teoría en particular, se considera que las composiciones que tienen un estado de baja viscosidad a temperaturas moderadamente bajas son ventajosas porque requieren solo un grado moderado de enfriamiento (por ejemplo, de este modo se ahorra energía) para beneficiarse de las ventajas mencionadas anteriormente del estado de baja viscosidad.

En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la gelificación térmica inversa se caracteriza por una temperatura de transición (en el que la composición está en un estado más viscoso a temperaturas por encima de la temperatura de transición) en un intervalo de 10 °C a 20 °C. En algunas realizaciones, la gelificación térmica inversa se caracteriza por una temperatura de transición en un intervalo de 13 °C a 19 °C. En algunas realizaciones, la gelificación térmica inversa se caracteriza por una temperatura de transición en un intervalo de 15 °C a 18 °C.

La temperatura de transición se puede determinar usando procedimientos conocidos en la técnica mediante la identificación de una temperatura a la que la composición experimente un cambio repentino en las propiedades, por ejemplo, un cambio repentino en el módulo de almacenamiento a cizalla y/o una transición de fase determinada mediante calorimetría.

En algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 10 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 30 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 100 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 300 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 1.000 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 3.000 veces. En algunas realizaciones, la transición térmica inversa de la composición aumenta un módulo de almacenamiento a cizalla de la composición en al menos 10.000 veces.

Como se ejemplifica en la presente memoria, los ejemplos de composiciones conservan sus ventajosas propiedades reológicas y de curado incluso después de incubarse en agua.

Sin suscribir a ninguna teoría particular, se considera que tal propiedad mejora la utilidad de las composiciones descritas en la presente memoria para aplicaciones en un ambiente acuoso, que incluye ambientes in vivo.

Por tanto, de acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la composición es resistente al agua.

En la presente memoria, el término “resistente al agua" se refiere a una sustancia (por ejemplo, una composición descrita en la presente memoria) que, después de su incubación en agua durante al menos una hora, la sustancia no produce una absorción apreciable de agua ni el agua produce una absorción apreciable de la sustancia o porción de la misma. La sustancia retiene de este modo un límite identificable y relativamente estacionario con el agua adyacente, que se puede volver muy visible mediante la adición de un colorante soluble en agua al agua o sustancia, como se ejemplifica en la presente memoria.

En la presente memoria, la frase "absorción apreciable" se refiere a un movimiento neto de moléculas de una sustancia a otra (por ejemplo, de una composición descrita en la presente memoria al agua, o viceversa) en un grado de al menos 500 mg/cm2.

En algunas realizaciones, la resistencia al agua es tal que la composición se caracteriza por una tasa de disolución menor que 100 mg/cm2 por hora en un ambiente acuoso.

Como se define en la presente memoria, la "tasa de disolución" se determina mediante el contacto de la composición con una solución acuosa (por ejemplo, solución salina tampón fosfato pH 7,4) durante una hora en ausencia de agitación, por ejemplo, al colocar suavemente la solución acuosa sobre la composición, y determinar una cantidad de disolución de la composición (determinada por una disminución en el peso de la composición) a una temperatura de 20 °C. En algunas realizaciones, la tasa de disolución es menor que 50 mg/cm2 por hora. En algunas realizaciones, el cambio de peso es menor que 40 mg/cm2 por hora. En algunas realizaciones, el cambio de peso es menor que 30 mg/cm2 por hora.

El cambio de peso en unidades de mg/cm2 se puede determinar mediante la medición de un cambio de peso de una composición en una muestra y la división del cambio de peso por un área de la interfaz entre la composición y la solución acuosa. Como se ejemplifica en la presente memoria, dicha prueba se puede realizar usando aproximadamente 1 ml de cada una de la composición y la solución acuosa, con una interfaz entre la composición y el agua de aproximadamente 38 mm2.

El término "resistente al agua" abarca tanto sustancias inmiscibles en agua como sustancias que son miscibles con agua cuando se agitan suficientemente, pero que resisten el agua (por ejemplo, se disuelven muy lentamente en el agua) en ausencia de agitación suficiente.

El conjugado de polímero-polipéptido:

El conjugado de polímero-polipéptido de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en esta sección se puede usar en el contexto de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos de las invenciones descritas en la presente memoria, y se puede combinar con un polóxamero de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria y con un polóxamero polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del conjugado de polímero-polipéptido (o polímero-proteína) en la composición está en un intervalo de 2 a 15 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 5 a 10 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 6 a 9 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado es de aproximadamente 7,3 mg/ml.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del conjugado en la composición está en un intervalo de 2 a 8 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 5 a 8 mg/ml.

En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 6 a 8 mg/ml.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del conjugado en la composición está en un intervalo de 6 a 15 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 6 a 10 mg/ml. En algunas realizaciones, una concentración del conjugado está en un intervalo de 6 a 9 mg/ml.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el conjugado tiene la siguiente fórmula general:

X(-Y-Zm)n

en el que X es un polipéptido como se describe en la presente memoria, Y es un resto polimérico como se describe en la presente memoria, Z es un grupo polimerizable como se describe en la presente memoria, n es un número entero mayor que 1 (por ejemplo, 2, 3, 4 y hasta 20) y m es 1 o un número entero mayor que 1 (por ejemplo, 2, 3, 4 y hasta 20) que representa el número de grupos polimerizables por resto polimérico.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, m está en un intervalo de 1 a 10. En algunas realizaciones, m está en un intervalo de 1 a 4. En algunas realizaciones, m es 1.

Se debe entender que dado que la fórmula anterior incluye más de un resto -Y-Zm, diferentes restos -Y-Zm en un conjugado pueden tener opcionalmente valores diferentes para m.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, los restos poliméricos comprenden un polímero sintético. Los poloxámeros (por ejemplo, poloxámero F127) y el poli (etilenglicol) son ejemplos de polímeros sintéticos adecuados para restos poliméricos de acuerdo con realizaciones de la presente invención.

Sin suscribir a ninguna teoría particular, se considera que la conjugación de un polímero sintético con un polipéptido (por ejemplo, una proteína natural como el fibrinógeno) proporciona un medio para crear hidrogeles biocompatibles mientras se controlan sus propiedades físicas (por ejemplo, densidad, rigidez y degradabilidad proteolítica) a través del componente sintético versátil sin comprometer la biocompatibilidad.

El polipéptido del conjugado tiene al menos 10 aminoácidos de longitud, opcionalmente, al menos 20 aminoácidos de longitud, y opcionalmente al menos 50 aminoácidos de longitud.

El término "polipéptido" como se usa en la presente memoria abarca polipéptidos nativos (productos de degradación, polipéptidos sintetizados sintéticamente o polipéptidos recombinantes) y peptidomiméticos (típicamente, polipéptidos sintetizados sintéticamente), así como peptoides y semipeptoides que son análogos de polipéptidos, que pueden tener, por ejemplo, modificaciones que hacen que los polipéptidos sean más estables mientras están en un cuerpo o más capaces de penetrar en las células. Tales modificaciones incluyen, pero no se limitan a, modificación del extremo N-terminal, modificación del extremo C-terminal, modificación del enlace peptídico, que incluye, pero sin limitación, CH²-NH, CH²-S, CH²-S=O, O=C-NH, CH²-O, CH²-CH², S=C-NH, CH=CH o CF = CH, modificaciones del esqueleto y modificación de residuos. Los procedimientos para preparar compuestos peptidorniméticos son bien conocidos en la técnica y se especifican, por ejemplo, en Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., Chapter 17,2, F. Choplin Pergamon Press (1992). A continuación se proporcionan detalles adicionales.

Los enlaces peptídicos (-CO-NH-) dentro del polipéptido pueden estar sustituidos, por ejemplo, por enlaces N-metilados (-N (CH3) -CO-), enlaces éster (-C(R)HCO-O-C(R)-N), enlaces cetometileno (-CO-CH²-), enlaces a-aza (-NH-N(R)-CO-), en el que R es cualquier alquilo, por ejemplo, metilo, enlaces amina (-CH²-NH-), enlaces hidroxietileno (-CH(OH)-CH²-), enlaces tioamido (-CS-NH-), enlaces dobles olefínicos (-CH=CH-), enlaces retroamida (-NH-CO-), derivados de péptidos (-N(R)-CH²-CO-), en el que R es la cadena lateral "normal", presentada naturalmente en el átomo de carbono. Estas modificaciones pueden ocurrir en cualquiera de los enlaces a lo largo de la cadena del polipéptido e incluso en varios (2-3) al mismo tiempo.

Como se usa a lo largo de la presente memoria, se entiende que el término "aminoácido" o "aminoácidos" incluye los 20 aminoácidos naturales; los aminoácidos frecuentemente modificados en forma pos-traduccional in vivo, que incluyen, por ejemplo, hidroxiprolina, fosfoserina y fosfotreonina; y otros aminoácidos inusuales que incluyen, pero sin limitación, ácido 2-aminoadípico, hidroxilisina, isodesmosina, nor-valina, nor-leucina y ornitina. Además el término "aminoácido" incluye D y L-aminoácidos.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polipéptido comprende una proteína o un fragmento de la misma.

En algunas realizaciones, los términos "polipéptido" y "proteína" se usan de modo indistinto.

La proteína puede ser una proteína natural (por ejemplo, una proteína que existe en organismos eucariotas y/o procariotas, células, material celular, material no celular y similares) o un polipéptido homólogo (por ejemplo, al menos 90% homólogo, opcionalmente al menos 95% homóloga, y opcionalmente al menos 99% homólogo) a una proteína natural.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la proteína (o fragmento de proteína) está desnaturalizada.

Se debe entender que la proteína descrita en la presente memoria puede comprender opcionalmente más de una cadena polipeptídica.

En realizaciones que comprenden una proteína caracterizada por más de una cadena polipeptídica, el conjugado descrito en la presente memoria comprende opcionalmente un polipéptido de la proteína.

Alternativamente, el conjugado descrito en la presente memoria comprende una pluralidad de polipéptidos de la proteína (por ejemplo, todos los polipéptidos de la proteína). En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la pluralidad de polipéptidos están unidos entre sí (por ejemplo, mediante enlaces no covalentes y/o covalentes) para formar un multímero (por ejemplo, un dímero, un trímero, un tetrámero, un hexámero, etc.), el multímero tiene unido al menos dos restos poliméricos, como se describe en la presente memoria. En algunas realizaciones, los polipéptidos de la proteína están separados (por ejemplo, separados por desnaturalización de la proteína), de modo que el conjugado descrito en la presente memoria es una mezcla de diferentes especies de conjugado, en el que cada una de las especies de conjugado comprende un polipéptido diferente.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polipéptido (por ejemplo, proteína o fragmento de proteína) se selecciona para exhibir una actividad biológica. En algunas realizaciones, la actividad biológica comprende soporte para el crecimiento y/o invasión celular.

Los ejemplos de proteínas que presentan una actividad biológica que es ventajosa en el contexto de las realizaciones de la presente invención incluyen, sin limitación, una proteína de señalización celular, una proteína de matriz extracelular, una proteína de adhesión celular, un factor de crecimiento, proteína A, una proteasa y un sustrato de proteasa. En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la proteína es una proteína de matriz extracelular.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polipéptido comprende un polipéptido de fibrinógeno (cadenas a , b y/o y de fibrinógeno) o un fragmento del mismo. En algunas realizaciones, el conjugado descrito en la presente memoria comprende las cadenas a , b y/o y de fibrinógeno. En algunas realizaciones, el polipéptido es un fibrinógeno desnaturalizado (por ejemplo, una mezcla de cadenas a , b y/o Y de fibrinógeno desnaturalizado).

Los ejemplos de proteínas de matriz extracelular incluyen, pero sin limitación, fibrinógeno (por ejemplo, cadena a , -Acceso Genbank Núm. NP_068657; cadena b-Acceso Genbank Núm. P02675; cadena Y-Acceso Genbank Núm. P02679), colágeno (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000079), fibronectina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_002017), vimentina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_003371), elastina, fibulina, laminina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP 000218) y gelatina.

Los ejemplos de proteínas de señalización celular incluyen, pero sin limitación, proteína quinasa activada por mitógenos p38 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_002736), factor nuclear kappaB (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_003989), proteína inhibidora de Raf quinasa (RKIP) (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. XP_497846), Raf-1 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. n P_002871), m Ek (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_002746), proteína quinasa C (PKC) (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. Np_002728), fosfoinositido-3-quinasa gamma (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_002640), receptor de tirosina quinasas tales como receptor de insulina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000199), proteínas G heterotriméricas (por ejemplo, Galpha(i) -Acceso Genbank Núm. NP_002060; Galpha(s)-Acceso Genbank Núm. NP_000507; Galpha(q)-Acceso Genbank Núm. NP_002063), caveolina-3 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_001225), proteína asociada a microtúbulos 1B, y proteínas 14-3-3 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_003397).

Los ejemplos de proteínas de adhesión celular incluyen, pero sin limitación, integrina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_002202), molécula de adhesión intercelular (iCAm ) 1 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000192), N-CAM (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000606), cadherina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_004351), tenascina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_061978), gicerina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_006491), y proteína inducida por lesión nerviosa 2 (ninjurin2) (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_067606).

Los ejemplos de factores de crecimiento incluyen, pero sin limitación, factor de crecimiento epidérmico (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_001954), factor de crecimiento transformante b (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000651), factor de crecimiento de fibroblasto ácido (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP000791), factor de crecimiento de fibroblasto básico (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_001997), eritropoyetina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000790), trombopoyetina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP000451), factor de crecimiento de neuritas, factor de crecimiento de hepatocitos (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000592), factor de crecimiento tipo insulina I (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_000609), factor de crecimiento tipo insulina II (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. Np_000603), interferón Y (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP000610), y factor de crecimiento derivado de plaquetas (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_079484).

Los ejemplos de proteasas incluyen, pero sin limitación, pepsina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_055039), quimotripsina de baja especificidad, quimotripsina de alta especificidad, tripsina (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. Np_002760), carboxipeptidasas (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_001859), aminopeptidasas (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_001141), prolina-endopeptidasa (por ejemplo Acceso Genbank Núm. NP_002717), Staphylococcus aureus V8 proteasa (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_374168), proteinasa K (PK) (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. P06873), ácido aspártico proteasa (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_004842), serina proteasas (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_624302), metaloproteasas (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. Np_787047), ADAMTS17 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_620688), triptasa-Y (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. n P_036599), matriptasa-2 (por ejemplo, Acceso Genbank Núm. NP_694564).

Los ejemplos de sustratos de proteasa incluyen el péptido o las secuencias de péptidos que son la diana de la proteína proteasa. Por ejemplo, la lisina y la arginina son la diana de la tripsina; tirosina, fenilalanina y triptofano son la diana de quimotripsina.

Estas proteínas naturales se pueden obtener de cualquier proveedor conocido de reactivos de biología molecular.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, los restos poliméricos del conjugado comprenden grupos polimerizables (por ejemplo, como se describe en la presente memoria) que se pueden unir a un polipéptido. Por ejemplo, acrilato, metacrilato, acrilamida, metacrilamida y vinil sulfona además de ser grupos polimerizables, son adecuados para la unión a un grupo tiol (por ejemplo, en un residuo de cisteína) por medio de la adición de tipo Michael.

Por tanto, como se ejemplifica en la sección de Ejemplos de la presente memoria, un resto polimérico puede comprender una pluralidad de dichos grupos (por ejemplo, acrilato), uno de los cuales reaccionó (lo que puede hacer que el grupo ya no sea polimerizable) para unir el resto polimérico al polipéptido, el grupo o grupos restantes son grupos polimerizables.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el conjugado comprende polímero de diacrilato (por ejemplo, restos de diacrilato de poli(etilenglicol), en el que un grupo acrilato de cada resto está unido a un residuo de cisteína de un polipéptido (por ejemplo, fibrinógeno desnaturalizado) y un grupo acrilato sirve como un grupo polimerizable.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el conjugado comprende un resto polimérico ramificado sustituido con más de dos grupos acrilato (por ejemplo, restos de tetraacrilato de poli(etilenglicol) de 4 brazos), en el que un grupo acrilato en cada resto está unido a un residuo de cisteína de un polipéptido (por ejemplo, fibrinógeno desnaturalizado); y los otros grupos acrilato (por ejemplo, tres grupos acrilato en un resto tetraacrilato) sirve como grupos polimerizables.

De acuerdo con algunas realizaciones, el polipéptido es fibrinógeno desnaturalizado y cada uno de los restos poliméricos comprende poli(etilenglicol).

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, cada uno de los restos de poli(etilenglicol) comprende un resto diacrilato de poli(etilenglicol), en el que un grupo acrilato del resto de diacrilato de poli(etilenglicol) está unido a un residuo de cisteína del fibrinógeno.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polipéptido es fibrinógeno desnaturalizado y cada uno de los restos poliméricos comprende polóxamero F127.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, cada uno de los restos poliméricos comprende un resto de diacrilato de polóxamero F127, en el que un grupo acrilato del resto de diacrilato de polóxamero F127 está unido a un residuo de cisteína del fibrinógeno.

Los conjugados de polímero-polipéptido para uso en las realizaciones de la invención también se describen en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional WO 2005/061018, Patente de los Estados Unidos Núm. 7.842.667 y Publicación de Solicitud de Patente Internacional WO 2011/073991.

Grupos polimerizables y polimerización:

Los grupos polimerizables y la polimerización de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en esta sección se pueden usar en el contexto de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos de las invenciones descritas en la presente memoria, y se pueden incorporar dentro de un conjugado de polímero-polipéptido polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria y dentro de un polóxamero polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria.

Como se usa en la presente memoria, la frase "grupo polimerizable" se refiere a un grupo funcional caracterizado por la capacidad de efectuar reticulación covalente mediante la polimerización del grupo polimerizable con un grupo funcional de otra molécula (por ejemplo, otro conjugado). En el contexto de cualquier realización de la presente invención, los grupos polimerizables pueden actuar como monómeros, por lo que la polimerización de los grupos polimerizables reticula los conjugados que comprenden los grupos polimerizables.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el grupo polimerizable es capaz de efectuar la reticulación mediante la polimerización con una molécula (por ejemplo, conjugado polímero-proteína, poloxámero sustituido) similar y/o idéntica a un molécula que contiene grupo polimerizable descrita en la presente memoria (por ejemplo, un conjugado o poloxámero que comprende un grupo polimerizable químicamente relacionado y/o idéntico al grupo polimerizable descrito en la presente memoria).

En la presente memoria, el término "polimerización" se refiere a una reacción en la que al menos dos moléculas o restos químicamente similares o idénticos se unen covalentemente mediante uno o más enlaces. La reacción y los enlaces formados de este modo son de un tipo que permite, al menos en algunas condiciones, que más de dos (por ejemplo, 10 o más) de las moléculas o restos químicamente similares o idénticos se unan covalentemente.

Son conocidos en la técnica muchos grupos polimerizables, que incluyen grupos (por ejemplo, grupos insaturados) que experimentan fácilmente una polimerización por radicales libres y grupos cíclicos (por ejemplo, lactonas) que se polimerizan fácilmente mediante la apertura del anillo.

Son conocidas en la técnica diversas condiciones para efectuar la polimerización (por ejemplo, polimerización por radicales libres). La polimerización se puede efectuar, por ejemplo, por medio de fotoiniciación (en presencia de irradiación con la luz apropiada, por ejemplo, 365 nm, y opcionalmente también un iniciador como se describe en la presente memoria), por medio de reticulación química (en presencia de un donante de radicales libres) y/o calentamiento (a las temperaturas adecuadas). De acuerdo con ejemplos de realizaciones, la polimerización se efectúa mediante irradiación con luz UV (por ejemplo, a una longitud de onda de aproximadamente 365 nm).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, se selecciona un grupo polimerizable de modo que la polimerización del mismo se pueda efectuar en condiciones relativamente suaves que no sean perjudiciales para las células vivas. Por ejemplo, las condiciones de polimerización de forma opcional son suficientemente no tóxicas y no peligrosas para que sean adecuadas para efectuar la polimerización in vivo, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el grupo polimerizable es polimerizable por polimerización por radicales libres. Los ejemplos de tales grupos incluyen, sin limitación, un acrilato, un metacrilato, una acrilamida, una metacrilamida y una vinilsulfona.

En cualquiera de los aspectos de las realizaciones de la invención, se puede usar opcionalmente un iniciador de radicales libres para iniciar la polimerización de los grupos polimerizables descritos en la presente memoria. El experto en la materia será capaz de seleccionar un iniciador adecuado para iniciar la polimerización de grupos polimerizables seleccionados.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una composición como se describe en la presente memoria también comprende un iniciador de radicales libres (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

Polóxamero y polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable:

El polóxamero y polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en esta sección se puede usar en el contexto de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos de las invenciones descritas en la presente memoria, y se puede combinar con un conjugado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria y puede comprender un grupo polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del polóxamero es de al menos 5 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero es de al menos 8 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero es de al menos 10 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero es de al menos 12 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del polóxamero está en un intervalo de 13 a 25 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero está en un intervalo de 13 a 20 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero está en un intervalo de 13,5 a 17,5 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero es aproximadamente 15,4 por ciento en peso.

El polóxamero F127 es un ejemplo de polóxamero, que se puede usar opcionalmente en algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es al menos 3 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es al menos 5 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es al menos 7 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable está en un intervalo de 7,8 a 15 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable está en un intervalo de 7,8 a 12 por ciento en peso. En algunas realizaciones, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable está en un intervalo de 7,8 a 10 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración del polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es aproximadamente 8,1 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración total del polóxamero y el polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es al menos 19 por ciento en peso. En algunas realizaciones, la concentración total es al menos 21 por ciento en peso. En algunas realizaciones, la concentración total es al menos 22 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración total del polóxamero y el polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es no mayor que 30 por ciento en peso. En algunas realizaciones, la concentración total es no mayor que 27 por ciento en peso. En algunas realizaciones, la concentración total es no mayor que 25 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, una concentración total del polóxamero y el polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es aproximadamente 23,5 por ciento en peso.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polóxamero sustituido es un polóxamero F127 sustituido con al menos un grupo polimerizable.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el polóxamero sustituido está sustituido con al menos dos grupos polimerizables (por ejemplo, acrilato) descritos en la presente memoria, por ejemplo, 2, 3, 4 y hasta 20 grupos polimerizables. En algunas realizaciones, el polóxamero sustituido comprende dos grupos polimerizables descritos en la presente memoria, por ejemplo, el polóxamero sustituido es un diacrilato de polóxamero. El diacrilato de polóxamero F127 es un ejemplo de diacrilato de polóxamero que se puede usar opcionalmente en algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria,

Composición de materia en forma reticulada:

La composición de materia de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en esta sección se puede usar en el contexto de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos de las invenciones descritas en la presente memoria, y puede comprender un conjugado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria, un polóxamero de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria, y un polóxamero polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria. Además, la reticulación se puede efectuar con un grupo polimerizable de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona una forma reticulada de cualquiera de las composiciones que comprende un conjugado de polímero-polipéptido, como se describe en la presente memoria. La forma reticulada comprende una pluralidad de las moléculas del conjugado (como se describe en la presente memoria) y una pluralidad de moléculas de un polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable (como se describe en la presente memoria) reticulado covalentemente con otro después de la polimerización del grupo polimerizable (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición de la materia es un armazón.

Como se usa en la presente memoria, el término "armazón" describe una estructura de soporte bidimensional o tridimensional. El armazón de acuerdo con las realizaciones de la presente invención está compuesto por unidades precursoras (que comprenden los conjugados y/o el poloxámero sustituido con al menos un grupo polimerizable, como se describe en la presente memoria) que están reticulados entre estos. El armazón puede comprender además compuestos (tal como el poloxámero descrito en la presente memoria) que están contenidos dentro del armazón, sin estar reticulados con las unidades precursoras mencionadas anteriormente.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, se puede usar un armazón como soporte para el crecimiento, unión y/o propagación de las células y, por tanto, facilita la generación y/o reparación de tejidos. En algunas realizaciones, un armazón mantiene la forma deseada de un tejido y/o colonia celular soportada por este.

Se debe entender que una "forma reticulada" de una composición como se describe en la presente memoria puede comprender una proporción menor que poloxámero (como se describe en la presente memoria) que la composición per se, porque el poloxámero generalmente no experimenta reticulación covalente (en contraste con el conjugado y el poloxámero sustituido con al menos un grupo polimerizable, como se describe en la presente memoria), y por lo tanto se puede fugar de la forma reticulada.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición de la materia es un hidrogel.

Como se usa en la presente memoria y es bien conocido en la técnica, el término "hidrogel" se refiere a un material que comprende redes sólidas (por ejemplo, un armazón descrito en la presente memoria) formadas por cadenas de polímeros naturales y/o sintéticos solubles en agua, que pueden contener cantidades sustancial (por ejemplo, más del 99%) de agua.

El hidrogel puede ser una forma reticulada de una composición descrita en la presente memoria per se, es decir, el agua contenida en el hidrogel es sustancialmente la misma que el agua en la composición antes de la reticulación.

Alternativamente, el hidrogel puede comprender agua absorbida por la composición de la materia después de la reticulación de una composición descrita en la presente memoria.

Sin suscribir a ninguna teoría particular, se considera que los hidrogeles son particularmente ventajosos para aplicaciones tales como la regeneración de tejidos, ya que proporcionan una consistencia sólida o semisólida deseable mientras contienen un grado considerable de ambiente acuoso que es adecuado para permitir el crecimiento y la migración celular dentro del hidrogel.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición de la materia se caracteriza por un módulo de almacenamiento a cizalla de al menos 30.000 Pa a una temperatura de 17 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 35.000 Pa a una temperatura de 17 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es al menos 40.000 Pa a una temperatura de 17 °C. En algunas realizaciones, el módulo de almacenamiento a cizalla es aproximadamente 45.000 Pa una temperatura de 17 °C.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición de la materia es biodegradable, es decir, la composición de la materia se degrada después del contacto con un tejido y/o una célula (por ejemplo, por proteólisis y/o hidrólisis). Los materiales biodegradables son útiles en diversas aplicaciones médicas, por ejemplo, como implantes temporales. Además, los materiales biodegradables son muy adecuados como matrices para soportar el crecimiento y/o migración celular, ya que el crecimiento y/o migración celular están asociados con la degradación de una matriz circundante.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la biodegradabilidad de una composición de la materia es un resultado de la biodegradabilidad de un polipéptido de un conjugado (como se describe en la presente memoria) dentro de la composición de la materia, de modo que la degradación del polipéptido causa la degradación de la composición de la materia.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento para producir a una composición de la materia descrita en la presente memoria, el procedimiento que comprende someter una composición descrita en la presente memoria a las condiciones que efectúan la reticulación covalente mediante la polimerización del grupo polimerizable, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la reticulación covalente se efectúa in vivo.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la reticulación covalente se efectúa ex vivo.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, las condiciones que efectúan la reticulación covalente mediante la polimerización comprenden irradiación (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

Aplicaciones de la composición y composición de materia:

Las aplicaciones de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en esta sección se pueden realizar en el contexto de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos de las invenciones descritas en la presente memoria, y pueden usar una composición de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria y/o una composición de la materia de acuerdo con cualquiera de las realizaciones respectivas descritas en la presente memoria.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria se identifica para su uso en la generación de un armazón de hidrogel (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria y/o cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria se identifica para su uso en la reparación del tejido dañado.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria y/o cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria se identifica para su uso en el tratamiento de un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido.

De acuerdo con algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria y/o cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria se identifica para su uso en la inducción de la formación de un tejido.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un uso de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria y/o cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para la reparación del daño del tejido.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un uso de cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria y/o cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para tratar un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento de inducción de la formación de un tejido in vivo, el procedimiento que comprende administrar cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria a un individuo.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento de tratamiento de un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido, el procedimiento que comprende administrar cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria al sujeto.

Cualquiera de los procedimientos y usos que usa una composición que se describe en la presente memoria (por ejemplo, para la reparación del daño del tejido, para la fabricación de un medicamento, para el tratamiento de un individuo y/o para la inducción de la formación de un tejido) se pueden efectuar mediante la sujeción de la composición (por ejemplo, in vivo) en condiciones que efectúan el curado de la composición, como se describe en la presente memoria, para inducir de este modo la formación del tejido. En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el curado se efectúa mediante la reticulación covalente. En algunas realizaciones, la reticulación covalente se efectúa mediante la polimerización del grupo polimerizable, como se describe en la presente memoria.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento de inducción de la formación de un tejido in vivo, el procedimiento que comprende la implantación de cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria en un individuo, para inducir de este modo la formación del tejido.

De acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un procedimiento de tratamiento de un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido, el procedimiento que comprende implantar cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria en el sujeto, para inducir de este modo la formación del tejido.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones of cualquiera de los procedimientos y usos que usa composición de la materia como se describe en la presente memoria (por ejemplo, mediante la implantación de la composición de la materia y/o para la fabricación de un medicamento), la composición de la materia se prepara en una forma adecuada para un individuo en el que se va a implantar la composición de la materia según lo determine, por ejemplo, un médico tratante (por ejemplo, un cirujano). En algunas realizaciones, la composición de la materia se prepara en la forma deseada mediante la preparación de un molde con la forma deseada y sujeción de una composición descrita en la presente memoria a reticulación covalente en el molde (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, el tejido comprende cartílago, y la composición se usa para reparar cartílago dañado y/o tratar a un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de cartílago.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la composición y/o medicamento se identifica para su uso en cirugía artroscópica.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, el procedimiento y/o uso se efectúa por cirugía artroscópica.

Como se usa en la presente memoria, la frase "cirugía artroscópica" se refiere a un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo en el que el tratamiento del daño del interior de una articulación se realiza a través de una pequeña incisión.

Sin suscribir a ninguna teoría particular, se considera que la fluidez de las composiciones descritas en la presente memoria la hace particularmente adecuadas para la inyección a través de una pequeña incisión tal como la que se usa en cirugía artroscópica, mientras que su viscosidad y capacidad de curación las hace particularmente adecuadas para permanecer en un lugar deseado durante y después de la cirugía.

Los ejemplos de afecciones asociadas con daño o pérdida de cartílago que se pueden tratar de acuerdo con realizaciones de la invención, incluyendo realizaciones que implican cirugía artroscópica, incluyen cartílago flotante desgarrado, cartílago de superficie desgarrado y ligamento cruzado anterior desgarrado y/o reconstruido.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la composición es curable mediante la polimerización (por ejemplo, como se describe en la presente memoria) en un medio fisiológico. En algunas realizaciones, la polimerización se inicia mediante la irradiación (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

Sin suscribir a ninguna teoría particular, se considera que la polimerización, y particularmente la polimerización iniciada por irradiación, es un mecanismo de reacción especialmente adecuado (por ejemplo, biocompatible) para aplicaciones que involucran tejido vivo (por ejemplo, aplicaciones in vivo), tal como se describe en la presente memoria, porque se puede inducir un alto grado de reticulación covalente mediante solo una cantidad relativamente pequeña de un compuesto reactivo (por ejemplo, un iniciador), lo que puede ayudar a minimizar la toxicidad u otros efectos adversos causados por reacciones químicas. Además, la irradiación se puede enfocar fácilmente a una ubicación deseada (por ejemplo, durante la cirugía), de este modo se minimiza adicionalmente las reacciones químicas adversas.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición forma un armazón de hidrogel (por ejemplo, como se describe en la presente memoria) después del curado en el medio fisiológico.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones de cualquiera de los aspectos descritos en la presente memoria, la composición se prepara y/o almacena a una temperatura en la que la composición no es un fluido viscoso y/o un gel como se describe en la presente memoria. Tal temperatura puede ser, por ejemplo, una temperatura (por ejemplo, temperatura de almacenamiento) a la que la composición es un sólido congelado, o una temperatura a la que la composición es un fluido de viscosidad relativamente baja (por ejemplo, una temperatura por debajo de una temperatura de transición como se describe en la presente memoria).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición se somete a una temperatura (por ejemplo, una temperatura por encima de una temperatura de transición como se describe en la presente memoria) a la que la composición se convierte en un líquido viscoso y/o gel tal como se describe en la presente memoria (por ejemplo, mediante la experimentación de la gelificación térmica inversa). Se puede determinar que la composición se convierte en fluido viscoso y/o estado de gel mediante inspección visual del aspecto de la composición (por ejemplo, la composición parece turbia) y/o evaluar la consistencia (por ejemplo, viscosidad) de la composición (por ejemplo, inversión y/o agitación de la composición).

Ingredientes, empaques y kits adicionales:

Cualquiera de las composiciones de acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria se puede formular para facilitar su administración (por ejemplo, implantación).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria puede comprender además un portador farmacéuticamente aceptable.

En la presente memoria, el término "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador o un diluyente que no causa una irritación significativa a un organismo y no anula la actividad biológica y las propiedades del compuesto administrado. Los ejemplos, sin limitaciones, de portadores son: propilenglicol, solución salina, emulsiones y mezclas de disolventes orgánicos con agua, así como portadores sólidos (por ejemplo, en polvo) y gaseosos.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el portador es un portador acuoso, por ejemplo, una solución acuosa (por ejemplo, solución salina). La solución salina tamponada con fosfato es un ejemplo de portador acuoso que se puede usar opcionalmente en algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, un pH del portador acuoso está en un intervalo de 5 a 9. En algunas realizaciones, el pH está en un intervalo de 6 a 8. En algunas realizaciones, el pH está en un intervalo de 7 a 7,5.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, un pH del portador acuoso es aproximadamente 7,4.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria se empaca en un material de empaque y se identifica en forma impresa, en o sobre el material de empaque, para su uso en la reparación del daño tisular, inducción de la formación de tejido y/o para tratar a un individuo que tiene un trastorno, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, cualquiera de las composiciones de la materia descritas en la presente memoria se empaca en un material de empaque y se identifica en forma impresa, en o sobre el material de empaque para su uso en la reparación del daño tisular que induce la formación de tejido. y/o para tratar a un individuo que tiene un trastorno, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición se formula para almacenamiento a temperaturas por debajo de 0 °C, por ejemplo, a aproximadamente -20 °C.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, la composición se empaca en un recipiente parcial o completamente opaco (por ejemplo, un recipiente que forma parte de un aplicador descrito en la presente memoria), para minimizar el riesgo de fotoiniciación prematura de la polimerización. .

La composición descrita en la presente memoria también se puede proporcionar como parte de un kit.

Por tanto, de acuerdo con otro aspecto de las realizaciones de la invención, se proporciona un kit que comprende cualquiera de las composiciones descritas en la presente memoria.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el kit comprende un aplicador cargado con la composición, el aplicador está configurado para liberar la composición como resultado de la presión aplicada a la composición. Como se ejemplifica en la presente memoria, incluso un estado muy viscoso de la composición puede ser un fluido bajo presión.

La presión sobre la composición puede ser causada, por ejemplo, por presión manual, por un gas comprimido dentro del aplicador y/o por un motor (por ejemplo, un motor eléctrico).

En algunas realizaciones, el aplicador comprende un pistón (por ejemplo, como en una jeringa) configurado para aplicar presión a la composición en el aplicador.

En algunas realizaciones, el conjugado, polóxamero y polóxamero sustituido (como se describe en la presente memoria) se almacenan por separado (por ejemplo, en forma de una composición como se describe en la presente memoria) de un iniciador de radicales libres (como se describe en la presente memoria) dentro de un kit, por ejemplo, en unidades de empaque separadas, de modo que la composición se almacene sin incluir un iniciador, hasta que se contacte con el iniciador inmediatamente antes de la reticulación, como se describe en la presente memoria. Tal almacenamiento de los componentes de la composición antes de su uso puede ayudar a evitar el inicio prematuro de la reticulación de los componentes de la composición.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el conjugado, poloxámero y poloxámero sustituido (como se describe en la presente memoria) se almacenan por separado de un portador (como se describe en la presente memoria) dentro de un kit, por ejemplo, en unidades de empaque separadas, de manera que el conjugado, poloxámero y poloxámero sustituido se almacenan en un estado seco hasta poner en contacto con el portador para la formación de una composición que comprende un portador como se describe en la presente memoria. Tal almacenamiento de los componentes de la composición antes de su uso puede aumentar la vida útil efectiva de los componentes (y del kit).

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el kit además comprende instrucciones que proporcionan guía con respecto al almacenamiento y/o uso de la composición del mismo.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el kit comprende instrucciones que proporcionan orientación con respecto a la selección de las condiciones de reticulación (por ejemplo, con o sin irradiación; con o sin calentamiento; con o sin adición de un iniciador de polimerización) para obtener una composición de la materia con las propiedades deseadas.

En algunas realizaciones de cualquiera de las realizaciones descritas en la presente memoria, el kit comprende instrucciones que proporcionan orientación con respecto al momento en que la composición está lista para uso (por ejemplo, como se describe en la presente memoria), por ejemplo, la manera de determinar el momento en que ha ocurrido suficiente gelificación térmica inversa (por ejemplo, como se describe en la presente memoria).

Los términos "comprende", "que comprende", "incluye", "que incluye", "que tiene" y sus conjugaciones significan "que incluye pero sin limitación".

El término "que consiste en" significa "que incluye y sin limitación a".

El término "que consiste esencialmente en" significa que la composición, procedimiento o estructura puede incluir ingredientes, etapas y/o partes adicionales, pero solo si los ingredientes, etapas y/o partes adicionales no alteran materialmente las características básicas y novedosas de la composición, procedimiento o estructura reivindicados.

El término "ejemplar" se usa en la presente memoria para significar "que sirve como ejemplo, instancia o ilustración". Cualquier realización descrita como "ejemplos de" no debe interpretarse necesariamente como preferida o ventajosa sobre otras realizaciones y/o excluir la incorporación de características de otras realizaciones.

El término "opcionalmente" se usa en la presente memoria para significar "que se proporciona en algunas realizaciones y no se proporciona en otras realizaciones". Cualquier realización particular de la invención puede incluir una pluralidad de características "opcionales" a menos que tales características entren en conflicto.

Como se usa en la presente memoria, la forma singular "un", "una" y "el/la" incluye referencias en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por ejemplo, el término "un compuesto" o "al menos un compuesto" puede incluir una pluralidad de compuestos, que incluye sus mezclas.

A lo largo de esta solicitud, se pueden presentar varias realizaciones de esta invención en un formato de intervalo. Se debe entender que la descripción en formato de intervalo es simplemente por conveniencia y brevedad y no se debe interpretar como una limitación inflexible del alcance de la invención. Por consiguiente, se debe considerar que la descripción de un intervalo ha divulgado específicamente todos los subintervalos posibles así como los valores numéricos individuales dentro de ese intervalo. Por ejemplo, la descripción de un intervalo tal como de 1 a 6 se debe considerar que tiene subintervalos divulgados específicamente tales como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6, etc., así como números individuales dentro de ese intervalo, por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5 y 6. Esto se aplica independientemente de la amplitud del intervalo.

Siempre que se indique en la presente memoria un intervalo numérico, se considera que incluye cualquier número citado (fraccionario o integral) dentro del intervalo indicado. Las frases " que varía/intervalos entre" un primer número indicado y un segundo número indicado y "que varían/intervalos de" un primer número indicado "a" un segundo número indicado se usan en la presente memoria indistintamente y se considera que incluyen el primer y segundo número indicado y todos los numerales fraccionarios y enteros entre estos.

Como se usa en la presente memoria, el término "procedimiento" se refiere a formas, medios, técnicas y procedimientos para realizar una tarea determinada, que incluye, pero sin limitación esos modos, medios, técnicas y procedimientos conocidos o fácilmente desarrollados a partir de modos, medios, técnicas y procedimientos conocidos por los profesionales de las técnicas química, farmacológicas, biológicas, bioquímicas y médicas.

Se aprecia que ciertas características de la invención, que, para mayor claridad, se describen en el contexto de realizaciones separadas, también se pueden proporcionar en combinación en una única realización. A la inversa, varias características de la invención, que se describen, por brevedad, en el contexto de una realización única, también se pueden proporcionar por separado o en cualquier subcombinación adecuada o según sea adecuado en cualquier otra realización descrita de la invención. Ciertas características descritas en el contexto de diversas realizaciones no se deben considerar características esenciales de esas realizaciones, a menos que la realización no sea operativa sin esos elementos.

Varias realizaciones y aspectos de la presente invención según lo delineado anteriormente y reivindicado en la sección de reivindicaciones a continuación, encuentran apoyo experimental en los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Se hace ahora referencia a los siguientes ejemplos, que junto con las descripciones anteriores ilustran algunas realizaciones de la invención de una manera no limitativa.

Materiales y procedimientos

Materiales:

Irgacure® 2959 se obtuvo de Ciba.

El diacrilato de poloxámero F127 (F127-DA) y el diacrilato de poli (etilenglicol) (PEG-DA) se prepararon mediante la acrilación de Pluronic® F127 (12,6 kDa) y poli (etilenglicol) (PEG) diol (12 kDa), respectivamente, como se describe en la Solicitud de Patente Internacional PCT/IL2010/001072 (publicada como documento WO2011/073991).

Se prepararon conjugados de poloxámero-fibrinógeno y PEG-fibrinógeno F127 a partir de F127-DA y PEG-DA, respectivamente, como se describe en la Solicitud de Patente Internacional PCT/IL2010/001072 (publicada como documento WO2011/073991).

Mediciones reológicas:

Las mediciones reológicas se llevaron a cabo usando un reómetro AR-G2 (TA5 Instruments, New Castle, DE, USA) equipado con una placa Peltier con base controlada por temperatura. En todos los experimentos se utilizó una geometría de placa de acero inoxidable de 20 mm. Cada medición se llevó a cabo con 0,2 ml de una solución de polímero que contiene 0,1% (p/v) de iniciador Irgacure® 2959. Las condiciones de prueba para las mediciones reológicas fueron una deformación de 2% a una frecuencia de oscilación de 3 radianes por segundo.

La gelificación térmica inversa de formulaciones no reticuladas se evaluó mediante mediciones de reología dependientes de la temperatura. Los efectos de la reticulación en la reología de la formulación se evaluaron mediante la reticulación de formulaciones mientras se realizaban mediciones de reología dependientes del tiempo.

Análisis estadístico:

El análisis estadístico se realizó con el software de análisis estadístico Microsoft Excel. Las comparaciones entre dos tratamientos se realizaron mediante la prueba T de Student (dos colas, igual varianza). Se consideró estadísticamente significativo un valor de p <0,05.

Ejemplo I

Efecto de polóxamero sobre las propiedades de formulaciones de PEG-fibrinógeno

Se prepararon varias formulaciones para soluciones de precursores de hidrogel mediante la disolución de PEG-DA (PEG-diacrilato), F127-OH (Poloxámero F127), F127-Da (diacrilato de poloxámero F127) y/o F127-MA (monoacrilato de poloxámero F127) a las concentraciones indicadas e Irgacure® 2959 0,1% (p/v) en una solución de 7,3 mg/ml de PEG-fibrinógeno en solución salina tamponada con fosfato (PBS) a un pH de 7,4. Las mezclas se mantuvieron a una temperatura de 4 °C hasta que se observó una disolución completa.

Las soluciones precursoras de hidrogel se reticularon mediante la irradiación de la solución precursora con luz UV (365 nm, 4-5 mW/cm2), para formar hidrogeles. Se irradió un volumen de 100 pl de solución de precursor de hidrogel en un tubo de silicio de 5 mm de diámetro, que da como resultado cilindros de hidrogel de 5 mm de altura.

Para cada formulación, las propiedades reológicas (por ejemplo, módulo de almacenamiento a cizalla (por ejemplo, módulo de almacenamiento a cizalla (G')) de las soluciones de precursores de hidrogel (es decir, antes de la reticulación UV) e hidrogeles (es decir, después de la reticulación UV) se midieron como se describe anteriormente en la presente memoria.

El hinchamiento se calculó como el aumento porcentual en peso de hidrogeles hinchados con solución salina tamponada con fosfato (PBS) sobre el peso inicial de los hidrogeles.

Los valores del módulo de almacenamiento a cizalla (G') y las relaciones de hinchamiento obtenidos con las diversas formulaciones se resumen en la Tabla 1 a continuación.

Como se muestra en la Tabla 1, las diversas formas de poloxámero F127 (F127-0H, F-127-MA y F127-DA) fueron eficaces para aumentar los valores de G' antes de la reticulación, mientras que PEG-DA disminuyó los valores de G' antes de la reticulación (comparar, por ejemplo, con las Formulaciones 4 y 7). Los polímeros no acrilados y monoacrilados (F127-0H y F127-MA) fueron considerablemente más eficaces para aumentar los valores de G' antes de la reticulación que los polímeros diacrilados (comparar, por ejemplo, la Formulación 2 con las Formulaciones 3 y 4, la Formulación 5 con la Formulación 7. y la Formulación 6 con la Formulación 10).

Como se muestra además en el mismo, los polímeros diacrilados (PEG-DA y F127-DA) fueron altamente eficaces para aumentar los valores G' de los hidrogeles reticulados (comparar, por ejemplo, la Formulación 2 con las Formulaciones 3 y 4, Formulación 4 con la Formulación 7. y Formulación 7 con Formulación 10).

Tabla 1: Composición y propiedades físicas de ejemplos de formulaciones antes y después de la reticulación

Las composiciones que exhibían una viscosidad relativamente alta (por ejemplo, un valor G' relativamente alto) antes de la reticulación eran ventajosamente más fáciles de manipular a aproximadamente la temperatura ambiente, debido a su fluidez reducida.

Además, se planteó la hipótesis de que el hinchamiento excesivo de una formulación reticulada puede producir efectos perjudiciales, por lo que se consideró ventajoso un grado de hinchamiento que no es mucho más que el de la Formulación 1 (cuya experiencia ha demostrado ser satisfactoria con respecto a sus propiedades de hinchamiento) fue considerado ventajoso. La presencia de F127-DA se asoció con grados más bajos de hinchamiento (comparar, por ejemplo, la Formulación 2 con la Formulación 3, la Formulación 3 con la Formulación 4 y la Formulación 7 con las Formulaciones 5 y 10).

Tomados en conjunto, los resultados anteriores muestran que una combinación de F127-0H y F127-DA, en concentraciones suficientemente altas en una composición que comprende PEG-fibrinógeno (por ejemplo, como en las Formulaciones 9 y 10), producen un hinchamiento menor que 100%, un G' de al menos 10.000 Pa antes de la reticulación, y un G' de al menos 40.000 Pa después de la reticulación.

Ejemplo 2

Propiedades de los ejemplos de formulación que comprenden fibrinógeno-PEG con poloxámero F127 acrilado y no acrilado

La Formulación 10, que comprende 7,3 mg/ml de PEG-fibrinógeno, 15,4 por ciento en peso de F127-OH y 8,1 por ciento en peso de F127-DA (como se describe en el Ejemplo 1), se seleccionó para una caracterización adicional de sus propiedades físicas y químicas. Se esperaba que la Formulación 10 fuera particularmente ventajosa porque exhibía una viscosidad considerable antes de la reticulación, mientras que exhibía menos hinchamiento después de la reticulación que las formulaciones viscosas similares.

El módulo de almacenamiento a cizalla (G') de la Formulación 10 (como una solución no reticulada) se midió en función de la temperatura, como se describe en la sección de la materiales y procedimientos. Para comparación, también se midió una formulación que comprendía 7,4 mg/ml de PEG-fibrinógeno y 10 por ciento en peso de F127-DA.

Como se muestra en la Figura 1, la Formulación 10 experimenta una transición a aproximadamente 16 °C, caracterizada por un fuerte aumento en G'. Por el contrario, una solución de 7,4 mg/ml de PEG-fibrinógeno con 10 por ciento en peso de F127-DA no mostró tal aumento en G'.

Como se muestra en las Figuras 2A y 2B, la Formulación 10 era un líquido de flujo libre a una temperatura de 4 °C (Figura 2A), pero era lo suficientemente viscoso a temperatura ambiente para no exhibir flujo en intervalos de tiempo cortos (Figura 2B).

La solución de precursor de hidrogel de la Formulación 10 se introdujo fácilmente en una jeringa a temperatura baja, ya que era un líquido de flujo libre a dicha temperatura.

Como se muestra en la Figura 3, la solución se inyectó con una jeringa a temperatura ambiente, en forma del material viscoso.

Como se muestra en la Figura 4, el material viscoso inyectado se puede adherir a una superficie vertical sin fluir hacia abajo.

Estos resultados indican que las propiedades físicas de tales formulaciones producen un líquido que fluye libremente a bajas temperaturas para una manipulación conveniente (por ejemplo, carga en una jeringa), así como un material viscoso a temperatura ambiente que es inyectable y capaz de permanecer en un sitio diana independientemente de la orientación espacial del sitio diana.

Para evaluar la capacidad de la formulación para resistir el agua, el material viscoso se incubó con una solución de colorante acuosa durante dos horas.

Como se muestra en las Figuras 5A-5D, el material viscoso no exhibe sustancialmente absorción de agua o colorante soluble en agua, incluso después de la incubación con una solución de colorante acuosa durante 2 horas.

Para evaluar cuantitativamente la resistencia de la formulación a la disolución en un ambiente acuoso, se colocó aproximadamente 1 ml de la Formulación 10 en un vial de vidrio de suero de 2 ml (Wheaton). La formulación se expuso a una temperatura de 20 °C, a la cual la formulación estaba en forma viscosa, y después se vertió 1 ml de tampón PBS (pH 7,4) sobre la formulación. Esta configuración creó una interfaz entre la formulación viscosa y el PBS con un área de 38,48 mm2. Se midió el peso inicial de la formulación y se midió el peso final (después de la exposición al ambiente acuoso) de la formulación después de 1 o 2 horas (se midieron 3 muestras en cada punto de tiempo. El cambio de peso de la formulación se normalizó para cambiar de peso por 1 cm2.

Como se muestra en la Tabla 2 a continuación y en la Figura 6, la formulación se disolvió a una tasa de solo aproximadamente 34 mg/cm2 por hora durante el transcurso de dos horas de exposición a un ambiente acuoso.

Este resultado indica que la formulación es resistente al agua, es decir, no es sustancialmente afectada por el contacto con el agua en un corto período de tiempo y, por lo tanto, se puede usar en ambientes acuosos como en el cuerpo, mientras conserva sus propiedades viscosas.

Tabla 2: Cambio en el peso de la Formulación 10 tras la exposición a PBS

Ejemplo 3

Reticulación de ejemplos de formulación que comprende PEG-fibrinógeno con polóxamero F127 acrilado y no acrilado

Con el fin de evaluar la utilidad de la Formulación 10, como se describe en los Ejemplos 1 y 2, para la implantación y reticulación in situ, la formulación se colocó en una lesión artificial y se reticuló mediante irradiación UV a una longitud de onda de 365 nm.

Como se muestra en las Figuras 7A-7D, la consistencia de la formulación permitió la inyección de la formulación en la lesión artificial y el moldeado de la formulación para adaptarse a la forma de la lesión y la irradiación UV produjo un hidrogel con una consistencia relativamente sólida, que ajustó la forma de la lesión.

Además, como se muestra en las Figuras 8A-8D, la formulación se puede inyectar en un molde dentro de un ambiente acuoso y se reticuló para producir un hidrogel en forma del molde.

Estos resultados confirman que la formulación se puede aplicar por inyección y se reticuló reticular in situ para producir un hidrogel, incluso en ambientes acuosos como en el cuerpo.

Ejemplo 4

Efecto de la concentración de PEG-fibrinógeno de las propiedades de formulación

Para evaluar el efecto de la concentración de PEG-fibrinógeno sobre las propiedades de las formulaciones antes y después de la reticulación, se modificó la Formulación 10 descrita anteriormente de modo de contener 0, 4, 7 o 10 mg/ml de PEG-fibrinógeno.

La reología de las formulaciones se midió como se describe en la sección de la materiales y Procedimientos anterior. Como se muestra en la Figura 9, las concentraciones más altas de PEG-fibrinógeno en la formulación se asociaron con valores G' más bajos después de la gelificación térmica inversa y con temperaturas de gelificación ligeramente superiores.

Estos resultados indican que el PEG-fibrinógeno actúa como un plastificante y disminuye el grado de gelificación térmica inversa en comparación con F127-OH y F127-DA solos.

Como se muestra en la Figura 10, concentraciones más altas de PEG-fibrinógeno en la formulación se asociaron con valores G' más altos después de la reticulación.

Estos resultados sugieren que el PEG-fibrinógeno aumenta la densidad de reticulación, de este modo se produce un hidrogel más rígido.

Ejemplo 5

Comparación de PEG fibrinógeno y polóxamero-fibrinógeno en las formulaciones

Para evaluar el efecto del polímero conjugado con la proteína sobre las propiedades de la formulación, se preparó una nueva formulación ("Formulación 11") que comprendía un poloxámero F127-fibrinógeno en lugar de PEG-fibrinógeno como en la Formulación 10. Formulaciones 10 y 11 por lo demás eran idénticas, y comprende 7,3 mg/ml de PEG-fibrinógeno o F127-fibrinógeno, 15,4 por ciento en peso de F127-OH y 8,1 por ciento en peso de F127-DA. La reología de las Formulaciones 10 y 11 se midió como se describe en la sección de materiales y procedimientos anterior.

Como se muestra en la Figura 11, el reemplazo de PEG-fibrinógeno por F127-fibrinógeno no afectó ni a las propiedades del gel tras la gelificación térmica inversa ni a las temperaturas de gelificación. Sin embargo, el fibrinógeno F127 produjo valores G' algo más altos a baja temperatura (en ausencia de gelificación térmica inversa).

Como se muestra en la Figura 12, el reemplazo de PEG-fibrinógeno con F127-fibrinógeno no afectó significativamente las propiedades del hidrogel reticulado.

Estos resultados indican que la identidad del polímero conjugado con la proteína no es un factor significativo para determinar las propiedades reológicas de las formulaciones antes de la reticulación o después de la reticulación.

Ejemplo 6

Degradación hidrolítica y proteolítica de hidrogeles

Las Formulaciones 10 y 11 se prepararon y reticularon como se describe anteriormente en la presente memoria. Las formulaciones se reticularon en moldes de teflón de 16 mm de diámetro por irradiación UV (365 nm, 5 mW/cm2) durante 5 minutos, lo que produce un hidrogel en forma de disco.

Para evaluar la susceptibilidad de los hidrogeles a la degradación hidrolítica, las muestras de hidrogel se sumergieron en 50 ml de PBS (solución salina tampón fosfato) a una temperatura de 50 °C. En varios momentos, las muestras se lavaron tres veces con 50 ml de DDW (agua bidestilada) fría (4 °C) para eliminar el material residual del hidrogel. A continuación, las muestras se congelaron y liofilizaron durante 24 horas y se obtuvieron sus valores de masa seca. Los porcentajes de pérdida de masa representaron el nivel de degradación hidrolítica.

Para evaluar la susceptibilidad de los hidrogeles a la degradación proteolítica, las muestras de hidrogel se sumergieron durante 24 horas en PBS que contiene 0,1 por ciento en peso de tripsina a una temperatura de 37 °C. Después se lavaron las muestras, se congelaron y liofilizaron como se describió anteriormente en la presente memoria, y después se determinó la concentración de proteínas usando un sistema de determinación de nitrógeno Kjeldahl.

Como se muestra en la Figura 13, aproximadamente el 15% del hidrogel se degradó después de 34 días en PBA a 50 °C. Este resultado indica que el hidrogel es susceptible de hidrólisis.

Como se muestra en la Figura 14, la incubación con tripsina produjo una rápida degradación del hidrogel. Este resultado indica que la escisión de enlaces peptídicos en el fibrinógeno produce la degradación del hidrogel.

Los resultados anteriores indican que los hidrogeles preparados por reticulación de las formulaciones descritas en la presente memoria son biodegradables y se degradan tanto por hidrólisis (aparentemente debido a la hidrólisis de enlaces éster) como por proteólisis. Después de la degradación, los productos de degradación se difunden fuera de la matriz reticulada. Además, el F127-OH en el hidrogel no está unido covalentemente y se puede difundir fuera de la matriz reticulada en un ambiente acuoso.

Aunque la invención se ha descrito junto con realizaciones específicas de la misma, es evidente que muchas alternativas, modificaciones y variaciones serán evidentes para los expertos en la técnica.

Además, la cita o identificación de cualquier referencia en esta solicitud no se interpretará como una admisión de que dicha referencia está disponible como técnica anterior a la presente invención. En la medida en que se usan los títulos de sección, no se deben interpretar como necesariamente limitantes.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica, cosmética o cosmecéutica que comprende:

(a) un conjugado de polímero-polipéptido que comprende un polipéptido que tiene unido al mismo al menos dos restos poliméricos, comprendiendo dicho polipéptido una proteína de matriz extracelular o un fragmento del mismo, y comprendiendo cada uno de dichos restos poliméricos un polímero sintético seleccionado del grupo que consiste en un poli(etilenglicol) y un polóxamero (copolímero de poli(etilenglicol-propilenglicol)), en la que al menos uno de dichos restos poliméricos además comprende al menos un grupo polimerizable, en la que las moléculas de dicho conjugado no se unen covalentemente entre sí;

(b) un polóxamero;

(c) un polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable; y

(d) un portador acuoso farmacéutica, cosmética o cosmecéuticamente aceptable,

exhibiendo la composición una gelificación térmica inversa,

2. La composición de la reivindicación 1, caracterizada por una tasa de disolución menor que 50 mg/cm2 por hora en un ambiente acuoso.

3. La composición de la reivindicación 1 o 2, en la que una concentración de dicho conjugado está en un intervalo de 2 a 15 mg/ml.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que una concentración de dicho polóxamero está en un intervalo de 13 a 25 por ciento en peso.

5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que una concentración de dicho polóxamero sustituido por al menos un grupo polimerizable está en un intervalo de 7,8 a 15 por ciento en peso.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que una concentración total de dicho polóxamero y dicho polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable es de al menos 21 por ciento en peso.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que dicho polipéptido comprende un fibrinógeno o un fragmento del mismo.

8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicha gelificación térmica inversa está caracterizada mediante una temperatura de transición en un intervalo de 10 °C a 20 °C.

9. Un kit que comprende la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Una composición de materia que comprende una forma reticulada de la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo dicha forma reticulada una pluralidad de moléculas de dicho conjugado y dicho polóxamero sustituido con al menos un grupo polimerizable reticulado de forma no covalente a otro tras la polimerización de dicho grupo polimerizable.

11. La composición de materia de la reivindicación 10, siendo un armazón y/o un hidrogel.

12. La composición de materia de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 11, caracterizada por un módulo de almacenamiento a cizalla de al menos 30.000 Pa a una temperatura de 17 °C.

13. Un procedimiento de producción de la composición de materia de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, comprendiendo el procedimiento someter una composición descrita en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 a condiciones que efectúen la reticulación covalente mediante la polimerización de dicho grupo polimerizable, produciendo de este modo la composición de materia.

14. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de materia de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, para uso en la reparación del daño tisular, en la inducción de la formación de un tejido y/o en el tratamiento de un individuo que tiene un trastorno caracterizado por daño o pérdida de tejido.

15. La composición para uso o composición de materia para uso de acuerdo con la reivindicación 14, en la que dicho tejido comprende cartílago.