ES2829623T3 - Composición para la inmunomodulación - Google Patents
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Abstract
Composición que presenta 6- y/u 8-prenilnaringenina como sustancia activa para uso en la inmunoestimulación.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición para la inmunomodulación
La presente invención se refiere a una composición para la inmunomodulación, así como a usos y procedimientos relacionados con la misma.
Las inmunoterapias son formas de tratamiento, en las que se ve influenciado el sistema inmune de un organismo. La inmunomodulación puede servir para amortiguar el sistema inmune, por ejemplo después de trasplantes y para evitar una reacción de rechazo, o también para la inmunoestimulación, es decir, un aumento de la reacción inmune natural. Las sustancias activas de la inmunoterapia se denominan en general inmunomoduladores. Los inmunomoduladores pueden ser, por lo tanto, inmunoestimuladores o inmunoinhibidores. Un ejemplo de un destacado inmunoestimulador es el interferón, el cual se emplea en la terapia de enfermedades de la hepatitis C. También se describen inmunomoduladores vegetales, por ejemplo extractos del cáñamo o de la equinácea.
Para el melanoma maligno existen ya diferentes sustancias inmunomoduladoras empleadas en la clínica, que modulan la actividad de las células asesinas naturales (células NK). Así, para este fin, el interferón a pasa a emplearse en la terapia del melanoma adyuvante en los estadios II y III o la interleuquina 2 (IL-2) para el tratamiento del melanoma metastásico en el estadio IV.
También en el caso de otras enfermedades se emplean sustancias inmunomoduladoras, por ejemplo interferón pegilado para el tratamiento de la hepatitis C, o interferón p para el tratamiento de la esclerosis múltiple.
Las sustancias inmunomoduladoras empleadas hasta ahora no se han acreditado la mayoría de ellas en la práctica. Esto es particularmente válido para la terapia del melanoma. Allí, las inmunoterapias llevadas a cabo hasta ahora muestran, por norma general, solo tasas de respuesta moderadas menores que 10 % con considerables efectos secundarios simultáneos, tales como, por ejemplo, casos de fallecimiento condicionados por el medicamento en el caso de la terapia con y IL-2 sistémica en el estadio IV. También en el sector de infecciones o enfermedades autoinmunes se manifiestan considerables dificultades en el caso de las terapias actualmente aprobadas. A pesar de una inmunoterapia intensiva, la norma son cursos crónicos, tales como, por ejemplo, en el caso de la hepatitis C o la esclerosis múltiple.
A ello se agrega el hecho de que muchos inmunomoduladores actualmente utilizados son costosos en la fabricación. Condicionan síntesis y procedimientos de purificación complejos, de modo que la provisión de grandes cantidades requiere en última instancia, también para los pacientes, inversiones mayores.
En el estado de la técnica se da a conocer un efecto inhibidor de 6- y 8-prenilnaringenina sobre la producción de citoquina o bien prostaglandina de células inflamatorias, p. ej., Peluso et al., Planta Medica, tomo 76, N° 14, 2010; Cho et al., International Inmunopharmacology, tomo 10, N° 5, 2010; documento WO 02/39960. Con ello va acompañado, sin embargo, un efecto inmunoinhibidor.
Ante estos antecedentes, es misión de la presente invención proporcionar un nuevo inmunomodulador con el que se eviten o al menos se reduzcan los problemas descritos en el estado de la técnica.
Este problema se resuelve mediante la provisión de una composición para uso en la inmunoestimulación, la cual, como sustancia activa, presenta 6- y/u 8-prenilnaringenina (PN).
Los flavonoides prenilados pertenecen al grupo de los flavonoides, un gran grupo de compuestos polifenólicos de bajo peso molecular. Los flavonoides se encuentran en plantas y se componen de flavonas, flavonoles, flavononas, flavan-3-oles y antocianinas. Estos metabolitos vegetales secundarios juegan un papel en la defensa de la planta frente a microorganismos u hongos y la protección frente a estrés oxidativo.
Un representante importante de los flavonoides prenilados es la prenilnaringenina (PN).
Los autores de la invención pudieron demostrar de manera impresionante en el cultivo celular que 6- y/u 8-prenilnaringenina determina una estimulación del sistema inmune.
En el caso de la prenilnaringenina y los compuestos de acuerdo con la invención específicos que caen bajo la misma se puede tratar de la o bien de las únicas sustancias activas para la monoterapia en sentido estricto. Sin embargo, también pueden preverse otras sustancias activas, de modo que resultan efectos eventualmente sinérgicos.
Con ello, se resuelve por completo el problema en el que se fundamenta la invención.
La composición presenta 6-prenilnaringenina (6-PN) y/u 8-prenilnaringenina (8-PN).
6-PN y 8-PN son los denominados flavonoides prenilados. Estos se encuentran en bajas concentraciones, por ejemplo, en el lúpulo y en la cerveza. La estructura de esta clase de flavonoides se deriva de 2-fenilcrom-4-ona. 6-PN y 8-PN son isómeros. La diferencia estriba en la posición del grupo fenilo consistente en cinco átomos de carbono. 6-PN y 8-PN son productos de una reacción con cierre del anillo de una molécula precursora común, desmetilxantohumol, un polifenol que se basa en la estructura de 1,3-difenil-2-propen-1-ona. Ambas moléculas existen como enantiómeros (R,S).
8-PN presenta una fuerte afinidad de unión a receptores de estrógenos del útero de rata y ha sido identificada como un potente fitoestrógeno en virtud de una separación característica de los grupos hidroxilo que imitan a betaestradiol; véase Milligan et al. (1999), Identification of potent phytoestrogen in hops (Humulus lupulus L.) and beer, J. Clin. Endocrinol. Metab. 84, 2249-2252.
Junto a las propiedades antioxidantes, algunos flavonoides muestran también propiedades anticancerosas; véase Hodek et al. (2002) Flavonoids-potent and versatile biologically active compounds interacting with cytochromes, pág.
450, Chem. Biol. Interact. 139, 1-21. 8-PN inhibe la angiogenesis, inducida por el factor de crecimiento de fibroblastos básico y factor de crecimiento endotelial vascular, en un gel de colágeno tridimensional in vitro y en ensayos de la membrana corioalantoidea in vivo; véase Hepper et al. (2004), 8-Prenylnaringenin, A novel phytoestrogen, inhibits angiogenesis in vitro and in vivo, J. Cell Physiol.199, 98-107. 8-PN imita los efectos de 17pestradiol en células de cáncer de mama MCF-7; véase Rrong et al.(2001), 8-Prenylnaringenin, the phytoestrogen in hops and beer, upregulates the function of the e-cadherin-/catenin complex in human mammary carcinoma cells, Eur. J. Cell. Biol. 80, 5 180-585. 8-PN induce, además, la apoptosis en células MCF7 y en blastos de leucemia resistentes a una pluralidad de sustancias activas; véase Brunelli et al. (2007), 8-Prenylnaringenin, inhibits estrogen receptor-a-mediated cell growth and induces apoptosis in MCF-7 breast cancer cells, J. Steroid. Biochem. Mol. Biol.
107, 140-148, y Diller et al. (2007), Ability of prenylflavonones present in hops to induce apoptosis in a human Burkitt lymphoma cell line, Planta Med. 73, 755-761. Recientemente se describió, además, la inhibición de la glicoproteína P, la proteína transportadora asociada a una multirresistencia, y la inhibición de MRP1 por parte de 8-PN; véase Wesolowska et al. (2010), 8-Prenylnaringenin is an inhibitor of multidrug resistance-associated transporters, P-glycoprotein and MRP1, Eur. J. Pharmacol 644, 32-40. Además, 8-PN inhibe directamente la activación de la vía de señales K/Akt de PI (3) en células MCF-7 in vitro; Brunelli et al. (2009), 8-Prenylnaringerin inhibits epidermal growth factor-induced MCF-7 breast cancer cell proliferation by targeting phosphatidylinositol-3-OH kinase activity, J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 113, 163-170, 6-PN y 8-PN muestran efectos antiproliferantes sobre las líneas celulares de cáncer de próstata humanas PC-3 y DU145 in vitro; Delmulle et al. (2006), Anti-proliferative properties of prenylated flavonoids from hops (Humulus lupulus L.) in human prostate cancer cell lines, Phytomedicine 13, 732 734. Esto tiene lugar en ausencia de una activación de caspasa-3 y características morfológicas apoptóticas típicas; Delmulle et al. (2008), Treatment of PC-3 and DU145 prostate cancer by prenyflavonoids from hop (Humulus lupulus L.) induces a caspase-independent form of cell death, Phytother. Res. 22, 197-203.
En la solicitud de patente alemana DE 102013104342 se describe el uso de 6-PN y 8-PN para el tratamiento de un melanoma y un precursor de melanoma de la piel, así como una metástasis de la mucosa. Allí se describe, además, que en el caso de 6-PN y 8-PN se trata de inhibidores distintos de histona desacetilasas (HDACs) de las clases I, II y IV.
La idoneidad de 6-PN y 8-PN como inmunoestimulador no se ha descrito hasta ahora en el estado de la técnica.
Los autores de la invención pudieron demostrar de manera impresionante que 6-PN y 8-PN ejercen efectos inmunoestimuladores sobre el sistema inmune innato o bien sobre células asesinas naturales (células NK). Las prenilnaringeninas aumentan de forma masiva la viabilidad de células NK, prolongan la supervivencia global de células NK y determinan un “asesinato” incrementado de células modificadas, tales como células infectadas con virus o células tumorales. Las prenilnaringeninas activan, por consiguiente, a las células NK de forma directa o indirecta.
La invención se refiere, por lo tanto, a una inmunoestimulación.
Esta medida tiene la ventaja de que a través de una activación preestablecida del sistema inmune innato tiene lugar una estimulación de los mecanismos de defensa endógenos, y el organismo está protegido frente a ello de manera mejorada frente a enfermedades.
Según un perfeccionamiento preferido, en el caso de la inmunoestimulación se trata de una del sistema inmune innato.
Esta medida tiene la ventaja de que se actúa positivamente de forma decidida sobre la parte del sistema inmune a través de la cual se puede rechazar una gran parte de infecciones y enfermedades.
Según un perfeccionamiento de acuerdo con la invención, la inmunoestimulación determina una estimulación y/o un aumento de la viabilidad y/o un aumento de la vida y/o un aumento de la actividad de las células asesinas naturales (células NK).
Esta medida tiene la ventaja de que se actúa de manera estimulante sobre el tipo de célula central del sistema inmune innato. Con ello, el cuerpo es fortalecido y está en condiciones de reconocer y exterminar de manera mejorada células anormales, tales como células tumorales o células infectadas por virus. En este caso, la activación de las células NK puede tener lugar tanto mediante la activación directa de las células NK, p. ej., mediante una regulación al alza de mecanismos estimulantes. Así, se pueden regular al alza ligandos de superficie específicos o bien receptores a células diana, por ejemplo células tumorales o infectadas por virus, los cuales son reconocidos por células del sistema inmune innato y, por consiguiente, conducen a una actividad incrementada. Además, la activación de las células NK puede tener lugar mediante una activación indirecta, p. ej., mediante regulación a la baja de mecanismos inhibidores.
En el caso de la composición de acuerdo con la invención se trata preferiblemente de una composición farmacéutica que está configurada, además, preferiblemente para el tratamiento de una enfermedad que se elige del grupo consistente en infecciones virales, enfermedades autoinmunes o enfermedades tumorales.
Se entiende que la composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede presentar una formulación farmacéuticamente aceptable. Formulaciones farmacéuticamente aceptables son suficientemente conocidas en el estado de la técnica. A modo de ejemplo, se remite al tratado de Kibbe A. (2000), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3a edición, American Pharmaceutical Association and Pharmaceutical Press. La composición farmacéutica de acuerdo con la invención puede contener, además, aditivos. Estos abarcan cualquier compuesto o composición que sean ventajosos para el uso de acuerdo con la invención, bajo los cuales caen sales, aglutinantes, disolventes, agentes dispersantes y otras sustancias utilizadas habitualmente en relación con la formulación de medicamentos.
La composición de acuerdo con la invención puede presentarse en una forma de aplicación que posibilite una aplicación sistémica o una aplicación tópica tal como, por ejemplo, en forma de solución para inyección o bebible, en forma de pomada, crema, loción, gel, pasta, sistema terapéutico transdérmico, espuma, polvo. La sustancia activa puede presentarse, además, encapsulada, por ejemplo en liposomas.
Según una forma de realización alternativa, en el caso de la composición de acuerdo con la invención se trata de un producto alimenticio.
Esta medida tiene la ventaja de que las propiedades positivas de los flavonoides prenilados reconocidas por los autores de la invención pueden ser recogidas a través de los alimentos. No se requiere la provisión de un medicamento sintetizado de forma compleja y a aprobar. El producto alimenticio puede contener al flavonoide prenilado o bien 6-PN y/u 8-PN en una concentración que se presenta de forma natural. El producto alimenticio puede estar enriquecido, sin embargo, también en relación con estas sustancias activas, de modo que resulta un efecto positivo incrementado sobre la salud del organismo. El producto alimenticio puede ser tanto un líquido como un alimento sólido.
En este caso, se prefiere que en el caso del producto alimenticio se trate de uno a base de lúpulo.
Esta medida tiene la ventaja de que se utiliza una “materia prima” natural para los flavonoides prenilados o bien 6-PN y/u 8-PN, la cual está disponible en grandes cantidades y a partir de la cual se pueden aislar bien o bien enriquecer las sustancias activas.
En este caso, se prefiere que en la composición de acuerdo con la invención, la sustancia activa, es decir, el flavonoide prenilado o bien prenilnaringenina (PN), preferiblemente 6-PN y/u 8-PN, se presente en forma micelada o bien empaquetada en micelas.
Las micelas, también denominadas coloides de asociación, son agregados a base de moléculas anfifílicas o bien sustancias tensioactivas que se acumulan espontáneamente en un medio de dispersión, por ejemplo agua. Frente a los liposomas presentan un diámetro claramente menor. Éste se encuentra por término medio en el intervalo nanométrico, entre aprox. 1 nm - aprox. 100 nm, preferiblemente entre aprox. 20 nm - 80 nm, más preferiblemente aprox. 35 nm - 65 nm, lo más preferiblemente, aprox. 30 nm o 50 nm. “Aprox.” significa a este respecto ± 10 %. El empaquetamiento de la sustancia activa en micelas tiene la ventaja de que con ello se aumenta claramente la biodisponibilidad en el organismo. Las micelas que contienen la sustancia activa se presentan en un producto solubilizado. La sustancia activa está, por así decirlo, “solubilizada”. Como particularmente adecuado se ha manifestado un empaquetamiento en micelas que es ofrecido por la razón social Aquanova, Darmstadt, Alemania, bajo la denominación “Produkt-Micelle”. Los productos solubilizados obtenidos se comercializan bajo la denominación NovaSOL®. Las micelas producto son estables térmicamente, mecánicamente y también en el ácido gástrico y, por término medio, presentan un diámetro de solo aprox. 30 nm.
Otro objeto de la presente divulgación se refiere al uso de un flavonoide prenilado, preferiblemente de prenilnaringenina, más preferiblemente de 6- y/u 8-prenilnaringenina, como inmunomodulador, preferiblemente inmunoestimulador, más preferiblemente para la estimulación y/o el aumento de la viabilidad y/o el aumento de la vida de las células asesinas naturales (células NK).
Otro objeto de la presente divulgación se refiere a un procedimiento para la inmunomodulación, preferiblemente para la inmunoestimulación, más preferiblemente para la estimulación y/o el aumento de la viabilidad y/o el aumento de la vida y/o el aumento de la actividad de las células asesinas naturales (células NK) en un organismo vivo, preferiblemente un ser humano, que presenta las siguientes etapas: (1) provisión de la composición de acuerdo con la invención y (2) aplicación de la composición en o bien al organismo vivo y (3), eventualmente, repetición de las etapas (1) y (2), teniendo lugar preferiblemente la aplicación por vía sistémica y/o tópica.
Se entiende que las características precedentemente mencionadas y a explicar todavía en lo que sigue se pueden utilizar no solo en la combinación en cada caso indicada, sino también en otras combinaciones o individualmente, sin abandonar el marco de la presente invención.
La invención se explica ahora con mayor detalle con ayuda de Ejemplos de realización, de los que resultan propiedades, características y ventajas adicionales. Los Ejemplos de realización han de ilustrar la invención, pero no limitar su alcance. En este caso, se hace referencia a las Figuras adjuntas, en las que se representa lo siguiente:
La Fig. 1, estructuras químicas de 6-PN y 8-PN. Se representan las estructuras químicas de 6-prenilnaringenina (5,6-dihidroxi-2-(4-hidroxi-fenil)-6-(3-metil-but-2-enil)-croman-4-ona y 8-prenilnaringenina (5,7-dihidroxi-2-(4-hidroxi-fenil)-8-(3-metil-but-2-enil)-croman-4-ona.
La Fig. 2, medición de la viabilidad en células NK después de tratamiento durante 48 horas con diferentes concentraciones de 6-PN u 8-PN.
La Fig. 3, medición de la supervivencia global de células NK después de tratamiento único con diferentes concentraciones de 6-PN u 8-PN.
La Fig. 4, análisis de la actividad de células NK sobre células tumorales HepG2 humanas.
La Fig. 5, 6-PN y 8-PN activan células inmunes humanas primarias y reducen la masa del tumor de
un melanoma maligno metastásico.
La Fig. 6 , 6-PN y 8-PN aumentan/prolongan la viabilidad de células NK de donantes sanos, medida
en un aparato de viabilidad/recuento de células automatizado.
La Fig. 7, 6-PN y 8-PN aumentan/prolongan la viabilidad de PBMCs de donantes sanos, medida en
un aparato de viabilidad/recuento de células automatizado.
La Fig. 8, 6-PN y 8-PN aumentan la activad metabólica de PBMCs de donantes sanos o de la línea celular NK estandarizada y adquirible en el comercio NKL, medida con el ensayo Cell
Titer-Blue de Promega.
Ejemplos de Realización
1. Síntesis de 6-prenilnaringenina y 8-prenilnaringenina (PN)
8-prenilnaringenina y 6-prenilnaringenina se sintetizaron conforme a Gester et al. (2001), An efficient Synthesis of the potent phytoestrogens 8-prenylnaringenin and 6-(1,1-dimetialil)naringenin by europium (III)-catalyzed Claisen rearrangement, Tetrahedron 57, 1015-1018 o bien Tischer y Metz (2007), Selective C-6 prenylation of flavonoids via europium (III)-catalyzed Claisen rearrangement and cross-metathesis, Advanced Synthesis & Catalysis 349, 147 151. El contenido de las dos publicaciones precedentes es componente como referencia de la presente solicitud.
2. Viabilidad incrementada de células NK humanas mediante 6-PN y 8-PN
Células NK humanas fueron tratadas durante 48 horas con 6,25, 12,5, 25 o 50 pM de 6-PN u 8-PN. A continuación, se llevó a cabo una medición de la viabilidad (ensayo de viabilidad Cell Titer Blue, Promega, Madison, Estados Unidos de América). Como colorante de referencia para las dos HDACi naturales 6-PN y 8-PN se utilizó la HDACi SAHA (Vorinostat) clínicamente empleada y establecida, en pequeñas concentraciones. El resultado se reproduce en la Fig. 2. Se representan los valores medios con la desviación estándar de tres experimentos independientes con células NK expandidas de tres donantes humanos sanos. La línea horizontal trazada visualiza el valor del control no tratado; una disminución de la señal de fluorescencia significa reducción de la viabilidad. En este caso se demuestra que en intervalos de concentraciones entre 6,25 y 50 pM, 6-PN u 8-PN (Fig. 2A, B) se puede medir un aumento, en parte claro, de la viabilidad de células NK humanas frente a la tanda de control, así como a las células tratadas con SAHA. El grupo de tratamiento con SAHA muestra, por el contrario, a lo largo de todo el intervalo de concentraciones, una clara reducción de la viabilidad de las células NK (Fig. 2C).
3. Supervivencia global prolongada de células NK humanas
Células NK humanas fueron tratadas con 6,25, 12,5, 25 o 50 pM de 6-PN u 8-PN. A continuación, a través de tinción con azul tripán y recuento al microscopio diario en cámaras de recuento Chip C estandarizadas, se midió la supervivencia global de las células NK. Como sustancia activa de referencia se utilizó de nuevo la HDACi SAHA (Vorinostat). El resultado se representa en la Fig. 3. Se representa el valor medio con la desviación estándar de tres experimentos independientes con células NK expandidas de tres donantes humanos sanos. La flecha de la izquierda visualiza < 10 % de células vivas en el grupo de tratamiento con SAHA; la flecha de la derecha visualiza < l0 % de células vivas en el grupo control no tratado. En este caso se demuestra que la tasa de supervivencia de las células NK a lo largo de todas las concentraciones de 6-PN (Fig. 3A) y 8-PN (Fig. 3B) sometidas a ensayo se aumenta claramente con respecto al control no tratado y a las células tratadas con SAHA.
4. Actividad incrementada de células NK humanas sobre células tumorales humanas
En un experimento adicional se analizó la actividad de NK en células tumorales HepG2 humanas mediante monitoreo de células en tiempo real (Roche Applied Science xCELLigence SP-System, Mannheim, Alemania). Las células tumorales HepG2 se distinguen por una baja sensibilidad frente a 6-PN o bien 8-PN. Se midió la impedancia celular de las células tumorales adherentes como parámetro para el estado de las células (número de células, viabilidad, morfología, adhesión). Como control positivo para la inducción de la muerte celular se utilizó Triton X-100. Se llevaron a cabo tres experimentos independientes con células NK expandidas de tres donantes humanos sanos. El resultado se muestra en la Fig. 4. Se representan los valores medios con desviación estándar de un ensayo ilustrativo. Las células tumorales HepG2 (diana) se incubaron a partir del inicio del tratamiento (24 horas) con 25 pM de 6-PN u 8-PN o bien con células NK (efector) (relación de efector a diana (E:T) = 1,25:1 o 2,5:1) o con la combinación a base de HDACi y células NK. La normalización tuvo lugar al inicio del tratamiento y una caída de la impedancia (índice celular normalizado) significa la reducción de la viabilidad de las células o bien del estado de las células. En este caso, se demuestra, en comparación con el control para la muerte celular inducida (Triton X-100), que tanto en el caso de un tratamiento con 6-PN (Fig. 4A, B) como con 8-PN (Fig. 4C, D), se produce una actividad incrementada de las células NK humanas frente a células tumorales humanas. Ensayos con otras concentraciones de 6-PN u 8-PN (p. ej., 6,25 pM) u otra relación E:T (p. ej., 5:1), así como una línea de células tumorales adicional (p.ej., Hep3B) proporcionaron resultados equivalentes.
5. Confirmación de la inmunomodulación antitumoral mediante material de pacientes primario
En un experimento adicional en material de pacientes primario se demostró que 6-PN y 8-PN activan células inmunes humanas primarias y reducen la masa del tumor de un melanoma maligno metastásico. El resultado de este experimento se muestra en la Fig. 5: A Fotografías al microscopio en un aumento de 200x que muestran las células tumorales de melanoma con células inmunes adheridas; en el caso del tratamiento con 12,5 pM o 25 pM de 6-PN o bien 8-PN se reduce claramente el número de las células tumorales vitales (flechas en rojo). B La evaluación cuantitativa de las células tumorales 48, 72 y 96 h después del comienzo del tratamiento muestra una disminución significativa de las células de melanoma bajo tratamiento con 12,5 pM o 25 pM de 6-PN o bien 8-PN; 3 recuentos independientes por triplicado; prueba de comparación múltiple de Dunnett con ANOVA de una vía, **P < 0,01.
6. Confirmación del aumento actual de la viabilidad de células NK con aparato de recuento de células automático
En un experimento consecutivo se demostró que 6-PN y 8-PN aumentan/prolongan la viabilidad de células NK de donantes sanos, medido en un aparato de viabilidad/recuento de células automatizado. Con ello, el examen es independiente de la persona que realiza el experimento. El resultado se representa en la Fig. 6. Células NK de dos donantes sanos fueron tratadas una vez con 12,5 pM o 25 pM de 6-PN o bien 8-PN y, a continuación, se examinó diariamente, en momentos independientes, mediante un aparato de recuento de células Nucleocounter NC-250, en cuanto a la viabilidad a lo largo de un espacio de tiempo de 336 h; se muestra el valor medio /- DE.
7. Expansión del aumento de la viabilidad a la población de células relevante: células mononucleares de la sangre periférica (PBMCs)
En un experimento adicional se demostró que 6-PN y 8-PN aumentan/prolongan la viabilidad de PBMCs de donantes sanos, medido en un aparato de viabilidad/recuento de células automatizado. El resultado se representa en la Fig. 7. PBMCs de tres donantes sanos fueron tratadas una vez con 12,5 pM o 25 pM de 6-PN o bien 8-PN y, a continuación, se examinó diariamente, en momentos independientes, mediante un aparato de recuento de células Nucleocounter NC-250, en cuanto a la viabilidad a lo largo de un espacio de tiempo de 336 h; se muestra el valor medio /- DE.
8. Confirmación de la actividad activadora sobre PBMCs mediante ensayo alternativo y confirmación renovada mediante la línea celular NK adquirible en comercio (NKL)
En otro experimento se demostró que 6-PN y 8-PN aumentan la actividad metabólica de PBMCs de donantes sanos o de la línea celular NK NKL adquirible en el comercio, medido con el ensayo Cell Titer-Blue de Promega. El
resultado se muestra en la Fig. 8. A PBMCs de dos donantes sanos fueron tratadas una vez con 12,5 |uM o 25 |uM de 6-PN o bien 8-PN y fueron examinadas después de 48 h. B Células NKL fueron tratadas una vez con 12,5 |uM o 25 |uM de 6-PN o bien 8-PN y fueron examinadas después de 48 h. En el caso de las dos poblaciones de células inmunes y en el caso de los dos tratamientos se puede detectar un aumento de la actividad metabólica; se muestra el valor medio /- DE.
Conclusión
Los autores de la invención pudieron demostrar que 6-prenilnaringenina (6-PN) y 8-prenilnaringenina (8-PN) ejercen efectos inmunoestimuladores sobre el sistema inmune innato o bien células NK. Estas HDACi naturales (i) aumentan masivamente la viabilidad de células NK, (ii) prolongan la supervivencia global de células NK y (iii) activan células NK o bien determinan un “asesinato” incrementado de células degeneradas o bien infectadas humanas mediante células NK.
Claims (8)
1. Composición que presenta 6- y/u 8-prenilnaringenina como sustancia activa para uso en la inmunoestimulación.
2. Composición según la reivindicación 1, para uso según la reivindicación 1, caracterizada por que en el caso de la inmunoestimulación se trata de una del sistema inmune innato.
3. Composición según una de las reivindicaciones precedentes, para uso según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por que la inmunoestimulación determina una estimulación y/o un aumento de la viabilidad y/o el aumento de la vida y/o el aumento de la actividad de las células asesinas naturales (células NK).
4. Composición según una de las reivindicaciones precedentes, para uso según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por que en el caso de la composición se trata de una composición farmacéutica.
5. Composición según la reivindicación 4, para uso según la reivindicación 4 en el tratamiento de una enfermedad que se elige del grupo consistente en infecciones virales, enfermedades autoinmunes, enfermedades tumorales.
6. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 3, para uso según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada por que en el caso de la composición se trata de un producto alimenticio.
7. Composición según la reivindicación 6, para uso según la reivindicación 6, caracterizada por que en el caso de la composición se trata de un producto alimenticio a base de lúpulo.
8. Composición según una de las reivindicaciones precedentes, para uso según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por que la sustancia activa se presenta en forma micelada.
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