ES2813415T3 - Métodos y composiciones para el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para uso en la inhibición de una enfermedad inflamatoria o autoinmune en un sujeto que lo necesita, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo comprende los seis dominios CDR del anticuerpo anti-RhoB 7F7 o el anticuerpo anti-RhoB 9G5, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB 7F7 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12, y dicho anti-RhoB 9G5 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16, y en el que la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende: - CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos RSSQSLVHSNGNTYLH, - CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos KVSNRFS, y - CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos SQSTHVPYTFGGGTKLEIK; y la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende: - CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SYYMF, - CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos GFNPTNGGTDFNEKFKS, y - CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos DGNLWGQGTSVTVSS; y la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende: - CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SASSSVSYMH, - CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos DTSNLAS, y - CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos HQRSSYPYTFGGGTKLEIKR; y la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende: - CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos TYAMN, - CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos RIRSKSNNYATYYADSVKD, y - CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos GGGNLDYWGQGTTLTVSS.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos y composiciones para el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias

La presente solicitud reivindica la prioridad, a tenor de 35 U.S.C. §119 (e), de la Solicitud Provisional de Patente de Estados N.° 61/522.009, presentada el 10 de agosto de 2011.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas. Específicamente, la invención proporciona composiciones y métodos novedosos para el tratamiento de enfermedades que tienen un componente autoinmune y/o inflamatorio en su patología como se define en las reivindicaciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad autoinmune se produce cuando un organismo no reconoce sus propias partes constituyentes como "propias", dando como resultado una respuesta inmune frente a sus propias células y tejidos. En otras palabras, el cuerpo ataca a sus propias células. El sistema inmunológico confunde alguna parte del cuerpo con un patógeno y lo ataca. Los tratamientos actuales para las enfermedades autoinmunes normalmente incluyen inmunosupresión y/o tratamiento sintomático con antiinflamatorios que no modifican la enfermedad para disminuir el daño de la respuesta inmune anómala. Sin embargo, en la técnica existe la necesidad de métodos y composiciones para inhibir y/o retrasar la aparición de patología asociada con trastornos autoinmunes.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención se define mediante las reivindicaciones y cualquier otro aspecto o realización presentados en el presente documento que no esté dentro del ámbito de las reivindicaciones es solo para información. La invención es como se define en las reivindicaciones adjuntas y se refiere a un anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para su uso en la inhibición de una enfermedad inflamatoria o autoinmune en un sujeto; un anticuerpo aislado o fragmento del mismo inmunológicamente específico para RhoB; y una composición que comprende al menos un anticuerpo o fragmento del mismo. De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporcionan métodos para inhibir, tratar y/o prevenir la aparición de una enfermedad autoinmune y/o inflamatoria y/o enfermedades que tienen un componente autoinmune y/o inflamatorio en su patología en pacientes que lo necesitan, en donde los métodos comprenden la administración de al menos un anticuerpo anti-RhoB o fragmento de anticuerpo inmunológicamente específico para RhoB o un fragmento peptídico del mismo como se define en las reivindicaciones. En el presente documento también se desvela un inhibidor de RhoB. En una opción particular, el inhibidor de RhoB es una molécula pequeña relacionada estructuralmente o procedente del anticuerpo, fragmento de anticuerpo, fragmento de péptido o mimético químico o biológico de las regiones CDR y epítopos de los anticuerpos reconocidos por las CDR. En una opción particular, el inhibidor de RhoB es un péptido RhoB. En una opción particular, los métodos de la divulgación comprenden la administración de una composición que comprende al menos un péptido RhoB y/o anticuerpo o fragmento de anticuerpo inmunológicamente específico para RhoB o un fragmento peptídico del mismo y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una opción particular, los métodos además comprenden la administración de al menos un agente antiinflamatorio y/o inmunosupresor de forma simultánea y/o secuencial con el al menos un inhibidor de RhoB (por ejemplo, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo inmunológicamente específico para RhoB o un fragmento peptídico del mismo).

También se describen composiciones para la inhibición, tratamiento y/o prevención de enfermedades inflamatorias o autoinmunes. Las composiciones comprenden al menos un inhibidor de RhoB y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una opción particular, el inhibidor de RhoB es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo inmunológicamente específico para RhoB o un fragmento peptídico del mismo. En una opción particular, el inhibidor de RhoB es un péptido RhoB. En otra opción, la composición comprende además al menos un compuesto antiinflamatorio y/o al menos un agente inmunosupresor. En el contexto de la presente invención, la composición comprende al menos un anticuerpo anti-RhoB o un fragmento de anticuerpo del mismo como se define en las reivindicaciones adjuntas y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En el presente documento también se desvelan anticuerpos anti-RhoB, péptido RhoB (por ejemplo, para la generación de anticuerpos), o moléculas pequeñas relacionadas estructuralmente o procedentes del anticuerpo, fragmento de anticuerpo, fragmento de péptido o mimético químico o biológico de las regiones CDR y epítopos de los anticuerpos reconocidos por las CDR, y composiciones que los comprenden.

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporcionan métodos para inhibir, tratar y/o prevenir una afección o trastorno asociado con el aumento de los niveles de inmunoglobulina en el suero sanguíneo (por ejemplo, hipergammaglobulinemia o gammapatía monoclonal de significado incierto) en pacientes que lo necesitan, que comprenden la administración de al menos un anticuerpo anti-RhoB o fragmento de anticuerpo del mismo como se define en las reivindicaciones adjuntas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 es un gráfico del grosor medio del tobillo a lo largo del tiempo de ratones K/BxN que fueron tratados con suero anti-péptido RhoB, suero anti-KLH, o vehículo solo.

La Figura 2A es un gráfico del título de Ig anti-glucosa-6-fosfato isomerasa (GPI) en suero de ratones K/BxN tratados con suero anti-péptido RhoB, suero anti-KLH, o vehículo solo. La Figura 2B es un gráfico del número de células secretoras de anti-GPI por 105 células de ratones K/BxN tratados con suero anti-péptido RhoB, suero anti-KLH, o vehículo solo.

La Figura 3 proporciona la secuencia de aminoácidos de RhoB humana (SEQ ID NO: 3). La secuencia subrayada es el Péptido 1 (SEQ ID NO: 1).

La Figura 4 proporciona un gráfico de la secreción de IgM con o sin estimulación con lipopolisacárido (LPS) en presencia o ausencia de un anticuerpo de control o anticuerpos anti-RhoB de un hibridoma o un subclón del mismo.

La Figura 5 proporciona un alineamiento de secuencias de RhoA (SEQ ID NO:4) y RhoB (SEQ ID NO: 3). Las secuencias subrayadas y la secuencias en cajas representan antígenos para anticuerpos RhoB.

La Figura 6A proporciona un gráfico del grosor de la parte trasera del tobillo ± SEM de ratones K/BxN tratados con anticuerpo monoclonal anti-RhoB 9G5 o 7F7 o Ig de control antes de la aparición de artritis (21 días de edad). Las Figuras 6B y 6C proporcionan gráficos de los títulos de anticuerpos anti-GPI y el número de células secretoras de anticuerpos anti-GPI (ASC) en los ratones, respectivamente.

La Figura 7A proporciona un gráfico del grosor posterior del tobillo ± SEM de ratones K/BxN durante un periodo de tiempo prolongado que fueron tratados con anticuerpo monoclonal anti-RhoB 9G5 o Ig de control después de la aparición de artritis a las 4 semanas de edad. La Figura 7B proporciona un gráfico del grosor posterior del tobillo ± SEM de ratones K/BxN durante un periodo de tiempo más corto que fueron tratados con anticuerpo monoclonal anti-RhoB 9G5 o 7F7 o Ig de control después de la aparición de artritis a las 4 semanas de edad. La Figura 8A proporciona un gráfico del grosor del tobillo posterior ± SEM en ratones RhoB KO (RhoB KO KRN.g7) artríticos. La Figura 8B proporciona un gráfico del grosor de la parte posterior del tobillo ± SEM en ratones C57BL/6 sin tratamiento previo que recibieron una transferencia de suero de ratones KRN B6.g7 o RhoB KO KRN B6.g7 el día 0. La Figura 8C proporciona un gráfico del grosor de la parte posterior del tobillo ± SEM en ratones sin tratamiento previo de tipo silvestre o RhoB KO C57BL/6 que recibieron una transferencia de suero de ratones artríticos K/BxN el día 0.

La Figura 9A proporciona las secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO: 9) y de aminoácidos (SEQ ID NO: 10) de la cadena ligera de 7F7. La Figura 9B proporciona las secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO: 11) y de aminoácidos (SEQ ID NO: 12) de la cadena pesada de 7F7. Las líneas verticales representan fronteras entre dominios. En negrita - región variable (V); subrayado - región de unión (J); en cursiva - región de diversidad (D); FWR - región marco; CDR - región determinante de la complementariedad.

La Figura 10A proporciona las secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO: 13) y de aminoácidos (SEQ ID NO: 14) de la cadena ligera de 9G5. La Figura 10B proporciona las secuencias de nucleótidos (SEQ ID NO: 15) y de aminoácidos (SEQ ID NO: 16) de la cadena pesada de 9G5. Las líneas verticales representan fronteras entre dominios. En negrita - región variable (V); subrayado - región de unión (J); en cursiva - región de diversidad (D); FWR - región marco; CDR - región determinante de la complementariedad.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Los hibridomas estables que producen un anticuerpo monoclonal dirigido frente a RhoB han sido difíciles de generar y mantener. Al intentar obtener un hibridoma, se ha observado que los hibridomas más relevantes mueren o dejan de secretar el anticuerpo anti-RhoB. Esta observación condujo a la hipótesis de que un anticuerpo frente a RhoB podría inhibir la producción de anticuerpos en los linfocitos B. En el presente documento, se muestra que los anticuerpos frente a RhoB pueden inhibir la secreción de inmunoglobulinas de los linfocitos B de murino estimulados. Además, en el presente documento se muestra que los anticuerpos frente a RhoB retrasan la aparición y atenúan el transcurso de la artritis en un modelo animal de artritis reumatoide (RA) impulsada por autoanticuerpos. Las enfermedades o síntomas de enfermedades que son el resultado de la producción de autoanticuerpos se podrían beneficiar de una terapia que bloquee o atenúe la producción de anticuerpos.

La administración del anticuerpo anti-RhoB puede ser similar a otras terapias basadas en anticuerpos que son tolerables a pesar de su aspecto no dirigido para el tratamiento de enfermedades. Algunos ejemplos incluyen, pero no se limitan a, las terapias de anticuerpos anti-TNF (infliximab, adalimumab, etanercept), anti-CD20 (rituximab) y anti-BLyS (belimumab). Estas terapias generalmente mitigan la inflamación o erradican los linfocitos B o la función de los linfocitos B. Para los pacientes que toleran mal estas terapias, el anticuerpo anti-RhoB proporciona otra opción terapéutica.

La administración de anticuerpos RhoB tendrá probablemente una toxicidad o efectos secundarios bajos o nulos. En particular, los ratones que tienen deficiencia genética de RhoB son normales y carecen de deficiencias inmunológicas evidentes, incluyendo deficiencias en las respuestas de los linfocitos B a la estimulación de antígenos o la formación de memoria de IgG. Aunque los ratones con deficiencia de RhoB generan una respuesta de anticuerpos IgG normal, mostraron una respuesta secundaria de IgM levemente reducida. Por lo tanto, la tecnología anti-RhoB parece retardar la función anómala de los linfocitos B en la producción de anticuerpos autoinmunes, pero no altera la función normal de los linfocitos B después de la exposición antigénica canónica. En particular, RhoB es una proteína de respuesta al estrés con una semivida corta, por lo que es probable que se agote rápidamente y se vea afectada funcionalmente por un bloqueo de anticuerpos específico.

RhoB es una proteína intracelular. Sin quedar ligado a ninguna teoría, el anticuerpo anti-RhoB puede entrar en las células a través del receptor Fc. Como tal, esto podría dar como resultado una toxicidad o efectos secundarios reducidos, ya que solo las células que expresan el receptor Fc pueden ser susceptibles de terapia con anticuerpos anti-RhoB. De forma similar, la toxicidad también debería ser menor que la de los agentes inmunomoduladores no dirigidos tales como dexametasona, prednisona o talidomida, que en la actualidad se usan en el entorno clínico.

Aunque la presente invención desvela la terapia con anticuerpos anti-RhoB como se define en las reivindicaciones adjuntas, en el presente documento se describen, pero no se reivindican, otros inhibidores de RhoB (por ejemplo, actividad y/o expresión de RhoB) que se pueden usar en lugar de o en coordinación con los anticuerpos anti-RhoB. Por ejemplo, se pueden usar moléculas de ácido nucleico que inhiben la expresión de RhoB, tales como ARNip y moléculas antisentido. Se ha mostrado que el micro-ARN-21 reduce la expresión de (Sabatel et al. PLoS One (2011) 6:e16979). Además, las secuencias peptídicas RhoB identificadas en el presente documento o moléculas pequeñas estructuralmente relacionadas basadas en las secuencias peptídicas o las CDR que interactúan con los epítopos correspondientes en RhoB también pueden servir como inhibidores de la actividad de RhoB, en particular cuando se acoplan a sistemas de administración apropiados.

La interrupción de RhoB mediada por anticuerpos retarda, inhibe y/o atenúa las respuestas celulares inflamatorias que involucran a los linfocitos B. Como se mencionó anteriormente, los anticuerpos frente a RhoB se pueden usar para aliviar enfermedades o síntomas de enfermedad que son el resultado de la producción y/o secreción de autoanticuerpos. Sin embargo, se pueden diseñar agentes terapéuticos específicos dirigidos a RhoB (por ejemplo, administrados mediante un sistema de administración intracelular de macromoléculas (por ejemplo, la región variable de una molécula de IgG)) que detengan o redirijan las señales inflamatorias intracelulares que son organizadas por los linfocitos B. De esta manera, la terapia anti-RhoB funcionará en los tipos de células que contribuyen a la inflamación crónica, tal como las células mesenquimales (células endoteliales, miofibroblastos, células del músculo liso, monocitos/macrófagos) que se cree que contribuyen al desarrollo de enfermedad cardiovascular (CVD), cáncer, diabetes u otras enfermedades importantes que pueden ser apoyadas directa o indirectamente por un entorno tisular inflamatorio.

En la CVD, los estudios preclínicos han demostrado que RhoB está regulada por estatinas y existen evidencias clínicas de que el efecto "no reductor del colesterol" de las estatinas se puede atribuir a acciones antiinflamatorias. Por lo tanto, las terapias anti-RhoB se pueden usar para limitar la aterosclerosis o se pueden combinar con estatinas u otras terapias antiinflamatorias como nuevas opciones terapéuticas. En otros entornos de tejido inflamatorio, anti-RhoB también puede inhibir la respuesta inflamatoria de los fibroblastos. Como tal, la terapia anti-RhoB puede mitigar las respuestas fibróticas que contribuyen a la cicatrización tisular, tal como en la piel, el hígado o el corazón.

Con respecto a la diabetes, se ha mostrado que para la activación de los linfocitos T que causan enfermedades se requieren autoanticuerpos (Harbers et al. (2007) J. Clin. Invest., 117:1361-1369). En consecuencia, el desarrollo de enfoques para evitar que los autoanticuerpos activen los linfocitos T (por ejemplo, mediante la reducción o inhibición de autoanticuerpos) podría evitar o tratar enfermedades autoinmunes. En particular, se ha demostrado que los anticuerpos específicos para CD20 pueden reducir la aparición de diabetes mediante el agotamiento de un subconjunto de linfocitos B (Hu et al. (2007) J. Clin. Invest., 117:3857-3867). Además de la diabetes, se ha demostrado el tratamiento de otras enfermedades autoinmunitarias mediado por anticuerpos. Por ejemplo, se ha mostrado que los anticuerpos frente al receptor de esfingosina 1-fosfato reducen la colitis en un modelo de ratón (Liao et al. (2009) FASEB J., 23:1786-96).

Como se ha indicado anteriormente, la presente invención proporciona composiciones y métodos para la inhibición, el tratamiento y/o la prevención de enfermedades autoinmunes y/o enfermedades inflamatorias como se define en las reivindicaciones adjuntas. En una realización particular, las enfermedades autoinmunes o enfermedades inflamatorias que se van a tratar mediante los métodos de la invención son aquéllas en las que los linfocitos B están implicados en la fisiopatología y/o los síntomas de la enfermedad. Tales enfermedades autoinmunes y enfermedades inflamatorias también se pueden denominar enfermedades autoinmunes mediadas por linfocitos B o enfermedad inflamatoria. Los linfocitos B se han implicado en el desempeño de un papel en la fisiopatología de una variedad de enfermedades autoinmunes o inflamatorias (véase, por ejemplo, Browning, J.L. (2006) Nat. Rev. Drug Discov., 5:564-576).

Como se usa en el presente documento, la expresión "enfermedad autoinmune" se refiere a la presencia de una respuesta autoinmune (una respuesta autoinmune dirigida frente a un antígeno propio o autoantígeno) en un sujeto. Las enfermedades autoinmunes incluyen enfermedades causadas por un fallo en la tolerancia propia de un modo tal que el sistema inmune adaptativo responde a antígenos propios y media daño celular y tisular. En una realización particular, las enfermedades autoinmunes se caracterizan por ser resultado de, al menos en parte, una respuesta inmune humoral.

Algunos ejemplos de enfermedad autoinmune incluyen, pero no se limitan a, encefalomielitis diseminada aguda (ADEM), leucoencefalitis hemorrágica necrotizante aguda, enfermedad de Addison, agammaglobulinemia, asma alérgica, rinitis alérgica, alopecia areata, amiloidosis, espondilitis anquilosante, rechazo de trasplante mediado por anticuerpos, nefritis por anti-GBM/anti-TB, síndrome antifosfolipídico (APS), angioedema autoinmune, anemia aplásica autoinmune, disautonomía autoinmune, hepatitis autoinmune, hiperlipidemia autoinmune, inmunodeficiencia autoinmune, enfermedad autoinmune del oído interno (AIED), miocarditis autoinmune, pancreatitis autoinmune, retinopatía autoinmune, púrpura trombocitopénica autoinmune (ATP), enfermedad tiroidea autoinmune, urticaria autoinmune, neuropatías axonales y neuronales, enfermedad de Balo, enfermedad de Behcet, penfigoide ampolloso, miocardiopatía, enfermedad de Castleman, enfermedad celíaca, enfermedad de Chagas, síndrome de fatiga crónica, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP), ostomielitis multifocal recurrente crónica (CRMO), síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial/penfigoide benigno de la mucosa, enfermedad de Crohn, síndrome de Cogans, enfermedad por crioaglutininas, bloqueo cardiaco congénito, miocarditis por virus coxsackie, enfermedad de CREST, crioglobulinemia mixta esencial, neuropatías desmielinizantes, dermatitis herpetiforme, dermatomiositis, enfermedad de Devic (neuromielitis óptica), Síndrome de Dressler, endometriosis, fascitis eosinofílica, eritema nudoso, encefalomielitis alérgica experimental, síndrome de Evans, fibromialgia, alveolitis fibrosante, arteritis de células gigantes (arteritis temporal), glomerulonefritis, síndrome de Goodpasture, granulomatosis con poliangeítis (GPA), enfermedad de Graves, Síndrome de Guillain-Barre, encefalitis de Hashimoto, tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura de Henoch-Schonlein, herpes gestacional, hipogammaglobulinemia, hipergammaglobulinemia, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), nefropatía por IgA, enfermedad esclerosante relacionada con lgG4, lipoproteínas inmunoreguladoras, miositis por cuerpos de inclusión, enfermedad inflamatoria intestinal, diabetes insulinodependiente (tipo 1), cistitis intersticial, artritis juvenil, diabetes juvenil, síndrome de Kawasaki, síndrome de Lambert-Eaton, vasculitis leucocitoclástica, liquen plano, liquen escleroso, conjuntivitis leñosa, enfermedad por IgA lineal (LAD), lupus (SLE), enfermedad de Lyme, enfermedad de Meniére, poliangeítis microscópica, enfermedad mixta del tejido conectivo (MCTD), gammapatía monoclonal de significado incierto (MGUS), úlcera de Mooren, enfermedad de Mucha-Habermann, esclerosis múltiple, miastenia grave, miositis, narcolepsia, neuromielitis óptica (enfermedad de Devic), neutropenia, penfigoide cicatricial ocular, neuritis óptica, reumatismo palindrómico, PANDAS (trastornos neuropsiquiátricos autoinmunes pediátricos asociados a estreptococos), degeneración cerebelosa paraneoplásica, hemoglobinuria paroxística nocturna (PNH), síndrome de Parry-Romberg, síndrome de Parsonage-Turner, pars planitis (uveítis periférica), pénfigo, neuropatía periférica, encefalomielitis perivenosa, anemia perniciosa, síndrome de POEMS, poliarteritis nodosa, síndromes poliglandulares autoinmunes de tipo I, II y III, polimialgia reumática, polimiositis, síndrome posterior a infarto de miocardio, síndrome postpericardiotomía, dermatitis por progesterona, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, psoriasis, artritis psoriásica, fibrosis pulmonar idiopática, pioderma gangrenoso, aplasia eritrocítica pura, fenómeno de Raynauds, distrofia simpática refleja, síndrome de Reiter, policondritis recidivante, síndrome de piernas inquietas, fibrosis retroperitoneal, fiebre reumática, artritis reumatoide, sarcoidosis, síndrome de Schmidt, escleritis, esclerodermia, síndrome de Sjogren, autoinmunidad espermática y testicular, síndrome de la persona rígida, endocarditis bacteriana subaguda (SBE), síndrome de Susac, oftalmía simpática, arteritis de Takayasu, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, púrpura trombocitopénica (PTT), síndrome de Tolosa-Hunt, mielitis transversa, colitis ulcerosa, enfermedad indiferenciada del tejido conectivo (UCTD), uveítis, vasculitis, dermatosis vesiculoampollosa, vitíligo, macroglobulinemia de Waldenstrom (WM), y granulomatosis de Wegener (granulomatosis con poliangeítis (GPA)).

En una realización particular, la enfermedad autoinmune se selecciona entre el grupo que consiste en artritis reumatoide, diabetes de tipo 1, lupus eritematoso sistémico (lupus o SLE), miastenia grave, esclerosis múltiple, esclerodermia, enfermedad de Addison, penfigoide ampolloso, pénfigo vulgar, síndrome de Guillain-Barre, síndrome de Sjogren, dermatomiositis, púrpura trombocitopénica trombótica, hipergammaglobulinemia, gammapatía monoclonal de significado incierto (MGUS), macroglobulinemia de Waldenstrom (WM), polirradiculoneuropatía desmielinizante inflamatoria crónica (CIDP), encefalopatía de Hashimoto (HE), tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, granulomatosis de Wegener, y rechazo de trasplante mediado por anticuerpos (por ejemplo, para trasplantes de tejidos tales como trasplante renal). En una realización particular, la enfermedad autoinmune es diabetes de tipo 1, lupus, o artritis reumatoide.

Como se usa en el presente documento, una "enfermedad inflamatoria" se refiere a una enfermedad causada por, o que es resultado de, o que da como resultado, inflamación. La expresión "enfermedad inflamatoria" también puede referirse a una reacción inflamatoria no regulada que causa una respuesta exagerada por parte de macrófagos, granulocitos, y/o linfocitos T que conduce a daño tisular anómalo y muerte celular. En una realización particular, la enfermedad inflamatoria comprende un proceso inflamatorio mediado por anticuerpos. Una "enfermedad inflamatoria" puede ser una afección inflamatoria aguda o crónica y puede ser resultado de infecciones o causas no infecciosas. Algunas enfermedades inflamatorias incluyen, pero no se limitan a, aterosclerosis, arteriosclerosis, trastornos autoinmunes, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, polimialgia reumática (PMR), artritis gotosa, artritis degenerativa, tendinitis, bursitis, psoriasis, fibrosis quística, artrosteítis, artritis reumatoide, artritis inflamatoria, síndrome de Sjogren, arteritis de células gigantes, esclerosis sistémica progresiva (esclerodermia), espondilitis anquilosante, polimiositis, dermatomiositis, pénfigo, penfigoide, diabetes (por ejemplo, Tipo I), miastenia grave, tiroditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, enfermedad de Goodpasture, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, colangitis esclerosante, enfermedad inflamatoria intestinal, Enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, anemia perniciosa, dermatosis inflamatoria, neumonitis intersticial usual (NIU), asbestosis, silicosis, bronquiectasia, beriliosis, talcosis, neumoconiosis, sarcoidosis, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersticial linfoide, neumonía intersticial de células gigantes, neumonía intersticial celular, alveolitis alérgica extrínseca, granulomatosis de Wegener y formas de angiítis relacionadas (arteritis temporal y poliarteritis nodosa), dermatosis inflamatorias, hepatitis, reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado (por ejemplo, dermatitis por hiedra venenosa), neumonía, inflamación del tracto respiratorio, síndrome de dificultad respiratoria del adulto (ARDS), encefalitis, reacciones de hipersensibilidad inmediata, asma, fiebre del heno, alergias, anafilaxia aguda, fiebre reumática, glomerulonefritis, pielonefritis, celulitis, cistitis, colecistitis crónica, isquemia (lesión isquémica), rechazo de aloinjerto, rechazo de injerto contra huésped, apendicitis, arteritis, blefaritis, bronquiolitis, bronquitis, cervicitis, colangitis, corioamnionitis, conjuntivitis, dacrioadenitis, dermatomiositis, endocarditis, endometritis, enteritis, enterocolitis, epicondilitis, epididimitis, fascitis, fibrositis, gastritis, gastroenteritis, gingivitis, ileítis, iritis, laringitis, mielitis, miocarditis, nefritis, onfalitis, ooforitis, orquitis, osteítis, otitis, pancreatitis, parotiditis, pericarditis, faringitis, pleuritis, flebitis, neumonitis, proctitis, prostatitis, rinitis, salpingitis, sinusitis, estomatitis, sinovitis, testitis, amigdalitis, uretritis, urocistitis, uveítis, vaginitis, vasculitis, vulvitis, y vulvovaginitis, angitis, bronquitis crónica, osteomielitis, neuritis óptica, arteritis temporal, mielitis transversa, fascilitis necrotizante, y enterocolitis necrotizante. En una realización particular, la enfermedad inflamatoria se selecciona entre el grupo que consiste en aterosclerosis, arteriosclerosis, trastornos autoinmunes, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, artritis inflamatoria, y miocarditis.

La presente invención también incluye composiciones como se definen en las reivindicaciones adjuntas y métodos para la inhibición, tratamiento, y/o prevención de afecciones y trastornos asociados a niveles elevados de ciertas inmunoglobulinas en el suero sanguíneo tales como hipergammaglobulinemia o gammapatía monoclonal de significado incierto con el anticuerpo anti-RhoB o un fragmento del mismo como se define en las reivindicaciones adjuntas.

En una divulgación, se administran inhibidores de RhoB, por ejemplo, anticuerpo anti-RhoB, a un sujeto para tratar cánceres mantenidos por secreción de anticuerpos. En una opción particular, el cáncer es un tumor sanguíneo tal como mieloma múltiple. En otra opción, el cáncer es un tumor sólido. Sin el deseo de quedar unidos a teoría alguna, la secreción de anticuerpos puede contribuir a procesos inflamatorios de apoyo. Los estudios preclínicos muestran que RhoB ayuda a la angiogénesis y linfoangiogénesis tumoral que son vitales para el progreso de tumores malignos, que se ha demostrado que dependen de la deposición de anticuerpos en el microentorno tumoral inflamatorio. De ese modo, se puede usar anti-RhoB para limitar el progreso de tumores primarios después del tratamiento para prevenir recaídas y prolongar la remisión. La terapia anti-RhoB también se puede administrar a un sujeto para tratar síndromes paraneoplásicos mediados por anticuerpos que están asociados a ciertos tipos de cáncer. Algunos ejemplos incluyen, pero no se limitan a, síndrome de la persona rígida, opsoclono-mioclono (por ejemplo, en cáncer de mama), encefalomielitis periférica, y retinopatía (por ejemplo, en cáncer pulmonar).

Los métodos de la presente invención también incluyen la administración de al menos un agente distinto para el tratamiento de una enfermedad autoinmune y/o inflamatoria. Sin el deseo de quedar unidos a teoría alguna, la administración de anticuerpos anti-RhoB mitiga la producción de anticuerpos autoinmunes. Como tal, esta tecnología no desplaza los enfoques específicos de enfermedad para el tratamiento de la enfermedad autoinmune.

En una realización particular, el método comprende administrar al menos un inmunosupresor. El término "inmunosupresor" y la expresión "agente inmunosupresor", como se usan en el presente documento, incluyen compuestos o composiciones que suprimen las respuestas inmunitarias o los síntomas asociados a las mismas. Algunos inmunosupresores incluyen, pero no se limitan a, análogos de purina (por ejemplo, azatioprina), metotrexato, ciclosporina (por ejemplo, ciclosporina A), ciclofosfamida, leflunomida, micofenolato (micofenolato mofetilo), esteroides (por ejemplo, glucocorticoide, corticosteroide), metilprednisona, prednisona, fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), cloroquina, hidroxicloroquina, clorambucilo, antagonista de CD20 (por ejemplo, rituximab, ocrelizumab, veltuzumab u ofatumumab), abatacept, un antagonista de TNF (por ejemplo, infliximab, adalimumab, etanercept), macrólidos (por ejemplo, pimecrolimus, tacrolimus (FK506), y sirolimus), deshidroepiandrosterona, lenalidomida, un antagonista de CD40 (por ejemplo, anticuerpos anti-CD40L), abetimus sodio, antagonistas de BLyS (por ejemplo, anti-BLyS (por ejemplo, belimumab), dactinomicina, bucilamina, penicilamina, leflunomida, mercaptopurina, análogos de pirimidina (por ejemplo, arabinósido de citosina), mizoribina, agentes alquilantes (por ejemplo, mostaza nitrogenada, mostaza de fenilalanina, busulfán, y ciclofosfamida), antagonistas del ácido fólico (por ejemplo, aminopterina y metotrexato), antibióticos (por ejemplo, rapamicina, actinomicina D, mitomicina C, puramicina, y cloranfenicol), IgG humana, globulina antilinfocítica (ALG), anticuerpos (por ejemplo, anti-CD3 (OKT3), anti-CD4 (OKT4), anti-CD5, anti-CD7, anti-receptor de IL-2 (por ejemplo, daclizumab y basiliximab), anti-alfa/beta TCR, anti-ICAM-1, muromonab-CD3, anti-IL-12, alemtuzumab y anticuerpos frente a inmunotoxinas), 1-metiltriptófano, y derivados y análogos de los mismos. En una realización particular, el inmunosupresor se selecciona entre el grupo que consiste en metotrexato, hidroxicloroquina, antagonista de CD20 (por ejemplo, rituximab, ocrelizumab, veltuzumab u ofatumumab), abatacept, un antagonista de TNF (por ejemplo, infliximab, adalimumab, etanercept), sirolimus, y antagonistas de BLyS (por ejemplo, anti-BLyS (por ejemplo, belimumab)). En una realización particular, el inmunosupresor es un antagonista de CD20, antagonista de TNF, o antagonista de BLyS.

En una realización particular, los métodos de de la presente invención comprenden administrar al menos un agente antiinflamatorio. Como se usa en el presente documento, un "agente antiinflamatorio" se refiere a compuestos para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o los síntomas asociados a la misma. Algunos agentes antiinflamatorios incluyen, pero no se limitan a, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE: por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, naproxeno, salicilato de metilo, diflunisal, indometacina, sulindac, diclofenaco, ketoprofeno, ketorolaco, carprofeno, fenoprofeno, ácido mefenámico, piroxicam, meloxicam, metotrexato, celecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, y nimesulida), corticosteroides (por ejemplo, prednisona, betametasona, budesonida, cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, tramcinolona, y fluticasona), rapamicina (véanse, por ejemplo, Migita et al., Clin. Exp. Immunol. (1997) 108:199-203; Migita et al., Clin. Exp. Immunol. (1996) 104:86-91; Foroncewicz et al., Transpl. Int. (2005) 18:366-368), lipoproteínas de alta densidad (HDL) y compuestos que elevan el colesterol HDL (véanse, por ejemplo, Birjmohun et al. (2007) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 27:1153-1158; Nieland et al. (2007) J. Lipid Res., 48:1832-1845; Bloedon et al. (2008) J. Lipid Res., Samaha et al. (2006) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 26:1413-1414, que desvelan el uso de rosiglitazona como antiinflamatorio, Duffy et al. (2005) Curr. Opin. Cardiol., 20:301-306), inhibidores de quinasas rho (véase, por ejemplo, Hu, E. (2006) Rec. Patents Cardiovasc. Drug Discov., 1:249-263), agentes antimaláricos (por ejemplo, hidroxicloroquina y cloroquina), acetaminofeno, glucocorticoides, esteroides, beta-agonistas, agentes anticolinérgicos, metilxantinas, inyecciones de oro (por ejemplo, aurotiomalato de sodio), sulfasalazina, penicilamina, agentes antiangiogénicos, dapsona, psoralenos, agentes antivirales, estatinas (véanse, por ejemplo, Paraskevas et al. (2007) Curr. Pharm. Des., 13:3622-36; Paraskevas, K.I. (2008) Clin. Rheumatol. 27:281-287), y antibióticos (por ejemplo, tetraciclinas). En una realización particular, el antiinflamatorio es una estatina o lipoproteínas de alta densidad (HDL) y compuestos que elevan el colesterol HDL.

De acuerdo con otro aspecto de la divulgación, se proporcionan péptidos RhoB. En una opción particular, el péptido RhoB comprende al menos 10 aminoácidos consecutivos de la SEQ ID NO: 3. En una opción particular, el péptido RhoB comprende la mitad C-terminal (98 aminoácidos) de RhoB. En una opción particular, el péptido RhoB se selecciona entre el grupo que consiste en VANKKDLRSDEHVRTELARMKQEPVRTDDGRAMAVRIQAYDYLECSAKTKEGVREVFETATRAALQKRYGSQNGCI NCCKVL (SEQ ID NO: 5), KDLRSDEHVRTELARMKQEPVRTDDGRAMAVRIQAYDYLECSAKTKEGVREVFETAT RAAL (SEQ ID NO: 6), SDEHVRTELARMKQEPVRTDDGRAMAVRIQAYDYLECSAKTKEGVREVFETATRAALQKRYGSQNGCINCCKVL

(SEQ ID NO: 7), DDGRAMAVRIQAY (SEQ ID NO: 2), RTDDGRAMAVRIQAYDYLE (SEQ ID NO: 1), y AVRIQAYDYLE (SEQ ID NO: 8) (véase, por ejemplo, la Figura 5). Los péptidos RhoB pueden tener una longitud mayor o menor que 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más aminoácidos, que las secuencias identificadas anteriormente, en particular 1, 2, 3, 4, o 5 aminoácidos, en el extremo N-terminal y/o C-terminal del péptido. En otra opción, los péptidos de la presente invención tienen una homología o identidad de al menos un 90 %, 95 %, 97 %, 99 %, o un 100 % con la SEQ ID NO: 3 (o con las SEQ ID NOs: 1,2, 5-8).

Los péptidos se pueden preparar en una variedad de formas, de acuerdo con métodos conocidos. Los péptidos se pueden preparar mediante síntesis peptídica química (por ejemplo, síntesis en fase sólida). La disponibilidad de las moléculas de ácido nucleico que codifican el péptido también permite la producción de la proteína usando métodos de expresión in vitro y sistemas de expresión sin células conocidos en la técnica. Los sistemas de transcripción y traducción in vitro están disponibles en el mercado, por ejemplo, en Promega Biotech (Madison, Wl) o en Gibco-BRL (Gaithersburg, MD). Los péptidos también se pueden producir mediante expresión en un sistema procariota o eucariota adecuado. Por ejemplo, parte o toda la molécula de ADN que codifica el péptido se puede insertar en un vector plasmídico adecuado para expresión en una célula bacteriana, tal como E. coli. Tales vectores comprenden los elementos reguladores necesarios para la expresión del ADN en la célula hospedadora colocados de un modo tal como para permitir la expresión del a Dn en la célula hospedadora. Tales elementos reguladores requeridos para la expresión incluyen secuencias promotoras, secuencias de inicio de la transcripción y, opcionalmente, secuencias potenciadoras. Los péptidos producidos mediante expresión génica en un sistema procariota o eucariota recombinante se pueden purificar de acuerdo con métodos conocidos en la técnica.

Los péptidos, preparados mediante los métodos mencionados anteriormente, se pueden analizar de acuerdo con procedimientos convencionales. Por ejemplo, tal proteína se puede someter a análisis de secuencias de aminoácidos, de acuerdo con métodos conocidos.

Los péptidos se pueden conjugar con una proteína vehículo (por ejemplo, un vehículo macromolecular). Por ejemplo, los péptidos se pueden usar con fines de inmunización in vivo. Aunque los animales se pueden inmunizar con péptido libre, el título del anticuerpo antipeptídico se puede estimular mediante el acoplamiento del péptido a un vehículo. Los ejemplos de vehículos incluyen, pero no se limitan a, KLH (hemocianina de lapa californiana), GST (glutatión-S-transferasa), BSA (albúmina de suero bovino), cBSA (albúmina de suero bovino cationizada), OVA (ovoalbúmina), LPH (hemocianina de Limulus polyphenus), y TT (toxoide tetánico).

La presente invención también incluye anticuerpos o fragmentos de anticuerpos aislados que son inmunológicamente específicos para RhoB (por ejemplo, SEQ ID NO: 3) como se define en las reivindicaciones adjuntas. La presente invención también incluye anticuerpos o fragmentos de anticuerpos aislados como se define en las reivindicaciones adjuntas que son inmunológicamente específicos para secuencias de aminoácidos como se estableció anteriormente. En una opción en particular, el péptido tiene una homología o identidad de al menos un 90 %, 95 %, 97 %, 99 %, o un 100 % con las SEQ ID NOs: 1, 2, 5, 6, 7, u 8. Los péptidos pueden tener una longitud mayor o menor que 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o más aminoácidos, que las secuencias identificadas anteriormente, en particular 1, 2, 3, 4, o 5 aminoácidos, en el extremo N-terminal y/o C-terminal del péptido. En otra opción, los péptidos tienen una homología o identidad de al menos un 90 %, 95 %, 97 %, 99 %, o un 100 % con la SEQ ID NO: 3.

Las moléculas de anticuerpo de la invención se pueden preparar usando una variedad de métodos conocidos en la técnica. Los anticuerpos policlonales y monoclonales se pueden preparar como se describe en Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds. Los anticuerpos se pueden preparar mediante reticulación química, técnicas de hibridomas híbridos y mediante la expresión de fragmentos de anticuerpos recombinantes expresados en células hospedadoras, tales como bacterias o células de levadura.

En una realización particular, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es inmunológicamente específico para la SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 8. En una realización particular, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un par de anticuerpos o un grupo de anticuerpos. En una realización particular, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12. En una realización particular, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16.

El anticuerpo puede ser un anticuerpo de origen natural o puede ser un anticuerpo sintético o modificado (por ejemplo, un anticuerpo generado de manera recombinante; un anticuerpo quimérico; un anticuerpo biespecífico; un anticuerpo humanizado; un anticuerpo de camélido; y similares). El anticuerpo puede comprender al menos una etiqueta de purificación. En una realización particular, el anticuerpo marco es un fragmento de anticuerpo. Los fragmentos de anticuerpo incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de inmunoglobulina que incluyen, pero no se limitan a: dominio único (Dab; por ejemplo, dominio variable único de cadena ligera o pesada), Fab, Fab', F(ab')² , Y F(v); y fusiones (por ejemplo, mediante un conector) de estos fragmentos de inmunoglobulina que incluyen, pero no se limitan a: scFv, scFv² , scFv-Fc, minicuerpo, diacuerpo, triacuerpo y tetracuerpo. El anticuerpo también puede ser una proteína (por ejemplo, una proteína de fusión) que comprende al menos un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En una realización particular de la presente invención, el anticuerpo comprende una región Fc.

El anticuerpo y el fragmento de anticuerpo de la presente invención comprende los seis dominios CDR de los anticuerpos monoclonales anti-RhoB 7F7 y 9G5 (véanse las Figuras 9 y 10). En una realización particular, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende ambos dominios CDR3. En una realización particular, los dominios del anticuerpo o fragmento de anticuerpo tienen una homología o identidad de al menos un 90 %, 95 %, 97 %, 99 %, o un 100 % con los dominios presentes en el anticuerpo monoclonal anti-RhoB 7F7 o 9G5. Los dominios pueden ser más largos o más cortos que los dominios representados en las Figuras 9 y 10 en aproximadamente 1, 2, 3, 4 o 5, aminoácidos, en particular 1 o 2 aminoácidos, en el extremo N-terminal y/o C-terminal del dominio.

El anticuerpo también puede ser una proteína sintética que imite a una inmunoglobulina. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, moléculas Affibody® (Affibody, Bromma, Suecia), darpinas (proteínas de repetición de anquirina diseñadas; Kawe et al. (2006) J. Biol. Chem., 281:40252-40263), y peptacuerpos (Terskikh et al. (1997) PNAS 94:1663-1668).

Además los anticuerpos de la presente invención se pueden modificar. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden humanizar. En una realización particular, los anticuerpos híbridos (o una parte de los mismos) se insertan en la estructura de un anticuerpo o una construcción de fragmento de anticuerpo. Por ejemplo, el dominio ligero variable y/o el dominio pesado variable de los anticuerpos de la presente invención se pueden insertar en otra construcción de anticuerpo. En la técnica se conocen bien algunos métodos para producir anticuerpos de manera recombinante. De hecho, hay disponibilidad de vectores comerciales para ciertas construcciones de anticuerpo y fragmento de anticuerpo.

Los anticuerpos de la presente invención también se pueden conjugar/unir a otros componentes. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden unir de manera operativa (por ejemplo, se pueden unir mediante enlace covalente, opcionalmente, mediante un conector) al menos a un agente detectable, agente de formación de imágenes, agente de contraste, inmunosupresor, o agente antiinflamatorio. Los anticuerpos de la presente invención también pueden comprender al menos una etiqueta de purificación (por ejemplo, una etiqueta de His).

En el presente documento también se desvelan composiciones que comprenden los inhibidores o anticuerpos de RhoB. En el contexto de la presente invención, la composición comprende al menos un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como se define en las reivindicaciones adjuntas y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las moléculas de anticuerpo de la invención se pueden preparar usando una variedad de métodos conocidos en la técnica. Los anticuerpos se pueden preparar mediante reticulación química, técnicas de hibridomas híbridos y mediante la expresión de anticuerpos recombinantes o fragmentos de anticuerpo expresados en células hospedadoras, tales como células de mamífero, bacterias o células de levadura. En una realización de la invención, las moléculas de anticuerpo se producen mediante la expresión de anticuerpos recombinantes o fragmentos de anticuerpo en células hospedadoras. Las moléculas de ácido nucleico que codifican el anticuerpo se pueden insertar en vectores de expresión y se pueden introducir en células hospedadoras. A continuación, las moléculas de anticuerpo resultantes se aíslan y se purifican del sistema de expresión. Los anticuerpos comprenden opcionalmente una etiqueta de purificación mediante la cual se puede purificar el anticuerpo.

La pureza de las moléculas de anticuerpo de la invención se puede evaluar usando métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia, que incluyen, pero no se limitan a, ELISA, inmunohistoquímica, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad, cromatografía de afinidad de metales inmovilizados (IMAC), cromatografía de exclusión por tamaño, electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), transferencia de Western, resonancia de plasmones superficiales y espectroscopía de masas.

La divulgación también incluye hibridomas que secretan anticuerpos RhoB monoclonales. En la actualidad, los hibridomas RhoB son - como promedio - de crecimiento lento y producen cantidades menores de anticuerpos en comparación con otros hibridomas. Para eludir esta posible limitación se pueden adoptar varios enfoques. Por ejemplo, la secuencia de nucleótidos del anticuerpo anti-RhoB se puede clonar a partir de los hibridomas y a continuación se pueden producir anticuerpos anti-RhoB mediante enfoques de biología molecular. En otra opción, se pueden desarrollar hibridomas secretores independientes de RhoB o las condiciones de cultivo de hibridomas se pueden modificar para maximizar la producción de anticuerpos.

La divulgación también incluye métodos para identificar moléculas pequeñas u otras entidades moleculares tales como ácidos nucleicos pequeños, péptidos, carbohidratos y similares que son inhibidores de RhoB. Los anticuerpos RhoB de la presente invención o fragmentos de los mismos (en particular las regiones CDR) o los epítopos correspondientes se pueden usar para diseñar inhibidores de RhoB con actividad biológica similar.

Definiciones

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto o una composición farmacéutica se refiere a una cantidad eficaz para prevenir, inhibir, tratar o disminuir los síntomas de un trastorno o enfermedad en particular. En el presente documento el tratamiento de un trastorno inflamatorio puede hacer referencia a curar, aliviar y/o prevenir el trastorno inflamatorio, el síntoma del mismo o la predisposición hacia el mismo.

"Farmacéuticamente aceptable" indica la aprobación de una agencia reguladora del gobierno federal o estatal o enumerado en la Farmacopea de Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y más particularmente en seres humanos.

Un "vehículo" se refiere, por ejemplo, a un diluyente, adyuvante, excipiente, agente auxiliar o vehículo con el que se administra un agente activo de la presente invención. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Como vehículos se usan preferentemente agua o soluciones salinas acuosas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol, en particular para soluciones inyectables. Los vehículos farmacéuticos adecuados se describen, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E.W. Martin.

Un "anticuerpo" o "molécula de anticuerpo" es cualquier inmunoglobulina, incluyendo anticuerpos y fragmentos de los mismos, que se une a un antígeno específico. Como se usa en el presente documento, anticuerpo o molécula de anticuerpo contempla moléculas de inmunoglobulina intactas, partes inmunológicamente activas de una molécula de inmunoglobulina y fusiones de partes inmunológicamente activas de una molécula de inmunoglobulina.

Como se usa en el presente documento, la expresión "inmunológicamente específico" se refiere a proteínas/polipéptidos, en particular anticuerpos, que se unen a uno o más epítopos de una proteína o compuesto de interés, pero que no reconocen ni se unen sustancialmente a otras moléculas en una muestra que contiene una población mixta de moléculas biológicas antigénicas.

Como se usa en el presente documento, el término "prevenir" se refiere al tratamiento profiláctico de un sujeto que presenta el riesgo de desarrollar una afección dando como resultado una disminución de la probabilidad de que el sujeto desarrolle la afección.

El término "tratar" como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier tipo de tratamiento que imparte un beneficio a un paciente que padece una enfermedad, incluyendo la mejora del estado del paciente (por ejemplo, en uno o más síntomas), retraso en la progresión de la afección, etc.

Como se usa en el presente documento, los términos "hospedador", "sujeto" y "paciente" se refieren a cualquier animal, incluyendo los seres humanos.

La expresión "ARN pequeño de interferencia (ARNip)" se refiere a una molécula de ARN bicatenario corto (normalmente de menos de 30 nucleótidos de longitud, en particular 12-30 o 20-25 nucleótidos de longitud). Normalmente, el ARNip modula la expresión de un gen al que se dirige el ARNip. En la técnica se conocen métodos para identificar y sintetizar moléculas de ARNip (véase, por ejemplo, Ausubel et al. (2006) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc). Como se usa en el presente documento, el término ARNip puede incluir moléculas de ARN horquillado corto (ARNhc). Normalmente, las moléculas de ARNhc consisten en secuencias cortas complementarias separadas por una secuencia de bucle pequeña en la que una de las secuencias es complementaria con el gen diana. Las moléculas de ARNhc se procesan normalmente en un ARNip dentro de la célula mediante endonucleasas. En la publicación de solicitud de Estados Unidos N.° 20050032733 se proporcionan modificaciones de las moléculas de ARNip a modo de ejemplo. Los vectores de expresión para la expresión de moléculas de ARNip usan preferentemente un promotor fuerte que puede ser constitutivo o regulado. Tales promotores se conocen bien en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, promotores de ARN polimerasa II, el promotor T7 de ARN polimerasa y los promotores U6 y H1 de ARN polimerasa III (véase, por ejemplo, Myslinski et al. (2001) Nucl. Acids Res., 29:250209).

"Moléculas de ácido nucleico antisentido" u "oligonucleótidos antisentido" incluyen moléculas de ácido nucleico (por ejemplo, moléculas monocatenarias) que se dirigen (complementarias) a una secuencia elegida (por ejemplo, a sitios de inicio de traducción y/o sitios de corte y empalme) para inhibir la expresión de una proteína de interés. Tales moléculas antisentido tienen normalmente una longitud entre aproximadamente 15 y aproximadamente 50 nucleótidos, más particularmente entre aproximadamente 15 y aproximadamente 30 nucleótidos, y a menudo abarcan el sitio de inicio de la traducción de las moléculas de ARNm. También se pueden generar construcciones antisentido que contienen la secuencia completa de la molécula de ácido nucleico diana en orientación inversa. Los oligonucleótidos antisentido dirigidos a cualquier secuencia de nucleótidos conocida se pueden preparar mediante síntesis de oligonucleótidos de acuerdo con métodos convencionales.

Terapias y composiciones para el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias

Como se indicó anteriormente en el presente documento, la presente invención incluye composiciones que comprenden al menos un anticuerpo anti-RhoB (incluyendo fragmentos del mismo) y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable según se define en las reivindicaciones adjuntas. La composición puede comprender además al menos otro agente antiinflamatorio y/o al menos un agente inmunosupresor. Alternativamente, al menos otro agente antiinflamatorio y/o al menos un agente inmunosupresor pueden estar contenidos dentro de una composición o composiciones separadas con al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición o composiciones que comprenden al menos un anticuerpo anti-RhoB y la composición o composiciones que comprenden al menos otro agente antiinflamatorio y/o al menos un agente inmunosupresor pueden estar contenidas dentro de un kit. Tal composición o composiciones se pueden administrar, en una cantidad terapéuticamente eficaz, a un paciente que lo necesite para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o autoinmune. En una realización particular, el paciente se monitorizar al menos una vez para la enfermedad inflamatoria o autoinmune después de la administración de las composiciones de la presente invención para monitorizar el tratamiento de la enfermedad inflamatoria o autoinmune (por ejemplo, en el caso de artritis reumatoide, dolor y/o rigidez de articulaciones (por ejemplo, articulación de la mano); presencia de nódulos reumatoides; y/o presencia de factor reumatoide o anticuerpos del factor reumatoide en la sangre).

Las composiciones de la presente invención se pueden administrar mediante cualquier vía adecuada, por ejemplo, mediante inyección (por ejemplo, para administración local o sistémica), intravenosa, oral, pulmonar, nasal u otros modos de administración. En general, el vehículo farmacéuticamente aceptable de la composición se selecciona entre el grupo de diluyentes, conservantes, solubilizantes, emulsionantes, adyuvantes y/o vehículos. Las composiciones pueden incluir diluyentes de diversos contenidos de tampón (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato), pH y fuerza iónica; y aditivos tales como detergentes y agentes solubilizantes (por ejemplo, Tween 80, Polisorbato 80), antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfito de sodio), conservantes (por ejemplo, Timerosal, alcohol bencílico) y sustancias de carga (por ejemplo, lactosa, manitol). Las composiciones también se pueden incorporar en preparaciones de partículas de compuestos poliméricos tales como ácido poliláctico, ácido poliglicólico, etc., o en liposomas o nanopartículas. Tales composiciones pueden influir en el estado físico, la estabilidad, la tasa de liberación in vivo y la tasa de eliminación in vivo de los componentes de una composición farmacéutica de la presente invención. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042) páginas 1435-1712. La composición de la presente invención se puede preparar, por ejemplo, en forma líquida, o puede estar en forma de polvo seco (por ejemplo, liofilizado).

Además en otra realización, las composiciones de la presente invención se pueden administrar en un sistema de liberación controlada, tal como usando una infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, un parche transdérmico, liposomas, u otros modos de administración. En una realización particular, se puede usar una bomba (véase Langer, mencionado anteriormente; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. (1987) 14:201; Buchwald et al., Surgery (1980) 88:507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. (1989) 321:574). En otra realización, se pueden usar materiales poliméricos (véase Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), CRC Press: Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley: Nueva York (1984); Ranger y Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. (1983) 23:61; véanse también Levy et al., Science (1985) 228:190; During et al., Ann. Neurol. (1989) 25:351; Howard et al., J. Neurosurg. (1989) 71:105). Además en otra realización, un sistema de liberación controlada se puede colocar en las proximidades de los tejidos diana del animal, requiriendo de ese modo solamente una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, mencionado anteriormente, (1984) vol. 2, pp. 115­ 138). En particular, un dispositivo de liberación controlada se puede introducir en un animal en las proximidades del sitio de inflamación inapropiada. Otros sistemas de liberación controlada se discuten en la revisión de Langer (Science (1990) 249:1527-1533).

Los métodos de la presente invención pueden comprender además la administración de al menos otro método terapéutico para el tratamiento de la enfermedad autoinmune o de la enfermedad inflamatoria. Por ejemplo, en el tratamiento de una enfermedad autoinmune, el anticuerpo anti-RhoB se puede coadministrar con radiación de los ganglios linfáticos del sujeto o con plasmaféresis.

Además en otra opción, la presente divulgación incluye composiciones que comprenden al menos un péptido de secuencia RhoB (incluyendo secuencias del mismo) y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición puede comprender además otros agentes (por ejemplo, al menos otro agente antiinflamatorio y/o o al menos un agente inmunosupresor) o se pueden incluir en un kit con otra composición, como se describió anteriormente en el presente documento para los anticuerpos anti-RhoB. Las composiciones se pueden administrar a un sujeto (por ejemplo, métodos terapéuticos) como se describió anteriormente en el presente documento para los anticuerpos anti-RhoB.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar varias realizaciones de la presente invención. Los ejemplos no pretenden limitar la invención en modo alguno.

EJEMPLO 1

Los ratones con inactivación génica de RhoB se inmunizaron con RhoB-péptido-KLH o KLH (hemocianina de lapa californiana). Específicamente, el Día 0, a los ratones RhoB-KO se les inyectó RhoB-péptido-KLH o KLH en adyuvante completo de Freund (CFA). El Día 14, se proporcionó una inyección de refuerzo con RhoB-péptido-KLH o KLH en adyuvante incompleto de Freund (IFA). Por último, el Día 29 se administró una segunda inyección de refuerzo con RhoB-péptido-KLH o KLH en solución salina tamponada con fosfato (PBS). Las extracciones de sangre se obtuvieron el Día 10 y el Día 24 y el suero se recogió el Día 32.

Los ratones transgénicos K/BxN TCR expresan un TCR reactivo a un autopéptido obtenido de la glucosa-6-fosfato isomerasa (GPI), presentada por la molécula Ag7 de la clase II de MHC (Korganow et al. (1999) Immunity, 10:451-461; Kouskoff et al. (1996) Cell, 87:811-822; Matsumoto et al. (1999) Science, 286:1732-1735). Los ratones K/BxN desarrollan espontáneamente una forma muy agresiva de artritis a las 4 a 5 semanas de edad. La artritis de los ratones K/BxN imita a la artritis de los seres humanos en que es crónica, progresiva, simétrica, y presenta las mismas características histológicas de la artritis humana. La artritis experimentada por los ratones K/BxN es específica de las articulaciones y permite la puntuación de la artritis mediante medición con calibrador del grosor del tobillo (Korganow et al. (1999) Immunity, 10:451-461; Ji et al. (2001) J. Exp. Med., 194:321-330).

Los ratones K/BxN (5 ratones por grupo) se trataron con 1) solución salina, 2) suero anti-KLH, o 3) suero anti-péptido RhoB. Específicamente, el suero (200 pl) se administró, i.p., a ratones de 21 días de edad. El grosor medio del tobillo se midió a lo largo del tiempo como un indicador de artritis. Como se observa en la Figura 1, el anti-suero RhoB inhibe la artritis.

Los ratones K/BxN producen los Ab artritogénicos dirigidos frente a GPI, que se desarrollan a títulos elevados debido a la ayuda preferente que reciben los linfocitos B que expresan inmunoglobulinas específicas de GPI de los linfocitos T reactivos a GPI que muestran el TCR codificado por transgén. Como anteriormente, los ratones K/BxN (5 ratones por grupo) se trataron con un total de 200 pl (100 pl de suero mezclado con 100 pl de solución salina) (i.p.) de 1) solución salina, 2) suero anti-KLH o 3) suero anti-péptido RhoB. Como se observa en las Figuras 2A y 2B, el suero de ratones K/BxN a los que se administra anti-suero RhoB tenía niveles reducidos de Ig anti-GPI en suero (según lo determinado mediante ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)) en comparación con los ratones K/BxN a los que se administra antisuero KLH o vehículo solo y números reducidos de células secretoras de anticuerpos anti-GPI (según se determina mediante aplicación puntual de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISPOT)) en comparación con ratones K/BxN a los que se administra anti-suero KLH o vehículo solo.

Además de lo mencionado anteriormente, también se determinó si el anti-suero RhoB afectaba a otras citoquinas en ratones K/BxN. La administración de anti-suero RhoB a ratones K/BxN no moduló significativamente los niveles de IFNy, TNFa, IL-6, IL-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-1p o RANTES en comparación con ratones K/BxN a los que se administró anti-suero KLH o vehículo solo.

Los esplenocitos se aislaron de los ratones y los linfocitos B se fusionaron con células de mieloma inmortalizadas (Sp2/0) para generar hibridomas. Se analizaron 48 muestras. 7 dieron fuertes positivos para el Péptido 1 (RTDDGRAMAVRIQAYDYLE; SEQ ID NO: 1; los aminoácidos 140-158 de RhoB humana (N.° de Acceso CAA29968 en GenBank)) y 5 dieron positivos para el Péptido 1 y el Péptido 2 (DDGRAMAVRⁱQ^a Y; SEQ ID NO: 2; Los aminoácidos 142-154 de RhoB humana (N.° de Acceso CAA29968 en GenBank)).

La Figura 3 proporciona la secuencia de aminoácidos de RhoB humana. El péptido 1 está subrayado. Los ratones vacunados con un antígeno peptídico que incluye esta secuencia se dividieron en dos conjuntos de anticuerpos.

Estos dos conjuntos están definidos por epítopos ligeramente diferentes pero superpuestos: la unión de un conjunto de anticuerpos se puede ver afectada por la fosforilación de Y156, pero el otro conjunto de anticuerpos probablemente no lo sea (véanse los resultados anteriores que distinguen entre el Péptido 1 y el Péptido 2, que carece de la tirosina en 156). Ambos conjuntos de anticuerpos reconocen específicamente la proteína RhoB de longitud completa, pero solo uno bloqueó la secreción de anticuerpos por los linfocitos B en cultivos tisulares o en animales.

La Figura 4 proporciona los resultados de un experimento ELISA en el que se demuestra que un sobrenadante de hibridoma anti-RhoB (Negro) suprime la secreción de anticuerpos por los linfocitos B de ratón tratados con LPS: comparar el valor de referencia (sin activar; diamante), línea roja activada (cuadrado) y línea suprimida (triángulo). La línea X es un control no específico (anticuerpo IDO) que no suprime la activación. Las otras líneas representan sobrenadantes obtenidos a partir de subclones de hibridoma anti-RhoB del hibridoma original, que muestran niveles intermedios de supresión. La tinción con yoduro de propidio (PI) demostró que los linfocitos B proliferaban como respuesta a LPS. Un análisis que usa una matriz de perlas de IL6 mostró que los hibridomas anti-RhoB no secretaban IL6.

EJEMPLO 2

Los ratones K/BxN se trataron con 500 pg de anticuerpos monoclonales anti-RhoB 9G5 o 7F7 o Ig de control antes de la aparición de artritis (21 días de edad). La Figura 6A muestra que ambos anticuerpos monoclonales anti-RhoB 9G5 y 7F7 inhibieron la artritis según lo indicado por el grosor de la parte posterior del tobillo. Las Figuras 6B y 6C muestran que los anticuerpos monoclonales anti-RhoB también inhiben la producción de autoanticuerpos ya que los títulos de autoanticuerpos anti-GPI se midieron mediante ELISA (Fig. 6B) y las células secretoras de anticuerpos anti-GPI (ASC) se midieron mediante el ensayo ELISpot (Fig. 6C).

Los ratones K/BxN también se trataron con 500 pg de anticuerpos monoclonales anti-RhoB 9G5 o 7F7 o Ig de control después de la aparición de artritis (4 semanas de edad). Como se observa en la Figura 7, los anticuerpos monoclonales anti-RhoB 9G5 y 7F7 inhibieron la progresión de la artritis, según se determinó mediante el grosor de la parte posterior del tobillo.

Además de lo mencionado anteriormente, también se determinó si los anticuerpos monoclonales anti-RhoB afectaban a otras citoquinas en ratones K/BxN. Los ratones K/BxN se trataron con 500 pg de 7F7 o Ig de control a los 21 días de edad. Las células de los ganglios linfáticos que drenan las articulaciones se recolectaron a las 6 semanas de edad y se cultivaron durante la noche en PMA (50 ng/ml) con ionomicina (500 ng/ml). Las citoquinas se midieron en los sobrenadantes de cultivo mediante una matriz de perlas citométricas. La administración del anticuerpo monoclonal anti-RhoB 7F7 a ratones K/BxN no moduló significativamente los niveles de las citoquinas inflamatorias IFNy, TNFa, IL-17, IL-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-ip y RANTES o citoquinas IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 e IL-13 relacionadas con los linfocitos B en comparación con ratones K/BxN a los que se administra Ig de control.

Se generaron ratones artríticos con inactivación génica (KO) de RhoB (RhoB KO KRN.g7) cruzando sobre el fondo KRN.g7. Los ratones KRN B6.g7 son ratones C57BL/6 que expresan tanto la molécula KRN TCR tg como la molécula IAg7 MHC de Clase II necesaria para la activación de los linfocitos T KRN, pero carecen del resto de genes asociados a NOD (Kouskoff et al. (1996) Cell 87:811-822). La Figura 8A muestra que los ratones RhoB KO tenían artritis reducida en comparación con los ratones KRN.g7, según lo determinado por el grosor de la parte posterior del tobillo. La Figura 8B muestra que el suero de ratones RhoB KO KRN.g7 tampoco pudo inducir artritis cuando se transfirió a receptores sin tratamiento previo. Específicamente, el suero de ratones KRN B6.g7 o RhoB KO KRN B6.g7 se transfirió De manera adoptiva a ratones C57BL/6 sin tratamiento previo el día 0. Sin embargo, la Figura 8C muestra que la artritis se puede inducir en ratones RhoB ko cuando el suero artritógeno de K/BxN se transfiere de manera adoptiva. El suero de los ratones K/BxN artríticos se transfirió adoptivamente a ratones wt o RhoB KO C57BL/6 sin tratamiento previo el día 0. De manera notable, la artritis observada fue más grave y de mayor duración con los ratones RhoB KO. Sin quedar ligado a la teoría, el aumento de gravedad observado en la artritis en ratones RhoB KO se puede deber a la incapacidad de los ratones para eliminar el autoanticuerpo. De hecho, los títulos de autoanticuerpos anti-GPI aumentaron moderadamente en los ratones RhoB KO KRN.g7 en comparación con los ratones KRN.g7, pero el número de células secretoras de anticuerpos anti-GPI (ASC) fue similar entre los dos ratones.

Además, también se determinó si las citoquinas se veían afectadas en ratones RhoB KO. Las células de los ganglios linfáticos que drenan las articulaciones se recolectaron a las 6 semanas de edad y se cultivaron durante la noche en PMA (50 ng/ml) con ionomicina (500 ng/ml). Las citoquinas se midieron en los sobrenadantes de cultivo mediante una matriz de perlas citométricas. En comparación con los ratones KRN.g7, los ratones RhoB KO KRN.g7 no tenían niveles modulados significativamente de las citoquinas inflamatorias IFN^y, TNFa, IL-17, IL-10 y MCP-1 (aunque RANTES, MIP-1a y MIP-1 p presentaban una tendencia ligeramente menor en ratones RhoB K^o KRN.g7) o La citoquinas IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 e IL-13 relacionadas con linfocitos B. Sin quedar ligado a la teoría, la similitud en los fenotipos de ratón de los ratones RhoB KO en comparación con los ratones a los que se les administró un anticuerpo anti-RhoB es una evidencia adicional de que los anticuerpos anti-RhoB ejercen su actividad a través de su interacción con RhoB.

Los ratones RhoB KO C57BL/6 también poseían poblaciones linfoides normales. Específicamente, el porcentaje de poblaciones linfoides en la médula ósea, el timo, el bazo, los ganglios linfáticos y la cavidad peritoneal de los ratones C57BL/6 de tipo silvestre y RhoB KO se midieron mediante citometría del flujo. Los niveles de Ig de los ratones C57BL/6 de tipo silvestre y RhoB KO también se midieron mediante ELISA. De manera notable, no se observó diferencia significativa en poblaciones linfoides o niveles de Ig en suero (IgM, lgG1, lgG2b, lgG2c, e lgG3) entre los ratones C57BL/6 de tipo silvestre y RhoB KO. Los ratones C57BL/6 RhoB-/-, RhoB+/-, o RhoB+/+ también se inmunizaron con 100 pg de NP-KLH en alumbre el día 0. Se tomaron muestras de suero los días 0, 5, 14 y 21 y se analizaron para detectar IgM o IgG anti-NP mediante ELISA. Los ratones RhoB KO mostraron una respuesta normal a la inmunización.

En la memoria descriptiva mencionada anteriormente se citan varias publicaciones y documentos de patente con el fin de describir más completamente el estado de la técnica al que pertenece la presente invención.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para uso en la inhibición de una enfermedad inflamatoria o autoinmune en un sujeto que lo necesita, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo comprende los seis dominios CDR del anticuerpo anti-RhoB 7F7 o el anticuerpo anti-RhoB 9G5, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB 7F7 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12, y dicho anti-RhoB 9G5 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16, y en el que

la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos RSSQSLVHSNGNTYLH,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos KVSNRFS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos SQSTHVPYTFGGGTKLEIK; y

la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SYYMF,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos GFNPTNGGTDFNEKFKS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos DGNLWGQGTSVTVSS; y

la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SASSSVSYMH,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos DTSNLAS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos HQRSSY^pY^t FGGGTKLEIKR; y

la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos TYAMN,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos RIRSKSNNYATYYADSVKD, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos GGGNLDYWGQGTTLTVSS.

2. El anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad autoinmune o inflamatoria es artritis reumatoide, diabetes de tipo I, lupus, o miastenia grave.

3. El anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho uso además comprende la administración de al menos un agente antiinflamatorio, o al menos un inmunosupresor.

4. El anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha enfermedad autoinmune es hipergammaglobulinemia o gammapatía monoclonal de significado incierto.

5. El anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo para el uso de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB o fragmento del mismo es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12 o un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16.

6. Un anticuerpo aislado o fragmento del mismo inmunológicamente específico para RhoB, en el que dicho anticuerpo o fragmento del mismo comprende los seis dominios CDR del anticuerpo anti-RhoB 7F7 o el anticuerpo anti-RhoB 9G5, en el que dicho anticuerpo anti-RhoB 7F7 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12, y dicho anti-RhoB 9G5 es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16, y en el que

la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos RSSQSLVHSNGNTYLH,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos KVSNRFS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos SQSTHVPYTFGGGTKLEIK; y

la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 7F7 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SYYMF,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos GFNPTNGGTDFNEKFKS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos DGNLWGQGTSVTVSS; y

la cadena ligera del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos SASSSVSYMH,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos DTSNLAS, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos HQRSSY^pY^t FGGGTKLEIKR; y

la cadena pesada del anticuerpo anti-RhoB 9G5 comprende:

- CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos TYAMN,

- CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos RIRSKSNNYATYYADSVKD, y

- CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos GGGNLDYWGQGTTLTVSS.

7. El anticuerpo o fragmento del mismo de la reivindicación 6, en el que dicho anticuerpo o fragmento del mismo es un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 10 y 12 o un anticuerpo monoclonal que comprende las SEQ ID NOs: 14 y 16.

8. Una composición que comprende al menos un anticuerpo o fragmento del mismo de la reivindicación 6 o 7 y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La composición de la reivindicación 8, en la que dicha composición además comprende al menos un agente antiinflamatorio, o al menos un inmunosupresor.