ES2786374T3 - Compuesto antimicótico - Google Patents

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ES2786374T3 ES15817507T ES15817507T ES2786374T3 ES 2786374 T3 ES2786374 T3 ES 2786374T3 ES 15817507 T ES15817507 T ES 15817507T ES 15817507 T ES15817507 T ES 15817507T ES 2786374 T3 ES2786374 T3 ES 2786374T3
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Kazuhiro Ito
Garth Rapeport
Peter Strong
Peter John Murray
Stuart Thomas Onions
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** donde: R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6; R1a y R1b representan independientemente hidrógeno o halo; R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4; R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4; R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; X representa CH o N; Y representa N o CH cuyo átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido por R, R1a o R1b; R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto antimicótico
Campo de la invención
Esta invención se refiere a un compuesto útil en el tratamiento de micosis, composiciones que lo contienen y su uso en terapia.
Antecedentes de la invención
La incidencia de las infecciones fúngicas ha aumentado sustancialmente a lo largo de las dos últimas décadas y las formas invasivas son las principales causas de morbilidad y mortalidad, especialmente entre pacientes inmunocomprometidos o inmunodeprimidos. La candidiasis diseminada, la aspergilosis pulmonar y los hongos oportunistas emergentes son los agentes más comunes que producen estas micosis graves. Una característica particular de los hongos es que son capaces de generar una matriz extracelular (MEC) que los une y les permite adherirse a sus sustratos in vitro o in vivo. Estas biopelículas sirven para protegerlos contra los entornos hostiles del sistema inmunitario del huésped y para resistir la muerte antimicrobiana (Kaur y Singh, 2013).
La aspergilosis pulmonar se puede segmentar en aquellos pacientes que padecen una enfermedad no invasiva frente a aquellos con una afección invasiva. Se usa una subdivisión adicional para caracterizar a los pacientes que exhiben un componente alérgico a la aspergilosis (conocido como ABPA; aspergilosis broncopulmonar alérgica) en comparación con aquellos que no lo hacen. Los factores que precipitan la aspergilosis pulmonar pueden ser agudos, tales como la exposición a altas dosis de medicamentos inmunosupresores o a la intubación en una unidad de cuidados intensivos. Alternativamente, pueden ser crónicos, tales como una infección anterior con TB (Denning y col.
2011a). Las infecciones pulmonares crónicas con Aspergillus pueden dejar a los pacientes con daño pulmonar amplio y permanente, lo que requiere tratamiento de por vida con fármacos azólicos orales (Limper y col., 2011).
Un grupo de investigaciones creciente sugiere que la infección por Aspergillus puede desempeñar un papel importante en el asma clínico (Chishimba y col., 2012; Pasqualotto y col., 2009). Además, el trabajo publicado recientemente ha correlacionado la infección por Aspergillus con peores resultados clínicos en pacientes con EPOC (Bafadhel y col., 2013). Estudios transversales similares han demostrado asociaciones entre la presencia de Aspergillus spp. y Candida spp. en el esputo y la función pulmonar empeorada (Chotirmall y col., 2010; Agbetile y col., 2012).
La aspergilosis invasiva (AI) presenta tasas altas de mortalidad en pacientes inmunocomprometidos, por ejemplo, aquellos sometidos a trasplante alogénico de células madre o trasplantes de órganos sólidos (tales como trasplantes de pulmón). El primer caso de AI descrito en un paciente inmunocomprometido se produjo en 1953. Este evento fue concurrente con la introducción de los corticosteroides y la quimioterapia citotóxica en los regímenes de tratamiento (Rankin, 1953). La aspergilosis invasiva es una preocupación importante en el tratamiento de la leucemia y otras malignidades hematológicas dada su alta incidencia y la mortalidad asociada. Las tasas de mortalidad por lo general superan el 50 % (Lin y col., 2001) y las tasas a largo plazo pueden alcanzar el 90 % en receptores de trasplantes alogénicos de células madre hematopoyéticas, a pesar de la disponibilidad de medicamentos triazólicos orales(Salmeron y col., 2012). En pacientes sometidos a trasplantes de órganos sólidos (particularmente del pulmón), el uso de dosis altas de esteroides deja a los pacientes vulnerables a la infección (Thompson y Patterson, 2008), lo que es un problema grave. La enfermedad también se ha presentado en poblaciones de pacientes inmunocomprometidos menos gravemente. Estas incluyen aquellos que padecen EPOC o cirrosis subyacente, pacientes que reciben dosis altas de esteroides e individuos provistos de catéteres venosos centrales o asistidos por ventilación mecánica (Dimopoulos y col., 2012).
Los medicamentos antifúngicos existentes se administran predominantemente oral o sistémicamente. Estas vías de administración utilizadas habitualmente son deficientes para tratar infecciones de las vías respiratorias pulmonares, ya que las concentraciones de fármaco alcanzadas en el punto de infección tienden a ser inferiores a aquellas en los órganos. Esto es así especialmente para el hígado, que es un punto de toxicidad: hasta 15 % de los pacientes tratados con voriconazol padecen niveles elevados de transaminasas (Levin y col., 2007; Lat y Thompson, 2011). La exposición del hígado también da como resultado interacciones farmacológicas significativas que surgen de la inhibición de las enzimas hepáticas P450 (Jeong, y col., 2009; Wexler y col., 2004).
Además, el uso generalizado de triazoles, tanto en la clínica como en la agricultura, ha conducido a una emergencia creciente y problemática de micosis resistentes en algunas ubicaciones (Denning y col., 2011b; Bowyer y Denning, 2014).
Resulta claramente evidente que existe una necesidad médica urgente de medicamentos antifúngicos novedosos que aporten una eficacia mejorada y mejores perfiles de tolerabilidad sistémica.
Resumen de la invención
En un primer aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
X representa CH o N;
Y representa CH o N;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos (en ocasiones denominados en lo sucesivo "compuestos de la invención" o "compuestos de la descripción”).
Los datos biológicos descritos en esta invención revelan que los compuestos de la invención son inhibidores potentes del crecimiento de Aspergillus fumigatus en ensayos in vitro. En ratones inmunodeprimidos, los compuestos de la invención demostraron una inhibición potente de las infecciones por Aspergillus fumigatus. En esta invención se describen otras propiedades deseables de los compuestos de la invención.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra los efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto sobre las UFC en los pulmones de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus. La Figura 2 y Figura 3 muestran los efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto sobre las concentraciones de galactomanano en FLBA y suero, respectivamente, en ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus.
En las Figuras 1-3, el símbolo *** indica significancia con P < 0,001.
Descripción detallada de la invención
Los grupos alquilo pueden ser de cadena ramificada o lineal. Los grupos alquilo C1-4 pueden representar, por ejemplo, alquilo C1-3 o alquilo C1-2. Los grupos alquilo ejemplares incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo y cH2CHMe2. En una realización, alquilo se refiere a alquilo de cadena lineal.
Alcoxi, como se emplea en esta invención, significa -Oalquilo e incluye alcoxi de cadena lineal o ramificada, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi.
Hidroxialquilo significa alquilo con un sustituyente hidroxilo en cualquier posición. Los ejemplos incluyen hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxi-n-propilo y 4-hidroxi-n-butilo.
Los halógenos pueden ser adecuadamente Br, Cl o F, especialmente Cl o F, particularmente F.
En una realización, se proporciona una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la invención.
Los compuestos de la descripción incluyen aquellos donde el átomo especificado es un isótopo de origen natural o no natural. En una realización, el isótopo es un isótopo estable. Por tanto, los compuestos de la descripción incluyen, por ejemplo, aquellos que contienen uno o más átomos de deuterio en lugar de átomos de hidrógeno y similares.
La descripción también abarca todas las formas polimórficas de los compuestos definidos en esta invención.
La descripción también abarca todos los solvatos de los compuestos definidos en esta invención. Los ejemplos de solvatos incluyen hidratos.
Adecuadamente, R representa H, F, CN, OCHF2, OCF3 , SO2NH2, SO2NHMe, SO2NMe2 o Cl, especialmente F o CN, más preferiblemente F.
Adecuadamente, R1a representa H, F o Cl, especialmente H.
Adecuadamente, R1b representa H o F, especialmente H.
Adecuadamente, R2 representa H, Me u OMe, especialmente H.
Adecuadamente, R3 representa Me, CN, Cl, CH2OH o F, especialmente Me.
Adecuadamente, R4 representa H o Me, especialmente H.
Adecuadamente, R5 representa H o Me.
Adecuadamente, R6 representa H o Me.
Adecuadamente, NR5R6 representa NH2, NHMe o NMe2.
Adecuadamente, X representa CH o N, especialmente CH.
Adecuadamente, Y representa CH (cuyo átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido por R, R1a o R1b, por ejemplo, por F) o N, especialmente CH.
Adecuadamente, R1a y R1b representan cada uno H y R representa F, CN, OCHF2, OCF3, SO2NH2, SO2NHMe, SO2NMe2 o Cl, especialmente R1a y R1b representan H y R representa F o CN, más preferiblemente R1a y R1b representan H y R representa F.
Alternativa y adecuadamente, R1a representa F, R1b representa H y R representa F u OCHF2, por ejemplo, R1a representa F, R1b representa H y R representa F.
Alternativa y adecuadamente, R1a representa Cl, R1b representa H y R representa F.
Adecuadamente, R4 representa H y R3 representa Me, CN, Cl, CH2OH o F, especialmente R4 representa H y R3 representa Me.
Alternativa y adecuadamente, R4 representa Me y R3 representa Me.
Adecuadamente, Y representa CH, R1a y R1b representan cada uno H y R está en la posición 3 o posición 4, especialmente la posición 4.
Alternativa y adecuadamente, Y representa CH, R1b representa H, y R y R1a están en las posiciones 2,4, posiciones 3,4, posiciones 2,5 o posiciones 3,5, especialmente las posiciones 2,4.
Alternativa y adecuadamente, Y representa N, R1a y R1b representan cada uno H y R está en la posición 4, posición 5 o posición 6, especialmente la posición 5.
Adecuadamente, Y representa CH, y R, R1a y R1b están en las posiciones 2,4 y 6.
Adecuadamente, R2 está situado en orto al nitrógeno del sustituyente de piperazinilo. Alternativamente, R2 está situado en meta al nitrógeno del sustituyente de piperazinilo.
Adecuadamente, R4 está situado en orto al oxígeno del sustituyente de éter.
Adecuadamente, el resto aromático que comprende Y representa 4-fluorofenilo, 3-fluorofenilo, 2,4-difluorofenilo, 2,5-difluorofenilo, 3,4-difluorofenilo, 3,5-difluorofenilo, 4-cianofenilo, 3-cianofenilo, 4-difluorometoxifenilo, 4-(trifluorometoxi)fenilo, 4-sulfamoilfenilo, 4-(W-metilsulfamoil)fenilo, 4-(W-W-dimetilsulfamoil)fenilo, 4-ciano-2-fluorofenilo, 4-(difluorometoxi)-3-fluorofenilo, 4-cloro-2-fluorofenilo, 4-cloro-3-fluorofenilo, 2,4,6-trifluorofenilo, 5-fluoropiridin-2-ilo, 5-cianopiridin-2-ilo, 6-cianopiridin-2-ilo, 4-cianopiridin-2-ilo, 5-(trifluorometoxi)piridin-2-ilo o 5-cloropiridin-2-ilo, especialmente 4-fluorofenilo o 4-cianofenilo, más preferiblemente 4-fluorofenilo.
En una realización, el compuesto de fórmula (I) se selecciona entre:
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(2,4-difluorofenil)benzamida;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-6-metilpiridin-2-il)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-danofenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-2,5-dimetilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(5-fluoropiridin-2-il)benzamida;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(5-danopiridin-2-il)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(3-danofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-danofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-dorofenil)piperazin-1-il)-W-(4-danofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3,5-dimetilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-danofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-difluorometoxifenil)benzamida;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-(trifluorometoxi)fenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(3-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3,5-dimetilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-hidroximetilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-fluorofenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-dorofenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-sulfamoilfenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-(N-metilsulfamoil)fenil)benzamida;
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-(N,N-dimetilsulfamoilfenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-fluorofenil)piperazin-1-il)-W-(4-sulfamoilfenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-dano-2-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-fluorofenil)piperazin-1-il)-W-(4-dano-2-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-(difluorometoxi)-3-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(2,5-difluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3,4-d¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3,5-d¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-doro-2-fluorofen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-doro-3-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(2,4,6-tr¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-3-met¡lbenzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-2-met¡lbenzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)-3-metox¡benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)-2-metox¡benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(6-danop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-danop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-h¡drox¡met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-danop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-(tr¡fluorometox¡)p¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-dorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡r¡dm-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-danop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡r¡dm-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da;
y sales farmacéut¡camente aceptables de los m¡smos.
En una real¡zac¡ón, el compuesto de fórmula (I) no es:
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo.
Los compuestos de la ¡nvenc¡ón se pueden preparar a part¡r de mater¡ales de part¡da comerc¡al¡zados med¡ante las metodologías s¡ntét¡cas no l¡m¡tantes representadas a cont¡nuac¡ón (Esquemas 1-3).
Esquema 1
Figure imgf000007_0001
Por tanto, los compuestos de fórmula (I) se pueden obtener mediante un procedimiento general (Esquema 1) mediante el cual un precursor de ácido benzoico (II), o un derivado adecuadamente protegido del mismo, se hace reaccionar con un agente activador para generar un derivado de ácido carboxílico electrofílico reactivo, seguido de una reacción posterior con una amina de fórmula (III), o un derivado adecuadamente protegido de la misma. Los expertos en la materia entenderán que, en algunos casos, se puede aislar el derivado de ácido carboxílico activado, tal como un cloruro de ácido, o, en otros casos, puede ser un producto intermedio transitorio que no se aísla, sino que se genera in situ y se usa directamente. Los reactivos adecuados para la activación del grupo carboxilato incluyen carbonil diimidazol, 1-cloro-W,W,2-trimetilprop-1-en-1-amina y una amplia selección de agentes de acoplamiento peptídico tales como hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidinofosfonio (PyBOP®), clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida (EDCI.HCI) y similares. Tales reacciones se llevan a cabo convenientemente en un disolvente aprótico no polar, tal como DCM, o, en algunos casos, en disolventes no próticos polares tales como piridina. Las amidas resultantes se pueden generar a temperatura ambiente o inferior, tal como TA, o se pueden formar a temperaturas elevadas, por ejemplo, 60 °C. Un análisis de las metodologías para la preparación de amidas se describe en: "Amide bond formation and peptide coupling", Montalbetti, C.A.G.N. y Falque, V. Tetrahedron, 2005, 61, 10827­ 10852. Los compuestos de fórmula (I) se revelan, en aquellos casos donde se han empleado uno o más grupos protectores, mediante etapas de desprotección apropiadas.
Los productos intermedios de fórmula (II) se pueden obtener mediante un procedimiento de formación de enlaces mediado por metales nobles, tal como una reacción de acoplamiento de Buchwald, entre un derivado de piperazina de fórmula (V) y un 4-bromobenzoato de fórmula (VI) para proporcionar, en el primer caso, los ésteres de ácido benzoico de formula (IV) correspondientes. Los expertos en la materia entenderán que se puede usar una amplia variedad de condiciones para influir en las transformaciones de este tipo. En particular, los catalizadores de paladio y los ligandos de fosfina tales como RuPhosG3 y RuPhos se emplean rutinariamente en presencia de una base, por ejemplo, carbonato de cesio o hexametildisilazida de litio. Tales procedimientos de acoplamiento habitualmente se llevan a cabo en disolventes no próticos polares tales como DMF y a temperaturas elevadas, por ejemplo, a 70-80 °C. Los compuestos de fórmula (II) se obtienen después de la hidrólisis posterior de los ésteres (IV) al ácido libre. Las condiciones adecuadas para la interconversión de este grupo funcional dependen de la naturaleza del éster. Los ésteres primarios y secundarios (por ejemplo, Ra = Me, Et y Pri) se saponifican convenientemente mediante exposición a una base inorgánica adecuada, por ejemplo, hidróxido de litio, en una mezcla acuosa de disolventes apróticos y/o próticos, tal como THF:metanol:agua. Los ejemplos más impedidos (por ejemplo Ra = tBu) se pueden desesterificar más fácilmente mediante tratamiento con un ácido mineral fuerte, tal como ácido clorhídrico, o un ácido orgánico fuerte, típicamente ácido trifluoroacético, usados indistintamente puros o en presencia de un disolvente tal como DCM.
En un procedimiento alternativo, que usa la metodología de acoplamiento de Buchwald, los productos intermedios de éster avanzados de fórmula (IV) también están disponibles mediante reacción de los bromuros de arilo de fórmula (VIII) con los motivos de piperazina de fórmula (XIV) (Ra = alquilo inferior, tal como alquilo C1-5, por ejemplo, metilo o etilo, o si no tere-butilo) de una manera similar a la descrita anteriormente. La misma tecnología se puede aplicar al bromuro de arilo (VIII) y una piperazina adecuadamente protegida de fórmula (IX), generando de ese modo los productos intermedios de fórmula (VII), que se transforman en los compuestos de fórmula (V) antes mencionados mediante una etapa de desprotección apropiada. Una estrategia de grupo protector de nitrógeno, apta para este fin, es un uretano que emplea, por ejemplo, el grupo Boc (P = CO2tBu) que es estable en las condiciones requeridas para la reacción de acoplamiento y se puede retirar posteriormente mediante tratamiento con ácido. La retirada de un grupo protector N-Boc se consigue típicamente mediante tratamiento con un ácido orgánico fuerte tal como TFA en un disolvente inerte tal como DCM a temperatura ambiente.
En una tercera estrategia, los ésteres de ácido benzoico de fórmula (IV) se pueden obtener mediante la reacción de los productos intermedios fenólicos (XIII) [X = CH] o los piridinoles correspondientes [X = N] con un agente alquilante de fórmula (XI), donde Z representa un grupo saliente y la estereoquímica de dicho reactivo es absoluta como se representa. Los agentes alquilantes típicos para transformaciones de este tipo incluyen ésteres de sulfonato tales como mesilatos (Z = Me SO2O) o triflatos (Z = CF3SO2O), así como haluros de alquilo, por ejemplo, el derivado de clorometilo o bromometilo (Z = Cl y Br, respectivamente).
Una consideración práctica significativa es que el derivado de tosilato (XIa) [Z = p-tolilSO2O], a saber: 4-metilbencenosulfonato de ((3S,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metilo, es un reactivo ampliamente disponible, a granel, de fuentes comerciales, en una pureza enantiomérica alta. Este derivado también es química y configuracionalmente estable y, como sólido, ofrece ventajas operativas sobre agentes alquilantes alternativos más volátiles (y por lo tanto más peligrosos). El procedimiento de eterificación se lleva a cabo típicamente en condiciones básicas, por ejemplo, en presencia de etóxido de sodio (para generar el anión fenóxido in situ) en un disolvente aprótico polar, adecuadamente DMF, y a temperaturas en la región de 40-50 °C.
De manera similar a la ya descrita anteriormente, las piperazinas 1,4-diariladas de fórmula (XIII) se obtienen del acoplamiento de Buchwald de las piperazinas monosustituidas (XIV) con bromofenoles de fórmula (X) [X = CH, Rc = H] o con los bromopiridinoles correspondientes [X = N, Rc = H] o, en algunos casos, con derivados adecuadamente protegidos de los mismos [Rc t H]. En aquellos casos donde el compuesto de fórmula (X) se ha protegido (por ejemplo, como un éter metílico o bencílico), el producto acoplado deseado (XIII) se obtiene después de una etapa de desprotección apropiada (por ejemplo, O-desmetilación con BBr3 u hidrogenólisis).
Los bromuros de arilo hidroxilados de fórmula (X) también se convierten mediante la misma metodología en las N-arilpiperazinas de fórmula (XII) mediante una reacción de acoplamiento con una piperazina monoprotegida de fórmula (IX). Un grupo protector de amina empleado habitualmente para tal fin es el grupo Boc, en cuyo caso el compuesto de fórmula (IX) es piperazina-1-carboxilato de tere-butilo. Resultará evidente para los expertos en la materia que se pueden seleccionar otros grupos protectores de nitrógeno en base a consideraciones de ortogonalidad y eficiencia operativa. La alquilación de la función hidroxilo libre en las N-arilpiperazinas de fórmula (XII) con el tosilato (XIa), como se describió anteriormente, da lugar a los productos intermedios de fórmula (VII).
Se entenderá a partir de las rutas preparativas descritas anteriormente (Esquema 1) que, en algunos casos, es ventajoso realizar las mismas transformaciones sintéticas o similares en un orden diferente para mejorar la eficiencia general de los procedimientos y/o la calidad de los materiales obtenidos a partir de los mismos. Además de los ejemplos ya descritos, los bromuros de arilo hidroxilados de fórmula (X) se pueden transformar en los compuestos de fórmula (VII) realizando las dos etapas, descritas anteriormente, en orden inverso. El tratamiento de los fenoles/piridinoles de fórmula (X) con el tosilato (XIa) proporciona los derivados de éter de fórmula (VIII), que se han convertido en condiciones de acoplamiento de Buchwald en los productos intermedios de fórmula (VII), como se describió anteriormente.
Las estrategias adicionales para preparar los compuestos de la invención, usando las tecnologías sintéticas descritas anteriormente, se dan a conocer a continuación (Esquema 2), en las que los mismos productos intermedios que se presentan anteriormente u otros estrechamente relacionados (Esquema 1) se ensamblan en un orden diferente. Esquema 2
Figure imgf000009_0001
El tratamiento de los componentes de anilina (MI) con los cloruros de benzoilo (XIX) proporciona los derivados de benzanilida de fórmula (XVIII). Como ya se ha señalado, tales productos amídicos se pueden preparar a partir de la amina y los ácidos benzoicos correspondientes directamente usando una amplia variedad de agentes activadores, que incluyen reactivos de acoplamiento peptídico, de los cuales muchos están disponibles en la técnica. El sometimiento de estos productos a la reacción de acoplamiento de Buchwald con una piperazina monoprotegida adecuada (IX), bajo la acción de un catalizador, de la manera indicada anteriormente, da lugar a los productos intermedios de fórmula (XVII). Los derivados de piperazina que son estables en estas condiciones de formación de enlaces incluyen uretanos tales como el derivado de N-Boc, aunque las alternativas (tales como un grupo Cbz) pueden ser ventajosas en algunos casos. La retirada del grupo protector de amina en condiciones adecuadas y un segundo procedimiento de N-arilación mediada por paladio con un bromuro aromático de fórmula (X), o un derivado protegido del mismo, proporciona los productos intermedios avanzados de fórmula (XV).
En algunos casos, esta transformación se puede lograr usando sustratos (X) en los que está presente el grupo hidroxilo libre (es decir, Rc = H). En otros casos, puede ser preferible proteger dicha funcionalidad como, por ejemplo, un derivado de éter, típicamente como un éter bencílico, que se puede revertir al fenol o piridinol libre mediante O-desalquilación en condiciones hidrogenolíticas. Los compuestos representativos de fórmula (I) se obtienen a continuación mediante la alquilación posterior del grupo hidroxilo con un reactivo de fórmula (XI), más adecuadamente con el tosilato (XIa).
Los compuestos de la invención donde la benzamida se forma con una 2-aminopiridina, (I) [Y = N], son accesibles a partir del acoplamiento cruzado mediado por paladio de una carboxamida primaria de fórmula (XX) con un sustrato de 2-bromopiridina opcionalmente sustituida de fórmula (XXI) (Esquema 3). Las condiciones de reacción típicas para realizar la amidación de Buchwald de haluros de arilo incluyen el uso de un catalizador de paladio, tal como tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0) en presencia de un ligando de fosfina, habitualmente Xantphos y similares, en condiciones básicas, por ejemplo, usando carbonato de cesio. Es habitual realizar tales reacciones en un disolvente aprótico polar, típicamente DMF, a temperaturas elevadas tales como 80-100 °C. Las benzamidas primarias (XX) se generan fácilmente a partir de los ácidos benzoicos correspondientes (II) tratándolas con una fuente de amoniaco, convenientemente cloruro de amonio, en condiciones de acoplamiento peptídico estándar.
Esquema 3
Figure imgf000010_0001
Los grupos protectores y los medios para su retirada se describen en "Protective Groups in Organic Synthesis”, de Theodora W. Greene y Peter G. M. Wuts, publicado por John Wiley & Sons Inc; 4a Rev Ed., 2006, ISBN-10: 0471697540. Un análisis de las metodologías para la preparación de amidas se describe en; "Amide bond formation and peptide coupling”, Montalbetti, C.A.G.N. y Falque, V. Tetrahedron, 2005, 61, 10827-10852.
Por tanto, la invención también proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000010_0002
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
X representa CH o N;
o un derivado activado del mismo (tal como un haluro de ácido, p. ej., un cloruro de ácido o un anhídrido de ácido); o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (MI):
Figure imgf000010_0003
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; e
Y representa CH o N;
o una sal del mismo.
La invención también proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XV):
Figure imgf000011_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
R1a y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4;
X representa CH o N; e
Y representa CH o N;
o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (XI):
Figure imgf000011_0002
donde:
Z representa un grupo saliente tal como p-tolilSO2O;
o una sal del mismo.
La invención también proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XX):
Figure imgf000011_0003
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (XXI):
Figure imgf000012_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo; y
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4;
o una sal del mismo.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) incluyen en particular sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos. Con sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) se pretende comprender las sales de adición de ácido no tóxicas terapéuticamente activas que son capaces de formar los compuestos de fórmula (I). Estas sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente tratando la forma de base libre con tales ácidos apropiados en un disolvente o una mezcla de disolventes adecuados. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos hidrohálicos, p. ej., ácido clorhídrico o bromhídrico, ácidos sulfúrico, nítrico, fosfórico y similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, malónico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y similares.
Recíprocamente, dichas formas salinas se pueden convertir mediante tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.
La definición de los compuestos de fórmula (I) está destinada a incluir todos los tautómeros de dichos compuestos. La definición de los compuestos de fórmula (I) está destinada a incluir todos los solvatos de dicho compuesto (lo que incluye solvatos de sales de dicho compuesto) a menos que el contexto lo indique específicamente de otro modo. Los ejemplos de solvatos incluyen hidratos.
Los compuestos de la descripción incluyen realizaciones donde uno o más átomos especificados son isótopos de origen natural o no natural. En una realización, el isótopo es un isótopo estable. Por tanto, los compuestos de la descripción incluyen, por ejemplo, compuestos que contienen deuterio y similares.
La descripción también abarca todas las formas polimórficas de los compuestos definidos en esta invención.
Los productos intermedios novedosos como se describen en esta invención, tales como los compuestos de fórmula (II), (IV), (V), (VII), (VIII), (XV) y (XX) y sales de los mismos, forman un aspecto adicional de la invención. Las sales incluyen sales farmacéuticamente aceptables (tales como las mencionadas anteriormente) y sales no farmacéuticamente aceptables. Las sales de ácidos (p. ej., ácidos carboxílicos) incluyen sales de metales del primer y segundo grupo que incluyen sales de sodio, potasio, magnesio y calcio.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la invención opcionalmente en combinación con uno o más diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Adecuadamente, los compuestos de la invención se administran tópicamente al pulmón o la nariz, particularmente, tópicamente al pulmón. Por tanto, en una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la invención opcionalmente en combinación con uno o más diluyentes o vehículos tópicamente aceptables.
Las composiciones adecuadas para administración pulmonar o intranasal incluyen polvos, soluciones líquidas, suspensiones líquidas, gotas nasales, que comprenden soluciones o suspensiones, o aerosoles presurizados o no presurizados.
Las composiciones se pueden administrar convenientemente en forma farmacéutica unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985). Las composiciones también se pueden administrar convenientemente en forma farmacéutica unitaria múltiple.
La administración tópica a la nariz o el pulmón se puede conseguir mediante el uso de una formulación no presurizada tal como una solución o suspensión acuosa. Tales formulaciones se pueden administrar por medio de un nebulizador, p. ej., uno que puede ser manual y portátil o para uso doméstico u hospitalario (es decir, no portátil). Un dispositivo de ejemplo es un inhalador RESPlMAT. La formulación puede comprender excipientes tales como agua, tampones, agentes ajustadores de la tonicidad, agentes ajustadores del pH, modificadores de la viscosidad, tensioactivos y codisolventes (tales como etanol). Las formulaciones de líquido de suspensión y aerosol (ya sea presurizado o no presurizado) contendrán típicamente el compuesto de la invención en forma finamente dividida, por ejemplo, con un D50 de 0,5-10 |jm, p. ej., alrededor de 1-5 jm. Las distribuciones del tamaño de partícula se pueden representar usando los valores D10 D50 y D90. El valor de mediana D50 de las distribuciones del tamaño de partícula se define como el tamaño de partícula en micras que divide la distribución por la mitad. La medición obtenida a partir de difracción láser se describe con mayor exactitud como una distribución de volumen y, por consiguiente, el valor D50 obtenido usando este procedimiento se denomina más convenientemente valor Dv50 (mediana para una distribución de volumen). Como se emplea en esta invención, los valores Dv se refieren a distribuciones del tamaño de partícula medidas usando difracción láser. Similarmente, los valores D10 y D90, usados en el contexto de la difracción láser, se toman para indicar los valores Dv10 y Dv90 y se refieren al tamaño de partícula mediante el cual el 10 % de la distribución se encuentra por debajo del valor D10 y el 90 % de la distribución se encuentra por debajo del valor D90, respectivamente.
Según un aspecto específico de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la invención en forma de partículas suspendidas en un medio acuoso. El medio acuoso comprende típicamente agua y uno o más excipientes seleccionados entre tampones, agentes ajustadores de la tonicidad, agentes ajustadores del pH, modificadores de la viscosidad y tensioactivos.
La administración tópica a la nariz o el pulmón también se puede conseguir mediante el uso de una formulación de aerosol. Las formulaciones de aerosol comprenden típicamente el principio activo suspendido o disuelto en un propelente de aerosol adecuado, tal como un clorofluorocarbono (CFC) o un hidrofluorocarbono (HFC). Los propelentes de CFC adecuados incluyen tricloromonofluorometano (propelente 11), diclorotetrafluorometano (propelente 114) y diclorodifluorometano (propelente 12). Los propelentes de h Fc adecuados incluyen tetrafluoroetano (HFC-134a) y heptafluoropropano (HFC-227). El propelente comprende típicamente 40 %-99,5 %, p. ej., 40 %-90 % en peso de la composición de inhalación total. La formulación puede comprender excipientes que incluyen codisolventes (p. ej., etanol) y tensioactivos (p. ej., lecitina, trioleato de sorbitán y similares). Otros excipientes posibles incluyen polietilenglicol, polivinilpirrolidona, glicerina y similares. Las formulaciones de aerosol se envasan en recipientes metálicos herméticos y se administra una dosis adecuada por medio de una válvula dosificadora (p. ej., como las suministradas por Bespak, Valois o 3M o alternativamente por Aptar, Coster o Vari).
La administración tópica al pulmón también se puede conseguir mediante el uso de una formulación de polvo seco. Una formulación de polvo seco contendrá el compuesto de la descripción en forma finamente dividida, típicamente con un MMD de 1-10 jm o un D50 de 0,5-10 jm, p. ej., alrededor de 1-5 jm. Los polvos del compuesto de la invención en forma finamente dividida se pueden preparar mediante un procedimiento de micronización o un procedimiento de reducción de tamaño similar. La micronización se puede realizar usando un molino de chorro tal como los fabricados por Hosokawa Alpine. La distribución del tamaño de partícula resultante se puede medir usando difracción láser (p. ej., con un instrumento Mastersizer 2000S de Malvern). La formulación contendrá típicamente un diluyente tópicamente aceptable tal como lactosa, glucosa o manitol (preferiblemente lactosa), por lo general de tamaño de partícula comparativamente grande, p. ej., un MMD de 50 jm o más, p. ej., 100 jm o más o un D50 de 40-150 jm. Como se emplea en esta invención, el término "lactosa" se refiere a un componente que contiene lactosa, lo que incluye a­ lactosa monohidratada, p-lactosa monohidratada, a-lactosa anhidra, p-lactosa anhidra y lactosa amorfa. Los componentes de lactosa se pueden procesar mediante micronización, tamizado, molienda, compresión, aglomeración o secado por pulverización. También están abarcadas formas de lactosa comercializadas en diversas formas, por ejemplo, Lactohale® (lactosa de grado inhalatorio; DFE Pharma), lnhaLac®70 (lactosa tamizada para inhalador de polvo seco; Meggle), Pharmatose® (DFE Pharma) y Respitose® (lactosa de grado inhalatorio tamizada; DFE Pharma). En una realización, el componente de lactosa se selecciona del grupo que consiste en a-lactosa monohidratada, a­ lactosa anhidra y lactosa amorfa. Preferiblemente, la lactosa es a-lactosa monohidratada.
Las formulaciones de polvo seco también pueden contener otros excipientes tales como estearato de sodio, estearato de calcio o estearato de magnesio.
Una formulación de polvo seco se administra típicamente usando un dispositivo inhalador de polvo seco (DPI). Los ejemplos de sistemas de administración de polvo seco incluyen SPINHALER, DISKHALER, Tu RbOHALER, DISKUS, SKYEHALER, ACCUHALER y CLICKHALER. Otros ejemplos de sistemas de administración de polvo seco incluyen ECLIPSE, NEXT, ROTAHALER, HANDIHALER, AEROLISER, CYCLOHALER, BREEZHALER/NEOHALER, MONODOSE, FLOWCAPS, TWINCAPS, X- CAPS, TURBOSPIN, ELPENHALER, MIATHALER, TWISTHALER, NOVOLIZER, PRESSAIR, ELLIPTA, inhalador de polvo seco ORIEL, MICRODOSE, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OMNIHALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR y PROHALER. Los compuestos de la invención también se podrían administrar tópicamente a otra superficie interna o externa (p. ej., una superficie mucosa o piel) u oralmente. Los compuestos de la invención se pueden formular convencionalmente para tales vías de administración.
Los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de micosis y para la prevención o el tratamiento de enfermedades asociadas a micosis.
En un aspecto de la invención se proporciona el uso de uno o más compuestos de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de micosis y para la prevención o el tratamiento de enfermedades asociadas a micosis.
En otro aspecto de la invención se proporciona un método para el tratamiento de un sujeto con una micosis que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de la invención.
En otro aspecto de la invención se proporciona un método para la prevención o el tratamiento de una enfermedad asociada a una micosis en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz de uno o más compuestos de la invención.
Las micosis pueden ser causadas, en particular, por Aspergillus spp. tales como Aspergillus fumigatus o Aspergillus pullulans y especialmente Aspergillus fumigatus. Las micosis también pueden ser causadas por Candida spp., p. ej., Candida albicans o Candida glabrata, Rhizopus spp., p. ej., Rhizopus oryzae, Cryptococcus spp., p. ej., Cryptococcus neoformans, Chaetomium spp., p. ej., Chaetomium globosum, Penicillium spp., p. ej., Penicillium chrysogenum y Trichophyton spp., p. ej., Trichophyton rubrum.
Una enfermedad asociada a una micosis es, por ejemplo, la aspergilosis pulmonar.
El compuesto de la invención se puede usar en un contexto profiláctico administrando dicho compuesto antes del comienzo de la micosis.
Los sujetos incluyen sujetos humanos y animales, especialmente sujetos humanos.
Los compuestos de la invención son especialmente útiles para el tratamiento de micosis tales como infección por Aspergillus fumigatus y para la prevención o el tratamiento de enfermedades asociadas a micosis tales como infección por Aspergillus fumigatus en sujetos de riesgo. Los sujetos de riesgo incluyen lactantes prematuros, niños con defectos congénitos del pulmón o el corazón, sujetos inmunocomprometidos (p. ej., los que padecen infección por VIH), asmáticos, sujetos con fibrosis quística, sujetos ancianos y sujetos que padecen una afección médica crónica que afecta al corazón o al pulmón (p. ej., insuficiencia cardíaca congestiva o enfermedad pulmonar obstructiva crónica). Los compuestos de la invención también son útiles para el tratamiento de micosis resistentes a azoles tales como infección por Aspergillus fumigatus resistente a azoles, particularmente en combinación con posaconazol.
Los compuestos de la invención se pueden administrar en combinación con un segundo principio activo o más. El segundo o más principios activos se pueden seleccionar, por ejemplo, entre otros agentes antifúngicos (tales como voriconazol o posaconazol), anfotericina B, una equinocandina (tal como caspofungina) y un inhibidor de la 3-hidroxi-3-metil-glutaril-CoA reductasa (tal como lovastatina, pravastatina o fluvastatina).
El segundo o más principios activos incluyen principios activos adecuados para el tratamiento o la prevención de una micosis tal como infección por Aspergillus fumigatus o una enfermedad asociada a una micosis tal como infección por Aspergillus fumigatus o afecciones comórbidas con una micosis tal como infección por Aspergillus fumigatus.
Los compuestos de la invención se pueden coformular con un segundo principio activo o más, o el segundo principio activo o más se pueden formular para ser administrados independientemente por la misma vía o una diferente.
Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden administrar a pacientes que ya están siendo tratados sistémicamente con un antifúngico, tal como voriconazol o posaconazol.
Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden coadministrar, p. ej., coformular, con uno o más agentes seleccionados entre anfotericina B, una equinocandina, tal como caspofungina, y un inhibidor de la 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa, tal como lovastatina, pravastatina o fluvastatina.
El compuesto de la invención se puede coadministrar, p. ej., coformular, alternativamente (o además), con uno o más agentes seleccionados entre candicidina, filipina, hamicina, natamicina, nistatina, rimocidina, bifonazol, butoconazol, clotrimazol, econazol, fenticonazol, isoconazol, ketoconazol, luliconazol, miconazol, omoconazol, oxiconazol, sertaconazol, sulconazol, tioconazol, albaconazol, efinaconazol, epoxiconazol, fluconazol, isavuconazol, itraconazol, propiconazol, ravuconazol, terconazol, abafungina, amorolfina, butenafina, naftifina, terbinafina, anidulafungina, micafungina, ácido benzoico, ciclopirox, flucitosina (5-fluorocitosina), griseofulvina, tolnaftato y ácido undecilénico. Los compañeros de combinación preferidos incluyen intraconazol, voriconazol, caspofungina y posaconazol.
Según un aspecto de la invención se proporciona un kit de partes que comprende (a) una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la invención opcionalmente en combinación con uno o más diluyentes o vehículos; (b) una composición farmacéutica que comprende un segundo principio activo opcionalmente en combinación con uno o más diluyentes o vehículos; (c) opcionalmente una o más composiciones farmacéuticas adicionales que comprenden cada una un tercer principio activo o más opcionalmente en combinación con uno o más diluyentes o vehículos; y (d) instrucciones para la administración de las composiciones farmacéuticas a un sujeto con necesidad de las mismas. El sujeto con necesidad de las mismas puede padecer, o ser susceptible de, una micosis tal como infección por Aspergillus fumigatus.
Los compuestos de la invención se pueden administrar en un intervalo adecuado, por ejemplo, una vez al día, dos veces al día, tres veces al día o cuatro veces al día.
Una cantidad de dosis adecuada para un humano de peso promedio (50-70 kg) se espera que sea de alrededor de 50 |jg a 10 mg/día, p. ej., 500 |jg a 5 mg/día, aunque la dosis exacta que se va a administrar puede ser determinada por un experto en la técnica.
Los compuestos de la invención se espera que tengan uno o más de los atributos favorables siguientes:
• actividad antifúngica potente, particularmente actividad contra Aspergillus spp. tales como Aspergillus fumigatus, o actividad contra Candida spp., p. ej., Candida albicans o Candida glabrata, Rhizopus spp., p. ej., Rhizopus oryzae, Cryptococcus spp., p. ej., Cryptococcus neoformans, Chaetomium spp., p. ej., Chaetomium globosum, Penicillium spp., p. ej., Penicillium chrysogenum o Trichophyton spp., p. ej., Trichophyton rubrum, especialmente después de la administración tópica al pulmón o la nariz;
• una duración larga de la acción en los pulmones, preferentemente consistente con la administración una vez al día;
• exposición sistémica baja después de la administración tópica al pulmón o la nariz; y
• un perfil de seguridad aceptable, especialmente después de la administración tópica al pulmón o la nariz.
SECCIÓN EXPERIMENTAL
Las abreviaturas usadas en esta invención se definen a continuación (Tabla 1). Cualquier abreviatura no definida está destinada a expresar su significado generalmente aceptado.
Tabla 1: Abreviaturas
ABPA aspergilosis broncopulmonar alérgica
ac. acuosa
ATCC Colección Americana de Cultivos Tipo
BALF fluido de lavado broncoalveolar
BEAS2B línea celular epitelial bronquial humana inmortalizada con SV40
Boc terc-butiloxicarbonilo
br amplia
BSA albúmina sérica bovina
CC50 concentración de citotoxicidad celular de 50 %
UFC unidad(es) formadora(s) de colonias
CLSI Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio
COI índice de corte
conc. concentración/concentrada
d doblete
DCM diclorometano
DFB50 días necesarios para alcanzar una carga fúngica de 50 % del control DIPEA W,W-diisopropiletilamina
DMAP 4-dimetilaminopiridina
DMEM Medio de Eagle modificado por Dulbecco
DMF W,W-dimetilformamida
DMSO dimetilsulfóxido
DSS sulfato sódico de dextrano
EBM medio basal endotelial
MEC matriz extracelular
EDCI.HCI clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida EGM2 medio de crecimiento celular endotelial 2
EUCAST Comité Europeo de Antibiogramas
(ES+) ionización por electroespray, modo positivo
Et etilo
Et3N trietilamina
EtOAc acetato de etilo
FBS suero fetal bovino
GM galactomanano
HPAEC célula endotelial de arteria pulmonar humana
HOBt.H2O 1-hidroxibenzotriazol monohidratado
CLAR cromatografía líquida de alta resolución de fase reversa h hora(s)
AI aspergilosis invasiva
i.n. intranasal
IPA 2-propanol
i.t. intratraqueal
CL-EM cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas Li Hep heparina de litio
LiHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio
m multiplete
(M+H)+ ion molecular protonado
MDA malondialdehído
Me metilo
MeCN acetonitrilo
MeOH metanol
MHz megahercio
CMI50 50 % de concentración mínima inhibitoria
CMI75 75% de concentración mínima inhibitoria
CMI90 90% de concentración mínima inhibitoria
min minuto(s)
MMD diámetro medio másico
MOI multiplicidad de infección
MOPS ácido 3-(W-morfolino)propanosulfónico
m/z: relación masa/carga
NCPF Colección Nacional de Hongos Patógenos
RMN (espectroscopía de) resonancia magnética nuclear
NE no ensayado
DO densidad óptica
PBS solución salina tamponada con fosfato
P grupo protector
q cuarteto
TA temperatura ambiente
CLAR-FR cromatografía líquida de alta resolución de fase reversa
RPMI medio Roswell Park Memorial Institute
RuPhos 2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenilo
RuPhosG3 metanosulfonato de (2-diciclohexilfosfino-2',6'-diisopropoxibifenil)[2-(2'-amino- 1,1'-bifenil)]paladio (II)
s singlete
sat. saturada
sc subcutánea
SDS dodecilsulfato sódico
t triplete
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
TR34/L98H U
hi n
s a
tid c
in e
a pa
en As
e pergillus fumigatus que contiene una sustitución de leucina a l codón 98 y una repetición en tándem de 34 pb Xantphos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno
Procedimientos generales
Todos los materiales de partida y disolventes se obtuvieron indistintamente de fuentes comerciales o se prepararon según la cita bibliográfica. A menos que se indique de otro modo, se agitaron todas las reacciones. Las soluciones orgánicas se secaron rutinariamente sobre sulfato de magnesio anhidro. Las hidrogenaciones se realizaron en un reactor de flujo H-cube de Thales en las condiciones indicadas.
La cromatografía en columna se realizó en cartuchos de sílice precargados (malla 230-400, 40-63 |jm) usando la cantidad indicada. La SCX se adquirió de Supelco. A menos que se indique de otro modo, la mezcla de reacción que se va a purificar se diluyó primero con DCM. Esta solución se cargó directamente en la SCX y se lavó con MeOH. El material deseado se eluyó a continuación lavando con NH30,7 M en MeOH.
Cromatografía líquida de alta resolución preparativa de fase reversa
Método 1: Columna X-Select CSH C18 de Waters, 5 jm (19 x 50 mm), caudal 28 mL min-1 eluyendo con un gradiente de H2O-MeCN que contenía 0,1 % v/v de ácido fórmico a lo largo de 6,5 min usando detección de UV a 254 nm. Información del gradiente: 0,0-0,2 min, 20 % de MeCN; 0,2-5,5 min, aumentado de 20 % de MeCN a 80 % de MeCN; 5.5- 5,6 min, aumentado de 80 % de MeCN a 95 % de MeCN; 5,6-6,5 min, mantenido a 95 % de MeCN.
Método 2: Columna X-Select CSH C18 de Waters, 5 jm (19 x 50 mm), caudal 28 mL min'1 eluyendo con un gradiente de H2O-MeCN que contenía 0,1 % v/v de ácido fórmico a lo largo de 6,5 min usando detección de UV a 254 nm. Información del gradiente: 0,0-0,2 min, 50 % de MeCN; 0,2-5,5 min, aumentado de 50 % de MeCN a 80 % de MeCN; 5.5- 5,6 min, aumentado de 80 % de MeCN a 95 % de MeCN; 5,6-6,5 min, mantenido a 95 % de MeCN.
Método 3: Columna X-Select CSH C18 de Waters, 5 jm (19 x 50 mm), caudal 28 mL min-1 eluyendo con un gradiente de H2O-MeCN que contenía 0,1 % v/v de ácido fórmico a lo largo de 6,5 min usando detección de UV a 254 nm. Información del gradiente: 0,0-0,2 min, 35 % de MeCN; 0,2-5,5 min, aumentado de 35% de MeCN a 65 % de MeCN; 5.5- 5,6 min, aumentado de 65 % de MeCN a 95 % de MeCN; 5,6-6,5 min, mantenido a 95 % de MeCN.
Métodos analíticos
Métodos de CLAR de fase reversa: columna Xselect CSH C18 XP de Waters, 2,5 jm (4,6 x 30 mm) a 40 °C; caudal 2.5- 4,5 mL min-1 eluida con un gradiente de H2O-MeCN que contenía 0,1 % v/v de ácido fórmico (Método a) o NH4HCO3 10 mM en agua (Método b) a lo largo de 4 min que emplea detección de UV a 254 nm. Información de gradiente: 0-3,00 min, aumentado de 95 % de H2O- 5 % de MeCN a 5 % de H2O- 95 % de MeCN; 3,00-3,01 min, mantenido a 5 % de H2O- 95 % de MeCN, caudal aumentado a 4,5 mL min-1; 3,01 3,50 min, mantenido a 5 % de H2O-95 % de MeCN; 3,50-3,60 min, devuelto a 95 % de H2O- 5 % de MeCN, caudal reducido a 3,50 mL min-1; 3,60-3,90 min, mantenido a 95 % de H2O- 5 % de MeCN; 3,90-4,00 min, mantenido a 95 % de H2O- 5 % de MeCN, caudal reducido a 2,5 mL min-1.
Espectroscopia de RMN 1H: los espectros de RMN 1H se adquirieron en un espectrómetro Advance III de Bruker a 400 MHz usando disolvente residual no deuterado como referencia y, a menos que se especifique de otro modo, se realizaron en DMSO-d6.
Procedimientos representativos para la preparación de productos intermedios
4-(4-hidroxi-3-metilfenil)piperazina-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000018_0001
Un matraz cargado con piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (7,44 g, 40,0 mmol), 4-bromo-2-metilfenol (Xa) (6,23 g, 33,3 mmol), RuPhos (311 mg, 0,67 mmol) y RuPhos G3 (557 mg, 0,67 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces. Se añadió una solución de LiHMDS (1 M en THF, 100 mL, 100 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 3 h. Después de enfriar a TA, la mezcla se enfrió rápidamente mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (100 mL) y a continuación se neutralizó con NaHCO3 ac. 1 M (100 mL). La capa ac. se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL) y se secaron los extractos orgánicos combinados. Los volátiles se retiraron al vacío para proporcionar un producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SÍO2, 120 g, 0-100 % de EtOAc en isohexanos, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XIIa) como un sólido marrón claro (7,80 g, 78 %); tR 2,07 min (Método b); m/z 293 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 1,41 (9H, s), 2,07 (3H, s), 2,86-2,88 (4H, m), 3,41-3,43 (4H, m), 6,58-6,65 (2H, m), 6,71 (1H, d) y 8,72 (1H, s).
1-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metilfenil)piperazina
Figure imgf000019_0001
A una solución de producto intermedio (XIIa) (7,80 g, 25,1 mmol) en DMSO (60 mL) se añadió hidróxido de sodio ac. (3,0 mL, 12,5 M, 37,6 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 10 min y a continuación se trató poco a poco con el tosilato (Xla) (ej. APIChem, número de catálogo: AC-8330, 12,4 g, 27,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 18 h, se enfrió a TA y se añadió agua (200 mL). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 200 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite marrón. El análisis del producto bruto protegido con Boc (VIIa) mediante RMN 1H indicó que contenía ~10 % del alqueno: (R)-1-((2-(2,4-difluorofenil)-4-metilentetrahidrofuran-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol, formado como subproducto de la eliminación. El uretano bruto (VIIa) se recogió en DCM (150 mL) y se trató con TFA (39,0 mL, 502 mmol). Después de 2 h a TA, la mezcla de reacción se concentró al vacío para retirar la mayoría de los volátiles y a continuación se diluyó con EtOAc (200 mL) y se lavó con NaOH ac. (2 M, 200 mL). Se separó la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 200 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 200 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite marrón claro. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (S¡O2, 80 g, 0-10 % de NH3/MeOH 0,7 M en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (Va), como un aceite viscoso marrón claro (9,46 g, 80 %); tR 1,91 min (Método b); m/z 470 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,07 (3H, s), 2,15 (1H, dd), 2,36-2,42 (1H, m), 2,52-2,56 (1H, m), 2,79-2,81 (4H, m), 2,87-2,90 (4H, m), 3,66 (1H, dd), 3,73-3,77 (2H, m), 4,04 (1H, t), 4,57 (2H, dd), 6,64 (1H, dd), 6,70-6,75 (2H, m), 6,99 (1H, td), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76 (1H, s) y 8,34 (1H, s).
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)benzoato de metilo
Figure imgf000019_0002
Un matraz cargado con producto intermedio (Va) (9,00 g, 19,2 mmol), metil-4-bromobenzoato (VIa) (4,95 g, 23,0 mmol), RuPhos (0,18 g, 0,38 mmol, 2 % molar), RuPhosG3 (0,32 g, 0,38 mmol, 2 % molar) y carbonato de cesio (9,99 g, 30,7 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (150 mL). La mezcla se calentó a 80 °C durante 22 h y a continuación, mientras aún estaba caliente, se vertió en agua (150 mL) para formar una goma marrón. Se añadió más agua (300 mL) y se extrajo la fase ac. con DCM (2 x 200 mL). Los extractos orgánicos se combinaron y concentraron al vacío para proporcionar un aceite marrón que se vertió en agua (100 mL). El precipitado resultante se recogió mediante filtración y a continuación se resuspendió en THF (100 mL). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 h, durante la cual se formó una suspensión crema. La mezcla se enfrió a TA y el precipitado resultante se recogió mediante filtración, se lavó con THF (2 x 50 mL) y a continuación se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IVa), como un sólido amarillo claro (9,48 g, 79 %); 4R 2,79 min (Método b); m/z 604 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,09 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,11-3,14 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (5H, s superpuesto sobre m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,85 (1H, br d), 7,00 (1H, td), 7,04 (2H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76 (1H, s), 7,81 (2H, d) y 8,34 (1H, s).
4-(4-(4-hidroxi-3-metilfenil)piperazin-1-il)benzoato de etilo
Figure imgf000020_0001
Un matraz cargado con una solución de 4-(piperazin-1-il)benzoato de etilo (XlVa) (20,0 g, 85,0 mmol) y 4-bromo-2-metilfenol (Xa) (19,2 g, 102 mmol) en DMF (213 mL) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces. Se añadió RuPhos G3 (1,43 g, 1,71 mmol) y el matraz se evacuó y rellenó con nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió LiHMDS (17,1 g, 102 mmol). La reacción se agitó a TA durante 10 min, a continuación se enfrió en un baño de agua y se añadió LiHMDS (20,0 g, 120 mmol) en partes iguales (7 x 2,85 g) a intervalos de 5 min. La solución resultante se agitó a TA durante 30 min y a continuación se enfrió a 0 °C y trató con ácido clorhídrico 2 M (200 mL), lo que dio como resultado un pH de 6-7. La mezcla se agitó durante 15 min a temperatura ambiente y a continuación se extrajo con EtOAc (220 mL). La capa ac. se separó y extrajo con EtOAc (4 x 50 mL) y los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (6 x 50 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un sólido crema. Se añadió una mezcla de isohexanos e IPA (1:1, 150 mL) y la suspensión se agitó a TA durante 30 min. El sólido se recogió mediante filtración y la torta del filtro se lavó con una mezcla de isohexanos e IPA (1:1,2 x 10 mL) seguida de isohexanos (4 x 10 mL) y se secó al vacío a 40 °C durante 18 h para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XlIIa), como un sólido crema (15,3 g, 50 %); tR 2,29 min (Método b); m/z 341 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 1,29 (3H, t), 2,09 (3H, s), 3,06-3,09 (4H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 4,24 (2H, dd), 6,66 (2H, brs), 6,76 (1H, brs), 7,03 (2H, d), 7,80 (2H, d), 8,72 (1H, s).
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)benzoato de etilo
Figure imgf000020_0002
A una solución de producto intermedio (XlIIa) (15,3 g, 44,9 mmol) en DMF (110 mL) enfriada a 0 °C se añadió etóxido de sodio (3,13 g, 46,1 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min y a continuación se trató con el tosilato (Xla). Se permitió que la mezcla de reacción se calentara a TA, se calentó a 50 °C durante 1 h y a continuación se enfrió a TA. Se añadieron ácido clorhídrico (1 M, 60 mL) y agua (200 mL) y la mezcla se agitó durante 30 min a TA y a continuación se extrajo con DCM (150 mL). La capa ac. se separó y extrajo con DCM (2 x 50 mL) y los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (4 x 30 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un sólido crema. El sólido se suspendió en una mezcla equitativa de isohexanos e IPA (80 mL) y se agitó a TA durante 1 h. El sólido se recogió mediante filtración, se lavó con una mezcla de isohexanos e IPA 1:1 (3 x 20 mL) y a continuación se secó al vacío a 40 °C durante 18 h para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IVb), como un sólido blanco (16,4 g, 56 %); tR 2,92 min (Método b); m/z 618 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 1,29 (3H, t), 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,12-3,14 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,24 (2H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 6,98-7,05 (3H, m), 7,267,34 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,81 (2H, d), 8,34 (1H, s).
2-(benciloxi)-5-bromobenzonitrilo
Figure imgf000021_0001
A una suspensión agitada de 5-bromo-2-hidroxibenzonitrilo (Xb) (1,00 g, 5,05 mmol), bromuro de tetrabutilamonio (814 mg, 2,53 mmol) y fosfato de potasio tribásico monohidratado (1,16 g, 5,05 mmol) en agua (10 mL) se añadió bromuro de bencilo (600 pL, 5,05 mmol). La mezcla se agitó durante 18 h a TA y se extrajo con DCM (3 x 20 mL). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 12 g, 0-40 % de EtOAc en isohexanos, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (Xc), como un sólido blanco (1,22 g, 82 %); tR 2,53 min (Método a); m/z no se observó ionización; RMN 1H 8: 5,30 (2H, s), 7,31 (1H, d), 7,34-7,48 (5H, m), 7,85 (1H, dd), 8,03 (1H, d).
4-(4-(4-(benciloxi)-3-cianofenil)piperazin-1-il)benzoato de metilo
Figure imgf000021_0002
Un matraz cargado con 4-(piperazin-1-il)benzoato de metilo (XlVa) (459 mg, 2,08 mmol), producto intermedio (Xc) (500 mg, 1,74 mmol), RuPhos (40,0 mg, 87,0 pmol), RuPhos G3 (67,0 mg, 87,0 pmol) y carbonato de cesio (678 mg, 2,08 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (8,0 mL). La mezcla se calentó a 80 °C durante 18 h y a continuación se enfrió a TA y se repartió entre agua (50 mL) y EtOAc (50 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 mL). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 50 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un sólido amarillo. El producto bruto se trituró en dietil éter (20 mL), se recogió mediante filtración y se secó al vacío a 40 °C durante 18 h para proporcionar el compuesto del título (XlIIb) como un sólido beis (286 mg, 37 %); tR 2,74 min (Método a); m/z 428 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 3,21-3,24 (4H, m), 3,44-3,47 (4H, m), 3,78 (3H, s), 5,22 (2H, s), 7,05 (2H, d), 7,22-7,25 (1H, m), 7,32-7,36 (3H, m), 7,39-7,47 (4H, m), 7,81 (2H, d).
4-(4-(3-ciano-4-hidroxifenil)piperazin-1-il)benzoato de metilo
Figure imgf000021_0003
Se hidrogenó una solución de producto intermedio (XlIIb) (286 mg, 0,669 mmol) en EtOAc (80 mL) usando e1H-Cube (10 % de paladio sobre carbono, 70 x 4 mm, lleno de hidrógeno, 30 °C, 1 mL/min). Se evaporó el disolvente al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 4 g, 0-100 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (Xlllc), como un sólido blanco (139 mg, 60 %); tR 2,06 min (Método a); m/z 338 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 3,14-3,17 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,78 (3H, s), 6,93 (1H, d), 7,04 (2H, d), 7,16 (1H, d), 7,25 (1H, dd), 7,80 (2H, d), 10,45 (1H, s).
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-cianofenil)piperazin-1-il)benzoato de metilo
Figure imgf000022_0001
A una solución de producto intermedio (XIIIc) (139 mg, 0,412 mmol) en DMSO (1,0 mL) se añadió hidróxido de sodio ac. (30,0 |jL, 12,5 M, 0,381 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 10 min y a continuación se trató con una solución del tosilato (Xla) (154 mg, 0,343 mmol) en DMSO (1,0 mL). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 18 h, se enfrió a TA y se añadió agua (30 mL). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 30 mL) y se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite marrón. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 12 g, 0-100 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IVc), como una espuma blanca (100 mg, 46 %); tR 2,59 min (Método a); m/z 615 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,18 (1H, dd), 2,40-2,46(1H, m), 2,56-2,64 (1H, m), 3,21-3,24 (4H, m), 3,45-3,47 (4H, m), 3,78-3,96 (6H, m), 4,04 (1H, dd), 4,59 (2H, dd), 6,98 (1H, td), 7,05 (2H, d), 7,11 (1H, d), 7,25-7,35 (4H, m), 7,73 (1H, s), 7,81 (2H, d), 8,33 (1H, s).
1-(((2R,4R)-4-((4-bromo-2-metMfenoxi)metN)-2-(2,4-difluorofenM)tetrahidrofuran-2-M)metM)-1H-1,2,4-triazol
Figure imgf000022_0002
A una solución de 4-bromo-2-metilfenol (Xa) (920 mg, 4,89 mmol) en DMSO (10 mL) se añadió hidróxido de sodio ac. (0,39 mL, 12,5 M, 4,89 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 10 min y a continuación se trató con el tosilato (Xla) (2,00 g, 4,45 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 72 h y a continuación se enfrió a TA y se repartió entre agua (25 mL) y EtOAc (20 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 25 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 15 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2,12 g, 0-30 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (Villa), como un aceite incoloro (1,84 g, 86 %); tR 2,78 min (Método a); m/z 464 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,09 (3H, s), 2,17 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,60 (1H, m), 3,72-3,78 (2H, m), 3,82 (1H, dd), 4,00-4,06 (1H, m), 4,57 (2H, dd), 6,82 (1H, d), 7,00 (1H, td), 7,25-7,34 (4H, m), 7,76 (1H, s), 8,34 (1H, s).
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)benzoato de etilo
Figure imgf000023_0001
Un vial cargado con 4-(piperazin-1-il)benzoato de etilo (XlVa) (103 mg, 0,44 mmol), producto intermedio (VlIIa) (170 mg, 0,37 mmol), RuPhos (8,5 mg, 18 |jmol), RuPhos G3 (14,2 mg, 18 |jmol) y carbonato de cesio (191 mg, 0,59 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (3,0 mL). La mezcla se calentó a 80 °C durante 18 h y a continuación a 100 °C durante 24 h. La mezcla de reacción se enfrió a TA y se repartió entre agua (10 mL) y EtOAc (10 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la capa ac. se extrajo por EtOAc (3 x 10 mL). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 10 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 12 g, 0-100 % de EtOAc en isohexano, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IVb), como un sólido blanco (100 mg, 43 %).
3-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofenM)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-6-bromo-2-metilpiridina
Figure imgf000023_0002
A una solución de 6-bromo-2-metilpiridin-3-ol (Xd) (1,00 g, 5,32 mmol) en DMSO (17 mL) se añadió hidróxido de sodio ac. (2,80 mL, 2,0 M, 5,32 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 10 min y a continuación se trató poco a poco con el tosilato (Xla) (2,17 g, 4,84 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 65 °C durante 18 h, se enfrió a TA y se añadió agua (30 mL). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL) y los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 30 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite amarillo. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 40 g, 0-100 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (VlIIb), como un sólido blanco (1,50 g, 64 %); tR 2,28 min (Método a); m/z 465/467 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,17 (1H, dd), 2,29 (3H, s), 2,38­ 2,44 (1H, m), 2,54-2,62 (1H, m), 3,74-3,88 (3H, m), 4,03 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 7,00 (1H, td), 7,25-7,35 (3H, m), 7,39 (1H, dd), 7,76 (1H, s), 8,34 (1H, s).
4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofenM)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-6-metNpiridm-2-il)piperazina-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000023_0003
Un matraz cargado con piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (IXa) (550 mg, 2,93 mmol), producto intermedio (VlIIb) (1,50 g, 3,22 mmol), RuPhos (68,0 mg, 0,147 mmol), RuPhos G3 (123 mg, 0,147 mmol) y carbonato de cesio (1,53 g, 4,69 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (15 mL). La mezcla se calentó a 80 °C durante 18 h, a continuación se enfrió a TA y se repartió entre agua (100 mL) y EtOAc (100 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (3 x 50 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite amarillo. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 80 g, 0-100 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (VIIb), como una espuma blanca (1,38 g, 77 %); tR 2,14 min (Método a); m/z 571 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 1,41 (9H, s), 2,15 (1H, dd), 2,21 (3H, s), 2,36-2,42 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,29-3,33 (4H, m), 3,39-3,41 (4H, m), 3,67 (1H, dd), 3,75 (2H, dd), 4,04 (1H, dd), 4,57 (2H, dd), 6,60 (1H, d), 7,00 (1H, td), 7,18 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76 (1H, s), 8,34 (1H, s).
1-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofenM)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-6-metNpiridm-2-il)piperazina
Figure imgf000024_0001
Una solución de producto intermedio (VIIb) en DCM (10 mL) se trató con TFA (2,62 mL, 34,0 mmol) y se agitó a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar un aceite marrón, que se repartió entre EtOAc (50 mL) y NaHCO3 ac. 1 M (20 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (20 mL) y a continuación se secó y evaporó al vacío para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (Vb), como una espuma marrón (858 mg, 76 %); tR 1,26 min (Método a); m/z 471 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,14 (1H, dd), 2,21 (3H, s), 2,36-2,42 (1H, m), 2,53-2,57 (1H, m), 2,80-2,85 (4H, m), 3,26-3,31 (4H, m), 3,66 (1H, dd), 3,71-3,77 (2H, dd), 4,04 (1H, t), 4,57 (2H, dd), 6,56 (1H, d), 7,00 (1H, td), 7,17 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76 (1H, s), 8,34 (1H, s). 4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-6-metNpiridm-2-il)piperazin-1-il)benzoato de metilo
Figure imgf000024_0002
Un matraz cargado con producto intermedio (Vb) (860 mg, 1,82 mmol), metil-4-bromobenzoato (Vía) (470 mg, 2,19 mmol), RuPhos (17,0 mg, 0,0360 mmol, 2 % molar), RuPhosG3 (28,0 mg, 0,0360 mmol, 2 % molar) y carbonato de cesio (950 mg, 2,92 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (6,0 mL). La mezcla se calentó a 80 °C durante 18 h, a continuación se enfrió a TA y se repartió entre EtOAc (50 mL) y agua (50 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 50 mL) y a continuación se secó y evaporó al vacío para proporcionar un sólido beis. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 24 g, 0-100 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IVd), como un sólido amarillo (690 mg, 61 %); tR 2,21 min (Método a); m/z 605 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,15 (1H, dd), 2,23 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 3,47-3,50 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,78 (5H, m), 4,04 (1H, dd), 4,57 (2H, dd), 6,66 (1H, d), 6,97-7,04 (3H, td), 7,21 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76 (1H, s), 7,81 (2H, d), 8,34 (1H, s).
Ácido 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-N)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)benzoico
Hidrólisis del éster metílico (IVa)
Figure imgf000025_0001
A una suspensión de producto intermedio (IVa) (9,00 g, 14,9 mmol) en DMSO (370 mL) se añadió una solución de hidróxido de litio (1,79 g, 74,5 mmol) en agua (37,0 mL). La mezcla se calentó a 70 °C durante 22 h y a continuación se enfrió a TA, se diluyó con agua (1000 mL) y se acidificó (a ~ pH 2) mediante la adición de ácido clorhídrico ac. 1 M (80 mL). La mezcla se enfrió en un baño de hielo durante 2 h y el precipitado resultante se recogió mediante filtración. La torta del filtro se lavó con agua (3 x 80 mL) y se secó al vacío a 50 °C para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IIa), como un sólido blanco (4,66 g, 54 %); tR 2,21 min (Método 1a); m/z 590 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,12-3,14 (4H, m), 3,42-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br d), 6,97-7,03 (3H, m), 7,25-7,34 (2H, m), 7,77-7,80 (3H, m), 8,34 (1H, s) y 12,31 (1H, s).
Hidrólisis del éster etílico (IVb)
A una suspensión de producto intermedio (IVb) (16,4 g, 26,6 mmol) en DMSO (375 mL) se añadió una solución de hidróxido de litio (3,18 g, 74,5 mmol) en agua (50 mL). La mezcla se calentó a 70 °C durante 22 h y a continuación se enfrió a TA, se vertió en agua (500 mL) y se acidificó (a ~ pH 5-6) mediante la adición de ácido clorhídrico 2 M (70 mL). La mezcla se agitó a TA durante 30 min y el sólido resultante se recogió mediante filtración y se lavó con agua (2 x 20 mL) y con dietil éter (3 x 30 mL) y a continuación se secó al vacío a 40 °C durante 18 h para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IIa), como un sólido tostado (14,2 g, 84 %); tR 2,26 min (Método 1a); m/z 590 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,09 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,12-3,14 (4H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 6,97­ 7,03 (3H, m), 7,26-7,34 (2H, m), 7,77-7,80 (3H, m), 8,34 (1H, s), 12,31 (1H, brs).
Ácido 4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-N)metoxi)-3-cianofenil)piperazin-1 -il)benzoico
Figure imgf000025_0002
A una suspensión de producto intermedio (IVc) (100 mg, 0,163 mmol) en DMSO (8,0 mL) se añadió una solución de hidróxido de litio (19 mg, 0,81 mmol) en agua (1,0 mL). La mezcla se calentó a 50 °C durante 18 h, a continuación se enfrió a TA, se diluyó con agua (10 mL) y se acidificó (a ~ pH 3) mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (2,0 mL). La mezcla se extrajo con DCM/EtOAc 4:1 (2 x 25 mL) y los orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 10 mL) y se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un sólido blanco que se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IIb), como un sólido blanco (74 mg, 75 %); tR 2,32 min (Método a); m/z 601 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,18 (1H, dd), 2,40-2,46 (1H, m), 2,58-2,64 (1H, m), 3,21-3,24 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,78-3,96 (3H, m), 4,04 (1H, dd), 4,59 (2H, dd), 6,98 (1H, td), 7,03 (2H, d), 7,11 (1H, d), 7,25-7,35 (4H, m), 7,74 (1H, s), 7,79 (2H, d), 8,34 (1H, s), 12,30 (1H, brs).
Ácido 4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-N)metN)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-N)metoxi)-6-metilpiridin-2-il)piperazin-1-il)benzoico
Figure imgf000026_0001
A una suspensión de producto intermedio (IVd) (690 mg, 1,14 mmol) en DMSO (54 mL) se añadió una solución de hidróxido de litio (140 mg, 5,71 mmol) en agua (9,0 mL). La mezcla se calentó a 70 °C durante 22 h y a continuación se enfrió a TA, se diluyó con agua (100 mL) y se acidificó (a ~ pH 2) mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (6,0 mL). La mezcla se enfrió en un baño de hielo durante 15 min y el precipitado resultante se recogió mediante filtración, se lavó con agua (3 x 50 mL) y se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (IIc), como un sólido amarillo (617 mg, 87 %); tR 1,91 min (Método a); m/z 591 (M+H)+ (ES+); r Mn 1H 8: 2,15 (1H, dd), 2,23 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,39-3,42 (4H, m), 3,47-3,50 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,78 (2H, m), 4,04 (1H, dd), 4,57 (2H, dd), 6,66 (1H, d), 6,97-7,02 (3H, td), 7,21 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76­ 7,80 (3H, m), 8,34 (1H, s), 12,31 (1H, br).
4-bromo-W-(4-fluorofeml)benzamida
Figure imgf000026_0002
A una solución de 4-fluoroanilina (Illa) (0,85 mL, 9,00 mmol), trietilamina (1,88 mL, 13,5 mmol) y DMAP (0,11 g, 0,90 mmol) en THF (15 mL) se añadió cloruro de 4-bromobenzoilo (XlXa) (2,37 g, 10,8 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo a TA durante 1 h y a continuación se repartió entre EtOAc (100 mL) y ácido clorhídrico 1 M (100 mL). La fase orgánica se separó y lavó secuencialmente con ácido clorhídrico 1 M (100 mL), NaHCO3 ac. sat. (100 mL) y salmuera (100 mL) y a continuación se secó y evaporó al vacío. El residuo bruto se trituró de DCM caliente (100 mL) y la mezcla se calentó a reflujo para proporcionar una suspensión blanca que se permitió que enfriara a TA. El precipitado resultante se recogió mediante filtración para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVIIIa), como un sólido blanco (1,81 g, 65 %); tR 2,23 min; m/z 294/296 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 7,20 (2H, t), 7,74­ 7,79 (4H, m), 7,90 (2H, d) y 10,36 (1H, s).
4-(4-((4-fluorofenil)carbamoil)fenil)piperazina-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000026_0003
Un matraz cargado con piperazina-1-carboxilato de tere-butilo (IXa) (4,00 g, 215 mmol), producto intermedio (XVIIIa) (6,63 g, 22,6 mmol), RuPhos (100 mg, 0,215 mmol) y RuPhos g 3 (180 mg, 0,215 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces. Se añadió una solución de LiHMDS (1 M en THF, 75,0 mL, 75,0 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 5 h. Después de enfriar a TA, la mezcla se repartió entre EtOAc (150 mL) y ácido clorhídrico 1 M (150 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la fase ac. se extrajo con EtOAc (3 x 150 mL). Los orgánicos combinados se secaron y concentraron al vacío para proporcionar un sólido marrón que se trituró en una mezcla de isohexanos y dietil éter (1:1, 100 mL). El producto así obtenido se recogió mediante filtración, se lavó con una mezcla de isohexanos y dietil éter (1:1, 25 mL) y a continuación se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVIIa), como un sólido tostado (6,44 g, 85 %); 4R 2,40 min (Método a); m/z 400 (M+H)+; RMN 1H 8: 1,43 (9H, s), 3,27-3,30 (4H, m), 3,45-3,48 (4H, m), 7,03 (2H, d), 7,14-7,18 (2H, m), 7,74-7,79 (2H, m), 7,88 (2H, d), 9,99 (1H, s).
W-(4-fluorofeml)-4-(piperazm-1-M)benzamida
Figure imgf000027_0001
A una solución de producto intermedio (XVIIa) (6,44 g, 16,1 mmol) en DCM (200 mL), se añadió TFA (24,7 mL, 322 mmol). La reacción se agitó a TA durante 2 h y a continuación se evaporó al vacío. Se añadió tolueno (5,0 mL) y la mezcla se evaporó de nuevo al vacío. El aceite resultante se recogió en una mezcla de DCM (90 mL) y metanol (10 mL) y a continuación se extrajo con una mezcla de agua (50 mL) y NaHCO3 ac. sat. (50 mL). Se separó y retuvo la fase orgánica y la capa ac. se extrajo con una mezcla de DCM y metanol (9:1, 3 x 100 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron y concentraron al vacío para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVIa), como un sólido marrón (3,74 g, 70 %); tR 1,02 min (Método a); m/z 300 (M+H)+; RMN 1H 8: 2,81-2,83 (4H, m), 3,18­ 3,20 (4H, m), 6,99 (2H, d), 7,14-7,18 (2H, m), 7,74-7,80 (2H, m), 7,85 (2H, d), 9,99 (1H, s).
W-(4-fluorofeml)-4-(4-(4-metox¡-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)benzam¡da
Figure imgf000027_0002
Un matraz cargado con 4-bromo-1-metoxi-2-metilbenceno (Xe) (406 mg, 2,02 mmol), producto intermedio (XVIa) (550 mg, 1,84 mmol), RuPhos (43 mg, 0,092 mmol) y RuPhos G3 (77 mg, 0,092 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces. Se añadió una solución de LiHMDS (9,2 mL, 1 M en THF, 9,2 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 8 h. Después de enfriar a TA, la mezcla se enfrió rápidamente mediante la adición de ácido clorhídrico ac. 1 M (9,0 mL) y a continuación se repartió entre agua (15 mL) y EtOAc (15 mL). Se separó y retuvo la capa orgánica y la capa ac. se extrajo con EtOAc (2 x 15 mL). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 mL) y a continuación se secaron y evaporaron al vacío. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 12 g, 0-100 % de EtOAc en isohexano, elución por gradiente) para proporcionar un sólido amarillo. Este material se repurificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 4 g, 0-10 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVa), como un sólido blanquecino (83 mg, 11 %); tR 2,27 min (Método a); m/z 420 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,13 (3H, s), 3,13-3,16 (4H, m), 3,42-3,45 (4H, m), 3,72 (3H, s), 6,77-6,88 (3H, m), 7,08 (2H, d), 7,17 (2H, t), 7,75­ 7,80 (2H, m), 7,89 (2H, d), 10,02 (1H, s).
W-(4-fluorofeml)-4-(4-(4-h¡drox¡-3-met¡lfeml)piperazm-1-¡l)benzam¡da
Figure imgf000027_0003
A una suspensión de producto intermedio (XVa) (83 mg, 0,20 mmol) en DCM (5,0 mL) a 0 °C se añadió una solución de tribromuro de boro (0,59 mL, 1 M en DCM, 0,59 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 min, se permitió que se calentara a TA durante 8 h y a continuación se repartió entre agua (15 mL) y DCM (10 mL). Se separó y retuvo la capa orgánica y la capa ac. se extrajo con una mezcla de DCM y MeOH (90:10, 5 x 15 mL). Los orgánicos combinados se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 4,0 g, 0-3 % de MeOH en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVb), como un sólido beis (61 mg, 72 %); tR 1,73 min (Método a); m/z 406 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 3,08-3,11 (4H, m), 3,41-3,43 (4H, m), 6,67 (2H, brs), 6,77 (1H, brs), 7,07 (2H, d), 7,17 (2H, t), 7,76-7,80 (2H, m), 7,89 (2H, d), 8,73 (1H, s), 10,01 (1H, s).
W-(4-fluorofeml)-4-(4-(4-h¡drox¡-2,5-d¡met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)benzam¡da
Figure imgf000028_0001
Un matraz cargado con 4-bromo-2,5-dimetilfenol (Xf) (73,1 mg, 0,364 mmol), producto intermedio (XVIa) (120 mg, 0,400 mmol), RuPhos (8,48 mg, 0,0180 mmol) y RuPhos G3 (15,2 mg, 0,0180 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces. Se añadió una solución de LiHMDS (1 M en THF, 1,46 mL, 1,46 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 70 °C durante 18 h. Después de enfriar a TA, la mezcla se enfrió rápidamente mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (5,0 mL) y a continuación se basificó con NaOH ac. 2 M (10 mL). La capa ac. se extrajo con EtOAc (3 x 15 mL) y los orgánicos combinados se secaron y evaporaron al vacío. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 24 g, 0-5 % de metanol (1 % de NH3) en DCM, elución por gradiente) para proporcionar un sólido marrón. El sólido se trituró en dietil éter (20 mL) y se recogió mediante filtración, se lavó con dietil éter (10 mL) y se secó a 40 °C al vacío para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XVc), como un sólido blanquecino (72,0 mg, 47 %); tR 2,19 min (Método a); m/z 420 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,07 (3H, s), 2,18 (3H, s), 2,87-2,89 (4H, m), 3,39-3,42 (4H, m), 6,60 (1H, s), 6,80 (1H, s), 7,06 (2H, d), 7,14-7,19 (2H, m), 7,76-7,80 (2H, m), 7,89 (2H, d), 8,81 (1H, s), 10,00 (1H, s).
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-metilfen¡l)p¡perazin-1-¡l)benzam¡da
Figure imgf000028_0002
A una solución de producto intermedio (Ila) (1,00 g, 1,70 mmol), DIPEA (1,78 mL, 10,2 mmol) y cloruro de amonio (0,454 g, 8,48 mmol) en DMF (30 mL) a 0 °C se añadió HATU (1,30 g, 3,39 mmol) poco a poco a lo largo de 2 min. La mezcla de reacción se calentó a TA durante 2 h, a continuación se diluyó con agua (70 mL) y el sólido resultante se recogió mediante filtración. La torta del filtro se lavó con agua (2 x 50 mL) y el sólido se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el compuesto del título, producto intermedio (XXa) como un polvo blanquecino (850 mg, 83 %); tR 2,24 min (Método b); m/z 589 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,09 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,51-2,57 (1H, m), 3,11-3,14 (4H, m), 3,36-3,39 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,04 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,85 (1H, br s), 6,97-7,04 (4H, br s), 7,26-7,34 (2H, m), 7,72 (1H, br), 7,77 (3H, t), 8,34 (1H, s).
Preparac¡ón de Ejemplos de compuestos de la ¡nvenc¡ón
Ejemplo 1: 4-(4-(4(((3R,5R)-5((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
1. A partir de Producto intermedio (Ila)
Figure imgf000029_0001
A una suspensión de producto intermedio (IIa) (2,50 g, 4,24 mmol), EDCI (1,63 g, 8,48 mmol) y DMAP (30 mg, 0,21 mmol) en piridina (30 mL) se añadió 4-fluoroanilina (0,41 mL, 4,3 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 60 °C durante 2 h y a continuación se enfrió a TA. La dilución de la mezcla con agua (60 mL) y agitación durante 5 min produjo un sólido, que se recogió mediante filtración y a continuación se lavó con agua (3 x 10 mL) y con dietil éter (2 x 15 mL) para proporcionar un polvo de color tostado. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 40 g, 0-3 % de MeOH en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 1, como un sólido amarillo (2,47 g, 85 %); tR 2,60 min (Método a); m/z 683 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,15 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 6,99 (1H, td), 7,08 (2H, d), 7,16 (2H, t), 7,25-7,35 (2H, m), 7,76-7,80 (3H), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H) y 10,00 (1H, s).
2. A partir de Producto intermedio (XVb)
Figure imgf000029_0002
A una solución de producto intermedio (XVb) (19 mg, 0,047 mmol) en DMSO (1,5 mL) se añadió hidróxido de sodio ac. (1 M, 98 |j L, 0,098 mmol). La mezcla se agitó a TA durante 10 min y a continuación se trató con una solución de tosilato (Xla) (ej. APIChem, número de catálogo: AC-8330, 12,4 mg, 27,6 mmol) en DMSO (0,5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 2 h, se enfrió a TA y se añadió agua (10 mL). La mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL) y los extractos orgánicos combinados se secaron y evaporaron al vacío para proporcionar un aceite marrón. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 4 g, 0-2 % de MeOH en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el sólido beis (23 mg). El producto se repurificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 4,0 g, 0-50 % de EtOAc en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 1, como un sólido blanquecino (14 mg, 42 %); tR 2,60 min (Método a); m/z 683 (M+H)+ (ES+).
Ejemplo 2: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metilfeml)piperazm-1-M)-N-(2,4-difluorofeml)benzamida
Figure imgf000029_0003
A una suspensión de producto intermedio (lla) (74,0 mg, 0,125 mmol) en DCM (1,0 mL) se añadió 1-cloro-W,W,2-trimetilprop-1-en-1-amina (50,0 j L, 1,88 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 18 h y a continuación se evaporó al vacío. El sólido de color tostado resultante se disolvió en DCM (1,0 mL) y se añadió a una solución de 2,4-difluoroanilina (19,0 j L, 0,188 mmol) en piridina (0,5 mL). La reacción se agitó a TA durante 3 h, a continuación se diluyó con DCM (3,0 mL) y se acidificó a pH 2 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (6,0 mL). La mezcla se pasó a través de un separador de fases y los orgánicos se evaporaron al vacío. El producto bruto así obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SiO2, 12 g, 50-100 % de EtOAc en isohexano, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 2, como un sólido blanquecino (59,0 mg, 66 %); tR 2,53 min (Método a); m/z 701 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,42-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,80 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,06-7,12 (3H, m), 7,25-7,36 (3H, m), 7,56 (1H, td), 7,77 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H), 9,81 (1H, s).
Ejemplo 3: 4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡r¡dm-2-¡l)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
Figure imgf000030_0001
A una suspensión de producto intermedio (IIc) (100 mg, 0,169 mmol), EDCI (64,9 mg, 0,339 mmol) y DMAP (1,03 mg, 8,47 jmol) en piridina (900 j L) se añadió 4-fluoroanilina (17,6 j L, 0,186 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 18 h y a continuación se vertió en agua (50 mL). El sólido resultante se recogió mediante filtración y se lavó con agua (10 mL) y con dietil éter (10 mL) y se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 3, como un polvo blanquecino (94,0 mg, 80 %); tR 2,25 min (Método a); m/z 684 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,16 (1H, dd), 2,24 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,39-3,42 (4H, m), 3,49-3,51 (4H, m), 3,69 (1H, dd), 3,74-3,78 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,67 (1H, d), 7,00 (1H, td), 7,07 (2H, d), 7,13-7,22 (3H, m), 7,25-7,34 (2H, m), 7,76-7,79 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,00 (1H, s).
Ejemplo 4: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-c¡anofeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
Figure imgf000030_0002
A una suspensión de producto intermedio (IIb) (72,0 mg, 0,120 mmol), EDCI (45,1 mg, 0,235 mmol) y DMAP (1,00 mg, 8,19 jmol) en piridina (1,0 mL) se añadió 4-fluoroanilina (11,1 j L, 0,118 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 72 h. La mezcla se diluyó con agua (30 mL) y se agitó durante 5 min. El sólido así formado se recogió mediante filtración y se purificó mediante cromatografía en columna de desorción súbita (SO2, 4 g, 0-10 % de MeOH en DCM, elución por gradiente) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 4, como un sólido blanco (36,8 mg, 44 %); tR 2,59 min (Método a); 694 m/z (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,18 (1H, dd), 2,40-2,46 (1H, m), 2,56-2,64 (1H, m), 3,23­ 3,26 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,78-3,96 (3H, m) ,4,04(1H, dd), 4,59 (2H, dd), 6,98 (1H, td), 7,08-7,19 (5H, m), 7.25­ 7.37 (4H, m), 7.74-7.80 (3H, m), 7.89 (2H, d), 8.34 (1H, s), 10.03 (1H, s).
Ejemplo 5: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-2,5-d¡met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
Figure imgf000031_0001
A una solución de producto intermedio (XVc) (70,0 mg, 0,167 mmol) en DMSO (1,0 mL) a 30 °C se añadió NaOH ac. (20,0 |jL, 12,5 M, 0,250 mmol). Después de 30 min, se añadió el tosilato (Xla) (83,0 mg, 0,184 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 18 h, a continuación se enfrió a TA y se vertió en agua (15 mL). El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se lavó con agua (20 mL) para proporcionar un sólido blanco. El producto bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Método 2) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 5, como un sólido blanco (34,0 mg, 29 %); tR 2,89 min (Método a); m/z 697 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,07 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,25 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, s), 2,53-2,57 (1H, m), 2,89-2,92 (4H, m), 3,41-3,44 (4H, m), 3,69 (1H, dd), 3,74-3,81 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,71 (1H, s), 6,88 (1H, s), 7,00 (1H, td), 7,07 (2H, d), 7,16 (2H, t), 7,26-7,35 (2H, m), 7,76-7,80 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,35 (1H, s), 10,00 (1H, s).
Ejemplo 6: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tN azoM-il)metil)-5-(2,4-dmuorofeml)tetramdrofuran-3-il)metoxi)-3-metMfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da
Figure imgf000031_0002
A una suspensión de producto intermedio (Ila) (100 mg, 0,17 mmol), EDCI (65 mg, 0,34 mmol) y DMAP (1,04 mg, 8,48 jmol) en piridina (1,40 mL) se añadió 5-fluoropiridin-2-amina (23,9 mg, 0,25 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 15 h. La mezcla se diluyó con dCm (8,0 mL) y se acidificó mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M (2,0 mL). La mezcla se pasó a continuación a través de un separador de fases y los orgánicos se evaporaron al vacío. El producto bruto se purificó mediante CLAR preparativa (Método 2) para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 6, como un sólido blanco (41,0 mg, 34 %); tR 2,51 min (Método a); m/z 684 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,69 (1H, dd), 3,74­ 3,80 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,05 (2H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,74-7,79 (2H, m), 7,97 (2H, d), 8,20 (1H, dd), 8,34 (1H, s), 8,37 (1H, d), 10,56 (1H, s).
Ejemplo 7: 4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tNazol-1-M)metM)-5-(2,4-difluorofeml)tetrahidrofuran-3-M)metoxi)-3-metMfeml)p¡perazm-1-M)-W-(5-c¡anop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da
Figure imgf000031_0003
Un vial cargado con producto intermedio (XXa) (100 mg, 0,170 mmol), 6-bromonicotinonitrilo (31,1 mg, 0,170 mmol), Xantphos (4,91 mg, 8,49 jmol, 5 % molar), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(0) (3,89 mg, 4,25 jmol, 2,5 % molar) y carbonato de cesio (166 mg, 0,510 mmol) se evacuó y rellenó con nitrógeno tres veces antes de añadir DMF (1,0 mL). La reacción se calentó a 100 °C durante 18 h, a continuación se enfrió a TA y se repartió entre DCM (15 mL) y salmuera (20 mL). Se separaron las fases y la capa orgánica se secó y concentró al vacío para proporcionar un residuo oleoso que se trituró en metanol (6,0 mL). El sólido resultante se aisló mediante filtración, se lavó con dietil éter (10 mL) y se secó al vacío a 40 °C para proporcionar el sólido bruto. La etapa de trituración se repitió con metanol (3,0 mL) y se secó al vacío para proporcionar el compuesto del título, Ejemplo 7, como un polvo blanquecino (71,5 mg, 59 %); 4R 2,71 min (Método b); m/z 691 (M+H)+ (ES+); RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,15 (4H, m), 3,45-3,47 (4H, m), 3,69 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,05 (2H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,74-7,77 (2H, m), 7,99 (2H, d), 8,05 (1H, dd), 8,34 (1H, s), 8,48 (1H, dd), 10,92 (1H).
Los ejemplos de compuestos siguientes (Tabla 2) se pueden preparar mediante métodos sintéticos similares a los ejemplos antes mencionados o mediante métodos descritos en otra parte en esta invención:
Tabla 2: Ejemplos de compuestos de la invención adicionales
N.° de ejemplo, Estructura, Nombre, Método de purificación y Datos analíticos y espectrales
Figure imgf000033_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3-danofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante tnturadón de éter/DCM;
‘R 2,53 m¡n (Método a); m/z 690 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,01 (1H, td), 7,10 (2H, d), 7,26-7,34 (2H, m), 7,51-7,58 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,91 (2H, d), 8,05 (1H, td), 8,26-8,27 (1H, m), 8,35 (1H, s), 10,27 (1H, s).________________________________________________________________________________________
Figure imgf000033_0002
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-danofen¡l)benzam¡da
CLa R prep. Método 2;
‘R 2,53 m¡n (Método a); m/z 690 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,25-7,35 (4H, m), 7,77-7,80 (3H, m), 7,91 (2H, m), 7,97-8,01 (2H, m), 8,34 (1H, s), 10,34 (1H, s).
Figure imgf000033_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-dorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-danofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,79 m¡n (Método a); m/z 710 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,18 (1H, dd), 2,39-2,45 (1H, m), 2,53-2,61 (1H, m), 3,20-3,23 (4H, m), 3,45- 3,48 (4H, m), 3,75-3,89 (3H, m), 4,05 (1H, dd), 4,59 (2H, dd), 6,93-7,03 (3H, m), 7,08-7,12 (3H, m), 7,26-7,33 (2H, m), 7,77-7,82 (3H, m), 7,92 (2H, d), 7,98-8,02 (2H, m), 8,34 (1H, s), 10,35 (1H, s).
Figure imgf000034_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3,5-d¡met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡anofeml)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,70 m¡n (Método a); m/z 704 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,09-2,15 (7H, m), 2,40-2,46 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,17-3,20 (4H, m), 3,41-3,45 (5H, m), 3,55 (1H, dd), 3,84 (1H, dd), 4,09 (1H, t), 4,58 (2H, brs), 6,65 (2H, br s), 7,01 (1H, td), 7,10 (2H, d), 7,26-7,34 (2H, m), 7,77-7,81 (3H, m), 7,91 (2H, d), 7,99 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,35 (1H, s).
Figure imgf000034_0002
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-d¡fluorometox¡fen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,59 m¡n (Método a); m/z 731 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,59 (1H, m), 3,12-3,18 (4H, m), 3,40-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,75-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,08 (2H, d), 7,15 (2H, d), 7,25-7,35 (3H, m), 7,77-7,81 (3H, m), 7,90 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,03 (1H, s).
Figure imgf000034_0003
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(tr¡fluorometox¡)fen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,83 m¡n (Método a); m/z 749 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,14-3,16 (4H, m), 3,42-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,25-7,35 (4H, m), 7,77 (1H, s), 7,87-7,91 (4H, m), 8,34 (1H, s), 10,13 (1H, s).
N.° de ejemplo, Estructura, Nombre, Método de purificación y Datos analíticos y espectrales
Figure imgf000035_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 50-100 % de EtOAc en /so-hexano, eluc¡ón por grad¡ente); ‘R 2,60 m¡n (Método a); m/z 683 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86-6,91 (2H, br m), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,25-7,39 (3H, m), 7,54-7,57 (1H, m), 7,74-7,78 (2H, m), 7,90 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,12 (1H, s).______________
Figure imgf000035_0002
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3,5-d¡met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡en‘e);
‘R 2,71 m¡n (Método a); m/z 697 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,13 (1H, dd), 2,15 (6H, s), 2,40-2,46 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,17-3,20 (4H, m), 3,40-3,46 (5H, m), 3,56 (1H, dd), 3,84 (1H, t), 4,09 (1H, t), 4,55-4,62 (2H, m), 6,66 (2H, s), 7,01 (1H, td), 7,08 (2H, d), 7,17 (2H, t), 7,26-7,34 (2H, m), 7,76-7,80 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,02 (1H, s).________________________________________
Figure imgf000035_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-h¡drox¡met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,21 m¡n (Método a); m/z 699 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,16 (1H, dd), 2,36-2,42 (1H, m), 2,51-2,57 (1H, m), 3,15-3,17 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,73-3,80 (2H, m), 4,03 (1H, dd), 4,45 (2H, d), 4,58 (2H, d), 4,99 (1H, t), 6,77-6,83 (2H, m), 7,00 (1H, td), 7,07-7,10 (3H, m), 7,15-7,19 (2H, m), 7,26-7,33 (2H, m), 7,76-7,76 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,35 (1H, s), 10,02 (1H, s)._________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000036_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
CLAR prep. Método 2;
‘R 2,67 min (Método a); m/z 687 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,14 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,20-3,22 (4H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 3,71-3,84 (3H, m), 4,02 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,73 (1H, dd), 6,92-7,02 (3H, m), 7,09 (2H, d), 7,17 (2H, t), 7,25-7,32 (2H, m), 7,76­ 7,80 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,02 (1H, s).___________________________________________________
Figure imgf000036_0002
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-dorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡en‘e);
‘R 2,80 m¡n (Método a); m/z 703 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,17 (1H, dd), 2,38-2,44 (1H, m), 2,53-2,60 (1H, m), 3,19-3,22 (4H, m), 3,42-3,44 (4H, m), 3,74-3,88 (3H, m), 4,04 (1H, dd), 4,59 (2H, dd), 6,92-7,02 (3H, m), 7,07-7,09 (3H, m), 7,14-7,19 (2H, m), 7,25-7,32 (2H, m), 7,76-7,80 (3H, m), 7,89 (2H, d), 8,33 (1H, s), 10,01 (1H, s)._______________________________________________________
Figure imgf000036_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-sulfamo¡lfeml)benzam¡da
CLa R prep. Método 3;
‘R 2,19 m¡n (Método a); m/z 744 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,14-3,16 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,80 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,24-7,35 (4H, m), 7,76-7,79 (3H, m), 7,91-7,96 (4H, m), 8,34 (1H, s), 10,25 (1H, s).___________________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000037_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-sulfamo¡lfen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 50-100 % de EtOAc en ¡sohexano, a cont¡nuac¡ón 5-10 % de MeOH (1 % de NH3) en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
RMN 1H 8: 2,15 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,20-3,22 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,72-3,78 (2H, m), 3,83 (1H, dd), 4,03 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,73 (1H, br d), 6,91-7,02 (3H, m), 7,10 (2H, d), 7,24-7,32 (4H, m), 7,76 (1H, s), 7,78 (2H, d), 7,91-7,96 (4H, m), 8,33 (1H, s), 10,25 (1H, s).________________________________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000038_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡ano-2-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,61 m¡n (Método a); m/z 708 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,15 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,26-7,34 (2H, m), 7,70 (1H, dd), 7,77 (1H, s), 7,89-7,98 (4H, m), 8,35 (1H, s), 10,10 (1H, s).____________________
Figure imgf000038_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1 W-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡ano-2-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 50-100 % de EtOAc en ¡sohexano, eluc¡ón por grad¡en‘e); ‘R 2,69 m¡n (Método a); m/z 712 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,14 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,57 (1H, m), 3,20-3,22 (4H, m), 3,44-3,47(4H, m), 3,72-3,84 (3H, m), 4,03 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,73 (1H, dd), 6,91-7,02 (3H, m), 7,09 (2H, d), 7,25-7,32 (2H, m), 7,70 (1H, dd), 7,76 (1H, s), 7,89-7,98 (4H, m), 8,33 (1H, s), 10,08 (1H, s).___________________________________________________
Figure imgf000038_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(d¡fluorometox¡)-3-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-4 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,51 m¡n (Método a); m/z 749 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,12-3,18 (4H, m), 3,41-3,47 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,78 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 6,97-7,02 (1H, m), 7,09 (2H, d), 7,17-7,35 (4H, m), 7,58 (1H, d), 7,77 (1H, s), 7,89-7,94 (3H, m), 8,34 (1H, s), 10,18 (1H, s)._____________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000039_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(2,5-d¡fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-3 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,67 m¡n (Método a); m/z 701 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,12 (3H, s), 2,17 (1H, dd), 2,38-2,43 (1H, m), 2,54-2,60 (1H, m), 3,25-3,43 (4H, m), 3,53-3,62 (4H, m), 3,71-3,83 (3H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,86 (1H, br s), 6,98-7,12 (5H, m), 7,27-7,37 (4H, m), 7,56-7,61 (1H, m), 7,79 (1H, s), 7,91 (2H, d), 8,37 (1H, s), 9,93 (1H, s)._________________________________________________
Figure imgf000039_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(3,4-d¡fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡en‘e);
‘R 2,65 m¡n (Método a); m/z 701 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,45(4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,08 (2H, d),
Figure imgf000039_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3,5-d¡fluorofen¡l)benzam¡da
CLa R prep. Método 1;
‘R 2,73 m¡n (Método a); m/z 701 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, m), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 6,90 (1H tt), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,25-7,35 (2H, m), 7,55-7,58 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 10,26 (1H, s)._______________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000040_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-doro-2-fluorofen¡l)benzam¡da
CLAR prep. Método 1;
‘R 2,74 min (Método a); m/z 717 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,07 (2H, d), 7,25-7,35 (3H, m), 7,51 (1H, dd), 7,63 (1H, t), 7,77 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 9,87 (1H, s).________________
Figure imgf000040_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-doro-3-fluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante prec¡p¡tac¡ón con agua, f¡ltrac¡ón y lavado con agua;
‘R 2,80 m¡n (Método a); m/z 717 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,25-7,35 (2H, m), 7,53 (1H, t), 7,61 (1H, dd), 7,77 (1H, s), 7,89 (2H, d), 7,97 (1H, dd), 8,34 (1H, s), 10,23 (1H, s).
Figure imgf000040_0003
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(2,4,6-trifluorofen¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 50-100 % de EtOAc en ¡sohexano, eluc¡ón por grad¡ente); ‘R 2,48 m¡n (Método a); m/z 719 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 2,92 (2H, t), 3,13-3,16 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,09 (2H, d), 7,26-7,34 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,34 (1H, s), 9,79 (1H, s)._______________________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000041_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-il)-N-(4-fluorofenil)-3-metilbenzamida
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-4 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,58 m¡n (Método a); m/z 697 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,17 (1H, dd), 2,35 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,05-3,07 (4H, m), 3,17-3,19 (4H, m), 3,69 (1H, dd), 3,75-3,80 (2H, m), 4,06 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,14-7,20 (3H, m), 7,25-7,35 (2H, m), 7,76-7,80 (5H, m), 8,34 (1H, s), 10,12 (1H, s).___________________________
Figure imgf000041_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)-2-met¡lbenzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡en‘e);
‘R 2,57 m¡n (Método a); m/z 697 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (4H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,15 (4H, m), 3,34-3,37 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,85-6,90 (3H, m), 7,00 (1H, td), 7,13-7,17 (2H, m), 7,25-7,35 (2H, m), 7,40 (1H, d), 7,72-7,77 (3H, m), 8,34 (1H, s), 10,09 (1H, s).____________________________
Figure imgf000041_0003
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)-3-metox¡benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 50-100 % de EtOAc en ¡sohexano, eluc¡ón por grad¡ente); ‘R 2,43 m¡n (Método a); m/z 713 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,56 (1H, m), 3,14-3,22 (8H, m), 3,68 (1H, dd), 3,75­ 3,80 (2H, m), 3,89 (3H, s), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, brs), 6,85 (1H, brs), 6,97-7,03 (2H, m), 7,19 (2H, t), 7,25-7,35 (2H, m), 7,51 (1H, d), 7,59 (1H, dd), 7,75-7,79 (3H, m), 8,34 (1H, s), 10,10 (1H, s).____________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000042_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-2-metox¡benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-4 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,47 m¡n (Método a); m/z 713 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,16 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 3,99 (3H, s), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,65 (1H, d), 6,69 (1H, dd), 6,76 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 7,00 (1H, td), 7,16 (2H, t), 7,25-7,35 (2H, m), 7,73-7,77 (4H, m), 8,34 (1H, s), 9,88 (1H, s).______________
Figure imgf000042_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(6-c¡anop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante tr¡turac¡ón de MeOH;
‘R 2,75 m¡n (Método a); m/z 691 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,12-3,14 (4H, m), 3,44-3,47 (4H, m), 3,67 (1H, dd), 3,74-3,78 (2H, m), 4,04 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,86 (1H, br s), 6,97-7,06 (3H, m), 7,26-7,34 (2H, m), 7,75-7,77 (2H, m), 7,99 (2H, d), 8,05 (1H, dd), 8,35 (1H, s), 8,48 (1H, dd), 10,94 (1H, s)._________________
Figure imgf000042_0003
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡anop¡r¡dm-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante prec¡p¡tac¡ón de MeOH;
‘R 2,72 m¡n (Método b); m/z 691 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,13-3,15 (4H, m), 3,45-3,47 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,06 (2H, d), 7,25­ 7,34 (2H, m), 7,57 (1H, dd), 7,77 (1H, s), 7,99 (2H, d), 8,34 (1H, s), 8,51 (1H, brs), 8,62 (1H, dd), 10,92 (1H, s).
N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000043_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-h¡drox¡met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-c¡anop¡ridm-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,19 m¡n (Método a); m/z 707 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,14-3,17 (4H, m), 3,47-3,49 (4H, m), 3,67-3,80 (3H, m), 4,04 (1H, dd), 4,45 (2H, d), 4,58 (2H, dd), 4,97 (1H, t), 6,77-6,83 (2H, m), 6,99 (1H, td), 7,05-7,08 (3H, m), 7,25­ 7,33 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,99 (2H, d), 8,27 (1H, dd), 8,34-8,37 (2H, m), 8,84 (1H, dd), 10,99 (1H, s)._____________
Figure imgf000043_0002
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-(tnfluorometox¡)p¡rid¡n-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-100 % de EtOAc en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,82 m¡n (Método a); m/z 750 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 82,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,42 (1H, m), 2,53-2,58 (1H, m), 3,13-3,15 (4H, m), 3,44-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,06 (2H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,77 (1H , s), 7,93 (1H, dd), 7,98 (2H, d), 8,31 (1H, d), 8,34 (1H, s), 8,47 (1H, d), 10,74 (1H, s).
Figure imgf000043_0003
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluoropmd¡n-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,63 m¡n (Método a); m/z 688 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,14 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,53-2,59 (1H, m), 3,19-3,21 (4H, m), 3,43-3,45 (4H, m), 3,72-3,84 (3H, m), 4,03 (1H, dd), 4,58 (2H, d), 6,73 (1H, dd), 6,90-7,02 (3H, m), 7,05 (2H, d), 7,25-7,31 (2H, m), 7,74-7,79 (2H, m), 7,97 (2H, d), 8,21 (1H, dd), 8,33 (1H, s), 8,37 (1H, d), 10,57 (1H, s).________________________________________ N.° d e e je m p lo , E s tru c tu ra , N o m b re , M é to d o d e p u rifica c ió n y D a tos a n a lític o s y e s p e c tra le s
Figure imgf000044_0001
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetraltidrofuran-3-¡l)metox¡)-3-metilfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-clorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,72 m¡n (Método a); m/z 701 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 82,10 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,12-3,15 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,05 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,76 (2H, brs), 6,86 (1H, brs), 7,00 (1H, td), 7,05 (2H, d), 7,26-7,34 (2H, m), 7,77 (1H , s), 7,93 (1H, dd), 7,97 (2H, d), 8,23 (1H, dd), 8,34 (1H, s), 8,42 (1H, dd), 10,66 (1H, s).
Figure imgf000044_0002
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)metil)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetraltidrofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡nd¡n-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-c¡anop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡an‘e cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡en‘e);
‘R 2,18 m¡n (Método a); m/z 692 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,15 (1H, dd), 2,24 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,52-2,57 (1H, m), 3,44-3,50 (8H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74­ 3,78 (2H, m), 4,04 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,67 (1H, d), 6,97-7,06 (3H, m), 7,21 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,99 (2H, d), 8,26 (1H, dd), 8,34-8,36 (2H, m), 8,84 (1H, dd), 10,98 (1H, s).________________________________
Figure imgf000044_0003
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)metil)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetraltidrofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡nd¡n-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da
Pur¡f¡cado med¡ante cromatografía en columna (S¡O2, 0-10 % de MeOH en DCM, eluc¡ón por grad¡ente);
‘R 2,16 m¡n (Método a); m/z 685 (M+H)+ (ES+);
RMN 1H 8: 2,16 (1H, dd), 2,24 (3H, s), 2,37-2,43 (1H, m), 2,54-2,58 (1H, m), 3,41-3,43 (4H, m), 3,48-3,50 (4H, m), 3,68 (1H, dd), 3,74-3,78 (2H, m), 4,04 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,67 (1H, d), 6,97-7,05 (3H, m), 7,21 (1H, d), 7,25-7,34 (2H, m), 7,74-7,79 (2H, m), 7,97 (2H, d), 8,21 (1H, dd), 8,34 (1H, s), 8,37 (1H, d), 10,57 (1H, s)._____________________
Ensayos biológicos: métodos experimentales
Evaluación del crecimiento de hongos planctónicos
a . Ensayo de microtitulación de resazurina
Este ensayo se real¡zó usando un método mod¡f¡cado publ¡cado (Monteiro y col., 2012). Se cult¡varon esporas de Aspergillus fumigatus (NCPF2010, Publ¡c Health England, W¡ltsh¡re) en agar dextrosa Sabouraud durante 3 días. Se preparó una suspens¡ón madre de esporas a partir de un cult¡vo de agar dextrosa Sabouraud lavando con PBS-tween (10 mL; PBS que cont¡ene 0,05 % de Tween-20, 100 U/mL de pen¡c¡l¡na y 100 U/mL de estreptom¡c¡na). El recuento de esporas se evaluó usando un hemocitómetro Neubauer y usando PBS ajustado a 106 esporas/mL. Se preparó una suspensión de trabajo de esporas (104 esporas/mL) en m OpS RPMI-1640 esterilizado con filtro (50 mL; RPMI-1640 que contiene L-glutamina 2 mM, 2 % de glucosa y MOPS 0,165 M, tamponado a pH 7 con NaOH). Se añadió sal sódica de resazurina (100 pL de solución a 1 %; Sigma-Aldrich, Dorset, Reino Unido) a la suspensión de esporas y se mezcló bien. Se añadió la mezcla de suspensión de esporas-resazurina (100 pL/pocillo) a placas de 384 pocillos (n.° de catálogo 353962, BD Falcon, Oxford, Reino Unido).
Simultáneamente, se añadieron los compuestos de ensayo (solución de DMSO de 0,5 pL) a 100 pL de la mezcla de esporas-resazurina por cuadruplicado para proporcionar una solución final de DMSO de 0,5 % usando un Integra VlAFLO 96 de Integra (lntegra, Zizers, Suiza). Para los pocillos de control sin esporas, se añadió solución de MOPS-RPMI-resazurina (100 pL) en lugar de la mezcla de esporas-resazurina. La placa se cubrió con una membrana Breathe Easier (n.° de catálogo Z763624, Sigma-Aldrich, Dorset, Reino Unido) y se incubó (35 °C, 5 % de CO2) hasta que la fluorescencia en los pocillos inoculados fue el doble de la de los pocillos de control (alrededor de 24 h). La fluorescencia de cada pocillo (545 nm (excitación)/590 nm (emisión), ganancia 800, altura focal 5,5 mm) se determinó usando un multiescáner (Clariostar: BMG, Buckinghamshire, Reino Unido). Se calculó el porcentaje de inhibición para cada pocillo y se calcularon los valores CMI50, CMI75 y CMI90 a partir de la curva de concentración-respuesta generada para cada compuesto de ensayo.
b Ensayo de microdilución en caldo
Este ensayo se realizó usando un método modificado publicado por EUCAST (Rodríguez-Tudela y col., 2008). Se cultivaron esporas de Aspergillus fumigatus (NCPF2010, NCPF7010 (mutación 220 de metionina), NCPF7099 (mutación G54 de glicina) de Public Health England, Wiltshire; mutantes TR34/L98H del St Louis Hospital, París, Francia) en agar dextrosa Sabouraud durante 3 días. Se preparó una suspensión madre de esporas a partir de un cultivo de agar dextrosa Sabouraud lavando con PBS-tween (10 mL; PBS que contiene 0,05 % de Tween-20, 100 U/mL de penicilina y 100 U/mL de estreptomicina). El recuento de esporas se evaluó usando un hemocitómetro Neubauer y a continuación se ajustó a 106 esporas/mL con PBS. Se preparó una suspensión de trabajo de esporas (2 x 105 esporas/mL) en BSA MOPS RPMI-1640 (50 mL; RPMI-1640 que contiene L-glutamina 2 mM, 0,5 % de BSA, 2 % de glucosa, MOPS 0,165 M, tamponado a pH 7 con NaOH) esterilizado con filtro. Para el ensayo, primero se añadió BSA MOPS RPMI-1640 (50 pL/pocillo) en toda la placa de 384 pocillos (número de catálogo 353962, BD Falcon, Oxford, Reino Unido). A continuación se añadieron los compuestos de ensayo
(solución de DMSO de 0,5 pL) por cuadruplicado usando un VIAFLO 96 de Integra (Integra, Zizers, Suiza) y se mezclaron bien usando un mezclador de placas. Posteriormente, se añadieron 50 pL de la suspensión de trabajo de esporas preparada anteriormente a todos los pocillos excepto a los pocillos de control sin esporas. Para los pocillos de control sin esporas, se añadió en su lugar solución de BSA MOPS-RPMI (50 pL/pocillo). La placa se cubrió con una tapa de plástico y se incubó (35 °C con aire ambiente) durante 48 h. La DO de cada pocillo a 530 nm se determinó usando un multiescáner (Clariostar: BMG, Buckinghamshire, Reino Unido). Se calculó el porcentaje de inhibición para cada pocillo y se calcularon los valores CMI50, CMI75 y CMI90 a partir de la curva de concentración-respuesta generada para cada compuesto de ensayo.
El cribado del panel de hongos fue realizado por Eurofins Panlabs Inc. Los valores CMI y CMI50 de los artículos de ensayo se determinaron siguiendo las directrices del Clinical and Laboratory Standards Institute, métodos de microdilución en caldo para levaduras (CLSI M27-A2) , (CLSI, 2002) y para hongos filamentosos (CLSI M38-A), (CLSI, 2008).
Infección con Aspergillus fumigatus de células epiteliales bronquiales
Se sembraron células BEAS2B en placas de 96 pocillos (100 pL; 30000 células/pocillo; n.° de catálogo 3596, Sigma Aldrich, Dorset, Reino Unido) en 10 % de FBS r Pm I-1640 y a continuación se incubaron (37 °C, 5 % de CO2) durante un día antes de la experimentación. Se añadieron los compuestos de ensayo (solución de DMSO de 0,5 pL) o vehículo (DMSO) a cada pocillo para proporcionar una concentración final de DMSO de 0,5 %. Las células BEAS2B se incubaron con los compuestos de ensayo durante 1 h (35 °C, 5 % de CO2) antes de la infección con suspensión de conidios (0,5 x 105/ml en 10 % de FBS Rp MI-1640) de Aspergillus fumigatus (20 pL; Public Health England). La placa se incubó durante 24 h (35 °C, 5 % de CO2). El sobrenadante (50 pL) se recogió y se transfirió a una placa de PCR (n.° de catálogo L1402-9700, Starlab, Milton Keynes, Reino Unido), que se congeló (-20 °C) hasta su uso. Después de descongelar, el sobrenadante (5 pL) se diluyó 1:20 añadiendo solución de R7-PBS (95 pL; R7 a PBS 1:4; Bio-Rad Laboratories, Redmond, WA, EE. UU.). Los niveles de GM en estas muestras (50 pL) se midieron usando kits de Platelia GM-EIA (Bio-Rad Laboratories, Redmond, WA, EE. UU.). Se calculó el porcentaje de inhibición para cada pocillo y se calculó el valor CI50 a partir de la curva de concentración-respuesta generada para cada compuesto de ensayo.
Infección con Aspergillus fumigatus de bicapas de alvéolos humanos
Se prepararon modelos in vitro de alvéolos humanos, que consisten en una bicapa de células epiteliales y células endoteliales alveolares humanas, como se describió anteriormente (Hope y col., 2007). Este sistema permite la administración de un compuesto de ensayo a los compartimentos superior (espacio "aire”) y/o inferior (espacio "sistémico”). Esta flexibilidad se ha aprovechado para explorar los efectos de los tratamientos combinados administrando el Ejemplo 1 de compuesto a la cámara superior y posaconazol u otros agentes antifúngicos a la cámara inferior. Se cosecharon células endoteliales de arteria pulmonar humana primarias (HPAEC) y se diluyeron a 106 células/mL en medio EGM-2 (Lonza, Basilea, Suiza). Se invirtieron los transpocillos y se aplicó la suspensión de células (100 pL/pocillo) a la base de cada transpocillo. Los transpocillos invertidos se incubaron a TA dentro de una campana de flujo durante 2 h, después de lo cual se giraron a la posición vertical. Se añadió medio EGM-2 a los compartimientos inferior (700 pL/pocillo) y superior (100 pL/pocillo) y se incubaron los transpocillos durante 48 h (37 °C, 5 % de CO2). El medio EGM-2 del compartimiento inferior se sustituyó a continuación por medio EGM-2 fresco. Las células A549 se cosecharon y diluyeron a 5 x 105 células/mL en 10 % de EBM, a continuación se añadieron al compartimiento superior (100 pL/pocillo) de todos los transpocillos y se incubaron las placas durante 72 h (37 °C, 5 % de CO2). Se cultivaron conidios de Aspergillus fumigatus (la cepa sensible a itraconazol NCPF2010 y la cepa resistente a itraconazol TR34-L98H) por separado en agar dextrosa Sabouraud durante 3 días. Se preparó una suspensión madre de conidios de cualquiera de las cepas a partir de un cultivo de agar dextrosa Sabouraud lavando con PBS-tween (10 mL; PBS que contiene 0,05 % de Tween-20, 100 U/mL de penicilina y 100 U/mL de estreptomicina). El recuento de conidios se evaluó utilizando un hemocitómetro Neubauer y se ajustó a 106 conidios/mL con PBS. Se preparó una solución madre de trabajo de conidios en EBM (conc. de 105 conidios/mL) inmediatamente antes de su uso.
Se añadieron los compuestos de ensayo y de referencia (o DMSO puro como vehículo) a los pocillos apropiados de placas de 24 pocillos (3 pL/pocillo que contenían 600 pL de FBS e Bm a 2 %) para el tratamiento del compartimiento inferior y a placas de 96 pocillos (1 pL/pocillo que contenía 200 pL de FBS EMB a 2 %) para el tratamiento del compartimiento superior, para proporcionar una concentración final de DMSO de 0,5 %. Se aspiró el medio del compartimiento superior y se añadieron los que contenían los compuestos de ensayo y de referencia apropiados, o vehículo, (100 pL/pocillo). Los transpocillos se transfirieron a continuación a la placa de 24 pocillos que contenía los compuestos de ensayo y de referencia o vehículo de DMSO. Después de la incubación durante 1 h (35 °C, 5 % de CO2), se añadió la suspensión de conidios (10 pL/pocillo) al compartimiento superior de cada transpocillo. Las placas se incubaron a continuación durante 24 h (35 °C, 5 % de CO2). Los sobrenadantes de cada compartimiento (5 pL/compartimento) se recogieron y almacenaron (-20 °C). El medio se sustituyó diariamente después de la recogida de los sobrenadantes y se trataron todos los pocillos con los compuestos de ensayo y de referencia o con DMSO, como se describió anteriormente, durante 3 días. Se siguieron recogiendo muestras hasta que el crecimiento fúngico fue visible a simple vista en todos los transpocillos. Los niveles de GM en el sobrenadante del compartimiento inferior se midieron a continuación mediante ELISA (BioRad, CA, EE. UU.) como un índice de la invasión de Aspergillus fumigatus.
Viabilidad celular: ensayo de resazurina
Las células BEAS2B se sembraron en placas de 384 pocillos (100 pL; 3000/pocillo; BD Falcon, n.° de catálogo 353962) en RPMI-LHC8 (medio RPMI-1640 y LHC8 combinado en proporciones iguales) un día antes de la experimentación. Para los pocillos de control exentos de células, se añadió RPMI-LHC8 (100 pL). Se añadieron los compuestos de ensayo (0,5 pL de una solución de DMSO) para proporcionar una concentración final de DMSO de 0,5 % usando un VIAFLO 96 de Integra (Integra, Zizers, Suiza). Se incubaron células BEAS2B con cada compuesto de ensayo durante 1 día (37 °C/5 % de CO2 en RPMI-LHC8). Después de la adición de solución madre de resazurina (5 pL, 0,04 %), las placas se incubaron durante 4 h adicionales (37 °C/5 % de CO2). La fluorescencia de cada pocillo a 545 nm (excitación) y 590 nm (emisión) se determinó usando un multiescáner (Clariostar: BMG Labtech). El porcentaje de pérdida de viabilidad celular se calculó para cada pocillo con respecto al tratamiento con vehículo (0,5 % de DMSO). Cuando procedía, se calculó un valor CC50 a partir de la curva de concentración-respuesta generada a partir de la curva de concentración-respuesta para cada compuesto de ensayo.
Actividad antifúngica in vivo
Se hizo crecer Aspergillus fumigatus (ATCC 13073 [cepa: NIH 5233], American Type Culture Collection, Manassas, VA, EE. UU.) en placas de agar de Malta (Nissui Pharmaceutical, Tokio, Japón) durante 6-7 días a TA (24 ± 1 °C). Las esporas se desprendieron asépticamente de las placas de agar y se suspendieron en agua destilada estéril con 0,05 % de Tween 80 y 0,1 % de agar. El día de la infección, se evaluaron los recuentos de esporas mediante hemocitómetro y se ajustó el inóculo para obtener una concentración de 1,67 * 108 esporas mL'1 de solución salina fisiológica.
Para inducir la inmunosupresión y neutropenia, se administró a ratones A/J (machos, 5 semanas de edad) hidrocortisona (Sigma H4881; 125 mg/kg, sc,) en los días 3, 2 y 1 antes de la infección, y ciclofosfamida (Sigma C0768; 250 mg/kg, ip) 2 días antes de la infección. El día 0, los animales se infectaron con la suspensión de esporas (35 pL intranasalmente).
Los compuestos de ensayo se administraron intranasalmente (35 pL de una suspensión de 0,08-2,00 mg/mL en solución salina fisiológica) una vez al día, 30 minutos antes de la infección en el día 0 y a continuación en los días 1,2 y 3 (lo que representa el tratamiento profiláctico) o solo en los días 1, 2 y 3 (lo que representa el tratamiento terapéutico). Para el tratamiento profiláctico prolongado, los compuestos de ensayo (35 pL de una suspensión de 0,0032 o 0,016 mg/mL en solución salina fisiológica) se administraron intranasalmente una vez al día durante siete días; a continuación 30 min antes de la infección en el día 0 y, posteriormente, indistintamente en los días 1, 2 y 3 después de la infección, o solo en el día 0. Los efectos de estos paradigmas de tratamiento se compararon con los obtenidos cuando el tratamiento se limitó a un día y 30 minutos antes de la inoculación y a continuación en los días 1, 2 y 3 posinfección; o se redujo aún más a solo un día y 30 minutos antes de la infección. Los pesos corporales de los animales se monitorizaron diariamente y los que presentaron una reducción > 20 %, en comparación con su peso corporal en el día 0, se sacrificaron.
Seis horas después de la última dosis, los animales se anestesiaron, se canuló la tráquea y se recogió el BALF. El número total de células alveolares se determinó utilizando un hemocitómetro, y los números de macrófagos y neutrófilos alveolares se determinaron mediante análisis por FACS (EPICS® ALTRA II, Beckman Coulter, lnc., Fullerton, CA, EE. UU.) usando MOMA2-FITC antirratón (macrófago) o 7/4 antirratón (neutrófilo), respectivamente, como se describió anteriormente (Kimura y col., 2013). Los niveles de IFN-y e IL-17 en BALF, y de IL-6 y TNFa en suero se determinaron usando el kit de ELISA de IFN-y, IL-17, IL-6 o TNF-a de ratón Quantikine® (R&D systems, lnc., Mineápolis, MN, EE. UU.), respectivamente. El MDA, un marcador del estrés oxidativo, se ensayó usando kits de ensayo OxiSelect® TBARS (cuantificación de MDA; Cell Biolabs Inc, San Diego, CA, EE. UU.). El GM de Aspergillus en suero se determinó usando kits de Platelia GM-EIA (Bio-Rad Laboratories, Redmond, WA, EE. UU.). El índice de corte se calculó mediante la fórmula: Índice de corte = DO en la muestra /DO en el control de corte proporcionado en el kit. Para los ensayos de carga fúngica tisular, se retiraron asépticamente 100 mg de tejido pulmonar y se homogeneizaron en 0,2 mL de agar a 0,1 % en agua destilada estéril. Los homogeneizados pulmonares diluidos en serie se emplataron en placas de agar de Malta (50 pL/placa) y se incubaron a 24 ± 1 °C durante 72 a 96 h. Se contaron las colonias de A. fumigatus en cada placa y se presentó el título fúngico como UFC por gramo de tejido pulmonar.
Se usaron ratones A/J neutropénicos gravemente inmunodeprimidos (machos, 5 semanas de edad) a los que se había administrado hidrocortisona (Sigma H4881; 125 mg/kg, sc,) diariamente durante tres días antes de la infección y ciclofosfamida (Sigma C0768; 250 mg/kg, ip) dos días antes de la infección para evaluar los efectos del tratamiento combinado de Ejemplo (I) de compuesto administrado intranasalmente y posaconazol administrado oralmente. El día 0, los animales se infectaron intranasalmente con 35 pL de la suspensión de esporas (1,67 x 108 esporas/mL en solución salina fisiológica) de Aspergillus fumigatus (ATCC 13073 [cepa: NIH 5233]). El Ejemplo (I) de compuesto, preparado como una suspensión en solución salina isotónica (0,4 mg/mL), se administró una vez al día mediante una inyección intranasal (35 pL/ratón) en los días 1-6 después de la infección. El posaconazol (1 mg/kg) se administró oralmente una vez al día en los días 1-6 después de la infección. El peso corporal y la supervivencia se monitorizaron diariamente hasta el día 7.
Resumen de los resultados del cribado
Los compuestos de la invención, como se describen en esta invención, demuestran una actividad inhibidora potente contra la infección de células epiteliales bronquiales por Aspergillus fumigatus sensible a azoles y, cuando se ensaya, contra el crecimiento fúngico, como se evalúa mediante el ensayo de resazurina (Tabla 3). Con una única excepción, la incubación con los compuestos de la invención no tuvo, o tuvo poco efecto, sobre la viabilidad de las células epiteliales bronquiales BEAS2B en concentraciones de hasta, al menos, 10 pM. Particularmente, en estos sistemas de ensayo el Ejemplo 1 de compuesto presentó una potencia significativamente mayor que el voriconazol y la anfotericina B y una potencia similar al posaconazol.
Tabla 3 Efectos del tratamiento con voriconazol, posaconazol, anfotericina B y los ejemplos de compuestos de la invención sobre el crecimiento fúngico planctónico de Aspergillus fumigatus (NCPF2010), sobre la infección fúngica de células epiteliales bronquiales BEAS2B y sobre la viabilidad de las células BEAS2B Valores CMI50/CMI75/CC50 en el sistema de ensayo indicado (nM) Tratamiento (n.° de Ejemplo Crecimiento fúngico Infección de células Viabilidad celular de compuesto de ensayo) planctónico1 BEAS2B2 de BEAS2B3 CMI50 CMI75 CMI50 CC50 Voriconazol 90,8 168 154 >28600 Posaconazol 3,64 6,94 4,48 >14300 Anfotericina B 28,5 64,4 ne 977
1 1,98 5,02 5 ,43 >12200 2 0,74 3,06 1,42 >14300 3 ne ne 51,7 >14600 4 ne ne 7,77 >14400 5 ne ne 123 >14400 6 ne ne 23,9 >14600 7 ne ne 12,5 >14500 8 ne ne 14,2 548
9 ne ne 5,21 >14500 10 ne ne 14,5 >14100 11 ne ne 284 >14200 12 ne ne 97,3 >13700
13 4,27 17,8 23,9 >13400
14 ne ne 8,36 >14600 15 ne ne 7,64 >14400 16 ne ne 0,82 >14300 17 ne ne ne >14600 18 ne ne 86,6 >14200 19 ne ne 17,2 >13400 20 ne ne 36,1 >13200 21 ne ne 3,86 >13000 22 ne ne 4,77 >13400 Valores CMI50/CMI75/CC50 en el sistema de ensayo indicado (nM) Tratamiento (n.° de Ejemplo Crecimiento fúngico Infección de células Viabilidad celular de compuesto de ensayo) planctónico1 BEAS2B2 de BEAS2B3 CMI50 CMI75 CMI50 CC50
23 ne ne 3,37 >14100
24 ne ne ne >14100
25 ne ne 230 >13400
26 ne ne >1430 >14300
27 ne ne ne >14300
28 ne ne 11 ,7 >14300
29 ne ne 14,5 >13900
30 ne ne 1050 >13900
31 ne ne 10,7 >13900
32 ne ne 26,1 >14400
33 ne ne 43,5 >14400
34 ne ne 21,9 >14000
35 ne ne 125 >14000
36 ne ne 3,52 >14500
37 ne ne 18,8 >14500
38 ne ne 4,86 >14100
39 ne ne ne >13300
40 ne ne 6,87 >14500
41 ne ne ne >14300
42 ne ne ne >14500
43 ne ne 2,85 >14600 Notas al pie de la tabla: 1. Ensayo de microtitulación de resazurina; 2. Células epiteliales bronquiales; 3. n = 3-5; Además, los compuestos de la invención presentan una actividad inhibidora potente contra el crecimiento fúngico planctónico como se evalúa en un ensayo de microdilución en caldo (Tabla 4). En este ensayo, los compuestos de la invención presentan habitualmente una potencia significativamente mayor frente a las cepas resistentes a posaconazol (NCPF7099, NCPF7100 y TR34/L98H), así como frente a una cepa sensible a posaconazol (NCPF2010), que el posaconazol, el voriconazol y la anfotericina B.
Tabla 4 Efectos del tratamiento con voriconazol, posaconazol, anfotericina B y los ejemplos de compuestos de la invención sobre el crecimiento fúngico planctónico de cepas clínicas de Aspergillus fumigatus
T ra ta m ie n to (n .° d e V a lo re s C M I 75 (n M ) c o n tra las c e p a s c lín ic a s d e Aspergillus fumigatus in d ic a d a s1 E je m p lo d e c o m p u e s to ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------d e en s a y o ) N C P F 2010 N C P F 7099 N C P F 7100 L98H V o ric o n a zo l 496 96,7 596 >2860 P o sa co n a zo l 15,3 112 71,5 150 A n fo te r ic in a B 382 365 >1080 209
1 13,6 16,5 19,7 56,7 2 7,00 28,3 21,3 81,6
3 18,0 27,6 45,1 33
4 8,68 41,3 38,3 73,7 5 13,3 157 96,6 162
6 12,5 21,2 21,4 131
7 5,86 14,1 4,07 41,9 8 12,7 >1450 >1450 >1450 9 29,1 7,39 23,2 114
10 22,0 9,96 29,5 81,2
11 23,6 49,0 52,9 179
12 13,4 22,8 30,3 45,9
13 25,3 33,0 32,4 101
14 43,1 33,2 41,0 73,5
15 29,0 18,4 8,45 >1440
16 5,12 9,26 6,58 33,5
17 2,15 18,5 13,3 409
18 22,2 11,0 47,1 73,3
19 16,6 8,90 22,7 57,7
20 18,8 11,1 14,6 46,1
21 37,4 21,1 31,7 51,7
22 11,3 16,4 22,0 >1340
23 12,6 28,4 44,3 60,2
24 9,90 20,5 14,0 191 T ra ta m ie n to (n .° d e V a lo re s C M I 75 (n M ) c o n tra las c e p a s c lín ic a s d e Aspergillus fumigatus in d ic a d a s1 E je m p lo d e c o m p u e s to
d e en s a y o ) N C P F 2010 N C P F 7099 N C P F 7100 L98H
25 84,5 25,1 47,6 65,9
26 31,1 131 91,0 126
27 19,3 12,7 22,3 136
28 31,9 26,6 36,1 198
29 28,5 37,0 53,8 120
30 58,4 34,7 41,3 191
31 43,9 10,9 67,9 163
32 69,7 48,1 60,9 69,5
33 13,5 48,9 23,6 67,9
34 44,6 29,0 14,8 73,9
35 63,4 109 111 178
36 41,0 44,5 34,6 134
37 28,4 24,6 22,0 194
38 12,4 31,9 33,6 65,4
39 52,0 ne ne 65,9
40 12,5 24,0 14,6 73,1
41 57,6 ne ne 261
42 46,8 30,1 40,6 80,2
43 23,7 32,3 34,3 56,4
N o tas al p ie d e la ta b la : 1. Ensayo de microdilución en caldo, n = 3
Los efectos del E jem p lo 1 de compuesto sobre el crecimiento de un amplio abanico de patógenos fúngicos se evaluaron usando los métodos de microdilución en caldo del CLSI. El E jem p lo 1 de compuesto se encontró que es un potente inhibidor del crecimiento de Rhizopus oryzae, Cryptococcus neoformans, Chaetomimum globosum, Penicillium chrysogenum y Trichophyton rubrum, así como de algunas Candida spp. ( T a b la 5 ).
Tabla 5 Efectos del Ejemplo 1 de compuesto sobre el crecimiento de un abanico de especies de hongos Ejemplo 1 Voriconazol Posaconazol Agente fúngico Cepa CMI50 CMI100 (Hg/mL) CMI50 CMI100 (Hg/mL) CMI50 CMI100 (Hg/mL) Aspergillus flavus ATCC204304 1 ,0 >8,0 1 ,0 2,0 0,063 0,13 Aspergillus
pullulans ATCC9348 >8,0 >8,0 >8,0 >8,0 0,25 1 ,0
20240,047 0,031 >8,0 0,031 >8,0 0,031 >8,0 ATCC10231 0,13 >8,0 0,25 >8,0 0,13 >8,0 Cand 1 i * d 1 a al 1 b 1 i ■ cans
20183.073 0,5 >8,0 4,0 >8,0 0,25 >8,0 20186.025 >8,0 >8,0 >8,0 >8,0 >8,0 >8,0 ATCC36583 0,5 >8,0 0,25 >8,0 0,5 >8,0 Candida glabtata
R363 0,5 >8,0 >8,0 >8,0 0,5 >8,0 Rhizopus oryzae ATCC11145 0,063 2,0 8,0 >8,0 0,13 >8,0 Cryptococcus
neoformans ATCC24067 0,008 1 ,0 0,016 1 ,0 0,016 0,25 Chaectomium
globosum ATCC44699 0,063 >8,0 0,5 1 ,0 0,13 0,25 Penicillium
chrysogenum ATCC9480 0,031 >8,0 1 ,0 2,0 0,063 0,13 Trichophyton
rubrum ATCC 10218 < 0,008 0,031 < 0,008 0,063 < 0,008 0,031 Notas al pie de la tabla: CMI50/CMI100 = concentración requerida para la inhibición de 50 % y 100 % del crecimiento fúngico mediante inspección visual (CLSI).______________________________________________ La monoterapia con indistintamente el Ejemplo 1 de compuesto (0,1 pg/mL en la cámara superior) o posaconazol (0,01 pg/mL en la cámara inferior) inhibió la producción de GM en el día 1 en bicapas de alvéolos humanos. Sin embargo, los efectos inhibidores de estos tratamientos se perdieron rápidamente después (Tabla 6). Por el contrario, el tratamiento combinado de Ejemplo 1 de compuesto con posaconazol presentó una inhibición sostenida de la invasión posinfección. Por consiguiente, el DFB50 para el tratamiento combinado fue 5,48 días, mucho más largo que los valores para cualquiera de los compuestos solos.
Este efecto sinérgico o aditivo de la terapia combinada también se confirmó cuando el tratamiento con el Ejemplo 1 de compuesto se combinó con el de intraconazol, voriconazol o caspofungina (resultados no presentados).
Tabla 6 Efectos del Ejemplo 1 de compuesto, el posaconazol y el tratamiento combinado sobre la invasión de Aspergillus fumigatus (NCPF2010) en la cámara inferior en bicapas de alvéolos humanos (transpocillos) Niveles de GM en la cámara inferior para los tratamientos indicados Valor de DO (% Día de tratamiento - de inhibición frente al control)l
Vehículo Ejemplo 11 Cámara Posaconazol2 Cámara T ratamiento superior inferior combinado
0 0 0 0 0
1 0,68 0,091 (86) 0,064 (91) 0,007 (99)
2 1,19 1,15 (3,4) 1,01 (15) 0,011 (99)
3 1,19 1,14 (3,7) 1,14 (4,1) 0,025 (98)
4 1,18 1,13 (4,5) 1,17 (1,1) 0,11 (91) Niveles de GM en la cámara inferior para los tratamientos indicados Valor de DO (% Día de tratamiento - de inhibición frente al control)l
Vehículo Ejemplo 11 Cámara Posaconazol2 Cámara T ratamiento superior inferior combinado
5 1,18 1,18 (0,3) 1,18 (-0,6) 0,42 (64)
6 1,18 1,18 (-0,3) 1,19 (-1,1) 0,73 (38)
7 1,18 1,16 (0,9) 1,17 (0,3) 1,15 (2,0)
8 1,16 1,13 (2,8) 1,15 (0,8) 1,12 (3,7)
Valores DFB50 para los
tratamientos indicados 1,13 1,45 5,48 Notas al pie de la tabla: 1. Administrado a 0,1 jg/mL; 2. Administrado a 0,01|jg/mL; DFB50: días necesarios para alcanzar una carga fúngica de 50 % del control_____________________________________________________ Además, este tratamiento combinado se ha ensayado en bicapas infectadas con la cepa resistente a azoles de Aspergillus fumigatus: TR34-L98H. (Tabla 7) La monoterapia con el Ejemplo 1 de compuesto (1 jg/mL) en la cámara superior o con posaconazol (0,1 jg/mL) en la cámara inferior presentó un beneficio limitado. Por el contrario, la combinación del Ejemplo 1 de compuesto y posaconazol presentó efectos inhibidores notables sobre la invasión fúngica en la cámara inferior. El efecto beneficioso del tratamiento combinado se observó en el día 1 posinfección, pero desapareció después del día 2.
Tabla 7 Efectos del Ejemplo 1 de compuesto, el posaconazol y el tratamiento combinado sobre la invasión de Aspergillus fumigatus (cepa TR34-L98H) en la cámara inferior en el sistema celular de bicapa alveolar (transpocillos)
Niveles de GM en la cámara inferior para los tratamientos indicados Valor Día de tratamiento _______________ de DO (% de inhibición frente al control)l_______________
Ejemplo 1 de compuesto1 Posaconazol2 Cámara
inferior Tratamiento combinado
0 0 0 0
1 0,35 0,039 (88) 0,013 (96) 2 0,99 1,02 (-2,7) 0,082 (92)
3 0,99 0,97 (1,7) 0,54 (45)
4 1,01 1,02 (-1,4) 1,09 (-8,8) Valores DFB50 para los
tratamientos indicados 1,10 1,64 2,93 Notas al pie de la tabla: 1. Administrado a 1 jg/mL; 2. Administrado a 0,1 jg/mL; DFB50: días necesarios para alcanzar una carga fúngica de 50 % del control
Cuando se administra intranasalmente a ratones neutropénicos inmunocomprometidos, en el día 0 y los días 1-3 después de la inoculación (tratamiento profiláctico) en una comparación directa, el Ejemplo 1 de compuesto presentó efectos superiores al posaconazol en la reducción de la pérdida de peso corporal, medida a lo largo de 3 días, causada por infección con Aspergillus fumigatus (Tabla 8).
T a b la 8: Comparación de los efectos del tratamiento con el E jem p lo 1 de compuesto y posaconazol sobre la pérdida de peso corporal de ratones neutropénicos inmunocomprometidos causada por infección con Aspergillus fumigatus P é rd id a d e peso c o rp o ra l c a u s a d a p o r in fe cc ió n p o r A. fumigatus2 (% d e T , in h ib ic ió n d e la p é rd id a d e peso )
T ra ta m ie n to co n fá rm a c o 1 --------------------------------------------------------------------- - -------------------- ------- -----------------------------------------D ía 1 D ía 2 D ía 3
V e h íc u lo m ás e s p o ra s 9,2 ± 1,5 14,3 ± 1,9 19,3 ± 1,4
P o sa co n a zo l 7,3 ± 2,0 (21) 13,4 ± 1,9 (6) 18,1 ± 2,0 (6)
E je m p lo 1 6,1 ± 1,8 (34) 8,7 ± 2,5 (39) 11,1 ± 5,6 (42 )
N o tas al p ie d e la tab la : 1. Administrado a 0,4 mg/mL intranasalmente; 2. % de pérdida de peso en comparación con el peso del animal en el día 0.
Además, el tratamiento profiláctico y terapéutico con el E je m p lo 1 de compuesto presentó efectos superiores al posaconazol sobre la carga fúngica en el pulmón, así como sobre las concentraciones de GM, tanto en BALF como en suero, posinfección. Los datos para este compuesto, usado en regímenes de dosificación profilácticos y terapéuticos, se presentan en la T a b la 9 y las Fig . 1,2 y 3 (valores DI50 presentados en la T a b la 10 ).
T a b la 9: Efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el E jem p lo 1 de compuesto sobre las UFC en el pulmón y las concentraciones de galactomanano en el BALF y suero de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
C o n c . d e % d e in h ib ic ió n d e la re sp u e s ta
R é g im e n d e
fá rm a c o
tra ta m ie n to
(m g /m L ) U FC (/m g d e p u lm ó n ) G M en B A LF (C O I) G M en s u e ro (C O I)
V e h íc u lo m ás
es p o ra s N in g u n a 28,4 ± 16,9 4,8 ± 0,40 5,3 ± 1,1
E je m p lo 1 d e 0 ,08 15,2 ± 13,7 (46) 0,70 ± 0,39 (85) 0.81 ± 0.52 (85 ) co m p u es to :
tra ta m ie n to 0 ,4 2,1 ± 1,6 (93) 0,37 ± 0,46 (92) 0,24 ± 0,18 (95 ) p ro filá c tic o
2 0,8 ± 0,7 (97) 0,13 ± 0,02 (97) 0,18 ± 0,07 (97 )
0 ,4 3,8 ± 1,0 (87) 0,24 ± 0,06 (95) 0 ,29 ± 0,11 (95 ) E je m p lo 1 d e
c o m p u e s to :tra ta m ie n 2 1,9 ± 1,7 (93) 0,22 ± 0,14 (95) 0,25 ± 0,19 (95 )
10 0,5 ± 0,3 (98) 0,11 ± 0,05 (98) 0,24 ± 0,11 (95 )
N o tas al p ie d e la ta b la : los datos para la carga fúngica se presentan como la media ± error estándar de la media (EEM; n = 5-6).
T a b la 10: Valores DI50 para el tratamiento profiláctico con posaconazol y el E je m p lo 1 de compuesto sobre la carga fúngica en el pulmón y sobre las concentraciones de galactomanano en el BALF y suero de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
_ . . . .. V a lo re s D I50 p ara la re s p u e s ta in d ic a d a (m g /m L )
P rin c ip io a c tiv o _______________________________ ___________ __________________ '___________ (tra ta m ie n to p r ° f ilá c tic o ) Q arg a fú n g ic a en el p u lm ó n G M en B A LF G M en s u ero
E jem p lo 1 d e c o m p u e s to 0,086 < 0,08 < 0,08
P o sa co n a zo l 0,24 1,3 0,47
Además, el tratamiento profiláctico o terapéutico con otros compuestos de la invención presentó efectos superiores al posaconazol sobre la carga fúngica en el pulmón, así como sobre las concentraciones de GM, tanto en BALF como en suero, posinfección. Los datos de estos estudios se presentan a continuación ( T a b la s 11 y 12 ).
Tabla 11: Efectos del tratamiento profiláctico (en los días 0, 1, 2 y 3) con los compuestos de ensayo sobre la carga fúngica en el pulmón y las concentraciones de galactomanano en el BALF y suero de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
T ratamiento % de inhibición frente a controles infectados profiláctico N.° de Conc. de
Ejemplo de fármaco
Carga fúngica en el
compuesto (mg/mL) pulmón GM en BALF GM en suero Posaconazol 0,4 44 20 34
1 0,4 81 92 95
2 0,4 25 43 27
4 0,4 85 84 90
13 0,4 18 49 32
17 0,4 83 45 72
19 0,4 62 16 30
19 2 74 41 47
23 0,4 56 71 79
Tabla 12: Efectos del tratamiento terapéutico (en los días 1, 2 y 3) con los compuestos de ensayo sobre la carga fúngica en el pulmón y las concentraciones de galactomanano, tanto en BALF como en suero, en ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
T ratamiento frente a control infectado terapéutico N.° de Conc. de % de inhibición
Ejemplo de fármaco
(mg/mL) Carga fúngica en el
compuesto pulmón GM en BALF GM en suero
1 0,4 97 94 91
3 0,08 98 95 92
3 0,4 96 86 89
16 0,08 91 76 62
16 0,4 96 88 85
El tratamiento profiláctico con el Ejemplo 1 de compuesto también inhibió la acumulación de células inflamatorias en el BALF (Tabla 13), de manera similar al posaconazol. Además, el tratamiento profiláctico con el Ejemplo 1 de compuesto presentó efectos inhibidores superiores al posaconazol frente a las concentraciones de IL-17, IFNy y MDA en el BALF, y los valores de DI50 comparativos para el Ejemplo 1 de compuesto y para el posaconazol en experimentos independientes se presentan en la Tabla 14.
Tabla 13: Efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto sobre la acumulación de macrófagos y neutrófilos en el BALF de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
Números de células en BALF x 105/mL (% de inhibición) T ratamiento Conc. de fármaco
(mg/mL) Macrófago Neutrófilo
Vehículo más esporas 0,65 ± 0,14 0,49 ± 0,09
0,08 0,40 ± 0,15 (38) 0,37 ± 0,04 (24) Ejemplo 1 de compuesto
Tratamiento profiláctico 0,4 0,32 ± 0,07 (51) 0,26 ± 0,12 (47)
2 0.26 ± 0.05 (60) 0,22 ± 0,04 (55)
0,4 0,43 ± 0,05 (34) 0,38 ± 0,04 (22) Ejemplo 1 de compuesto
T ratamiento terapéutico 2 0,40 ± 0,11 (38) 0,34 ± 0,05 (31)
10 0,32 ± 0,07 (51) 0,27 ± 0,08 (45) Notas al pie de la tabla: los datos para el número de células se presentan como la media ± error estándar de la media (EEM), N = 5-6.
Tabla 14: Valores de DI50 para el tratamiento profiláctico con posaconazol y el Ejemplo 1 de compuesto sobre los niveles de IL-17, IFNy y MDA en el BALF de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
Valores de DI50 para los biomarcadores indicados (mg/mL) Principio activo (tratamiento
profiláctico)
IL-17 IFNy MDA Ejemplo 1 de compuesto 0,074 < 0,08 0,11
Posaconazol 0,61 0,22 0,69
Además, los datos que muestran los efectos del Ejemplo 1 de compuesto sobre los niveles de IFNy, IL-17 y MDA en el BALF, cuando se administra indistintamente profiláctica o terapéuticamente, se presentan en la Tabla 15 y los efectos sobre el suero, IL-6 y TNFa se presentan en la Tabla 16.
Tabla 15: Efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto sobre los niveles de IFNy, IL-17 y MDA en el BALF de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus Concentraciones de biomarcador en BALF (% de inhibición) Régimen de tratamiento Conc. de fármaco
(mg/mL) IFNy (pg/mL) IL-17 (pg/mL) MDA (Mg/mL)
Vehículo más esporas 9,2 ± 1,0 19,8 ± 3,6 1,8 ± 0,2
0,08 3,7 ± 1,7 (60) 9,8 ± 5,3 (51) 0,96 ± 0,32 (47) Ejemplo 1 de compuesto
Tratamiento profiláctico 0,4 3,0 ± 0,8 (67) 6,7 ± 4,9 (66) 0,57 ± 0,22 (68)
2 2,5 ± 0,3 (73) 3,2 ± 0,8 (84) 0,34 ± 0,05 (81)
Ejemplo 1 de compuesto 0,4 4,3 ± 2,2 (53) 8,5 ± 2,9 (57) 0,45 ± 0,10 (75) Tratamiento terapéutico 2 3,3 ± 0,8 (64) 4,0 ± 0,8 (80) 0,37 ± 0,10 (79) Concentraciones de biomarcador en BALF (% de inhibición) Régimen de tratamiento Conc. de fármaco
(mg/mL)
IFNy (pg/mL) IL-17 (pg/mL) MDA (Mg/mL)
10 2,1 ± 0,3 (77) 2,9 ± 0,7 (85) 0,25 ± 0,05 (86) Notas al pie de la tabla: los datos para las concentraciones de biomarcador se presentan como la media ± error estándar de la media (EEM), N := 5-6.
Tabla 16: Efectos del tratamiento profiláctico y terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto sobre los niveles de IL-6 y TNFa en el suero de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus.
Conc. de los biomarcadores (pg/mL) (% de Régimen de tratamiento Conc. de fármaco inhibición)
(mg/mL) IL-6 TNFa
Vehículo más esporas 284± 112 25,6 ± 8,0
0,08 159 ± 73,3 (44) 11,8 ± 5,9 (54) Ejemplo 1 de compuesto
Tratamiento profiláctico 0,4 86,3 ± 46,9 (70) 7,3 ± 3,5 (71)
2 44,5 ± 12,2 (84) 4,7 ± 0,4 (82)
0,4 51,7 ± 16,8 (82) 6.2 ± 0.5 (76) Ejemplo 1 de compuesto
T ratamiento terapéutico 2 44,2 ± 11,4 (84) 5,5 ± 0,7 (79)
10 35,9 ± 10,4 (87) 4,9 ± 0,6 (81) Notas al pie de la tabla: los datos para las concentraciones de biomarcador se presentan como la media ± error estándar de la media (EEM), N = 5-6.
El tratamiento terapéutico con el Ejemplo 1 de compuesto también se encontró que mantenía una inhibición potente de la carga fúngica en el pulmón, los niveles de galactomanano en suero y las concentraciones de citocinas en BALF en ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus. (Tablas 8, 9,10 y 13; y Figuras 1, 2 y 3).
También se evaluaron los efectos de la administración profiláctica prolongada del Ejemplo 1 de compuesto sobre los biomarcadores en ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus. La profilaxis prolongada con compuesto del Ejemplo 1 se encontró que inhibía la carga fúngica en el pulmón, así como las concentraciones de GM, tanto en BALF como en suero, a dosis 25 veces inferiores que las usadas en un estudio de biomarcadores anterior (Tabla 17). Además, los datos sugieren una acumulación de efectos antifúngicos en el pulmón en la administración repetida, ya que siete días de profilaxis produjeron efectos antifúngicos mayores que el tratamiento profiláctico durante un solo día añadido. La persistencia de acción del compuesto en el pulmón es sugerida por el hallazgo de que el tratamiento en los días -7 al día 0 generó efectos antifúngicos superiores en el día 3 que los resultantes del tratamiento solo en los días -1 y 0. Sin embargo, este protocolo de administración abreviado seguía siendo protector.
Tabla 17: Efectos de la administración profiláctica prolongada del Ejemplo 1 de compuesto sobre la carga fúngica (UFC) en el pulmón y las concentraciones de GM en el BALF y suero de ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus
Régimen de Dosis del Ejemplo Valores y % de inhibición de la respuesta3 tratamiento1 (días
de administración) (pg/mL) UFC (/mg de pulmón) GM en BALF (COI) GM en suero (COI) Vehículo más
Esporas2 Ninguna 34,7 ± 10,7 5,1 ± 0,9 4,3 ± 1,0 -7 a 3 3,2 8,3 ± 2,0 (76) 2,6 ± 0,36 (49) 1,8 ± 0,43 (58)
-1 a 3 3,2 9,5 ± 3,3 (73) 2,8 ± 0,71 (45) 2,2 ± 0,69 (49)
-7 a 3 16 5,0 ± 2,3 (86) 1,7 ± 0,39 (67) 1,4 ± 0,20 (67)
-1 a 3 16 6,1 ± 2,8 (82) 2,2 ± 0,61 (57) 1,6 ± 0,41 (63)
-7 a 0 16 6,7 ± 1,7 (81) 2,3 ± 0,52 (55) 1,7 ± 0,59 (60)
-1,0 16 13,1 ± 2,6 (62) 4,5 ± 0,50 (12) 4,0 ± 0,88 (7)
Notas al pie de la tabla: 1. El valor de N fue seis para todos los grupos tratados con fármaco; 2. El valor de N fue cinco para el grupo tratado con vehículo; 3. Los datos para la carga fúngica y los niveles de GM se presentan como la media ± error estándar de la media, y el porcentaje de inhibición, con respecto al vehículo.
Se evaluó la influencia sobre la supervivencia de la combinación de los tratamientos del Ejemplo 1 de compuesto, administrado tópicamente, con posaconazol oral, en ratones neutropénicos gravemente inmunocomprometidos después de la inoculación con Aspergillus fumigatus. La monoterapia con el Ejemplo 1 de compuesto (0,4 mg/mL, administrado intranasalmente) o con posaconazol (1,0 mg/kg, administrado oralmente) presentó solo un beneficio terapéutico muy limitado. Por el contrario, la combinación del Ejemplo 1 de compuesto y posaconazol demostró un aumento notable en el tiempo de supervivencia después de la infección (Tabla 18).
Tabla 18 Efectos del Ejemplo 1 de compuesto y el posaconazol como monoterapia y combinados sobre la supervivencia en ratones neutropénicos gravemente inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus Ensayo de Mantel-Ré x para la agimen de D Dosi is ( (vía) supervi Nvi:e°n dttees en el l Supervivenci o
.a C
supervivenciatratamiento ' ' r día 7 (%) media (días)
(frente a la
Vehículo ninguna 0/6 (0) 5 -Ejemplo 1 de
compuesto 0,4 mg/mL (in) 0/6 (0) 6 p < 0,05 Posaconazol 1 mg/kg (po) 0/6 (0) 6,5 No significativo Ejemplo 1 de
compuesto más 0,4 mg/mL (in) 1 mg/kg 5/6 (83) No definida p < 0,001 posaconazol (po)
Notas al pie de la tabla: N = 8 por grupo.
Farmacocinética in vivo
Es un procedimiento usado habitualmente para agentes terapéuticos pulmonares que se van a administrar a los pulmones de animales, por ejemplo, ratones, y plasma recogido en diversos momentos después de la administración con el fin de caracterizar la exposición sistémica resultante al compuesto administrado. El compuesto de la invención se puede ensayar en tales sistemas in vivo.
Resumen del perfil biológico de los Ejemplos de compuestos de la invención
Los ejemplos de compuestos de la invención descritos en esta invención se ha encontrado que son inhibidores potentes de la infección de células epiteliales bronquiales por Aspergillus fumigatus y del crecimiento planctónico. Los compuestos de la invención también inhibieron el crecimiento de cepas clínicas de Aspergillus fumigatus resistentes a posaconazol y resistentes a voriconazol, demostrando habitualmente mayor potencia que el posaconazol, voriconazol e intraconazol contra estas cepas. In vivo, en ratones neutropénicos inmunocomprometidos infectados con Aspergillus fumigatus, los compuestos de la invención demostraron una inhibición potente de la infección por Aspergillus fumigatus, ya sea administrados profiláctica o terapéuticamente. En particular, el Ejemplo 1 de compuesto demostró una inhibición potente de las respuestas inmunitarias del pulmón asociadas a infección por Aspergillus fumigatus, ya sea administrado profilácticamente o como tratamiento. Además, el Ejemplo 1 de compuesto fue altamente eficaz para reducir la pérdida de peso corporal dependiente de la infección. Estos efectos inhibidores fueron superiores a los del posaconazol. Resulta significativo el hecho de que los efectos antifúngicos beneficiosos del compuesto del Ejemplo 1 y los compuestos de la invención generalmente se observan en un contexto de administración tanto profiláctica como terapéutica.
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Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000061_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
X representa CH o N;
Y representa N o CH cuyo átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido por R, R1a o R1b;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, donde R representa H, F, CN, OCHF2, OCF3, SO2NH2, SO2NHMe, SO2NMe2 o Cl, especialmente F o CN, más especialmente F.
3. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 o 2, donde R1a representa H, F o Cl, especialmente H, y R1b representa H o F, especialmente H.
4. Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde R2 representa H, Me u OMe, especialmente H.
5. Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde R3 representa Me, CN, Cl, CH2OH o F, especialmente Me.
6. Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde R4 representa H o Me, especialmente H.
7. Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde X representa CH e Y representa CH.
8. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 que se selecciona de entre:
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(2,4-difluorofenil)benzamida;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-6-metilpiridin-2-il)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-cianofenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-2,5-dimetilfenil)piperazin-1-il)-W-(4-fluorofenil)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(5-fluoropiridin-2-il)benzamida;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-W-(5-cianopiridin-2-il)benzamida;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4-difluorofenil)tetrahidrofuran-3-il)metoxi)-3 met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3-c¡anofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((4R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡anofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-dorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-c¡anofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3,5-d¡met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-danofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-d¡fluorometox¡feml)benzam¡da;
4-(4-(5-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(tnfluorometox¡)fen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3,5-d¡met¡lfeml)p¡perazm-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-h¡drox¡met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-dorofeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-sulfamo¡lfeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(N-met¡lsulfamo¡l)fen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofeml)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(N,N-d¡met¡lsulfamo¡lfeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-sulfamo¡lfeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-dano-2-fluorofen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-dano-2-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1 W-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-(d¡fluorometox¡)-3-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(2,5-d¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3,4-d¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(3,5-d¡fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-doro-2-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-doro-3-fluorofeml)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(2,4,6-trifluorofen¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-3-met¡lbenzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazoM-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-2-met¡lbenzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-3-metox¡benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-fluorofeml)-2-metox¡benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(6-danopmdm-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(4-danopmdm-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-h¡drox¡met¡lfeml)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-danop¡rid¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tnazol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-(tr¡fluorometox¡)p¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-3-met¡lfen¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-clorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡r¡d¡n-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-c¡anop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-tr¡azol-1-¡l)met¡l)-5-(2,4-d¡fluorofen¡l)tetrah¡drofuran-3-¡l)metox¡)-6-met¡lp¡r¡d¡n-2-¡l)p¡peraz¡n-1-¡l)-W-(5-fluorop¡r¡d¡n-2-¡l)benzam¡da;
y sales farmacéut¡camente aceptables de los m¡smos.
9. Un compuesto según cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 8 para uso como un producto farmacéut¡co.
10. Un compuesto según cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 8 para uso en el tratam¡ento de m¡cos¡s o para uso en la prevenc¡ón o el tratam¡ento de enfermedades asoc¡adas a m¡cos¡s.
11. Un compuesto para uso según la re¡v¡nd¡cac¡ón 10 donde la m¡cos¡s es causada por Aspergillus spp. o Candida spp., p. ej., Candida albicans o Candida glabrata, Rhizopus spp., p. ej., Rhizopus oryzae, Cryptococcus spp., p. ej., Cryptococcus neoformans, Chaetomium spp., p. ej., Chaetomium globosum, Penicillium spp., p. ej., Penicillium chrysogenum o Trichophyton spp., p. ej., Trichophyton rubrum.
12. Una compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un compuesto según cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 8 opc¡onalmente en comb¡nac¡ón con uno o más d¡luyentes o vehículos farmacéut¡camente aceptables.
13. Un compuesto para uso según la re¡v¡nd¡cac¡ón 9 en comb¡nac¡ón con un segundo o más pr¡nc¡p¡os act¡vos; o una compos¡c¡ón farmacéut¡ca según la re¡v¡nd¡cac¡ón 12 que comprende un segundo o más pr¡nc¡p¡os act¡vos.
14. Un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000063_0001
donde:
R2 representa h¡drógeno, halo, c¡ano, alqu¡lo C1-4, alcox¡ C1-4 o haloalcox¡ C1-4;
R3 representa halo, c¡ano, alqu¡lo C1-4 o h¡drox¡alqu¡lo C1-4;
R4 representa h¡drógeno o alqu¡lo C1-4;
Ra representa H; y
X representa CH o N;
o una sal del m¡smo; o
un compuesto de fórmula (IV):
Figure imgf000063_0002
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4; R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
Ra representa alquilo C1-5; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo; o
un compuesto de fórmula (V):
Figure imgf000064_0001
donde:
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo; o
un compuesto de fórmula (VII):
Figure imgf000064_0002
donde:
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
Rb representa un grupo protector de nitrógeno tal como Boc; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo; o
un compuesto de fórmula (VIII):
Figure imgf000064_0003
donde:
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo; o
un compuesto de fórmula (XX):
Figure imgf000065_0001
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; y
X representa CH o N; o
una sal del mismo.
15. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 que comprende:
(a) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000065_0002
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
Ra representa hidrógeno; y
X representa CH o N;
o un derivado activado del mismo; o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (III):
Figure imgf000065_0003
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
R1a y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; e
Y representa N o CH cuyo átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido por R, R1a o R1b; o una sal del mismo; o
(b) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XV):
Figure imgf000066_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6;
Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo;
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4;
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4;
X representa CH o N; e
Y representa N o CH cuyo átomo de carbono puede estar opcionalmente sustituido por R, R1a o R1b;
o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (XI):
Figure imgf000066_0002
donde:
Z representa un grupo saliente tal como p-tolilSO2O;
o una sal del mismo; o
(c) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (XX):
Figure imgf000066_0003
donde:
R2 representa hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-4, alcoxi C1-4 o haloalcoxi C1-4;
R3 representa halo, ciano, alquilo C1-4 o hidroxialquilo C1-4;
R4 representa hidrógeno o alquilo C1-4; y
X representa CH o N;
o una sal del mismo;
con un compuesto de fórmula (XXI):
Figure imgf000067_0001
donde:
R representa hidrógeno, halo, ciano, haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4 o SO2NR5R6; Ría y R1b representan independientemente hidrógeno o halo; y
R5 y R6 representan independientemente hidrógeno o alquilo C1-4;
o una sal del mismo.
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