BR112017020807B1 - Composto 4-(4-(4-(((3r,5r)-5-((1h-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-n-(2- hidroxiciclo-hexil) benzamida antifúngica, seu processo de preparação, e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-TRIAZOL-1-IL)METIL)-5-(2,4-DIFLUOROFENIL)TETRA- HIDROFURAN-3-IL)METÓXI)-3-METILFENIL)PIPERAZIN-1-IL)-N-(2-HIDROXICICLOHEXIL) BENZAMIDA ANTIFÚNGICA OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DA MESMA. A presente invenção refere-se aos compostos, como definido no relatório descritivo, úteis no tratamento de micoses, a composições que contêm os mesmos e ao seu uso em terapia.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] Esta invenção refere-se a compostos úteis no tratamento de micoses, composições que contêm os mesmos e seu uso em terapia.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[002] A incidência de infecções fúngicas aumentou substancialmente ao longo das últimas duas décadas e formas invasivas são as causas principais de morbidez e mortalidade, especialmente entre pacientes imunocomprometidos ou imunossuprimidos. Candidíase disseminada, aspergilose pulmonar e fungos oportunistas emergentes são os agentes mais comuns que causam estas micoses graves. É uma característica particular dos fungos o fato de serem capazes de produzir uma matriz celular (ECM) que os ligam um com os outros e permite que estes sofram adesão aos seus substratos in vitro ou in vivo. Estes biofilmes servem para protegê- los contra os ambientes hostis do sistema imunológico do hospedeiro e para resistência à morte antimicrobiana (Kaur e Singh, 2013).

[003] A aspergilose pulmonar pode ser segmentada naqueles pacientes que sofrem de doença não invasiva versus aqueles com um estado de saúde invasivo. Uma subdivisão adicional é utilizada para caracterizar pacientes que exibem um componente alérgico à aspergilose (conhecida como ABPA; aspergilose broncopulmonar alérgica) comparados com aqueles que não exibem. Os fatores que aceleram a aspergilose pulmonar podem ser agudos, tal como a exposição a altas doses de medicamentos imunossupressores ou à intubação em uma unidade de cuidado intensivo. Alternativamente, estes podem ser crônicos, tal como uma infecção anterior com TB (Denning et al., 2011a). Infecções pulmonares crônicas com aspergillus pode deixar os pacientes com danos pulmonares extensivos e permanentes, requerendo tratamento durante sua vida toda com fármacos de azol orais (Limper et al., 2011).

[004] Um corpo crescente de pesquisa sugere que a infecção com aspergillus pode desempenhar uma função importante na asma clínica (Chishimba et al., 2012; Pasqualotto et al., 2009). Além disso, um trabalho publicado recentemente correlacionou a infecção com aspergillus a resultados clínicos mais desfavoráveis em pacientes com COPD (Bafadhel et al., 2013). Similarmente estudos transversais mostraram associações entre a presença de Aspergillus spp. e Candida spp. no escarro e função pulmonar agravada (Chotirmall et al., 2010; Agbetile et al., 2012).

[005] A aspergilose invasiva (AI) exibe altas taxas de mortalidade em pacientes imunocomprometidos, por exemplo, aqueles que estão sendo submetidos a transplante de células tronco alogênicas ou transplantes de órgãos sólidos (tais como transplantes de pulmão). O primeiro caso de AI relatado em um paciente imunocomprometido ocorreu em 1953. Este evento era concorrente com a introdução de corticosteroides e quimioterapia citotóxica nos regimes de tratamento (Rankin, 1953). A aspergilose invasiva é uma preocupação importante no tratamento de leucemia e outras malignidades hematológicas dada sua alta incidência e mortalidade associada. As taxas de morte geralmente excedem 50% (Lin et al., 2001) e taxas a longo prazo podem atingir 90% em receptores de transplante de células tronco hematopoiéticas alogênicas, apesar da disponibilidade de medicamentos orais de triazol (Salmeron et al., 2012). Em pacientes que estão sendo submetidos a transplante de órgão sólido (particularmente do pulmão), o uso de altas doses de esteroides deixa os pacientes vulneráveis à infecção (Thompson e Patterson, 2008) que é um problema sério. A doença também apareceu em populações de pacientes menos gravemente imunocomprometidos. Estes incluem aqueles que sofrem de COPD ou cirrose inerente, pacientes que recebem esteroides em doses altas e indivíduos providos de cateteres venosos centrais ou com suporte de ventilação mecânica (Dimopoulos et al., 2012).

[006] Os medicamentos antifúngicos existentes são predominantemente dosados de forma oral ou sistêmica. Estas rotas de fornecimento comumente exploradas são fracas para o tratamento de infecções nas vias aéreas pulmonares, uma vez que as concentrações de fármaco atingidas no logal da infecção tendem a serem menores que aquelas nos órgãos. Isto ocorre dessa maneira especialmente no fígado, que é um local de toxicidade: até 15% dos pacientes tratados com voriconazol sofrem níveis de transaminase aumentados (Levin et al., 2007; Lat e Thompson, 2011). A exposição do fígado também resulta em interações significativas do fármaco que ocorrem partindo da inibição de enzimas P450 hepáticas (Jeong, et al., 2009; Wexler et al., 2004).

[007] Além disso, o uso muito difundido de triazóis, tanto na clínica quanto na agricultura levou a uma emergência crescente e problemática de micoses resistentes em algumas localizações (Denning et al., 2011b; Bowyer e Denning, 2014).

[008] É claramente evidente que existe uma necessidade médica urgente para novos medicamentos antifúngicos que fornecem maior eficácia e melhores perfis de tolerabilidade sistêmica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] Em um primeiro aspecto, a invenção fornece o composto (I)

[0010] que é:

[0011] 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il) metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-N- (2-hidroxiciclo-hexil)benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma (o "composto da invenção").

[0012] O composto (I) contém dois centros estereogênicos dentro do radical 2-aminociclohexanol e é fornecido na forma de qualquer um de seus quatro estereoisômeros possíveis, na forma de um estereoisômero único ou na forma de uma mistura de estereoisômeros em qualquer proporção (incluindo misturas racêmicas).

[0013] Em um aspecto preferido, a invenção fornece o composto (I) na forma de um estereoisômero selecionado dos Compostos (Ia) e (Ib) ilustrados a seguir, que são os dois estereoisômeros derivados dos enantiômeros de trans-2-aminociclohexanol e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo:

[0014] Em um aspecto mais preferido a invenção fornece o composto (Ia) representado a seguir:

[0015] que é:

[0016] 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il) metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-N- ((1S,2S)-2-hidroxiciclo-hexil)benzamida ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

[0017] De forma adequada, o Composto (I) tal como o Composto (Ia) é fornecido na forma de um estereoisômero único.

[0018] Os dados biológicos divulgados aqui a seguir revelam que o Composto (I) e seus estereoisômeros, o Composto (Ia) em particular, são inibidores potentes de Aspergillus fumigatus crescido em ensaios in vitro. Em camundongos imunossuprimidos, o Composto (Ia) demonstrou inibição potente de infecções causadas por Aspergillus fumigatus.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0019] A Figura 1 exibe os efeitos do tratamento terapêutico com o Composto (Ia) sobre a UFC nos pulmões de camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

[0020] A Figura 2 mostra os efeitos do tratamento terapêutico com o Composto (Ia) sobre as concentrações séricas de galactomanana em camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

[0021] A Figura 3 mostra os efeitos do tratamento terapêutico com o Composto (Ia) sobre o conteúdo de DNA de Aspergillus fumigatus nos pulmões de camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0022] O composto da invenção pode ser preparado a partir de materiais de partida disponíveis comercialmente através da metodologia de síntese representada a seguir (Esquema 1). O acoplamento de Buchwald de um derivado de piperazina protegido de forma adequada com 4-bromo-2-metilfenol sob condições tipicamente empregadas para tais reações fornece o produto N-arilado 1. Um grupo protetor de amina (P) adequado para tais transformações é um grupo uretana tal como um grupo Boc (P = CO2tBu). Os peritos na arte considerarão que uma ampla variedade de condições pode ser utilizada para ter efeito sobre as transformações deste tipo. Em particular, catalisadores de paládio e ligantes de fosfina tais como RuPhosG3 e RuPhos são rotineiramente empregados na presença de uma base, por exemplo, carbonato de césio ou hexametildissilazida de lítio. Esquema 1

[0023] A reação do fenol 1 resultante com um derivado eletrofílico apropriado de ((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il)metanol (2, X = OH) sob condições básicas gera o éter 3. Um exemplo de tal composto é o tosilato correspondente (2, X = OTs) que está prontamente disponível, em alta pureza enanciomérica, em fontes comerciais. Embora tosilato seja um exemplo, X também pode ser um grupo de partida alternativo, tal como um halogênio, tipicamente cloro. A remoção seletiva do grupo protetor de amina revela a piperazina monossubstituída 4. No caso de um derivado de Boc (R = CO2tBu), a etapa de desproteção é tipicamente conduzida através da exposição do carbamato a um ácido mineral forte ou um ácido orgânico forte, tal como TFA, puro ou na presença de um solvente, tal como DCM.

[0024] Um segundo acoplamento de Buchwald da amina 4 com um 4-bromobenzoato de alquila sob condições básicas e a ação de um catalisador dá origem ao produto N,N-bisarilado 5 no qual R’ representa alquil inferior tal como C1-5 alquila, por exemplo, metila ou etila. A saponificação do éster 5 é convenientemente realizada através do tratamento com uma base, tal como um hidróxido de metal alcalino, em uma mistura de água e um solvente miscível aquoso adequado. A reação do produto ácido 6, com 2-aminociclohexanol, sob condições de acoplamento de amida padronizadas, bastante disponível na arte, fornece o Composto (I). Cada um dos quatro estereoisômeros separados do Composto (I) pode ser produzido através do uso do estereoisômeros isolado correspondente de 2-aminociclohexanol. Os estereoisômeros correspondentes de 2-aminociclohexanol estão cada um disponíveis comercialmente com alta pureza estereoisomérica.

[0025] Os grupos protetores e os meios para sua remoção são descritos em "Protective Groups in Organic Synthesis", por Theodora W. Greene e Peter G. M. Wuts, publicado por John Wiley & Sons Inc; 4th Rev Ed., 2006, ISBN-10: 0471697540. Uma revisão das metodologias para a preparação de amidas é abrangida em: ‘Amide bond formation and peptide coupling’ Montalbetti, C.A.G.N. e Falque, V. Tetrahedron, 2005, 61, 10827-10852.

[0026] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (I) incluem em particular sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis dos ditos compostos. Entende-se que os sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula (I) compreendem os sais de adição ácida não tóxicos terapeuticamente ativos que os compostos da fórmula (I) são capazes de formar. Estes sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente obtidos através do tratamento da forma de base livre com tais ácidos apropriados em um solvente ou uma mistura de solventes adequados. Os ácidos apropriados compreendem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos hidrohálicos, por exemplo, ácido clorídrico ou bromídrico, ácidos sulfúrico, nítrico, fosfórico e similares; ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, malônico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, pamoico e similares.

[0027] Reciprocamente as ditas formas de sal podem ser convertidas através do tratamento com uma base apropriada na forma de base livre.

[0028] É pretendido que a definição de Composto (I) inclua todos os tautômeros do dito composto.

[0029] Como o termo é utilizado aqui, um "estereoisômero único" do Composto (I) é um estereoisômero fornecido em uma forma tanto de alta pureza diastereoisomérica quanto alta pureza enanciomérica, ou seja, substancialmente livre de dos outros três estereoisômeros do Composto (I) que ocorrem em virtude da presença ali do radical 2- aminociclohexanol. Tipicamente, o estereoisômero único constitui pelo menos 98%, 99%, 99,5% ou 99,9% p/p do conteúdo do Composto (I) (isto é, os outros estereoisômeros constituem menos de 2%, 1%, 0,5% ou 0,1% p/p do conteúdo do Composto (I)).

[0030] É pretendido que a definição do Composto (I) inclua todos os solvatos do dito composto (incluindo solvatos de sais do dito composto) a não ser que o contexto indique especificamente o contrário. Os exemplos de solvatos incluem hidratos.

[0031] O composto da divulgação inclui modalidades em que um ou mais átomos especificados são isótopos que ocorrem naturalmente ou que não ocorrem naturalmente. Em uma modalidade o isótopo é um isótopo estável. Assim, os compostos da divulgação incluem, por exemplo, compostos que contêm deutério e similares.

[0032] A divulgação também se estende a todas as formas polimórficas do composto definido aqui.

[0033] Os novos intermediários que são descritos aqui tais como os compostos das fórmulas (3), (4), (5) e (6) e sais dos mesmos, formam um aspecto adicional da invenção. Os sais incluem sais farmaceuticamente aceitáveis (tais como aqueles mencionados anteriormente) e sais não farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de ácidos (por exemplo, ácidos carboxílicos) incluem sais de metais do primeiro e do segundo grupos incluindo sais de sódio, potássio, magnésio e cálcio.

[0034] Em uma modalidade é fornecida uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção opcionalmente em combinação com um ou mais diluentes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[0035] De forma adequada, o composto da invenção é administrado de forma tópica nos pulmões ou no nariz, particularmente, de forma tópica nos pulmões. Assim, em uma modalidade é fornecida uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção opcionalmente em combinação com um ou mais de diluentes ou carreadores topicamente aceitáveis.

[0036] As composições adequadas para administração pulmonar ou intranasal incluem pós, soluções líquidas, suspensões líquidas, gotas nasais que compreendem soluções ou suspensões ou aerossóis pressurizados ou não pressurizados.

[0037] As composições podem ser convenientemente administradas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas através de qualquer um dos métodos bem conhecidos na arte farmacêutica, por exemplo, como descrito em Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985). As composições também podem ser convenientemente administradas em várias formas de dosagem unitária.

[0038] A administração tópica no nariz ou nos pulmões pode ser conseguida através do uso de uma formulação não pressurizada tal como uma solução ou uma suspensão aquosa. Tais formulações podem ser administradas através de um nebulizador, por exemplo, um que pode ser de mão e portátil para uso doméstico ou no hospital (isto é, não portátil). Um exemplo de dispositivo é um inalador RESPIMAT. A formulação pode compreender excipientes tais como água, tampões, agentes de ajuste da tonicidade, agentes de ajuste do pH, modificadores de viscosidade, tensoativos e cossolventes (tal como etanol). Formulações líquidas em suspensão ou em aerossol (pressurizadas ou não pressurizadas) conterão tipicamente o composto da invenção na forma finamente dividida, por exemplo, com um D50 de 0,5-10 μm, por exemplo, em torno de 1-5 μm. As distribuições de tamanhos de partícula podem ser representadas utilizando valores de D10, D50 e D90. O valor médio de D50 das distribuições de tamanhos de partícula é definido como o tamanho de partícula em mícrons que divide a distribuição na metade. A medida derivada da difração a laser é descrita de forma mais acurada como uma distribuição de volume e consequentemente o valor de D50 obtido utilizando este procedimento é referido de forma mais significativa como um valor de Dv50 (média para uma distribuição de volume). Como utilizado aqui os valores de Dv referem-se às distribuições de tamanhos de partícula medidas utilizando difração a laser. Similarmente, os valores de D10 e D90, utilizados no contexto da difração a laser, são considerados como significando os valores de Dv10 e Dv90 e referem-se ao tamanho de partícula em que 10% da distribuição ficam abaixo do valor de D10 e 90% da distribuição ficam abaixo do valor de D90, respectivamente.

[0039] De acordo com um aspecto específico da invenção é fornecida uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção na forma particulada suspensa em um meio aquoso. O meio aquoso compreende tipicamente água e um ou mais excipientes selecionados de tampões, agentes de ajuste da tonicidade, agentes de ajuste do pH, modificadores de viscosidade e tensoativos.

[0040] A administração tópica no nariz ou nos pulmões também pode ser conseguida através do uso de uma formulação em aerossol. As formulações em aerossol compreendem tipicamente o ingrediente ativo suspenso ou dissolvido em um adequado propelente de aerossol, tal como um clorofluorocarboneto (CFC) ou um hidrofluorocarboneto (HFC). Os propelentes de CFC adequados incluem tricloromonofluorometano (propelente 11), diclorotetrafluorometano (propelente 114) e diclorodifluorometano (propelente 12). Os propelentes de HFC adequados incluem tetrafluoroetano (HFC-134a) e heptafluoropropano (HFC-227). O propelente compreende tipicamente 40%-99,5% por exemplo, 40%-90% em peso da composição de inalação total. A formulação pode compreender excipientes incluindo cossolventes (por exemplo, etanol) e tensoativos (por exemplo, lecitina, trioleato de sorbitana e similares). Outros excipientes possíveis incluem polietileno glicol, polivinilpirrolidona, glicerina e similares. As formulações em aerossol são embaladas em tubos e uma dose adequada é fornecida através de uma válvula medidora (por exemplo, que é fornecida pela Bespak, Valois ou 3M ou alternativamente pela Aptar, Coster ou Vari).

[0041] A administração tópica nos pulmões também pode ser conseguida através do uso de uma formulação em pó seco. Uma formulação em pó seco conterá o composto da divulgação na forma finamente dividida, tipicamente com um MMD de 1-10 μm ou um D50 de 0,5-10 μm, por exemplo, em torno de 1-5 μm. Os pós do composto da invenção na forma finamente dividida podem ser preparados através de um processo de micronização ou de um processo de redução de tamanho similar. A micronização pode ser realizada utilizando um moinho de jato tal como aqueles fabricados pela Hosokawa Alpine. A distribuição de tamanho de partícula resultante pode ser medida utilizando difração a laser (por exemplo, com um equipamento Malvern Mastersizer 2000S). A formulação irá tipicamente conter um diluente topicamente aceitável tal como lactose, glicose ou manitol (preferencialmente lactose), geralmente de tamanho de partícula comparativamente grande, por exemplo, um MMD de 50 μm ou mais, por exemplo, 100 μm ou mais ou um D50 de 40-150 μm. Como utilizado aqui, o termo "lactose" refere-se a um componente que contém lactose, incluindo α-lactose monoidratada, β-lactose monoidratada, α-lactose anidra, β-lactose anidra e lactose amorfa. Os componentes de lactose podem ser processados por micronização, peneiração, moagem, compressão, aglomeração ou secagem por spray. As formas disponíveis comercialmente de lactose em várias formas também são abrangidas, por exemplo, os produtos Lactohale® (lactose em grau de inalação; DFE Pharma), InhaLac®70 (lactose peneirada para inalador de pó seco; Meggle), Pharmatose® (DFE Pharma) e Respitose® (lactose em grau de inalação peneirada; DFE Pharma). Em uma modalidade, o componente de lactose é selecionado do grupo que consiste de α- lactose monoidratada, α-lactose anidra e lactose amorfa. Preferencialmente, a lactose é α-lactose monoidratada.

[0042] As formulações em pó seco também podem conter outros excipientes tais como estearato de sódio, estearato de cálcio ou estearato de magnésio.

[0043] Uma formulação em pó seco é tipicamente fornecida utilizando um dispositivo inalador de pó seco (DPI). Os exemplos de sistemas de fornecimento de pó seco incluem SPINHALER, DISKHALER, TURBOHALER, DISKUS, SKYEHALER, ACCUHALER e CLICKHALER. Exemplos adicionais de sistemas de fornecimento de pó seco incluem ECLIPSE, NEXT, ROTAHALER, HANDIHALER, AEROLISER, CICLOHALER, BREEZHALER/NEOHALER, MONODOSE, FLOWCAPS, TWINCAPS, X-CAPS, TURBOSPIN, ELPENHALER, MIATHALER, TWISTHALER, NOVOLIZER, PRESSAIR, ELLIPTA, inalador de pó seco ORIEL, MICRODOSE, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OMNIHALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR e PROHALER.

[0044] O composto da invenção é útil no tratamento de micoses e para a prevenção ou para o tratamento de doença associada a micoses.

[0045] Em um aspecto da invenção é fornecido o uso do composto da invenção na produção de um medicamento para o tratamento de micoses e para a prevenção ou para o tratamento de doença associada a micoses.

[0046] Em outro aspecto da invenção é fornecido um método de tratamento de um indivíduo com uma micose que compreende a administração ao dito indivíduo de uma quantidade eficiente do composto da invenção.

[0047] Em outro aspecto da invenção é fornecido um método de prevenção ou de tratamento de doença associada a uma micose em um indivíduo que compreende a administração ao dito indivíduo de uma quantidade eficiente do composto da invenção.

[0048] As micoses podem, em particular, ser causadas por Aspergillus spp. tal como Aspergillus fumigatus.

[0049] Uma doença associada a uma micose é, por exemplo, aspergilose pulmonar.

[0050] O composto da invenção pode ser utilizado em um cenário profilático através da administração do dito composto antes do início da micose.

[0051] Os indivíduos incluem indivíduos humanos e animais, especialmente indivíduos humanos.

[0052] O composto da invenção é especialmente útil para o tratamento de micoses tal como infecção com Aspergillus fumigatus e para a prevenção ou para o tratamento de doença associada a micoses tal como infecção com Aspergillus fumigatus em indivíduos em risco. Os indivíduos em risco incluem bebês prematuros, crianças com defeitos congênitos dos pulmões ou do coração, indivíduos imunocomprometidos (por exemplo, aqueles que sofrem de infecção com HIV), asmáticos, indivíduos com fibrose cística, indivíduos idosos e indivíduos que sofrem de um estado de saúde crônico que afeta o coração ou os pulmões (por exemplo, insuficiência cardíaca congestiva ou doença pulmonar obstrutiva crônica).

[0053] O composto da invenção também é útil no tratamento de outras micoses (e na prevenção ou no tratamento de doença associada às mesmas) incluindo aquelas causadas por Aureobasidium pullulans, Rhizopus oryzae, Cryptococcus neoformans, Chaetomimum globosum, Penicillium chrysogenum, Fusarium graminararum, Cladosporium herbarum, Trichophyton rubrum, Candida spp., por exemplo, Candida albicans, Candida glabrata e Candida krusei e outros Aspergillus spp., por exemplo, Aspergillus flavus.

[0054] Também é esperado que o composto da invenção seja útil no tratamento de micoses resistentes a azol (e na prevenção ou no tratamento de doença associadas às mesmas) por exemplo, aquelas causadas por Aspergillus spp. resistente a azol, por exemplo, Aspergillus fumigatus.

[0055] O composto da invenção pode ser administrado em combinação com um segundo ingrediente ativo ou adicional. Os segundos ingredientes ativos ou adicionais podem, por exemplo, ser selecionados de outros agentes antifúngicos que incluem agentes antifúngicos de azol (tal como voriconazol ou posaconazol), anfotericina B, uma equinocandina (tal como caspofungina) e um inibidor de 3- hidróxi-3-metil-glutaril-CoA redutase (tal como lovastatina, pravastatina ou fluvastatina). Outros exemplos de agentes antifúngicos de azol adequados incluem itraconazol e isavuconazol.

[0056] O segundo ingrediente ativo ou adicional pode, por exemplo, ser selecionado de voriconazol, posaconazol, itraconazol e caspofungina.

[0057] Os segundos ingredientes ativos ou adicionais incluem ingredientes ativos adequados para o tratamento ou para a prevenção de uma micose tal como infecção com Aspergillus fumigatus ou doença associada a uma micose tal como infecção com Aspergillus fumigatus ou condições comórbidas com uma micose tal como infecção com Aspergillus fumigatus.

[0058] O composto da invenção pode ser coformulado com um segundo ingrediente ativo ou adicional ou o segundo ingrediente ativo ou adicional pode ser formulado para ser administrado separadamente através da mesma rota ou uma diferente.

[0059] Por exemplo, o composto da invenção pode ser administrado a pacientes que já estão sendo tratados de forma sistêmica com um antifúngico, tal como voriconazol ou posaconazol ou alternativamente itraconazol ou isavuconazol.

[0060] Por exemplo, o composto da invenção pode ser coformulado com um ou mais agentes selecionados de anfotericina B, uma equinocandina, tal como caspofungina e um inibidor de 3-hidróxi-3- metil-glutaril-CoA redutase, tal como lovastatina, pravastatina ou fluvastatina.

[0061] De acordo com um aspecto da invenção é fornecido um kit de partes que compreende (a) uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção opcionalmente em combinação com um ou mais diluentes ou carreadores; (b) uma composição farmacêutica que compreende um segundo ingrediente ativo opcionalmente em combinação com um ou mais diluentes ou carreadores; (c) opcionalmente uma ou mais composições farmacêuticas adicionais cada um compreendendo um terceiro ingrediente ativo ou adicional opcionalmente em combinação com um ou mais diluentes ou carreadores; e (d) instruções para a administração das composições farmacêuticas a um indivíduo que necessita da mesma. O indivíduo que necessita disso pode sofrer ou ser suscetível a uma micose tal como infecção com Aspergillus fumigatus.

[0062] O composto da invenção pode ser administrado em um intervalo adequado, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia, três vezes ao dia ou quatro vezes ao dia.

[0063] Espera-se que uma quantidade de dose adequada para um ser humano de peso médio (50-70 kg) seja em torno de 50 μg até 10 mg/dia, por exemplo, 500 μg até 5 mg/dia embora a dose precisa que deve ser administrada possa ser determinada por um perito.

[0064] É esperado que o composto da invenção tenha um ou mais dos atributos favoráveis a seguir: potente atividade antifúngica, particularmente atividade contra Aspergillus spp. tal como Aspergillus fumigates, especialmente após a administração tópica nos pulmões ou no nariz; ação de longa duração nos pulmões, preferencialmente coerente com a dosagem uma vez ao dia; baixa exposição sistêmica após a administração tópica nos pulmões ou no nariz; e perfil de segurança aceitável, especialmente após a administração tópica nos pulmões ou no nariz.

SEÇÃO EXPERIMENTAL

[0065] As abreviações utilizadas aqui são definidas a seguir (Tabela 1). É pretendido que quaisquer abreviações não definidas transmitam seu significado comumente aceito. TABELA 1: Abreviações ABPA aspergilose broncopulmonar alérgica aq aquoso(a) ATCC American Type Culture Collection BALF fluido de lavagem broncoalveolar BEAS2B epitélio bronquial + adenovírus 12-SV40 híbrido, linhagem 2B Boc tert-butiloxicarbonil br amplo BSA albumina do soro bovino CC50 50% da concentração de citotoxicidade celular UFC unidade(s) formadora(s) de colônia(s) CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute COI índice de corte conc concentração d dubleto DCM diclorometano DMAP 4-dimetilaminopiridina DMEM Meio de Eagle Modificado por Dulbecco DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetil sulfóxido DNA Ácido desoxirribonucleico DSS dextran sulfato de sódio EBM meio basal de célula endotelial ECM matriz celular EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida ee excesso enanciomérico EGM meio de crescimento de célula endotelial EUCAST European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (ES+) EtOAc ionização por eletrospray, modo positivo acetato de etila FAM amidita de 6-fluoresceína FBS soro fetal bovino GM galactomanana hr hora(s) HPAEC células endoteliais primárias da artéria pulmonar humana IA aspergilose invasiva i.n. intranasal i.t. intratraqueal LC-MS/MS cromatografia líquida-espectrometria de massa Li Hep LiHMDS heparina de lítio bis(trimetilsilil)amida de lítio (M+H)+ íon molecular protonado MDA malondialdeído Me metil MeCN acetonitrila MeOH metanol MHz megahertz MIC50 50% de concentração inibitória mínima MIC75 75% de concentração inibitória mínima MIC90 90% de concentração inibitória mínima min minuto(s) MMD diâmetro médio ponderado em massa MOI multiplicidade de infecção MOPS ácido 3-(N-morfolino)propanossulfônico m/z: razão massa/carga NCPF National Collection of Pathogenic Fungi RMN ressonância magnética nuclear (espectroscopia) NT não testado DO densidade óptica PBS solução salina tamponada com fosfato PCR reação em cadeia da polimerase P grupo protetor q RT quarteto temperatura ambiente RP HPLC cromatografia líquida de alto desempenho de fase inversa RPMI meio do Roswell Park Memorial Institute RuPhos 2-diciclo-hexilfosfino-2’, 6’-diisopropoxibifenil metanossulfonato de (2-diciclo-hexilfosfino-2’, 6’- RuPhosG3 diisopropoxibifenil)[2-(2’-amino-1, 1’-bifenil)]paládio (II) s singleto sat saturado(a) sc subcutâneo SDS dodecil sulfato de sódio t tripleto TAMRA tetrametil-6-carboxirhodamina TE tris-EDTA (ácido etilenodiaminatetraacético) TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano Uma cepa de A. fumigatus que contém uma substituição de TR34/L98H leucina por histidina no códon 98 e uma repetição em tandem de 34 pb Uma cepa de A. fumigatus que contém uma substituição de TR46/Y121F/ tirosina por fenilalanina no códon 121, uma substituição de T289A treonina por alanina no códon 289 e uma repetição em tandem de 46 pb vol volume(s)

PROCEDIMENTOS GERAIS

[0066] Todos os reagentes e os solventes foram obtidos partindo de fontes comerciais ou preparados de acordo com a citação na literatura. A não ser que seja determinado de outra maneira todas as reações foram agitadas. As soluções orgânicas foram secas de forma rotineira em sulfato de magnésio anidro.

MÉTODOS ANALÍTICOS Métodos de HPLC de Fase Inversa:

[0067] Coluna Waters Xselect CSH C18 XP, 2,5 μm (4,6 x 30 mm) a 40°C; vazão 2,5-4,5 mL min-1 eluída com um gradiente de H2O-MeCN contendo 0,1% v/v de ácido fórmico (Método 1a) ou NH4HCO3 a 10 mM e, água (Método 1b) durante 4 min empregando detecção com UV em 254 nm. Informação do gradiente: 0-3,00 min, aumentado de 95% de H2O-5% de MeCN para 5% de H2O-95% de MeCN; 3,00-3,01 min, mantido em 5% de H2O-95% de MeCN, vazão aumentada para 4,5 mL min-1; 3,01 3,50 min, mantido em 5% de H2O-95% de MeCN; 3,50-3,60 min, retornado para 95% de H2O-5% de MeCN, vazão reduzida para 3,50 mL min-1; 3.60-3,90 min, mantido em 95% de H2O-5% de MeCN; 3,90-4,00 min, mantido em 95% de H2O-5% de MeCN, vazão reduzida para 2,5 mL min-1.

Espectroscopia de 1H RMN:

[0068] Os espectros de 1H RMN foram obtidos em um espectrômetro Bruker Advance III em 400 MHz utilizando solvente não deuterado residual como referência e a não ser que seja especificado o contrário foram corridos em DMSO-d6.

Preparação dos Compostos (Ia-d): os estereoisômeros do Composto (I).

[0069] A síntese de cis e trans 2-amino hexanóis opticamente puros foi relatada anteriormente (Jacobsen et al., 1997). Estes materiais estão disponíveis em alta pureza enanciomérica em inúmeras fontes comerciais e foram utilizados como fornecidos. 4-(4-hidróxi-3-metilfenil)piperazina-1-carboxilato de tert-butila.

[0070] Um frasco carregado com tert-butilpiperazin-1-carboxilato (19,1 g, 103 mmoles), 4-bromo-2-metil fenol (16,0 g, 86,0 mmoles), RuPhos (798 mg, 1,71 mmol) e RuPhos G3 (1,43 g, 1,71 mmol) foi evacuado e novamente preenchido com nitrogênio três vezes. Uma solução de LiHMDS (1 M em THF, 257 mL, 257 mmoles) foi adicionada via cânula e a mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 3 h. Após o resfriamento à RT a mistura foi extinta através da adição de ácido clorídrico aq a 1 M (400 mL) a 0°C e então neutralizada com NaHCO3 aq sat (400 mL). A camada aq foi extraída com EtOAc (1 x 400 mL então 2 x 200 mL) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (500 mL) e secos. Os compostos voláteis foram removidos in vacuo para fornecer um produto bruto que foi triturado em éter dietílico:hexano (2:1) (750 mL) e coletado por filtração para produzir o composto do título, Intermediário 1, na forma de um sólido cor de rosa (20,7 g, 76%); Rt 2,07 min (Método 1b); m/z 293 (M+H)+ (ES+); 1H RMN δ: 1,41 (9H, s), 2,07 (3H, s), 2,86-2,88 (4H, m), 3,41-3,43 (4H, m), 6,58-6,66 (2H, m), 6,71 (1H, d) e 8,73 (1H, s). 1-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-Triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazina.

[0071] A uma solução do intermediário 1 (21,5 g, 66,1 mmoles) em DMSO (408 mL) foi adicionado hidróxido de sódio aq (28,3 mL, 3,5 M, 99,0 mmoles). A mistura foi agitada à RT durante 30 min e foi então tratada em porções com ((3S,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil-5-(2,4- difluorofenil) tetra-hidrofuran-3-il)metil4-metilbenzenossulfonato 2 (ex APIChem, Número de Catálogo: AC-8330, 32,7 g, 72,7 mmoles). A mistura de reação foi agitada a 30°C durante 18 h, resfriada à RT e a água (600 mL) foi adicionada. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 500 mL) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com NaHCO3 aq sat (2 x 500 mL) e com salmoura (500 mL) e então secos e evaporados in vacuo para fornecer um óleo marrom (aprox. 41 g). A análise do produto protegido com N-Boc bruto 3 por 1H RMN indicou que este continha aproximadamente 10 mol % do produto de eliminação de alqueno: (R)-1-((2-(2,4-difluorofenil)-4-metilenotetra- hidrofuran-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol [A], junto com alguns materiais de partida não reagidos. Este produto bruto foi utilizado na etapa subsequente sem purificação.

[0072] O uretano bruto 3 foi coletado em DCM (260 mL) e tratado com TFA (76,0 mL, 991 mmoles). Após 2 h à RT a mistura de reação foi concentrada in vacuo para remover a maioria dos compostos voláteis e foi então diluída com DCM (200 mL) e neutralizada cuidadosamente com NaHCO3 aq sat (500 mL) até pH 7, resultando na formação de uma emulsão. A mistura foi acidificada até pH 1 através da adição de ácido clorídrico a 1 M (250 mL) e DCM (350 mL) foi adicionado para formar uma mistura bifásica (duas camadas). A fase aq foi separada e retida e a fase orgânica foi extraída com ácido clorídrico a 1 M (800 mL). As camadas aq combinadas foram basificadas através da adição de hidróxido de sódio aq a 2 M (500 mL) até pH 14 e então extraídas com EtOAc (3 x 500 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (2000 mL) e então secos e evaporados in vacuo para produzir o composto do título, 4, na forma de um óleo marrom viscoso (24,6 g, 78%); Rt 1,46 min (Método 1a); m/z 470 (M+H)+ (ES+); 1H RMN δ: 2,07 (3H, s), 2,15 (1H, dd), 2,36-2,42 (1H, m), 2,52-2,56 (1H, m), 2,79-2,81 (4H, m), 2,87-2,90 (4H, m), 3,66 (1H, dd), 3,73-3,77 (2H, m), 4,04 (1H, t), 4,57 (2H, dd), 6,64 (1H, dd), 6,70-6,75 (2H, m), 6,99 (1H, td), 7,25-7,33 (2H, m), 7,76 (1H, s) e 8,34 (1H, s). 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-Triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1- il)benzoato de metila.

[0073] Um frasco carregado com o intermediário 4 (19,1 g, 40,7 mmoles), metil-4-bromobenzoato (10,5 g, 48,8 mmoles), RuPhos (0,38 g, 0,81 mmol, 2 mol%), RuPhosG3 (0,68 g, 0,81 mmol, 2 mol%) e carbonato de césio (21,2 g, 65,1 mmoles) foi evacuado e novamente preenchido com nitrogênio três vezes antes da DMF (500 mL) ser adicionada. A mistura foi aquecida a 90°C durante 18 h, resfriada à RT e vertida em água (300 mL). O sólido resultante foi coletado por filtração e foi lavado com água (3 x 100 mL) e com éter dietílico (3 x 75 mL) e então secos in vacuo a 50°C para fornecer o composto do título, 5, na forma de um sólido castanho (22,8 g, 89%); Rt 2,56 min (Método 1a); m/z 604 (M+H)+ (ES+); 1H RMN δ: 2,09 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,36-2,42 (1H, m), 2,53-2,57 (1H, m), 3,11-3,13 (4H, m), 3,43-3,46 (4H, m), 3,67 (1H, dd), 3,74-3,79 (5H, s se sobrepondo sobre m), 4,04 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,85 (1H, br d), 7,00 (1H, td), 7,04 (2H, d), 7,277,34 (2H, m), 7,77 (1H, s), 7,81 (2H, d) e 8,35 (1H, s). Ácido 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil) tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1- il)benzoico.

[0074] A uma suspensão do intermediário 5 (22,8 g, 37,8 mmoles) em DMSO (1000 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (4,52 g, 188 mmoles) em água (100 mL). A mistura foi aquecida a 70°C durante 22 h e foi então resfriada à RT, vertida em água (1000 mL) e acidificada até pH 2 através da adição de ácido clorídrico a 1 M (300 mL). A mistura foi resfriada em um banho de gelo durante 2 h e o precipitado resultante foi coletado por filtração. A torta de filtro foi lavada com água (2 x 200 mL) e com éter dietílico (4 x 200 mL). O sólido bruto foi triturado com THF (150 mL), coletado por filtração e foi então lavado com éter dietílico (3 x 100 mL) e seco in vacuo a 50°C para fornecer o composto do título, 6 na forma de um sólido esbranquiçado (19,7 g, 88%); Rt 2,28 min (Método 1a); m/z 590 (M+H)+ (ES+); 1H RMN δ: 2,09 (3H, s), 2,16 (1H, dd), 2,36-2,42 (1H, m), 2,52-2,58 (1H, m), 3,11-3,14 (4H, m), 3,41-3,44 (4H, m), 3,67 (1H, dd), 3,74-3,79 (2H, m), 4,04 (1H, dd), 4,58 (2H, dd), 6,75 (2H, br s), 6,85 (1H, br d), 6,97-7,03 (3H, m), 7,26-7,34 (2H, m), 7,77-7,80 (3H, m), 8,34 (1H, s) e 12,32 (1H, s). Composto (Ia): 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-Triazol-1-il)metil)-5- (2,4-difluoro fenil)tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3- metilfenil)piperazin-1-il)-N-((1S,2S)-2-hidroxiciclo-hexil)benzamida.

[0075] A uma mistura do intermediário 6 (100 mg, 0,17 mmol), EDCI (65 mg, 0,34 mmol) e DMAP (2,07 mg, 0,017 mmol) em piridina (1,0 mL) foi adicionado cloreto de (1S,2S)-2-aminociclohexanol (51,4 mg, 0,34 mmol). A mistura de reação foi agitada à RT durante 16 h e foi então diluída com DCM (8,0 mL) e lavada com ácido clorídrico a 1 M (2,0 mL). A mistura foi passada através de um separador de fases e as fases orgânicas foram evaporadas in vacuo. O produto bruto obtido dessa maneira foi purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, 12 g, 05% de MeOH em EtOAc, eluição em gradiente) para produzir o composto do título, (Ia) na forma de um sólido branco (75 mg, 64%).

Preparação dos Compostos (Ib-Id)

[0076] O restante dos exemplos de compostos da invenção foi preparado de uma maneira similar através do acoplamento do intermediário 6 ácido benzoico com o estereoisômero individual apropriado de 2-amino ciclohexanol. Estes compostos estão prontamente disponíveis em fontes comerciais. Os materiais obtidos na Sigma Aldrich foram fornecidos na forma dos sais cloridrato para os quais foram especificas as enanciopurezas a seguir: (1S,2S) isômero trans, >98% ee; (1R, 2R) isômero trans, >98% ee; (1R, 2S) isômero cis >97% ee; (1S, 2R) isômero cis, >97% ee.

[0077] Os dados dos espectros de LCMS e 1H RMN para os exemplos dos compostos (Ia-Id) são apresentados a seguir (Tabela 2). TABELA 2: Dados Analíticos e Espectrais para os Compostos da Invenção

TESTE BIOLÓGICO: MÉTODOS EXPERIMENTAIS Avaliação do crescimento de fungo planctônico: Ensaio de microdiluição de meio

[0078] Este ensaio foi conduzido utilizando um método modificado publicado por EUCAST (Rodriguez-Tudela, et al., 2008). Esporos de Aspergillus fumigatus (NCPF2010, NCPF7010 [mutação na metionina 220], NCPF7099 [mutação na Glicina G54]) de Public Health England, Wiltshire; mutantes TR34/L98H do St Louis Hospital, Paris, França; mutantes TR46/Y121F/T289A da University of Delhi, Delhi, Índia) foram cultivados em Sabouraud dextrose com ágar durante 3 dias. Uma suspensão estoque de esporos foi preparada partindo de uma cultura em Sabouraud dextrose com ágar através da lavagem com PBS-tween (10 mL; solução salina tamponada com fosfato contendo 0,05% Tween- 20, 100 U/mL de penicilina e 100 U/mL de estreptomicina). A contagem de esporos foi avaliada utilizando um hemocitômetro Neubauer e então ajustada em 106 esporos/mL com PBS. Uma suspensão de trabalho de esporos (2 x 105 esporos/mL) foi preparada em BSA MOPS RPMI-1640 esterilizado por filtração (50 mL; RPMI-1640 contendo 2 mM de L- glutamina, 0,5% de BSA, 2% de glicose, 0,165 M de MOPS, tamponado até pH 7 com NaOH).

[0079] Para o ensaio, o BSA MOPS RPMI-1640 (50 pL/poço) foi primeiramente adicionado por toda a placa de 384 poços (Número de Catálogo 353962, BD Falcon, Oxford, UK). Os compostos de teste (0,5 μL de solução de DMSO) foram então adicionados em quadruplicata utilizando um Integra VIAFLO 96 (Integra, Zizers, Suíça) e misturados bem utilizando uma misturadora de placas. Subsequentemente 50 μL da suspensão de trabalho de esporos preparada anteriormente foram adicionados em todos os poços exceto nos poços de controle sem esporos. Para os poços de controle sem esporos, foi adicionada ao invés dessa a solução de BSA MOPS-RPMI (50 μL/poço). A placa foi coberta com uma tampa de plástico e incubada (35°C com ar ambiente) durante 48 h. A DO de cada poço em 530 nm foi determinada utilizando um multi-scanner (Clariostar: BMG, Buckinghamshire, UK). A porcentagem de inibição para cada poço foi calculada e os valores de MIC50, MIC75 e MIC90 foram calculados partindo da curva de resposta à concentração gerada para cada composto de teste.

[0080] A verificação do conjunto de fungos foi conduzida pela Eurofins Panlabs Inc. Os valores de MIC e MIC50 dos artigos de teste foram determinados seguindo as normas de procedimento do CLSI: métodos para microdiluição de meio para levedura (CLSI M27-A2), (CLSI, 2002) e para fungos filamentosos (CLSI M38-A), (CLSI, 2008).

Infecção com Aspergillus fumigatus de células epiteliais bronquiais

[0081] As células BEAS2B foram inoculadas em placas de 96 poços (100 μL; 3 x 104 células / poço; No de Catálogo 3596, Sigma Aldrich, Dorset, UK) em 10% FBS RPMI-1640 e foram então incubadas (37°C, 5% de CO2) durante um dia antes do experimento. Os compostos de teste (0,5 μL de solução de DMSO) ou o veículo (DMSO) foram adicionados em cada poço para fornecer uma concentração de DMSO final de 0,5%. As células BEAS2B foram incubadas com os compostos de teste durante 1 h (35oC, 5% de CO2) antes da infecção com suspensão de conídios de Aspergillus fumigatus (20 uL; Public Health England) (0,5 x 105 /mL em 10% FBS RPMI-1640). A placa foi incubada durante 24 h (35°C, 5% de CO2). O sobrenadante (50 uL) foi coletado e transferido para uma placa de PCR (No de Catálogo L1402-9700, Starlab, Milton Keynes, UK), que foi congelada (-20°C) até o uso. Após o descongelamento, o sobrenadante (5 μL) foi diluído 1:20 através da adição da solução R7-PBS (95 μL; 1:4 R7 para PBS; Bio-Rad Laboratories, Redmond, WA, USA). Os níveis de galactomanana nestas amostras (50 μL) foram medidos utilizando Platelia GM-EIA kits (BioRad Laboratories, Redmond, WA, USA). A porcentagem de inibição para cada poço foi calculada e o valor de IC50 foi calculado partindo da curva de resposta à concentração gerada para cada composto de teste.

Infecção com Aspergillus fumigatus de bicamadas de alvéolos humanos

[0082] Modelos de alvéolos humanos in vitro, consistindo de uma bicamada de células epiteliais e células endoteliais alveolares humanas, foram preparados como descrito anteriormente (Hope et al., 2007). Este sistema permite a administração de um composto de teste aos compartimentos superior (espaço de "ar") e/ou inferior (espaço "sistêmico"). Esta flexibilidade foi utilizada para explorar os efeitos do tratamento de combinação através da dosagem do Composto (I) na câmara superior e posaconazol ou outros agentes antifúngicos na câmara inferior. As células endoteliais primárias da artéria pulmonar humana (HPAEC) foram coletadas e diluídas até 106 células/mL em meio EGM-2 (Lonza, Basel, Suíça). Os transwells foram invertidos e a suspensão de células (100 μL/poço) aplicada na base de cada transwell. Os transwells invertidos foram incubados à RT dentro de uma capela de fluxo laminar durante 2 h após as quais foram virados para cima. O meio EGM-2 foi adicionado nos compartimentos inferior (700 μL/poço) e superior (100 μL/poço) e os transwells foram incubados durante 48 h (37oC, 5% de CO2). O meio EGM-2 no compartimento inferior foi então substituído com meio EGM-2 fresco. As células A549 foram coletadas e diluídas até 5x105 células/mL em 10% de EBM, então adicionadas no compartimento superior (100 μL/poço) de todos os transwells e as placas foram incubadas durante 72 h (37oC, 5% de CO2). Conídios de Aspergillus fumigatus s sensível a itraconazol (NCPF2010) e cepas resistentes a itraconazol (TR34-L98H) foram cultivados separadamente em Sabouraud dextrose com ágar durante 3 dias. Uma suspensão estoque de conídios de qualquer uma das cepas foi preparada partindo da cultura em Sabouraud dextrose com ágar através da lavagem com PBS-tween (10 mL; PBS contendo 0,05% de Tween-20, 100 U/mL de Penicilina e 100 U/mL de Estreptomicina). A contagem de conídios foi avaliada utilizando um hemocitômetro Neubauer e ajustada a 106 conídios/mL com PBS. Um estoque de trabalho de conídios foi preparado em EBM (105 conídios/mL) imediatamente antes do uso.

[0083] Os compostos de teste e de referência (ou DMSO puro como o veículo) foram adicionados nos poços apropriados de placas de 24 poços (3 μL/poço contendo 600 μL de 2% FBS EBM) para o tratamento do compartimento inferior e nas placas de 96 poços (1 μL/poço contendo 200 μL de 2% FBS EBM) para o tratamento do compartimento superior, para fornecer uma concentração de DMSO final de 0,5%. O meio no compartimento superior foi aspirado e foi adicionado o que continha os compostos de teste e de referência apropriados ou o veículo (100 μL/poço). Os transwells foram então transferidos para a placa de 24 poços contendo os compostos de teste e de referência ou o veículo DMSO. Após incubação durante 1 h (35oC, 5% de CO2) a suspensão de conídios (10 μL/poço) foi adicionada no compartimento superior de cada transwell. As placas foram então incubadas durante 24 h (35oC, 5% de CO2). Os sobrenadantes de cada compartimento (5 μL/compartimento) foram coletados e armazenados (-20oC). O meio foi substituído diariamente após a coleta dos sobrenadantes e todos os poços foram tratados com os compostos de teste e de referência ou com DMSO, como descrito anteriormente, durante 3 dias. As amostras continuaram a ser coletadas até que o crescimento fúngico fosse visível ao olho nu em todos os transwells. Os níveis de GM no sobrenadante no compartimento inferior foram então medidos por ELISA (BioRad, CA, USA) como um índice de invasão de Aspergillus fumigatus.

Viabilidade Celular: Ensaio de Resazurin

[0084] As células BEAS2B foram inoculadas nas placas de 384 poços (100 μL; 3000 / poço /; BD Falcon, No de Catálogo 353962) em RPMI-LHC8 (meios RPMI-1640 e LHC8 combinados com proporções iguais) um dia antes do experimento. Para os poços de controle sem células, foi adicionado RPMI-LHC8 (100 μL). Os compostos de teste (0,5 μL de uma solução de DMSO) foram adicionados para fornecer uma concentração de DMSO final de 0,5% utilizando um Integra VIAFLO 96 (Integra, Zizers, Suíça). As células BEAS2B foram incubadas com cada composto de teste durante 1 dia (37°C / 5% de CO2 em RPMI-LHC8). Após a adição da solução estoque de resazurin (5 μL, 0,04%) as placas foram incubadas durante mais 4 h (37°C / 5% de CO2). A fluorescência de cada poço a 545 nm (excitação) e 590 nm (emissão) foi determinada utilizando um multi-scanner (Clariostar: BMG Labtech). A porcentagem de perda de viabilidade celular foi calculada para cada poço em relação ao tratamento com o veículo (0,5% DMSO). Quando apropriado, um valor de CC50 foi calculado partindo da curva de resposta à concentração gerada partindo da curva de resposta à concentração para cada composto de teste.

Atividade Antifúngica In Vivo

[0085] Aspergillus fumigatus (ATCC 13073 [cepa: NIH 5233], American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA) foi crescido em placas de Malt agar (Nissui Pharmaceutical, Tóquio, Japão) durante 67 dias à RT (24 ± 1°C). Os esporos foram despejados assepticamente das placas com ágar e suspensos em água destilada esterilizada com 0,05% de Tween 80 e 0,1% de ágar. No dia da infecção, as contagens de esporos foram avaliadas pelo hemocitômetro e o inóculo foi ajustado para a obtenção de uma concentração de 1,67 x io8 esporos mL-1 de solução salina fisiológica. Para induzir a imunossupressão e a neutropenia, camundongos A/J (machos, 5 semanas de idade) receberam doses de hidrocortisona (Sigma H4881; 125 mg/kg, sc,) nos dias 3, 2 e 1 antes da infecção e de ciclofosfamida (Sigma C0768; 250 mg/kg, i.p.) 2 dias antes da infecção. No dia 0, os animais foram infectados com a suspensão de esporos (30 μL de forma intranasal).

[0086] A substâncias de teste foram administradas de forma intranasal (35 μL de uma suspensão (0,0032-10,0 mg/mL de substância de fármaco em solução salina fisiológica) uma vez ao dia, apenas nos dias 1, 2 e 3 (representando assim um regime de tratamento terapêutico). Para o tratamento profilático estendido, os compostos de teste (35 μL de uma suspensão de 0,0032 ou 0,016 mg/mL em solução salina fisiológica) foram administrados de forma intranasal uma vez ao dia durante sete dias. Um grupo recebeu dose 30 min antes da infecção no dia 0, mas não subsequentemente, enquanto que um segundo grupo recebeu doses adicionais nos dias 1, 2 e 3 após a infecção. Os efeitos destes paradigmas de tratamento foram comparados com aqueles obtidos quando o tratamento era restrito em outros grupos a um dia ou 30 min antes da inoculação e então nos dias 1, 2 e 3 após a infecção em ambos os casos. Em um grupo final, a dosagem foi limitada ainda mais com os animais recebendo doses apenas duas vezes, uma vez ao dia e 30 min antes da infecção.

[0087] Os pesos corporais dos animais foram monitorados diariamente e em 6 h após a última dose de fármaco ser administrada no dia 3, os animais foram anestesiados, as traqueias canuladas e o sangue do BALF e o tecido pulmonar foram coletados. Os níveis de IL- 6 e TNFα no soro foram determinados utilizando o kit de ELISA de IL-6 ou TNF-α de camundongo Quantikine® (R&D systems, Inc., Minneapolis, MN, USA) respectivamente. A GM de Aspergillus no soro foi determinada utilizando Platelia GM-EIA kits (Bio-Rad Laboratories, Redmond, WA, USA). O índice de corte (COI) foi calculado através da fórmula: Índice de corte = DO na amostra / DO no controle de corte fornecido no kit. Para ensaios de carga fúngica nos tecidos, 100 mg de tecido pulmonar foram removidos assepticamente e homogeneizados em 0,2 mL de 0,1% de agar em água destilada esterilizada. Os homogenados pulmonares diluídos em série foram plaqueados em placas de Malt agar (50 μL/placa) e incubados a 24±1°C durante 72 a 96 h. As colônias de A. fumigatus em cada placa foram contadas e o título fúngico presente nas mesmas foram apresentados aqui na forma de UFCs por grama de tecido pulmonar.

[0088] Para a determinação do conteúdo de DNA de Aspergillus fumigatus, o DNA foi extraído dos pulmões infectados ou de Aspergillus fumigatus com o Isoplant (Nippon Gene) de acordo com a instrução do fabricante. Os tecidos cortados em <3 mm em qualquer comprimento foram misturados com a solução I (tampão de extração: 300 μL). A solução II (tampão de lise; cloreto de benzila:150 μL) foi então adicionada nas misturas seguida pela agitação com misturador de vortex durante 5 segundos. Após incubação a 50°C durante 15 min, a solução III (acetato de sódio, pH5,2: 150 μL) foi adicionada nas misturas agitadas vigorosamente durante 1-3 segundos e então incubadas em gelo durante 15 min. Após a incubação, as misturas forma centrifugadas a 12.000 g durante 15 min a 4°C. O DNA nas fases aq superiores dos sobrenadantes foi precipitado com etanol 100% (x 2,5 vol), lavado com etanol 70% e dissolvido em 5-10 μL de tampão TE.

[0089] A amplificação do DNA foi realizada Premix Ex TaqTM (Takara Bio) na placa de reação óptica de 96 poços. Os fragmentos do gene do rRNA 18S de Aspergillus fumigatus foram amplificados com o par de iniciadores; 5’-GGCCCTTAA ATAGCCCGGT-3’ (SEQ ID No. 1) e 5’-TGAGCCGATAGTCCCCCTAA-3’ (SEQ ID No. 2) e a sonda de hibridização; 5’-FAM-AGCCAGCGGCCCGCAAATG-TAMRA-3’ (SEQ ID No. 3). A PCR em tempo real foi realizada em um (25 μL contendo 50 ng de DNA de camundongo com 200 nM de sonda) sob as condições a seguir: incubação inicial durante 2 min a 50°C, desnaturação inicial durante 10 min a 95°C, seguida por 55 ciclos de 15 segundos a 95°C e 1 min a 65°C. As quantidades de DNA de Aspergillus fumigatus em 50 ng de DNA de pulmão de camundongo foi avaliada partindo da curva padrão com 0,05-50.000 pg de DNA de Aspergillus fumigatus.

Sumário dos Resultados de Seleção

[0090] O Composto (I) exibe atividade de inibição potente contra o crescimento de fungos planctônicos que é avaliada em um ensaio de microdiluição de meio (Tabela 3). TABELA 3 Os Efeitos do Tratamento com Voriconazol, Posaconazol, Anfotericina B e Compostos (Ia-d) sobre o crescimento de fungos planctônicos de isolados de Aspergillus fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: 1. Ensaio de microdiluição de meio, n = 2-3.

[0091] Nestes ensaios, o Composto (Ia) em particular exibia potência significativamente maior versus tanto as cepas resistentes a posaconazol (NCPF7099, NCPF7100, TR34/L98H e TR46/Y121F/T289A), bem como a cepa sensível a posaconazol (NCPF2010), do que posaconazol, voriconazol e Anfotericina B.

[0092] Os Compostos (Ia e Ic) também demonstram atividade de inibição potente contra a infecção fúngica de células epiteliais bronquiais (Tabela 4). Neste sistema de ensaio os Compostos (Ia e Ic) exibiam potência significativamente maior que voriconazol e potência maior que posaconazol. A incubação com os Compostos (Ia, Ib, Ic e Id) tinha nenhum ou pouco efeito sobre a viabilidade das células epiteliais bronquiais BEAS2B nas concentrações indicadas a seguir. TABELA 4: Os efeitos do Tratamento com Voriconazol, Posaconazol, Anfotericina B e Compostos (Ia-d) sobre o crescimento de fungos planctônicos Aspergillus fumigatus (NCPF2010), sobre a infecção fúngica de células epiteliais bronquiais BEAS2B e sobre a viabilidade das células BEAS2B. Valores de MIC50 / CC50 para o tratamento indicado (nM) Tratamento Infecção de células BEAS2B1 Viabilidade de Células BEAS2B2

Notas de Rodapé da Tabela: 1. Células epiteliais bronquiais; n = 1-3; 2. n = 3; nt: não testado.

[0093] Os efeitos do Composto (I) sobre o crescimento de uma faixa ampla de agentes patogênicos fúngicos foram avaliados utilizando os métodos do CLSI para microdiluição de meio. Foi observado que o Composto (Ia) é um inibidor potente do crescimento de Aureobasidium pullulans, Rhizopus oryzae, Cryptococcus neoformans, Chaetomimum globosum, Penicillium chrysogenum, Fusarium graminararum, Cladosporium herbarum e Trichophyton rubrum bem como algumas Candida spp. (notavelmente Candida albicans, Candida glabrata e Candida krusei) e alguns Aspergillus spp. (notavelmente Aspergillus flavus) (Tabela 5). TABELA 5 Os efeitos de inibição do Composto (Ia) sobre o crescimento de uma faixa de espécies fúngicas.

Notas de Rodapé da Tabela: MIC50 / MIC100 = concentração necessária para 50% e 100% de inibição do crescimento fúngico por inspeção visual (CLSI). ND: não determinado

[0094] As atividades de inibição sobre a invasão nos alvéolos de Aspergillus fumigatus (cepa sensível a azol: NCPF2010; e cepa resistente a azol TR34/L98H) foram determinadas através da medida da galactomanana (GM) na câmara inferior das bicamadas de alvéolos humanos 1 dia após a infecção. A administração do Composto (Ia) na câmara apical produziu inibição dependente da concentração dos níveis de GM na câmara inferior, com efeitos máximos excedendo 90% para ambas as cepas (Tabelas 6 e 7). TABELA 6 Efeitos do Composto (Ia) e Posaconazol sobre a invasão de Aspergillus fumigatus (cepa suscetível a azol: NCPF2010) na câmara inferior nas bicamadas de alvéolos humanos (transwells).

Nota de Rodapé da Tabela: n = 3. TABELA 7 Efeitos do Composto (Ia) e Posaconazol sobre a invasão de Aspergillus fumigatus (cepa resistente a azol: TR34/L98H) na câmara inferior nas bicamadas de alvéolos humanos (transwells).

Nota de Rodapé da Tabela: n = 1

[0095] Quando as atividades de inibição foram monitoradas durante vários dias após a infecção, foi observado que os efeitos de inibição iniciais da monoterapia com o Composto (Ia) (0,1 μg/mL na câmara superior) ou posaconazol (0,01 μg/mL na câmara inferior) desapareciam rapidamente (Tabela 8). Em contraste, o tratamento combinado com o Composto (Ia) na câmara superior e posaconazol na câmara inferior (como mostrado anteriormente) levou à inibição prolongada da invasão após a infecção. Consequentemente, o DFB50 para o tratamento de combinação era de 3,63 dias, muito mais longo que os valores para qualquer composto individualmente (Tabela 8). Este efeito sinérgico ou pelo menos aditivo da terapia de combinação também ocorreu quando tratamento com o Composto (Ia) foi combinado com aquele de itraconazol, voriconazol ou caspofungina (resultados não mostrados). TABELA 8 Efeitos do Composto (Ia), Posaconazol e da combinação de tratamentos sobre a invasão de Aspergillus fumigatus (NCPF2010) na câmara inferior nas bicamadas de alvéolos humanos (transwells).

Notas de Rodapé da Tabela: 1. Dosado em 0,1 μg/mL; 2. Dosado em 0,01 μg/mL; DFB50: Dias que levam para atingir uma carga fúngica de 50% do controle

[0096] Em adição, este tratamento de combinação foi testado em bicamadas infectadas com a cepa resistente a azol de Aspergillus fumigatus: TR34-L98H (Tabela 9) A monoterapia com o Composto (Ia) (0,3 μg/mL) na câmara superior ou com posaconazol (0,1 μg/mL) na câmara inferior exibiu efeito limitado. Em contraste, a combinação do Composto (Ia) e posaconazol exibiu efeitos de inibição notáveis sobre a invasão fúngica na câmara inferior. TABELA 9 Efeitos do Composto (Ia), de Posaconazol e da combinação de tratamentos sobre a invasão de Aspergillus fumigatus (cepa resistente a azol: TR34-L98H) na câmara inferior no sistema de células da bicamada alveolar (transwells).

Notas de Rodapé da Tabela: 1. Dosado em 0,3 μg/mL; 2. Dosado em 0,1 μg/mL; DFB50: Dias que levam para atingir uma carga fúngica de 50% do controle

[0097] Quando fornecido de forma intranasal aos camundongos neutropênicos imunocomprometidos nos dias 1, 2 e 3 após a inoculação (tratamento terapêutico), o Composto (Ia) exibiu alguma proteção contra a perda de peso corporal, medida ao longo de 3 dias, causada pela infecção com Aspergillus fumigatus em doses menores que as que eram requeridas de posaconazol. (Tabela 10). TABELA 10: Os Efeitos do Tratamento com o Composto (Ia) ou Posaconazol sobre a perda de peso corporal de camundongos neutropênicos imunocomprometidos, causada pela infecção com A. fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: 1. % de perda de peso causada pela infecção com A. fumigatus em comparação com o peso do animal no dia 1 quando o tratamento foi iniciado; 2. Dois estudos separados realizados.

[0098] Além disso, o tratamento terapêutico com o Composto (Ia) exibiu efeitos superiores ao do posaconazol sobre a carga fúngica nos pulmões, sobre as concentrações de galactomanana no soro e o conteúdo de DNA de Aspergillus fumigatus nos pulmões. Estes dados para o Composto (Ia) são mostrados na Tabela 11 e nas Figs. 1, 2 e 3. TABELA 11: Os Efeitos do Tratamento Profilático e Terapêutico com o Composto (Ia) sobre a UFC nos pulmões, sobre as concentrações de galactomanana no soro e sobre o DNA de Aspergillus nos pulmões de camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: Os dados para carga fúngica são mostrados na forma da média ± desvio padrão da média (SEM; n = 6).

[0099] Os valores de ID50 para posaconazol e o Composto (Ia), administrados de forma terapêutica em experimentos independentes, também são apresentados a seguir (Tabela 12). TABELA 12: Valores de ID50 para o Tratamento Terapêutico com Posaconazol e o Composto (Ia) sobre a carga fúngica nos pulmões em concentrações de galactomanana no soro e sobre o conteúdo de DNA de Aspergillus fumigatus DNA no tecido pulmonar, em camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: nt: não testado

[00100] Também foi observado que o tratamento terapêutico com o Composto (Ia) inibe as concentrações de citocina no soro em camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus. (Tabelas 13 e 14; Figs. 1, 2 e 3). Os valores de ID50 calculados para a inibição dos níveis de citocina no soro (Tabela 14) são muito similares àqueles observados para a carga fúngica nos pulmões, para as concentrações de galactomanana no soro e para o conteúdo de DNA de Aspergillus fumigatus nos pulmões (acima). TABELA 13: Os efeitos do tratamento terapêutico com o Composto (Ia) sobre os níveis de IL-6 e TNFα no soro de camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: Os dados para as concentrações de biomarcadores são mostrados na forma da média ± desvio padrão da média (SEM), N = 6. TABELA 14: Valores de ID50 para o Tratamento Terapêutico com o Composto (Ia) sobre os níveis de IL-6 e TNFα no soro nos camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

[00101] Foram avaliados os efeitos da dosagem profilática estendida com o Composto (Ia) nos camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus. Foi observado que a profilaxia estendida com o Composto (Ia) inibia a carga fúngica nos pulmões, bem como as concentrações de GM tanto no BALF quanto no soro, em doses 25 vezes menores que aquelas utilizadas em um estudo anterior (Tabela 15). Além disso, os dados sugerem um acúmulo de efeitos antifúngicos nos pulmões em dosagens repetidas uma vez que sete dias de profilaxia produziram efeitos antifúngicos maiores que o tratamento profilático durante um único dia. A persistência de ação do composto nos pulmões é sugerida pela descoberta de que o tratamento nos dias -7 até o dia 0 gerava efeitos antifúngicos superiores no dia 3 que aqueles resultantes do tratamento nos dias -1 e 0, apenas. TABELA 15 Efeitos da dosagem profilática estendida do Composto (Ia) sobre a carga fúngica (UFC) nos pulmões e sobre as concentrações de GM no BALF e no soro em camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus.

Notas de Rodapé da Tabela: 1. O valor de N era cinco para todos os grupos tratados com veículo e fármaco; 2. Os dados para carga fúngica e os níveis de GM são mostrados na forma da média ± desvio padrão da média e da porcentagem de inibição, em relação ao veículo.

Farmacocinética In Vivo

[00102] É um procedimento comumente utilizado que os agentes terapêuticos pulmonares sejam dosados nos pulmões de animais, por exemplo, camundongos e plasma coletado em vários pontos de tempo após a dosagem com a finalidade de caracterizar a exposição sistêmica resultante para o composto administrado.

[00103] O composto da invenção pode ser testado em tais sistemas in vivo mencionados anteriormente.

SUMÁRIO DO PERFIL BIOLÓGICO DO COMPOSTO (I)

[00104] Foi descoberto que o Composto (I) na forma de todos os quatro estereoisômeros é um inibidor potente do crescimento de Aspergillus fumigatus planctônico e da infecção de células epiteliais bronquiais. O Composto (Ia) inibiu o crescimento de isolados de Aspergillus fumigatus resistentes a posaconazol e resistentes a voriconazol, demonstrando potência maior que posaconazol, voriconazol e Anfotericina B contra estas cepas. Também foi observado que uma faixa ampla de outros fungos patogênicos é sensível ao Composto (Ia). Foram mostrados efeitos sinérgicos ou pelo menos aditivos para o Composto (Ia) em combinação com posaconazol, itraconazol, voriconazol e caspofungina. In vivo, nos camundongos neutropênicos imunocomprometidos infectados com Aspergillus fumigatus, o Composto (Ia), demonstrou inibição potente da infecção com Aspergillus fumigatus, bem como a resposta imunológica pulmonar associada quando dosado de forma terapêutica ou profilática. O Composto (Ia) também era eficiente na redução da perda de peso corporal dependente da infecção. Estes efeitos de inibição eram superiores àqueles de posaconazol. É clinicamente significativo que os efeitos antifúngicos benéficos do Composto (I) sejam observados em um cenário terapêutico.

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Claims (15)

1. Composto caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I):

em que é: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-N- (2-hidroxiciclo-hexil)benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que está na forma de um estereoisômero selecionado dos Compostos (Ia) e (Ib):

ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos mesmos.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é o Composto (Ia) de fórmula:

em que é: 4-(4-(4-(((3R,5R)-5-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-5-(2,4- difluorofenil)tetra-hidrofuran-3-il)metóxi)-3-metilfenil)piperazin-1-il)-N- ((1S, 2S) - 2-hidroxiciclo-hexil) benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é fornecido na forma de um estereoisômero único.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para uso como um produto farmacêutico.

6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de micoses ou para uso na prevenção ou no tratamento de doença associada a micoses.

7. Composto para uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a micose é causada por Aspergillus spp., tal como Aspergillus fumigatus ou Aspergillus flavus, especialmente Aspergillus fumigatus.

8. Composto para uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a micose é causada por Aureobasidium pullulans, Rhizopus oryzae, Cryptococcus neoformans, Chaetomimum globosum, Penicillium chrysogenum, Fusarium graminararum, Cladosporium herbarum, Trichophyton rubrum ou Candida spp., por exemplo, Candida albicans, Candida glabrata ou Candida krusei.

9. Composto para uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a micose é uma micose resistente a azol.

10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, opcionalmente em combinação com um ou mais diluentes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

11. Composto para uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que é em combinação com um segundo ingrediente ativo ou adicional, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 10, que compreende um segundo ingrediente ativo ou adicional, selecionado de agentes antifúngicos que incluem agentes antifúngicos de azol (tais como voriconazol, posaconazol, itraconazol ou isavuconazol), anfotericina B, uma equinocandina (tal como caspofungina) e um inibidor de 3-hidróxi-3-metil-glutaril-CoA redutase (tal como lovastatina, pravastatina ou fluvastatina).

12. Composto para uso ou uma composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado(a) pelo fato de que o segundo ingrediente ativo ou adicional é selecionado de voriconazol, posaconazol, itraconazol e caspofungina.

13. Processo para preparação do composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a reação de um composto de fórmula (6):

ou um sal do mesmo, com 2-aminociclohexanol ou um sal do mesmo.

14. Processo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (Ia):

e 2-aminociclohexanol é (1S, 2S) -2-aminociclohexanol:

ou um sal do mesmo.

15. Processo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula (I) é um composto de fórmula (Ib):

e 2-aminocyclohexanol é (1R,2R)-2-aminocyclohexanol:

ou um sal do mesmo.

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