ES2765282T3 - Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad, que contiene la misma como ingrediente activo - Google Patents
Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad, que contiene la misma como ingrediente activo Download PDFInfo
- Publication number
- ES2765282T3 ES2765282T3 ES16904146T ES16904146T ES2765282T3 ES 2765282 T3 ES2765282 T3 ES 2765282T3 ES 16904146 T ES16904146 T ES 16904146T ES 16904146 T ES16904146 T ES 16904146T ES 2765282 T3 ES2765282 T3 ES 2765282T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- growth factor
- epidermal growth
- fusion protein
- human epidermal
- spider venom
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 105
- 239000002708 spider venom Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 101
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 title claims abstract description 100
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 title claims abstract description 100
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 title claims abstract description 100
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 31
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims description 23
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 title claims description 17
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 51
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 33
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 15
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 claims description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 17
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 12
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 12
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 12
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 12
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 10
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 8
- 101710099833 Venom protein Proteins 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 8
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 6
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 6
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 6
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 101000795829 Phoneutria nigriventer Delta-ctenitoxin-Pn2a Proteins 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 241000238907 Phoneutria nigriventer Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- -1 aliphatic glycerol ester Chemical class 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCO WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N Sildenafil Natural products CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 2
- 108010052164 Sodium Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000018674 Sodium Channels Human genes 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 2
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 2
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000012094 cell viability reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 101150109249 lacI gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 201000011264 priapism Diseases 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- DEIYFTQMQPDXOT-UHFFFAOYSA-N sildenafil citrate Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 DEIYFTQMQPDXOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 2
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 2
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- CFMYXEVWODSLAX-QOZOJKKESA-N tetrodotoxin Chemical compound O([C@@]([C@H]1O)(O)O[C@H]2[C@@]3(O)CO)[C@H]3[C@@H](O)[C@]11[C@H]2[C@@H](O)N=C(N)N1 CFMYXEVWODSLAX-QOZOJKKESA-N 0.000 description 2
- 229950010357 tetrodotoxin Drugs 0.000 description 2
- CFMYXEVWODSLAX-UHFFFAOYSA-N tetrodotoxin Natural products C12C(O)NC(=N)NC2(C2O)C(O)C3C(CO)(O)C1OC2(O)O3 CFMYXEVWODSLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 229940094720 viagra Drugs 0.000 description 2
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- HFBFSOAKPUZCCO-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N HFBFSOAKPUZCCO-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N Ala-Trp-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YQNBILXAUIAUCF-CIUDSAMLSA-N Asn-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YQNBILXAUIAUCF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- CSEJMKNZDCJYGJ-XHNCKOQMSA-N Asp-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O CSEJMKNZDCJYGJ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- RXBGWGRSWXOBGK-KKUMJFAQSA-N Asp-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RXBGWGRSWXOBGK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 101710199851 Copy number protein Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- BUIYOWKUSCTBRE-CIUDSAMLSA-N Cys-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O BUIYOWKUSCTBRE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZJBWJHQDOIMVLM-WHFBIAKZSA-N Cys-Cys-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O ZJBWJHQDOIMVLM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PFAQXUDMZVMADG-AVGNSLFASA-N Cys-Gln-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PFAQXUDMZVMADG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BNCKELUXXUYRNY-GUBZILKMSA-N Cys-Lys-Glu Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N BNCKELUXXUYRNY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CYHMMWIOEUVHHZ-IHRRRGAJSA-N Cys-Met-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CYHMMWIOEUVHHZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N Cys-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002714 Extracts of rosemary Substances 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N Glu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N Glu-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O FKGNJUCQKXQNRA-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OCRQUYDOYKCOQG-IRXDYDNUSA-N Gly-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OCRQUYDOYKCOQG-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- LSQHWKPPOFDHHZ-YUMQZZPRSA-N His-Asp-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N LSQHWKPPOFDHHZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MYZMQWHPDAYKIE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- FKYKZHOKDOPHSA-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FKYKZHOKDOPHSA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- GYXVUTAOICLGKJ-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GYXVUTAOICLGKJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 1
- 239000004902 Softening Agent Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N Thr-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- IYHRKILQAQWODS-VJBMBRPKSA-N Trp-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N IYHRKILQAQWODS-VJBMBRPKSA-N 0.000 description 1
- YLRLHDFMMWDYTK-KKUMJFAQSA-N Tyr-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 YLRLHDFMMWDYTK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 150000005827 chlorofluoro hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000005080 cortical synaptosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000008269 hand cream Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N monoethyl carbonate Chemical compound CCOC(O)=O CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000012875 nonionic emulsifier Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 230000021148 sequestering of metal ion Effects 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000009056 telangiectasis Diseases 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010079202 tyrosyl-alanyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000037331 wrinkle reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
- A61K8/925—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of animal origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43513—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae
- C07K14/43518—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae from spiders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
Description
DESCRIPCIÓN
Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad, que contiene la misma como ingrediente activo.
Campo técnico
La presente invención se refiere a una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende la misma como componente efectivo.
Técnica antecedente
La piel está compuesta de epidermis, dermis y tejido subcutáneo. Mientras que proporciona protección contra un ataque de microbios que se introducen desde el exterior, la piel juega un papel muy importante para mantener la humedad y la temperatura corporal. La epidermis desempeña un papel de protección de la piel, regula la temperatura corporal y mantiene la humedad corporal, y está compuesta por una matriz extracelular que está relacionada con la elasticidad y la flexibilidad de la piel. La dermis está directamente relacionada con el envejecimiento de la piel.
Al unirse a un receptor para un factor de crecimiento epidérmico presente en una superficie de una célula, el factor de crecimiento epidérmico humano (hEGF) induce la dimerización de un receptor para un factor de crecimiento epidérmico. Un receptor dimérico para un factor de crecimiento epidérmico activa la tirosina quinasa presente en el receptor para inducir un sistema de transducción de señales intracelular. Como resultado de esos procesos, se promueve la glucólisis y la síntesis de proteínas en una célula, lo que finalmente conduce al crecimiento celular.
El factor de crecimiento epidérmico que juega un papel importante en la regeneración de la piel disminuye de acuerdo con el progreso del envejecimiento, y una disminución en el factor de crecimiento epidérmico provoca una reducción en la proliferación y en la transferencia de las células de la piel, y por lo tanto fenómenos como el envejecimiento de la piel, aumento de las arrugas y una reducción en la elasticidad de la piel se exhiben en consecuencia.
El PnTx2-6 como el veneno de araña de una araña errante brasileña (Phoneutria nigriventer) está compuesto por 403 nucleótidos que consisten en muchos glutamatos y péptidos señal. Se sabe que PnTx2-6 tiene influencia en un flujo a través de un canal de iones de sodio e induce una erección en una rata anestesiada.
Como el veneno de araña de una araña errante brasileña, se conocen 100 o más tipos de polipéptidos con un tamaño de 3.500 a 9.000 Da. Al inducir la secreción de acetilcolina y glutamato en forma sensible a TTX (tetrodotoxina), aumenta la introducción de iones de sodio en un sinaptosoma cortical, evitando así la inactivación de un canal de sodio. En consecuencia, se produce un fenómeno de priapismo.
Como uno de los venenos de araña de una araña errante brasileña que causa un fenómeno de priapismo, PnTx2-6 se ha estudiado continuamente en todo el mundo desde 2010 como una proteína natural que se puede utilizar como un sustituto del Viagra. Sin embargo, todavía no se conoce el mecanismo de trabajo intracelular preciso de PnTx2-6, y solamente se conocen pocos estudios relacionados con una producción a gran escala de PnTx2-6 para su uso como una proteína natural que puede sustituir al Viagra.
Mientras tanto, en el Registro de Patente Coreana No. 1613302, se divulga a "el polipéptido SV82 y una composición cosmética para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende la misma como componente efectivo". Además, en la Publicación de Solicitud de Patente Coreana No. 2015-0056022, se divulga a "una composición cosmética para mejorar la piel que comprende a una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico". Sin embargo, no se ha realizado ninguna descripción para la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende la misma como componente efectivo de la presente invención.
Descripción detallada de la invención
Problemas técnicos a resolver
La presente invención se diseña en vista de las circunstancias descritas anteriormente, y de acuerdo con la fusión del factor de crecimiento epidérmico humano a una proteína de veneno de araña, los inventores de la presente invención produjeron una nueva proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña teniendo un mayor efecto de la proliferación celular en la piel. La proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña no solamente puede promover la proliferación celular en la piel, sino que también tiene una excelente termoestabilidad. Por lo tanto, como resultado de la producción de diversas formulaciones cosméticas (por ejemplo, piel, esencia, loción y crema) que contienen la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo y de llevar a cabo una prueba cutánea, el
efecto de mejorar las arrugas de la piel y el mantenimiento de la elasticidad de la piel se confirmó con un sujeto de prueba. En consecuencia, se completó la presente invención
Medios técnicos para resolver los problemas
Para resolver los problemas descritos anteriormente, la presente invención proporciona una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
La presente invención también proporciona a un gen que codifica para la proteína de fusión mencionada anteriormente.
La presente invención también proporciona a un vector recombinante que comprende el gen mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona a una célula huésped transformada con el vector recombinante mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona un procedimiento para producir en una célula huésped a la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña, que comprende sobreexpresar a un gen que codifica para una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña transformando a una célula huésped con el vector recombinante mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona una composición cosmética para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende, como componente efectivo, una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
Efecto ventajoso de la invención
El procedimiento de producción en E. coli utilizando el gen con codones optimizados de E. coli que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención tiene una etapa de producción simplificada ya que las proteínas se expresan en forma de un cuerpo de inclusión en E. coil (Escherichia coli) y permite la producción a gran escala de las proteínas. Además, como la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña producida por el procedimiento mencionado anteriormente tiene termostabilidad y una excelente función para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel, se espera que la proteína de fusión se utilicé ventajosamente como materia prima de cosméticos funcionales.
Descripción breve de los dibujos
La Figura 1 es un dibujo esquemático que ilustra el proceso para preparar el plásmido recombinante (pET22b::ESV) que incluye a un gen que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV) y la transformación de E. coli con el plásmido.
La Figura 2 muestra los resultados de la expresión de E. coli y la determinación por separación de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (es decir, la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene el factor de crecimiento epidérmico humano fusionado con el amino terminal de la proteína de veneno de araña; ESV). La Fig. 2A muestra los resultados de la electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida que se ha llevado a cabo para determinar la presencia o la ausencia de la expresión: 1; marcador de tamaño, de 2 a 4; lisado celular bruto antes de la inducción de la expresión, 5 a 7; lisado celular bruto después de la inducción de la expresión, 8; proteínas solubles en agua totales después de la inducción de la expresión, 9; proteínas insolubles totales (es decir, cuerpo de inclusión) después de la inducción de la expresión, y la flecha; ESV esperado. La Figura 2B muestra los resultados de la electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que finalmente se ha separado utilizando una columna de níquel-agarosa. La Figura 2C muestra el resultado de determinar el dominio del factor de crecimiento epidérmico humano utilizando un kit de detección de EGF en el que se realizó la determinación para examinar el dominio del factor de crecimiento epidérmico humano de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña finalmente separada. En la Fig. 2C, C representa el control EGF y T representa una muestra de prueba.
La Figura 3 es una imagen fotográfica en la que se muestra el efecto de la proliferación de fibroblastos dérmicos después del tratamiento de fibroblastos dérmicos con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV) mediante tinción con cristal violeta.
La Figura 4 es una imagen fotográfica en la que la presencia o ausencia de la proliferación de fibroblastos dérmicos después del tratamiento de fibroblastos dérmicos con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV), que ha sido sometida a esterilización gamma o a esterilización a alta presión, se muestra para la determinación de la estabilidad térmica de la proteína de fusión, en la que la proliferación celular de los fibroblastos dérmicos se determinó por tinción con cristal violeta.
La Figura 5 es una gráfica que ilustra el resultado del efecto de proliferación de células HaCaT después del tratamiento de células HaCaT con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV).
La Figura 6 es una imagen fotográfica que muestra el efecto de la curación de heridas en células HaCaT después del tratamiento de células HaCaT con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV).
La Figura 7 es una gráfica que muestra la fusión entre las células HaCaT y la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña después de tratar a las células HaCaT en un multi-pocillo recubierto con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV).
Mejor(es) modo(s) para realizar la invención
Para lograr el objeto de la presente invención, la presente invención proporciona una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
El alcance de la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de acuerdo con la presente invención incluye a una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 2, y también equivalentes funcionales de la proteína. El término "equivalente funcional" indica a una proteína que tiene, como resultado de la adición, sustitución o deleción de un aminoácido, al menos 70%, preferiblemente al menos 80%, más preferiblemente al menos 90% e incluso más preferiblemente al menos 95% de homología de secuencia con la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 2, e indica a una proteína que exhibe sustancialmente la misma actividad fisiológica que la proteína representada por la SEQ ID NO: 2. La expresión "sustancialmente la misma actividad fisiológica" significa la actividad de mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel. Además, en la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña se incluye un fragmento, un derivado y un análogo de la misma. Los términos "fragmento", "derivado" y "análogo" que se utilizan en este documento indican aun polipéptido que tiene sustancialmente la misma función o actividad fisiológica que la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención.
La proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención consiste preferiblemente en 103 aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, y puede ser una proteína nueva que se produce por fusión entre el factor de crecimiento epidérmico humano que consiste en los aminoácidos 1 al 53 y la proteína del veneno de araña que consiste en los aminoácidos 54 al 103 de la secuencia de aminoácidos anterior.
La presente invención proporciona además a un gen que codifica para la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel. Este gen puede consistir en una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 de E. coli optimizada por codón, pero sin limitarse a los mismos.
El gen que codifica para la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un efecto incrementado en la proliferación celular de la piel de la presente invención, puede incluir una secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1. Además, los homólogos de la secuencia de nucleótidos también están dentro del alcance de la presente invención. Específicamente, el gen descrito anteriormente puede comprender a una secuencia de nucleótidos que tiene preferiblemente al menos 70%, más preferiblemente al menos 80%, aún más preferiblemente al menos 90%, y lo más preferiblemente al menos 95% de homología con la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1. El "% de homología de secuencia" para un determinado polinucleótido se identifica comparando una región comparativa con dos secuencias que están alineadas de manera óptima. En este respecto, una parte del polinucleótido en la región comparativa puede comprender una adición o una eliminación (es decir, un espacio) en comparación con una secuencia de referencia (sin ninguna adición o eliminación) en relación con la alineación optimizada de las dos secuencias.
La "optimización por codón" significa una modificación del codón de un polinucleótido que codifica para una proteína con un codón que se utiliza preferencialmente que otros en un organismo específico de tal manera que la proteína codificada pueda expresarse más eficientemente en el mismo. Debido a que la mayoría de los aminoácidos están descritos por varios codones que se denominan "sinónimo" o "codón sinónimo", los códigos genéticos tienen degeneración. Sin embargo, el uso de codones por parte de un organismo específico no es aleatorio, y está sesgado a tripletes de codones específicos. Tal sesgo del uso de codones puede ser incluso mayor en relación con un determinado gen, un gen con función común o del origen del ancestro, una proteína expresada a un alto nivel frente a proteínas con un bajo número de copias, o una región de codificación de un grupo de proteínas en el genoma de un organismo. La secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 de la presente invención es una secuencia que se ha optimizado por codón de E. coli de tal forma que el gen que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña se pueda expresar bien en E. coli.
La presente invención también proporciona un vector recombinante que comprende el gen descrito anteriormente, y a una célula huésped transformada con el vector recombinante.
El término "recombinante" indica una célula que replica a un nucleótido heterogéneo o que expresa a dicho nucleótido, o un péptido, un péptido heterogéneo o una proteína codificada por un nucleótido heterogéneo. La célula recombinante puede expresar un gen o un fragmento del gen en forma de sentido o antisentido, que no se encuentran en el estado natural de la célula. Además, una célula recombinante puede expresar a un gen que se encuentra en estado natural, siempre que dicho gen sea modificado y reintroducido en la célula por un medio artificial.
De acuerdo con la presente invención, el gen que codifica la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña puede insertarse en un vector de expresión recombinante. El término "vector de expresión recombinante" significa plásmido bacteriano, fago, plásmido de levadura, virus de células vegetales, virus de células de mamífero u otro vector. Cualquier plásmido y vector se puede utilizar generalmente si se puede replicar y se estabiliza en un huésped. Las características importantes del vector de expresión incluyen que comprenda un origen de replicación, un promotor, un gen marcador y un elemento de control de la traducción.
El vector de expresión que comprende a la secuencia génica que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña y una señal apropiada para regular la transcripción/traducción se puede construir de acuerdo con un procedimiento que es bien conocido por un experto en la técnica. El procedimiento incluye una técnica de ADN recombinante in vitro, una técnica de síntesis de ADN y una técnica recombinante in vivo. Para inducir la síntesis de ARNm, la secuencia de ADN se puede unir eficazmente a un promotor adecuado presente en el vector de expresión. Además, el vector de expresión puede comprender un sitio de unión a ribosomas como un sitio de inicio de la traducción y un terminador de la transcripción.
El vector recombinante de acuerdo con una realización de la presente invención se prepara mediante fusión en marco del extremo 5' terminal (sitio de la enzima de restricción NdeI) y en el extremo 3' (sitio de la enzima de restricción XhoI) del gen que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (SEQ ID NO: 1) al vector pET22b, y es un vector caracterizado porque puede producir la proteína de fusión de factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña basado en la expresión efectiva del gen mencionado con una ayuda del promotor lac (promotor lac) y del represor lacI (represor lacI).
Para una célula huésped que tiene la capacidad de tener una clonación y expresión estables y continuas del vector de la presente invención, se puede utilizar cualquier célula huésped conocida en la técnica pertinente. Los ejemplos de las células procariotas incluyen a Bacillus sp. cepa que incluye E. coli Rosetta, E. coli JM109, E. coli BL21, E. coli RR1, E. coli l E392, E. coli B, E. coli X 1776, E. coli W3110, Bacillus subtillus, Bacillus thuringiensis y similares, y las bacterias y cepas intestinales que incluyen a Salmonella typhimurium, Serratia marcescens y varias Pseudomonas sp. etcétera.
Además, cuando una célula eucariota se transforma con el vector de la presente invención, la levadura (Saccharomyce cerevisiae), una célula de insecto, una célula humana (por ejemplo, línea celular CHO (ovario de hámster chino), W138, BHK, COS-7, 293, HepG2, 3T3, RIN y la línea celular Md CK, una célula vegetal y similares pueden utilizarse como una célula huésped.
La célula huésped transformada con el vector recombinante de acuerdo con una realización de la presente invención puede ser E. coli Rosetta2 (DE3) pLysS, pero no está limitada a la misma.
Cuando una célula huésped es una célula procariota, el suministro del vector recombinante de la presente invención en una célula huésped se puede llevar a cabo mediante el procedimiento de CaCl2 , el procedimiento de Hanahan (Hanahan, D., J. Mol. Biol., 166: 557-580 (1983)) o un procedimiento de electroporación, y similares. Además, cuando una célula huésped es una célula eucariota, el vector puede introducirse en una célula huésped mediante un procedimiento de microinyección, un procedimiento de precipitación con fosfato de calcio, un procedimiento de electroporación, un procedimiento de transfección mediada por liposomas, un procedimiento de tratamiento con DEAE-dextrano o un procedimiento de bombardeo genético y similares.
La presente invención proporciona además un procedimiento para producir en una célula huésped una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que comprende sobreexpresar a un gen que para codifica una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña transformando una célula huésped con el vector recombinante descrito anteriormente.
Con respecto al procedimiento de acuerdo con una realización de la presente invención, la célula huésped puede ser preferiblemente E. coli, y más preferiblemente E. coli Rosetta2 (DE3) pLysS, pero no limitado a las mismas.
La presente invención proporciona además una composición cosmética para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende, como componente efectivo, una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
En la composición cosmética de acuerdo con una realización de la presente invención, el contenido de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña puede ser del 0,000001 al 0,02% en peso con respecto al peso total de la composición cosmética, pero no limitado a la misma.
En la composición cosmética de la presente invención, los componentes que se utilizan típicamente para una composición cosmética se incluyen además de los componentes efectivos que se describen anteriormente. Ejemplos de los mismos incluyen un material lipídico, un disolvente orgánico, un agente de disolución, un agente de condensación, un agente gelificante, un agente suavizante, un antioxidante, un agente de suspensión, un estabilizador, un agente espumante, un aroma, un agente tensioactivo, agua, un emulsionante iónico o no iónico, un agente de carga, un agente secuestrante de iones metálicos, un agente quelante, un conservador, vitamina, un agente bloqueante, un agente humectante, aceite esencial, un tinte, un pigmento, un agente activador hidrofílico o lipofílico, un agente auxiliar común como la vesícula lipídica y un vehículo.
La composición de la presente invención se puede preparar en cualquier formulación que generalmente se prepara en la técnica pertinente. Por ejemplo, la composición puede formularse en una solución, una suspensión, una emulsión, una pasta, un gel, una crema, una loción, un polvo, un aceite, una base en polvo, una base en emulsión, una base de cera, un aerosol, o similares, pero no se limitan a los mismos. Más específicamente, la composición puede formularse en una piel, un suavizante de la piel, un tónico para la piel, un astringente, una loción, una loción de leche, una loción humectante, una loción nutricional, una crema de masaje, una crema para los ojos, una crema para la humedad, una crema para manos, una esencia, una esencia nutricional, un paquete, una espuma limpiadora, un agua limpiadora, una loción limpiadora, una crema limpiadora, una loción corporal, un limpiador corporal, un jabón, un polvo o similares.
En un caso en el que la composición cosmética de la presente invención tiene un tipo de formulación de pasta, crema o gel, es posible utilizar, como componente portador, aceite animal, aceite vegetal, cera, parafina, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicol, silicona, bentonita, sílice, talco u óxido de zinc.
En un caso en el que la composición cosmética de la presente invención tiene un tipo de formulación de polvo o aerosol, es posible utilizar, como componente portador, lactosa, talco, sílice, hidróxido de aluminio, silicato de calcio o polvo de poliamida. En particular, en un caso en el que la composición cosmética es un aerosol, se puede incluir adicionalmente un propulsor tal como clorofluorohidrocarburo, propano/butano o dimetil éter.
En un caso en el que la composición cosmética de la presente invención tiene un tipo de formulación de solución o emulsión, se utiliza un disolvente, un agente de disolución o un emulsionante como componente portador, y ejemplos de los mismos incluyen isopropanol, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, aceite de 1,3-butilglicol, éster alifático de glicerol, polietilenglicol y éster de ácido graso de sorbitán.
En un caso en el que la composición cosmética de la presente invención tiene un tipo de suspensión de formulación, es posible utilizar, como componente portador, un diluyente en fase líquida tal como agua, etanol o propilenglicol, un agente de suspensión tal como alcohol isoestearílico etoxilado, éster de polioxietilen sorbitol o éster de polioxietilensorbitano, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar o tragacanto.
A continuación, la presente invención se explica con mayor detalle a la vista de los Ejemplos. Sin embargo, es evidente que los siguientes ejemplos se dan solo a modo de ejemplificar a la presente invención y de ninguna manera la presente invención se limita a los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Ejemplo 1. Preparación del vector de expresión recombinante y del microorganismo recombinante transformado para producir la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña
El gen optimizado que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña, el vector de expresión recombinante y el microorganismo recombinante transformado, se prepararon de acuerdo con los siguientes procedimientos.
Mediante el uso como plantilla de los genes que codifican para la proteína del veneno de araña o el factor de crecimiento epidérmico humano utilizado como proteína asociada, el fragmento del gen (SEQ ID NO: 1) que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que consiste en 103 aminoácidos y que ha sido optimizado para la expresión en un microorganismo huésped fue preparado y sintetizado.
Para sintetizar el gen que codifica para la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (SEQ ID NO: 2) que tiene la proteína del veneno de araña unida al carboxilo terminal (C-terminal) del factor de crecimiento epidérmico humano, nucleótido de 159 pb (es decir, del nucleótido 1 al 159 de la SEQ ID NO: 1) que codifica para el factor de crecimiento epidérmico humano, que ha sido optimizado para E. coli, se sintetizó utilizando un cebador directo 1 (5'-AAGGAGATATACATATGAACTCAGAC-3', SEQ ID NO: 3) y un cebador inverso 1 (5'-AGCCCTGGCGCGCa Ac TC-3', SEQ ID NO: 4). Además, se sintetizó un nucleótido de 150 pb (es decir, los nucleótidos 160 al 309 de la SEQ ID NO: 1) que codifica para la proteína del veneno de araña, que se ha optimizado para E. coli, utilizando un cebador directo 2 (5'-GAGTTGCGCGCCAGGGCT-3', SEQ ID NO: 5) y un cebador inverso 2 (5'-GTGCTCGAGTTTCTTGCA-3', SEQ ID NO: 6)
Al tener cada uno de los genes que codifican para el factor de crecimiento epidérmico humano o para la proteína del veneno de araña, que se han sintetizado por el procedimiento descrito anteriormente, como templado y también
utilizando un cebador directo 1 (SEQ ID NO: 3) y un cebador inverso 2 (SEQ ID NO: 6), un gen que consta de 309 nucleótidos que codifican para una proteína de fusión en la que la proteína del veneno de araña se une al C-terminal del factor de crecimiento epidérmico humano, se obtuvo finalmente por reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
El fragmento de gen y el plásmido recombinante mencionados anteriormente se digirieron con las mismas enzimas de restricción (extremo 5' con NdeI y extremo 3' con XhoI) seguido de la inserción, y así se preparó el plásmido recombinante (pET22b::ESV) que se muestra en la Figura 1. Posteriormente, E. coli TOP10 se transformó con el plásmido recombinante preparado para obtener una gran cantidad de la construcción génica del microorganismo huésped.
Posteriormente, E. coli Rosetta2 (DE3) pLysS (Novagen, Alemania) se transformó con el plásmido recombinante preparado para producir un microorganismo recombinante para producir una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña.
Ejemplo 2. Inducción de la expresión, aislamiento y purificación de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña
E. coli Rosetta2 (DE3) pLysS preparada en el Ejemplo 1 se cultivó en 11 de medio LB (10% de triptófano, 10% de cloruro de sodio y 5% de extracto de levadura) o medio BSB (1% de triptófano, 0,5% de extracto de levadura, 1% de glucosa y 0,1% de HEPES (pH 7.0), fabricado por Nexgen Biotechnologies, Inc.) hasta tener una OD600=0.6 a 0.8 para cultivo en lote, u OD600=15 a 20 para cultivo continuo utilizando un aparato de fermentación de 20 l. Después de esto, al agregar IPTG de 1 a 5 mM o 2% de lactosa (ambos en concentración final) a cada medio del cultivo celular, se indujo la expresión de E. coli recombinante. Después de la inducción de la expresión génica, las células se cultivaron adicionalmente durante 3 a 4 horas, y posteriormente se recolectaron por centrifugación. Las células recolectadas se suspendieron suficientemente en una solución tampón (solución salina tamponada con fosfato, 8 g de cloruro de sodio, 0,2 g de cloruro de potasio, 1,44 g de hidrógeno fosfato de sodio (Na2 HPO4) y 0,24 g de dihidrógeno fosfato de potasio (KH2 PO4)/l, pH 7.4) y se rompieron utilizando un homogeneizador de células ultrasónico. Como resultado, se separó una solución que contenía proteínas intracelulares.
Mediante el uso de la solución separada anteriormente como muestra, se examinó la expresión de proteínas mediante electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida al 15%. Como resultado, se confirmó la expresión de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña a partir del lisado de células bruto en el que la inducción de la expresión se ha llevado a cabo con IPTG o con lactosa (Figura 2A).
Para poder aislar y purificar a la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña cuya expresión se ha confirmado anteriormente, el cuerpo de inclusión se solubilizó utilizando una solución tampón solubilizante (urea 5M, pH 11), y posteriormente se sometió a un proceso de replegamiento con filtración ultrafina (membrana de filtración fina de 0,45 pm y membrana de filtración ultrafina de 1K). En consecuencia, la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña finalmente se aisló mediante el uso de una solución tampón de almacenamiento (PBS).
Para la purificación completa de la proteína de fusión anterior, la proteína de fusión aislada se pasó a través de una columna de níquel-agarosa a una tasa de 1 a 3 ml/minuto. Posteriormente, la columna se lavó varias veces con una solución tampón de unión, y al agregar una solución de imidazol 50, 1000 y 250 mM (pH 7.4) a la columna, la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña se fraccionó en una porción de 1 ml y se eluyó de la columna. Posteriormente, el imidazol presente en el tampón se eliminó utilizando un tampón de fosfato de potasio 10 mM y, por lo tanto, la proteína de fusión finalmente se purificó en un estado puro. Para determinar el resultado, se llevó a cabo una electroforesis en gel de SDS-acrilamida al 15%. Como resultado, la proteína de fusión finalmente purificada se confirmó con un tamaño casi esperado (es decir, aproximadamente 14 a 16 kDa, incluida la etiqueta de His) (Figura 2B). Finalmente, mediante el uso de un kit de detección de EGF, se confirmó el dominio de EGF en la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (Figura 2C).
Ejemplo 3. Medición de la actividad de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña - efecto de la proliferación en el fibroblasto dermal
Con la selección de una muestra a partir de la cual se ha confirmado la presencia de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña aislada y purificada como se describe en el Ejemplo 2, se midió una actividad de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña.
Después de cultivar fibroblastos dérmicos (fibroblastos dérmicos de adulto humano, células HDFa), las células se trataron con la proteína de fusión a una concentración de 0, 0,02 ppm o 0,2 ppm, seguido de su cultivo durante 3 días a 37°C. Posteriormente, la proliferación del fibroblasto dérmico se determinó en base a la tinción con cristal violeta.
Como resultado, se encontró que, en comparación con un grupo de control sin tratamiento (0 ppm), se obtiene un efecto de proliferación de fibroblastos dérmicos más favorable a medida que aumenta la concentración de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (0,02 a 0,2 ppm) (Figura 3). Además, en comparación con cada uno de los grupos de tratamiento de proteínas individuales (EGV y SV), se observó un mayor efecto en la proliferación celular con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno
de araña (ESV). Este resultado indica que cada uno de EGF y SV en la proteína de fusión no corresponde a una proteína de longitud completa sino que corresponde a cada dominio activo utilizado para la producción de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña, y cuando el tratamiento se lleva a cabo utilizando a cada proteína o la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV) a la misma concentración (por ejemplo, 0,02 ppm), el número molar de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (ESV) es aproximadamente 1/2 de EGF y SV, respectivamente. Por lo tanto, si se exhibe una proliferación de fibroblastos dérmicos similar a la misma concentración, se cree que la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña tiene el efecto de proliferación de fibroblastos dérmicos que es casi 2 veces mayor que EGF y SV, respectivamente. Como se muestra en la Figura 3, en comparación con e Gf y SV, hay un mayor número de fibroblastos dérmicos cuando se trata con proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña, lo que indica un efecto de proliferación de fibroblastos dérmicos que es casi 2 veces mayor que EGF y SV, respectivamente. Con base en los resultados anteriores, se cree que la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña tiene un efecto mejorado en la proliferación celular de la piel.
Ejemplo 4. Análisis de termoestabilidad de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña
Con la selección de una muestra a partir de la cual se ha confirmado la presencia de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña aislada y purificada como se describe en el Ejemplo 2, se realizó una prueba de termoestabilidad. Para la prueba de termoestabilidad, el fibroblasto dérmico se trató con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña a una concentración de 0,02 a 0,2 ppm, que se sometió a esterilización gamma (irradiación de 35 kgray) o esterilización a alta presión (tratamiento a 121°C durante 15 minutos), seguido de su cultivo durante 3 días a 37°C. Posteriormente, se determinó el grado de la proliferación celular dependiendo del tratamiento protéico con base en la tinción con cristal violeta.
Como resultado, se encontró que la proliferación celular causada por la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña en el grupo de esterilización gamma o el grupo de esterilización a alta presión era similar a la proliferación celular de un grupo sin ningún tratamiento por calentamiento. (Figura 4).
Con base en el resultado anterior, se encontró que la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención mantiene la actividad proteica incluso después de un tratamiento por calentamiento, y la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención con efecto aumentado de la proliferación celular de la piel se utiliza muy ventajosamente para la producción de un producto cosmético sin conservadores que se produce utilizando un procedimiento de tratamiento por calentamiento.
Ejemplo 5. Medición de la actividad de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña - Proliferación celular, cicatrización de heridas y efecto de adhesión celular en células HaCaT
Con la selección de una muestra a partir de la cual se ha confirmado la presencia de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña aislada y purificada como se describe en el Ejemplo 2, se midió la actividad de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña. La medición de la actividad de la proteína de fusión se llevó a cabo cultivando células HaCaT, tratando a las células cultivadas con la proteína de fusión a una concentración de 0, 0,02 ppm, 0,2 ppm, 2 ppm y 20 ppm, y analizando la proliferación celular de la herida. curación y adhesión celular en las células cultivadas.
Primero, cuando se realizó el análisis de la proliferación celular utilizando el reactivo de viabilidad celular PrestoBlueTM (Invitrogen, E.U.), Se confirmó el efecto de la proliferación celular HaCaT causado por un tratamiento de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña. Además, a medida que aumenta la concentración de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (0,02 a 20 ppm), se observó un efecto de la proliferación celular más favorable (Figura 5).
Después de cultivar células HaCaT en un pocillo, se añadió a la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña a una concentración de 0, 0,02 ppm, 0,2 ppm, 2 ppm y 20 ppm. Posteriormente, las células se observaron cada 6 horas con un microscopio (Olympus CK40, Olympus, Japón) para examinar el efecto de la curación de las heridas en las células HaCaT. Cuando se comparó con un grupo de control sin tratamiento (es decir, ningún tratamiento con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña), las células HaCaT tratadas con la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña mostraron un efecto de curación de las heridas, y fue se muestra particularmente que el efecto es más fuerte a medida que aumenta la concentración de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña (0,02 a 20 ppm) (Figura 6).
Como último paso, la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con una concentración de 0, 0,02 ppm, 0,2 ppm, 2 ppm y 20 ppm se revistió en una placa de 96 pocillos, que posteriormente se trató con células HaCaT seguidas de su cultivo durante 1 día a 37°C. Después de esto, al utilizar el reactivo de viabilidad celular PrestoBlueTM, se analizó el efecto de adhesión entre las células y la proteína de fusión del factor de
crecimiento epidérmico humano con veneno de araña. Como resultado, se demostró que las células HaCaT tratadas con proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña exhibieron un mayor efecto de adhesión en comparación con el grupo de control negativo que se había tratado con BSA (albúmina de suero bovino). Por lo tanto, se confirmó el efecto de adhesión de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña sobre una célula de la piel (Figura 7).
Ejemplo de prueba 1. Mejoramiento de las arrugas de la piel, efecto de mantenimiento de la elasticidad de la piel y prueba sensorial de irritación de la piel.
Mediante el uso de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que se ha aislado y purificado como se describe en el Ejemplo 2 como un componente efectivo, las composiciones cosméticas de los Ejemplos de preparación 1,2, 3 y 4 y los ejemplos Comparativos 1,2, 3 y 4 fueron preparados y utilizados para una prueba sensorial.
Específicamente, para confirmar cualquier mejora de las arrugas, un total de 30 hombres y mujeres con 30 años o más, pero menores de 60 (10 en 30's. 10 en 40's, y 10 en 50's y 60's) como sujetos se les permitió aplicar, una vez al día durante 2 semanas seguidas, la composición del ejemplo Comparativo (es decir, el grupo control) alrededor del área de los ojos en el lado izquierdo de la cara o alrededor del lado izquierdo de los labios en donde se encuentran muchas arrugas, o la composición del ejemplo de Preparación (es decir, grupo de prueba) alrededor del área de los ojos en el lado derecho de la cara o alrededor del lado derecho de los labios. La evaluación se realizó en función del nivel de reducción de las arrugas alrededor del ojo o de los labios. Además, también para el efecto de mantenimiento de la elasticidad de la piel como uno de los elementos funcionales descritos anteriormente, el grado de mantenimiento de la elasticidad de la piel se evaluó de acuerdo con el mismo procedimiento descrito anteriormente. También para el elemento de irritación de la piel, se realizó una prueba sensorial de acuerdo con el mismo procedimiento descrito anteriormente en términos de picazón, sensación de hormigueo y un fenómeno de eritema. La evaluación se realizó con base en criterios de evaluación de cinco puntos, es decir, muy excelente (5 puntos), excelente (4 puntos), moderada (3 puntos), pobre (2 puntos) y muy pobre (1 punto).
<Ejemplo de preparación 1 y ejemplo Comparativo 1>
Mediante la adición de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo y que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 1, se preparó una piel del ejemplo de Preparación 1.
Además, sin agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo pero que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 1, se preparó una piel del ejemplo Comparativo 1.
[Tabla 1]
Los resultados de la prueba sensorial del Ejemplo de preparación 1 y el Ejemplo comparativo 1 son como se muestran a continuación en la Tabla 2.
[Tabla 2]
<Ejemplo de Preparación 2 y ejemplo Comparativo 2>
Mediante la adición de la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo y que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 3, se preparó una esencia del ejemplo de Preparación 2.
Además, sin agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo pero que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 3, se preparó una esencia del ejemplo Comparativo 2.
[Tabla 3]
Los resultados de la prueba sensorial del Ejemplo de Preparación 2 y el Ejemplo Comparativo 2 son como se muestran a continuación en la Tabla 4.
[Tabla 4]
(continuación)
<Ejemplo de preparación 3 y ejemplo Comparativo 3>
Al agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo y con los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 5, se preparó una loción del ejemplo de Preparación 3.
Además, sin agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo pero que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 5, se preparó una loción del ejemplo Comparativo 3.
[Tabla 5]
Los resultados de la prueba sensorial del ejemplo de Preparación 3 y el ejemplo Comparativo 3 son como se muestran a continuación en la Tabla 6.
[Tabla 6]
(continuación)
<Ejemplo de Preparación 4 y ejemplo Comparativo 4>
Al agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo y con los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 7, se preparó una crema del ejemplo de Preparación 4.
Además, sin agregar la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña como un componente efectivo pero que tiene los componentes y el contenido que se describen a continuación en la Tabla 7, se preparó una crema del ejemplo Comparativo 4.
[Tabla 7]
Los resultados de la prueba sensorial del Ejemplo de preparación 4 y el Ejemplo comparativo 4 son como se muestran a continuación en la Tabla 8.
[Tabla 8]
(continuación)
A partir de los resultados de las pruebas sensoriales que se dan anteriormente, se encontró que, en comparación con los ejemplos Comparativos, los ejemplos de Preparación 1, 2, 3 y 4 en los que como componente efectivo está contenida la proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de la presente invención, son efectivos para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel.
<110> Nexgen Biotechnologies, Inc.
<120> Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mejorar las arrugas y mantener la elasticidad de la piel, que comprende la misma como componente efectivo.
<130> PCT1624
<160>6
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 309
<212>ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> EGF-SV
<400> 1
aactcagact ctgagtgccc actgtctcac gacggctact gccttcacga cggagtctgc 60
atgtacatcg aggctttgga taagtacgct tgtaattgcg tcgttggtta cattggagag 120
cgctgccaat accgtgactt aaaatggtgg gagttgcgcg ccagggctac ctgtgcaggg 180
caggatcagc catgcaaaga aacgtgcgat tgctgtggcg aacgtggcga atgcgtgtgt 240
ggtggtccgt gcatttgtcg ccaaggctat ttctggattg cgtggtacaa actggcgaac 300
tgcaagaaa 309
<210>2
<211> 103
<212> PRT
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> EGF-SV
<400> 2
Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His 1 5 10 15
Asp Gly Val Cys Met Tyr lie Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Asn 20 25 30
Cys Val Val Gly Tyr lie Gly Glu Arg Cys Gln Tyr Arg Asp Leu Lys
35 40 45
Trp Trp Glu Leu Arg Ala Arg Ala Thr Cys Ala Gly Gln Asp Gln Pro 50 55 60
Cys Lys Glu Thr Cys Asp Cys Cys Gly Glu Arg Gly Glu Cys Val Cys 65 70 75 80
Gly Gly Pro Cys lie Cys Arg Gln Gly Tyr Phe Trp lie Ala Trp Tyr 85 90 95
Lys Leu Ala Asn Cys Lys Lys
100
<210>3
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400>3
aaggagatat acatatgaac tcagac 26
<210> 4
<211> 18
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 4
agccctggcg cgcaactc 18
<210> 5
<211> 18
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400>5
gagttgcgcg ccagggct 18 <210>6
<211> 18
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> cebador
<400> 6
gtgctcgagt ttcttgca 18
Claims (8)
1. Una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
2. Un gen que codifica para la proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel de la reivindicación 1.
3. El gen de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el gen consiste en la secuencia de nucleótidos optimizada por codón de E. coli (Escherichia coli) de la SEQ ID NO: 1.
4. Un vector recombinante que comprende el gen de la reivindicación 2 o 3.
5. Una célula huésped transformada con el vector recombinante de la reivindicación 4.
6. Un procedimiento para producir en una célula huésped una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que comprende sobreexpresar un gen que codifica para una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña transformando a una célula huésped con el vector recombinante de la reivindicación 4.
7. El procedimiento para producir una proteína de fusión del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado porque la célula huésped es E. coli.
8. Una composición cosmética para mejorar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad de la piel que comprende, como componente efectivo, una proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña con un mayor efecto de proliferación de las células de la piel que consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160069272A KR101636851B1 (ko) | 2016-06-03 | 2016-06-03 | 피부 세포 증식 효과가 증가한 열 안정성 인간 상피세포성장인자-거미독 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물 |
| PCT/KR2016/007984 WO2017209347A1 (ko) | 2016-06-03 | 2016-07-22 | 피부 세포 증식 효과가 증가한 열 안정성 인간 상피세포성장인자-거미독 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2765282T3 true ES2765282T3 (es) | 2020-06-08 |
Family
ID=56502662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES16904146T Active ES2765282T3 (es) | 2016-06-03 | 2016-07-22 | Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad, que contiene la misma como ingrediente activo |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10125181B2 (es) |
| EP (1) | EP3339319B1 (es) |
| JP (1) | JP6472580B2 (es) |
| KR (1) | KR101636851B1 (es) |
| CN (1) | CN108137663A (es) |
| ES (1) | ES2765282T3 (es) |
| WO (1) | WO2017209347A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101613302B1 (ko) * | 2015-12-30 | 2016-04-18 | (주)넥스젠바이오텍 | Sv82 폴리펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물 |
| KR101678393B1 (ko) * | 2016-08-25 | 2016-12-06 | (주)넥스젠바이오텍 | 피부 세포 증식 효과가 증가한 전갈독 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 피부 탄력 증대 및 항노화 화장료 조성물 |
| KR101678392B1 (ko) * | 2016-09-30 | 2016-11-22 | (주)넥스젠바이오텍 | 항산화 기능 및 피부 세포 증식 효과가 증가된 부동화 단백질 및 인간 상피세포성장인자를 포함하는 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 |
| US10905738B2 (en) | 2018-07-05 | 2021-02-02 | Biozeus Desenvolvimento De Produtos Biofarmacêuticos | Synthetic peptides, prodrugs, pharmaceutical compositions and uses |
| KR102101952B1 (ko) * | 2018-11-23 | 2020-04-27 | 주식회사 코씨드바이오팜 | 거미줄 추출물을 함유하는 피부 미백용 및 자외선에 의한 피부 손상 예방용 화장료 조성물 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003201513A1 (en) * | 2002-01-11 | 2003-07-24 | Nexia Biotechnologies, Inc. | Methods of producing silk polypeptides and products thereof |
| KR20050027838A (ko) * | 2003-09-16 | 2005-03-21 | (주)넥스젠 | 식물체에서 발현된 재조합 인간 성장호르몬 |
| KR100583350B1 (ko) * | 2004-11-03 | 2006-06-05 | (주)넥스젠 | Ｆａｓ-1 도메인을 함유하는 융합 단백질을 이용한상피세포재생인자의 생산 방법 |
| CN102757974B (zh) * | 2012-06-05 | 2014-07-23 | 陕西省微生物研究所 | 一种重组人表皮生长因子的新型制备方法 |
| PT2899198T (pt) * | 2012-08-20 | 2018-06-29 | Univ Federal De Minas Gerais Ufmg | Péptido sintético pntx(19), composições farmacêuticas e utilização |
| KR101602689B1 (ko) * | 2013-11-14 | 2016-03-11 | 주식회사 엘지생활건강 | 혈소판유래성장인자 ｂ서브유닛의 융합단백질을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 |
| CN103834664B (zh) * | 2014-03-27 | 2016-05-04 | 吉林大学 | 重组表皮生长因子egf及其制备方法 |
| KR101613302B1 (ko) | 2015-12-30 | 2016-04-18 | (주)넥스젠바이오텍 | Sv82 폴리펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물 |
-
2016
- 2016-06-03 KR KR1020160069272A patent/KR101636851B1/ko active IP Right Grant
- 2016-07-22 JP JP2018535797A patent/JP6472580B2/ja active Active
- 2016-07-22 US US15/522,159 patent/US10125181B2/en active Active
- 2016-07-22 ES ES16904146T patent/ES2765282T3/es active Active
- 2016-07-22 WO PCT/KR2016/007984 patent/WO2017209347A1/ko active Application Filing
- 2016-07-22 EP EP16904146.4A patent/EP3339319B1/en active Active
- 2016-07-22 CN CN201680060212.6A patent/CN108137663A/zh not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6472580B2 (ja) | 2019-02-20 |
| US20180186848A1 (en) | 2018-07-05 |
| EP3339319A1 (en) | 2018-06-27 |
| CN108137663A (zh) | 2018-06-08 |
| EP3339319B1 (en) | 2019-10-16 |
| US10125181B2 (en) | 2018-11-13 |
| JP2018529385A (ja) | 2018-10-11 |
| WO2017209347A1 (ko) | 2017-12-07 |
| EP3339319A4 (en) | 2019-04-10 |
| KR101636851B1 (ko) | 2016-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2765282T3 (es) | Proteína de fusión termoestable del factor de crecimiento epidérmico humano con veneno de araña que tiene un mayor efecto de la proliferación celular en la piel y una composición cosmética para mitigar las arrugas de la piel y mantener la elasticidad, que contiene la misma como ingrediente activo | |
| ES2760547T3 (es) | Proteína de fusión de la toxina botulínica y el factor de crecimiento epidérmico humano con aumento de la proliferación de las células cutáneas y efecto antioxidante, y composición cosmética que contiene la misma como componente eficaz | |
| EP3521306B1 (en) | Fusion protein comprising immobilized protein with increased antioxidative function and skin cell proliferation effect and human epithelial cell growth factor, and cosmetic composition containing fusion protein as active ingredient for improving skin wrinkles | |
| KR101652956B1 (ko) | 항산화 기능 및 세포 증식 효과가 증가된 인간 상피세포재생인자 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 항노화 화장료 조성물 | |
| JP6261673B2 (ja) | 皮膚しわの改善及び弾力維持のための化粧料組成物 | |
| US11166898B2 (en) | Human growth hormone fusion protein with enhanced thermal stability and cosmetic composition for anti-wrinkle and maintaining skin elasticity comprising the same as effective component | |
| US10745451B2 (en) | Scorpion toxin fusion protein with enhanced skin cell proliferation effect and cosmetic composition for anti-wrinkle, enhancing skin elasticity and anti-aging comprising the same as an effective ingredient | |
| US20210100729A1 (en) | Fusion protein of heat shock proteins with increased anti-oxidant activity and skin cell proliferation effect and cosmetic composition for anti-wrinkle comprising the same as effective component | |
| KR101657299B1 (ko) | 세포 증식 효과가 증가한 인간 상피세포재생인자와 인간 성장호르몬의 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 항노화 화장료 조성물 | |
| US11986545B2 (en) | Fusion protein comprising growth differentiation factor 11 and epidermal growth factor with enhanced anti-oxidation activity and enhanced skin cell proliferation effect and cosmetic composition for anti-wrinkle comprising the same as effective component | |
| US11786450B2 (en) | Fusion protein comprising heat shock protein 10 and brazzein protein with enhanced anti-oxidation activity and skin cell proliferation effect and anti-wrinkle cosmetic composition comprising the same as effective component | |
| KR102581377B1 (ko) | 콜라겐 합성 촉진 활성을 갖는 콜라겐 타입 4 저분자 펩타이드 및 이를 이용한 방법 | |
| US20220192958A1 (en) | Fusion protein comprising growth differentiation factor 11 and heat shock protein 10 with enhanced skin cell proliferation effect and cosmetic composition for anti-wrinkle comprising the same as effective component |