ES2732460T3 - Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular - Google Patents

Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular Download PDF

Info

Publication number
ES2732460T3
ES2732460T3 ES15732785T ES15732785T ES2732460T3 ES 2732460 T3 ES2732460 T3 ES 2732460T3 ES 15732785 T ES15732785 T ES 15732785T ES 15732785 T ES15732785 T ES 15732785T ES 2732460 T3 ES2732460 T3 ES 2732460T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
group
compound
dimethyl
phenanthren
decahydro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15732785T
Other languages
English (en)
Inventor
René LAFONT
Waly Dioh
Sophie Raynal
Stanislas Veillet
Franck Lepifre
Jean-Denis Durand
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sorbonne Universite
Biophytis SA
Original Assignee
Sorbonne Universite
Biophytis SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sorbonne Universite, Biophytis SA filed Critical Sorbonne Universite
Application granted granted Critical
Publication of ES2732460T3 publication Critical patent/ES2732460T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/06—Anabolic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B60—VEHICLES IN GENERAL
    • B60F—VEHICLES FOR USE BOTH ON RAIL AND ON ROAD; AMPHIBIOUS OR LIKE VEHICLES; CONVERTIBLE VEHICLES
    • B60F3/00—Amphibious vehicles, i.e. vehicles capable of travelling both on land and on water; Land vehicles capable of travelling under water
    • B60F3/0007—Arrangement of propulsion or steering means on amphibious vehicles
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B63—SHIPS OR OTHER WATERBORNE VESSELS; RELATED EQUIPMENT
    • B63C—LAUNCHING, HAULING-OUT, OR DRY-DOCKING OF VESSELS; LIFE-SAVING IN WATER; EQUIPMENT FOR DWELLING OR WORKING UNDER WATER; MEANS FOR SALVAGING OR SEARCHING FOR UNDERWATER OBJECTS
    • B63C13/00—Equipment forming part of or attachable to vessels facilitating transport over land
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C07J41/0016—Oximes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J5/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond
    • C07J5/0007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond not substituted in position 17 alfa
    • C07J5/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane and substituted in position 21 by only one singly bound oxygen atom, i.e. only one oxygen bound to position 21 by a single bond not substituted in position 17 alfa not substituted in position 16
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B63—SHIPS OR OTHER WATERBORNE VESSELS; RELATED EQUIPMENT
    • B63B—SHIPS OR OTHER WATERBORNE VESSELS; EQUIPMENT FOR SHIPPING 
    • B63B29/00—Accommodation for crew or passengers not otherwise provided for
    • B63B29/02—Cabins or other living spaces; Construction or arrangement thereof
    • B63B2029/022—Bathing platforms
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B63—SHIPS OR OTHER WATERBORNE VESSELS; RELATED EQUIPMENT
    • B63H—MARINE PROPULSION OR STEERING
    • B63H11/00—Marine propulsion by water jets
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B63—SHIPS OR OTHER WATERBORNE VESSELS; RELATED EQUIPMENT
    • B63H—MARINE PROPULSION OR STEERING
    • B63H25/00—Steering; Slowing-down otherwise than by use of propulsive elements; Dynamic anchoring, i.e. positioning vessels by means of main or auxiliary propulsive elements
    • B63H25/42—Steering or dynamic anchoring by propulsive elements; Steering or dynamic anchoring by propellers used therefor only; Steering or dynamic anchoring by rudders carrying propellers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Combustion & Propulsion (AREA)
  • Transportation (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Ocean & Marine Engineering (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Compuesto de la fórmula general (I) siguiente:**Fórmula** en la que: V-U es un enlace sencillo carbono-carbono e Y es un grupo hidroxilo o un hidrógeno, o V-U es un enlace etilénico C=C; X se elige entre: un oxígeno; o un grupo N-OR5, eligiéndose entonces R5 entre: un hidrógeno; un grupo alquilo de C1-C6 que posee o no insaturaciones en la cadena; un grupo (C1-C6)CO2R6, pudiendo ser R6 un hidrógeno o un grupo de C1-C6; un grupo (C1- C6)OR7, siendo R7 un ciclo aromático o heteroaromático mono o polisustituido o no con un grupo alquilo o alcoxilo, CF3 o Cl; un grupo (C1-C6)NR8R9, siendo R8 y R9 grupos de C1-C6, o grupos (C1-C6)N(C1-C6) o grupos (C1-C6)N(C1-C6)OR6 con R6 definido como anteriormente, NR8R9 puede ser también un heterociclo; y en la que: - Q es un grupo carbonilo; eligiéndose R1 entre: un grupo (C1-C6)W(C1-C6); un grupo (C1-C6)W(C1-C6)W(C1-C6); un grupo (C1- C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); un grupo (C1-C6)A, representando A un heterociclo eventualmente sustituido con un grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6) o CO2(C1-C6); o un grupo CH2Br; siendo W un heteroátomo elegido entre N, O y S; estando el compuesto en forma de un enantiómero, un diastereoisómero, un hidrato, un solvato, un tautómero, una mezcla racémica o una sal farmacéuticamente aceptable.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos químicos y su utilización terapéutica, en particular para la mejora de la calidad muscular en los mamíferos.
Más particularmente, la invención permite mejorar la calidad muscular en los mamíferos obesos.
La invención permite también mejorar la calidad muscular de los mamíferos sarcopénicos.
La invención se refiere también a la utilización de estos compuestos químicos en el tratamiento y/o la prevención de la obesidad en mamíferos.
Estado de la técnica
La atrofia muscular puede producirse por diversas causas: desnutrición, no utilización de los músculos (ej. inmovilización a consecuencia de una fractura), cáncer u otra enfermedad grave (insuficiencia cardíaca o renal) que induzca caquexia, o se produce de forma natural por el envejecimiento de los individuos (sarcopenia). Esta atrofia puede derivarse de una reducción de la proteosíntesis y/o de un aumento de la proteólisis y, según los casos, ir acompañada por una fibrosis y/o por una infiltración a través del tejido adiposo. La identificación de los factores y mecanismos que controlan la proteosíntesis y la proteólisis musculares representa por lo tanto un prerrequisito para plantear los tratamientos apropiados de estas patologías.
La Figura 1, que forma parte del estado de la técnica, muestra las principales vías de la proteosíntesis y de la proteólisis en los músculos (reconstituida según Zhao et al., 2008 y Little et al., 2009).
La proteosíntesis muscular es indispensable, y esencialmente se controla a nivel de la traducción. Necesita evidentemente un aporte nutricional adecuado de aminoácidos. Es estimulada por la actividad física y regulada por numerosos factores, en primer lugar el IGF-1 y los andrógenos (Little et al., 2009).
Tabla 1: Factores y modelos que actúan sobre la proteosíntesis y la proteólisis en los músculos.
Figure imgf000002_0001
Figure imgf000003_0001
La proteólisis de las miofibrilas se efectúa por medio del proteosoma, mientras que las mitocondrias son destruidas por autofagia (Zhao et al., 2008). También se describen mecanismos de apoptosis de las células satélites (Murphy et al., 2010).
La miostatina, producida de forma autocrina por los músculos, representa un factor particularmente importante ya que actúa a la vez estimulando la proteólisis e inhibiendo la proteosíntesis. También estimula la fibrosis (Li et al., 2008).
El envejecimiento se acompaña de una modificación de diferentes factores reguladores (Walston et al., 2012): la actividad física se reduce a menudo, la nutrición proteica/vitamínica puede ser insuficiente y, después de las comidas, los contenidos de aminoácidos circulantes, cuyo aumento es necesario para estimular la proteosíntesis, presentan un aumento reducido que puede ser debido a una captación esplácnica (Boirie et al., 1997). Además, el envejecimiento se acompaña de modificaciones hormonales importantes: en particular, se observará un aumento de la miostatina (Léger et al., 2008), una reducción de los andrógenos (Seidman, 2007), de la hormona de crecimiento (Macell et al., 2001; Sattler, 2013), así como un aumento de los marcadores de inflamación (IL-6, TNF-a,... Schaap et al., 2009; Verghese et al., 2011). Estas diferentes modificaciones son desfavorables para la proteosíntesis, mientras que favorecen la proteólisis, lo que produce la reducción progresiva del tamaño de los músculos (sarcopenia). También provocan una modificación en la distribución de los tipos de fibras musculares en detrimento de las fibras rápidas, lo que se traduce en una disminución de la fuerza de los músculos (dinapenia). Se asiste finalmente al desarrollo de tejido conjuntivo en el seno de los músculos (fibrosis).
En un contexto de obesidad, la situación se agrava por varias razones complementarias: la infiltración de grasa en los músculos agrava el contexto inflamatorio, la insulinorresistencia reduce el efecto del IGF-1 sobre la proteosíntesis, sin contar con que la movilidad se reduce por el sobrepeso (Stenholm et al., 2009).
La Figure 2, que forma parte del estado de la técnica, ilustra el agravamiento de la sarcopenia en un contexto de obesidad (según Quillot et al., 2013).
En todos los casos, en ausencia de tratamiento, la sarcopenia es un proceso que no puede sino agravarse, hasta la pérdida total de movilidad. La sarcopenia no es, sin embargo, el único proceso que conduce a una atrofia de los músculos esqueléticos. También se produce una atrofia durante una inmovilización (ej. después de una fractura), durante un ayuno prolongado (o un régimen de adelgazamiento), o durante patologías graves (ej. cánceres, SIDA) que provocan una caquexia. También se pueden citar las diversas distrofias musculares de origen genético. Estas diferentes situaciones presentan un cierto número de características comunes con la sarcopenia, pero con una proporción respectiva diferente de los factores desencadenantes (Tisdale, 2007; Saini et al., 2009).
Posibles tratam ientos conocidos
Se han considerado y ensayado diferentes métodos de prevención/tratamiento de la sarcopenia. Se trata en primer lugar del ejercicio físico, cuya eficacia está establecida (Bonnefoy et al., 2000; Bonnefoy, 2008; Ryan et al., 2013). Así, después de realizar ejercicios durante 8 semanas, se han observado incrementos de la fuerza muscular del 180% y de la masa muscular del 11% (Fiatarone et al. 1990). Sin embargo, una eficacia óptima necesitaría varias horas de ejercicios físicos por día, lo que es difícil de considerar en periodos largos.
Un aporte aumentado de los sustratos de la síntesis proteica, sea dando proteínas de digestión rápida, y según una cronología optimizada (Coeffier et al., 2009; Aussel et al., 2013), así como un complemento de ciertos aminoácidos o sus metabolitos (leucina, HMB [p-hidroxi-p-metilbutirato], citrulina, ornitina) puede aumentar la proteosíntesis muscular (Li & Heber, 2011).
Diferentes tratamientos farmacéuticos tienen como objetivo corregir las modificaciones del contexto hormonal ligadas al envejecimiento (Crenn, 2013). Comprenden:
- hormonas sexuales como la testosterona (White et al., 2013) o sus variantes, los SARM (Selective Androgen Receptor Modulators), u hormonas no sexuales como la hormona del crecimiento (Liu et al., 2003) y el IGF-1, la grelina o la progranulina, incluso la vitamina D
- inhibidores de la miostatina (anticuerpos dirigidos contra la molécula o su receptor, o péptido precursor de la miostatina) (Murphy et al., 2010; Han & Mitch, 2011)
- moléculas que tienen como objetivo el sistema renina-angiotensina como los inhibidores de ACE o la angiotensina 1-7 (Dalla Libera et al., 2001; Shiuchi et al., 2004; Kalupahana & Moustaid-Moussa, 2012; Allen et al., 2013)
- agonistas de los receptores p-adrenérgicos (Ryall et al., 2004, 2007)
- sustancias naturales variadas, incluso extractos más complejos de origen vegetal (ej. isoflavonas: Aubertin-Leheudre et al., 2007; extracto de aceite de oliva: Pierno et al., 2014; resveratrol: Shadfar et al., 20011; Bennett et al., 2013).
La gran diversidad de estos tratamientos indica la dificultad de tratar una patología multifactorial, cuyos factores desencadenantes no están totalmente identificados. Además, muchas moléculas candidatas presentan efectos secundarios (caso de las hormonas sexuales, SARM o p-agonistas, por ejemplo), o no han sido todavía estudiadas más que en modelos animales. Todos estos elementos explican la ausencia de medicamentos disponibles en el mercado.
A día de hoy, las investigaciones tienen como objetivo más particularmente la miostatina, inhibiendo su acción, por ejemplo, con anticuerpos anti-miostatina o anticuerpos anti-receptores (Dumonceaux et al., 2010; Greenberg, 2012; Sakuma & Yamaguchi, 2012; Arounleut et al., 2013; Buehring & Binkley, 2013; Collins-Hooper et al., 2014; White & Le Brasseur, 2014).
Las fitoecdisonas, y más particularmente la 20-hidroxiecdisona (20E), han sido objeto de numerosos estudios farmacológicos, que comenzaron en Japón y luego en Uzbekistán, y se han desarrollado después en otros países diferentes.
Estos estudios han resaltado las propiedades antidiabéticas y anabolizantes de esta molécula. Sus efectos estimulantes sobre las síntesis proteicas en los músculos se observan en ratas in vivo (Syrov, 2000; Tóth et al., 2008; Lawrence, 2012) y en miotubos murinos C2C12 in vitro (Gorelick-Feldman et al., 2008). Se trata de un efecto a nivel de la traducción, que implica la fosforilación de la proteína ribosómica p70S6K, al término de una cascada en la que interviene la proteína quinasa Akt/PkB, una vía utilizada también por el IGF-1 para estimular la proteosíntesis.
Por otra parte, Zubeldia et al. (2012), por medio de las mismas células C2C12, han mostrado que un extracto de Ajuga turkestanica enriquecido en fitoecdisonas (20-hidroxiecdisona y turquesterona) inhibe la transcripción de la miostatina y la caspasa 3 (una proteína implicada en los procesos de apoptosis).
Por otra parte, la 20-hidroxiecdisona posee propiedades antifibróticas, que no han sido demostradas en los músculos, sino a nivel de los riñones, donde los mecanismos de fibrosis ocurren de forma muy similar (Hung et al., 2012). Se oponen así a los efectos del TGFp, una proteína cercana a la miostatina, y en particular a la estimulación de Simad 2,3 que provoca esta sustancia. Por lo tanto, se puede pensar que la 20-hidroxiecdisona podría tener efectos similares sobre los músculos (o el corazón).
La 20-hidroxiecdisona reduce la acumulación de masa grasa en los ratones alimentados con un régimen enriquecido en grasas (Kizelsztein et al., 2009; Foucault et al., 2012) o en ratas ovariectomizadas, un modelo de menopausia (Seidlova-Wuttke et al., 2010).
Algunos de los efectos descritos anteriormente en modelos animales se han encontrado en estudios clínicos, todavía poco numerosos. Así, la 20-hidroxiecdisona aumenta la capacidad física (Azizov et al., 1995; Gadhzieva et al., 1995) y la masa muscular (Simakin et al., 1988) y provoca una pérdida de masa abdominal en voluntarios obesos y con sobrepeso (Wuttke et al., 2013; Foucault et al., 2014; solicitud de patente PCT WO 2013/068704).
Los metabolitos 20-ceto de la 20-hidroxiecdisona (postesterona y 14-desoxiposterona) han sido descritos por Kumpun et al. (2011). Debido a la vida media tan corta de la 20-hidroxiecdisona, Kumpun et al. (2011) ha sugerido que los metabolitos podrían estar en el origen de la actividad de este compuesto. Sin embargo, la 20E así como sus metabolitos son poco biodisponibles en ratones (Dzhukharova et al., 1987; Hikino et al., 1972), en ratas, (Kapur et al., 2010 y Seidlova-Wuttke et al., 2010) y en humanos (Brandt 2003; Bolduc, 2006). Su rendimiento global entre otros no es completamente satisfactorio en relación con aplicaciones de mejora de la calidad muscular.
Varios estudios han mostrado que la turquesterona (11a,20-dihidroxiecdisona), metabolito derivado de la 20E, muestra una actividad superior a la de la 20E in vivo (Syrov et al., 2001: Bathori et al., 2008). Por lo tanto, todavía existe actualmente, para aplicaciones terapéuticas que tienen como objetivo una mejora de la calidad muscular tanto en los mamíferos obesos como en los mamíferos sarcopénicos, una necesidad de nuevos compuestos que tengan una buena biodisponibilidad, expresándose más particularmente en términos de coeficiente de exposición plasmática elevada a la vez que presenten una actividad globalmente superior a la de la 20E sobre la mejora de la calidad muscular, expresándose esta actividad global en términos de rendimiento de la inhibición de la expresión génica de la miostatina combinada con el aumento de la síntesis proteica en mamíferos.
Exposición de la invención
Los inventores han descubierto ahora que, de forma completamente inesperada, algunos compuestos de la familia de los esteroides que responden a una fórmula general particular, cuya estructura difiere de la de la 20E y de sus metabolitos, presentan un coeficiente de exposición plasmática superior al de esta última y efectos iguales o superiores a los de la 20 hidroxiecdisona (20E) para la inhibición de la miostatina y la estimulación de la proteosíntesis mediante fosforilación de la proteína S6K1. Estos efectos permiten mejorar la calidad y/o la fuerza muscular en los mamíferos sarcopénicos y obesos sarcopénicos.
Los compuestos de la invención no interaccionan con los receptores nucleares esteroides de la esfera sexual (receptores de andrógenos y estrógenos). Muestran una buena estabilidad química en el plasma y en microsomas. Finalmente, varios de entre ellos presentan un perfil farmacocinético claramente mejorado con relación a la 20-hidroxiecdisona. Inducen además una mejor inhibición de la expresión génica de la miostatina y una mayor mejora de la síntesis proteica.
La invención propone así un compuesto de la fórmula general (I) siguiente:
Figure imgf000005_0001
en la que:
V-U es un enlace sencillo carbono-carbono e Y es un grupo hidroxilo o un hidrógeno, o V-U es un enlace etilénico C=C;
X se elige entre: un oxígeno, un grupo N-OR5,
eligiéndose entonces R5 entre: un hidrógeno; un grupo alquilo de C1-C6 que posee o no insaturaciones en la cadena; un grupo (C-i-C6)CO2R6, pudiendo ser R6 un hidrógeno o un grupo de C1-C6; un grupo (Ci -C6)OR7, siendo R7 un ciclo aromático o heteroaromático mono o polisustituido o no con un grupo alquilo o alcoxilo, CF3 o Cl; un grupo (Ci -C6)NR8R9, siendo R8 y R9 grupos de C i­
Ca, o grupos (C1-C6)N(C1-C6) o grupos (C1-C6)N(C1-Ca)OR6, definiéndose R6 como anteriormente, NR8R9 también puede ser un heterociclo;
y en la que:
Q es un grupo carbonilo;
eligiéndose R1 entre: un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca)W(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca)CO2(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)A, representando A un heterociclo eventualmente sustituido con un grupo de tipo OH, OMe, (Ci-Ca), N(Ci-Ca) o CO2(Ci-Ca); un grupo CH2Br;
siendo W un heteroátomo elegido entre N, O y S;
estando el compuesto en forma de un enantiómero, un diastereoisómero, un hidrato, un solvato, un tautómero, una mezcla racémica o una sal farmacéuticamente aceptable.
Una forma particular de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I), en el que:
X es un oxígeno;
V-U es un enlace sencillo carbono-carbono;
Y es un grupo hidroxilo;
Q es un grupo carbonilo;
R1 se elige entre: un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca)W(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)W(Ci-Ca)CO2(Ci-Ca); un grupo (Ci-Ca)A, representando A un heterociclo eventualmente sustituido con un grupo de tipo OH, OMe, (Ci-Ca), N(Ci-Ca) o CO2(Ci-Ca);
siendo W un heteroátomo elegido entre el N, O y S.
Otra forma particular de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I) en el que V-U es un enlace etilénico
Otra forma particular de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I) en el que X es un grupo N-OR5, estando definido R5 como anteriormente.
Otra forma particular de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I) elegido entre los compuestos siguientes:
• n° 81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,
15,ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n° 86: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)acetil]-10,13-dimetil-2,3,
4,5,9,11,12,15,ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n° 88: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(4-hidroxi-1-piperidil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,
5,9,11,i2,15,ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n° 89: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-[4-(2-hidroxietil)-1-piperidil]acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,ia,17-decahidro-iH-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n° 91: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-[2-(3-dimetilaminopropil(metil)amino)acetil]-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,ia,17-decahidro-iH-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n°
Figure imgf000006_0001
92: 2-[2-oxo-2-[(2 ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]sulfanilacetato de etilo
• n° 93: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etilsulfanilacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,
15,ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-a-ona
• n° 94: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(2-hidroxietilsulfanil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,
9,11,12,15,ia,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-a-ona.
Otro objetivo de la invención se refiere a un compuesto de fórmula general (I) como medicamento, principalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otro objetivo de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I) para su utilización en el tratamiento y/o la prevención de la sarcopenia y la obesidad sarcopénica, sus complicaciones y/o patologías asociadas, tales como la pérdida de fuerza, de masa muscular, de rendimiento y capacidad físicos y de movilidad en mamíferos. El rendimiento y capacidad físicos se pueden caracterizar mediante pruebas de marcha y de esfuerzo físico.
Otro objetivo de la invención utiliza el compuesto de fórmula general (I) para su utilización en el tratamiento y/o la prevención de la obesidad y sus complicaciones y/o patologías asociadas, ventajosamente de la diabetes de tipo 2 o del síndrome metabólico en mamíferos.
Breve descripción de los dibujos
• La Figura 1 forma parte del estado de la técnica, ilustra las principales vías de la proteosíntesis y de la proteólisis en los músculos (compuesto según Zhao et al., 2008 y Little et al., 2009).
• La Figura 2 forma parte del estado de la técnica, ilustra el agravamiento de la sarcopenia en un contexto de obesidad (según Quillot et al., 2013).
• La Figura 3A ilustra los efectos de la 20E (compuesto comparativo) y de los compuestos según la invención n° 51 y 93 sobre el peso de ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas.
• La Figura 3B ilustra los efectos de la 20E (compuesto comparativo) y de los compuestos según la invención n° 51 y 93 sobre la cantidad de proteínas del músculo Soleus de ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas.
• La Figura 4 ilustra los efectos de la 20E (compuesto comparativo) y de los compuestos según la invención n° 51 y 93 sobre el transcrito de la miostatina del músculo Soleus de ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas.
• La Figura 5A ilustra los efectos de la 20E (compuesto comparativo) y de los compuestos según la invención n° 51 y 93 sobre sur los transcritos de MyoD de ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas.
• La Figura 5B ilustra los efectos de la 20E (compuesto comparativo) y de los compuestos según la invención n° 51 y 93 sobre los transcritos de la miogenina de ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas.
• La Figura 6 ilustra en forma de tabla los resultados obtenidos para compuestos de la presente invención durante experimentos de análisis de la expresión génica de la miostatina y de la síntesis proteica.
Descripción detallada
El objetivo de la invención es desarrollar nuevos compuestos químicos que respondan principalmente a los objetivos fijados anteriormente, en relación con aplicaciones terapéuticas para el tratamiento y/o la prevención de la obesidad y/o la sarcopenia en mamíferos. Estos últimos compuestos son nuevos pues eran inexistentes en las bases de datos químicas. Ventajosamente se pueden sintetizar según procedimientos industrializables, es decir con un mínimo de etapas de síntesis y un rendimiento óptimo. Tienen efectos superiores a los de la 20E para la inhibición de la miostatina, la estimulación de la proteosíntesis mediante la fosforilzación de la proteína S6K1. Presentan una buena estabilidad química en el plasma y en los microsomas. Tienen un perfil farmacocinético mejorado y una posología definida. Estimulan el anabolismo muscular en las células C2C12 y presentan un efecto anti-hiperglicémico.
En el marco de la presente invención, se entiende por “grupo arilo”, un ciclo aromático que tiene de 5 a 8 átomos de carbono o varios ciclos aromáticos fusionados que tienen de 5 a 14 átomos de carbono. En particular, los grupos arilo pueden ser grupos monocíclicos o bicíclicos, preferentemente fenilo o naftilo. Ventajosamente se trata de un grupo fenilo (Ph).
En el marco de la presente invención, se entiende por “grupo heteroarilo”, cualquier grupo aromático hidrocarbonado de 3 a 9 átomos que contienen uno o varios heteroátomos, tales como por ejemplo átomos de azufre, nitrógeno u oxígeno. El heteroarilo según la presente invención puede estar formado por uno o varios ciclos fusionados. Ejemplos de grupos heteroarilo son los grupos furilo, isoxazilo, piridilo, tiazolilo, pirimidilo, bencimidazol, benzoxazol y benzotiazol. Ventajosamente, el grupo heteroarilo se elige entre los grupos furilo, piridilo y tiazolilo. De forma ventajosa se trata del grupo furilo.
En el marco de la presente invención, se entiende por “átomo de halógeno” cualquier átomo de halógeno, ventajosamente elegido entre el Cl, Br, I o F, en particular elegido entre el F, Cl o Br, en particular F o Cl.
En el marco de la presente invención, se entiende por “grupo alquilo de C1-C6”, cualquier grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, lineal o ramificado, en particular los grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo y n-hexilo. Ventajosamente se trata de un grupo metilo, etilo, iso-propilo o t-butilo, en particular de un grupo metilo o etilo, más particularmente de un grupo metilo. En el marco de la presente invención, se entiende por “grupo cicloalquilo de C3-C6“, cualquier ciclo saturado e hidrocarbonado que comprende de 3 a 6 átomos de carbono, en particular, el grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. Ventajosamente se trata de un grupo ciclopropilo o ciclohexilo.
En el marco de la presente invención, se entiende por “(grupo alquilo de Ci-C6)arilo”, cualquier grupo arilo tal como se ha definido anteriormente, por medio de un grupo alquilo de C1-C6 tal como se ha definido anteriormente. En particular un ejemplo de (grupo alquilo de C1-C6)arilo es un grupo bencilo o -(CH2)2fenilo.
En el marco de la presente invención, se entiende por “farmacéuticamente aceptable”, lo que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que generalmente es segura, no tóxica y, ni biológicamente ni de otra forma no deseable y que es aceptable para un uso tanto veterinario como farmacéutico humano.
En el marco de la presente invención, se entiende por “sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto” las sales que son farmacéuticamente aceptables, tal como se han definido en la presente memoria, y que poseen la actividad farmacológica deseada del compuesto original. Dichas sales comprenden:
(1) las sales de adición de ácido formadas con ácidos minerales tales como el ácido clorhídrico, el ácido bromhídrico, el ácido sulfúrico, el ácido nítrico, el ácido fosfórico y similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como el ácido acético, el ácido bencenosulfónico, el ácido benzoico, el ácido canforsulfónico, el ácido cítrico, el ácido etanosulfónico, el ácido fumárico, el ácido glucoheptónico, el ácido glucónico, el ácido glutámico, el ácido glicólico, el ácido hidroxinaftoico, el ácido 2-hidroxietanosulfónico, el ácido láctico, el ácido maleico, el ácido málico, el ácido mandélico, el ácido metanosulfónico, el ácido mucónico, el ácido 2-naftalenosulfónico, el ácido propiónico, el ácido salicílico, el ácido succínico, el ácido dibenzoil-L-tártrico, el ácido tártrico, el ácido ptoluenosulfónico, el ácido trimetilacético, el ácido trifluoroacético y similares; o
(2) las sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto precursor, bien es reemplazado por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion de metal alcalino-térreo o un ion de aluminio; o bien se coordina con una base orgánica o inorgánica. Las bases orgánicas aceptables comprenden la dietanolamina, la etanolamina, la N-metilglucamina, la trietanolamina, la trometamina y similares. Las bases inorgánicas aceptables comprenden el hidróxido de aluminio, el hidróxido de calcio, el hidróxido de potasio, el carbonato de sodio y el hidróxido de sodio.
En el marco de la presente invención, se entiende por “solvato de un compuesto” cualquier compuesto obtenido por adición de una molécula de disolvente inerte al compuesto según la invención, formándose el solvato debido a su fuerza de atracción mutua. Los solvatos son, por ejemplo, alcoholatos del compuesto. Un hidrato es un solvato en el que el solvente inerte utilizado es el agua. Puede ser mono-, di- o tri-hidratado.
En el marco de la presente invención, se entiende por “tautómero”, cualquier isómero de constitución de los compuestos según la presente invención que son interconvertibles mediante la reacción química reversible denominada tautomerización. En la mayoría de los casos, la reacción se produce por migración de un átomo de hidrógeno acompañada por un cambio de localización de un doble enlace. En una disolución de un compuesto capaz de tautomerización, se crea un equilibrio entre los 2 tautómeros. La relación entre tautómeros es función entonces del disolvente, de la temperatura y del pH. La tautomería, por lo tanto, es la transformación de un grupo funcional en otro, lo más a menudo por desplazamiento concomitante de un átomo de hidrógeno y de un enlace n (enlace doble o triple). Tautómeros habituales son, por ejemplo, los pares aldehídos/cetonas-alcoholes o más precisamente enol; amidasácidos imídicos; lactamas-lactimas; iminas-enaminas; enaminas-enaminas. En particular, puede incluir una tautomería ciclo-cadena que tiene lugar cuando el movimiento del protón se acompaña por la transformación de una estructura abierta a un ciclo.
Descripción de las síntesis y esquemas generales
Los compuestos de fórmula general (I) se pueden preparar por aplicación o adaptación de cualquier método conocido por sí mismo por el experto en la técnica y/o al alcance de este último, principalmente los descritos por Larock (1989), o por aplicación o adaptación de los procedimientos descritos en los siguientes procedimientos.
Los diferentes grupos hacen referencia a las definiciones anteriormente dadas.
Esquema A: La 20-hidroxiecdisona Ai puede ser reducida al compuesto A2 por acción del zinc en ácido acético tal como se describe en Zhu et al. (2002). Este compuesto A2 puede sufrir una ruptura oxidativa en C20-C22 de la cadena por reacción del PCC en piridina para dar el compuesto A3. Las alquiloximas de tipo R5ONH2 reaccionan sobre el carbonilo en C20 para dar las iminas A4 correspondientes así como el compuesto A5 de doble reacción en C20 y C6.
Figure imgf000008_0001
Esquema B: Las alquiloximas de tipo R5ONH2 reaccionan sobre el carbonilo en C6 del compuesto Ai para dar la oxima Bi así como, eventualmente los compuestos B2 (confórmero Z) y B'2(confórmero E) de eliminación del hidróxido en C14-C15. Estos 3 compuestos pueden sufrir de forma independiente una ruptura de cadena como se describe en el esquema A para dar los compuestos B3 y B4, con el compuesto (Z)-oxima B'3 como subproducto. Alquiloximas de tipo R5ONH2 reaccionan con el carbonilo en C6 de los compuestos B3 o B4 para dar los compuestos B5 y Be.
Figure imgf000009_0001
Esquema C: El compuesto Ai puede sufrir una ruptura oxidativa como se describe en el esquema A para dar el compuesto Ci. Este compuesto denominado postesterona en la bibliografía puede sufrir la acción de una alcoxima de tipo R5ONH2 en el carbonilo en C20, lo que permite obtener el compuesto C2, el compuesto C3 de doble reacción en C6 y C20 y el compuesto C4 de eliminación del hidroxilo en C14-C15.
Figure imgf000009_0002
Esquema D: La mezcla de confórmeros (E) y (Z); B3 y B'3 procedentes del esquema B se hace reaccionar con cloruro de titanio, que tiene como acción la deshidratación del compuesto (Z); B'3 para obtener el D1. El carbonilo en C17 del compuesto B3 aislado en la etapa anterior experimenta una aminación reductora con R3NH2 en presencia de cianoborohidruro de sodio para dar el compuesto D2 que puede ser acilado con un cloruro de ácido R4COCl, que permite la obtención del compuesto D3.
Esquema E: La postesterona Ci experimenta una aminación reductora y luego una acilación del mismo tipo que las descritas en el esquema D y permite la obtención de los compuestos E1, y luego E2.
Figure imgf000010_0001
Esquema F: La amina secundaria del compuesto E1 procedente del esquema F es alquilada mediante un compuesto bromoalquilo para dar la amina terciaria F2.
Figure imgf000010_0002
Esquema G: La postesterona C1 se puede bromar en C21 por medio de bromo para dar el compuesto bromado G1 que puede ser alquilado mediante un nucleófilo WR, pudiendo ser W una amina o un tiol y dar el compuesto G2.
Figure imgf000010_0003
Esquema H: El compuesto bromado G1 obtenido en el esquema G puede reaccionar con compuestos alcoholatos de tipo OR para obtener los compuestos eterados H1.
Figure imgf000010_0004
Esquema I: Los compuestos G2 procedentes del esquema G pueden sufrir una reducción del carbonilo en C20 por medio del borohidruro de sodio para los alcoholes I2.
Figure imgf000010_0005
Esquema J: Los compuestos G2 procedentes del esquema G pueden sufrir la reacción en C20 de una alcoxamina de tipo R5ONH2 tal como se describe en el esquema C y permite obtener el compuesto J1.
Figure imgf000011_0001
EJEMPLOS:
Materiales y métodos
Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) de protón (1H) se efectúan en un aparato Bruker Avance DPX300 (300,16 MHz). Los desplazamientos químicos (8) se miden en partes por millón (ppm). Los espectros se calibran sobre el desplazamiento químico del disolvente deuterado utilizado. Las constantes de acoplamiento (J) se expresan en hercios (Hz) y la multiplicidad está representada de la manera siguiente, singlete (s), doblete (d), doblete de doblete (dd), triplete (t), triplete de doblete (td), cuadruplete (q), multiplete (m). Los espectros de masa (EM) se realizan mediante un espectrómetro Agilent Technologies MSD, tipo G1946A, las muestras son ionizadas mediante una fuente de “Atmospheric pressure Chemical ionization" (APCI).
Abreviaciones
TBAF: fluoruro de tetrabutilamonio
THF: tetrahidrofurano
DMF: dimetilformamida
CDCh: cloroformo deuterado
CD3OD: metanol deuterado
DMSO-cte dimetilsulfóxido deuterado
PyBop: hexafluorofosfato de (benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfonio
Boc: terc-butiloxicarbonilo
mmol: milimol(es)
|jM: micromolar
mL: mililitro(s)
g: gramo(s)
M: mol/litro
N: normal
nm: nanómetro(s)
min: minuto(s)
h: hora(s)
d: día(s)
t. a.: temperatura ambiente
UV: ultravioleta
ctrl: control
PM: peso molecular
EM: espectrometría de masas
A modo de ejemplos ilustrativos de la invención, se han sintetizado los compuestos representados en la tabla 2. Tabla 2: Lista de los compuestos cuya síntesis se ejemplifica.
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0003
Los compuestos 81-96 y 102 mencionados anteriormente cuya síntesis se describe en los ejemplos siguientes, forman parte de la invención. Los otros compuestos mencionados anteriormente cuya síntesis se ilustra a continuación, se divulgan aquí por comparación.
Ejemplo 1: Esquema A
Preparación de los compuestos n° 1 y n° 2: (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metilcarbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona y (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000028_0001
Producto 1 Producto 2
Etapa 1: Preparación del (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000028_0002
Se disuelven 20 g (41,6 mmol) de 20-hidroxiecdisona (comercialmente disponible) en 280 mL de acido acético y la disolución se calienta 67 °C. Se añaden en porciones 27,2 g (416 mmol) de polvo de zinc y el medio de reacción se calienta a 67°C durante 18 h. Luego, se filtra la disolución a 20°C a través de una torta de Celita que se lava con 50 mL de metanol. El filtrado se evapora para dar 33,7 g de aceite pardo que se purifica por cromatografía ultrarrápida sobre un cartucho de gel de sílice (diclorometano/metanol, 90/10) para dar 9,52 g de polvo amarillo (Rto: 49%) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-1.2.3.4.5.9.11.12.14.15.16.17- dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona.
LC-MS: m/z = 465,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,72-5,43 (m, 1H(C7)), 4,42-4,32 (m, 2H), 4,13 (s, 1H), 3,76-2,62 (m, 2H), 3,2-3,1 (m, 2H), 2,21-2,14 (m, 2H), 1,90-1,02 (m, 28H), 1,03-0,77 (m, 6H).
Etapa 2: Preparación del (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-acetil-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11, 12.14.15.16.17- dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000029_0001
Se disuelven 9,52 g (20,28 mmol) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrocidopenta[a]fenantren-6-ona en 46 mL de piridina y 276 mL de diclorometano. Se añaden 6,69 g (30,4 mmol) de clorocromato de piridinio en porciones en 10 minutos y se agita el medio de reacción a 20°C durante 2 h 30 min. La piridina y el diclorometano se evaporan a continuación a vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/metanol, 95/5) para dar 4 g de polvo beige (Rto: 56%) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-acetil-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona.
LC-MS: m/z = 347,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,68-5,46 (m, 1H(C7)), 4,41-4,37 (m, 2H), 3,76-3,55 (m, 2H), 2,83-2,54 (m, 2H), 2,33-1,95 (m, 6H), 1,90-1,30 (m, 10H), 1,28-1,18 (m, 1H), 0,88-0,42 (m, 6H).
Etapa 3: Preparación de los epímeros (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona y (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metíl-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetíl-1,2,3,4, 5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000029_0002
Se disuelven 328 mg (0,947 mmol) de (2S,3R,5R,10R,13S,17S)-17-acetil-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona (14-desoxi-postesterona), preparada en la etapa 2, en 1,2 mL de etanol y se añaden en porciones 200 mg (0,994 mmol) de 2,2,2-trifluoroacetato de but-3-enoxiamonio. El medio de reacción se lleva a reflujo durante 20 h. El disolvente se evapora y el residuo se purifica por cromatografía preparativa en columna C18 (acetonitrilo/agua, 60/40) para dar 24 mg de polvo beige (Rto: 6%) del compuesto n° 1 (2S,3R,5R,10R,13S,14S,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona y 57 mg de polvo beige (Rto: 14%) del compuesto n° 2 (2S,3R,5R,10R,13S,14R,17S)-17-(N-but-3-enoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3-dihidroxi-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,14,15,16,17-dodecahidrociclopenta[a]fenantren-6-ona.
Compuesto n° 1:
LC-MS: m/z = 416,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) - epímero beta en C14 - 85,83-5,72 (m, 1H), 5,70 (s, 1H(C7)), 5,1-5 (m, 2H), 4,40­ 4,36 (m, 2H), 4 (t, 2H), 3,77-3,71 (m, 2H), 2,80-2,60 (m, 1H), 2,40-1,20 (m, 20H), 0,82-0,74 (m, 6H).
Compuesto n° 2:
LC-MS: m/z = 416,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-D6) -epímero alfa en C14 -8 5,87-5,72 (m, 1H), 5,48 (s, 1H(C7)), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,40­ 4,36 (m, 2H), 4 (t, 2H), 3,77-3,71 (m, 2H), 2,80-2,60 (m, 1H), 2,44-1,23 (m, 20H), 0,83 (s, 3H), 0,47 (s, 3H).
Los compuestos n° 3 a 6 han sido preparados según el mismo esquema, en forma de mezcla de epímeros C14 alfa y C14 beta.
Figure imgf000030_0002
Ejemplo 2: Esquema B
Preparación del compuesto n° 7: Oxima de [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetíl-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]etanona] y del compuesto n° 19;
[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-metoxietoxi)-C-metil-carbonimidoil)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol]
Figure imgf000030_0001
Compuesto n° 7 Compuesto n° 19
Preparación del compuesto n° 7
Etapa 1: Preparación del compuesto (a) [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-17-[(lR,2R)-1,2,5-tríhidroxi-1,5-dimetíl-hexil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol] y del compuesto (b) [(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]-6-metil-heptano-2,3,6-triol]
Figure imgf000031_0001
20-E Compuesto (a) Compuesto (b) Compuesto (c) Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 3 del Esquema A, se han preparado 788 mg de polvo beige (Rto: 37%) del compuesto (a) [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol] a partir de 20-hidroxiecdisona y de hidrocloruro de O-metilhidroxilamina. También se han podido aislar 667 mg (Rto: 32%) du compuesto de eliminación (b) [(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]-6-metil-heptano-2,3,6-triol] y también se han podido aislar 34 mg (Rto: 2%) del compuesto de eliminación (c) [(2R,3R)-2-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]-6-metil-heptano-2,3,6-triol]. Compuesto (a):
LC-MS: m/z = 510,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 66,25 (s, 1H(C7)), 4,45-4,35 (m, 3H), 4,31-4,29 (m, 1H), 4,14 (s, 1H), 3,74-3,69 (m, 4H), 3,6-3,5 (m, 1H), 3,17-3,08 (m, 1H), 2,87-2,75 (m, 1H), 2,26-2,20 (m, 2H), 2,05-1,1 (m, 15H), 1,1-0,98 (m, 11H), 0,73 (s, 6H).
Compuesto (b):
LC-MS: m/z = 492,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 66,04 (s, 1H), 5,77 (s, 1H), 4,45-4,30 (m, 2H), 4,25 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,75-3,65 (m, 5H), 3,63-3,55 (m, 1H), 3,20-3,08 (m, 2H), 2,17-1,90 (m, 3H), 1,70-1,20 (m, 11H), 1,15-0,93 (m, 14H), 0,74 (s, 3H). Compuesto (c):
LC-MS: m/z = 492,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 66,55 (s, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,44-4,26 (m, 3H), 4,09 (s, 1H), 3,79-3,67 (m, 5H), 3,62­ 3,54 (m, 1H), 3,16-3,08 (m, 1H), 2,30-1,90 (m, 4H), 1,70-1,20 (m, 11H), 1,15-0,92 (m, 14H), 0,73 (s, 3H).
Partiendo del compuesto (b) aislado:
Etapa 2a: Preparación del compuesto (d): [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]etanona]
Figure imgf000031_0002
Compuesto n° (b) Compuesto n° (d)
Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 2 del Esquema A, se han preparado 267 mg de polvo beige (Rto: 55%) de compuesto (d) [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]etanona] a partir del compuesto (b).
Compuesto (d):
LC-MS: m/z = 374,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 86,09 (s, 1H), 5,81-5,75 (m, 1H), 4,39-4,37 (m, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,72-3,68 (m, 1H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,2-3 (m, 2H), 2,75-2,60 (m, 1H), 2,29-2,10 (m, 5H), 1,74-1,23 (m, 8H), 0,74­ 0,70 (m, 6H).
Etapa 3a: Preparación del compuesto n° 7: Oxima de [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidrociclopenta[a]fenantren-17-il]etanona]
Figure imgf000032_0001
Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 3 del Esquema A, se han preparado 81 mg de polvo blanco (Rto: 71%) de oxima de 1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,17S)-2,3-dihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-1,2,3,4,5,9,11,12,16,17-decahidroddopenta[a]fenantren-17-il]etanona a partir del compuesto (d).
Compuesto n° 7:
LC-MS: m/z = 389,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 810,53 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,37 (d, 1H), 4,30-4,26 (m, 1H), 3,77-3,67 (m, 4H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,15-3,03 (m, 1H), 2,80-2,65 (m, 2H), 2,25-2,12 (m, 1H), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,79 (s, 3H), 1,74-1,20 (m, 8H), 0,76-0,66 (m, 6H).
Preparación del compuesto n° 19 partiendo del compuesto (a) (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetil-hexil]1-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol aislado:
Etapa 2b: Preparación de los compuestos (e): [1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etanona] y (f): [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etanona].
Figure imgf000032_0002
Compuesto (a) Compuesto (e) Compuesto (f)
Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 2 del Esquema A, se han aislado 891 mg de polvo beige (Rto: 36%) de compuesto (e) [1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etanona], así como 23 mg (rendimiento: 0,9%) del compuesto (f): [1-[(2S,3R,5R,6Z,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etanona] a partir de 3,5 g de compuesto (a) [2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-17-[(1R,2R)-1,2,5-trihidroxi-1,5-dimetilhexil]-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol] aislado.
Compuesto (e):
LC-MS: m/z = 392,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 5 6,28 (s, 1H(C7)), 4,74 (s, 1H), 4,42-4,36 (m, 1H), 4,32-4,28 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 4H), 3,68-3,52 (m, 1H), 3,20-3,12 (m, 1H), 2,90-2,76 (m, 1H), 2,30-2,00 (m, 5H), 1,90-1,50 (m, 8H), 1,49-1,24 (m, 3H), 0,72 (s, 3H), 0,45 (s, 3H).
Compuesto (f):
LC-MS: m/z = 392,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 55,71 (s, 1H(C7)), 4,45 (s, 1H), 4,45-4,41 (m, 1H), 4,26-4,23 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 4H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,18-3,09 (m, 1H), 2,90-2,80 (m, 1H), 2,22-2,00 (m, 5H), 1,88-1,22 (m, 11H), 0,73 (s, 3H), 0,47 (s, 3H).
Etapa 3b: Preparación del compuesto n° 19: [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-metoxietoxi)-C-metilcarbonimidoil)-6-metoxiimino-10,13-dimetíl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol]
Figure imgf000033_0001
Compuesto (e) Compuesto n° 19
Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 3 del Esquema A, se han preparado 46 mg de polvo blanco (rendimiento: 48%) del compuesto n° 19 [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-(N-(2-metoxietoxi)-C-metil-carbonimidoil)-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-cidopenta[a]fenantren-2,3,14-triol] a partir de 233 mg del compuesto (e).
Compuesto n° 19:
LC-MS: m/z = 465,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 56,28 (s, 1H(C7)), 4,66 (s, 1H), 4,44-4,38 (m, 1H), 4,34-4,28 (m, 1H), 4,10-4,01 (m, 2H), 3,75-3,70 (m, 4H), 3,65-3,45 (m, 3H), 3,24 (s, 3H), 2,98-2,76 (m, 2H), 2,30-1,90 (m, 4H), 1,80-1,24 (m, 12H), 0,73 (s, 3H), 0,49 (s, 3H).
El compuesto n° 21 se ha preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000033_0003
Ejemplo 3: Esquema C
Preparación del compuesto n° 23: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-etoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,l5,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000033_0002
Postesterona n° 23
Siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 3 del Esquema A, se han preparado 64 mg de polvo blanco (rendimiento: 22%) de (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(N-etoxi-C-metil-carbonimidoil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-cidopenta[a]fenantren-6-ona a partir de postesterona (obtenida mediante ruptura oxidativa de la cadena de la 20-hidroxiecdisona siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 2 del Esquema B).
Compuesto n° 23:
LC-MS: m/z = 406,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%.
RMN de 1H (300 MHz, CD3OD) 85,82 (s, 1H(C7)), 4,04 (q, 2H), 3,97-3,92 (m, 1H), 3,89-3,80 (m, 1H), 3,22-3,10 (m, 1H), 3,04 (t, 1H), 2,43-1,55 (m, 15H), 1,45-1,37 (m, 1H), 1,21 (t, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,64 (s, 3H).
Los compuestos n° 24 a 36 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000034_0001
H),
Figure imgf000035_0001
Ejemplo 4: Esquema D
Preparación del compuesto n° 37: N-(2,2-difluoroetil)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-l7-il]etil]furan-2-carboxamida
Figure imgf000036_0001
Etapa 1: Preparación del compuesto n° 39: [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-difluoroetilamino)etil]-6-metoxiimmo-10,13-dimetíl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidm-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol].
Figure imgf000036_0002
180 mg (0,46 mmol) de compuesto (e) [1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etanona], obtenido en la etapa 2b del método B, se disuelven en 5 mL de metanol y se añaden 0,21 mL (2,76 mmol) de 2,2-difluoroetanamina al medio de reacción. El pH de la disolución se ajusta a 6 por medio de la cantidad suficiente de ácido acético concentrado. Luego, se añaden en porciones 31,8 mg (0,506 mmol) de cianoborohidruro de sodio y la suspensión obtenida se calienta a reflujo durante 20 h. Se evapora el disolvente y el residuo obtenido se recoge en 20 mL de agua y el pH se ajusta a 8 por medio de una disolución saturada de bicarbonato de sodio. Se extrae esta fase acuosa con dos veces 15 mL de butanol y la fase butanólica se seca sobre sulfato, se filtra y se evapora para dar un sólido amarillo, que recogido en 30 mL de éter isopropílico y filtrado da, después de secado, 134 mg (rendimiento: 62%) del compuesto n° 39 (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-difluoroetilamino)etil]-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol en forma de polvo amarillo.
Compuesto n° 39:
LC-MS: m/z = 457,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 97%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 86,30-6,23 (m, 1H), 5,95-5,70 (m, 1H), 4,43-4,25 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,65-3,55 (m, 1H), 3,42-3,32 (m, 1H), 2,88-2,76 (m, 2H), 2,29-2,23 (m, 1H), 1,99-1,15 (m, 16H), 1,05-0,82 (m, 3H), 0,73 (s, 3H), 0,61-0,53 (m, 3H).
Etapa 2: Preparación del compuesto n° 37: N-(2,2-difluoroetil)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]furan-2-carboxamida
134 mg (0,285 mmol) del compuesto n° 39 [(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-17-[1-(2,2-difluoroetilamino)etil]-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-cidopenta[a]fenantren-2,3,14-triol] se disuelven en 2 mL de THF y se añaden 52 mg (0,854 mmol) de bicarbonato de sosa al medio de reacción en atmósfera de argón. Se añaden 30 pL (0,299 mmol) de cloruro de furoilo y se agita el medio de reacción durante 20 h a 20°C. La disolución se vierte a continuación sobre 5 mL de agua y se extrae dos veces con 10 mL de butanol. La fase butanólica se evapora para dar 118 mg de sólido purificado por cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 100 mg de polvo blanco (rendimiento: 60%) del compuesto n° 37: N-(2,2-difluoroetil)-N-[1-[(2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-6-metoxiimino-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15, 16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]furano-2-carboxamida.
Compuesto n° 37:
LC-MS: m/z = 551,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 87,87 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,58 (d, 1H), 4,43-4,27 (m, 3H), 3,95-3,83 (m, 1H), 3,75-3,65 (m, 4H), 3,63-3,49 (m, 2H), 2,85-2,68 (m, 1H), 2,31-2,18 (m, 1H), 2,01-1 (m, 17H), 0,73-0,15 (m, 6H).
Los compuestos n° 38 y 40 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000037_0002
Ejemplo 5: Esquema E
Preparación del compuesto n° 4 1 : 2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil] acetamida
Figure imgf000037_0001
Etapa 1: Preparación del compuesto n° 42: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-(2-metoxietil amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000038_0001
5 g (13,8 mmol) de postesterona (obtenida mediante ruptura oxidativa de la cadena de la 20-hidroxiecdisona siguiendo el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 2 del Esquema B) se disuelven en 250 mL de metanol y se añaden gota a gota 7,2 mL (83 mmol) de 2-metoxietilamina. El pH de la disolución se lleva a continuación a pH 6 mediante adición de ácido acético concentrado y 250 mL de THF. Se añaden en porciones 0,954 g de cianoborohidruro de sodio y se lleva el medio de reacción a reflujo durante 20 h. Los disolventes se evaporan y el producto bruto obtenido se recoge en 100 mL de agua y se ajusta el pH a 8 mediante adición de una disolución saturada de bicarbonato de sosa. Se extrae el medio tres veces con 80 mL de butanol y se evapora la fase butanólica para dar una espuma marrón que, recogida con 5 mL de acetato de etilo da, después de filtración y secado, 3,32 g (rendimiento: 57%) del compuesto n° 42: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-(2-metoxietilamino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de polvo gris.
Compuesto n° 42:
LC-MS: m/z = 422,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 95%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,70-5,60 (m, 1H(C7)), 4,80-4,62 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 4,43-4,35 (m, 1H), 3,78-3,70 (m, 2H), 3,68-3,50 (m, 3H), 3,30-3,18 (m, 5H), 3,10-2,91 (m, 1H), 2,30-0,9 (m, 18H), 0,82 (s, 3H), 0,59 (s, 3H).
RMN de 13C (75 MHz, DMSO-de) 8202,9 (C6), 120,5, 82,9, 66,7, 58,1,46,2, 37,8, 30,5, 23,9, 6,2.
Etapa 2: Preparación del compuesto n° 41: 2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]acetamida
Figure imgf000038_0002
Siguiendo el mismo modo de operación que en la etapa 2 del Ejemplo 5, se han obtenido 89 mg (rendimiento: 58%) del compuesto n° 41 [2-metoxi-N-(2-metoxietil)-N-[1-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-6-oxo-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]acetamida] en forma de polvo naranja a partir del compuesto n° 42.
Compuesto n° 41:
LC-MS: m/z = 494,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 94%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,63 (s, 1H(C7)), 4,88-4,7 (m, 1H), 4,5-4,35 (m, 2H), 4,2-3,9 (m, 2H), 3,76 (s, 1H), 3,68-3,52 (m, 1H), 3,5-3,3 (m, 4H), 3,28-3,18 (m, 6H), 3,08-2,9 (m, 1H), 2,3-0,95 (m, 18H), 0,88-0,75 (m, 3H), 0,7-0,42 (m, 3H).
Los compuestos n° 43 a 75 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000039_0001
H),
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000042_0001
Ejemplo 6: Esquema F
Preparación del compuesto n° 76: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-(2-metoxietil (metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,l5,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000043_0001
155 mg (0,368 mmol) del compuesto n °42 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-(2-metoxietilamino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-cidopenta[a]fenantren-6-ona], preparado según la técnica descrita en la etapa 1 del Ejemplo 5, se disuelven en 2,5 mL de DMF y se añaden 61,8 mg (0,735 mmol) de bicarbonato de sosa al medio de reacción así como 0,034 mL (0,552 mmol) de yodometano. La suspensión obtenida se agita a 20°C durante 20 h. A continuación, se vierte la disolución sobre 15 mL de agua y se extrae tres veces con 15 mL de butanol. La fase butanólica se evapora para dar 220 mg de polvo purificado mediante cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 40 mg de polvo blanco (rendimiento: 25%) del compuesto n° 76: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-(2-metoxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de polvo blanco.
Compuesto n° 76:
LC-MS: m/z = 436,3 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,61 (s, 1H(C7)), 4,64 (s, 1H), 4,47-4,34 (m, 2H), 3,75 (s, 1H), 3,67-3,50 (m, 1H), 3,25-3,16 (m, 5H), 3,05-2,85 (m, 1H), 2,27-1,15 (m, 20H), 0,90-0,70 (m, 6H), 0,59 (s, 3H).
Los compuestos n° 77 a 80 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000043_0002
Ejemplo 7: Esquema G
Preparación del compuesto n° 81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000044_0001
Etapa 1: Preparación del compuesto n° 102: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-bromoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000044_0002
Se disuelve 1 g (2,76 mmol) de postesterona (obtenida por ruptura oxidativa de la cadena de la 20-hidroxiecdisona según el mismo modo de operación que el descrito en la etapa 2 del Esquema B) en 20 mL de metanol, La disolución se enfría a 0°C y se añaden gota a gota 0,284 mL (5,52 mmol) de bromo y se agita el medio de reacción durante 1 h a esta temperatura, y luego se deja a temperatura ambiente 16 h, Se vierte el medio de reacción sobre 50 mL de una disolución saturada de bicarbonato de sosa y se extrae tres veces con 100 mL de acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan con 50 mL de disolución saturada de bicarbonato de sosa, y luego con agua salada, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora el disolvente para dar 833 mg de polvo que, recogido en 30 mL de diclorometano, da después de filtración y desecación 412 mg (rendimiento: 31%) del compuesto n° 102: 2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-bromoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de polvo amarillo.
Compuesto n° 102:
LC-MS: m/z = 443,1 (MH+) pureza UV a 254 nm = 91%.
RMN de 1H (300 MHz,DMSO-cfe) 85,69-5,63 (m,1H(C7)), 5,08 (s, 1H), 4,42-4,35 (m, 3H), 4,33-4,22 (m, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,66-3,58 (m, 1H), 3,39 (t, 1H), 3,10-2,95 (m, 1H), 2,25-1,20 (m, 13H), 0,83 (s, 3H), 0,51 (s, 3H).
Etapa 2: Preparación del compuesto n° 81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000044_0003
Se disuelven 50 mg (0,103 mmol) del compuesto n° 102 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-bromoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona] en 1 mL de d Mf y se añaden 42,7 mg de carbonato de potasio así como 10,78 pL (0,124 mmol) de morfolina, Después de 18 h de agitación a 20°C, se vierte el medio de reacción sobre 10 mL de agua y se extrae esta fase acuosa dos veces con 15 mL de butanol. Se evapora la fase orgánica para dar 71 mg de polvo purificado por cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH, 90/10) para dar 28 mg (rendimiento: 60%) del compuesto n° 81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de polvo blanco.
Compuesto n° 81:
LC-MS: m/z = 448,4 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz,DMSO-cfe) 85,65 (s, 1H(C7)), 5,02 (s, 1H), 4,45 (d, 1H), 4,40-4,37 (m, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,68­ 3,53 (m, 5H), 3,34-3,24 (m, 4H), 3,08-2,95 (m, 1H), 2,45-1,17 (m, 16H), 0,82 (s, 3H), 0,48 (s, 3H).
Los compuestos n° 82 a 94 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000046_0002
Ejemplo 8: Esquema H
Preparación del compuesto n° 95: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etoxiacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,l5,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000046_0001
100 mg (0,227 mmol) del compuesto n° 102 [2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-bromoacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-cidopenta[a]fenantren-6-ona], preparado en la etapa 1 del Ejemplo 7, se disuelven en 2 mL de etanol y se añaden gota a gota 0,102 mL (0,272 mmol) de una disolución de etóxido de sodio al 21% en etanol diluidos en 1 mL de etanol y la disolución obtenida se lleva a reflujo durante 30 min. El medio de reacción enfriado a 20°C se vierte sobre 25 mL de agua y se extrae con dos veces 20 mL de butanol. La fase orgánica se evapora para dar 30 mg de un aceite purificado por cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH, 95/5) para dar 13,5 mg (rendimiento: 14%) del compuesto n° 95: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etoxiacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de aceite amarillo.
Compuesto n° 95:
LC-MS: m/z = 407,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 93%.
RMN de 1H (300 MHz,DMSO-de) 85,65-5,59 (m, 1H(C7)), 4,96 (s, 1H), 4,46 (d, 1H), 4,41-4,36 (m, 1H), 4,03 (q, 2H), 3,77 (s, 1H), 3,68-3,55 (m, 1H), 3,08-2,90 (m, 1H), 2,75-2,62 (m, 1H), 2,3-2,15 (m, 2H), 1,92-1,42 (m, 13H), 1,18 (t, 3H), 0,83 (s, 3H), 0,58-0,49 (m, 3H).
El compuesto n° 96 se ha preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000047_0002
Ejemplo 9: Esquema I
Preparación del compuesto n° 97: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-hidroxi-2-(2-hidroxietíl(metíl)amino)etíl]-10,13-dimetíl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
Figure imgf000047_0001
157 mg (0,360 mmol) del compuesto n° 87 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(2-hidroxietil(metil)amino)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona] obtenidos según el método de la etapa 2 del Ejemplo 7 se disuelven en 7,5 mL de etanol y se añaden en porciones 21,14 mg (0,559 mmol) de borohidruro de sodio, Después de 16 h de agitación a 20°C, se vierte el medio de reacción sobre 20 mL de agua y se extrae tres veces con 15 mL de butanol. La fase orgánica se evapora para dar un polvo purificado por cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH/NH4OH, 85/14/1) para dar 96 mg (rendimiento: 60%) del compuesto n° 97: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[1-hidroxi-2-(2-hidroxietil(metil)amino)etil]-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona en forma de polvo blanco.
Compuesto n° 97:
LC-MS: m/z = 438,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 85,6 (s, 1H(C7)), 5,32-5,2 (m, 2H), 4,77 (s, 1H), 4,47 (d, 1H), 4,42-4,38 (m, 1H), 3,92-3,57 (m, 4H), 3,3-2,95 (m, 4H), 2,82 (s, 3H), 2,31-1,18 (m, 16H), 0,85 (s, 3H), 0,69 (s, 3H).
RMN de 13C (75 MHz, DMSO-de)8203,2, 164,9, 121,0, 82,8, 66,9, 59,0, 55,6, 50,6, 46,9, 40,7, 37, 34, 31,9, 31,1,30,3, 24,5, 23,2, 20,4, 16,3.
Los compuestos n° 98 a 100 se han preparado según el mismo esquema.
Figure imgf000048_0002
Ejemplo 10: Esquema J
Preparación del compuesto n° 101: (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-17-(N-metoxi-C-(morfolinometíl)carbonimidoil)-10,13-dimetíl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol
Figure imgf000048_0001
Se disuelven 30 pL (0,301 mmol) de hidrocloruro de metoxilamina en 0,6 mL de piridina y se añaden en porciones 136 mg (0,301 mmol) del compuesto n° 81 [(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona] preparados en la etapa 2 del Ejemplo 7. Después de 36 h de agitación a 20°C, se recoge el medio de reacción en 10 mL de diclorometano y se lava esta disolución dos veces con agua salada, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se evapora para dar un polvo purificado por cromatografía ultrarrápida sobre cartucho de gel de sílice (diclorometano/MeOH, 90/10) para dar 81 mg (rendimiento: 53%) del compuesto n° 101: (2S,3R,5R,6E,10R,13R,14S,17S)-6-metoxiimino-17-(N-metoxi-C-(morfolinometil)carbonimidoil)-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-2,3,14-triol en forma de polvo amarillo.
Compuesto n° 101:
LC-MS: m/z = 506,2 (MH+) pureza UV a 254 nm = 99%.
RMN de 1H (300 MHz, DMSO-de) 8 Mezcla de confórmeros (Z) y (E) en C6: 6,28 (s,0,45H (C7-confórmero E), 5,72 (s,0,55H (c7-confórmero Z), 4,62 (s,0,45H-confórmero E), 4,53 (s,0,55H-confórmero Z), 4,47-4,35 (m,1H), 4,33­ 4,21(m,1H), 3,77-3,70 (m,7H), 3,60-3,48 (m,5H), 3,16-3,06 (m,1H), 2,90-2,70 (m,2H), 2,45-1,20 (m,18H), 0,72 (s,3H), 0,64-0,57 (m,3H).
Cascada de cribado y caracterización de los efectos biológicos de los derivados de la 20-hidroxiecdisona
El desarrollo del ensayo de cribado se ha iniciado a partir de los trabajos de la bibliografía y se ha basado en las características de la patología de la sarcopenia. A nivel fisiopatológico, esta enfermedad se caracteriza por una disminución de la síntesis proteica y un aumento de la proteólisis. El desarrollo de futuros medicamentos se debe cribar por lo tanto sobre factores moleculares ligados a estos dos fenómenos.
A nivel celular, sobre cultivos de células musculares procedentes de la línea murina C2C12, Gorelick-Feldman et al. (2008) han mostrado que un tratamiento con fitoecdisonas aumenta la síntesis proteica en 20% de media. Los primeros estudios de implementación se han apoyado en las condiciones de cultivo y de tratamiento descritas por Gorelick-Feldman en presencia de productos de referencia (IGF-1 y 20-hidroxiecdisona o 20E). Se han realizado medidas de la incorporación de leucina tritiada en estas células para evaluar la síntesis de novo de proteínas. Estos primeros resultados han permitido determinar que la secuencia óptima para observar los efectos de las fitoecdisonas sobre la síntesis proteica era diferenciar las células durante 5 días, y luego poner leucina tritiada durante 2 h 30 min en presencia de IGF-1 o de 20E.
El análisis bibliográfico ha mostrado que moléculas tales como el IGF-1 no incrementaban la síntesis proteica más que un 20%, a la vez que activaban dianas de esta vía de señalización de forma más sostenida y que podían alcanzar estimulaciones del orden de 200% [Kazi et al., 2010]. Estas dianas comprenden las fosforilaciones activadoras de proteínas tales como la Akt o la S6 quinasa. Por otra parte, en el mismo sistema celular C2C12, Zubeldia et al. (2012) han analizado los fenómenos de apoptosis y de proteólisis. En su estudio, han señalado principalmente que extractos de plantas que contienen fitoecdisonas como la turquesterona o la 20E eran capaces, después de 24 h de tratamiento de células C2C12 diferenciadas, de inhibir la expresión de los genes de la miostatina y de la caspasa 3 en un factor de 4 y de 2, respectivamente [Zubeldia et al., 2012].
Después de varios experimentos en los que las células C2C12 diferenciadas en miotubos han sido incubadas en presencia de IGF-1 o de 20E durante 2 h 30 min ó 6 h, se han desarrollado dos ensayos de cribado. Así, la fosforilación de la proteína S6 quinasa y la expresión del gen de la miostatina se han estudiado para determinar su modulación por una hormona de crecimiento o una ecdisona y caracterizar estas modulaciones desde un punto de vista estadístico.
PROTOCOLOS
Inhibición de la expresión de la miostatina en células C2C12:
Las células mioblásticas C2C12 (ATCC CRL-1772) se siembran en placas de 24 pozos con una densidad de 30.000 células por pozo y se cultivan en un medio DMEM que contiene glucosa a razón de 4,5 g/L y suplementado con suero de ternera fetal (10%) y con antibióticos (penicilina y estreptomicina). Cuarenta y ocho horas más tarde se induce la diferenciación de los mioblastos por privación parcial de suero (2% en lugar de 10%) durante 5 días. Las células se colocan a continuación en un medio empobrecido en glucosa (DMEM que contiene 1 g/L de glucosa) y desprovisto de suero, en presencia de las moléculas que se van a ensayar o de las referencias (IGF-1 100 ng/mL ó 20E 10 j M) durante 6 h. Al final del experimento, los ARN mensajeros (ARNm) se extraen utilizando la metodología clásica a base de fenol y cloroformo. Brevemente, las células son lisadas con una disolución de trizol (Sigma T9424) que contiene un ácido fuerte y fenol. Los ARNm se separan de las proteínas por adición de cloroformo y luego centrifugación. A continuación, se precipitan en isopropanol para ser suspendidas a continuación con una concentración de 1 jg / jL en agua ultrapura desprovista de ARNasas y ADNasas. A continuación, 1 jg de ARNm se convierte por retrotranscripción en ADN complementario mediante la enzima AMV en presencia de un cebador y una mezcla de nucleótidos según el protocolo dado por el suministrador (Applied Biosystems 4368814). La expresión génica se estudia mediante reacción en cadena iniciada por una enzima polimerasa y generalmente denominada PCR en condiciones cuantitativas, de donde el nombre preciso de qPCR. Las qPCR se realizan sobre un 7900HT Fast real-Time PCR detection system (Applied Biosystems). Las condiciones de programación son estándar y consisten en 1 ciclo a 95°C durante 15 min, seguido de 40 ciclos a 95°C durante 15 s y a 60°C durante 1 minuto y se termina con una etapa de curva de fusión entre 60°C y 95°C. Las muestras analizadas contienen todas 100 ng de ADNc, un tampón de qPCR que incluye la enzima, la mezcla de oligonucleótidos y el agente intercalante (el sybergreen o SYBRgreen), y el par de cebadores específicos del gen estudiado, estratégicamente elegido entre dos secuencias exónicas y a la concentración final de 200 nM. Se fijan sondas fluorescentes sobre el ADN de doble cadena y que no emiten fluorescencia más que cuando se fijan al ADN. El programa de la máquina establece un umbral de fluorescencia. Cuando la cantidad de ADN permite a la sonda fluorescente superar el umbral, se obtiene un número de ciclo PCR denominado "Ct" por "Cycle Threshold" o ciclo umbral. Este valor es el que está en la base de los cálculos para cuantificar el ADN de forma relativa. Se establece una relación R entre la cantidad de ADN de partida de una muestra y la de un testigo, que no se ha sometido a tratamiento (es decir R=2'(Ct muestra -Ct testigo)) y se relaciona esta medida con la de un gen endógeno conocido por no estar modulado por el tratamiento (es decir R = 2'ññCt).
Los cebadores utilizados se recogen en la siguiente tabla:
Tabla 3: Cebadores utilizados para evaluar las modificaciones de expresión génica
Figure imgf000050_0001
Fosforilación de la S6 quinasa:
Se siembran las células mioblásticas C2C12 (ATCC CRL-1772) en placas de 6 pozos con densidad de 170.000 células por pozo y se cultivan en un medio DMEM que contiene glucosa a razón de 4,5 g/L y suplementada con suero de ternera fetal (10%) y con antibióticos (penicilina y estreptomicina). Cuarenta y ocho horas más tarde, se induce la diferenciación de los mioblastos por privación parcial de suero (2% en lugar de 10%) durante 5 días. Las células se colocan a continuación en un medio empobrecido en glucosa (DMEM que contiene 1 g/L de glucosa) y desprovisto de suero en presencia de las moléculas que se van a ensayar o de las referencias (IGF-1 100 ng/mL ó 20E 10 j M) durante 2 h. Al final del experimento, las células son lisadas con un tampón de lisis comercial (Invitrogen FNN0011) completado con una mezcla comercial de anti-proteasas (Roche 05056489001). Después de centrifugación, la fracción citoplásmica que contiene las proteínas solubles se guarda y se determina la concentración de proteínas utilizando un kit comercial (Biorad 500-0114) cuyo principio está compuesto de la dosificación por la metodología de Lowry. La dosificación de la fosforilación de S6 quinasa se realiza utilizando un kit ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) comercial (Cell signaling 7063). Brevemente, se depositan 50 jg de lisado proteico en los pozos de una microplaca de 96 pozos y se incuban toda la noche a 4°C con la disolución de antígeno específico del anticuerpo pS6 quinasa treonina 389. La fijación del antígeno sobre el fondo de los pozos se hace electrostáticamente. A continuación, la disolución de anticuerpos que se va a dosificar (pS6K T389) se incuba a 37°C en los pozos durante 2 horas. Los anticuerpos se fijan específicamente sobre el antígeno. A continuación, se lavan los pozos para eliminar con tampón de lavado los anticuerpos primarios específicos del antígeno que se va a dosificar que están en exceso. La tercera etapa consiste en fijar el anticuerpo de detección. La disolución de anticuerpos de detección se incuba a 37°C en los pozos durante 1 hora. Los pozos se lavan a continuación para eliminar los anticuerpos de detección en exceso. Nótese que los anticuerpos de detección están acoplados a una enzima que, en presencia de sustrato, le transforma en producto de reacción detectable y medible gracias a la aparición de una coloración. La última etapa consiste en revelar los anticuerpos fijados. Una disolución reveladora que contiene el sustrato para la enzima, en este caso el TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina), se incuba a 37°C y en la oscuridad durante 30 minutos. La aparición de una coloración azul en el sustrato indica la presencia del anticuerpo que se va a dosificar. Para evitar cualquier fenómeno de saturación, se añade una disolución de parada (que, en general, contiene sosa) y provoca un cambio de coloración, que de azul se vuelve amarilla. La intensidad de ésta es proporcional a la cantidad de enzima presente y por lo tanto a la concentración de anticuerpos buscada. La intensidad de la señal se mide por espectrometría a la longitud de onda de 450 nm.
Evaluación del efecto de las moléculas en un modelo de ratón sometido a régimen hiperlipídico
La 20E y el compuesto 51 como compuestos comparativos y el compuesto según la invención (N° 93) han sido administrados por vía oral, con una dosis de 5 mg/kg de peso corporal, a ratones C57BL/6J de 12 semanas sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas. Se ha evaluado el efecto de los compuestos sobre el peso y la cantidad de proteínas del músculo Soleus así como los transcritos de genes implicados en la miogénesis.
La miogénesis, proceso de formación de los tejidos musculares, está controlada por diversos factores de transcripción miogénicos que actúan como efectores terminales de la cascada de señalización y producen transcritos implicados en las diferentes etapas de desarrollo. Las funciones de los factores de transcripción han sido bien descritos en diferentes revisiones (Sabourin y Rudnicki 2000) y (Le Grand y Rudnicki 2007). La proteína Pax7 (Paired-box protein 7) mantiene una población de células satélites en estado quiescente y, con Myf5 (Myogenic factor 5), desempeña un papel en la expansión de mioblastos activados. La proteína MyoD (Myoblast Determination protein) parece determinar el potencial de diferenciación de mioblastos activados, y coopera con la miogenina y la proteína MEF2 (Myocyte Enhancer Factor 2) para controlar y provocar la diferenciación. Finalmente, se requiere la m RF4, (Muscle-specific Regulatory Factor 4) para la hipertrofia, aunque probablemente desempeña otras funciones. Obviamente, estos factores de transcripción no actúan solos, sino que existen en el marco de cascadas de señalización complejas que controlan cada etapa de la miogénesis (Knight and Kothary, 2011).
La determinación de la cantidad de proteínas se hace lisando en primer lugar los músculos extraídos en una disolución de NaOH 0,1N con la tecnología FastPrep, La cuantificación de las proteínas se hace por dosificación colorimétrica derivada del método de Lowry.
Para realizar el análisis de la expresión de los genes, se han homogeneizado los tejidos musculares en una disolución de Trizol (500 j L), y los ARN se extraen y se purifican utilizando el método con fenol/cloroformo. Se ha utilizado una cantidad de 1 pg de ARN como matriz para la síntesis de la primera cadena de ADNc utilizando oligo (dT) como cebadores y la enzima AMV transcriptasa inversa tal como la describe el fabricante (Applied Biosystems 4368814). A continuación, se efectúan las Q-PCR utilizando un dispositivo 7900HT provisto de un sistema rápido de detección en tiempo real mediante PCR (Applied Biosystems) y el programa qPCR estándar (1 ciclo de 95°C 15 min, 40 ciclos 95°C 15 s y 60°C 1 min, una curva de fusión a 60-95°C para las sondas de Sybergreen). Los experimentos se realizan en una mezcla maestra Sybergreen SYBR (Applied Biosystems) que contiene las muestras de ADNc 100 ng y un conjunto de cebadores que se fijan al nivel de 2 exones diferentes y a una concentración final de 200 nM.
Las diferencias relativas de la expresión de los genes entre tratamientos se expresan en aumento o disminución de los números de los tiempos de ciclo [Ct] comparado con el grupo de control. Habiendo normalizado el valor [Ct] de cada gen con el gen de la beta-actina.
Estudio de farmacocinética por vía oral de las moléculas en ratas
Se ha evaluado la farmacocinética de los compuestos por vía oral utilizando ratas Wistar macho (Charles River). La 20E como compuesto comparativo ha sido administrada en una dosis de 50 mg/kg de peso corporal. Los nuevos compuestos según la invención se han administrado en una dosis de 10 mg/kg de peso corporal en forma de una mezcla de 4 a 6 productos. Después de la administración, se toma sangre de la cola a t = 0,25 h; 0,5 h; 1 h; 3 h; 6 h y 8 h. Las muestras de sangre se han centrifugado y se han extraído los plasmas. La dosificación de las muestras de plasma ha permitido la determinación de los parámetros farmacocinéticos, es decir el Cmax, que corresponde a la concentración máxima observada después de la administración de la molécula, el Tmax que es el tiempo requerido para alcanzar la concentración máxima después de la administración de la molécula y el AUC: el área bajo la curva compuesta por las diferentes concentraciones en los diferentes tiempos de muestreo.
RESULTADOS
• Efectos sobre la expresión de la miostatina
Tabla 4: Efectos sobre la expresión de la miostatina. Los resultados se expresan en porcentaje de expresión génica de la miostatina en las células en contacto con los compuestos con respecto a la expresión en las células de control. A representa un porcentaje inferior a 70%, B representa un porcentaje entre 71% y 85%. Los compuestos se ensayan a la concentración de 10 j M.
Figure imgf000051_0001
Figure imgf000052_0001
Los 38 compuestos siguientes: 4, 5, 7, 21, 25, 27 a 29, 31 a 33, 38, 41, 43, 46, 47, 51 a 54, 62 a 65, 67, 68, 71, 75, 76, 79, 81, 86, 89, 92 a 94, 99 y 101 inhiben de forma muy significativa la expresión de la miostatina en las células musculares.
Los 15 compuestos siguientes: 19, 23, 30, 35 a 37, 48, 56, 57, 60, 73, 83, 85, 88 y 91 inhiben de forma significativa la expresión de la miostatina en las células musculares.
• Efectos sobre la síntesis proteica vía la fosforilación de la S6K1.
Tabla 5: Efectos sobre la síntesis proteica. Los resultados se expresan en porcentaje de aumento de la fosforilación de la S6K en las células musculares, A representa valores superiores a 130%, B valores comprendidos entre 110 y 129%. Los compuestos se ensayan a la concentración de 10 pM.
Figure imgf000052_0002
Los 8 compuestos siguientes: 28, 42, 62, 67, 86, 89, 93 y 94 estimulan la fosforilación de la S6K1 de forma muy significativa a niveles equivalentes al IGF-1 (130-140%).
Los 12 compuestos siguientes: 32, 41, 43, 46, 51, 52, 63, 76, 81, 88, 91 y 92 estimulan la fosforilación de la S6K1 de forma significativa a niveles equivalentes al de la 20E (120%).
• Estudio de las moléculas en un modelo de ratones sometidos a un régimen hiperlipídico
El estudio in vivo se realiza evaluando el efecto de la 20E y el compuesto 51 como compuestos comparativos y la molécula según la invención (N° 93) administrados por vía oral, a una dosis de 5 mg/kg de peso corporal, a ratones C57BL/6 sometidos a un régimen hiperlipídico durante 6 semanas. Se han evaluado el efecto de las moléculas sobre el peso y la cantidad de proteínas del músculo Soleus así como los transcritos de genes implicados en la miogénesis. Los efectos de la 20E y el n° 51 como compuestos comparativos y el compuesto según la invención n° 93 sobre el peso del músculo se ilustran en la figura 3A y los efectos de la 20E y de los compuestos n° 51 y 93 sobre la cantidad de proteínas del músculo Soleus se ilustran en la figura 3B.
La 20E y los compuestos administrados a 5 mg/kg inducen los 3 aumentos del peso y de la cantidad de proteínas del músculo Soleus comparado con el grupo de control, Los compuestos n° 51 y 93 muestran una eficacia tan grande como la de la 20E. Incluso, se observa un aumento significativo del contenido de proteínas con el compuesto n°93. Los efectos de la 20E y del compuesto n° 51 como compuestos comparativos y del compuesto según la invención administrado n° 93, sobre el transcrito de la miostatina del músculo Soleus, se ilustran en la figura 4.
La 20E y los compuestos n°51 y 93 inhiben de forma comparable la expresión de la miostatina en el músculo Soleus. Estas moléculas inhibían también el transcrito de la miostatina en los estudios in vitro de las líneas celulares C2C12 tal como se presenta en la tabla 4 anterior.
Los efectos de la 20E y del compuesto n° 51 como compuestos comparativos y del compuesto según la invención n° 93 sobre los transcritos de MyoD y de la miogenina, genes implicados en la miogénesis del músculo Soleus, se ilustran respectivamente en las figuras 5A y 5B,
La 20E y los compuestos n°51 y 93 inducen el aumento de los transcritos de los genes MyoD que determina el potencial de diferenciación y Myf5 implicado en la proliferación de los miocitos. Inducen también el aumento del transcrito del gen de la miogenina implicada en la diferenciación precoz de los miocitos.
• Estudio farmacocinético de las moléculas en ratas
La farmacocinética de la 20E y de compuestos según la invención ha sido evaluada en ratas mediante la administración oral de una dosis de 10 mg/kg en el caso de los compuestos y de 50 mg/kg en el caso de la 20E.
Tabla 6: Principales parámetros de farmacocinética (Tmaxi Cmax y AUC) de la 20E y de los compuestos ensayados en ratas Wistar
Figure imgf000053_0001
Teniendo en cuenta la dosis 5 veces mayor de 20E (50 mg/kg) con relación a la de los compuestos según la invención (10 mg/kg), el coeficiente de exposición Cexp [Cexp= (Dosis20EX AUCcompuesto): (Dosiscompuesto x AUC20E)] pone de manifiesto la mejora del perfil farmacocinético de todos los compuestos ensayados con relación a la 20E. Así este estudio en ratas muestra que los compuestos n° 31; 46; 51 y 93 presentan una mejor exposición plasmática con relación a la 20E.
• Balance
La tabla ilustrada en la figura 6 expone los resultados obtenidos para compuestos de la presente invención en experimentos de análisis de la expresión génica de la miostatina y de la síntesis proteica.
En relación con la expresión génica de la miostatina, los resultados se expresan en porcentaje de expresión génica de la miostatina en las células en contacto con los compuestos con respecto a la expresión en las células control. A representa un porcentaje inferior a 70%, B representa un porcentaje entre 71% y 85%.
En relación con el análisis de la síntesis proteica los resultados se expresan en porcentaje de aumento de la fosforilación de la S6K en las células musculares. A representa valores superiores a 130%, B valores comprendidos entre 110 y 129%.
Tabla 7: Balance de los resultados ilustrados en la figura 6,
Figure imgf000054_0001
Los productos más atractivos son de categoría AA o AB, a saber de categoría A para su expresión génica sobre la miostatina asociada a una categoría A o B en síntesis proteica.
BIBLIOGRAFÍA
Argoulet P, Bialek P, Liang LF, et al. 2013. A myostatin inhibitor (propeptide-Fc) increases muscle mass and muscle fiber size in aged mice but does not increase bone density or bone strength. Exper Gerontol 48:898-904.
Aubertin-Leheudre M, Lord C, Khalil A, Dionne IJ. 2007. Six months of isoflavone supplement increases fat-free mass in obese-sarcopenic postmenopausal women: a randomized double-blind controlled trial. Eur J Clin Nutr 61:1442-1444.
Aussel C, Woelffle E, Lemoigne P, Depailler L, Bouillanne O. 2013. Une nouvelle stratégie nutritionnelle pour lutter contre la dénutrition et la sarcopénie : le régime protéique pulsé. Cahiers Nutrition Diététique 48:33-40. Azizov AP, Seifulla RD, Ankudinova IA, Kondrat'eva II, Borisova iG. 1998. Effect of the antioxidants elton and leveton on the physical work capacity of athletes. Eksp Klin Farmakol 61(1):60-62.
Baptista IL, Leal ML, Artioli GG, et al. 2010. Leucine attenuates skeletal muscle wasting via inhibition of ubiquitin ligases. Muscle Nerve 41(6):800-808.
Báthori M, Tóth N, Hunyadi A, Márki A, Zador E. (2008). Phytoecdysteroids and anabolic-androgenic steroids -Structure and effects on Humans. Current Medicinal Chemistry 15:75-91.
Bennett BT, Mohamed JS, Alway SE. 2013. Effects of resveratrol on the recovery of muscle mass following disuse in the plantaris muscle of aged rats. PLoS One 8(12):e83518.
Boirie Y, Gachon P, Beaufrére B. 1997. Splanchnic and whole body leucine kinetics in young and elderly men. Am J Clin Nutr. 65:489-495.
Bonnefoy M, Constans T, Ferry M. 2000. Dénutrition du sujet ágé. Influence de la nutrition et de l'activité physique sur le muscle au grand áge. Presse Med 29:2177-2182.
Bonnefoy M. 2008. Interventions pour restaurer la masse musculaire chez le sujet ágé. Nutr Clin Metab 22:80-83.
Buehring B, Binkley N. 2013. Myostatin - the holy grail for muscle, bone, and fat? Curr Osteoporos Rep 11(4):407-414.
Castan-Laurell I, Dray C, Knauf C, Kunduzova O, Valet P. 2012. Apelin, a promising target for type 2 diabetes treatment? Trends Endocrinol Metab 23(5):234-241.
Chermnykh NS, Shimanovsky NL, Shutko GV, Syrov VN. 1988. Effects of methandrostenolone and ecdysterone on physical endurance of animais and protein metabolism in the skeletal muscles. Farmakologiya i Toksikologiya6: 57-62.
Coeffier M, Petit A, Déchelotte P. 2009. Quelle pharmaconutrition pour lutter contre la sarcopénie ? Nutrition Clinique Métabolisme 23:76-79.
Collins-Hooper H, Sartori R, Macharia R, et al. 2014. Propeptide-mediated inhibition of myostatin increases muscle mass through inhibiting proteolytic pathways in aged mice. J Gerontol A Biol Sci Med Sci, doi:10.1093/gerona/gh170.
Crenn P. 2013. Sarcopénie et cachexie : approche médicamenteuse. Nutrition Clinique Métabolisme 27:69-73.
de Jager N, Hudson NJ, Reverter A, et al. 2011. Chronic exposure to anabolic steroids induces the muscle expression of oxytocin and a more than fiftyfold increase in circulating oxytocin in cattle. Physiol Genomics 43:467-478.
Dumonceaux J, Marie S, Beley C, Trollet C, Vignaud A, Ferry A, Butler-Browne G, Garcia L. 2010. Combination of myostatin pathway interference and dystrophin rescue enhances tetanic and specific force in dystrophic mdx mice. Mol Ther 18(5): 881-887.
Fiatarone MA, Marks EC, Ryan ND, Meredith CN, Lipsitz LA, Evans WJ. 1990. High-intensity strength training in nonagerians. JAMA 263: 3029-3034. Foucault AS, Mathé V, Lafont R, Even P, Dioh W, Veillet S, Tomé D, Huneau D, Hermier D, Quignard-Boulangé A. 2012. Quinoa extract enriched in 20-hydroxyecdysone protects mice from dietinduced obesity and modulates adipokines expression. Obesity 20:270-277.
Foucault AS, , Dioh W, Lafont R, Veillet S, Tomé D, Quignard-Boulangé A, , Clément K, Rizkalla S. 2014. 20-Hydroxyecdysone increases android fat mass loss with no significant effect on muscle mass loss during a weight loss program in obese and overweight subjects. ICFSR 2014 International Conference of Frailty and Sarcopenia Research, Barcelone, 12-14/03/2014. Gadzhieva RM, Portugalov SN, Paniushkin VV, Kondrat'eva II. 1995. A comparative study of the anabolic action of ecdysten, leveton and Prime Plus, preparations of plant origin. Eksp Klin Farmakologiya 58(5): 46-48. Gilson H, Schakman O, Combaret L, et al. 2007. Myostatin gene deletion prevents glucocorticoid-induced muscle atrophy. Endocrinology 148:452-460. Gorelick-Feldman J, MacLean D, Ilic N, Poulev A, Lila MA, Raskin I.2008. Phytoecdysteroids increase protein synthesis in skeletal muscle cells. J. Agric. Food Chem. 56: 3532-3537.
Gorelick-Feldman J, Cohick W, Raskin I. 2010. Ecdysteroids elicit a rapid Ca2+ flux leading to Akt activation and increased protein synthesis in skeletal muscle cells. Steroids 70: 632-637.
Greenberg SA. 2012. Pathogenesis and therapy of inclusión body myositis. Curr Opin Neurol 25(5): 630-639.
Han HQ, Mitch WE. 2011. Targeting the myostatin signaling pathway to treat muscle wasting diseases. Curr Opin Support Palliat Care 5(4):334-341. Hung TJ, Chen WM, Liu SF, et al. 2012. 20-Hydroxyecdysone attenuates TGF-p1-induced renal cellular fibrosis in proximal tubule cells. J Diabetes Complications 26(6):463-469.
Kazi AA, Lang CH 2010. PRAS40 Regulates Protein Synthesis and Cell Cycle in C2C12 Myoblasts Mol Med.16(9-10):359-371.
Kizelsztein P, Govorko D, Komarnytsky S, Evans A, Wang Z, Cefalu WT, Raskin I. 2009. 20-Hydroxyecdysone decreases weight and hyperglycemia in a diet-induced obesity mice model. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab.
296:E433-E439.
Kumpun S. et al. 2011. The metabolism of 20-hydroxyecdysone in mice: Relevance to pharmacological effects and gene switch applications for ecdysteroids. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 126(1-2): 1-9.
KnightJDR, Kothary R. 2011. The myogenic kinome: protein kinases critical tomammalian skeletal myogenesis Skeletal Muscle, 1:29, http://www.skeletalmusclejournal.com/content/171/29
Lafont R, Clément K, Rizkalla S, Foucault AS, Veillet S, Dioh W. 2013 Phytoecdysones for use in weight stabilization after a weight-loss diet. Demande de brevet PCT WO 2013/068704
Lafont R, Harmatha J, Marion-Poll F, Dinan L, Wilson ID. 2002. Ecdybase, a freeecdysteroiddatabase. http://ecdybase.org
Larock RC. 1989. Comprehensive organic transformations: A guide to functional group preparations. VCH Publishers, New York.
Lawrence MM. 2012. Ajuga turkestanica as a countermeasure against sarcopenia and dynapenia. Ms thesis, Appalachian State University.
Le Grand F, Rudnicki MA. 2007.Skeletal muscle satellite cells and adultmyogenesis. Curr Opin Cell Biol, 19:628-633. Léger B, Derave W, De Bock K; Hespel P, Russell AP. 2008. Human sarcopenial reveals an increase in SOCS-3 and myostatin and a reduced efficiency of Akt phosphorylation. Rejuvenation Res 11(1):163-175.
Li Z, Heber D. 2011. Sarcopenic obesity in the elderly and strategies for weight management. Nutrition Reviews 70(1):57-64.
Li ZB, Kollias HD, Wagner KR. 2008. Myostatin directly regulates skeletal muscle fibrosis. J. Biol. Chem.
283(28):19371-19378.
Little JP, Phillips SM. 2009. Resistance exercise and nutrition to counteract muscle wasting. Appl Physiol Nutr Metab 34:817-828.
Liu W, Thomas SG, Asa SL, et al. 2003. Myostatin is a skeletal muscle target of growth hormone anabolic action. J Clin Endocr Metab 88(11):5490-5496. Macell TJ, Harman SM, Urban RJ, et al. 2001. Comparison of GH, IGF-I, and testosterone with mRNA of receptors and myostatin in skeletal muscle in older men. Am J Physiol Endocrinol Metab 281 :E1159-E1164.
Murad MH, Elamin KB, Abu Elnour NO, et al. 2011. Clinical review: the effect of vitamin D on falls: a systematic review and meta-analysis. J Clin Endocrinol Metab 96(10):2997-3006.
Murphy KT, Koopman R, Naim T, et al. 2010. Antibody-directed myostatin inhibition in 21-mo-old mice reveals novel roles for myostatin signaling in skeletal muscle structure and function. FASEB J 24:4433-4442.
Pierno S, Tricarico D, Liantonio A, et al. 2014. An olive oil-derived antioxidant mixture ameliorates the age-related decline of skeletal muscle function. AGE 36:73-88.
Quillot D, Bohme P, Malgras P, Malgras A, Ziegler O. 2013. L'obésité du sujet ágé. Nutr Clin Métabolisme 27:95-101. Ryall JG, Plant DR, Gregorevic P, Silence MN, Lynch GS. 2004. p2-Agonist administration reverses muscle wasting and improves muscle function in aged rats. J Physiol 555(1):175-188.
Ryall JG, Church JE, Lynch GS. 2007. A novel role of p-adrenoreceptor signalling in skeletal muscle growth, development and régénération. Proc Australian Physiol Soc 40:103-108.
Ryan AS, Li G, Blumenthal JB, Ortmeyer HK. 2013. Aerobic exercise weight loss decreases skeletal muscle myostatin expression and improves insulin sensitivity in older adults. Obesity 21(7):1350-1356.
Sabourin LA, Rudnicki MA. 2000. The molecular regulation of myogenesis. Clin Genet 57:16-25.Saini A, Faulkner S, AL-Shanti N, Stewart C. 2009. Powerful signais for weak muscles. Ageing Res Rev 8:251-267.
Sakuma K, Yamaguchi A. 2012. Sarcopenia and age-related endocrine function. Int J Endocrinol, doi:10.1155/2012/127362.
Sattler FR. 2013. Growth hormone in the aging male. Best Practice Res Clin Endocr Metab 27:541-555.
Schaap LA, Pluijm SMF, Deeg DJH, et al. 2009. Higher inflammatory marker levels in older persons: associations with 5-year change in muscle mass and muscle strength. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 64A(11):1183-1189.
Seidlova-Wuttke D, Erhardt C, Wuttke W. 2010. Metabolic effects of 20-OH ecdysone in ovariectomized rats. J Steroid Biochem Mol Biol 119:121-126.
Seidman SN. 2007. Androgens and the aging male. Psychopharmacol Bull 40:205-218.
Shadfar S, Couch ME, McKinney KA, et al. 2011. Oral resveratrol therapy inhibits cancer-induced skeletal muscle and cardiac atrophy in vivo. Nutr Cancer 63(5):749-762.
Simakin SYu, Panyushkin VV, Portugalov SN, Kostina LV, Martisorov EG. 1988. Combined application of preparation Ecdysten and product Bodrost during training in cyclic sports. Sports Science Bulletin N°2, 29-31.
Stenholm S, Alley D, Bandinelli S, et al. 2009. The effect of obesity combined with low muscle strength on decline in mobility in older persons: results from the InCHIANTI study. Int J Obesity 33:635-644.
Syrov VN. 2000. Comparative experimental investigations of the anabolic activity of ecdysteroids and steranabols. Pharm Chem Journal 34(4):193-197.
Syrov VN, Saatov V, Sagdullaev ShSh, Mamatkhanov AU. (2001). Study of the structure - anabolic activity relationship for the phytoecdysteroids extracted from some plants of central Asia. Pharmaceutical Chemistry Journal 35: 667-671. Tchoukouegno Ngueu S. 2013. Estrogenic, cytotoxic and anabolic effects on estrogen target organs of an extract of Erythrina excelsa and ecdysterone. PhD thesis, German Sports University of Cologne.
Tisdale MJ. 2001. Facteurs lipolytiques et protéolytiques de la cachexie cancéreuse. Nutr Clin Métabol 15:266-272.
Todorov IN, Mitrokhin Yul, Efremova Ol, Sidorenko LI. 2000. The effect of ecdysterone on the biosynthesis of proteins and nucleic acids in mice. Pharmaceut Chem J 34(9):455-458.
Tóth N, Szabó A, Kacsala P, Héger J, Zádor E. 2008. 20-Hydroxyecdysone increases fiber size in a muscle-specific fashion in rat. Phytomedicine 15:691-698.
Verghese J, Holtzer R, Oh-Park M, et al. 2011. Inflammatory markers and gait speed decline in older adults. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 66A:1083-1089.
Walston JD. 2012. Sarcopenia in older adults. Curr. Opinion Rheumatol. 24:623-627.
White JP, Gao S, Puppa MJ, et al. 2013. Testosterone regulation of Akt/mTORC1/FoxO3a signaling in skeletal muscle. Mol Cell Endocrinol 365:174-186.
White TA, LeBrasseur, NK. 2014. Myostatin and sarcopenia: opportunities and challenges - a mini-review. Gerontology, doi:10.1159/000356740.
Wuttke W, Seidlová-Wuttke D. 2013. Pflanzliche Praparate für die Therapie klimaterischer und postmenopausaler Beschwerden und Erkrankungen. Frauenartz 54:580-587.
Zhao J, Brault JJ, Schild A, Goldberg AL. 2008. Coordinate activation of autophagy and the proteasome pathway by FoxO transcription factor. Autophagy 4(3):378-380.
Zhu WM, Zhu HJ, Tian WS, Hao XJ, Pittman Jr CU. 2002. The selective dehydroxylation of 20-hydroxyecdysone by Zn powder and anhydrous acetic acid. Synthetic Communications 32:1385-1391.
Zubeldia JM, Hernández-Santana A, Jiménez-de-Rio M, et al. 2012. In vitro characterization of the efficacy and safety profile of a proprietary Ajuga turkestanica extract. Chinese Medicine 3:215-222.

Claims (8)

REIVINDICACIONES
1 .-Compuesto de la fórmulageneral (I) siguiente:
Figure imgf000058_0001
en la que:
V-U es un enlace sencillo carbono-carbono e Y es un grupo hidroxilo o un hidrógeno, o V-U es un enlace etilénico C=C;
X se elige entre: un oxígeno; o un grupo N-OR5,
eligiéndose entonces R5 entre: un hidrógeno; un grupo alquilo de C1-C6 que posee o no insaturaciones en la cadena; un grupo (C rC 6)CO2R6, pudiendo ser R6 un hidrógeno o un grupo de C1-C6; un grupo (C1-C6)OR7, siendo R7 un ciclo aromático o heteroaromático mono o polisustituido o no con un grupo alquilo o alcoxilo, CF3 o Cl; un grupo (CrC6)NR8R9, siendo R8 y R9 grupos de C1-C6, o grupos (CrC6)N(CrC6) o grupos (C1-C6)N(C1-C6)OR6 con R6 definido como anteriormente, NR8R9 puede ser también un heterociclo;
y en la que:
• Q es un grupo carbonilo;
eligiéndose R1 entre: un grupo (CrC6)W(CrC6); un grupo (CrC6)W(CrC6)W(CrC6); un grupo (C1-C6)W(C1-C6)CO2(C1-C6); un grupo (C1-C6)A, representando A un heterociclo eventualmente sustituido con un grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(C1-C6) o CO2(C1-C6); o un grupo CH2Br;
siendo W un heteroátomo elegido entre N, O y S;
estando el compuesto en forma de un enantiómero, un diastereoisómero, un hidrato, un solvato, un tautómero, una mezcla racémica o una sal farmacéuticamente aceptable.
2. - Compuesto según la reivindicación 1, en el que en la fórmula (I):
X es un oxígeno;
V-U es un enlace sencillo carbono-carbono;
Y es un grupo hidroxilo;
R1 se elige entre: un grupo (CrC6)W(CrC6); un grupo (C1-C6)W (CrC6)W (CrC 6); un grupo (CrC6)W (Cr C6)CO2(Cr C6); o un grupo (CrC6)A, representando A un heterociclo eventualmente sustituido con un grupo de tipo OH, OMe, (C1-C6), N(CrC6) o CO2(C rC 6);
W es un heteroátomo elegido entre N, O y S.
3. - Compuesto según la reivindicación 1, en el que en la fórmula (I), V-U es un enlace etilénico C=C.
4. - Compuesto según la reivindicación 1, en el que en la fórmula (I), X es un grupo N-OR5.
5.- Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, elegido entre los siguientes compuestos:
- n° 81: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-17-(2-morfolinoacetil)-2,3,4,5,9,11,12, 15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 86: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(3-hidroxipirrolidin-1-il)acetil]-10,13-dimetil-2,3, 4.5.9.11.12.15.16.17- decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 88: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(4-hidroxi-1-piperidil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4, 5.9.11.12.15.16.17- decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 89: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-[4-(2-hidroxietil)-1 -piperidil]acetil]-10,13-dimetil -2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-lH-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 91: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-[2-(3-dimetilaminopropil(metil)amino)acetil]-2,3,14-trihidroxi-10, 13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 92: 2-[2-oxo-2-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetN-6-oxo-2,3A5,9,11,12,15, 16,17-decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il]etil]sulfanilacetato de etilo
- n° 93: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-17-(2-etilsulfanilacetil)-2,3,14-trihidroxi-10,13-dimetil-2,3,4,5,9,11,12, 15.16.17- decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona
- n° 94: (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihidroxi-17-[2-(2-hidroxietilsulfanil)acetil]-10,13-dimetil-2,3,4, 5.9.11.12.15.16.17- decahidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-6-ona.
6. - Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, como medicamento.
7. - Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su utilización en el tratamiento y/o la prevención de la sarcopenia y en particular de la obesidad sarcopénica, de sus complicaciones y/o de patologías asociadas, tales como la pérdida de fuerza, de masa muscular, de rendimiento y capacidad físicos y de movilidad en mamíferos.
8. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su utilización en el tratamiento y/o la prevención de la obesidad y de sus complicaciones y/o de patologías asociadas, ventajosamente de la diabetes de tipo 2 o del síndrome metabólico en mamíferos.
ES15732785T 2014-05-20 2015-05-20 Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular Active ES2732460T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1454538A FR3021318B1 (fr) 2014-05-20 2014-05-20 Produits derives de la 20-hydroxyecdysone et leur utilisation dans la preparation de medicaments
PCT/FR2015/051332 WO2015177469A1 (fr) 2014-05-20 2015-05-20 Composés chimiques et leur utilisation pour l'amélioration de la qualité musculaire

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2732460T3 true ES2732460T3 (es) 2019-11-22

Family

ID=51518935

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15732785T Active ES2732460T3 (es) 2014-05-20 2015-05-20 Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular

Country Status (15)

Country Link
US (2) US9938315B2 (es)
EP (2) EP3461833A1 (es)
JP (1) JP6621217B2 (es)
KR (1) KR102506149B1 (es)
CN (1) CN106536539B (es)
AU (1) AU2015263121B2 (es)
CA (1) CA2949649A1 (es)
ES (1) ES2732460T3 (es)
FR (1) FR3021318B1 (es)
IL (1) IL249062A0 (es)
PL (1) PL3145942T3 (es)
PT (1) PT3145942T (es)
RU (1) RU2724329C2 (es)
TR (1) TR201909078T4 (es)
WO (1) WO2015177469A1 (es)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3065644B1 (fr) * 2017-04-28 2020-02-21 Biophytis Extrait de 20-hydroxyecdysone de qualite pharmaceutique, son utilisation et sa preparation
FR3078252B1 (fr) * 2018-02-28 2020-08-14 Biophytis Phytoecdysones pour leur utilisation dans la prevention de la perte de force musculaire lors d’une immobilisation
FR3093640B1 (fr) 2019-03-15 2021-10-01 Biophytis Phytoecdysones et leurs dérivés pour leur utilisation dans le traitement de maladies neuromusculaires
FR3093641B1 (fr) * 2019-03-15 2023-11-03 Biophytis Phytoecdysones et leurs dérivés pour leur utilisation dans le traitement de l’altération de la fonction respiratoire
FR3108504B1 (fr) 2020-03-30 2023-03-31 Biophytis Phytoecdysones et leurs dérivés pour leur utilisation dans le traitement d’altérations de la fonction respiratoire lors d’une infection virale
WO2022133265A1 (en) * 2020-12-17 2022-06-23 University Of Florida Research Foundation, Incorported Steroidal compound derivatives as therapeutic agents
FR3128873A1 (fr) 2021-11-10 2023-05-12 Biophytis Phytoecdysones et/ou dérivés de 20-hydroxyecdysone en combinaison avec un principe actif visant à restaurer l’expression SMN pour leur utilisation dans le traitement de l’amyotrophie spinale

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1618881A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-25 Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) GmbH Use of non-glucocorticoid steroids for the treatment of muscular dystrophy
WO2007100695A2 (en) * 2006-02-28 2007-09-07 Trustees Of Boston University Metabolic regulators and uses thereof
EP2265116A4 (en) * 2008-03-14 2013-02-06 Intrexon Corp STEROID LIGANDS AND THEIR USE IN GENE SWITCH MODULATION
FR2982489B1 (fr) 2011-11-10 2013-12-27 Inst Biophytis Sas Phytoecdysones pour leur utilisation dans la stabilisation du poids apres un regime amaigrissant
FR2983733B1 (fr) * 2011-12-13 2017-12-22 Inst Biophytis Sas Phytoecdysones pour leur utilisation dans l'amelioration de la qualite musculaire de mammiferes obeses et/ou sarcopeniques

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017516851A (ja) 2017-06-22
BR112016027053A8 (pt) 2022-11-29
RU2016149619A3 (es) 2018-11-19
EP3145942A1 (fr) 2017-03-29
PT3145942T (pt) 2019-07-04
CA2949649A1 (fr) 2015-11-26
FR3021318A1 (fr) 2015-11-27
CN106536539B (zh) 2020-01-07
AU2015263121B2 (en) 2018-12-06
EP3461833A1 (fr) 2019-04-03
AU2015263121A1 (en) 2017-01-12
BR112016027053A2 (pt) 2017-08-15
FR3021318B1 (fr) 2017-04-28
US20180327444A1 (en) 2018-11-15
KR102506149B1 (ko) 2023-03-07
CN106536539A (zh) 2017-03-22
US20170226151A1 (en) 2017-08-10
RU2016149619A (ru) 2018-06-20
WO2015177469A1 (fr) 2015-11-26
IL249062A0 (en) 2017-01-31
TR201909078T4 (tr) 2019-07-22
KR20170027319A (ko) 2017-03-09
RU2724329C2 (ru) 2020-06-23
US9938315B2 (en) 2018-04-10
PL3145942T3 (pl) 2019-10-31
US10316056B2 (en) 2019-06-11
JP6621217B2 (ja) 2019-12-18
EP3145942B1 (fr) 2019-04-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2732460T3 (es) Compuestos químicos y su utilización para la mejora de la calidad muscular
TWI776886B (zh) Sestrin-gator2交互作用之調節劑及其用途
ES2941969T3 (es) Moduladores de la interacción de Sestrina-GATOR2 y sus usos
JP2016531121A (ja) 疾患の治療のためのｋｄｍ１ａ阻害剤
EA018258B1 (ru) Замещенный ациланилид и содержащие его композиции и способы лечения
WO2016176473A1 (en) Apelin receptor agonists and methods of use thereof
US12006321B2 (en) Substituted pyrazolo[1,5-a]pyrimidines as apelin receptor agonists
WO2018053373A1 (en) Uses of satl-inducible kinase (sik) inhibitors for treating osteoporosis
WO2021108198A1 (en) Inhibitors of receptor interacting protein kinase i for the treatment of disease
US20110275577A1 (en) Methods of treating dermatologic, gynecologic, and genital disorders with caffeic acid analogs
ES2908602T3 (es) Nuevos inhibidores de BRaf y uso de los mismos para el tratamiento de reacciones cutáneas
CA2904116C (en) Onapristone polymorphic forms and methods of use
CA2929345A1 (en) Co-targeting androgen receptor splice variants and mtor signaling pathway for the treatment of castration-resistant prostate cancer
BR112016027053B1 (pt) Composto e usos de um composto
CA2808492A1 (en) Antifungal agents and uses thereof
JP2018537530A (ja) 滑膜肉腫を処置するための化合物および方法
JP6791977B2 (ja) 骨格筋の肥大剤としてのフロスタン−３オール誘導体
KR20230025869A (ko) Tlr7/8 길항제 및 이의 용도
WO2004001018A2 (en) Vacuolins
JPH0769883A (ja) アロマターゼ阻害剤
WO2023288069A1 (en) Methods of using substituted flavones for treating bone disorders
CN106102726A (zh) 4‑苄磺酰基‑2‑丁腈
JP2002356446A (ja) 医薬用溶液