ES2706505T3

ES2706505T3 - Mejora de la tasas de flujo de microesferas de vidrio para facilitar la fabricación de elemento de prueba de inmunodiagnóstico

Info

Publication number: ES2706505T3
Application number: ES16170272T
Authority: ES
Inventors: Jonathan Burr Crowther; Amy Louise Surowitz; Anna Krystyna Luczak
Original assignee: Ortho Clinical Diagnostics Inc
Current assignee: Ortho Clinical Diagnostics Inc
Priority date: 2012-10-16
Filing date: 2013-10-15
Publication date: 2019-03-29
Anticipated expiration: 2033-10-15
Also published as: ES2586910T3; US20140106466A1; US10107809B2; BR102013026691A2; EP3076176A1; CN103728445A; CA2829953A1; EP2722671B1; JP2014081377A; CN103728445B; JP6342137B2; EP2722671A1; BR102013026691A8; US9354242B2; US20160202255A1; EP3076176B1; DK2722671T3

Abstract

Un método para fabricar un elemento de prueba de inmunodiagnóstico, dicho elemento incluyendo una pluralidad de columnas de prueba, dicho método comprendiendo: lavar una pluralidad de microesferas de vidrio de tamaño micro; colocar la pluralidad de microesferas de vidrio en un aparato de mezcla; colocar una cantidad preseleccionada de nanopartículas inertes en el aparato de mezcla en el que las microesferas de vidrio y las nanopartículas están hechas de sustancialmente el mismo material; mezclar juntas la pluralidad de microesferas de vidrio y las nanopartículas inertes usando el aparato de mezcla, en donde se hace que las nanopartículas inertes se adhieran a la superficie exterior de dichas microesferas de vidrio; colocar la mezcla de las microesferas de vidrio y las nanopartículas inertes en las columnas de prueba; y colocar un reactivo acuoso en las columnas de prueba.

Description

DESCRIPCIÓN

Mejora de la tasas de flujo de microesferas de vidrio para facilitar la fabricación de elemento de prueba de inmunodiagnóstico

CAMPO TECNICO

La materia divulgada en la presente se refiere de manera general a microesferas de vidrio como se usan en un elemento de prueba de inmunodiagnóstico y más específicamente a un método para mejorar las propiedades del flujo de las microesferas de vidrio para su uso en un elemento de prueba sin interferir con la funcionalidad del mismo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

La tecnología de aglutinación en columna (CAT) emplea un elemento de prueba de inmunodiagnóstico, como un casete o tarjeta, que incluye o soporta una pluralidad de columnas o cámaras. Una cantidad de microesferas que están típicamente hechas de vidrio o material similar o, alternativamente, una matriz de gel se añaden a las columnas del elemento de prueba junto con un reactivo adecuado antes de la adición de una muestra del paciente, como sangre total, plasma, suero o glóbulos rojos. Se puede crear entonces una reacción de aglutinación en cada cámara de prueba seguido por centrifugación o agitación del elemento de prueba, permitiendo de este modo la determinación del grupo sanguíneo u otras pruebas. Durante la centrifugación, los aglutinantes grandes quedan atrapados sobre las microesferas mientras que los aglutinantes más pequeños quedan atrapados a lo largo de la longitud de la columna, dentro de las microesferas o matriz de gel, y los glóbulos rojos más pequeños (RBC) pasan a través de ellos hacia el fondo de la columna. Ejemplos de casetes de prueba que emplean CAT se describen en las Patentes de Estados Unidos N° 5.338.689 y 5.863.802. La EP0849595 describe el uso de partículas sintéticas como reactivos en reacciones de aglutinación. La EP0485228 describe un dispositivo y ensayo de aglutinación en columna. La JP H06148191 A describe una partícula unida a péptido para su uso en un inmunoensayo de aglutinación.

La fabricación eficiente de los elementos de prueba de aglutinación en columna requiere que las microesferas usadas en la misma sean capaces de fluir libremente durante un paso de llenado de fabricación cuando las microesferas de vidrio son dispensadas inicialmente en cada una de las columnas de prueba. Después de su fabricación, y como se recibe de los distribuidores, las microesferas de vidrio tienen típicamente tasas de flujo adecuadas. Sin embargo, las microesferas también incluyen varias impurezas, como polvo, aceites y carbonato de sodio, que evitarían la consistencia general en el uso. Por lo tanto, las microesferas se lavan antes de llenar las columnas de un elemento de prueba. Aunque la operación de lavado elimina las impurezas, este proceso también produce fuerzas de atracción entre las microesferas que pueden retardar significativamente las tasas de flujo de las microesferas e impactar en el tiempo de fabricación en el llenado de las cámaras de un elemento de prueba.

Las microesferas de vidrio de borosilicato Tipo I de aproximadamente 50-120 pm de diámetro se usan típicamente en la fabricación de elementos de prueba de aglutinación en columna. La superficie lisa limpia de las microesferas provoca que cada microesfera se asocie, o adhiera, a microesferas adyacentes en sus puntos de contacto. Esta fuerza de cohesión impacta negativamente en la capacidad de las microesferas de fluir. Por lo tanto, hay una necesidad para mejorar las tasas de flujo de las microesferas de vidrio limpias y de minimizar la variabilidad de las tasas de flujo entre lotes diferentes de microesferas limpias para reducir el tiempo de inactividad de la máquina de fabricación.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION

Los estudios en curso han demostrado que mezclar microesferas de vidrio con cantidades de traza de nanopartículas químicamente inertes, como sílice ahumada, resulta en una mejora significativa de la tasa de flujo de las microesferas de vidrio y puede mejorar el proceso de llenado del elemento de prueba. Como las microesferas limpias y secas no pueden fluir libremente debido a las fuertes fuerzas de atracción entre las microesferas limpias, se hace ventajoso interrumpir esas fuerzas a través de la adición de nanopartículas inertes, como sílice ahumada. Estas nanopartículas se adhieren a la superficie exterior de las microesferas de vidrio, provocando imperfecciones en la superficie que interrumpen las fuerzas de atracción entre las microesferas de vidrio y mejoran sus propiedades de flujo. Ventajosamente, la adición de sílice ahumada u otras nanopartículas inertes adecuadas no tiene impacto en la función o eficacia del elemento de prueba. Una pequeña cantidad de sílice ahumada añadido, por ejemplo a una tasa de alrededor de 0,0001% a alrededor de 1,0% en peso, proporciona mejora de flujo significativa durante la fabricación. La presencia de reactivo acuoso en las columnas elimina de manera efectiva la asociación de las nanopartículas con las microesferas de vidrio y por lo tano no interfiere con la reacción de aglutinación creada posteriormente.

La invención se define por las reivindicaciones añadidas.

Estos, y otros aspectos y objetos de la presente invención se apreciarán y entenderán mejor cuando se considere en conjunción con la siguiente descripción y los dibujos acompañantes. Debe entenderse, sin embargo, que la siguiente descripción, aunque indica realizaciones preferidas de la presente invención y numerosos detalles específicos de la misma, se da a modo de ilustración y no de limitación. Por ejemplo, las descripciones resumidas anteriores no se pretende que describan realizaciones separadas individuales cuyos elementos no son intercambiables. De hecho, muchos de los elementos descritos en relación a una realización particular pueden usarse junto, y posiblemente intercambiarse con, elementos de otras realizaciones descritas. Se pueden hacer muchos cambios y modificaciones dentro del alcance de la presente invención y la invención incluye tales modificaciones. Las figuras siguientes no se pretende que estén dibujadas a ninguna escala precisa con respecto al tamaño relativo, relación angular o posición relativa ni a cualquier relación combinatoria con respecto a intercambiabilidad, sustitución, o representación de una implementación real.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 es un diagrama de la fabricación y uso de un elemento de prueba de aglutinación en columna; La FIG: 2 es un diagrama de flujo de un método de preparar microesferas de vidrio para la fabricación del elemento de prueba de aglutinación en columna;

La FIG. 3 representa el efecto de nanopartículas inertes en las superficies de las microesferas de vidrio durante la mezcla; y

La FIG. 4 es una tabla comparativa de tasas de flujo de las microesferas de vidrio en base a la preparación. DESCRIPCION DETALLADA

A lo largo de la siguiente exposición, varios términos como "exterior", "interior", "parte superior", "parte inferior", "por encima" y "por debajo" se usan para proporcionar un marco adecuado de referencia respecto a los dibujos acompañantes.

El término "muestra" significa un volumen de un líquido, solución o suspensión, que se pretende sea sometido a determinación cualitativa o cuantitativa de cualquiera de sus propiedades, como la presencia o ausencia de un componente, la concentración de un componente, etc. Las realizaciones de la presente invención son aplicables a muestras humanas y animales de sangre total. Las muestras típicas en el contexto de la presente invención como se describe en la presente incluyen sangre, plasma, glóbulos rojos, suero y suspensión de la misma.

El término "alrededor" como se usa en conexión con un valor numérico a lo largo de la descripción y reivindicaciones denota un intervalo de precisión, familiar y aceptable para un experto en la técnica. El intervalo que gobierna este término es preferiblemente de ±10%. A menos que se especifique, los términos descritos anteriormente no se pretende que limiten el alcance de la invención como se describe en la presente y de acuerdo con las reivindicaciones.

En referencia a los dibujos, la FIG. 1 ilustra una realización 100 ejemplar de una aplicación de microesferas de vidrio micronizadas que tienen nanopartículas añadidas a las mismas. Más específicamente, un elemento de prueba de inmunodiagnóstico 101 que emplea tecnología de aglutinación en columna (CAT) comprende un sustrato plano 111 hecho de un material adecuadamente rígido, como un plástico u otros materiales inertes que soportan una pluralidad de columnas de prueba 103 formadas en una configuración tubular y dispuestas en una matriz lineal 112. De acuerdo con la presente realización, se proporcionan seis (6) columnas de prueba 103 en paralelo y están espaciadas igualmente una de otra. Se observará que el número de columnas de prueba puede variarse fácilmente. cada una de las columnas de prueba 103 está dimensionada para retener una cantidad de las microesferas de vidrio y al menos un reactivo acuoso 104 para propósitos de prueba en una muestra de paciente, como sangre total 105 y/o plasma, suero o suspensión de glóbulos rojos.

Cuando se prueba una muestra de sangre 105, una cantidad de una muestra de sangre 105 del paciente se dispensa en cada una de las columnas de prueba 103 a través de una abertura en la parte superior de las columnas 103. El elemento de prueba 101 se centrifuga entonces o se agita verticalmente para producir una mezcla de la muestra y el agente de aglutinación. Mientras está siendo dada vueltas por la centrifugadora 106, la sangre desciende a varios niveles, en base al tamaño de los aglutinantes formados, a través de las microesferas de vidrio 102 y el reactivo acuoso 104, como es impulsada por las fuerzas g aplicadas. Dependiendo de la aglutinación de la muestra de sangre 105 en el reactivo acuoso 104, toda o porciones de la muestra de la muestra de sangre pueden pasar a través de las microesferas de vidrio 102. Las células aglutinadas 109 no pasan completamente a través de las microesferas de vidrio mientras que los glóbulos rojos 108 continúan pasando entre las microesferas 102 y eventualmente se hunden en el fondo de la columna de prueba 103. Dependiendo de la cantidad de aglutinación, los aglutinantes pueden verse atrapados en las microesferas de vidrio 102 a varios niveles. El patrón de aglutinación característico de la muestra de sangre determina el resultado de la reacción de la muestra 105 usando una métrica de patrón de aglutinación convencional 110 para comparación. De esta manera, las microesferas de vidrio 102 actúan como un filtro para el paso de la sangre a través de las mismas en base a las propiedades de aglutinación de la muestra de sangre y facilitan la inspección para determinar la extensión de la reacción, ya sea visualmente o por visión instrumental.

Como se ha indicado anteriormente y para lograr el llenado eficiente de las columnas de prueba 103 del elemento de prueba 101 descrito en la presente con microesferas de vidrio, es deseable mantener propiedades de flujo uniformes de las microesferas de vidrio 102 de lote a lote de fabricación. La FIG. 2 ilustra un diagrama de flujo que representa una metodología para prepararlas microesferas de vidrio 102 micronizadas para su uso en un elemento de prueba de inmunodiagnóstico, como un casete o tarjeta de prueba que emplea tecnología de aglutinación en columna. En el paso 201 las microesferas se reciben de un suministrador en un tamaño sustancialmente no modificable. De acuerdo con una realización ejemplar, se suministran microesferas de vidrio de borosilicato tipo 1 y preferiblemente Tipo 1A, variando en tamaño de alrededor de 50 - 120 pm de diámetro, más preferiblemente de 65 - 90 pm de diámetro e incluso más preferiblemente de 75 -90 pm de diámetro. Las designaciones Tipo 1 y Tipo A l son designadores de clase asignados por la Sociedad Americana para Pruebas y Materiales (ASTM). Las microesferas de vidrio comprenden típicamente un 85-95% de SiO2 por peso y tienen un tamaño medio de alrededor de 80 pm de diámetro, con Na2O, B2O3, y AhO3 comprendiendo otros componentes químicos ejemplares de las microesferas.

Como un paso inicial, las microesferas de vidrio no lavadas pueden probarse para tasas de flujo y otras propiedades incluso aunque el proceso de lavado no se haya realizado todavía. Este paso de prueba puede ayudar a asegurar que las microesferas fluyan a una tasa adecuada después de los pasos de lavado de las microesferas de vidrio y añadir nanopartículas a las microesferas de vidrio, como se describirá a continuación. Otros requisitos de control de calidad para las microesferas de vidrio entrantes pueden incluir, por ejemplo, una cantidad mínima de microesferas decoloradas a través de inspección visual, un requisito mínimo de conformidad esférica, así como la verificación de un intervalo especificado de tamaños de partícula, y una cantidad máxima de contaminantes particulares.

La presencia de contaminantes y/o impurezas en las superficies de las microesferas de vidrio puede provocar que las células de la sangre se adhieran a las microesferas e impacten en la funcionalidad y consistencia del elemento de prueba. Por ejemplo, pueden aparecer carbonato de sodio y aceites en la superficie de las microesferas de vidrio como un subproducto de su fabricación. Para eliminar estos y otros contaminantes de la superficie de las microesferas de vidrio suministradas, se realiza un lavado con ácido ejemplar en el paso 202, incluyendo enjuagar las microesferas de vidrio en agua destilada. Se puede realizar un lavado adicional alternativo que incluya un lavado cáustico, antes o después del lavado con ácido, y un paso de enjuagado usando agua destilada. En el paso 203, las microesferas lavadas se secan en un horno. Cabe señalar que los lavados cáustico y con ácido, y el paso de secado, son bien conocidos y familiares para los expertos en la técnica. Estos pasos de lavado no son esenciales para la presente invención y pueden reemplazarse con procedimientos de limpieza y secado igualmente eficaces. Tales otros procedimientos se consideran equivalentes y sustitutos intercambiables para los pasos de lavado y secado descritos en la presente e incluidos en las reivindicaciones siguientes. En el paso 204, las microesferas de virio son cribadas o tamizadas para separar cualquier grumo residual.

En el paso 205, las microesferas de vidrio son probadas entonces para las tasas de flujo usando un medidor Hall Flow, que es un embudo de acero calibrado estandarizado, o un aparato similar. En este punto, pude requerirse una tasa de flujo mínima dependiendo de los procesos de fabricación, en particular, de las herramientas usadas para llenar el elemento de prueba de aglutinación en columna 101. Para aumentar la consistencia de las tasas de flujo de microesferas a través de los lotes, los lotes que se han sometido a los pasos de preparación descritos anteriormente pueden categorizarse de acuerdo con sus tasas de flujo medidas. Para lograr la consistencia en las tasas de flujo a través de los lotes, pueden mezclarse juntos. Por ejemplo, dos lotes pueden colocarse en un contenedor dimensionado apropiadamente y mezclarse manualmente usando una cuchara o los dos lotes pueden fluirse a través de un tamiz.

En el paso 206, se mezclan nanopartículas inertes con las microesferas de vidrio lavadas para mejorar las tasas de flujo de las microesferas de vidrio lavadas. De acuerdo con la presente realización, se utiliza sílice ahumada hidrófilo, que comprende alrededor del 99% o más de SiO2 por peso, formada como aglomerados encadenados de partículas de SO2 esféricas. El sílice ahumada es un producto comercial común disponible de varios fabricantes, por ejemplo, Evonik Degussa Corporation, Cabot Corporation, Wacker Chemie-Dow Coming y otros. Más específicamente, y de acuerdo con una realización, se usa la Marca Aerosil® 380 de sílice ahumada como la fuente de nanopartículas mezcladas con las microesferas de vidrio.

Todavía en referencia al paso 206, la mezcla de las microesferas de vidrio y sílice ahumada puede realizarse de acuerdo con la siguiente realización, como un ejemplo. Se coloca una cantidad predeterminada de microesferas de vidrio, por ejemplo alrededor de 20 kg, en un mezclador en V Patterson-Kelley. Se añade una pequeña cantidad de partículas de sílice ahumada, por ejemplo alrededor de 0,2 g, al mezclador en V y el mezclador en V se hace funcionar entonces durante alrededor de tres minutos a alrededor de 24 revoluciones por minuto (RPM). Este paso permite que las nanopartículas de sílice ahumada se mezclen sustancial y uniformemente con las microesferas de vidrio. La cantidad de sílice ahumada añadido es preferiblemente de alrededor del 0,0001% a alrededor del 1,0% por peso, más preferiblemente de alrededor del 0,0005% a alrededor del 0,1% por peso, e incluso más preferiblemente de alrededor del 0,0005% a alrededor del 0,0015% por peso, lo que proporciona tasas de flujo de microesferas de vidrio adecuadas durante la fabricación del elemento de prueba.

La FIG. 3 ilustra el proceso de mezclado. Durante el mezclado, la dureza de las microesferas de vidrio 301 es suficiente para romper los aglomerados de sílice ahumada 306 enredados mecánicamente en agregados 307 tridimensionales sustancialmente más pequeños, dispersando eficazmente el sílice ahumada entre las microesferas de vidrio, en donde los agregados tienen un tamaño de alrededor de 0,1 pm a alrededor de 0,2 pm. Los agregados 307 están compuestos ellos mismos de partículas primarias fusionadas, en donde cada una de las partículas primarias tiene un tamaño de alrededor de 7 nm de diámetro, que se adhieren a la superficie de las microesferas de vidrio en forma agregada e interrumpen la atracción física entre las microesferas de vidrio. Considerando la partícula primaria de 7 nm y la microesfera de vidrio de 80 pm como se han descrito anteriormente, la proporción diámetro/tamaño de la microesfera de vidrio con la nanopartícula primaria de acuerdo con esta realización ejemplar es de alrededor de 11.429.

En base al mezclado anteriormente descrito de nanopartículas inertes con las microesferas de vidrio, se proporciona un aumento significativo en las tasas de flujo. en referencia a la FIG. 4, se recogieron datos comparativos sobre un número de lotes en donde las tasas de flujo medidas aumentan desde una media de alrededor de 0,84 g/s (gramos por segundo) para microesferas de vidrio lavadas a una media de alrededor de 1,05 g/s, para microesferas lavadas que tienen añadidas nanopartículas inertes. Cabe señalar que el uso de un mezclador en V para mezclar partículas secas es bien conocido y familiar para los expertos en la técnica. El equipo, cantidades, duraciones y otros pasos de mezclado particulares descritos en la presente pueden reemplazar son técnicas de mezclado conocidas igualmente eficaces y por lo tanto se considera que están incluidas en las reivindicaciones siguientes.

La FIG. 3 ilustra el efecto resultante de las nanopartículas intercaladas que contribuyen a la tasa de flujo mejorada de las microesferas de vidrio lavadas. Inicialmente, la superficie de una microesfera de vidrio 301 lavada están en contacto directo con la superficie de una microesfera de vidrio colindante, como se muestra en 304. Esto provoca que las microesferas de vidrio se adhieran entre sí debido a las fuerzas de cohesión como las fuerzas de cohesión físicas por ejemplo, Van der Waals, fuerzas electrostáticas) u otras fuerzas de cohesión químicas provocadas por la proximidad cercana de las microesferas de vidrio colindantes. Mezclando los aglomerados de sílice ahumada 306 con las microesferas de vidrio 302, las nanopartículas agregadas se rompen en los agregados 307 y se adhieren a la superficie de las microesferas de vidrio 303 lavadas y, en efecto, reemplazan las fuerzas de atracción entre microesferas de vidrio colindantes con fuerzas de adhesión subsidiarias. Es decir, las nanopartículas de sílice ahumada actúan para separar las microesferas de vidrio lavadas, como se muestra en 305, y reducen las fuerzas de cohesión entre las microesferas de vidrio 304 lavadas. Así, las nanopartículas mantienen una separación entre las microesferas de vidrio, lo que resulta en adhesión reducida entre las microesferas y en tasas de flujo aumentadas. La fluidez aumentada de las microesferas de vidrio ayuda en el procedimiento de llenado de columnas aumentando la fluidez de las microesferas de vidrio y reduciendo los cuellos de botella y el tiempo de inactividad durante la operación de llenado de columnas. La FIG. 4 muestra una tabla de las tasas de flujo de microesferas de vidrio en tres puntos diferentes en el proceso de tratamiento de las microesferas de vidrio, como se ha recibido, después del lavado, y después del mezclado con sílice ahumada.

Tras la operación de llenado de columnas cuando se dispensan el reactivo de aglutinación acuoso y las microesferas de vidrio/nanopartículas en cada una de las columnas de prueba como parte de la fabricación del elemento de prueba, las fuerzas de atracción creadas entre las partículas de sílice ahumada y las microesferas de vidrio se difunden fácilmente y las nanopartículas se separan en la solución. Como resultado, las nanopartículas permiten que se mantengan tasas de flujo adecuadas durante el procedimiento de llenado pero no interfieren con el resto de la fabricación del elemento de prueba o protocolo de prueba pretendido debido a su tamaño relativamente pequeño.

LISTA DE PARTES PARA LAS FIGS. 1-4

100 aplicación de microesferas de vidrio con nanopartículas añadidas

101 elemento de prueba

102 microesferas de vidrio

103 columnas de prueba

104 reactivo acuoso

105 muestra de sangre

106 centrifugadora

107 microesferas de vidrio vertidas

108 muestra de sangre descendida

109 muestra de sangre no descendida

110 reacciones de aglutinación de columnas

111 sustrato

112 matriz lineal

201 paso - recibir las microesferas de vidrio

202 paso - lavar las microesferas de vidrio

203 paso - secar las microesferas de vidrio

204 paso - cribar las microesferas

205 paso - probar y mezclar las microesferas de vidrio

206 paso - mezclar las microesferas de vidrio con sílice ahumada

301 microesferas de vidrio lavadas

302 mezclado de las microesferas de vidrio y el sílice ahumada

303 microesferas de vidrio con nanopartículas adheridas

304 superficie de contacto de las microesferas de vidrio

305 superficies de las microesferas de vidrio separadas por nanopartículas

306 aglomerados de nanopartículas

307 agregados de nanopartículas

La descripción escrita usa ejemplos para describir la invención, incluyendo el mejor modo, y también para permitir a cualquier experto en la técnica poner en práctica la invención, incluyendo hacer y usar cualquier aparato o sistema y realizar cualquiera de los métodos incorporados. El alcance patentable de la invención se define por las reivindicaciones siguientes, y puede incluir otros ejemplos que se pongan en práctica por los expertos en la técnica. Tales otros ejemplos se pretende que estén dentro del alcance de las reivindicaciones siguientes si tienen elementos estructurales que no difieren del lenguaje literal de las reivindicaciones, o si incluyen elementos estructurales equivalentes con diferencias insubstanciales del lenguaje literal de las reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para fabricar un elemento de prueba de inmunodiagnóstico, dicho elemento incluyendo una pluralidad de columnas de prueba, dicho método comprendiendo:

lavar una pluralidad de microesferas de vidrio de tamaño micro;

colocar la pluralidad de microesferas de vidrio en un aparato de mezcla;

colocar una cantidad preseleccionada de nanopartículas inertes en el aparato de mezcla en el que las microesferas de vidrio y las nanopartículas están hechas de sustancialmente el mismo material; mezclar juntas la pluralidad de microesferas de vidrio y las nanopartículas inertes usando el aparato de mezcla, en donde se hace que las nanopartículas inertes se adhieran a la superficie exterior de dichas microesferas de vidrio;

colocar la mezcla de las microesferas de vidrio y las nanopartículas inertes en las columnas de prueba; y colocar un reactivo acuoso en las columnas de prueba.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además asegurar la pluralidad de columnas de prueba sustancialmente en paralelo en un paquete rígido.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el paso de colocar una cantidad preseleccionada de nanopartículas inertes en el aparato de mezcla comprende colocar sílice ahumada en el aparato de mezcla a de aproximadamente el 0,0001% a aproximadamente el 1,0% en peso entre la sílice ahumada y las microesferas de vidrio.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el paso de colocar una cantidad preseleccionada de nanopartículas inertes en el aparato de mezcla comprende colocar sílice ahumada en el aparato de mezcla a de aproximadamente el 0,0005% a aproximadamente el 0,1% en peso entre la sílice ahumada y las microesferas de vidrio.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el paso de colocar una cantidad preseleccionada de nanopartículas inertes en el aparato de mezcla comprende colocar sílice ahumada en el aparato de mezcla a de aproximadamente el 0,0005% a aproximadamente el 0,0015% en peso entre la sílice ahumada y las microesferas de vidrio.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la pluralidad de microesferas de vidrio comprende sustancialmente microesferas de vidrio de borosilicato que tienen un diámetro de entre aproximadamente 50 - 120 |jm.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la pluralidad de microesferas de vidrio comprende sustancialmente microesferas de vidrio de borosilicato que tienen un diámetro de entre aproximadamente 65 - 90 jm.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la pluralidad de microesferas de vidrio comprende sustancialmente microesferas de vidrio de borosilicato que tienen un diámetro de entre aproximadamente 75 - 90 jm.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que las nanopartículas inertes adheridas a la superficie exterior de dichas microesferas de vidrio comprenden partículas de sílice ahumada fusionadas en agregados que tienen un tamaño de aproximadamente 0,1 jm a aproximadamente 0,2 jm.