ES2693523T3 - Sistemas de suministro de fármacos - Google Patents

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ES2693523T3 ES14821857.1T ES14821857T ES2693523T3 ES 2693523 T3 ES2693523 T3 ES 2693523T3 ES 14821857 T ES14821857 T ES 14821857T ES 2693523 T3 ES2693523 T3 ES 2693523T3
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Abstract

Un sistema de suministro de fármacos que comprende (a) un péptido farmacéuticamente activo o cualquier sal farmacéuticamente aceptable del mismo, (b) 1 a 2% en peso de un quitosano o derivado de quitosano, que tenga un grado de desacilación (DD) de 85 a 95% y un peso molecular (PM) de 100 a 200 kDa, (c) 10 a 25% del peso de un azúcar-fosfato, y (d) agua, con bases en el peso total del sistema de suministro de fármacos.

Description

DESCRIPCION
Sistemas de suministro de farmacos Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a sistemas de suministro de un peptido termogelificante que se inyectan como sol de 5 fluido a temperatura ambiente a traves de agujas de inyeccion finas y se transforman en un gel altamente viscoso, una vez insertado en el tejido caliente del cuerpo humano o animal. El peptido se libera entonces desde el hidrogel inducido termicamente en el tejido circundante de una manera controlada durante un periodo de tiempo mas largo.
Antecedentes de la invencion
Muchos peptidos farmaceuticamente activos no se pueden entregar de manera efectiva a traves de la administracion 10 oral dado que la mayoria de los peptidos son propensos a la degradacion en el tracto gastrointestinal. Como consecuencia, los peptidos deben ser entregados por via parenteral. Sin embargo, la administracion parenteral del farmaco peptidico en el subcutis o el tejido muscular esta asociada con la incomodidad del paciente por medio de las inyecciones de aguja. Esas inyecciones invasivas necesitan ser repetidas con bastante frecuencia toda vez que muchos peptidos tienen una corta vida media de solo unas pocas horas o incluso menos de una hora. por lo tanto, se 15 han desarrollado formulaciones de deposito parenteral en forma de implantes o suspensiones de microparticulas para reducir la frecuencia en la que las inyecciones tienen que ocurrir.
Para la comodidad de la paciente que sufre de una enfermedad cronica, hay una necesidad de desarrollar aun mas las tecnologias de formulacion de deposito disponibles de hoy para lograr sistemas de administracion sostenida de farmacos que puedan inyectarse a traves de agujas muy finas.
20 Se sugieren hidrogeles inducidos termicamente que se pueden inyectar como sol de fluido y que se solidifican como hidrogel muy viscoso. Sin embargo, muchos de estos hidrogeles se basan en polimeros de alto peso molecular que, una vez disueltos en medios acuosos, se convierten en soluciones altamente viscosas de modo que se requiere de nuevo un gran tamano de aguja para la inyeccion (por ejemplo, en X. Chen et al., J. Biomat. Aplicaciones 2011, 27 (4), 391-402, debido a la utilizacion de un quitosano de alto peso molecular (500 kDa) el sol tuvo que ser instilado en 25 el ojo usando una jeringa sin aguja). Otro problema con los sistemas hasta ahora propuesto es una liberacion de farmaco muy fuerte corto tiempo despues de la inyeccion (la llamada "oleada") de modo que una cantidad significativa del farmaco ya se libera en el tejido inmediatamente antes de que el fluido se transforme en un hidrogel . Aun mas, algunos sistemas tienen un problema de estabilidad y se transforman en un hidrogel ya durante el tiempo de almacenamiento que los hace inservibles para una inyeccion posterior (por ejemplo, como se observa por el inventor 30 de la presente invencion para sistemas de quitosano/beta-glicerofosfato como se describe anteriormente por ejemplo, en el documento WO99/07416).
Sumario de la invencion
Por lo tanto, todavia hay una necesidad de un sistema de administracion sostenida de un farmaco de peptido que cumpla todos los requisitos siguientes para minimizar las molestias de los pacientes y para maximizar la comodidad, 35 seguridad y operatividad para la inyeccion realizada por el propio paciente o por los medicos clinicos:
- Listos para el uso (el producto farmaco debe estar inmediatamente listo para ser inyectado, no hay que realizar esfuerzos preparatorios importantes, por ejemplo, no es necesario que un polvo seco deba reconstituirse con un vehiculo acuoso para llegar a una suspension inyectable)
- Inyectabilidad a traves de una aguja muy fina (por ejemplo, 21 G o menor)
40 - la liberacion sostenida del farmaco durante un periodo prolongado de tiempo (por ejemplo, uno o mas meses)
- Biocompatibilidad (por ejemplo, que los componentes no causen dolor despues de la inyeccion)
- Biodegradabilidad (por ejemplo, que todos los componentes sean completamente reabsorbidos por el cuerpo despues de un tiempo razonable para evitar la acumulacion de cualquiera de los componentes despues de eventos repetitivos de inyeccion)
45 - La estabilidad fisica durante la vida util razonable (por ejemplo, no hay posibilidad de que la calidad del sol en el
sistema de almacenamiento se prolongue mas alla del almacenamiento en condiciones de frio o a temperatura ambiente)
- Buen perfil de seguridad de los excipientes
La presente invencion satisface sorprendentemente todos esos requisitos y por lo tanto es un sistema de suministro 50 de peptidos comercialmente viable.
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En un primer aspecto, la presente invencion proporciona una sistema de suministro de farmaco que comprende:
(a) un peptido farmaceuticamente activo o cualquier sal farmaceuticamente aceptable del mismo, por ejemplo, pamoato de pasireotida,
(b) 1 a 2% en peso de un quitosano (CS) o derivado de quitosano, que tiene un grado de desacilacion (DD) de 85 a 95% y un peso molecular (MW) de 100 a 200 kDa
(c) 10 a 25% en peso de un azucar-fosfato, preferiblemente un glucosa-1-fosfato (G1-P) y
(d) agua, con base en el peso total del sistema de administracion de farmacos.
En un segundo aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar el sistema de administracion de farmacos tal como se define por un primer aspecto que comprende siguientes etapas del proceso:
(1) disolver el quitosano en una solucion acuosa acida, Preferiblemente en una solucion de acido clorhidrico,
(2) disolver el azucar-fosfato en un medio acuoso, preferiblemente en agua,
(3) disolver, dissolver parcialmente, o dispersar el peptido en la solucion de azucar-fosfato, preferiblemente dispersar el peptido, y
(4) combinar la solucion de peptido/glucosa-fosfato y/o la suspension con la solucion de quitosano.
El sistema de suministro de farmaco de acuerdo com el primer aspecto es para uso intramuscular o subcutaneo, preferiblemente para uso subcutaneo.
En un tercer aspecto, se proporciona una forma de dosificacion que comprende el sistema de suministro de farmaco de acuerdo con el primer aspecto en forma de un liquido en una ampolla, vial o jeringa precargada.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1 muestra los perfiles de liberacion de los hidrogeles de pasireotida CS/G1-P frente a soluciones de CS (media ± DE, n = 3) y demuestra la liberacion controlada de farmacos de peptido en contraste con un control.
La figura 2 muestra los perfiles de liberacion de los hidrogeles de Pasireotida CS/G1-P como una funcion de la carga inicial (media ± DE, n = 3).
La figura 3 muestra la viscosidad de cizallamiento aparente en 20,0 ± 0,2 °C para la solucion de CS y sistemas de CS/agentes gelificantes almacenados a 2 - 8 °C y a 20 - 25 °C (n= 3) qu demuestran la buena estabilidad fisica de las formas de realizacion de la presente invencion en contraste con una forma de realizacion de referencia.
La figura 4 muestra la evolucion del tiempo de gelificacion, determinado por la reologia a 37 °C, de soluciones de CS/agentes gelificantes almacenadas a 2 - 8 °C y a 20 - 25 °C (n= 3) lo que demuestra la buena estabilidad fisica de las formas de realizacion de la presente invencion en contraste con una forma de realizacion de referencia.
La figura 5 muestra las fuerzas de inyeccion de 1 ml de solucion CS/G1P (1,5 % en peso. CS y 0,40 mmol/g G1P) inyectados en el aire a dos velocidades de inyeccion con agujas 23 G, 25 G y 30 G (n = 10) y demuestra la buena inyectabilidad de las realizaciones de la presente invencion.
La figura 6 muestra el peso molecular relativo de CS para tres lotes diferentes de 1,5 % en peso/Solucion de 0,40 mmol/g G1P CS no filtrada y esterilizada por filtracion a traves de una membrana de 0,2 micras (n = 3) y demuestra la viabilidad de esterilizar las formas de realizacion de la presente invencion para hacerlas adecuadas para uso parenteral.
Descripcion detallada de la invencion
De aqui en adelante, la presente invencion se describe y se ejemplifica con mas detalle.
En los aspectos de la presente invencion, el peptido es preferiblemente hidrofobo. En una realizacion el peptido es hidrofobo por medio de las caracteristicas de sus aminoacidos. En otra realizacion, el peptido es hidrofobo por medio de su contraion (es) que hacen que el peptido como una sal hidrofoba, por ejemplo sales como dibunato, naftoato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato/embonato, estearato, xinafoato. En una realizacion preferida, el peptido esta presente como sal de pamoato, mas preferiblemente como la sal monopamoato.
En una realizacion preferida, el peptido hidrofobo o la sal del mismo esta presente en una forma amorfa (grado de cristalinidad <20%, preferiblemente <5%) y micronizada (por ejemplo, por molienda por chorro) a una disdribution tamano de particula (por difraccion de luz laser) de x90 <= 10 micras, por ejemplo, 3 pm, x50 <= 5 pm, por ejemplo, 1 m, x10> = 0,3 m, por ejemplo, 0,7 pm y posee un area de superficie especifica (por BET)> = 8 m2/ g, por ejemplo, 32 m2/ g).
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En aun otra realizacion preferida, el peptido es un analogo de la somatostatina, por ejemplo, octreotida, pasireotida, vapreotida, o lanreotida, preferiblemente octreotida o pasireotida, mas preferiblemente pasireotida. En una realizacion preferida, el peptido hidrofobo es pamoato de octreotido o pamoato de pasireotida.
"Hidrofobo" en este documento se refiere como una caracteristica de una sustancia farmacologicamente activa que es escasamente, ligeramente, o muy ligeramente soluble en agua a temperatura ambiente (por ejemplo 20 - 25 °C) de acuerdo a la Pharmacopeia (USP y PhEur) con terminos descriptivos para la solubilidad con sus gamas de solubilidad de 10 a 33, 1-10, o 0,1 a 1 g/L, respectivamente. Preferiblemente, el peptido hidrofobo es muy poco soluble en agua a temperatura ambiente, preferiblemente la solubilidad en agua es de aproximadamente 1 g/L o inferior a temperatura ambiente. Por ejemplo, los peptidos hidrofobos son pamoato de pasireotida con una solubilidad en agua de 0,02 g/L o pamoato de octreotido con una solubilidad en agua de 0,2 g/L (25 °C) o pamoato de vapreotida con una solubilidad en solucion salina de tampon de fosfato (PBS pH 7,4) de aproximadamente 0,02-0,04 g/L.
En los aspectos de la presente invencion, un quitosano, un quitosano modificado o un derivado de quitosana (por ejemplo quitosano HCl, carboximetilquitosano, lactato de quitosan, acetato de quitosan) se utiliza. En una realizacion preferida, un quitosano se utiliza que tiene un grado de desacilacion (DD) de 70 a 95%, preferiblemente un DD 85 a 95%, mas preferiblemente un DD de 90 ± 2,5%. En una realizacion preferida se utiliza un quitosano que tiene un peso molecular (MW) de 20 a 300 kDa, preferiblemente un MW 80-200 kDa, mas preferiblemente un MW de 100 a 150 kDa, incluso mas preferiblemente un peso molecular de 135 ± 20 kDa.
Los quitosanos se pueden obtener en, por ejemplo, por Heppe Medical Chitosan GmbH, Halle (Saale), Alemania, por ejemplo, en el tipo de quitosano 90/10 (DD 87,6-92,5%, viscosidad 8 - 15 mPas, corresponde a un MW (GPC) de ca. 20 a 100 kDa), Chitosan 90/20 (DD 87,6-92,5%, viscosidad 16 - 30 mPas, corresponde a un MW (GPC) de ca. 40 a 150 kDa), Chitosan 90/50 (DD 87,6-92,5%, viscosidad 31 - 70 mPas, corresponde a un MW (GPC) de ca. 80-200 kDa), Quitosano 90/100 (DD 87,6-92,5%, viscosidad 71 - 150 mPas, corresponde a un MW (GPC) de ca. 100-250 kDa), o quitosano 90/200 (DD 87,6-92,5%, Viscosidad 151 - 350 mPas, corresponde a un MW (GPC) de ca. 150-300 kDa). Las viscosidades se miden como una solucion de 1% de quitosano en acido acetico 1% a 20 °C. En una realizacion preferida de la presente invencion se utiliza un quitosano 90/50.
En los aspectos de la presente invencion se usa un azucar-fosfato. En las realizaciones de la presente invencion el azucar de dicho azucar-fosfato es un monosacarido, disacarido, o un oligosacarido, preferiblemente un monosacarido seleccionado del grupo de las aldosas, por ejemplo, glucosa, manosa, galactosa, alosa, altrosa, gulosa, idosa, talosa, ribosa, arabinosa, xilosa, lixosa, o del grupo de cetosas, por ejemplo fructosa, sorbosa, tagatosa, psicosa, araboketose, xyloketose, o una mezcla de las mismas, glucosa o fructosa preferiblemente o una mezcla de las mismas.
En una realizacion preferida, dicho azucar-fosfato es una glucosa-fosfato, preferiblemente una glucosa-1-fosfato, preferiblemente un alfa-D-glucosa-1-fosfato, mas preferiblemente um hidrato de alfa-D-glucosa-1-fosfato disodico.
En los aspectos de la presente invencion, el sistema de suministro de medicamento comprende al menos 1 %, al menos 2%, 1 a 30%, 2 a 10%, o 2 a 5%, preferiblemente de 2 a 5% en peso del peptido en su forma de base libre basado en el peso total del sistema de administracion de farmacos. El sistema de administracion de farmaco comprende de 1025% en peso de la azucar-fosfato del sistema de administracion de farmacos basado en el peso total del sistema de administracion de farmacos. Las formas de realizacion preferidas comprenden 10, 15, y 20% en peso del azucar- fosfato de glucosa-1-fosfato basado en el peso total del sistema de administracion de farmacos. En las realizaciones preferidas, los valores porcentuales corresponden a 0,27, 0,40 y 0,53 mmol/g, respectivamente.
En una realizacion preferida, el sistema de suministro de farmaco comprende, comprende sustancialmente, consiste esencialmente en, o consiste en, preferiblemente consiste en
(a) 2 a 5% en peso de un peptido hidrofobo en su forma de base libre, preferiblemente presente en forma de sal de pamoato, preferiblemente el petido es pamoato de pasireotida,
(b) 1 a 2% en peso de un quitosano que tiene un DD de 90 ± 2,5% y un PM de 135 ± 20 kDa, que se somete a un acido, preferiblemente se somete al acido clorhidrico.
(c) 10 a 25% en peso de glucosa-1 -fosfato, y
(d) agua.
basado en el peso total del sistema de administracion de farmacos
En un segundo aspecto de la presente invencion, se proporciona un procedimiento para preparar el sistema de administracion de farmacos tal como se define por el primer aspecto que comprende siguientes etapas de proceso:
(1) disolver el quitosano en una solucion acida acuosa, preferiblemente en una solucion de acido clorhidrico,
(2) disolver el azucar-fosfato en un medio acuoso, preferiblemente en agua,
(3) disolver, dissolver parcialmente, o dispersar el peptido en la solucion de azucar-fosfato, preferiblemente dispersar
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el peptido, y
(4) combinar la solucion de peptido/glucosa-fosfato y/o la suspension con la solucion de quitosano.
En una realizacion preferida, las soluciones resultantes de las etapas (1) y (2) se enfrfan, por ejemplo, a 1-12 °C, preferiblemente a 2 - 8 °C, antes del procesado adicional de acuerdo con los pasos (3) y (4).
En una forma de realizacion preferida el paso (3) comprende el uso de ultrasonido y se realiza bajo condiciones frfas. Las condiciones frfas son, por ejemplo, condiciones que aseguren que los componentes involucrados en el paso (3) se mantienen en el intervalo de 1-12 °C, preferiblemente en el intervalo de 2 a 8 °C durante el tratamiento con ultrasonidos y a partir de entonces.
En una realizacion preferida en el paso se anade (4) la solucion de peptido/glucosa-fosfato a la solucion de quitosano en condiciones frfas. Las condiciones frfas son, por ejemplo, condiciones que aseguren que los componentes de la etapa (4) que participan se mantienen en el intervalo de 1-12 °C, preferiblemente en el intervalo de 2-8 °C durante la adicion y a partir de entonces.
En un tercer aspecto, se proporciona un sistema de administracion de farmaco obtenible por el procedimiento de acuerdo con segundo aspecto.
En el cuarto aspecto de la presente invencion, el sistema de administracion de farmacos de acuerdo con el primer o tercer aspecto es para uso intramuscular o subcutaneo. En una realizacion preferida, el sistema de administracion del farmaco es para uso subcutaneo. En una realizacion preferida, el sistema de suministro de farmaco se administra en el subcutis a traves de una aguja 21G, 23G, 25G, 30G o, preferiblemente a traves de una aguja 25.
En el quinto aspecto de la presente invencion, la forma de dosificacion que comprende el sistema de suministro de farmaco de acuerdo con el primer, tercer, o cuarto aspecto es en forma de un lfquido en una ampolla, vial o una jeringa precargada, preferiblemente en una jeringuilla precargada. En una realizacion preferida la jeringa precargada esta equipada con una aguja 21G, 23G, 25g, o 30G, preferiblemente a traves de una aguja 25.
Como una forma de realizacion preferida, el sistema de suministro de farmaco de acuerdo con el primer, tercer, cuarto o quinto aspecto es en forma de una suspension fina y homogenea que comprende a las partfculas del peptido o de la sal del peptido de las que 90% o mas son mas pequenas que un longitud de cuerda de 30 micras (medido por mediciones de reflectancia del haz centradas, FBRM, por ejemplo, con una sonda de barrido de luz laser por Lasentec).
Dicha suspension es lo suficientemente estable como para que pueda ser llenado en ampollas, viales o jeringas precargadas y solo necesita ser sacudido suavemente despues de largo tiempo de almacenamiento a corto antes de su uso.
Ejemplos
Materiales:
El quitosano (CS) tal como se utiliza en los siguientes ejemplos se encuentra disponible comercialmente, por ejemplo, Heppe Medical Chitosan (HMC, Halle, Alemania) en grado tecnico, por ejemplo, Chitoscience® 90/50, o en grado farmaceutico, por ejemplo, Chitoceutical® 90/50 (lote 1) y Chitoceutical® 90/50 (lote 2). La viscosidad de los quitosanos se mide con un viscosfmetro (Brookfield DVI + pro) a 20 °C (1% en acido acetico al 1%) y los datos de viscosidad estan en el rango de 31 - 70 mPas. La DD se mide por fotometrfa o por los datos DD de titulacion y estan en el intervalo de 87,6 a 92,5%. El MW se determina mediante cromatograffa de exclusion por tamano (SEC) en combinacion con deteccion de fndice de refraccion (RI) y los datos MW estan en el intervalo de 80 a 200 kDa. El hidrato de la sal disodica de Alfa-D-glucosa-1-fosfato (G1-P, Mw: 376,16 g/mol) y acido clorhfdrico (HCl) esta comercialmente disponible de varias fuentes. La sfntesis de la pasireotida peptido se ha descrito antes, por ejemplo, en el documento WO02/10192. se utilizo agua purificada, por ejemplo, Ultrapure® agua obtenible a traves de un sistema de filtracion Millipore MilliQ® (Millipore, Molsheim, Francia).
Caracterizacion ffsica de los quitosanos:
El CS utilizado para la presente invencion se caracteriza por cromatograffa de exclusion molecular de triple deteccion (GPC) en un sistema de matriz maximo Viscotek Triple detector (Viscotek, EE.UU.) utilizando dos Viscogel A6000M (lecho mixto) columnas (Malvern Instruments GmbH, Alemania). La puesta en marcha consistio en un cromatografo de exclusion por tamanos conectado a una celda de dispersion de luz; un detector de fndice de refraccion y un viscosfmetro, lo que permite la determinacion simultanea del peso molecular absoluto del polfmero (Mw), el radio hidrodinamico y la viscosidad intrfnseca (n). Los analisis se realizaron a 30 °C con una fase movil de acido acetico 0,3 M, acetato de sodio 0,3 M, 1% de glicol de etileno y el uso de una velocidad de flujo de 0,7 ml/min y un dn/dc de 0,163 ml/g. Las muestras de CS se prepararon a concentraciones de 1 mg/ml, se disolvieron 24 h bajo agitacion en el mismo buffer y luego se filtraron utilizando un filtro de 0,2 micras antes del analisis. El volumen de inyeccion fue de 100 mL. La calibracion del sistema se hizo utilizando un estandar de pululano (Mw = 133 kDa, [n] = 0,515 dl/g, fndice de polidispersidad Mw/Mn = 1,08) obtenido a partir de Viscotek. Para la evaluacion de los se utilizo datos ffsicos el
software Omnisec de Viscotek. Cada caracterizacion de las muestras de CS se realizo por duplicado. Los resultados se presentan en la Tabla 1.
Tabla 1: Parametros fisicos obtenidos para los diferentes lotes de quitosano.
Nombre
grado de desacilacion (%) (informacion del proveedor) Absoluto Mw (kDa) Mw/Mn Viscosidad intrinseca (DL/g) Hidrodinamica radio (nm)
Chitoscience® 90/50
89.7 122 1.57 3.62 18.33
Chitoceutical® 90/50 (1)
90.7 135 1.61 3.86 19.28
Chitoceutical® 90/50 (2)
88.7 149 1.62 4.11 20.30
Chitoscience® 90/200
267 1.90 6.01 27.74
5 Preparacion de las formulaciones Solucion de CS:
Las soluciones CS se obtuvieron por disolucion de 3,75% en peso de CS en acido clorhidrico (HCl) de acuerdo con una relacion molar de grupos amino de quitosano: HCl igual a 0,9: 1.
Solucion G1-P:
10 La solucion G1-P se preparo a 350 mg/mL-1 en agua Milli-Q.
Suspensiones cargadas con peptidos CS/G1-P y determinacion del tamano de particula:
El pamoato de peptido pasireotida se anadio a la solucion de G1-P, dispersa mediante agitacion magnetica durante 2 h y se sonico 2 min usando una sonda de ultrasonidos (amplitud 80%, ciclo 1, la tecnologia Hielscher ultrasonido procesador UP400S ultrasonico, Stuttgart, Alemania) bajo agitacion magnetica en un bano de hielo. A continuacion se 15 anadio 3,60 g de suspension de G1-P/peptido gota a gota a 2,40 g de solucion fria CS bajo agitacion magnetica en un bano de hielo. La formulacion/G1-P/peptido obtenido CS se agito adicionalmente hasta que se obtuvo una suspension homogenea, segun lo verificado por microscopia optica y centrado mediciones de reflectancia del haz (FBRM) (Tabla 2). Las formulaciones finales, que contiene 1,5% en peso de CS, 0,40 mmol/g G1 P y peptido% en peso de 2,5 o 5,0, se almacenaron a 2 - 8 °C hasta su uso.
20 Se obtuvieron los datos utilizando una sonda Lasentec FBRM PI-14/206 FBRM (Mettler-Toledo, EE.UU.) y se analizaron con el software FBRM Lasentec (Version 6.7.0 09/2005 Mettler Toledo, Columbia, EE.UU.). Esta tecnica de dispersion de luz mide la luz de retrodispersion de un haz laser giratorio centrado fuera de una ventana de zafiro, en contacto con la suspension. Cuando los escaneres laser de particulas de luz cerca de la ventana de la sonda, que genera senales de luz de retrodispersion cuya duracion se traduce en longitudes de cuerda (distancia en linea recta 25 desde un borde de la particula a otra). Por lo tanto, incluso si la longitud de la cuerda esta relacionado con el tamano de particula, que no mide directamente la distribucion del tamano de particula, sino mas bien la distribucion de la longitud de cuerda.
Tabla 2: distribucion de longitud de la cuerda en las suspensiones de peptidos CS/G1-P/
Formulacion
Contenido de peptide (Peso%) Mediana de la longitud de la cuerda cuadrados ponderados (m) Media de la de longitud de lacuerda cuadrados ponderados (micras) < 30 micras (%)
Ejemplo 1: CS/G1- P/Peptido 2.5
2.50 10.27 12.66 94.56
Ejemplo 2: CS/G1- P/Peptido 5
5.00 10,87 12.57 96.61
Suspensiones cargadas con peptidos CS (control sin glucosa-fosfato):
Las suspensiones CS/peptido asi como los controles se prepararon siguiendo el mismo protocolo pero dispersando el 5 peptido en agua en lugar de solucion de G1-P.
Descripcion detallada del metodo de preparacion (Tamano del lote 6 g) de CS/GI-P/pasireotida 2,5% (Ejemplo 1) y CS/GI-P/pasireotida 5% (Ejemplo 2):
Materiales:
Chitoceutical 90/50 por HMC DD: 88,7% Mw: 149 kDa; HCl 1 M por Fluka; G1-P disodico por Sigma, Mw: 361,59 10 g/mol; pamoato de Pasireotida, amorfo, micronizado (base libre Mw: 1047.21, Mw sal de pamoato: 1435.53, disdribucion del tamano de particula por difraccion de luz laser: x90 <= 10 micras, aqui: 3 m, x50 <= 5 micras, aqui: 1 m, x10 > = 0,3 m, 0,7 m aqui, superficie especifica (BET)> = 8 m2/g, aqui 32 m2/g); Agua (MilliQ).
(1) Preparacion de la solucion de quitosano
Solucion de 40,00 g de quitosano de 3,75% w/w en HCl 0.185M se preparo por agitacion magnetica durante la noche. 15 La solucion de quitosano se filtro a traves de un filtro de nylon de 11 micras para eliminar cualquier material particulado insoluble. La solucion se almacena a 2 - 8 °C.
Requerido Actual
mCS (g)
1.50 1.50
HCl 0.185M qsp (g)
40.00 40.00
Ccssoi (mg/g)
37.8 37.5
pH
5.5-5.8 5.55
(2) Preparacion de suspensiones termogelificantes de CS /G1-P/ pasireotida 2,5% (Ejemplo 1):
(2.1) Preparacion de la suspension G1-P/pamoato de pasireotida 5,712%:
Se pesan 342,70 mg de pamoato de pasireotida y 1500.00 mg G1-P en un vaso de vidrio, y se ajusto a 6.000 g con 20 agua. La mezcla se pre-homogeneizo mediante agitacion magnetica durante 2 h.
Despues, la mezcla se homogeneiza por sonicationfor durante 5 min usando una sonda de ultrasonidos (amplitud 80%, ciclo 1) bajo agitacion magnetica en un bano de hielo.
Requerido Actual
Mg1-p (mg)
1500.0 1500.11
Mpamoato de pasireotida (mg)
342.70 342.70
H2O qsp (g)
6.000 5.9987
Cg1-p (mg/g)
250.00 250.07
Requerido Actual
Cpamoato de pasireotida (mg/g) 57.12 57.06
(2.2) Preparacion de suspension termogelificante CS/G1-P/SOM230 2,5%:
Se pesaron 2.400 g de solucion de quitosano en un matraz de vidrio tarado con un agitador magnetico.
En un bano de hielo, la disolucion de quitosano y la suspension del pamoato de pasireotida /G1-P 5,712% se enfria por lo menos durante 15 min. Gota a gota se anaden 3.600 g de la suspension del pamoato de pasireotida /G1-P 5 5,712% a la solucion de quitosano con agitacion magnetica. La agitacion de la suspension obtenida se continua
durante al menos 30 min o hasta que la sustancia farmacologicamente activa se dispersa en su totalidad. Se determina el pH y el tamano medio de particula (usando una sonda de Lasentec, FBRM). La suspension se almacena a 2 - 8 °C.
Requerido Actual
Mcssoi (g)
2.400 2.40039
Mpamoato de pasireotida/G1-P 5.712% (g)
3.600 3.60797
mpCS/G1-P pasireotida 2.5% (g)
6.000 6.00835
(3) Preparacion de las suspensiones termogelificantes de CS/G1-P /Pasireotida 5% (Ejemplo 2):
(3.1) Preparacion de la suspension G1-P/pamoato de pasireotida 11,423%:
10 Se pesaron 685,40 mg de pamoato de pasireotida y 1500.00 mg G1-P en un vaso de vidrio y se ajusto a 6.000 g con agua. La mezcla se pre-homogeneizo mediante agitacion magnetica durante 2 h. Despues, la mezcla se homogeneiza por tratamiento con ultrasonidos durante 5 minutos usando una sonda de ultrasonidos (amplitud 80%, ciclo 1) bajo agitacion magnetica en un bano de hielo.
Requerido Actual
MG1-P (mg)
1500.0 1499.81
Mpamoato de pasireotida (mg)
685.40 685.60
H2O qsp (g)
6.000 5.99967
Cg1-p (mg/g)
250.00 249.98
Cpamoato de pasireotida (mg/g)
114.23 114.27
(3.2) Preparacion de la suspension termogelificante de CS/G1-P/Pasireotida 5%:
15 Se pesaron 2.400 g de solucion de quitosano en un matraz de vidrio tarado con un agitador magnetico.
En un bano de hielo, la disolucion de quitosano y la suspension de pamoato de G1-P /SOM230 11.423% se enfriaron durante al menos 15 minutos. Gota a gota se anaden 3.600 g de la suspension G1-P/ pamoato de pasireotida 11.423% a la solucion de quitosano con agitacion magnetica. La agitacion de la suspension obtenida se continua durante al menos 30 min o hasta que la sustancia farmacologicamente activa se dispersa en su totalidad. El pH y el tamano 20 medio de particula se determina (usando una sonda de Lasentec, FBRM). La suspension se almacena a 2 - 8 °C.
Requerido Actual
MCSsol (g)
2.400 2.39977
Mpamoato de pasireotida/G1-P 5.712% (g)
3.600 3.59806
mpCS/G1-P pasireotida 2.5% (g)
6.000 5.99783
(4) Resultados:
Requerido (% peso) Actual (% peso) pH 2-8 °C
Ejemplo 1
Quitosano 1.50 1.498
G1-P 15.00 15.017 7.30
SOM230 Base Libre 2.50 2.500
Ejemplo 2
Quitosano 1.50 1.500
G1-P 15.00 14.996 7.32
SOM230 Base Libre 5.00 5.001
Cuantificacion del Peptido por HPLC:
El peptido se cuantifico usando un sistema de HPLC Agilent 1100 (Agilent, Santa Clara, CA, EE.UU.), con un Symmetry Shield® de Waters, RP18 3,5 pm, 50 x 4,6 mm de columna (Waters Corporation, Milford, EE.UU.). La fase movil A 5 consistia en agua, acetonitrilo, acido fosforico (900: 100: 1 V/V/V) y la fase movil B de (100: 900: 1 V/V/V) a una velocidad de flujo de 1,0 mL/min utilizando un gradiente de 6 pasos. 10 muestras mu l se inyectaron en una temperatura del horno de 40 °C. El analisis se realizo por deteccion UV a 230 nm. Todas las muestras se inyectaron por duplicado. El cromatograma resultante se analizo con Chromeleon 6,8 Datasystem (Dionex Corporation, Sunnyvale, CA, EE.UU.). La solucion stock de referencia del peptido se preparo en metanol y las soluciones estandar de diferentes 10 concentraciones se prepararon con medio de liberacion a pH 7,4 (vease la Tabla 2). Las curvas de calibracion
resultantes variaban desde 3 hasta 250 mg/ml con un coeficiente de correlacion por encima de 0.999.
Pruebas de liberacion in vitro:
Las pruebas de liberacion in vitro se realizaron por triplicado utilizando dos metodos diferentes. En el metodo I, se inyecto una cantidad de aproximadamente 0,5 g (exactamente pesada de 0.001 g) la formulacion a traves de una 15 aguja 21G en un tubo de 50 ml y se incubo 1 h en un bano oscilante de agua (GFL, Burgwedel, Alemania) se mantuvo
a 37 °C para permitir la formacion de gel. 25 ml del medio de liberacion pH 7,4 pre-calentado a 37 °C y despues se anadio lentamente al contenedor (t = 0) y se inicio una agitacion leve (10%). En el metodo II, se inyecto directamente la misma cantidad de la formulacion en un tubo de 50 ml que contiene 25 ml (50 ml para las formulaciones cargadas con peptido) de liberacion medio de pH 7,4 pre-calentado a 37 °C, en un bano de agua de movimiento alternativo 20 (GFL, Burgwedel, Alemania) se mantuvo a 37 °C (t = 0). Despues de 1 h en reposo, para permitir la formacion de gel, se inicio una agitacion suave (10%). Para el metodo I y II, en los puntos de tiempo definidos, los tubos fueron gentilmente homogeneizados, se centrifugaron y fueron retiradas muestras de 10 mL (25 mL para las formulaciones cargadas de peptido) de los medios y se reemplaza con medio de liberacion fresco para mantener constante el volumen y mantener las condiciones de inmersion. Todas las mediciones se realizaron por duplicado. La cantidad de 25 peptido liberado se determino por HPLC, como se describio anteriormente. La composicion del medio de liberacion a pH 7,4 utilizada para cada ensayo de liberacion esta en la lista en la Tabla 3.
Tabla 3: Composicion del pH del medio de liberacion 7.4 utilizado para la in vitro ensayos de liberacion
Componente
Cantidad
Na2HPO4
1,09 g
KH2PO4
0,32 g
NaCl
8,06 g
Cloruro de benzalconio
0,01 g
Polisorbato 80 *
4,00 g
Agua
qs 1000,0 ml
*: El polisorbato 80 se anadio como agente tensoactivo para mejorar la solubilidad del peptido en el medio de liberacion
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Comportamiento de liberacion sostenida del material depositado peptido-cargado CS/G1-P:
Las formulaciones CS/G1-P/peptido convertidas en depositos de solidos despues de la inyeccion en el medio de liberacion de pH 7,4 a 37 °C. En contraste, la solucion CS cargada con peptido (sin agente gelificante) solidifica progresivamente en numerosos agregados, debido al pH del medio. Los depositos CS /G1-P /peptido mantuvieron su forma e integridad estructural durante los 90 dias de la prueba de liberacion.
El perfil de liberacion de la CS/G1-P hidrogel cargado con peptido se muestra en la Fig. 1.
La adicion de G1-P a la solucion CS redujo significativamente la descarga inicial (liberacion de 2,5 ± 2,1% dentro de 6 h), en comparacion con la suspension de peptido sin agente (60,6 ± 16,8%) de gelificacion. Ademas, la formulacion CS/G1 P/peptido mostro una liberacion sostenida del peptido durante mas de 3 meses, mientras que el 80% liberado se alcanzo en alrededor de 3 dias para el control positivo basado en CS puro. En realidad, los depositos que contienen peptido al2,5% liberaron el 47% dentro de los 90 dias, siguiendo un patron de liberacion bifasico. Se visualiza una pequena cantidad de aproximadamente 20% a lo largo de la primera semana, seguido de una fase de liberacion sostenida mas lenta.
Se observo una pequena desviacion estandar de la cantidad de peptido liberado, en su mayoria por debajo de ± 3%, entre las muestras por triplicado durante el periodo de prueba completa, mostrando que las formulaciones de materiales depositados logran una buena repetibilidad de la liberacion con el tiempo.
Influencia de la carga de farmaco:
Como se muestra en la Fig. 2, la duplicacion de la carga entre las formulaciones de peptido CS/G1-P/peptido 2.5 y CS/G1-P/peptido 5 no afectan significativamente a la exposicion inicial (2,5% y 2,3%, respectivamente, en 6 h) y el patron de liberacion bifasica en general fue mantenido. Sin embargo, durante la fase de liberacion mas lenta, el hidrogel cargado al 5% libero el peptido mas lento que el hidrogel cargado al 2,5%, dando lugar a una diferencia de 18% entre las dos formulaciones despues de 90 dias.
Las siguientes pruebas analiticas de los ejemplos de las realizaciones de la invencion se realizaron con formulaciones correspondientes de placebo cuyos resultados son igualmente representativas para las formulaciones que comprenden peptido.
Preparacion de las soluciones CS/G1-P placebo:
Las soluciones CS se obtuvieron por disolucion de 3,75 %en peso de CS en HCl de acuerdo con una relacion molar de grupos amino CS/HCl igual a 0,9/1. Las soluciones G1P se prepararon a diferentes concentraciones en agua MilliQ. Las soluciones CS y G1P se enfriaron por separado a 4 °C durante 15 minutos. Entonces, la solucion de G1P se anadio gota a gota en la solucion de CS colocado en un bano de hielo bajo agitacion magnetica. La solucion de CS/ G1P obtenida se agito adicionalmente durante 15 minutos. Las formulaciones resultantes se almacenaron a 2 - 8 °C. Como referencia, se preparo una solucion CS/hidrato de sal de disodio de p-glicerofosfato (pGP, Mw: 288,10 g/mol) de acuerdo con el mismo procedimiento.
Mediciones reologicas:
Las medidas reologicas se llevaron a cabo utilizando un reometro Haake Rheostress1 (Thermo Fisher Scientific, Karlsruhe) con un sistema de circulacion para el medio ambiente de control de temperatura. El volumen de la muestra fue de aproximadamente 0,5 ml, introducidos entre una geometria cono-placa (2 ° de angulo de cono, 35 mm de diametro). Se utiliza una trampa de disolvente para minimizar la evaporacion de agua durante todas las pruebas. Para determinar la viscosidad a 20,00 ± 0,20 °C, las muestras desgasificadas recien preparadas, son preparadas con 1.5 wt.% Chitoceutical® 90/50 (1) y la concentracion de G1P que va desde 0.00 a 0,53 mmol/g, fueron sometidas a pruebas de rotacion a velocidades controladas de cizallamiento, durante las cuales la velocidad de cizallamiento se mantuvo constante durante 60 s y luego aumento por etapas de 5 a 103 s-1. Los valores de viscosidad de cizallamiento aparente se calcularon como la media de las viscosidades de cizallamiento aparente determinadas despues de 30 s de equilibrado en cada velocidad de cizalladura. Se llevaron a cabo las pruebas siguientes: (i) pruebas de barrido de tiempo, para determinar tiempos de gelificacion, se llevaron a cabo en constante frecuencia angular de 1 Hz y la temperatura constante de 37,00 ± 0,20 °C. La temperatura de transicion sol/gel (Tgel) o tiempo (Tgel) corresponden a la interseccion de las curvas de G 'y G (iii) la fuerza de los hidrogeles se evaluo mediante la realizacion de pruebas de barrido de frecuencia en hidrogeles formados ya sea en contacto con el aire o en PBS. Los geles se hicieron como sigue, 1 ml de solucion CS/G1P se vertio en moldes de forma redonda y se incubaron 6 h, 24 h y 48 h a 37 °C para permitir la formacion de hidrogeles, ya sea en una atmosfera saturada en humedad para evitar la evaporacion de agua o en 1 ml de PBS pre-calentado a 37 ° C.
Pruebas de estabilidad:
Las pruebas de estabilidad se llevaron a cabo con diferentes soluciones CS: (i) . Una solucion CS pura, 1,5% en peso de Chitoceutical® 90/50 (2); (ii) soluciones CS/G1-P 1,5 en peso.% Chitoceutical® 90/50 (1)/0,27 mmol/g G1-P y (iii) 1,5 en peso.% Chitoceutical® 90/50 (1 )/0,40 mmol/g G1-P, y (Iv) una solucion de CS/pGP, y como referencia 1,5% en
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
peso Chitoceutical® 90/50 (1)/hidrato de sal disodica p-glicerofosfato 0,40 mmol/g (pGP, Mw: 288,10 g/mol). Estas soluciones se filtran a traves de filtros de 0,22 micras, llena en viales de vidrio 2R y se purgan con nitrogeno antes del sellado hermetico. El contenido medio de oxigeno del espacio de cabeza determinado por espectroscopia de modulacion de frecuencia utilizando el FMS-760 Instrumento Lighthouse (Lighthouse Instruments, LLC) fue de 0,70 ± 0,07%. Las muestras se almacenaron en condiciones de refrigeracion (es decir, 2 - 8 °C) y a temperatura ambiente (es decir, 20-25 °C), y se analizaron despues de t = 1, 7, 14, 30, 60, 90, 135, 180 y 270 dias para las muestras almacenadas a 2 - 8 °C y en t = 1, 7, 14, 30, 60 y 180 dias para las muestras almacenadas a 20 - 25 °C, respectivamente. En cada momento, se siguio un grupo de caracteristicas diferentes para cada muestra: (i) la formulacion se inspecciono visualmente para cualquier cambio en el aspecto fisico, es decir, color, turbidez, consistencia (liquida o estado de gel); (ii) el valor de pH se determino utilizando un medidor de pH 691 (Metrohm, Herisau, Suiza); (iii) se midio la viscosidad a 20,00 ± 0,20 °C mediante la realizacion de una prueba de pasos como se describe en la seccion "Mediciones reologicas"; (iv) el tiempo de gelificacion se determino mediante una prueba de barrido de tiempos como se define en "mediciones reologicas".
Estabilidad durante el almacenamiento de soluciones de CS/agentes gelificantes:
La estabilidad durante el almacenamiento es un parametro crucial que necesita ser evaluado durante el desarrollo de un producto farmaceutico en un sistema de hidrogel formado in situ. Este tipo de formulaciones debe tener una vida util aceptable, es decir, sus propiedades fisicas termogelificantes deben mantenerse durante condiciones de almacenamiento definidas hasta la administracion. En esta seccion se presenta el estudio de la estabilidad de dos soluciones de termogelificacion CS/G1P (con 0,27 y 0,40 mmol/g G1P) de acuerdo con la presente invencion en comparacion con la solucion de referencia CS termogelificante/pGP (con 0,40 mmol/g pGP) y la solucion de CS puro (a la misma concentracion de polimero: 1,5% en peso.). El estudio incluyo el seguimiento durante 6 a 9 meses, por dos diferentes temperaturas de almacenamiento (2 y 8 °C y 20 - 25 °C), el tiempo de la apariencia, el pH, la viscosidad y la gelificacion de las soluciones asi como el peso molecular del CS.
Apariencia y pH:
En general, no se observaron cambios en la apariencia (estado liquido), ni en los valores de pH de las soluciones de CS/G1-P CS y el almacenamiento de 6 a 9 meses (para ambas temperaturas). El pH de la solucion de CS puro se mantuvo 5,2 ± 0,1 mientras que las de las soluciones de la G1P/CS fueron 7,1 ± 0,1 y 7,2 ± 0,1, para 0,27 y 0,40 mmol/g G1-P, respectivamente. Por el contrario, la solucion de CS/pGP se convirtio en un gel turbio en menos de 30 dias a 2 - 8 °C y despues de solo 1 dia a 20 - 25 C, con una caida del valor de pH desde 7,4 hasta 7,0.
Viscosidad:
Las viscosidades de cizallamiento aparente de la solucion de CS y sistemas de CS/agente gelificante se presentan en la Fig. 3. Los resultados muestran que para periodos de almacenamiento, siempre tan largos como de 6 a 9 meses y en condiciones de refrigeracion, la viscosidad aparente de cizallamiento de las soluciones puras CS y CS/ G1P se mantuvo sin cambios. Por el contrario, la viscosidad de CS/pGP aumento significativamente dentro de los 30 dias, de aproximadamente 180 mPas hasta 7500 mPas a una velocidad de cizallamiento de 5 s-1. Del mismo modo, la viscosidad de las soluciones CS/G1P era estable a temperatura ambiente durante 2 meses y solo aumentaba ligeramente a bajas velocidades de cizallamiento despues de 6 meses, mientras que la viscosidad de la solucion de CS puro muy ligeramente reducida con el tiempo y la viscosidad de la CS/pGP solucion se elevo drasticamente despues de solo 7 dias. Estos resultados estan completamente alineados con las observaciones anteriores, es decir, la solucion de CS puro, asi como las soluciones de CS/G1P mantenidas en estado liquido con el tiempo para las dos condiciones de almacenamiento, mientras que la solucion de CS/pGP se convirtio en gel con el tiempo. El almacenamiento en condiciones de refrigeracion permite mantener la formulacion CS/pGP en estado liquido durante poco mas de 14 dias en comparacion con menos de 7 dias a temperatura ambiente. Una vez que se produjo la transicion sol/gel, la viscosidad de los geles de CS/pGP continua aumentando hasta la estabilizacion (mas apreciable a 2 - 8 °C en la figura 3 (g)).
Tiempo de gelificacion:
Los tiempos de transicion sol/gel de las diferentes formulaciones de CS/agentes gelificantes creadas a 37 °C fueron seguidos durante el mismo periodo de almacenamiento y reportadas en la Fig. 4. Parece que el tiempo de gelificacion de la solucion compuesta de 0,27 mmol/g de G1P no es estable en el tiempo, y disminuye de aproximadamente 40 min inicialmente, a 35 min y 27 min despues de 6 meses de almacenamiento a 20 - 25 °C y 2 - 8 °C, respectivamente, con variaciones significativas observadas con el tiempo en condiciones de 20 - 25 °C. Estas variaciones se desvanecen cuando la concentracion de G1P se incrementa a 0,40 mmol/g. De hecho, el tiempo de gelificacion observado para la solucion de CS/G1P que contiene 0,40 mmol/g G1P almacenada a 20 - 25 °C fue estable durante 2 meses, pero disminuyo ligeramente despues. Sin embargo, cuando se almacena en condiciones de refrigeracion, esta solucion aparece con un tiempo de gelificacion constante de 12,2 ± 1,0 min mas de 9 meses. Con respecto a las soluciones de CS/pGP, las muestras se sometieron a una gelificacion espontanea en menos de 30 dias a 2 - 8 °C y 1 dia a 20 - 25 °C. Estas observaciones fueron confirmadas por las mediciones reologicas de el tiempo de gelificacion, ya que el sistema CS/pGP exhibio un comportamiento similar a un gel (G '> G ") desde el comienzo de la prueba de barrido de tiempo. Sin embargo ya antes de que estos puntos de tiempo, los tiempos de gelificacion fueron, sin embargo, muy
5
10
15
20
25
30
35
40
45
rapidos, en el intervalo de 1 a 2 min. Asi que la solucion CS/pGP no era estable cuando se almacena a temperatura ambiente o en condiciones de refrigeracion. Por el contrario, la adicion de 0,40 mmol/g G1P como agente gelificante alternativo a la solucion de CS mejoro significativamente la estabilidad del sistema, en particular cuando se almacena a 2 - 8 °C.
Evaluacion de la inyectabilidad:
La fuerza de inyeccion de una solucion CS/G1-P que contiene 1,5 en peso.% Chitoceutical® 90/50 (1) y 0,40 mmol/ g G1-P se midio usando un medidor de traccion electronico (Zwick Z 2.5, Ulm, Alemania) y se analizo con el software testXpert II (version 3.0, Zwick, Ulm, Alemania). Se inyecto 1 ml solucion termogelificante en un recipiente de cristal vacio, usando una jeringa de 1 ml (1 ml Luer-Lok jeringa de punta, BD, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE.UU.) Se ensayaron varias agujas: (i) 23 G (HSW FINE-JECT® 23 G x 1", Henke-Sass Wolf GmbH, Tuttlingen, Alemania), (ii) 25 G (Terumo® agujas hipodermicas, 25 G x 1 "de pared delgada aguja, Terumo Medical Corporation, Somerset, NJ, EE.UU.) y (iii) 30 G (BD Microlance ™ 3, 30 G x 1V", BD, Franklin Lakes, Nueva Jersey, EE.UU.). Antes de la medicion, todas las jeringas se equilibraron 10 min a temperatura ambiente y fueron preparadas para expulsar las burbujas de aire hasta que salio una pequena cantidad de la solucion. se midio la fuerza de inyeccion en dos velocidades de inyeccion diferentes: 80 y 100 mm/ min, para cada tamano de la aguja. Todas las mediciones se repitieron 10 veces.
El limite superior de 20 N se establece como criterio de aceptacion para inyecciones s.c., segun Schoenhammer et al en Pharmaceutical Research, 26 (2009) 2568-2577. Los resultados se presentan en la Fig. 5, y muestran que, solo el tamano de la aguja impacto significativamente la fuerza de la inyeccion. La fuerza necesaria para inyectar la solucion de CS/G1P estaba por debajo de 5 N cuando se utilizan agujas 23 G y 25 G, que se consideran como agujas que permiten inyecciones muy lisas. El usar una aguja mas delgada de 30 G requiere un aumento de la fuerza de inyeccion de aproximadamente 17,5 N, que todavia no superaba el limite superior de 20 N. Por lo tanto, la formulacion a base de CS de la presente invencion puede ser considerada como facil de inyectar a traves de agujas tan delgadas como 30 G o mas delgadas.
Filtracion esteril:
La solucion CS/G1P que contiene 1,5 en peso.% Chitoceutical® 90/50 (1) y 0,40 mmol/g G1P se filtraron a traves de filtros de jeringa de 0,22 micras (hidrofilos, 33 mm de diametro, 4,5 cm2 de area de filtracion, Millex-GV filtros, Millipore). se evaluo en tres lotes mediante el estudio del peso molecular de CS, determinado por GPC La influencia de la filtracion esteril de las caracteristicas de la solucion, medida antes y despues de la filtracion esteril. Los pesos moleculares de la CS en las soluciones filtradas se calcularon en relacion al Mw de las soluciones no filtradas. Todas las mediciones se realizaron por triplicado.
La filtracion esteril se realiza facilmente en la solucion de CS/G1P. Tal como se presenta en la Fig. 6, la viscosidad de la solucion se mantuvo sin cambios despues de la filtracion. El analisis GPC mostro solo una ligera disminucion de aproximadamente el 1 % del peso molecular del polimero entre la formulacion no filtrada, y la formulacion filtrada, este valor esta dentro del rango de precision del metodo (± 5%). Por lo tanto, no hay material polimerico que se considere perdido en el filtro durante la filtracion esteril.
Administracion in v/Vo/tolerabilidad local del hidrogel CS/G1-P:
La tolerabilidad local de los CS/G1-P hidrogeles de mas de tres semanas, se examino cada 10 semanas de edad ratas macho Wistar Hans sanos. Se inyectan 0,5 ml de solucion esteril CS/G1-P termogelificante (1,5 en peso.% Chitoceutical® 90/50 (2), 0,40 mmol/g G1-P), equilibrada a temperatura ambiente, por via subcutanea utilizando una aguja de 23 G en la region interescapular de nueve ratas bajo anestesia general. El mismo volumen de solucion salina esteril se inyecta por via subcutanea en su zona dorsal caudal como control negativo. El estado de salud y el peso corporal de los animales se controlo. Las muestras de sangre se recogieron bajo isoflurano mediante puncion sublingual en dia -3 (antes de la dosis) para el analisis de hematologia y por puncion de la vena cava en el dia de la necropsia para hematologia y analisis de bioquimica. Despues de 1, 7 y 21 dias, tres ratas se sacrificaron mediante exanguinacion de la puncion de la vena cava despues de la exposicion a isoflurano y los tejidos en los sitios de inyeccion fueron extirpados para su examen histologico.
Tabla 4: El examen histologico de s.c. tejido de las ratas implantadas con hidrogeles CS/G1P.
Inyeccion en los puntos de tiempo de post
Inflamacion Fibrosis
1 dia
+++/++++ agudo -
7 dias
+++/++++ subaguda +/++ inmaduro
Inyeccion en los puntos de tiempo de post
Inflamacion Fibrosis
21 dias
++ cronico +/++ maduro
Para la inflamacion, "+++" y "++++" indica respuesta inflamatoria leve, moderada y marcada respectivamente. Para la fibrosis, "-", "+" y "++" representa no, fibrosis minima y leve, respectivamente.
La reaccion inflamatoria observada en toda formulacion CS/G1-P inyectada por via subcutanea en ratas fue una reaccion tipica de cuerpo extrano, similar a la respuesta del tejido reportado para otros sistemas de deposito como 5 microparticulas de PLGA o hidrogeles estandar CS/p-GP. Despues de la inyeccion de la formulacion, se produjo una inflamacion de aguda a cronica en un orden secuencial y la inflamacion tendia a desaparecer con el tiempo. La fibrosis acompanada de la respuesta inflamatoria y rodeado el lugar del implante; que comenzo 7 dias despues de la inyeccion con un tejido inmaduro de granulacion bien vascularizado y hacia las 21 dias, se formo una capsula de espesor ligeramente vascularizado compuesto por fibroblastos y fibras de colageno. Por lo tanto, el hidrogel exhibe 10 biocompatibilidad aceptable de tejido.

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    REIVINDICACIONES
    1. Un sistema de suministro de farmacos que comprende
    (a) un peptido farmaceuticamente activo o cualquier sal farmaceuticamente aceptable del mismo,
    (b) 1 a 2% en peso de un quitosano o derivado de quitosano, que tenga un grado de desacilacion (DD) de 85 a 95% y un peso molecular (PM) de 100 a 200 kDa,
    (c) 10 a 25% del peso de un azucar-fosfato, y
    (d) agua,
    con bases en el peso total del sistema de suministro de farmacos.
  2. 2. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con la reivindicacion 1 en el que dicho peptido es hidrofobo.
  3. 3. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que un dicho peptido se encuentra presente en forma de una sal hidrofoba, por ejemplo, el peptido esta presente como sal de pamoato.
  4. 4. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que un dicho peptido es octreotida, pasireotida, vapreotida, o lanreotida, preferiblemente octreotida o pasireotida, mas preferiblemente pasireotida.
  5. 5. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que dicho quitosano tiene un grado de desacilacion (DD) de 90 ± 2,5%.
  6. 6. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que dicho quitosano tiene un peso molecular (MW) de 100 a 150 kDa, preferiblemente un MW de 135 ± 20 kDa.
  7. 7. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el azucar de dicho azucar-fosfato es un monosacarido, disacarido, o un oligosacarido, preferiblemente un monosacaridos seleccionados del grupo de aldosas, por ejemplo, glucosa, manosa, galactosa, alosa, altrosa, gulosa, idosa, talosa, ribosa, arabinosa, xilosa, lixosa, o del grupo de cetosas, por ejemplo fructosa, sorbosa, tagatosa, psicosa, araboketose, xyloketose, o una mezcla de los mismos, glucosa o fructosa preferiblemente o una mezcla de los mismos.
  8. 8. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que dicho azucar-fosfato es una glucosa-fosfato, preferiblemente una glucosa-1-fosfato, preferiblemente un alfa-D- glucosa-1-fosfato, mas preferiblemente alfa-D-glucosa -1-fosfato hidrato disodico.
  9. 9. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende al menos 1%, al menos 2%, 1 a 30%, 2 a 10%, o 2 a 5%, preferiblemente 2 a 5% en peso del peptido en su forma de base libre basado en el peso total del sistema de suministro de farmacos.
  10. 10. El sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende, sustancialmente comprende, consiste esencialmente en, o consiste en, que consiste preferiblemente en
    (a) 2 a 5% en peso de un peptido hidrofobo en su forma de base libre, preferiblemente presente en forma de sal de pamoato, preferiblemente el peptido es pamoato pasireotida,
    (b) 1 a 2% en peso de un quitosano que tiene un DD de 90 ± 2,5% y un MW de 135 ± 20 kDa, se somete a un acido, somete preferiblemente a acido clorhidrico.
    (c) 10 a 25% en peso de glucosa-1 -fosfato, y
    (d) agua.
    con base en el peso total del sistema de suministro de farmacos
  11. 11. Un procedimiento para preparar el sistema de suministro de farmacos como se define en uma cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende siguientes etapas de proceso:
    (1) disolver el quitosano en una solucion acida acuosa, preferiblemente en una solucion de acido clorhidrico,
    (2) disolver el azucar-fosfato en un medio acuoso, preferiblemente en agua,
    (3) disolver, dissolver parcialmente, o dispersar el peptido en la solucion de azucar-fosfato, preferiblemente dispersar el peptido, y
    (4) combinar la solucion peptido/glucosa-fosfato y/o la suspension con la solucion de quitosano.
  12. 12. Una forma de dosificacion que comprende el sistema de suministro de farmacos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en forma de un liquido, preferiblemente una suspension en una ampolla, vial o jeringa precargada, preferiblemente en forma de una suspension en una jeringa precargada equipada con una aguja de 5 inyeccion 21G o mas fina, preferiblemente 25G o mas fina.
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