ES2689071T3

ES2689071T3 - Régimen de dosificación del compuesto FGF-18

Info

Publication number: ES2689071T3
Application number: ES15706006.2T
Authority: ES
Inventors: Christoph H. Ladel; Hans Guehring
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2014-02-20
Filing date: 2015-02-20
Publication date: 2018-11-08
Anticipated expiration: 2035-02-20
Also published as: PT3119417T; AU2015220773B2; LT3107559T; AR099510A1; IL247084B; BR112016018685A2; SG11201606505UA; WO2015124727A1; PT3107559T; RU2016137292A; AU2015220777B2; EP3107559A1; PL3119417T3; AU2015220773A1; RS57853B1; HUE040350T2; NZ723148A; US20170072017A1; MX2016010872A; ZA201605548B

Abstract

Un compuesto FGF-18 para su uso en el tratamiento de un trastorno de cartílago, en donde el compuesto FGF-18 ha de administrarse intra-articularmente al menos tres veces por ciclo de tratamiento, estando dichas administraciones separadas por aproximadamente 3, 4 o 5 semanas.

Description

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estimulación de la médula ósea, la artroplastia por abrasión, la perforación subcondral o la microfractura del hueso subcondral. La co-administración opcional con un fármaco antiinflamatorio con efectos sobre los síntomas (dolor y función), tal como la anakinra o el diclofenaco, disminuiría el dolor asociado con el trastorno del cartílago a tratar.

En una realización preferida, el trastorno del cartílago a tratar de acuerdo con la invención es la osteoartritis, tal como la osteoartritis de rodilla o la osteoartritis de cadera. La osteoartritis a tratar puede ser, por ejemplo, y sin limitarse a ella, osteoartritis primaria o artrosis secundaria, así como a la osteoartritis que se clasifica como estadio 1 a estadio 4,

o grado 1 a grado 6 de acuerdo con el sistema de clasificación de la OARSI.

En una otra realización preferida, el trastorno del cartílago a tratar de acuerdo con la invención es una lesión del cartílago con y sin intervenciones quirúrgicas, tales como microfracturas. Además, después del crecimiento del cartílago debido a la administración de la composición de FGF-18 (administrada sola o junto con un fármaco antiinflamatorio como anakinra o diclofenaco), puede ser necesario un tratamiento quirúrgico para contornear adecuadamente el cartílago recién formado.

En una realización preferida, el tratamiento comprende la administración intraarticular del compuesto FGF-18 o la composición de FGF-18, solo o junto con un fármaco antiinflamatorio con efectos sobre los síntomas (dolor y función), como anakinra o diclofenaco. Los compuestos FGF-18 o composiciones de FGF-18 se pueden aplicar solos o junto con un fármaco antiinflamatorio, como anakinra o diclofenaco, mediante inyección directa en el líquido sinovial de la articulación o directamente en el defecto, ya sean solos o complejados con un vehículo adecuado para la liberación prolongada de proteína (por ejemplo, formulaciones de liberación sostenida) o liberación local restringida. Preferiblemente, el modo de administración del compuesto FGF-18, bien sea solo o junto con un fármaco antiinflamatorio, tal como anakinra o diclofenaco descritos en el presente texto, se selecciona entre el grupo que consiste en administración peri-sinovial, administración intra-sinovial, administración peri-articular y administración intra-articular. En una realización preferida, el compuesto FGF-18 descrito en la presente memoria se administra, bien sea solo o junto con un fármaco antiinflamatorio, tal como anakinra o diclofenaco, preferiblemente intrarticularmente (administración dentro de una articulación). El fármaco antiinflamatorio se administra preferiblemente por vía intrarticular (vía preferible para anakinra) u oral (vía preferible para diclofenaco). La administración intraarticular se realiza en una articulación elegida entre la articulación de la cadera, rodilla, codo, muñeca, tobillo, columna, pie, dedo, dedo del pie, mano, hombro, costillas, omóplatos, muslos, espinillas, talones y a lo largo de los puntos óseos de la columna vertebral. En otra realización preferida más, la administración intraarticular se hace en una articulación de la cadera o la rodilla.

Descripción de las figuras.

Figura 1: Esquema del programa de tratamiento. Figura 1 a: régimen de dosificación una vez a la semana; Figura 1b: régimen de dosificación una vez al mes (o cada 4 semanas); Figura 1 c: régimen de dosificación una vez al mes (o cada 4 semanas) +/-unos pocos días de variaciones aceptadas para comodidad del paciente.

Figura 2: Los compuestos FGF-18 evocan la deposición de matriz articular dependiente de la dosis en un modelo OA de rata, ilustrado por cuantificación de la tinción con Safranina-0.

Figura 3: Puntuación articulación total sin fémur.

Figura 4: Puntuación de articulación total.

Figura 5: Anchura de degeneración del cartílago tibial sustancial.

Figura 6: Concentración celular después de 8 días de cultivo de condrocitos porcinos estimulados o no con IL1α estimulados o no con IL1 días de cultivo (A) o después de un retraso de 6 horas (B) con rhFGF18 100 ng/ml y/o Anakinra 100 ng/mL. N = 4 para (A) y N = 6 para (B).

Figura 7: Niveles de α2MG en el suero a lo largo del tiempo.

Figura 8: AUC (área bajo la curva) de la diferencia del diámetro articular entre la rodilla objetivo (articulación OA) y la articulación contralateral (rodilla sana) a lo largo del tiempo.

Figura 9: volumen del cartílago (en mm3) en la tibia medial.

Descripción de las secuencias:

SEQ ID NO.1: Secuencia de aminoácidos del FGF-18 humano nativo.

SEQ ID NO.2: Secuencia de aminoácidos del FGF-18 truncado recombinante (trFGF-18).

SEQ ID NO.3: Secuencia de aminoácidos del antagonista del receptor de ilL-1 humano recombinante (anakinra).

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Ejemplos.

Material.

El FGF-18 truncado recombinante (trFGF-18) de los presentes ejemplos se ha preparado por expresión en E. coli, de acuerdo con la técnica descrita en la solicitud WO2006/063362. En los siguientes ejemplos, trFGF-18 y FGF-18 se usan indistintamente.

El antagonista del receptor de interleucina-1 humana recombinante (anakinra) se ha obtenido de Pharmacia.

Puntuación de las articulaciones.

Después del sacrificio, se retiró la rodilla derecha y se descalcificó en ácido fórmico al 5% durante 4 -6 días antes de cortarla por la mitad en el plano frontal e incrustarla en cera de parafina. Se cortaron tres secciones en pasos de 200 μm, se tiñeron con azul de toluidina y se analizaron usando el software ImagePro Plus™ (Media Cybernetics).

Al puntuar las tres secciones de la articulación, se determinó el peor de los casos para las dos mitades en cada portaobjetos para la lesión del cartílago como el ancho de degeneración del cartílago (μm). Esto refleja las áreas de lesión del cartílago tibial en las que la pérdida de condrocitos y proteoglicanos se extiende ≥50% del grosor del cartílago. La medición se realizó sobre el área de gravedad de lesión más grande en cada una de las tres zonas a través de la superficie tibial.

Se determinó un grupo de tratamiento con una media ± SE para cada puntuación y medida.

Los datos se analizaron usando un análisis de varianza de una vía (ANOVA de 1 vía) o test de Kruskal-Wallis (no paramétrico), junto con un test posterior de comparación múltiple apropiado. Las medidas del calibrador de la rodilla derecha se compararon con las de la izquierda usando una prueba t de Student. A menos que se indique lo contrario, Bolder BioPATH, Inc. solo realiza análisis estadísticos en datos en bruto (no transformados). Las pruebas estadísticas establecen ciertas suposiciones relativas a la normalidad y la homogeneidad de la varianza de los datos, y es posible que se requieran análisis adicionales si las pruebas dieron como resultado violaciones de estas suposiciones. La significación de todas las pruebas se estableció en p ≤ 0,05. Se hicieron comparaciones entre cada grupo y el grupo de control del vehículo, así como entre pares.

Ejemplo 1.

Método: la transección del ligamento cruzado anterior con resección del modelo de menisco medial (ACLT + tMx) de OA inducida por inestabilidad, se realizó en ratas Lewis macho de 10 -15 semanas de edad. Brevemente, bajo anestesia con Isoflurane, se abrió la cápsula articular de la rodilla derecha de cada rata, los ligamentos cruzado anterior y de fijación del menisco se seccionaron bruscamente, se extrajo el menisco y se cerraron la cápsula, los músculos y la piel mediante suturas. Los animales fueron distribuidos aleatoriamente en 10 grupos de n = 10 cada uno. Después de las dosis se investigaron 0, 0,3, 1, 3 y 10 μg por inyección intraarticular. Los grupos 1 a 5 recibieron un ciclo de tres inyecciones individuales en intervalos semanales, los grupos 6 a 10 tres inyecciones individuales en intervalos mensuales. El tratamiento intraarticular se inició tres semanas después de la cirugía. En ese momento, los cambios fisiopatológicos son ya manifiestos, por ejemplo la pérdida de matriz del cartílago. Los animales fueron sacrificados por eutanasia 17 semanas después de la cirugía y se investigaron las articulaciones.

Resultados: El trFGF-18 indujo una neoformación de tejido cartilaginoso dependiente de la dosis que se hizo significativa en la tibia lateral con 1 μg/articulación independientemente del régimen de inyección (véase la Figura 2a). El trFGF-18 indujo una neoformación de tejido cartilaginoso dependiente de la dosis que se volvió significativa en la tibia medial con 1 μg/articulación de acuerdo con un régimen semanal y con 0,3 μg/articulación de acuerdo con el régimen mensual (véase la Figura 2b).

Ejemplo 2

Método: Las ratas Lewis macho se sometieron a cirugía (bajo anestesia con isoflurano) para inducir un desgarro meniscal medial en la articulación de la rodilla derecha. Se administró a los animales IA con vehículo o FGF-18 en uno de dos regímenes diferentes (véase la tabla que sigue), luego se terminó el día 105. Se tomaron medidas de calibre de las rodillas en la línea base al inicio del estudio y los días 21, 42, 56, 84 y 105. El suero se evaluó en relación con los niveles de macroglobulina α2 en la línea base y en los días 21 y 105, así como una semana después de la dosis final (día 42 o 84). as rodillas derechas se recolectaron para evolución histopatológica.

Tabla 1: grupos de tratamiento

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Grupo: Número de ratas Tratamiento (10 μg en 50 μl)

1: 10 Normal + vehículo d21, 35, 49

2: 10 Cirugía + vehículo d21, 35, 49

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Ejemplo 5.

Método:

Se sometieron ratas Lewis macho a cirugía para inducir una rotura meniscal medial en la rodilla derecha. Los animales fueron tratados i. a. con FGF-18 (10 μg/articulación) los días 21, 28 y 35, y por vía oral con diclofenaco (1 mg/kg o 3 mg/kg) o vehículo los días 21 -23, 28 -30 y 35 -37, luego terminó el día 42 o el día 63. El suero fue recogido y se evaluaron los niveles de alfa 2 macroglobulina (α2MG) los días -3, 21, 42 y 63. La α2MG es un biomarcador sérico de inflamación. El vínculo entre α2MG y la inflamación ha sido ya demostrado (Kuribayashi et al., 2013).

Resultados.

Los controles de FGF-18 + vehículo tuvieron una hinchazón entre leve y moderada el día 24, que aumentó a grave el día 36, aunque no se observó cojera. La hinchazón de la rodilla disminuyó ligeramente a una gravedad marcada comenzando el día 44. Las mediciones con calibrador respaldaron estas observaciones, con diferencias significativas entre las rodillas derecha e izquierda el día 21 y puntos de tiempo más tardíos, pero no en la línea base. Los animales a los que se dieron 3 mg/kg de diclofenaco tuvieron puntuaciones de hinchazón significativamente reducidas los días 24 -29, 31 y 36 -43, en comparación con los controles del vehículo. Las medidas con calibre de la rodilla se redujeron significativamente el día 42, pero no se vieron afectadas significativamente en ningún otro punto temporal. Los animales que recibieron 1 mg/kg de diclofenaco tuvieron puntuaciones de hinchazón significativamente reducidas los días 24 -29, 31 y 36 -43, en comparación con los controles del vehículo. Las medidas del calibre de la rodilla se redujeron significativamente el día 42, pero no se vieron afectadas significativamente en ningún otro momento (datos no mostrados).

Los niveles de α2MG fueron más altos el día -3 (preoperatorio) que el día 21 después de la cirugía. Los niveles en animales a los que se les administró 3 mg/kg de diclofenaco se redujeron de forma leve, pero significativa, en comparación con los controles del vehículo en el punto de tiempo preoperatorio. Los niveles en el día 21, antes del tratamiento, fueron esencialmente los mismos para todos los grupos. En el día 42, los controles de la enfermedad tenían marcadamente elevados los niveles de α2MG (niveles aproximadamente cuatro veces el día 21), lo que era una diferencia significativa de los dos grupos de diclofenaco. El día 63, los niveles para todos los grupos fueron nuevamente similares (figura 7).

Conclusiones:

Globalmente, los resultados de este estudio indican que la administración de 1 o 3 mg/kg de diclofenaco a ratas con desgarro meniscal medial a las que también se administró FGF-18 redujo significativamente la hinchazón de la rodilla, basada tanto en las observaciones clínicas como en las mediciones del calibre. Estos efectos fueron evidentes durante aproximadamente una semana después de la dosis final de diclofenaco. Los niveles en suero de α2MG rastrearon los controles del vehículo en los días -3, 21 y 63, si bien se observó una fuerte reducción en el día 42 como resultado de un aumento masivo en los niveles de control.

Ejemplo 6

Método: El objetivo de este estudio era evaluar el efecto de la diferente frecuencia de dosificación intracíclica de la misma dosificación total (3 x 1 μg) de esprifermina sobre el volumen de cartílago en un modelo de rata de OA. La transección del ligamento cruzado anterior (ACLT) con resección del menisco medial (tMx) se realizó como se describe en el ejemplo 1. Se usaron las articulaciones de ratas macho Hooded Rats (200 -260 g, Charles River) en este estudio. Los animales fueron sacrificados mediante eutanasia 18 semanas después de la cirugía.

Los cambios en la articulación están relacionados con las evaluaciones clínicas en OA (pérdida de cartílago, osteofitos, esclerosis subcondral). Se inyectó 1 μg de esprifermina en solución salina tres veces, bien sea semanalmente, o bien cada 2ª, cada 3ª, cada 4ª o cada 5ª semana, y se compararon con los grupos de vehículos apropiados. El peso corporal, los diámetros de las articulaciones y las puntuaciones de salud clínica se investigaron semanalmente.

Resultados:

Los resultados mostraron que las inyecciones intraarticulares no tenían influencia sobre el aumento de peso corporal: no se observó ningún efecto farmacológico o de régimen de tratamiento significativo en el parámetro in-life. Sin embargo, los grupos inyectados cada dos semanas con solución salina (n = 4) tuvieron la mayor ganancia de peso corporal (datos no mostrados).

Con inyecciones en la semana 3, 4 y 5, los diámetros articulares fueron significativamente más altos que después de las inyecciones en la semana 3, 8 y 13 (ver figura 8). No se observaron diferencias significativas entre las inyecciones cada 2ª, 3ª o 4ª semana. Cuando se inyectó solamente cada quinta semana, el área bajo la curva de los diámetros de las articulaciones fue la misma que con las inyecciones de solución salina. Así, en tendencia, el AUC del diámetro de la articulación disminuye con una frecuencia de inyección más baja.

El análisis histológico cuantitavo mediante estereología reveló cambios severos similares a la OA en las articulaciones

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Claims

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